Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
Princpios bsicos
A espectrofotometria visvel e ultravioleta um dos mtodos analticos mais usados
nas determinaes analticas em diversas reas. aplicada para determinaes de compostos
orgnicos e inorgnicos, como, por exemplo, na identificao do princpio ativo de frmacos.
A espectroscopia de absoro molecular valiosa para a identificao dos grupos
funcionais na molcula. Mais importante, entretanto, so as aplicaes da espectroscopia de
absoro visvel/ ultravioleta para a determinao quantitativa de compostos contendo grupos
absorventes.
A regio ultravioleta do espectro geralmente considerada na faixa de 200 a 400 nm,
e a regio do visvel entre 400 a 800 nm. As energias correspondentes a essas regies so ao
redor de 150 a 72 k.cal.mol -1 na regio ultravioleta, e 72 a 36 k.cal.mol -1 para a regio visvel.
Energias dessa magnitude correspondem, muitas vezes, diferena entre estados eletrnicos
de muitas molculas.
A absoro da regio visvel e ultravioleta depende, em primeiro lugar, do nmero e
do arranjo dos eltrons nas molculas ou ons absorventes. Como conseqncia, o pico de
absoro pode ser correlacionado com o tipo de ligao que existe na espcie que est sendo
estudada.
De um ponto de vista prtico, o aspecto mais importante do clculo quntico a
determinao de quanta luz absorvida pela amostra. Isto descrito pela lei de BeerLambert, que d a relao entre a intensidade da luz incidindo na soluo (I0), e a intensidade
da luz saindo da soluo (I).
Log (I0/ I) =A=cl
A= absorbncia
= absorvidade molecular ou coeficiente de extino
c= concentrao do material absorvedor
l= espessura da amostra da amostra atravs da qual a luz passa.
Espectrofotmetros
Espectrofotmetros so instrumentos capazes de registrar dados de absorvncia ou
transmitncia em funo do comprimento de onda. Este registro chamado de espectro de
absoro ou de espectro de transmisso, segundo o dado registrado for de absorvncia ou
transmitncia, respectivamente. O espectro de absoro caracterstico para cada espcie
qumica, sendo possvel a identificao de uma espcie qumica por seu espectro de
absoro.
Fontes de radiao
Monocromador
Compartimento
Amostra/padro
Dispositivo de
processamentos de dados
Sistema detector
Fontes de radiao
As fontes de radiao mais comuns baseiam-se na incandescncia e so muito
prticas no infravermelho e no visvel, mas devem atuar em temperaturas elevadas na faixa do
ultravioleta. As fontes de radiao so constitudas por filamentos de materiais que so
excitados por descargas eltricas com elevada voltagem ou aquecimento eltrico.
Para que uma fonte de radiao seja considerada de boa qualidade deve:
- gerar radiao continua, ou seja, emitir todos os comprimentos de onda, dentro da
regio espectral utilizada;
- ter intensidade de potncia radiante suficiente para permitir a sua deteco pelo
sistema detector da mquina;
-ser estvel, isto , a potncia radiante deve ser constante. Alm disso, deve ter vida
longa e preo baixo.
Tipos de fontes de radiao
Cubeta convencional
Outras condies como pH, tcnicas de extrao por solventes, ajuste do estado de
oxidao, remoo prvia dos interferentes, controle da fora inica do meio, e as variaes
das temperaturas tambm so observadas.
Espectro de protenas
- possuem espectro bem caracterstico;
-so influenciadas pelo meio local: dependem de fenmenos eltricos;
-mostra a quantidade de hlice e folha ;
-caso a protena seja desnaturada, a espectroscopia ser diferente.
Espectro de cidos nuclicos
-tem a absorbncia menor que a soma das absorbncias dos nucleotdeos
individuais (hipocromicidade) e ocorre devido ao empilhamento ou alinhamento dos
planos paralelos das bases;
-se ocorrer um acrscimo na absoro hipercromicidade
-serve para determinar se esto estruturados.
Fluorescncia e fosforescncia
Fluorescncia a emisso de luz associada com eltrons que se movem de um
estado excitado para o estado fundamental.
Fosforescncia a capacidade que uma espcie qumica tem de emitir luz.
As duas so freqentemente usadas para se estudar processos biolgicos e so
muito mais teis que a absorbncia, por serem consideravelmente mais sensveis,
podendo, ento, detectar concentraes bastante baixas.
Automao nos mtodos espectrofotomtricos
Os principais motivos para o desenvolvimento de um sistema que viabilizasse vrias
determinaes simultneas com o mnimo de trabalho humano foram:
- preencher as necessidades dos laboratrios de analises clnicas, devido crescente
nmero de analises;
- o aumento do nmero de espcies qumicas a serem determinadas no sangue e na
urina como anlise de rotina.
BIBLIOGRAFIA
Silverstein, R. M., Bassler, G. C., Morrill, T. C.,
Identificao espectromtrica