Quim. Nova, Vol. 33, No.

3, 667-679, 2010
R
e
v
i
s

o
*e-mail: mtpupo@fcfrp.usp.br
ANTIBITICOS: IMPORTNCIA TERAPUTICA E PERSPECTIVAS PARA A DESCOBERTA E
DESENVOLVIMENTO DE NOVOS AGENTES
Denise Oliveira Guimares, Luciano da Silva Momesso e Mnica Tallarico Pupo
*
Departamento de Cincias Farmacuticas, Faculdade de Cincias Farmacuticas de Ribeiro Preto, Universidade de So Paulo,
Av. do Caf, s/n, 14040-903 Ribeiro Preto SP, Brasil
Recebido em 26/2/09; aceito em 21/8/09; publicado na web em 24/2/10
ANTIBIOTICS: THERAPEUTIC IMPORTANCE AND PERSPECTIVES FOR THE DISCOVERY AND DEVELOPMENT
OF NEW AGENTS. There is a continuous need for antibiotics, mainly with new mechanisms of action, since infectious diseases
represent the second major cause of death in the world and bacteria resistance levels are high. This review describes the contribution
of microbial natural products for the development of the major antibiotic classes, the mechanisms of action of current antibiotics,
some modern approaches involving genetic tools for the discovery and development of new antibiotics from microbial products and
antibiotics in clinical trials.
Keywords: microbial natural products; drug discovery; antibiotics.
INTRODUO
Antibiticos so compostos naturais ou sintticos capazes de
inibir o crescimento ou causar a morte de fungos ou bactrias. Po-
dem ser classicados como bactericidas, quando causam a morte
da bactria, ou bacteriostticos, quando promovem a inibio do
crescimento microbiano.
1

As bactrias so organismos unicelulares, identicados pela
primeira vez por van Leeuwenhoek por volta dos anos 1670, aps
a inveno do microscpio. Porm, somente no sculo XIX a pos-
sibilidade destes micro-organismos serem causadores de processos
infecciosos comeou a ser aventada. Esta hiptese surgiu aps os
elegantes experimentos de Louis Pasteur, que demonstrou que al-
gumas linhagens de bactrias eram importantes para processos de
fermentao e, tambm, que as bactrias eram de ampla distribuio
pelo meio ambiente.
2
Aps a segunda metade do sculo XIX, cientis-
tas como Robert Koch identicaram micro-organismos responsveis
por doenas como tuberculose, clera e febre tifoide. Nessa poca,
as pesquisas eram conduzidas na busca de agentes qumicos que
apresentassem atividade antibitica. O pesquisador Paul Ehrlich,
conhecido como o pai da quimioterapia uso de substncias qumi-
cas contra infeces foi responsvel pelos conceitos primrios de
que uma substncia qumica poderia interferir com a proliferao de
micro-organismos, em concentraes tolerveis pelo hospedeiro.
2
Em 1910, Ehrlich desenvolveu o primeiro antibitico de origem
sinttica, salvarsan (1), usado contra slis. Poucos progressos
foram conseguidos nos 20 anos seguintes para o desenvolvimento
de antibiticos, at a introduo da proavina (2), em 1934, agente
amplamente utilizado na Segunda Guerra Mundial, principalmente
contra infeces de feridas profundas. Entretanto, este composto era
muito txico para ser usado em infeces bacterianas sistmicas, o
que evidenciava a necessidade de agentes mais ecazes.
2
Em 1935,
um marco na quimioterapia antibacteriana ocorreu com a descoberta
de Gerhard Domagk de que o corante vermelho prontosil (3) apre-
sentava atividade in vivo contra infeces causadas por espcies de
Streptococcus. O prontosil (3) um pr-farmaco que originou uma
nova classe de antibiticos sintticos, as sulfas ou sulfonamidas (22),
que constituem a primeira classe de agentes efetivos contra infeces
sistmicas introduzida no incio dos anos 1940.
2
Entretanto, as sulfas
apresentam espectro de ao limitado e so pouco usadas atualmente.
Apesar destes avanos, o grande marco no tratamento das in-
feces bacterianas ocorreu com a descoberta da penicilina (4), por
Alexander Fleming, em 1928.
3
A atividade da penicilina era superior
das sulfas e a demonstrao que fungos produziam substncias ca-
pazes de controlar a proliferao bacteriana motivou uma nova frente
de pesquisas na busca de antibiticos: a prospeco em culturas de
micro-organismos, especialmente fungos e actinobactrias.
A penicilina G, ou benzilpenicilina (4), foi descrita em 1929
como agente antibitico, porm somente foi introduzida como agen-
te teraputico nos anos 1940. Aps o processo de industrializao
da penicilina, especialmente em consequncia da Segunda Guerra
Mundial,
4
foi observado um rpido crescimento na descoberta e
desenvolvimento de novos antibiticos.
Entre os anos 1940-1960 vrios antibiticos foram descober-
tos atravs de triagens de produtos naturais microbianos, sendo a
maioria deles ecazes para o tratamento de bactrias Gram positivo:
-lactmicos (5, cefalosporina), aminoglicosdeos (9, estreptomicina),
tetraciclinas (12, clortetraciclina), macroldeos (10, eritromicina),
peptdeos (15, vancomicina) e outros (11 cloranfenicol, 16 rifami-
cina B, 14 clindamicina e polimixina B). Neste perodo apenas trs
derivados sintticos foram introduzidos no mercado: isoniazida,
trimetropim (23) e metronidazol.
5
Entre os anos 1960-1980 foram introduzidos no mercado an-
tibiticos semi-sintticos ecazes para o tratamento de patgenos
Gram positivo e Gram negativo, anlogos aos antibiticos naturais j
existentes. A maioria deles foi obtida a partir de prottipos naturais
microbianos, como derivados -lactmicos (anlogos de penicilina e
cefalosporina, cido clavulnico, aztreonam), anlogos da tetraciclina,
derivados aminoglicosdicos (gentamicina, tobramicina, amicacina).
5
Entre os anos 1980-2000 as principais ferramentas utilizadas para a
busca de novos antibiticos foram a genmica e as triagens de colees
de compostos, em detrimento s triagens de produtos naturais micro-
bianos. Porm, houve uma reduo dramtica na identicao de novos
prottipos antibiticos, ao mesmo tempo em que ocorreu um aumento
na incidncia de resistncia bacteriana. Este perodo marcado pela
modicao do mercado de antibiticos pela introduo da classe das
uoroquinolonas sintticas (25, 26) na metade dos anos 1980, desenvol-
vidas a partir do cido nalidxico (24). Alguns antibiticos baseados em
Guimares et al. 668 Quim. Nova
Figura 2. Frmacos representativos das principais classes de antibiticos de origem natural
N
S
H
N
O
O
COOH
OH
H
N H
2
N
NH
NH
H
2
N
NH
O
O
OH HO
CHO
OH
O
O
NHCH
3
HO
HO
HO
O
O
O
O
OH
HO
OH
H
2
N
HO
O
Cl
O
HN
N
H
O
H
N
O
HO
O
CO
2
H
OH
OH HO
N
H
O
H
N
O
H
2
N
O
N
H
OH
O
NHCH
3
OH O OH
HO
N
H
O
OH
OH
O
NH
2
Cl
H
4 penicilina G
(Penicillium notatum)
10 eritromicina
(Streptomyces erythreus)
15 vancomicina
(Streptomyces orientalis)
9 estreptomicina
(Streptomyces griseus)
12 clortetraciclina
(Streptomyces aureofaciens)
O
O
O
HO
OH
OH
O
O
OH
OCH
3
O
O
HO
N(CH
3
)
2
N
S
COOH
O
O
H
N
O
O
5 cefalosporina C
(Cephalosporium acremonium)
N
H
O
O
N
N
O
O
O
S
N
O
O
O
OH
H
NH
N
O
O
N
O
N HN
O
O
O
NH
N
O
S
N
O
O
N
OH
18 quinupristina
(derivado semi-sinttico de PN
produzido por Streptomyces)
19 dalfopristina
(derivado semi-sinttico de PN
produzido por Streptomyces)
N
O
O
COOH
6 cido clavulnico
(Streptomyces clavuligerus)
OH
20 daptomicina
(Streptomyces roseosporum)
21 dalbavancina
(derivado semi-sinttico de PN produzido por
Streptomyces)
H
N
O
O
O
OH
OH OH
O
MeO
O
O
OH
HO
16 R=H rifamicina B
(Streptomyces mediterranei)
O
2
N
OH
OH
HN O
Cl Cl
11 cloranfenicol
(Streptomyces venezuela)
N
R
O
OH
OH
OH
SCH
3
O
13 R=OH lincomicina
(Streptomyces lincolnensis)
14 R=Cl clindamicina
(derivado semi-sinttico)
N
O
COOH
S
NH
2
OH
8 tienamicina
(Streptomyces cattleya)
N
H
N
O
O
OH
N
OH
O
HOOC NH
2
7 nocardicina A
(Nocardia uniformis)
R
NH N N C
H
17 R= rifampicina
H
2
N
COOH
COOH
N
H
H
N
O
N
H
O H
2
N
H
N
O
O
N
H
O
COOH
NH
O
O
O
H
N
NH
2
O
O
HN
HOOC
O
HN
OH
O
HN
O
HN
COOH
O
N
H
O
NH
HOOC
O
NH O
NH
2
O
H
N OH
OH
O
O
O O
H
N
N
H
H
N
N
H
O
O
O
O O
N
H
HO
O
H
N
OH
HO
NH
HO O
NH
N
O
O
OH
OH
OH OH
OH
O
COOH
Cl
Cl
Figura 1. Antibiticos de origem sinttica
HO
H
2
N
As As
NH
2
OH
1 salvarsan
N NH
2
H
2
N
2 prolavina
N H
2
N
NH
2
N S NH
2
O
O
3 prontosil
N N O
O
F
O
NH
O
N
COOH
N
HN
F
O
H
2
N
S
N
H
O O
N
O
N
N H
2
N
OMe
OMe
OMe
NH
2
22 sulfametoxazol
23 trimetropim 26 ciprofloxacina 27 linezolida
N N
O
COOH
24 cido nalidxico
N N
COOH
N
HN
F
O
25 enoxacina
7
6
8
3
1
prottipos naturais, como imipenem (derivado -lactmico) e anlogos da
eritromicina (10, derivado macroldeo) tambm foram introduzidos neste
perodo. A combinao de dois derivados semi-sintticos de produtos
naturais microbianos, quinupristina (18) e dalfopristina (19), foi aprovada
para uso em infeces causadas por Enterococcus faecium resistente
vancomicina em 1999 pelo FDA (Food and Drug Administration).
6

A partir de 2000, poucos antibiticos foram introduzidos para a
teraputica antimicrobiana. Em 2001, apenas um antibitico de origem
Antibiticos: importncia teraputica e perspectivas 669 Vol. 33, No. 3
sinttica da classe das oxazolidinonas foi introduzido no mercado farma-
cutico, a linezolida (27).
5
Os programas de descoberta de antibiticos de
fontes naturais tm sido retomados em algumas indstrias farmacuticas,
levando aprovao do lipodepsipeptdeo natural daptomicina (20) pelo
FDA em 2003. O derivado semi-sinttico glicopeptdico dalbavancina
(21) encontra-se em fase III de triagens clnicas pelo FDA.
5,6
PRINCIPAIS CLASSES DE ANTIBITICOS EM USO
CLNICO
Os antibiticos de origem natural e seus derivados semi-sintticos
compreendem a maioria dos antibiticos em uso clnico e podem ser
classicados em -lactmicos (penicilinas, cefalosporinas, carbape-
ninas, oxapeninas e monobactamas), tetraciclinas, aminoglicosdeos,
macroldeos, peptdicos cclicos (glicopeptdeos, lipodepsipeptdeos),
estreptograminas, entre outros (lincosamidas, cloranfenicol, rifamicinas
etc). Os antibiticos de origem sinttica so classicados em sulfonami-
das, uoroquinolonas e oxazolidinonas.
2,7,8
Os principais mecanismos de
ao antibitica destes agentes teraputicos esto listados na Tabela 1.
Antibiticos -lactmicos
Os antibiticos -lactmicos corresponderam a 50% do total de
vendas de antibiticos em 2004.
9
So agentes antibacterianos que ini-
bem irreversivelmente a enzima transpetidase, que catalisa a reao de
transpeptidao entre as cadeias de peptideoglicana da parede celular
bacteriana.
1,10
A atividade desta enzima leva formao de ligaes
cruzadas entre as cadeias peptdicas da estrutura peptideoglicana,
que conferem parede celular uma estrutura rgida importante para a
proteo da clula bacteriana contra as variaes osmticas do meio.
Constituem a primeira classe de derivados de produtos naturais utili-
zados no tratamento teraputico de infeces bacterianas. Hoje, vrias
dcadas aps a descoberta da penicilina, este grupo ainda contm os
agentes mais comumente utilizados. Possuem amplo espectro de ati-
vidade antibacteriana, eccia clnica e excelente perl de segurana,
uma vez que atuam na enzima transpeptidase, nica em bactrias.
Todos os antibiticos -lactmicos tm um elemento estrutural
farmacofrico em comum, o anel azetidinona de quatro membros,
ou anel -lactmico. Na maioria dos antibiticos, o anel central
-lactmico fundido a outro anel de cinco (tiazolidnico) ou seis (di-
hidrotiaznico) membros, formando as penicilinas ou cefalosporinas,
respectivamente.
9,10
Em geral, o sistema bicclico fundamental para
a atividade destes antibiticos, por mimetizar o resduo dipeptdico
terminal D-Ala-D-Ala da cadeia de peptideoglicana, substrato da
enzima transpeptidase (Figura 3).
O sistema bicclico tensionado destes antibiticos contribui para
o aumento da instabilidade qumica do anel -lactmico, altamente
suscetvel ao ataque de nuclelos que promovem a hidrlise do
grupo farmacofrico. No caso das penicilinas, o oxignio da cadeia
lateral aclica participa como nuclelo em reao intramolecular que
promove a abertura do anel -lactmico em meio cido, inativando o
antibitico e inviabilizando sua administrao por via oral (Figura 4A).
As modicaes estruturais possveis cam restritas s cadeias
laterais, que podem modular: a estabilidade em meio cido, funda-
mental para a atividade por via oral destes frmacos; a estabilidade
frente s -lactamases, enzimas bacterianas relacionadas resistncia,
que hidrolisam o grupo farmacofrico destes antibiticos e, o espectro
de ao frente a bactrias Gram negativo.
Para aumentar a estabilidade em meio cido foram adicionados
grupos retiradores de eltrons no carbono ao carbono carbonlico
da cadeia lateral em penicilinas semi-sintticas (ampicilina, amo-
xicilina, oxacilinas), que diminuem a nucleolicidade do oxignio
carbonlico (Tabela 2).
O principal mecanismo de resistncia bacteriana aos antibiticos
-lactmicos atravs da produo de enzimas que apresentam grupos
nucleoflicos (em geral, resduos de serina) capazes de promover a
abertura do anel -lactmico. Neste caso, a modicao molecular
responsvel pelo aumento de resistncia s -lactamases foi a intro-
duo de grupamentos volumosos no carbono ao carbono carbo-
nlico da cadeia lateral em penicilinas semi-sintticas (meticilina,
oxacilinas), que impedem o acesso dos antibiticos ao stio ativo da
enzima -lactamase por impedimento estrico.
10
Devido natureza mais complexa da parede celular, as bactrias
Gram negativo so mais resistentes ao de antibiticos, que no
so capazes de cruzar efetivamente esta barreira lipdica. Para ter
acesso clula bacteriana, os antibiticos devem cruzar a parede
Tabela 1. Principais mecanismos de ao antibitica
1,2
Antibiticos Alvo Mecanismo de ao
-lactmicos (penicilinas, cefalosporinas,
carbapeninas, monobactamas)
Enzima transpeptidase Inibio da formao de ligao cruzada entre cadeias de
peptideoglicano, impedindo a formao correta da parede
celular bacteriana.
-lactmicos (oxapeninas, sulfoxapeninas) Enzima -lactamase Inibio da enzima de resistncia bacteriana, que degrada
antibiticos -lactmicos.
Macroldeos, lincosamidas, estreptograminas
(dalfopristina e quinupristina), cloranfenicol,
oxazolidinonas (linezolida)
Subunidade 50S ribossmica Inibio da sntese proteica bacteriana.
Aminoglicosdeos, tetraciclinas Subunidade 30S ribossmica Inibio da sntese proteica bacteriana.
Glicopeptdeos (vancomicina, teicoplanina) Dipeptdeo terminal D-Ala-D-Ala do
peptideoglicano
Complexao com as cadeias peptdicas no ligadas e bloqueio
da transpeptidao, impedindo a formao correta da parede
celular bacteriana.
Peptdeos no ribossomais (bacitracina,
gramicidina C, polimixina B)
Membrana plasmtica Afetam permeabilidade da membrana bacteriana por
facilitarem o movimento descontrolado de ons atravs da
membrana.
Lipodepsipeptdeos (daptomicina) Membrana plasmtica Afeta permeabilidade da membrana bacteriana e bloqueia
sntese de cido pipoteicoico, componente da membrana
externa de bactrias Gram positivo.
Rifampicina RNA polimerase dependente de DNA Inibio da sntese de RNA.
Fluoroquinolonas Enzima DNA girase Bloqueio da replicao e reparo do DNA.
Sulfonamidas Enzima di-hidropteroato sintetase Bloqueio da formao de cofatores do cido flico, importantes
para sntese de cidos nucleicos.
Guimares et al. 670 Quim. Nova
celular atravs de canais proteicos de porina, embebidos na estrutura
lipdica, que apresentam o interior com caractersticas hidroflicas.
Assim, antibiticos com maior atividade frente a bactrias Gram
negativo so aqueles que apresentam grupos ionizveis em suas
estruturas qumicas. A Tabela 2 apresenta as principais modicaes
estruturais encontradas em penicilinas.
O maior nmero de antibiticos -lactmicos em uso clnico
pertence classe das cefalosporinas, que esto subdivididas em cefa-
losporinas de primeira, segunda, terceira e quarta geraes, em funo
do espectro de ao mais ampliado frente a bactrias Gram negativo.
O sistema bicclico das cefalosporinas menos tensionado em com-
parao ao das penicilinas, o que contribui para a maior estabilidade
frente reao de abertura intramolecular do anel -lactmico pela
cadeia lateral.
2,10
De fato, no so observados produtos de degrada-
o cefalosporinas provenientes deste tipo de reao. A presena de
grupos abandonadores ligados na posio 3 favorece a reao com a
enzima transpeptidase (Figura 4B) contribuindo, portanto, para a ao
antibitica. Por outro lado, a presena de steres em C-3 favorece a
hidrlise por esterases plasmticas. A hidrlise por esterases leva
formao do lcool, que um fraco grupo abandonador e, portanto,
o produto reagir mais lentamente com a enzima transpeptidase. A
introduo de grupos abandonadores diferentes do ster, como piridi-
Figura 3. Mecanismo de reao da transpeptidase na formao de ligao cruzada entre cadeias peptdicas da parede celular bacteriana e inibio por
antibiticos -lactmicos
Figura 4. A- Instabilidade de penicilinas em meio cido. B- Mecanismo de
ao das cefalosporinas
N
H
O
S
COOH
N R
O
H
+
/ H
2
O
HN
S
COOH
N
O
O
R
H
N
S
COOH
H
N
O
R
O
N
S
COOH
H
N
O
R
O O
Enz Ser
OH
Ser
Enzima
3
7
A
B
O
O
Tabela 2. Estrutura e propriedades das principais categorias de pe-
nicilinas em uso clnico
1
Categoria Nome R Propriedades
Baixo espec-
tro de ao,
sensvel a
-lactamases
Penicilina G (4)
(benzilpenicilina)
Fraca estabilidade
cida
Penicilina V (28)
Boa estabilidade
cida
Baixo espec-
tro de ao,
resistente a
-lactamases
Meticilina (29)
Fraca estabilidade
cida
Oxacilina (30)
Boa estabilidade
cida
Amplo espec-
tro de ao,
sensvel a
-lactamases
R = H ampicilina
(31)
R = OH amoxici-
lina (32)
Boa estabilidade
cida
Amplo espectro
de ao, anti-
Pseudomonas,
sensvel a
-lactamases
Carbenicilina (33)
Fraca estabilidade
cida
Ticarcilina (34)
Fraca estabilidade
cida
Espectro de
ao estendido
Piperacilina (35)
Uso injetvel,
ativo frente a P.
aeruginosa, ativi-
dade aumentada
frente a Entero-
bacteriaceae
Antibiticos: importncia teraputica e perspectivas 671 Vol. 33, No. 3
nium e carbamato, impede a hidrlise por esterases e favorece a reao
com a enzima transpeptidase. Porm, estes grupos abandonadores
tambm podem aumentar a hidrlise em meio cido, dicultando a
administrao por via oral destes antibiticos. A presena de metila
em C-3 favorece a absoro no trato gastrointestinal, mas diminui a
velocidade de reao com a enzima transpeptidase.
Modicaes em C-7 contribuem para o aumento de resistncia
frente s -lactamases. Tanto a introduo de um grupamento metoxli-
co com congurao em C-7 quanto a presena de funo oximino na
posio ao carbono carbonlico da cadeia lateral conferem resistncia
s enzimas -lactamases. A presena de anel aminotiazlico na cadeia
lateral em C-7 de cefalosporinas de terceira gerao aumenta a pene-
trao do antibitico atravs da membrana externa das bactrias Gram
negativo. Estruturas zwitterinicas apresentam maior atividade em
bactrias Gram negativo, devido ao maior carter hidroflico (Figura 5).
As cefalosporinas de primeira gerao so consideradas frmacos
de menor atividade que as penicilinas, porm apresentam boa ativi-
dade frente a bactrias Gram positivo. Tambm podem ser utilizadas
para tratamento de infeces por S. aureus e por Streptococcus
quando as penicilinas tm que ser evitadas. As cefalosporinas de
segunda gerao so frmacos que, em geral, apresentam atividade
variada frente a bactrias Gram positivo, porm atividade superior
frente a bactrias Gram negativo. A terceira e a quarta gerao das
cefalosporinas tambm so representadas por frmacos da classe
das oximinocefalosporinas. Essa classe de frmacos representa um
considervel incremento na potncia e no espectro de ao, particu-
larmente frente a bactrias Gram negativo.
2,10

Durante o perodo de maior procura por novos antibiticos,
compreendido entre as dcadas de 1970 e 1980, muitos subgrupos
de -lactmicos foram relatados, tais como as monobactamas,
9
repre-
sentadas pelas nocardicinas (naturais) e pelo aztreonam (sinttico), e
as clavamas ou oxapeninas, representadas pelo cido clavulnico (6),
frmaco inativador de -lactamases.
1
Os inibidores de -lactamases
apresentam fraca ao antibitica, devido ausncia de cadeia lateral
em C-6. Porm, reagem rapida e irreversivelmente com enzimas de
resistncia bacteriana, com mecanismo anlogo ao da reao de peni-
cilinas e cefalosporinas com a enzima transpeptidase. So geralmente
usados em combinaes com penicilinas de amplo espectro de ao.
As monobactamas so antibiticos -lactmicos monocclicos
e foram isoladas de fontes naturais. As nocardicinas (7) apresentam
atividade moderada in vivo frente a um pequeno grupo de bactrias
Gram negativo, incluindo Pseudomonas aeruginosa.
2,10
O aztreonam
um frmaco sinttico da classe das monobactamas com antividade
antibitica e administrado via intravenosa. Apresenta atividade frente
a micro-organismos Gram positivo e bactrias anaerbias.
2,10

A tienamicina (8) foi o primeiro exemplo da classe das carbapeni-
nas naturais e serviu de prottipo para o desenvolvimento de anlogos
sintticos como imipenem, meropenem e ertapenem. As carbapeninas
atuam de maneira anloga s penicilinas e cefalosporinas, com elevada
potncia e extraordinrio espectro de atividade frente a bactrias Gram
positivo e Gram negativo, alm de boa resistncia a -lactamases.
2
Aminoglicosdeos
Os aminoglicosdeos so agentes que possuem um grupo amino
bsico e uma unidade de acar. A estreptomicina (9), principal re-
presentante da classe, foi isolada em 1944 de Streptomyces griseus,
um micro-organismo de solo. Os aminoglicosdeos apresentam
atividade melhorada em pH levemente alcalino, em torno de 7,4,
onde esto positivamente carregados, facilitando a penetrao em
bactrias Gram negativo.
2
Os antibiticos aminoglicosdicos apresentam efeito bactericida
por ligarem-se especicamente subunidade 30S dos ribossomos
bacterianos, impedindo o movimento do ribossomo ao longo do
mRNA e, consequentemente, interrompendo a sntese de protenas.
2,11

O uso contnuo de antibiticos aminoglicosdeos deve ser cuidadosa-
mente controlado, devido aos efeitos ototxicos e nefrotxicos. Esses
agentes so efetivos contra bactrias Gram negativo aerbicas, como
P. aeruginosa, e apresentam efeito sinrgico com -lactmicos.
1
Devido polaridade, os aminoglicosdeos devem ser adminis-
trados por via injetvel. Eles tambm so incapazes de atravessar a
barreira hemato-enceflica ecientemente e, portanto, no podem ser
usados para o tratamento de meningites, a menos que sejam injetados
diretamente no sistema nervoso central.
2,11
Macroldeos
Os macroldeos representaram cerca de 18% do total de vendas
de antibiticos em 2004.
9
Os macroldeos naturais caracterizam-se
pela presena de lactonas macrocclicas de origem policetdica de 14
ou 16 membros, ligadas a um acar e um amino-acar.
1
Derivados
semi-sintticos podem apresentar anel macrocclico de 15 membros
(azitromicina). A eritromicina (10), isolada pela primeira vez em
1952 de Streptomyces erythreus, um dos mais seguros antibiticos
em uso clnico.
2
Os macroldeos so agentes bacteriostticos, que
atuam pela ligao com o RNA ribossomal 23S da subunidade 50S,
interferindo na elongao da cadeia peptdica durante a translao
e bloqueando a biossntese de protenas bacterianas.
9,12
So usados
em infeces respiratrias como pneumonia, exacerbao bacteriana
aguda de bronquite crnica, sinusite aguda, otites mdias, tonsilites
e faringites. Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes,
Haemophilus inuenzae e Moraxella catarrhalis so os patgenos
predominantes envolvidos nestas doenas.
9
A eritromicina age frente maioria dos patgenos respiratrios,
considerada segura e amplamente prescrita a crianas. Entretanto,
seu limitado espectro de ao e sua limitada estabilidade em meio
Figura 5. Exemplos selecionados de cefalosporinas de 1 4 gerao
Guimares et al. 672 Quim. Nova
cido resultam em uma fraca biodisponibilidade e uma variedade
de outros efeitos colaterais, tais como inuncia na motilidade
gastrointestinal, aes pr-arrtmicas e inibio do metabolismo
de frmacos. Porm, durante dcadas, esforos tm sido realizados
para se obter novos derivados da eritromicina, tanto de origem
natural quanto sinttica, com pers mais favorveis. Antibiticos
macroldeos de segunda gerao, como roxitromicina, claritromicina
e azitromicina, foram gradualmente substituindo a eritromicina,
superando seu espectro de atividade, melhorando a atividade e os
pers fsico-qumico e farmacocintico, alm de atenuar os efeitos
colaterais.
9

Cloranfenicol
O cloranfenicol (11) foi isolado a primeira vez do micro-
organismo Streptomyces venezuela. Atualmente o cloranfenicol
sintetizado e somente o ismero R,R ativo.
2,9
O cloranfenicol liga-se
subunidade 30S do ribossomo e parece inibir o movimento dos ri-
bossomos ao longo do mRNA, provavelmente pela inibio da peptidil
transferase, responsvel pela extenso da cadeia peptdica. Uma vez
que o cloranfenicol se liga mesma regio que os macroldeos e as
lincosamidas, eles no podem ser administrados em associao. Os
grupamentos nitro e ambos grupamentos lcool esto envolvidos nas
interaes. O grupo dicloroacetamida tambm importante, porm
pode ser substitudo por outros grupos eletronegativos.
2,9
Tetraciclinas
As tetraciclinas so antibiticos policetdicos bacteriostticos
de amplo espectro e bastante ecazes frente a diversas bactrias
aerbicas e anaerbicas Gram positivo e Gram negativo.
2,13
A
clortetraciclina (12) foi o primeiro derivado a ser descoberto. As
tetraciclinas inibem a sntese de protenas atravs da ligao com a
subunidade 30S dos ribossomos, impedindo a ligao do aminoacil-
tRNA. Como resultado, a adio de novos aminocidos para o
aumento da cadeia proteica bloqueada. A liberao de protenas
tambm inibida.
2,9
A seletividade frente aos ribossomos bacteria-
nos em relao aos ribossomos de eucariotos deve-se a diferenas
estruturais nos ribossomos e tambm concentrao seletiva do
antibitico nas clulas bacterianas.
1
Devido ao aumento de resis-
tncia bacteriana s tetraciclinas, o seu uso como primeira escolha
na terapia antibitica tem diminudo. Entretanto, o desenvolvimento
recente de um derivado semi-sinttico desta classe, a tigeciclina
(77), que inibe a bomba de euxo, indica o interesse contnuo nesta
classe de antibiticos.
1
Devido presena de formas de equilbrio
ceto-enlico, as tetraciclinas apresentam a capacidade de quelar
metais, especialmente clcio. Portanto, seu uso no recomendado
em crianas e mulheres grvidas, uma vez que estes antibiticos
podem se acumular em dentes e ossos em formao.
2

Lincosamidas
As lincosamidas tm propriedades antibacterianas similares aos
macroldeos e agem pelo mesmo mecanismo de ao. A lincomicina
(13) e seu derivado semi-sinttico clindamicina (14) foram introduzi-
dos na prtica clnica como antibiticos de uso oral em 1960 e 1969,
respectivamente. A lincomicina foi isolada do micro-organismo de
solo Streptomyces lincolnensis. A clindamicina um antibitico
amplamente utilizado, que possui melhor atividade e maior absoro
por via oral. A clindamicina o frmaco de escolha para o tratamen-
to de infeces perifricas causadas por Bacillus fragilis ou outras
bactrias anaerbicas penicilina resistentes. Este frmaco tambm
topicamente utilizado para o tratamento de acne.
2,9,14
Glicopeptdeos
Os antibiticos glicopeptdicos, vancomicina (15) e teicoplanina
tm se tornado os frmacos de primeira linha no tratamento de infec-
es por bactrias Gram positivo com resistncia a diversos antibi-
ticos.
15
A vancomicina (15), o primeiro antibitico glicopeptdico
introduzido na prtica clnica em 1959, foi isolada de amostras de
solo de Streptomyces orientalis (reclassicado como Amycolatopsis
orientalis). A elucidao da estrutura desse antibitico demorou vrios
anos, at ser completa e inequivocadamente proposta na dcada de
1980.
9
A vancomicina apresenta uma conformao rgida importante
para a atividade. Os glicopeptdeos inibem a biossntese da parede ce-
lular bacteriana pela complexao com o resduo dipeptdico terminal
D-Ala-D-Ala das cadeias peptdicas que constituem a parede celular.
Esta complexao impede que o substrato esteja disponvel para a ao
da transpeptidase inibindo, portanto, a reao de transpeptidao.
1,15

O desenvolvimento de resistncia bacteriana a estes antibiticos
mais lento, apesar de algumas linhagens de Staphylococcus aureus
hospitalares j apresentarem resistncia desde 1966.
2
Eles so restritos
para o tratamento de infeces causadas por bactrias Gram positivo
por serem incapazes de penetrar nas membranas de bactrias Gram
negativo.
9,15
A vancomicina (15) em geral o antibitico de ltima
escolha frente a patgenos Gram positivo resistentes, em particular
contra espcies de Enterococcus.
Lipodepsipeptdeos
A daptomicina (20) um lipodepsipeptdeo isolado de Strep-
tomyces roseosporus e aprovado em 2003 para tratamento de infec-
es causadas por bactrias Gram positivo. Seu mecanismo de ao
envolve desorganizao de mltiplas funes da membrana celular
bacteriana.
2,9,12
provvel que todos os antibiticos lipopeptdicos
apresentem alguma penetrao na membrana devido s cadeias
alqulicas, o que promove sua desorganizao.
1

Rifamicinas
A rifampicina (17) um frmaco semi-sinttico derivado da rifa-
micina B (16), produto natural hbrido de policetdeos e peptdeos no
ribossomais. A rifamicina B (16) foi isolada de Streptomyces medi-
terranei, reclassicado como Nocardia mediterranei.
1
A rifampicina
um inibidor da RNA polimerase, utilizada clinicamente como parte
da combinao de frmacos para o tratamento da tuberculose. o
nico frmaco em uso clnico que bloqueia a transcrio bacteriana.
1,12
Estreptograminas
A pritinamicina uma mistura de substncias macrolactonas
obtidas de Streptomyces pristinaespiralis, que podem ser utilizadas
oralmente no tratamento de infeces por bactrias Gram positivo.
Dois derivados semi-sintticos desta classe, quinupristina e dalfo-
pristina, tm sido utilizados por via intravenosa em combinao.
2
A
quinupristina (18) derivada da pristinamicina I, uma peptideolactona
cclica no ribossonal, enquanto a dalfopristina (19) deriva da pris-
tinamicina IIA, um hbrido policetdico/peptdico contendo um anel
macrolactnico.
1,16
Esses agentes atuam de maneira sinergstica para
bloquear a translao do polipeptdeo, pela ligao na subunidade
50S dos ribossomos bacterianos, na regio 23S do rRNA, sobrepondo
parcialmente o stio de ligao dos macroldeos.
1,14
Aparentemente,
a ligao da dalfopristina (19) aumenta a anidade da ligao para a
quinupristina (18), explicando o efeito sinrgico. A quinupristina (18)
inibe a elongao da cadeia peptdica, enquanto a dalfopristina (19)
interfere na transferncia da cadeia peptdica de um tRNA para outro.
2
Antibiticos: importncia teraputica e perspectivas 673 Vol. 33, No. 3
Antibiticos sintticos
Sulfonamidas e trimetoprim
As sulfonamidas, tambm conhecidas como sulfas, foram testadas
pela primeira vez nos anos 1930 como frmacos antibacterianos. Um
exemplo de sulfa ainda utilizada na teraputica o sulfametoxazol
(22), em associao com o trimetoprim (23), para o tratamento de
pacientes com infeces no trato urinrio e tambm para pacientes
portadores do vrus HIV que apresentam infeces por Pneumocystis
carinii. Cada um desses frmacos bloqueia uma etapa no metabolismo
do cido flico.
12
O sulfametoxazol bloqueia a enzima di-hidroptero-
ato sintetase, presente apenas nas bactrias, enquanto o trimetoprim
inibe a di-hidrofolato redutase. Ambas as enzimas atuam na via de
biossntese do N
5
,N
10
-metileno-tetra-hidrofolato, importante cofator
que fornece uma unidade de carbono na biossntese de bases pirimi-
dnicas constituintes dos cidos nucleicos. A atuao destes frmacos
sinrgica no bloqueio de dois diferentes passos na via bioqumica
de formao deste cofator essencial.
1
As sulfonamidas so, portanto,
agentes bacteriostticos que atuam como antimetablitos do cido p-
aminobenzoico, substrato para a di-hidropteroato sintetase bacteriana,
impedindo a formao do di-hidropteroato e, consequentemente, do
N
5
,N
10
-metileno-tetra-hidrofolato.
2
Quinolonas e uoroquinolonas
As quinolonas e uoroquinolonas so frmacos bactericidas muito
utilizados no tratamento de infeces do trato urinrio e tambm no
tratamento de infeces causadas por micro-organismos resistentes
aos agentes antibacterianos mais usuais.
2
Esta classe representou
19% das vendas de antibiticos em 2004.
9
O cido nalidxico (24),
sintetizado em 1962, foi o prottipo desta classe de antibiticos.
ativo frente a bactrias Gram negativo e utilizado no tratamento de
infeces do trato urinrio, porm, os micro-organismos podem ad-
quirir rpida resistncia a esse antibitico. Vrios outros anlogos tm
sido sintetizados, com propriedades similares ao cido nalidxico.
2
A
enoxacina (25), desenvolvida em 1980, um frmaco que apresenta
elevado espectro de atividade frente a bactrias Gram positivo e Gram
negativo. tambm ativo frente Pseudomonas aeruginosa, bactria
altamente resistente a antibiticos. O desenvolvimento da enoxacina
(25) foi baseado na descoberta de que um tomo de or na posio
6 aumenta a atividade, bem como facilita a entrada na clula bacte-
riana. Um anel piperaznico bsico na posio 7 levou ao aumento na
absoro por via oral, distribuio tecidual e estabilidade metablica.
Foi observado tambm um aumento no nvel e espectro de atividade,
particularmente frente a bactrias Gram negativo como Pseudomonas
aeruginosa. Muitos desses benefcios so devidos ao substituinte bsico
ligado posio 7 formar um zwitterion com o cido carboxlico da
posio 3.
2
A introduo de um substituinte cicloproplico na posio
1 incrementou o amplo espectro de ao, enquanto a substituio do
nitrognio da posio 8 por um carbono reduziu as reaes adversas e
aumentou a atividade frente a S. aureus. Estas modicaes originaram
a ciprooxacina (26), o antibitico mais ativo da classe das uoroqui-
nolonas frente a bactrias Gram negativo. Esse frmaco amplamente
utilizado em infeces do trato urinrio, respiratrio e gastrointestinal,
alm de infeces de pele, ossos e articulaes.
2
As uoroquinolonas agem inibindo a topoisomerase IV de
bactrias Gram positivo e apresentam seletividade 1000 vezes
maior para enzimas bacterianas em relao s enzimas correspon-
dentes em clulas humanas. Em bactrias Gram negativo, o alvo
das uoroquinolonas a topoisomerase II, tambm conhecida por
DNA-girase, que apresenta as mesmas funes da topoisomerase
IV.
2,17
As DNA-topoisomerases mudam o nmero de ligaes no
DNA superenrolado atravs de quebras transitrias no DNA, que
se torna topologicamente relaxado devido quebra temporria
em uma ta (tipo I) ou em ambas as tas ao mesmo tempo (tipo
II).
1,17
Topoisomerases so essenciais para a viabilidade celular em
clulas procariticas e eucariticas. As quinolonas apresentam boa
seletividade para clulas bacterianas.
Oxazolidinonas
A linezolida (27) um agente bacteriosttico da classe das
oxazolidinonas que apresenta um amplo espectro de ao e
atividade frente a bactrias resistentes a outros antibiticos que
inibem a sntese de protenas.
18
A linezolida (27) liga-se subu-
nidade 50S ribossomal, impedindo sua unio com a subunidade
30S para formao do ribossomo 70S, essencial para o incio da
sntese proteica. Desta forma, a translao no pode ser iniciada.
Os outros antibiticos que inibem a sntese proteica atuam no
prprio processo de translao.
2,18
A linezolida (27) foi lanada
em 2000 e apresenta boa atividade frente bactrias Gram positivo.
Esse frmaco pode ser administrado por via oral, porm, apresenta
um alto nvel de efeitos colaterais.
2,18
RESISTNCIA BACTERIANA
A resistncia pode ser considerada um fenmeno ecolgico que
ocorre como resposta da bactria frente ao amplo uso de antibiticos
e sua presena no meio ambiente.
19
As bactrias multiplicam-se rapi-
damente, sofrem mutao e so promscuas, podendo trocar material
gentico entre linhagens de mesma espcie ou de espcies diferentes.
So consideradas micro-organismos de alta capacidade de adaptao
a diversos fatores, como a exposio a agentes qumicos potentes.
5,19
Antes do sculo XXI a resistncia bacteriana ocorria predomi-
nantemente em ambientes hospitalares. Atualmente, a resistncia
bacteriana est associada a diversos ambientes e pode atingir indiv-
duos saudveis.
19
Uma alternativa que pode ser adotada na tentativa
de contornar o problema da resistncia bacteriana o uso de terapias
associadas.
5
Porm, o uso extensivo e muitas vezes inapropriado
dos antibiticos, ms condies de higiene, uxo contnuo de via-
jantes, o aumento de pacientes imunocomprometidos e a demora no
diagnstico das infeces bacterianas tm favorecido o aumento da
resistncia.
9
Um dos mais recentes exemplos de resistncia a anti-
biticos a causada por patgenos intracelulares, que constituem
um reservatrio para infeces recorrentes. Isso ocorre quando os
patgenos atacam clulas como os macrfagos e cam em um estgio
de dormncia, protegidos dos efeitos dos antibiticos administrados.
Atualmente, os antibiticos ampicilina e meropenem so capazes de
combater mais eciente e rapidamente bactrias intracelulares do
que as extracelulares.
20
difcil predizer qual micro-organismo vai ser inuenciado por
um determinado antibitico, pois nem sempre ocorre a resistncia
com o patgeno que est sendo focado no tratamento. Um exemplo
foi a observao de resistncia de enterococci frente vancomicina
utilizada, inicialmente, para o tratamento do patgeno Staphylococcus
aureus resistente meticilina.
21
O conhecimento dos mecanismos bioqumicos e genticos
envolvidos na resistncia bacteriana de grande importncia para
se entender como a bactria pode desenvolver a resistncia. Apesar
destes mecanismos variarem de patgeno para patgeno, a resistn-
cia causada por alguns fatores bsicos: inativao do antibitico
diretamente na molcula bioativa por alteraes qumicas, geralmente
promovidas por enzimas bacterianas;
22
modicao do alvo que leva
perda de sensibilidade ao antibitico;
23
mudanas na bomba de euxo
e permeabilidade externa da membrana que promovem a reduo da
concentrao do antibitico sem sua modicao qumica;
16
trans-
misso do alvo algumas bactrias se tornam insensveis a alguns
antibiticos porque so capazes de transmitir a inativao de uma
Guimares et al. 674 Quim. Nova
determinada enzima, ou seja, os antibiticos com mecanismos de
ao que envolvem inibio enzimtica tornam-se inativos por no
terem o alvo para atuar.
25
Algumas estratgias podem ser adotadas para evitar o desenvolvi-
mento de resistncia bacteriana: preveno de infeces bacterianas
com o uso de vacinas, uso racional de antibiticos, controle e preven-
o da disseminao de micro-organismos resistentes, descoberta e
desenvolvimento de novos antibiticos.
26
Alm disso, a caracterizao
dos genes responsveis pela resistncia, assim como sua localizao
e diversidade so de grande importncia para o entendimento dos
fatores envolvidos na resistncia.
26
Atualmente, h apenas cerca de trs compostos antibiticos com
novos mecanismos de ao em estudos pr-clnicos Fase I, sendo
que estes compostos so de amplo espectro para micro-organismos
Gram positivo ou para infeces do trato respiratrio. O cenrio para
bactrias Gram negativo ainda mais alarmante, pois no h nenhum
composto com novo mecanismo de ao em ensaios pr-clnicos.
27

Aspectos econmicos so tambm preocupantes. As indstrias
farmacuticas desejam receber o retorno nanceiro investido ao longo
do processo de desenvolvimento aps terem um antibitico lanado
no mercado. Entretanto, o aumento do uso de agentes antibiticos
gera tambm o rpido aumento da resistncia bacteriana, o que con-
tribui para diminuir o tempo da patente. O investimento na busca de
agentes antibiticos ca mais complicado, pois a descoberta de um
antibitico pode levar cerca de 7-10 anos e o desenvolvimento de
resistncia pode levar 7-8 anos.
5
Os antibiticos mais recentes lanados no mercado e em estudos
clnicos esto ilustrados na Figura 7 e pode-se destacar a signicativa
e contnua contribuio de produtos naturais microbianos nesta classe
teraputica. A tigeciclina (77), pertecente classe das tetraciclinas,
foi recentemente lanada no mercado pela indstria Wyeth.
12
Os
derivados glicopeptdicos dalbavancina (21), telavancina (79) e
oritavancina (82) ainda esto sendo submetidos a estudos clnicos.
A telavancina (79) e oritavancina (82) atuam na terminao D-ala-
D-ala, precursores do peptdeoglicano da parede celular bacteriana.
O antibitico -lactmico ceftobiprol (80) est em estudos clnicos
fase III.
12
Dois novos macroldeos, telitromicina (78), lanada no
mercado, e cetromicina (81), em estudos clnicos Fase III, so
antibiticos que atuam no domnio V da regio 23S do rRNA.
12
O
iclaprim (83) est em Fase III de estudos clnicos e atua na inibio
da di-hidrofolato redutase.
12

PERSPECTIVAS PARA A DESCOBERTA E
DESENVOLVIMENTO DE NOVOS ANTIBITICOS
Diversas razes justicam a necessidade urgente por novos
agentes antibiticos: doenas infecciosas so a segunda maior causa
de mortalidade do mundo; altas taxas de resistncia microbiana,
especialmente em ambientes hospitalares; o decrscimo constante
observado no nmero total de novos agentes antimicrobianos aprova-
dos pelo FDA;
28
a necessidade de agentes que atuem por mecanismos
de ao diferentes aos frmacos em uso.
27,29
Novas fontes de produtos naturais
Antibiticos naturais geralmente apresentam estruturas qumicas
complexas importantes para as interaes especcas e reconheci-
mento por alvos macromoleculares em bactrias patognicas.
30
Neste
contexto, nos ltimos 10 anos os pesquisadores tm voltado ateno
para fontes naturais ainda pouco exploradas, pois organismos obti-
dos de novos ecossistemas esto frequentemente associados nova
diversidade qumica.
31
Uma ampla diversidade de organismos tem
sido explorada nos mais diversos habitats, especialmente em locais
de condies ambientais extremas (ambientes que possuem alteraes
drsticas de temperatura, pH, umidade e/ou luminosidade).
O crescente interesse por micro-organismos marinhos, especial-
mente actinobactrias, tem levado descoberta de substncias com
atividade antitumoral e antibitica.
32
Algumas destas substncias esto
ilustradas na Figura 6. O antibitico policclico abissomicina C (45)
foi isolado de uma actinobactria marinha do gnero Verrucosispora e
atua inibindo a sntese do cido p-aminobenzoico.
33
As marinomicinas
A-D (46-49), macroldeos incomuns formados por lactonas dimricas
do cido hidroxibenzoico conjugadas com cadeias policetdicas,
foram isoladas da actinobactria marinha Marinispora e apresenta-
ram atividade antibitica frente a Staphylococcus aureus resitente
meticilina e Enterococcus faecium resistente vancomicina.
34
Bactrias de solo ainda continuam sendo promissoras na busca de
antibiticos. A platensimicina (52), isolada de Streptomyces platensi,
apresentou atividade antibacteriana de amplo espectro contra Gram
positivo e encontra-se em fase de estudos pr-clnicos.
35,36

Outro grupo de micro-organismos que tem sido explorado so as
bactrias gliding, caracterizadas como um grupo diverso de micro-
organismos que possuem alta capacidade de adaptao a diferentes
condies ambientais, como orestas tropicais, costa marinha, guas
sujas, areias de desertos e nos tratos gastrointestinais de seres humanos e
animais. Essas bactrias tm sido consideradas importantes na ecologia
microbiana e compostos antibacterianos isolados destas bactrias apre-
sentaram diferentes mecanismos de ao antibitica, como inibio da
sntese proteica, inibio de RNA polimerase e interferncia na sntese
da parede celular.
37
Micro-organismos endofticos, organismos no pa-
tognicos que vivem no interior de vegetais, tm sido considerados outra
fonte promissora na busca de substncias bioativas.
31,38
Recentemente,
novas substncias antimicrobianas tm sido isoladas de fungos endo-
fticos.
7,39
Os peptdeos munumbicinas A-D, isolados de Streptomyces
associado Kennedia nigriscans, apresentaram atividade frente a dife-
rentes bactrias resistentes meticilina.
40
Guanacastepenos A e I (50,
51) foram isolados do fungo endoftico CR115. O guanacastepeno A
(50) apresentou atividade frente a cepas resistentes de Staphylococcus
aureus e Enterococcus faecalis e o guanacastepeno I (51) apresentou
atividade antimicrobiana frente a S. aureus.
41
As plantas tambm podem contribuir na descoberta de novos
antibiticos, pois possvel que produtos naturais antimicrobianos
possam ser biossintetizados para prevenir e/ou combater o ataque
de micro-organismos patognicos s plantas. Gibbons
42
cita vrios
exemplos de metablitos isolados de plantas frente a Staphylococcus
sp. Produtos naturais vegetais tambm tm sido apontados como
inibidores de bombas de euxo, conhecidas como bombas de resis-
tncia a mltiplos frmacos, um novo alvo na busca de antibiticos.
42
Fontes naturais pouco exploradas com interaes ecolgicas que
podem resultar na descoberta de compostos quimicamente diversos
e biologicamente ativos tm sido consideradas promissoras na busca
de novos antibiticos como, por exemplo, estudos de bactrias sim-
biontes com insetos.
43
Estudos qumicos das bactrias endosimbiontes
LU 2184 e LU 7314 isoladas de tecidos da pulga Ceratophyllus sp.
e do intestino da larva da liblula Ceoenagrion sp., respectivamente,
permitiram o isolamento de dois compostos antibacterianos: bacitra-
cina (LU 2184) e amicoumacina B (LU 7314).
43

Peptdeos antimicrobianos foram isolados do contedo estomacal
de pingins rei (Aptenodytes patagonicus)
44
e da hemolinfa de for-
migas bfalo oriundas da Austrlia (Myrmecia gulosa).
45
Plectasina,
um peptdeo com 40 resduos de amoninocidos foi isolado de um
ascomiceto saproftico, Pseudoplectania nigrella, e possui atividade
frente a bactrias Gram positivo.
46
Trs tetrapeptdeos constitudos
de aminocidos incomuns foram isolados de Streptomyces sp.
47
A
partir do fungo Phoma sp. foram obtidas trs substncias antibiticas:
cidos fomalnicos A-C (53-55).
48

Antibiticos: importncia teraputica e perspectivas 675 Vol. 33, No. 3
A contribuio da genmica na descoberta de antibiticos
naturais
Vrias abordagens relacionando a qumica dos produtos naturais
e tcnicas de biologia molecular tm sido desenvolvidas visando a
obteno de molculas naturais, que possam ser usadas como prot-
tipos para o desenvolvimento de novos antibiticos.
49
Os micro-organismos cultivveis so reconhecidos como uma
excelente fonte para a descoberta de novas molculas bioativas, sendo
responsveis por cerca de 10% de todos os produtos naturais bioativos
conhecidos.
50
Porm, apenas cerca de 1% dos micro-organismos
existentes so cultivveis atravs de tcnicas microbiolgicas nor-
malmente usadas em laboratrios.
50

Atualmente, abordagens como a metagenmica, a biossntese
combinatria e a explorao genmica tm possibilitado o cultivo
de um grande nmero de micro-organismos no cultivveis, a diver-
sicao de colees de compostos atravs da obteno de produtos
naturais no-naturais e o acesso a clusters de genes biossintticos
silenciosos, respectivamente, gerando uma promissora expectativa
quanto descoberta de novos compostos bioativos.
49
Os genomas de toda a microbiota encontrada na natureza so
denominados em conjunto de metagenoma.
51
Tcnicas de isolamento
do metagenoma do solo permitem que o DNA de toda comunidade
microbiana seja diretamente extrado do ambiente, eDNA (do ingls
environmental DNA). Atravs da expresso heterloga do eDNA
em hospedeiros facilmente cultivveis, como Escherichia coli, os
respectivos produtos naturais codificados pelo metagenoma de
micro-organismos no cultivveis podem ser produzidos, isolados,
identicados e avaliados biologicamente.
51
Como a produo de anti-
biticos geralmente est relacionada a vias complexas de biossntese
inseridas em extensas regies do DNA, a clonagem dessas vias
uma atividade bastante complexa.
29
O emprego desse tipo de tcnica
pode gerar uma boa expectativa na descoberta de novos antibiticos,
porm uma das limitaes desse mtodo que o hospedeiro pode
no expressar o fragmento de DNA incorporado.
29
A descoberta das
turbomicinas A-B (56, 57)
52
e da palmitoilputrescina (58)
53
utili-
zando tcnicas metagenmicas ilustra o potencial desta abordagem
na busca de novos antibiticos. Mais recentemente, a abordagem
metagenmica foi aplicada na busca de genes especcos relaciona-
dos a enzimas envolvidas em acoplamento oxidativo na biossntese
de antibiticos glicopeptticos, resultando no isolamento de dois
novos clusters de genes.
54
Aps estudos de reconstituio in vitro e
expresso heterloga destes clusters de genes, sete novos anlogos
aglicnicos sulfatados da teicoplanina foram isolados e identicados,
com atividade antibitica semelhante vancomicina e teicoplanina
frente a Staphylococcus aureus.
54
A biossntese combinatria envolve a engenharia gentica das vias
biossintticas naturais para a produo de novos compostos usando a
maquinaria biossinttica existente em cada organismo, especialmente
para obteno de antibiticos derivados policetdeos e peptdeos no
ribossomais.
55
Esta possibilidade foi primeiramente demonstrada por
Hopwood et al.,
56
que clonou os genes biossintticos do antibitico
actinorodina (59) de Streptomyces coelicolor nos micro-organismos
produtores de medermicina (60) e di-hidrogranaticina (61), respec-
tivamente. O actinomiceto Streptomyces sp. AM-7161 modicado
geneticamente produziu, alm de medermicina (60), grandes quanti-
dades de uma nova substncia mederorrodina (62), a qual contm um
grupo hidroxila adicional caracterstico da actinorodina. Streptomyces
violaceoruber T 22, modicado para produzir di-hidrogranaticina
(61), produziu uma nova substncia, di-hidrogranatirodina (63), pre-
servando as conguraes dos precursores nos estereocentros da nova
molcula. Este trabalho representa a primeira utilizao do conceito
de biossntese combinatorial de produtos naturais e abriu uma nova
perspectiva para a diversicao estrutural de produtos naturais de
interesse.
51
Um exemplo mais recente de sucesso para a biossntese
combinatorial foi a manipulao gentica das vias biossintticas
de Streptomyces roseosporus, produtor da daptomicina (20), que
originou uma plataforma robusta com mais de 60 novos antibiticos
lipopetdicos, os quais seriam dicilmente obtidos por sntese qu-
mica.
57
A engenharia metablica, caracterizada pela combinao de
delees de genes e expresses de genes externos atravs de vetores
de expresso replicativos, tambm tem sido usada com sucesso para
gerar variaes estruturais de antibiticos aminocumarnicos.
58
Outro aspecto da genmica que tem sido adotado para a busca
de substncias antibiticas a identicao de clusters de genes
associados com a biossntese de antibiticos, denominada de ex-
Figura 6. Substncias com atividade antimicrobiana obtidas a partir de micro-organismos pouco explorados e atravs da utilizao de ferramentas genmicas
NH
OH
O
O
OH OH
O O OH OH OH OH OH OH OH OH OH
NH2
O
HO
OH
OH
CH3
NH
HN
NH
56 Turbomicina A
57 Turbomicina B
N
H
N
H
H2N
H
N
O
58 Palmitoilputrescina
O
O
O COOH
O
O
O
H
O
N(CH3)2
HO
OH
OH
O
H
O
O
O
O COOH
OH
OH H
H
OH
OH
O
O
O
H
O
N(CH3)2
HO
O
H
O
OH
59 Actinorodina
60 Medermicina
61 Diidrogranaticina
62 Mederorrodina
OH
OH
O
O
O COOH H
OH
OH H
H
OH
OH
64 ECO-02310
63 Diidrogranatirodina
O O
O
O
O
OH
45 Abissomicina C
HO
O O
OH
OH OH OH O O
OH
HO
OH OH OH
46 Marinomicina A
HO
O
O
OH
HO
O
O
OH
R
HO
OH
OH OH
OH OH
47 R = H Marinomicina B
48 R = CH3 Marinomicina D
HO
O O
OH
HO
HO
HO
O
O
OH
HO
OH
HO OH
49 Marinomicina C
OH
O
51 Guanacastepeno I
O
O
H
OH
O
O
50 Guanacastepeno A
O
O
N
H
O
OH
HO2C
OH
52 Platensimicina
C
H H
OH
O
HO
53 cido fomalnico A
C
H H
OH
O 54 cido fomalnico B
C
H H
OH
O
55 cido fomalnico C
O
O
OH
OH
OH
O
O
O
COOH
Guimares et al. 676 Quim. Nova
plorao genmica (genome mining), que possibilita a identicao
de genes que no so expressos em condies usuais de cultivo.
59,60

Esta abordagem associa a informao gentica primria funo das
respectivas enzimas biossintticas, possibilitando a identicao de
novos produtos naturais. O isolamento e identicao do composto
coeloquelina a partir de Streptomyces coelicolor demonstra uma
efetiva contribuio desta tcnica para a descoberta de agentes
antimicrobianos.
61
O potente agente antifngico ECO-02301 (64)
tambm foi identicado atravs da explorao genmica em Strep-
tomyces aizunensis.
59
Novos mecanismos de ao antibitica
Entre os 10 antibiticos aprovados desde 1998, somente a oxa-
zolidinona linezolida (27) e o lipodepsipeptdeo daptomicina (20)
apresentaram novos mecanismos de ao.
62
H poucos relatos de
compostos antimicrobianos que desempenham diferentes mecanismos
de ao como nova estratgia para o combate a doenas infecciosas.
O composto friulimicina B (76) um dos poucos exemplos. Esta
substncia encontra-se em Fase I de estudos pr-clnicos, iniciada
na Sua em junho de 2007. Apesar da friulimicina B apresentar
similaridade qumica com a daptomicina, ela o primeiro membro
da nova classe de antibiticos lipopeptdicos bactericidas que parece
interferir na inibio da formao do lipdeo I, um precursor na sntese
de peptideoglicanos da parede celular.
28
Apesar dos nucleosdeos simples possurem mecanismos de ao
j descritos, agindo especialmente como inibidores da sntese de
cidos nucleicos, os derivados acil- e glicosil-nucleosdicos possuem
mecanismos de ao mais diferenciados e complexos. Por exemplo,
a puromicina e nucleocidina podem agir como inibidores da sntese
de cidos nucleicos ou protenas ou sntese de glicanos, enquanto as
nicomicinas inibem a sntese de quitina da parede celular fngica.
63

Frmacos com novos mecanismos de ao devero apresentar
vantagens no combate a micro-organismos resistentes e emergncia
Figura 7. Antibiticos recentes introduzidos no mercado farmacutico e em estudos clnicos
H
N
N N
H
NH
OH
O
O
N
O
H
N
HO
O
OH
O
O
O
HO
N H2N
NH
O O
OH
HO OH
CO2H
O
NH
O
HO
H
N
HN
O
OH
O
O
O
OH
OH
H2N
HN
H
N
HN
HN
N
H
OH
OH
O
HN
O
HO
O
O
O
O
65 Arilomicina (pr-clnica)
Streptomyces sp.
73
67 ECO-0501 (pr-clnica)
Amycolatopsis orientallis
75
66 GE23077 (pr-clnica)
Actinomadura sp.
74
H2N
O
NH
O
N
H
O
N
H
O
O
NH2
O
OH
H
N
O
NH
O
N
H
O
OH
Cl
O
H
N
O
N
H
O
OH
H
N
O
OH
N
H
O
OH
H
N
O
N
H
O
H
N
OH
O
OH
N
H
O
H
N
O
O
OH
OH
OH
O
O
OH
HO
HO
HO
O
HN
NH2
O
HN
O
OH
68 Ramoplanina (Fase II)
Actinoplanes sp.
76
72 GE81112 (pr-clnica)
Streptomyces sp.
80
N
H
OH
H
N
O
N
H
O
OH
O H2N
O
N
HN
H
N
O
OH
O
HO
N
H
N
Cl
N
H
N
O
N
O
F
O
N
O O
OH
70 LBM415 (Fase I)
Actinonina de Streptomyces sp.
78
NH HN
HN
HN
NH
NH
NH
HN
OH
H
O H
NH
N
HN
HN
O
OH
OH
OH
OH
HO
O
HO
O
O
H O
O
O O
O
OH
HO
O
OH
OH
O
OH
O
71 AC98-6446 (Pr-clnica)
Manopeptimicina de Streptomyces hygroscopicus
79
O N NH2
O
OH
NH
N
H
O
HN
H
N
HN N
H
H
N
O
HO2C
H
N
O
H
N CO2H
O
O
O
HO
OCH3
HO
OH
N
H2N NH
O
O
69 Muraimicina (pr-clnica)
Streptomyces sp.
77
73 Nocatiacins (pr-clnica)
Nocatiacina I de Nocardia sp.
81
N
OH
O
O
N
S
O
O
NH
O
O
N
S
N S
N
NH
O
NH
O
HO
O
S
N
HN
O
O
O
N
HO
OH
N
S
H
N
O
NH2
O O
H
O
HO
74 Retapamulina (Fase III)
Pleuromutilina de Pleurotus mutiliz
82
O
O
O
O
H3CO
OH
O
O OH
Cl
OH
Cl
OH
O
O
HO
HO
O
O
H
OH
75 Tacumicina B (Fase II)
Dactylosporangium aurantiacum
83
H2N
N
S
O
OH
NH2
O O OH O OH
N
H
O
N
H H
N
OH
H
N
77 Tigeciclina
79 Telavancina
O O
Cl O
Cl
HN
O
N
H
O
H
N
O
N
H
O
H
N
O
N
H
O
H
N
OH
H H
H
H
HO
COOH
HO OH
N
H
P
OH
O
O
HO
HO
H
HO
O
N
H
H
HO
H
N
Tygacil - Wyeth Pharmaceuticals
84
TD-6424 - Theravance
28
O
O
OMe
H
O
H
N
O
O O
O
N
N
N
O
Me2N OH
H
78 Telitromicina
Sanofi-Aventis
12
N
O
N
H
H
N
O
N
H
O
O
HN
H
OH
O
O
NH O
H
N OH
O
O
H
N
O OH
O
N
O
H
N
NH
O
NH2
O
H
H
N
H
O
H
NH2
H
O
H
76 Friulimicina B
82 Oritavancina
O O
N
H
O
H
N
H
N
O
N
H
O
H
N
O
N
H
O
O
HN
HO OH
OH
O
OH
H
NH2
O
H H
OH
H
O
O
NH2
H
HO
Cl O
O
NH
HO
H
O
HO O
H
HO
HO
Cl
Targanta Therapeutics
28
N
S
O
O OH
N
NH
O
H
N
O
N
N
S
N
H2N
OH
80 Ceftobiprol
Johnson & Johnson
12
O
O
O
O
O
H
N
O
O
N
O
O
NMe2
HO
81 Cetromicina
Advanced Life Sciences
12
O
N
N
H2N NH2
MeO
OMe
83 Iclaprim
Arpida
12
NH2
O
O
OH
OH
Antibiticos: importncia teraputica e perspectivas 677 Vol. 33, No. 3
de novos patgenos. Butler e Buss
64
ilustram alguns compostos com
potencial para novas classes de antibiticos, destacando-se arilomi-
cina, manopeptimicina, muraimicina, caprazamicina e nocatiacina,
alm de outros compostos em fase de estudos clnicos.
64
Novas estratgias tm sido desenvolvidas na tentativa de otimi-
zar processos de elucidao de mecanismos de ao de candidatos
a frmacos antibiticos, como ensaios baseados em microarray e
biomarcadores . Essa tcnica consiste em trs etapas fundamentais:
construo de uma base de dados com as respostas transcricionais de
uma bactria frente a diferentes compostos antibiticos; padronizao
das concentraes e tempo de exposio dos antibiticos no ensaio
com mecanismos de ao ainda desconhecidos e a determinao
de genes transcritos envolvidos em novos mecanismos de ao. A
anlise dos dados realizada comparando-se respostas de diferentes
antibiticos com mecanismos de ao conhecidos com compostos de
mecanismos de ao desconhecidos. Os resultados so obtidos atravs
das respostas antibiticas baseadas em dados microarray dos meca-
nismos de ao de antibiticos conhecidos em funo das respostas
transcricionais de uma bactria (deve ter sequenciamento gentico
previamente caracterizado) por biomarcadores frente ao composto
do qual se deseja determinar o mecanismo de ao.
65
Novos ensaios antibacterianos
Os ensaios celulares caracterizam-se pela deteco dos efeitos que
um composto apresenta frente ao crescimento celular. Esta triagem ba-
seada na anlise do fentipo pode ser informativa acerca de interaes
entre os compostos e o sistema celular submetido no ensaio, porm no
possvel obter nenhuma informao acerca do mecanismo de ao
pelo qual as substncias atuam, j que a resposta fenotpica observada
pode estar relacionada a uma grande variedade de alvos responsveis
pelos efeitos biolgicos observados.
66
Alm disso, uma desvantagem
desta abordagem que a presena de compostos citotxicos em extratos
brutos pode mascarar o potencial de outros compostos.
67

Atualmente, ensaios high-throughput screening (HTS) tm sido
amplamente empregados para a descoberta e desenvolvimento de
novos frmacos. Esses ensaios so realizados por equipamentos
automatizados, comumente conhecidos como robotizados, que per-
mitem triagens in vitro e in vivo de grandes colees de compostos.
Os ensaios HTS permitem uma rpida anlise na identicao de
compostos bioativos com aplicaes qumicas e biolgicas.
68
Alguns alvos possuem alta probabilidade de sucesso na busca
de compostos antibacterianos: transglicosilase, que tem importante
funo na formao de substratos lipoglicopeptdicos para formao
da parede celular tem sido alvo para ensaios HTS; a sntese proteica
bacteriana tem sido explorada a nvel ribossomal utilizando tcnicas
de cristalograa de raios-X a m de se vericar em qual regio do
RNA ribossomal o antibitico se liga; em bactrias Gram positivo a
busca de inibidores de enzimas sortases, relacionadas formao da
parede de peptideoglicano, podem ser alvos para agentes bactericidas
e/ou bacteriostticos; enzimas que participam da via de biossntese do
isopreno, descritas no metabolismo de vrias bactrias patognicas,
tm sido consideradas alvos interessantes, pois so enzimas diferentes
das encontradas em seres humanos.
30
Alvos envolvendo mltiplas enzimas so priorizados devido a
uma maior probabilidade de se encontrar molculas capazes de se
ligarem a uma ou mais unidades, alm de serem alvos mais difceis
de favorecerem a resistncia.
27
Alvos envolvendo a virulncia, que
pode ser promovida por intermdio de molculas sinalizadoras em
processos quorum sensing, tambm tm sido explorados a m de se
detectar fatores responsveis pela patogenicidade. Nas bactrias, as
clulas monitoram sua densidade populacional por meio de sinais
qumicos, os quais tm sua produo favorecida em funo do
crescimento celular bacteriano. Aps um limiar de concentrao de
densidade populacional as molculas quorum sensing podem indu-
zir diferentes comportamentos para a comunidade bacteriana como
bioluminescncia, produo de antibiticos, formao de biolme,
virulncia, esporulao e capacidade de adaptao.
67,69
Recentemente, informaes sobre estrutura molecular de alta
resoluo de ribossomos tm contribudo para o desenvolvimento
de novos antibiticos que atuam a nvel ribossomal, pois permitem
observar quais caractersticas conectivas a nvel atmico dos ribos-
somos e seus ligantes so importantes.
70

Em muitas bactrias, a expresso de um determinado nmero de
genes crucial para o metabolismo regulada por estruturas do mRNA
conhecidas como riboswitches. Em algumas bactrias patognicas,
essas regies regulam a expresso gentica essencial para a sobrevi-
vncia ou virulncia do micro-organismo. Portanto, pode-se predizer
que metablitos que interajam nas regies riboswitches podem causar
efeitos letais para as bactrias, j que o composto mimtico no pode
desempenhar funes semelhantes ao ligante natural. Pesquisas tm
sido conduzidas utilizando essas regies como alvos para compostos
antibacterianos.
71
Porm, tanto os ensaios bioqumicos quanto os ensaios celulares
apresentam desvantagens por desconsiderarem a presena do hos-
pedeiro infectado. importante considerar que i) algumas doenas
afetam um organismo como um todo, e a maioria dos organismos
no pode ser reconstituda in vitro; ii) clulas e organismos esto
siologicamente correlacionados e esta interface pode ser crtica para
o desenvolvimento de algumas doenas, o que no pode ser recons-
titudo in vitro; iii) o progresso de uma doena tambm no pode ser
construdo in vitro. Com isso, vrios hits promissores apresentam
falhas quando submetidos a ensaios de toxicidade e eccia in vivo.
Isso ocorre porque tanto os patgenos quanto as substncias subme-
tidas a esses tipos de ensaios se comportam diferentemente quando
observadas in vitro e no hospedeiro. Uma alternativa a utilizao de
mamferos, como ratos e cobaias, infectados com micro-organismos
patognicos. Porm, esses ensaios tm um alto custo e aspectos ticos
envolvidos.
72
Organismos invertebrados com gentica bem caracte-
rizada, como Drosophylla, Caenorhabditis elegans e Arabidopsis
thaliana tm sido utilizados como hospedeiros de micro-organismos
patognicos caracterizando novos modelos biolgicos na busca de
agentes antimicrobianos.
72

Caenorhabditis elegans e Danio rerio (zebrash) tm sido
utilizados em ensaios antibacterianos, contribuindo para um ensaio
in vivo mais informativo, onde podem ser descobertos compostos
com atividade in vivo, incluindo pr-frmacos; compostos que
atuam sobre a virulncia do micro-organismo utilizado no ensaio
ou compostos que aumentam a resposta imune do hospedeiro.
Alm disso, podem ser detectados possveis efeitos txicos dos
compostos, o ensaio pode ser realizado em HTS e a infeco pode
ser monitorada em tempo real.
72
Vale mencionar que muitos prottipos no so adequados ao
futuro desenvolvimento de frmacos devido a problemas relacionados
farmacocintica. Com estas caractersticas, ensaios baseados em
modelos de infeco in vivo podem levar identicao de novas
substncias ativas com maior quantidade de informaes agregadas,
o que pode agilizar o processo de desenvolvimento de eventuais
antibiticos a partir dos prottipos descobertos.
72
CONCLUSES
As novas estratgias da pesquisa em produtos naturais micro-
bianos, envolvendo a busca de substncias em micro-organismos
pouco explorados e a utilizao de ferramentas genmicas para o
acesso a novos produtos naturais, aliadas aos novos ensaios biolgi-
Guimares et al. 678 Quim. Nova
cos adotados nas triagens, podem acelerar o processo de descoberta
de novos antibiticos, extremamente importantes num cenrio de
rpido desenvolvimento de resistncia pelas bactrias aos agentes
teraputicos disponveis.
A ampla biodiversidade existente no mundo combinada s di-
versas tcnicas citadas neste trabalho indica que novos compostos
antibiticos podem ser descobertos atravs da pesquisa com micro-
organismos ou outras fontes naturais.
AGRADECIMENTOS
Ao apoio nanceiro da FAPESP (Fundao de Amparo Pesquisa
do Estado de So Paulo), CAPES (Coordenao de Aperfeioamento
de Pessoal de Nvel Superior) e CNPq (Conselho Nacional de De-
senvolvimento Cientco e Tecnolgico) pelo apoio nanceiro s
pesquisas na forma de auxlios e bolsas de pesquisa.
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