Micro Apostila Detalhada

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Curso de Microbiologia Bsica

Curso : MB1504
INDICE GERAL
Captulo 1: Introduo Microbiologia

a.
b.
c.
d.
e.
Microbiologia como uma Cincia

A clula
Origem da Vida
O microscpico
Caractersticas distintivas dos principais grupos de microrganismos
Captulo 2: Caracterizao dos Microrganismos

a.
b.
c.
d.
e.
Isolamento e Cultivo de Culturas puras

Conservao das culturas puras
Preparo dos microrganismos para a Microscopia Luminosa
Informaes utilizadas para caracterizar os microrganismos
classificao dos organismos vivos
Captulo 3: Estrutura das clulas Procariticas e Eucariticas

a. Ultra-estrutura dos microrganismos procariotos
b. Ultra-estrutura dos microrganismos eucariotos
Captulo 4: Exigncias Nutricionais e o Meio Microbiolgico

a. Elementos qumicos como nutrientes
b. Classificao nutricional dos microrganismos
c. Meios utilizados para o crescimento dos microrganismos
Captulo 5: Cultivo e Crescimento dos Microrganismos

a. Condies fsicas para o cultivo dos microrganismos
b. Reproduo e cresimento dos microrganismos
Captulo 6: Controle dos Microrganismos

a. Antimicrobianos
b. Agentes fsicos
c. Agentes qumicos
Captulo 7: Os Principais Grupos de Microrganismos

a. Eubactrias e Arqueobactrias
b. Eucaritos
1
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Captulo 8: Metabolismo Microbiano

a.
b.
c.
d.
e.
f.
Catabolismo e Anabolismo
Bioenergtica
Principais fontes de energia dos microrganismos
Vias de degradao de nutrientes
Transporte de nutrientes para o interior da clula
Utilizao de energia para processos biosintticos
Captulo 9: Gentica Microbiana

a.
b.
c.
d.
e.
Cromossomos de clulas procariticas e eucariticas

Replicao do DNA
O gene
Variabilidade dos microrganismos - Mutao
Regulao da expresso gnica
Captulo 10: Vrus

a.
b.
c.
d.
Principais caractersticas
Replicao dos Vrus
Isolamento e identificao dos vrus
Patogenicidade
MICROBIOLOGIA BSICA
CAPTULO 1: Introduo Microbiologia
Microbiologia como uma Cincia

Estuda a natureza fundamental e as propriedades dos microrganismos (Microbiologia Bsica).
O controle e o uso dos microrganismos de maneira benfica (Microbiologia Aplicada)
Principais temas de pesquisa usados na Microbiologia Bsica:
1. Caractersticas Morfolgicas - forma e tamanho da clula; composio qumica e

funo de suas estruturas internas.
2. Caractersticas Fisiolgicas - p.ex; a necessidade nutricional especfica e as condies

fsicas necessrias ao crescimento e reproduo.
3. Atividades Bioqumicas - como os microrganismos quebram os nutrientes para obter

energia e como eles usam esta energia para a sntese de compostos da clula.
4. Caractersticas Genticas - a hereditariedade e variabilidade das caractersticas.

5. Potencial de causar doena - presena ou ausncia para o homem, animais e plantas
6. Caractersticas Ecolgicas - a ocorrncia natural dos microrganismos no ambiente e
sua relao com outros m.o.
7. Classificao - a relao taxonmica entre os grupos no mundo microbiano.

Principais campos de aplicao da microbiologia Aplicada (medicina, alimentos e laticneos,
agricultura, indstria e ambiente). Alguns exemplos:
1. Produo de vacina com mtodo mais econmico

2. Processos mais eficientes para o tratamento de esgoto
3. Sntese de numerosas substncias, desde mais simples, como o cido ctrico, a
antibiticos mais complexos, e enzimas
4. Utilizado como suplemento alimentar (protena de clula nica - SCP)

5. Produo de gs metano, utilizado como combustvel (pesquisa atual)
6. Biometalurgia - explora a atividade qumica de bactrias para extrair minerais de
minrios de baixa qualidade
7. Usados como "inseticidas biolgicos", no lugar de produtos qumicos; microrganismos

capazes de degradar poluentes
8. Microrganismos capazes de melhorar a capacidade de detergentes caseiros, em

9.
10.
remover manchas
Isero de genes bacterianos em plantas para matar insetos
Produo de enzimas bacterianas que dissolvem cogulos sanguneos; vacinas
humanas utilizando vrus de insetos; e testes laboratorias rpidos para diagnstico de
infeco viral (novas pesquisas da Engenharia Gentica-Microbiologia Mdica)
A clula
As clulas microbianas podem ser divididas em duas categorias com base em como a
substncia nuclear se apresenta dentro da clula: Clulas Eucariticas, apresenta um ncleo
separado do citoplasma por uma membrana nuclear; Clulas Procariticas, que apresentam
material nuclear sem membrana.
Todos os organismos, unicelulares (constitudos de uma nica clula), ou multicelulares (que
contm muitas clulas), apresentam as seguintes caractersticas:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
reproduo
utilizao de alimentos como fonte de energia
sntese de substncias e estrutura celular
excreo de substncias
resposta a alteraes ambientais
mutaes (alteraes sbitas em suas caractersticas hereditrias), embora ocorram
raramente
Elementos diferenciais entre clulas procariticas e eucariticas:

Elemento
Grupos pertencentes
Tamanho da clula
Ncleo
Organelas envolvidas por

membrana
Flagelo
Glicoclice
Parede Celular
Membrana citoplasmtica
Ribossomos
Cromossomos (DNA)
Diviso Celular
Reproduo sexual
Relao G + C (%)
Clulas Procariticas
Bactrias, algas verdeazuis
tipicamente 0.2-2.0 m
Clulas Eucariticas
Algas, fungos, protozorios,
vegetais e animais
tipicamente 10-100 m
limitado por membrana
membrana nuclear e
nuclear e presena de
nuclolo ausentes
nuclolo
presentes : lisossomos,
complexo de Golgi, retculo
ausente
endoplasmtico, mitocndria
e cloroplastos
consiste de 2 protenas
complexo : consiste de
construdas em blocos
mltiplos microtbulos
presente em algumas
presente como uma
clulas que tem parede
cpsula ou camada limosa
celular
usualmente presente;
quimicamente complexa
quando presente
(parede celular bacteriana quimicamente simples
tpica inclue peptidoglicano)
presena de esteris e
no contm carboidratos e
carboidratos que servem
esteris
como receptores
80S (retculo
70S, distribuidos no
endoplasmtico); 70S
citoplasma
(mitocndria e cloroplasto)
cromossomo nico, circular, um ou mais cromossomos,
sem histona
linear, com histona
fisso binria
mitose
transferncia de DNA
envolve meiose
apenas por fragmentos
28 a 73
em torno de 40
Origem da Vida
Concluses do estudo da origem da vida :
1. origem nica das formas de vida

2. existem 3 linhas primrias de descendncia evolucionria: Eubactrias,
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Arqueobactrias e Eucaritos
h duas linhas de procaritos: Eubcterias e Arqueobcterias
tanto os cloroplastos como as mitocndrias - origem bacteriana
o relgio evolucionrio no constante para todos os microrganismos
as maiores divergncias entre as Arqueo e Eubactrias so das termoflicas
a fotossntese surgiu depois
os organismos mais primitivos so associados aos ambientes hidrotermais (gua + alta
temperatura)
os primeiros organismos deveriam ter duas propriedades: mecanismo de metabolismo
(energia) e mecanismo de replicao (hereditariedade)
Os primeiros organismos alm de anaerbios, deveriam ser organotrficos fermentativos

No surgimento da vida em aerobiose, imagina-se ter comeado com as cianobactrias, as
quais crescem produzindo molculas de oxignio (O 2), as quais se decompem em tomos
(O), que reagiria com as novas molculas de oxignio produzidas, formando o oznio (O3).
Com a camada de oznio, surge proteo dos raios UV, e surgimento de microrganismos
aerbios.
Os organismos primitivos devem ter usados RNA como material gentico, tanto para
reproduo como para produo de enzimas.
Diviso dos Reinos (Antiga):
1.
2.
3.
4.
5.
Monera (procaritos) - microrganismos primitivos

Protista (algas, protozorios, fungos limosos)
Plantae (plantas verdes, algas superiores)
Fungi (fungos - bolores e leveduras)
Animalia (animais que ingerem alimentos)
Diviso dos Reinos (Atual):
1. Eubactrias (clulas procariticas)

2. Arqueobactrias (clulas procariticas) - microrganismos primitivos
3. Eucaritos (clulas eucariticas)
A teoria endosimbitica prope a maneira pela qual as clulas eucariticas tem evoluido:
origem das organelas eucariticas (cloroplastos e mitocndrias) a partir dos procaritos.
O Microscpico
O olho humano incapaz de perceber um objeto com um dimetro menor que 0.1 mm, a uma
-3
distncia de 25 cm. Os microrganismos tem dimenses de m (1m = 10 mm)
Os microscpicos so classificados dependendo do princpio no qual a ampliao baseada:
pticos (empregam dois sistemas de lentes, ocular e objetiva, atravs das quais a imagem
ampliada obtida) e eletrnicos (empregam um feixe de eltrons para produzir a imagem
ampliada)
A microscopia ptica a mais comumente utilizada no laboratorio de microbiologia. Em geral, o

microscpico ptico amplia o objeto at certo limite (1.000 a 2.000 vezes). Esta limitao
devida ao poder de resoluo.
Poder de Resoluo (P.R) - medida do menor objeto que pode ser visto ao microscpico
P.R = comprimento de onda ;
A.N
A.N. (Abertura Numrica) = n.sen
n = ndice de refrao; (teta) = semi ngulo do cone de luz que entra na objetiva.
Pode-se usar um meio (p.ex. leo de cedro) com o mesmo ndice de refrao do vidro da
lmina, para que os raios de luz deixem a lmina sem refrao, seguindo uma direo reta
para dentro da objetiva, aumentando assim o poder de resoluo (P.R.)
Principais caractersticas das objetivas do microscpio ptico :

Mxima
Ampliao
Dimetro
Dist. de Poder de
Distncia focal
Abertura
ampliao
linear da
aprox. do
trabalho resoluo
aproximada(mm)
'Nmerica
aprox.
objetiva
campo(mm)
aprox.(mm) (m)
(ocular 10x)
10x
(objetiva
seco de
16
1.5
0.25
4.50
2.0
100 vezes
pequeno
aumento)
40-45x
(objetiva
seco de
4
0.34
0.65
0.65
0.7
450 vezes
grande
aumento)
90-100x
(objetiva
1.8
0.15
1.25
0.13
0.4
1000 vezes
de
imerso)
A objetiva produz uma imagem real ampliada do objeto, a qual ainda aumentada em escala
muito maior pela ocular, sendo a mesma captada pelo olho humano
O Microscpico eletrnico possui grande vantagem diante do ptico, apresenta um poder de

resoluo 100 vezes maior, em virtude do comprimento de onda muito curto dos raios
o
o
-4
eletrnicos utilizados. possvel resoluo de objetos to pequenos quanto 10 A (1A =10
m). Produz aumentos teis de 200.000 a 400.000
Tipos de
Microscopia
Aumento
mx. til
Microscopia ptica
1000 - 2000
Campo Luminoso
Microscopia ptica
1000 - 2000
Campo Escuro
Microscopia ptica
1000 - 2000
Ultravioleta
Microscopia ptica
1000 - 2000
Fluorescente
Microscopia ptica
1000 - 2000
Controle de Fase
Microsc. Eletrnica
200.000 400.000
Aspecto do Espcime
Aplicaes
coradas ou no, quando

determinao dos elementos grosseiros de
coradas geralmente
bactrias,leveduras,bolores,algas e protozorios
assumem a cor do corante
geralmente no coradas,
microrganismos que exibem algum dado
aparecem brilhante sobre
morfolgico caracterstico em estado vivo
um fundo escuro
no visualizado diretamente; diferenciao de componentes celulares com base
fotografado
em > ou < absoro da luz UV.
brilhante e corado, corante
tcnicas diagnsticas
fluorescente
exames de estruturas celulares em clulas vivas
de microrganismos maiores
vrios graus de brilho
(leveduras,algas,protozorios, e algumas
bactrias)
exames de vrus e da ultra estrutura das clulas
visto em tela fluorescente
microbianas
Caractersticas distintivas dos principais grupos de microrganismos
Microrganismos
Caractersticas
1.Protozorios
eucariticos, unicelulares, ingerem partculas alimentares, no

apresentam parede celular rgida, no contm clorofila, alguns
movem-se por meio de flagelo ou cilios, e so amplamente
distribuidos na natureza (principalmente aquticos)
2. Algas
eucariticos, considerados semelhantes s plantas, contm

clorofila, podem ser uni ou multicelulares, apresentam parede
celular rgida, crescem em muitos ambientes diferentes (a maioria
aquticos)
3. Fungos
eucariticos, com parede celular rgida, uni ou multicelulares,

desprovidos de clorofila, absorvem nutrientes dissolvidos do
ambiente (no digerem alimentos) - so os bolores e leveduras
Bolores
fungos multicelulares, produzem estruturas filamentosas (hifas,

miclios...)
Leveduras
fungos unicelulares, apresentam formas variadas (esfrica a ovide;

elipside a filamentosos)
4. Bactrias
procariticos, carecem de membrana nuclear e outras estruturas

intracelulares organizadas observadas nos eucariticos, so
divididas em dois grupos: Eubactrias e Arqueobactrias
Eubactrias
apresentam vrias formas (esfrica, bastonete e espirilo) e

aparecem em formas agrupadas, variam de 0.5 - 5.0 m, so
unicelulares, algumas apresentam flagelos
semelhantes s eubactrias pelo microscpio, porm apresentam

diferenas importantes quanto sua composio qumica, hbeis
Arqueobactrias
em viver em ambientes no usuais (lagos salinos, piscinas
trmicas, fundo de pntanos)
5. Vrus
no so celulares como os citados acima, so muito menores (20 a

300 nm; 1nm=1/1000m) e mais simples em estruturas que as
bactrias, contm somente um tipo de cido ncleico circundante
por um envelope protico (DNA ou RNA), podem multiplicar-se
somente dentro das clulas vivas, apresentam-se sob vrias formas
CAPTULO 2 : Caracterizao dos Microrganismos
Uma populao microbiana, sob condies naturais, contm muitas espcies diferentes. Os
microbiologistas devem ser capazes de isolar, enumerar, e identificar os microrganismos em
uma amostra, para ento classific-los e caracteriz-los.
Isolamento e Cultivo de Culturas Puras
Os microrganismos na natureza normalmente existem em cultura mistas, com muitas espcies
diferentes ocupando o mesmo ambiente.
Ao determinar as caractersticas de um microrganismo, ele deve estar em cultura pura, ou
seja, em que todas as clulas na populao so idnticas no sentido de que elas se originaram
de uma mesma clula parental.
Em laboratrio, os microrganismos so cultivados ou desenvolvidos em material nutriente
denominado meio de cultura. O tipo de meio utilizado depende de vrios fatores :
1. consideraes sobre a origem do material a ser analisado

2. a espcie que se imagina estar presente nesta amostra
3. as necessidades nutricionais dos organismos
Tcnicas de isolamento de microrganismos:
O material a ser analizado colocado no meio de cultura - inculo - O processo de inoculao
pode ser feito mediante:
1. tcnica de esgotamento por meio de estrias superficiais - a amostra semeada na

2.
3.
superfcie do meio solidificado com uma ala de semeadura para esgotar a populao,
assim em algumas regies do meio, clulas individuais estaro presentes.
tcnica de semeadura em superfcie - uma gota da amostra diluida colocada na
superfcie do gar e com o auxlio de uma ala de semeadura de vidro (ala de
Drigalky) esta gota espalhada sobre o meio.
mtodo de pour-plate - a amostra diluida em tubos contendo meios liquefeitos (45
o
C). Aps homogeneizao so distribuidos em placas de Petri; e aps a solidificao
dos meios as placas so incubadas. As colnias se desenvolvero tanto acima quanto
abaixo da superfcie (colnias internas).
Em cada uma dessas tcnicas o objetivo diminuir a populao microbiana, assim as clulas
individuais estaro localizadas a uma certa distncia umas das outras. As clulas individuais,
se estiverem distante o suficiente, produziro uma colnia que no entra em contato com
outras colnias. Todas as clulas em uma colnia tem o mesmo parentesco. Para isolar uma
cultura pura, uma colnia individual transferida do meio para um tubo de ensaio.
Conservao das Culturas Puras
Uma vez que os microrganismos tenham sido isolados em cultura pura, necessrio manter as
culturas vivas por um perodo de tempo com o objetivo de estud-las.
Para armazenar por um perodo curto, as culturas podem ser mantidas temperatura de
o
refrigeradores (4 a 10 C)
10
o
Para armazenar por um perodo longo, as culturas so mantidas em nitrognio lquido (-196 C)
o
ou em freezers (-70 a -120 C), ou ainda congeladas, e ento desidratadas e fechadas vcuo
em um processo denominado liofilizao
Alguns dos mais usados mtodos de conservao:
1.
2.
3.
4.
transferncia peridica para meios novos

sob camada de leo mineral
liofilizao
congelamento
As colees de culturas so bancos de microrganismos e outras clulas que esto disposio

de pesquisadores, professores, investigadores de patentes, e todo aquele que necessite
estudar um tipo particular de microrganismos - um conjunto de clulas de referncia de uma
coleo de cultura padro. As clulas so congeladas em cubas de nitrognio lquido ou
liofilizadas para resistir a qualquer variao que possa destruir a identidade da clula original.
Preparo dos Microrganismos para a Microscopia Luminosa
Existem dois mtodos gerais utilizados para preparar espcimes microbiolgicas para
observao por meio do microscpico luminoso.
1. Tcnica entre lmina e lamnula e gota pendente - utiliza uma suspenso de
2.
microrganismos vivos em uma gota ou uma camada lquida. Estas preparaes (a

fresco) so especialmente teis quando a estrutura de um microrganismo pode ser
distorcida pelo calor ou agentes qumicos, ou quando o microrganismo no se cora
facilmente.
Tcnicas de Colorao - a camada fina do espcime seca e corada, assim os
microrganismos ficam fixados superfcie e apresentam-se corados para facilitar a
visualizao. Usadas para mostrar as vrias estruturas dos microrganismos, para
identificar e separar suas estruturas internas e para ajudar a identificar e separar
microrganismos similares.
As principais etapas do preparo de um espcime microbiano corado para exame microscpico

so:
1. Confeccionar um esfregao, ou uma camada fina do espcime sobre uma

lmina de vidro
2. Fixar o esfregao seco lmina, usualmente com o calor, para fazer aderir o
3.
microrganismo lmina
Colorao com um ou mais corantes
Colorao Simples - a colorao de microrganismo com uma nica soluo de corante; ex: azul
de metileno para leveduras, ou bolores.
Colorao diferencial - envolve mais de uma soluo de corante; ex: colorao de lcool-cido
para bactria causadora da tuberculose; distingue esta bactria patognicica, por meio da cor
(vermelho, pelo corante principal), de outras bactrias (azul, pelo corante do fundo)
encontradas em amostras como saliva e escarro.
Colorao de Gram - neste processo, o esfregao bacteriano tratado com os reagentes na
seguinte ordem: o corante prpura cristal violeta, a soluo de iodo (substncia que fixa o
corante no interior da clula), o lcool (remove o corante de certas bactrias) e o corante
vermelho safranina.
11
Bactrias Gram-positivas, retm o corante cristal violeta e aparecem coradas em violeta-escuro
Bactrias Gram-negativas, perdem o cristal violeta quando tratadas com lcool, so ento
coradas com o corante safranina e aparecem coradas em vermelho
Informaes utilizadas para Caracterizar os Microrganismos
As tcnicas laboratoriais para caracterizar os microrganismos variam desde uma microscopia
relativamente simples anlise de material gentico encontrado na clula.
As principais categorias de informaes usadas para caracterizar espcies diferentes so :
1. Caractersticas Morfolgicas - tamanho, forma e arranjo das clulas

2. Caractersticas Metablicas - maneira pela qual o microrganismo desenvolve os
processos vitais
3. Caractersticas Antignicas - os anticorpos produzidos em animais de laboratrios

4.
5.
podem ser usados para detectar a presena de antgenos nicos em culturas

bacterianas e so usados para caracterizar os microrganismos
Caractersticas Patognicas - importante determinar se o microrganismo causa doena
(patognico) ou no causa doena (no-patognico)
Caractersticas Genticas - a maioria dos microbiologistas conta atualmente com
tcnicas que permitem realizar anlises genticas para classificar ou identificar os
microrganismos ou compreender a sua atividade. A sonda de DNA um exemplo de
procedimento gentico rpido e amplamente utilizado - uma fita de DNA de uma
espcie conhecida misturada com uma fita de uma espcie desconhecida. Se os
microrganismos so da mesma espcie, as duas fitas se combinaro, ou se ligaro.
Esta combinao aparece como uma fita dupla de DNA com um marcador ligado.
Classificao dos Organismos Vivos

Como fazer para determinar os nomes dos microrganismos e como catalog-lo de forma
sistemtica?
As denominaes especficas no mundo biolgico, surgem da sistemtica, que pode ser
descrita como "a cincia do desenvolvimento de um arranjo ordenado das espcies, dentro de
cada uma das principais categorias de organismos". Sistemtica = Taxonomia
A cincia da taxonomia inclui a classificao (arranjo), nomenclatura (nomes) e identificao
(descrio e caracterizao) dos organismos vivos.
Os organismos que compartilham certas caractersticas comuns, so agrupados em grupos
taxonmicos denominados taxa (singular txon). O txon bsico a espcie, que uma
coleo de cepas com caractersticas similares. Depois segue com :
ESPCIE-GNERO-FAMLIA-ORDEM-CLASSE-DIVISO-REINO
Regra dos nomes - SISTEMA BINOMIAL DE NOMENCLATURA
1. Cada espcie recebe um nome constitudo de duas palavras (ex. Neurospora crassa)
2. O primeiro termo o nome do gnero e sempre se inicia com letra maiscula
3. A denominao do gnero uma palavra latina ou grega (um novo trmo composto de
4.
5.
razes latina ou grega, ou o nome latinizado de uma pessoa - masculino, feminino, ou

neutro)
Os nomes prprios dos microrganismo so sempre escrito em itlico
O segundo termo do nome de um microrganismo, especfico (espcie), escrito em
letras minsculas e usualmente descritivo:
12
o
o
o
o
adjetivo que modifica o nome (Bacillus albus - Bacillus branco)

adjetivo sob a forma de participio presente de um verbo (Clostridium dissolvens
- que dissolve)
substantivo no caso, possesivo que modifica o nome genrico (Salmonella
pullosum - Salmonella dos pintos)
nome de carter explicativo (Bacillus radicicola - Bacillus habitante da raz)
Ocasionalmente, necessrio subdividir uma espcie em variedades. Tal atitude tomada

quando existem diferenas numa espcie, insuficientes para a criao de uma nova espcie,
como por exemplo; a amostra de Streptococcus lactis que produz um aroma de malte e que
designada de Streptococcus lactis var. maltigenes
13
CAPTULO 3: Estruturas das Clulas Procariticas e Eucariticas
Ultra-estrutura dos Microrganismos Procariticos

A maioria das bactrias (organismos procariticos) so unicelulares e apresentam uma forma
simples (esfrica, cilndricas ou espiraladas), apesar dos 3,5 a 4 bilhes de anos durante os
quais elas tem evoludo
Estrutura Geral de uma clula (bacteriana) procaritica tpica :
Flagelos e pelos
1. so estruturas externas parede celular. Filamentos finos e ocos, que se

2.
3.
estendem a partir da membrana citoplasmtica atravessando a parede celular,

e que nem todas as clulas possuem
os flagelos so usados para locomoo da bactria, pulsionando-a atravs do
lquido em aproximadamente 100m/seg (3000 vezes o seu comprimento). So
mais longos que a clula (medindo de 15 a 20m). A energia para mover os
flagelos vem da fora protomotiva
os pelos ou fmbrias no so usados para locomoo, so mais finos,
menores, mais retos e mais numerosos que os flagelos. So ocos e a maior
parte deste tipo de filamento est envolvido com a adeso superfcie
Glicoclice
1. um material viscoso (geralmente polissacardeos) que circunda algumas
2.
clulas bacterianas. Chamado de cpsula quando se encontra organizado e

acoplado parede celular; e camada limosa se se encontra desorganizado e
acoplado frouxamente parede celular - esta ltima tende a ser solvel em
gua deixando assim o meio viscoso (como o caso da viscosidade do leite)
apresentam vrias funes :
aderncia (em pedras onde passa gua em grande movimento; em

razes de plantas; na superfcie lisa dos dentes humanos provocando a
crie)
proteo (contra dessecamento)
evitar a adsoro e lise das clulas por bacterifagos
Parede celular
1. rgida, suportam altas presses, mantendo assim a forma caracterstica de

cada clula. Serve como uma barreira a algumas substncias prevenindo a
evaso de certas enzimas que poderiam causar danos clula
14
2. podem reter corantes, alguns antibiticos, sais biliares, metais pesados e
3.
enzimas degradativas, em contra partida os nutrientes lquidos necessrios

clula tem passagem permitida
as paredes celulares so camadas de diferentes substncias que variam de
acordo com o tipo de bactria envolvida, diferindo em espessura e composio
Gram-Positivas :
1. membrana citoplasmtica:
2.
o fosfolipdeos
o protenas
parede celular:
o peptidoglicano - polmero poroso e insolvel, em grande
quantidade nestas bactrias (50% ou mais do peso seco da
clula), tornando a parede bem espessa
o cido teicico - polmero de glicerol e ribitol fosfato; carregados
negativamente pode ajudar no trasporte de ons + para dentro
e fora da clula; e no armazenamento de fsforo. Se
encontram ligados ao peptidoglicano ou membrana
citoplasmtica
o polissacardeos - ligados ao peptidoglicano
Gram-Negativas:
1. membrana citoplasmtica:
2.
3.
o fosfolipdeos
o protenas
parede celular - localizada no espao periplasmtico, ou seja, entre as
membranas citoplasmtica e externa.
o peptidoglicano - representa 10% do peso seco da clula
o lipoprotenas
membrana externa - presente apenas nestas bactrias, serve para
distingui-las.
o lipopolissacardeos - tpicos destas bactrias, ocorrem
somente na membembrana externa; formados de lpideos,
cerne de polissacardeo e antgenos O. Podem atuar como um
veneno (LPS ou endotoxina)
o trmeros de porina
Comparao entre as paredes celulares de bactrias Gram-Positivas e Gram-Negativas :
15
as paredes celulares das Arqueobactrias diferem das Eubactrias tanto em

composio qumica quanto na estrutura. Tais paredes contm protenas,
glicoprotenas ou polissacardeos completos. No contm peptidoglicono.
quando a parede de uma bactria Gram-positiva quase completamente
destruda, por enzimas, o resultado uma clula esfrica conhecida como
PROTOPLASTO, a qual permite a entrada de grande quantidade de gua,
resultando em lise. As paredes das Gram-negativas so mais resistentes a
estas enzimas
Mecanismo de Colorao de Gram :
16
Membrana Citoplasmtica
o stio de atividade enzimtica especfica, e do transporte de molculas para

dentro e para fora da clula. uma barreira para a maior parte das molculas
solveis em gua e muito mais seletiva que a parede celular
composta primariamente de: 20 a 30% de fosfolipdeos e 50 a 70% de
protenas, estas podem fluir pelos fosfolipdeos
contm enzimas envolvidas :
no trasporte de molculas (permeases)
na produo de energia
sntese de parede celular
a fotossntese ocorre em invaginaes da membrana citoplasmtica, as quais

fornecem uma extensa rea para acomodar uma alta concentrao de
pigmentos absorvidos da luz
Difuso e Osmose atravs da Membrana Citoplasmtica
1. Difuso Simples - passivo e a clula no gasta energia para realiz-lo. O

2.
3.
soluto se movimenta do lado menos diludo para o mais diludo at o equilbrio.

Ex. entrada e sada de CO2 e O2
Difuso por meio de Permeases - transporte da maior parte de nutrientes para
dentro da clula. Requer gasto de energia pela clula
Osmose - passagem do solvente de uma soluo de baixa concentrao de
soluto (alta conc. de gua) para uma soluo com alta concentrao de soluto
(ou baixa conc. de gua). A fora com que a gua se move atravs da
membrana a presso osmtica. As clulas microbianas podem ser expostas
a 3 tipos de condies osmticas :
o Isotnica - a concentrao total dos solutos a mesma em qualquer
lado da membrana
o Hipotnica - a concentrao do soluto mais baixa no interior da
clula. A gua entra na clula por presso osmtica. A maioria das
clulas crescem nesta condio
o Hipertnica - a concentrao do soluto mais alta no interior da clula.
A gua deixa a clula por presso osmtica
Estruturas Celulares Internas da Membrana Citoplasmtica (Citoplasma)

rea Citoplasmtica (poro fluida)
o citoplasma tem em torno de 80% de gua, alm de cidos nclicos,

protenas, carboidratos, lipdeos, ons inorgnicos, muitos compostos de baixo
peso molecular, e partculas com vrias funes :
1. Ribossomos - partculas densas, onde ocorre a sntese protica. Encontradas
2.
em todas as clulas procariticas e eucariticas. Consistem em 2 subunidades

de tamanhos diferentes (50S e 30S), que juntas formam o ribossomo
bacteriano 70S; S= unidade de quo rpido a partcula sedimenta quando
centrifugada em alta velocidade
Poli--hidroxibutirato (PHB) - material lipdico solvel em clorofrmio. Atua
como uma reserva de carbono e fonte de energia
17
3. Incluses - diferentes tipos de substncias qumicas que se acumulam
formando depsitos insolveis. Os grnulos e incluses no so comuns a
todas as clulas bacterianas
rea Nuclear
no apresenta ncleo delimitado por membrana, e ocupa uma poro prxima

do centro da clula - parece estar ligado ao sistema "membrana citoplasmticamesossomo"
nucleide - consiste em um nico cromossomo (DNA) circular. O cromossomo
a estrutura interna das clulas que fisicamente carrega a informao
hereditria de uma gerao para outra
Formas Latentes de Microrganismos Procariticos - Esporos e Cistos

Esporos
so formas inativas (no esto em crescimento), que podem viver em

condies desfavorveis, como dessecamento e calor, mas se
expostas novamente em condies ambientais apropriadas comeam
a crescer e tornar-se clulas vegetativas metabolicamente ativas
os esporos que se formam dentro da clula so chamados
ENDSPOROS, e so exclusivos das bactrias
possuem parede celular espessa, brilham muito com a luz do
microscpico, e so altamente resistente s mudanas ambientais - a
o
maioria suportam ate 80 C/10min
o esporo contm o cido dipicolnico (DPA) no encontrados em
clulas vegetativas, responsvel por 5 a 10% do peso seco do
endosporo, ocorre em combinao com grande quantidade de clcio, e
provavelmente contribui na resistncia ao calor
durante a esporulao ocorre um processo de desidratao,
eliminando a maior parte de gua do esporo, o que possivelmente
tambm vem contribuir para a resistncia ao calor
as bactrias Actinomicetes produzem outro tipo de esporo, o
CONDIO, muito resistente ao dessecamento mas no tanto ao calor.
Este organismo pode produzir muitos destes condios na extremidade
de um filamento, assim que tais condios so usados para a
reproduo e para proteo
Endospros
produzidos no interior da
clula
1 por cada clula vegetal
resistentes ao calor e
dessecamento
utilizados para proteo
Condios
na extremidade de
filamentos
vrios so produzidos por
clula
mais resistentes ao
dessecamento
utilizado para reproduo e
proteo
Cistos
apresenta estrutura e composio qumica diferente dos endsporos, e

no apresentam alta resistncia ao calor. Ex. cistos presentes em
Acetobacter
18
Ultra-estrutura dos Microrganismos Eucariticos - Fungos, Algas e Protozorios
A caracterstica predominante das clulas eucariticas o ncleo com cromossomos lineares,
envolvidos por uma membrana que no encontrada em procariotos
Funo de cada estrutura :
Flagelos e Clios
estruturas delgadas, ocas, utilizadas para locomoo, diferem dos das clulas
procariticas, no que a energia necessria para movimentar estes apndices
prover da hidrlise do ATP
Parede celular
encontradas nas plantas, algas e fungos, apresenta a funo de manter a

forma da clula e evitar que sofra lise pela presso osmtica
Eucariotos
plantas
fungos filamentosos
leveduras unicelulares
algas
Composio da Parede Celular

polissacardeos - celulose e
pectina
quitina e celulose
mananas - um polmero de
manose
celulose ou outro polissacardeo,
e CaCO3
Membrana Citoplasmtica
possui morfologia e funes semelhantes as das clulas procariticas, porm

apresentam caractersticas diferenciais destas clulas como :
1. a presena de esteris - principalmente colesterol - os quais
2.
3.
entrelaam-se na bicamada lipdica e conferem resistncia

membrana citoplasmtica dos eucariotos que no apresentam parede
celular
a membrana citoplasmtica reforada por fibras de microtbulos
formados pelas protenas actina e miosina.
no possuem enzimas em sua membrana citoplasmtica envolvidas no
metabolismo gerador de energia
Organelas Celulares
So estruturas envolvidas por uma membrana com funes especficas tais como, a
fotossntese, respirao, sntese protica, etc. O citoplasma a "residncia" das organelas"
Ncleo
a caracterstica marcante do ncleo dos eucariotos a membrana

nuclear, que contm muitos poros grandes, atravs dos quais
protenas e RNA podem passar para o citoplasma
a membrana nuclear geralmente d origem ou contnua ao retculo
endoplasmtico, organela onde as protenas so sintetizadas
esfrico ou oval, a maior organela na clula eucaritica. Nele est
contida as informaes hereditrias da clula na forma de DNA
formado de 5 a 10% de RNA e o restante de protenas
19
Retculo Endoplasmtico
conectados s membranas nuclear e citoplasmtica, podem ter

ribossomos ligados (rugosos) ou sem ribossomos ligados (lisos)
no retculo endoplasmtico rugoso as protenas produzidas pelos
ribossomos presentes nestas organelas, so liberadas no citoplasma
o retculo endoplasmtico liso est envolvido na sntese de glicognio,
lipdeos e esterides
Complexo de Golgi
o centro de empacotamento ou distribuio da clula. Responsvel

pelo "transporte seguro" dos compostos sintetizados, para o exterior da
clula, e tambm pela proteo da clula ao ataque de suas prprias
enzimas
no complexo de Golgi enzimas que foram sintetizadas no retculo
endoplasmtico rugoso (proteases, nucleases, glicosidases,
sulfatases, lipases, e fosfatases) so empacotadas dentro de
organelas chamadas lisossomos
as protenas sintetizadas no R.E. rugoso, so levadas para o complexo
de Golgi, onde os aucares so adicionados a estas para produzir as
glicoprotenas
Mitocndrias
local onde o ATP gerado durante a respirao aerbia. A membrana

interna altamente invaginada (cristas) - as quais aumentam a rea da
superfcie disponvel para a atividade respiratria
assemelham-se s clulas procariticas em vrios aspectos :
o mede em torno de 0.5 a 1.0 m de dimetro;
o contm seus prprios ribossomos, que tambm so 70S, em
vez de 80S como os presentes no citoplasma eucaritico;
o contm seu prprio DNA, o qual uma molcula nica, em fita
dupla como nos procariotos - este DNA carrega informaes
genticas para a sntese de um nmero limitado de protenas
que so produzidas nos ribossomos mitocondriais
o dividem-se para formar uma nova mitocndria, praticamente
da mesma forma que as clulas procariticas se dividem - se
dividem independentemente do ncleo celular, entretanto so
incapazes de se dividirem se forem removidos do citoplasma
Cloroplastos
presentes nas plantas e nas algas, tambm so organelas geradoras

de energia. o sitio das reaes fotossintticas
apresenta um DNA circular (como nos procariotos) o qual codifica
protenas no ribossomo destas organelas (70S) e enzimas necessrias
para a utilizao de CO2 no ar
a membrana interna dobra-se no estroma (citoplasma dos cloroplastos)
para formar pilhas de sacos em forma de disco ou fita chamadas
tilacides - contm pigmentos clorofila e carotenides
so capazes de se dividir por fisso binria no citoplasma como as
mitocndrias
Formas Latentes dos Microrganismos Eucariotos - Esporos e Cistos

Esporos
20
Os fungos produzem esporos sexuais e assexuais. Algumas caractersticas destas formas
latentes de vida so :
os esporos sexuados so resultado de 2 clulas reprodutivas

(gametas) em uma clula fertilizada. So produzidos menos
frequentemente e em menor nmero que os esporos assexuados
os esporos assexuados so produzidos por hifas areas, e tem a
funo de disseminar a espcie. So especialmente estruturados para
serem dispersos do talo-me. So normalmente brancos quando
rcem produzidos, e depois adquirem cores caractersticas coma a
idade
os esporos dos fungos terrestres podem ser recobertos por camadas
espessas para evitar ressecamento. Podem ser leves para serem
carregados em correntes de ar
Cistos
Produzidos por muitos protozorios, podem apresentar funo de

proteo ou de reproduo para estes eucariotos
21
CAPTULO 4: Exigncias Nutricionais e o Meio Microbiolgico
Elementos Qumicos como Nutrientes

Os elementos qumicos principais para o crescimento da clula so : carbono, nitrognio,
oxignio, enxofre e fsforo
Carbono - C
todos os organismos requerem carbono de alguma forma. Em geral os

compostos orgnicos so os que possuem carbono
o carbono forma o esqueleto das 3 maiores classes de nutrientes orgnicos :
carboidratos, lipdeos, e protenas - estes fornecem energia para o crescimento
da clula e serve como unidade bsica do material celular
os heterotrficos utilizam compostos orgnicos como sua principal fonte de
carbono, obtendo tais molculas a partir do meio, ou ingerindo organismos
autotrficos ou mesmo heterotrficos
os autotrficos utilizam o CO2 como sua principal ou nica fonte de carbono
Nitrognio - N
todos os organismos necessitam em alguma forma, a parte essencial dos

aminocidos, que formam as protenas
as bactrias so mais versteis para usar o N que os organismos eucariotos.
Algumas bactrias podem utilizar o N2 (nitrognio atmosfrico) - fixao de
nitrognio - e outras podem utilizar compostos nitrogenados como : nitratos,
nitritos e sais de amnia. E algumas utilizam ainda compostos de nitrognio
orgnico tais como os aminocidos e peptdeos
Hidrognio (H), Oxignio (O), Enxofre (S) e Fsforo (P)
essenciais a todos os organismos.

H e o O fazem parte de muitos compostos orgnicos e da gua
S necessrio para a biossntese dos aminocidos cistena, cistina, e
metionina
P essencial para a sntese de cidos nuclicos e ATP
alguns desses elementos so encontrados na gua ou na atmosfera gasosa do
meio. Os os inorgnicos como sulfatos e fosfatos, podem tambm suprir os
principais elementos necessrios ao microrganismo
Outros Elementos
muitos outros elementos essenciais so requeridos, porm em menor

quantidade que os citados acima - sdio, ferro, molibdnio, cobalto, zinco,
cobre mangans
+
o sdio, Na , requerido pelas permeases da membrana que transporta o
acar melibiose em clulas de Escherichia coli
+2
o ferro, Fe , requerido pelas enzimas citocromo, catalases e succinil
desidrogenases (como cofator)
+2
+2
+2
alguns minerais, em pequenas quantidades (mg/l) como o Zn , Cu , Mn ,
+6
+2
+6
Mo , Co so requeridos para ativar enzimas. O Mo por exemplo
requerido pela nitrogenase, a enzima que catalisa a converso do N 2 para o
NH3 (amnia) durante a fixao do N2
Classificao Nutricional dos Microrganismos
22
Grupo Nutricional
Fonte de Carbono
Fonte de Energia
compostos
inorgnicos
Exemplos
bactrias nitrificantes
Quimioautotrficos
CO2
do Fe, H e S
muitas bactrias,
Quimioheterotrficos compostos orgnicos compostos orgnicos fungos, protozorios
e animais
bactrias sulfurosas
verde e prpura,
Fotoautotrficos
CO2
luz
algas, plantas e
cianofceas
bactrias prpuras e
Fotoheterotrficos
compostos orgnicos
luz
verdes no
enxofradas
Meios Utilizados para o Cultivo de Microrganismos
Os componentes comuns na estrutura do meio faro parte de uma destas categorias :
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
nutrientes nitrognio-amnico - peptonas, infuses, extratos .....

fonte de energia - glicose ....
fatores de promoo de crescimento - sangue, soro, vitaminas, NADH ....
tampo fosfato, para manuteno de pH em meios de fermentao - sais de
fosfato acetatos e citratos solveis
-2
-2
+2
+2
sais minerais e metais, para melhorar o crescimento - PO4 , SO4 , Ca , Mg ,
+2
+2
Fe , Mn e metais
agentes seletivos - reagentes qumicos, antibiticos, e tinturas inibidoras
corantes indicadores, teis para indicar mudanas de pH no meio, durante e
depois do crescimento de microrganismos - fenol vermelho, vermelho neutro,
bromocresol prpura ....
agentes gelificantes - gar, gelatina ....
Caractersticas de alguns produtos complexos usados como ingredientes dos meios de cultura
Ingredientes
Caractersticas
Agar
uma mistura de 2 polissacardeos, obtido de algas marinhas, usado

o
para solidificar o meio; insolvel em gua fria, gelifica a <45 C. No
serve como nutriente para a maioria dos microrganismos e no
metabolizado durante seu crescimento
Extrato de
Carne
extrato aquoso de tecido muscular, concentrado sob a forma de pasta,

contm carboidratos, compostos orgnicos de nitrognio, vitaminas
hidrossolveis e sais
Sais Biliares
preparado de bilis de boi fresca, usado como agente inibidor seletivo

em bacteriologia
Casena
um digerido pancretico de casena, uma fonte importante de

nitrognio-amnico
Corantes
fazer uso somente daqueles certificados pela CSBS
Gelatina
um produto protico purificado, usado para solidificar o meio
Gelisato
um hidrolisado pancretico de gelatina que possue um contedo

escasso de cistina, triptofano e carboidrato
23
Infuses
usa-se infuses de corao de boi ou de bezerro, e de crebro
Neopeptona
digerido enzimtico de protinas, adequado p/ muliplicao de

organismos cuja cultura in vitro se considera difcil
Ox-Gall
constitudo por bilis fresca purificada; um agente inibidor
Peptona
um produto da digesto enzimtica da carne, solvel em gua e

formada por polipeptdeos, gua e oligossacardeos. Se trata de uma
peptona para uso geral
Fitona
peptona vegetal preparada por digerido de farinha de soja com

papana, til para culturas de organismos de multiplicao difcil
Polipeptona
mistura de peptonas (tripticase + thiotone) para uso em meios que

requerem ambas protenas
Proteose
Peptona
uma peptona especializada, preparada por digestivos de carne fresca

selecionada com papana, til para produo de toxinas microbianas
Soytona
hidrolizado anzimtico de farinha de sementes de soja, adequados

para meios que no h hidratos de carbono
Acares
todos devem ser quimicamente puros e adequados para fins

bacteriolgico
Tiotona
preparado por digestivo pptico de tecido animal; alto contedo de

enxofre, til nas anlises de formao do H2S
Tripticase
peptona derivada da casena por digesto pancretica, fonte rica em

nitrognio de aminocidos
Triptona
hidrolisado pancretico, fonte rica de nitrognio-amnico; destinado ao

isolamento de cultivo de organismos de difcil crescimento
Extrato de
Levedura
extrato aquoso de clulas de leveduras lisadas, fonte excelente de

substncias estimulantes do crescimento como vitamina B; contm
compostos orgnicos de N e C
gua
deve-se usar somente gua desmineralizada, que no txica aos

microrganismos
1. Meios para Cultivo de Bactrias

Os meios escolhidos para o cultivo de bactrias especficas normalmente imitam o habitat
normal das mesmas, assim:
para as bactrias que preferem os nutrientes encontrados no sangue adiciona-se sangue ao meio
se a glicose o constituinte comum de um nicho bacteriano - adiciona-se o
acar ao meio
Para aquelas bactrias que apresentam maiores exigncias nutricionais - fastidiosas - utilizase os meios complexos, citados acima na tabela, os quais contm uma grande variedade de
substncias orgnicas preparadas a partir de matrias naturais
Alguns exemplos de meios quimicamente definidos utilizados no crescimento de bactrias :
1. bactria quimioautotrfica :
fonte de nitrognio - (NH4)2SO4
24
fonte de carbono (na forma de CO2) - NaHCO3
tampo e ons essenciais - Na2HPO4 ; K2HPO4
ons essenciais - MgSO4.7H2O ; FeCl3.6H2O ; CaCl2.2H2O
solvente - H2O
2. bactria heterotrfica no fastidiosa :

fonte de energia e carbono - glicose (0.1%)
fonte de nitrognio, tampo e ons essenciais - NH4H2PO4
tampo e ons essenciais - KH2PO4
ons essenciais - MgSO4.7H2O
solvente - H2O
3. bactria heterotrfica fastidiosa :

fonte de carboidrato, nitrognio orgnico, vitaminas, sais - extrato de carne
fonte de nitrognio orgnico e algumas vitaminas - peptona
ons e requerimento osmtico - NaCl
solvente - H2O
2. Meios para o Cultivo de Fungos
Assim como as bactrias os fungos absorvem nutrientes em vez de inger-los. A adsoro
auxiliada por enzimas secretadas no meio, que quebram as molculas orgnicas em pores
menores que podem ser transportadas mais facilmente parta dentro da clula
Todos os fungos so heterotrficos. E podem crescer no laboratrio;
em uma mistura simples contendo acar, uma fonte de nitrognio inorgnico

ou orgnico e alguns minerais;
alguns necessitam de vitaminas;
e outros podem crescer somente em meio complexo que contenha uma grande
variedade de compostos orgnicos providos da peptona e extrato de carne.
Em geral, o meio utilizado para culturas de fungo tem : (1) uma concentrao maior de acar
que as bactrias - 4%; (2) e um pH menor - 3.8 a 5.6
Composio de um meio utilizado para o isolamento e crescimento de fungos em geral : gar
Sabourand
fonte de carbono, nitrognio - peptona
fonte de carbono e energia - glicose (em alta concentrao inibe o crescimento bacteriano)
agente solidificante - gar
25
solvente - H2O
3. Meios para o Cultivo de Algas
As algas utilizam luz para produzir energia, e requerem somente CO 2, H2O e vrios ons
inorgnicos para crescer.
Os meios complexos para algas normalmente contm extrato de soja. Mais existem poucos
meios "prontos" como os existentes para bactrias e fungos
Meios com finalidades especiais - MEIOS ESPECIAIS
So utilizados quando se quer isolar, identificar ou contar os microrganismos, eles fornecem
informaes especficas sobre os microrganismos
Meios para Anaerbios
os primeiros cultivos de anaerbios foram em camadas profundas de meios

solidificado, assim podem crescer pois a camada de gar da superfcie exclui o
oxignio atmosfrico
a adio de um agente redutor ao meio remove o oxignio - MEIO REDUZIDO
- ex. tioglicolato de sdio
para anaerbios estritos, como as arqueobactrias produtoras de metano por
exemplo, o cuidado deve ser maior. Deve-se :
(1) ferver o meio para que a maior parte do oxignio dissolvido seja retirado
(2) adicionar o gs N2, livre de oxignio, nos tubos contendo o meio
(3) adicionar um agente redutor, p.ex. a cistena remove os ltimos traos de
oxignio
(4) esterilizao do meio (recomendvel a utilizao de vlvula de selagem no
topo do frasco para prevenir a entrada de oxignio)
Meios Seletivos
serve para selecionar um microrganismo permitindo um tipo particular de

microrganismo ou suprimindo o crescimento de outros microrganismos.
Exemplos : gar sabourand para fungos; gar verde brilhante para Salmonella;
o corante verde brilhante adicionado ao meio inibe as bactrias Gram +
comuns do trato intestinal; o gar feniletanol inibe o crescimento de Gramnegativas, mais no das Gram-positivas
recentemente os antibiticos vem sendo adicionado aos meios, tornando-os
seletivos para os microrganismos resistentes estes agentes antimicrobianos
Meios Diferenciais
servem para diferenciar os vrios tipos de microrganismos em uma placa com

gar. P.ex. : se uma amostra de secreo da garganta semeada numa placa
de gar sangue, pode-se diferenciar as batrias hemolticas (produzem
enzimas que lisam as clulas vermelhas formando uma zona clara ao redor da
colnia) das no hemolticas (que no dissolvem as clulas vermelhas, e
portanto no formam este halo ao redor das colnias)
26
Meios Seletivos/Diferenciais
agem tanto como seletivos como diferenciais, so particularmente teis em

microbiologia de sade pblica, como na determinao da qualidade da gua
ou na identificao de causas de infeco alimentar
gar MacConkey - contm sais biliares e corante cristal violeta, os quais inibem
o crescimento de Gram+ e permitem o desenvolvimento de Gram-negativas, e
ainda a lactose, que distingue as Gram + (produtoras de cido a partir do
acar tornando-as vermelhas) das Gram-negativas (no produtoras de cido)
Meios de Enriquecimento
utilizados para selecionar microrganismo que est presente em determinado

local, em pequenas quantidades com relao populao. O meio favorece o
crescimento da espcie desejada, mas no o crescimento das outras espcies
presentes em uma populao mista
ao contrrio do meio seletivo, nenhum agente inibido utilizado para prevenir o
crescimento de microrganismos indesejveis
um exemplo so as bactrias que oxidam o fenol - que podem ser isoladas de
amostras do solo, utilizando um meio de enriquecimento, constituido de sais de
amnia, e fenol como nica fonte de carbono e energia - assim somente os
microrganismos capazes de oxidar o fenol estaro presente em grande nmero
depois de vrios cultivos seletivos
Meios de Estocagem
utilizado para a manuteno da viabilidade e das caractersticas fisiolgicas de

uma cultura, a qual pode exigir um meio diferente daquele timo para o seu
crescimento - o desenvolvimento rpido e luxuriante pode estar associado com
a rpida morte celular. Assim p.ex., a glicose, que favorece com frequncia o
crescimento, tambm desenvolve maior quantidade de cidos no meio, sendo
prefervel omitir a glicose na preparao de um meio de estocagem
27
CAPTULO 5: Cultivo e Crescimento dos Microrganismos
Crescimento - o aumento ordenado de todos os componentes de um organismo. Morte - a

perda irreversvel da capacidade de reproduo, crescimento e diviso, por parte de um
organismo ou de uma clula
Condies Fsicas para o cultivo dos Microrganismos
A temperatura, os gases do meio, e o pH so os principais fatores fsicos, que juntos criam
condies timas para o crescimento celular
1. Temperatura :
De grande influncia no cresciemnto dos microrganismos - todos os processo de crescimento
so dependentes de reaes qumicas, as quais so afetadas pela temperatura
A temperatura na qual uma espcie de microrganismo cresce mais rapidamente a
temperatura tima de crescimento - em temperaturas mais favorveis para o crescimento, o
nmero de divises celulares por hora, chamada de taxa de crescimento, dobra para cada
o
aumento de temperatura de 10 C
Para qualquer microrganismo particular h 3 temperaturas importantes a conhecer : mnima,
tima e mxima (nesta ltima as enzimas so danificadas pelo calor e a clula para de crescer)
Os microrganismos podem ser divididos em 3 grupos de acordo com a variao de temperatura
na qual crescem melhor :
o
Psicrfilos - crescem em baixas temperaturas (15 - 20 C)
alguns morrem se expostos temperatura ambiente (25 C). A temperaturas

muito alta certas enzimas e a membrana citoplasmtica podem ser danificadas
existem bactrias, fungos, algas e protozorios que so psicrfilos. Em
o
temperaturas de 4-10 C os microrganismos psicrfilos deterioram alimentos
estocados por longo perodos
so encontrados principalmente em guas frias e solos, tais como os oceanos
e regies polares. Alguns gneros so : Pseudomonas, Flavobacterium,
Alcaligens.
o
Mesfilos - crescem em temperaturas moderadas (25 - 40 C)
a maioria dos microrganismos pertencem a este grupo. As bactrias saprfitas,

os fungos, as algas e os protozorios crescem no limite mnimo da variao de
o
temperaturas mesfilas (25 C), e os parasitrios de humanos e animais no
o
limite mximo dessa variao (40 C)
o
Termfilos - crescem a altas temperaturas (40 - 85 C)
podem ser encontrados em reas vulcnicas, em misturas de fertilizantes e em

nascentes quentes
a maioria so procaritos, nenhuma clula eucaritica cresce em uma
o
temperatura superior a 60 C - a perda de funo da membrana citoplasmtica
a baixa temperatura pode ser o que determina a temperatura de crescimento
mnima dos termfilos
28
2. Atmosfera Gasosa
Os microrganismos no seu habitat natural necessitam de quantidades variadas de gases tais
como : O2, CO2, N2, CH3 .
Alguns gases so utlizados no metabolismo celular; outros podem ter sido excludos de uma
cultura por serem txicos s clulas. O O2 e CO2, so os dois gases principais que afetam o
crescimento de clulas microbianas
De acordo com a resposta ao O2 os microrganimismos so divididos em 4 grupos :
Aerbios - requerem oxignio para o crescimento (padro: 21% de O 2)
alguns aerbios podem crescer mais lentamente quando o O2 limitado. Se os

microrganismos crescem em meio lquido podem rapidamente utilizar o O 2
dissolvido na camada superficial do meio. Para evitar este problema, as
culturas lquidas de microrganismos aerbios so algumas vezes agitadas
(shaker) para aumentar o suprimento de O2 dissolvido e produzir um estoque
celular maior num tempo de incubao menor
existem alguns grupos de microrganismos que requerem nveis elevados de
CO2 - Neisseria gonorrhoea - 5 a 10% de CO2. Neste caso pode-se colocar a
placa com meio semeado com o microrganismos dentro de uma jarra
hermeticamente fechada, contendo uma vela acessa, a qual queimar
enquanto tiver O2 suficiente para manter esta combusto (C + O2 --- CO2),
assim a atmosfera dentro da jarra vai conter uma quantidade de O2 reduzida e
uma concentrao de CO2 aumentada.
Facultativos - crescem na presena de O2 ou podem tambm crescer em anaerobiose
quando em condies de anaerobiose, obtm energia pelo processo

metablico chamado fermentao. Ex. genros da famlia bacteriana
Enterobacteriacea (Escherichia coli), leveduras (Saccharomyces cerevisae)
Anaerbios - aqueles que podem ser mortos pelo oxignio
no utilizam o O2 para reaes de produo de energia

alguns at toleram baixas concentraes de oxignio :
o Clostridium perfringens - altamente tolerantes ao O2
o Clostridium tetani - moderadamente tolerantes ao O2
o Methanobacterium - anaerbios estritos
a toxicidade do oxignio para os anaerbios :
o O2 + e ---- O2 (radical superxido) : podem causar danos s clulas
(1)
+
o 2O2 + 2H ---- O2 + H2O2 (perxido de hidrognio) : podem destruir os
componentes vitais da clula (2)
29
o
-2
O2 + H2 O ---- O2 + OH + OH (hidroxila) : pode danificar quase todo

tipo de molcula encontrada em uma clula viva, inclusive o DNA (3)
Os microrganismos aerbios e facultativos, que crescem em aerobiose, e at

alguns microrganismos anaerbios, desenvolveram vrios mecanismos
protetores contra estas formas txicas de O2 :
(1) produo da enzima superxido dismutase - que elimina os radicais
superxidos convertendo-os rapidamente em perxido de hidrognio
(2) metabolizao do perxido de hidrognio por mais duas enzimas - catalase,
que converte o H2O2 em O2 e H2O; e a peroxidase que converte o H2O2 em
H2O. Assim a reao (3) no mais ocorre e os radicais OH no mais so
formados
Cultivo de bactrias anarobias :

(1) uma incubadora - cmara de anaerobiose
(2) jarra de anaerobiose - este sistema inadequado para o cultivo de
anaerbios estritos
Depois que a jarra fechada o O2 presente removido em horas pela reao

catalisada pelo pldio :
O2 + 2H2 paldio 2H2O
Microaerfilos - podem utilizar oxignio nas reaes qumicas para a produo
de energia (1 a 15% de O2)
no suportam nveis de O2 de 21% presentes na atmosfera, como requerem os

aerbios, mais podem utilizar o O2 em nveis mais baixos
a tolerana moderada ao oxignio deve-se alta susceptibilade aos radicais
perxidos e o perxido de hidrognio que so formados nas culturas incubadas
sob condies de anaerobiose. Exemplo : Campylobacter jejuni (provoca
diarria em humanos)
30
3. pH - Potencial Hidrogeninico
+
pH = - log {H }. Quanto > {H }, < pH, e mais cido
o pH timo normalmente bem definido para cada espcie. Encontra-se no

valor mediano de variao de pH sobre o qual o crescimento acontece,
diferentemente da tempertura tima
para o melhor crescimento do microrganismo num meio cido ou bsico, ele
deve ser capaz de manter o seu pH intracelular em torno de 7.5, no
importando qual o valor do pH externo. A maneira de obter o pH da clula viva
nessa faixa, expulsando ou absorvendo ons hidrognio (at um certo limite)
as variaes de pH podem ser mortal ao cultivo de microrganismo, isto pode
ser prevenido pela adio de um tampo ao meio
pH de alguns ambientes :
o guas de escoamento de solos vulcnicos e de minas : pH = 1 a 3
o guas de nascentes : pH = 10
o solos ricos em amnia : pH = 11
o oceanos : pH = 8; guas polares : pH = 6
Microrganismos
bactrias
fungos
protozorios
algas
pH timo
4a9
5a6
6.7 e 7.7
4 a 8.5
4. Outras condies
os microrganismos podem apresentar outras necessidades como : a luz, para

os organismos fotossintticos. Alm da funo ligada ao metabolismo celular e
aos nutrientes, a gua influencia o crescimento por meio da presso osmtica
e da presso hidrosttica
Presso Osmtica - fora com a qual a gua se move atravs da membrana
citoplasmtica de uma soluo contendo uma baixa concentrao de solutos
para uma contendo alta concentrao de soluto. As clulas podem estar em
um meio:
(a) Isotnico - onde a concentrao de solutos em um meio igual quela no interior da clula.
No h movimento de gua para dentro e para fora da clula
(b) Hipertnico - onde a concentrao de solutos fora da clula maior que no interior. A gua
flui para fora da clula resultando na desidratao e contrao do protoplasto
31
(c) Hipotnico - a concentrao de soluto no interior da clula maior que fora dela. A gua flui
para dentro da clula, o influxo da gua fora o protoplasto contra a parede celular. Se a
parede for fraca, pode romper-se; o protoplasto pode inchar, e eventualmente rompe
Presso Hidrosttica - a presso exercida pelo peso da gua que permanece na superfcie
dela. Os microrganismos dependente de presso so chamados barfilos, estes
microrganismos morrem um meio com baixa presso hidrosttica pois contm vesculas de gs
que se expandem com grande fora na descompresso e rompem as clulas
Reproduo e Crescimento dos Microrganismos

O crescimento em uma cultura microbiana normalmente significa um crescimento no nmero
total de clulas devido reproduo dos organismos individuais na cultura
Dois fenmenos ocorrem : (1) o crescimento, ou reproduo das clulas individualmente; (2)
crescimento ou aumento na populao de uma cultura microbiana
Reproduo em Microrganismos Eucariticos
Na natureza a reproduo ocorre de duas maneiras :

(1) Reproduo Assexuada - basicamente resulta em novas clulas idnticas
s originais
(2) Reproduo Sexuada - permite a troca de material gentico e assim a
gerao de um novo ser
1. Reproduo Assexuada
apesar de no implicar em variao gentica mais eficiente que a reproduo

sexuada em propagar as espcies. Neste tipo de reproduo os novos
indivduos so produzidos por: (1) um organismo parental ou; (2) uma clula
(organismos unicelulares)
a reproduo assexuada nos organismos eucaritos mais complexa que nos
procaritos, onde uma nica clula parental simplesmente se divide em duas
clulas-filhas idnticas. Nos eucaritos deve ser precedida de MITOSE - uma
forma de diviso nuclear na qual todos os cromossomos da clula so
32
duplicados e os dois novos conjuntos se separam para formar os ncleos filhos
idnticos. A clula ento se divide em 2 clulas-filhas, cada uma recebendo um
ncleo
Etapas da Mitose em detalhe :
(1) assim que as clulas entram em PRFASE os cromossomos condensa-se em estruturas

em forma de fitas e tornam-se visveis ao microscpico
(2) os cromossomos so duplicados, dispondo-se lado a lado, unidos no centro pelo
centrmero (um anel de protenas), ao mesmo tempo, os centrolos (cilndricos de microtbulos
protecos) migram para lados opostos da clula
(3) a medida que os centrolos se separam um fuso mittico comea a se formar entre eles. No
FINAL DA PRFASE os centrolos se movem para os plos opostos da clula com o fuso entre
eles. Durante esta fase, a membrana nuclear comea a desintegrar-se
(4) a membrana nuclear desaparece, e os cromossomos parecem estar acoplados pelos seus
centrmeros s fibras do fuso. O centrmero de cada cromossomo se divide e os dois
cromossomos-filhos em cada conjunto se separam completamente
(5) este o estgio mais curto da MITOSE, onde os cromossomos-filhos se move para um dos
lados da clula utilizando as fibras do fuso como guia
(6) marcada pela chegada dos dois conjuntos de cromossomos em um dos plos do fuso.
Uma membrana nuclear forma-se ao redor do agrupamento dos cromossomos em cada plo e
o cromossomo se alonga em fitas de cromatina tpica da INTERFASE (fase em que as clulas
se apresentam em estgio de repouso)
(7) todas as clulas derivadas da MITOSE de um organismo eucarito tem ento o mesmo
nmero de cromossomos e o mesmo tipo de genes das clulas parentais
2. Reproduo Sexuada
fuso de duas clulas sexuais diferentes (gametas) que so procedentes de

dois pais de sexos diferentes ou tipo de relao sexuada
a fuso de gametas denominada fertilizao e a clula resultante, de zigoto
na reproduo sexual tem-se :
(1) fuso de dois ncleos haplides
(2) formao de um zigoto (diplide)
33
(3) MEIOSE, resultando novamente em clulas haplides
(4) a fuso das clulas haplides completando o ciclo
O ciclo celular dos eucaritos

o
o
o
todas as clulas eucariticas perfazem um ciclo celular semelhante,

com exceo dos gametas.
a duraco do ciclo celular varia de um tipo de clula para outra.
as fases do ciclo pode ser resumida :
G1 - fase de crescimento - a clula cresce e sintetiza protenas

S - fase de sntese de DNA - a clula continua a crescer e a sntese de DNA
ocorre no ncleo at que a quantidade de DNA seja duplicada
G2 - fase de crescimento - o crescimento celular atinge o seu mximo
M - mitose - a sntese de macromolculas quase cessa e o ncleo sofre mitose
Reproduo em Microrganismos Procariticas
A maioria das bactrias se multiplicam pelo processo de reproduo assexuada - FISSO
BINRIA TRANSVERSA - onde as clulas dividem-se individualmente em 2 clulas-filhas de
tamanho aproximadamente igual
34
Alguns procariotos reproduzem-se assexuadamente por outros modelos de diviso celular :

(1) Brotamento - ex. Rhodopseudomonas acidophila
(2) Fragmentao - ex. Nocardia
(3) Formao de Exospros - ex. Streptomyces
Crescimento de uma cultura bacteriana
durante o crescimento ativo de uma cultura microbiana as populaes de

clulas crescem exponencialmente, aumentando por meio de uma progresso
geomtrica (2n)
o intervalo de tempo requerido para que cada microrganismo se divida
conhecido como TEMPO DE GERAO, os quais so fortemente
influenciados no somente pela composio nutricional do meio mais tambm
pelas condies fsicas de incubao
tempo de gerao: g = t/n ; t = intervalo de tempo particular, n = nmero de
geraes
taxa de crescimento: R = n/t
Exemplos :
Escherichia coli: tg = 12.5 min; Mycobacterium tuberculosis: tg = 13 a 15 h
Curva de crescimento bacteriana tpica
35
Fase de
crescimento
(a) - Lag
(b) Exponencial
ou Log
(c) Estacionria
(d) - Morte
Taxa de
crescimento
zero
mxima ou
constante
zero
negativa
Caractersticas
nenhum aumento no nmero de clulas,
aumentam de tamanho, so sintetizadas
novas enzimas para as clulas se
adaptarem ao novo meio
condies de crescimento balanceado; as
clulas so uniformes em termos de
composio qumica e atividade
metablicas e fisiolgicas. Pico da atividade
e eficincia fisiolgica
acmulo de produtos metablicos txicos
e/ou exausto de nutrientes. Algumas
clulas morrem, outras crescem e se
dividem. O nmero de clulas viveis
diminue
acmulo adicional de produtos metablicos
inibitrios. A taxa de morte acelerada; o
nmero de clulas diminue de modo
exponencial. Tipicamente todas as clulas
morre em dias ou meses
Medida de crescimento da populao
os microbiologistas utilizam uma variedade de tcnicas para quantificar o

crescimento microbiano. Os mais comuns so :
(1) Contagem Microscpica - muito comum, aplicada para quantificar clulas em vacinas, leite e
culturas, e expresso em nmero de clulas/ml
(2) Contagem Celular Eletrnica - muito comum, aplicada para quantificar clulas em vacinas,
leite e culturas, e expresso em nmero de clulas/ml
(3) Contagem em Placa - muito comum, aplicada para quantificar clulas em vacinas, de leite,
culturas, solos e alimentos, expresso em UFC/ml (unidade formadora de colnia)
(4) Membrana Filtrante - aplicada para quantificar clulas em vacinas, de leite, culturas, solos e
alimentos, expresso em UFC/ml (unidade formadora de colnia)
(5) Turbidez - aplicado para ensaio microbiolgico, estimativa de unidades de absorbncia da
massa de clulas em caldo ou outras suspenses
(6) Contedo de Nitrognio - muito comum, aplicado para a medida indireta da massa celular,
expresso em mg de N/ml
36
(7) Peso Seco - muito comum, aplicado para a medida indireta da massa celular, expresso em
mg de N/ml
(8) Produtos Metablicos - aplicados a ensaios microbiolgicos e medidas indiretas da
atividade metablica (crescimento), expressa em quantidade do produto/ml
Cultura Contnua
usadas para simular o habitat natural de uma espcie microbiana para estudar
sua estabilidade gentica em relao ao tempo
nas indstrias, manter as clulas em fase de crescimento logartmico ativo
cessar o volume mximo de produtos desejados. Estes sistemas abertos ou
CULTURAS CONTNUAS podem ser obtidos assim :
o quimiostato um aparelho amplamente usado para o crescimento contnuo

dos microrganismos
Culturas Sincrnicas
as clulas se dividem todas ao mesmo tempo, mais pode se conseguir isto (por
um determinado perodo), por exemplo semeando uma cultura em uma
temperatura razovel para seu crescimento, mantendo-a nessa temperatura,
onde elas metabolizaro lentamente, mas no se dividiro. Quando a
temperatura rapidamente aumentada para a de crescimento timo da clula,
estas sofrero divises sincronizadas (ao mesmo tempo)
as culturas sincrnicas permitem aos pesquisadores estudar o cresciemnto
microbiano, a organizao e a morfognese durante estgios particulares do
ciclo de diviso celular
na verdade no prtico analisar uma nica clula microbiana, por causa do
seu tamanho diminuto. Entretanto, se todos as clulas em uma cultura esto
no mesmo estgio de cresciemtno a informao que se pode extrair de toda a
populao de clulas pode ser extrapolada para fornecer informaes
aplicveis a uma nica clula
37
CAPTULO 6: Controle dos Microrganismos
Controlar - destruir, inibir ou remover. Vrios sao os agentes fsicos e qumicos que podem ser
utilizados para manter os microrganismos em nveis aceitveis
processos usados : aquecimento, baixas temperaturas, radiao, filtrao e

dessecao. O mtodo de escolha depende do tipo de material que contm o
microrganismo : (1) meio de cultura; (2) produtos farmacuticos; (3) superfcie de
instrumentos cirrgicos; (4) sala de cirurgia de um hospital; (5) alimento de consumo
humano
substncias qumicas que matam os microrganismos, ou previnem o seu crescimento
so chamados de agentes ANTIMICROBIANOS (antibacterianos, antivrus,
antifngicos, antiprotozorios)
Antimicrobianos :
que matam os microrganismos - MICROBICIDA (bactericida, fungicida,

viricida)
Esterilizao - destruio de todos os microrganismos presentes em um material, incluindo

esporos
que apenas inibem o crescimento dos microrganismos MICROBIOSTTICOS (fungisttico ou bacteriosttico)
aspectos fundamentais que se deve aplicar aos agentes fsicos e qumicos :
1. Padro de morte em uma populao microbiana
o critrio de morte de um microrganismo em Microbiologia baseado em uma

nica propriedade : a capacidade de se reproduzir. Assim a morte de um
microrganismo definida como a perda da capacidade de reproduo
a avaliao da eficincia de um agente microbicida pode ser testada cultivando
uma amostra do material tratado para determinar o nmero de sobreviventes
2. Condies que influenciam a atividade antimicrobiana
tamanho da populao microbiana - quanto maior mais tempo para morrer

concentrao do agente microbicida - quanto menor a concentrao mais
tempo leva para destruir
tempo de exposio ao agente microbicida - quanto maior o tempo de
exposio maior ser o nmero de clulas mortas
temperatura em que so expostos ao agente microbicida - quanto mais alta a
temperatura mais rapidamente a populao morta
natureza do material que contm os microrganismos - tempo de exposio
menor - meio fluido e pH 5.0
caractersticas dos microrganismos que esto presentes
3. Mecanismo de destruio das clulas microbianas
conhecendo o mecanismo de ao de um dado composto possvel

predeterminar as condies sob as quais atuar mais eficientemente, alm de
tambm revelar que espcies de microrganismos sero mais susceptveis
quele agente
38
os possveis mecanismos esto associados com os principais aspectos

estruturais : alterao do estado fsico do citoplasma, inativao de enzimas,
ou rompimento da membrana ou parede celular - podem levar morte da
clula
Agentes Fsicos
Altas Temperaturas : calor mido, calor seco, incinerao
1. Calor mido
mais eficiente que o calor seco para destruir os microrganismos - leva menos
tempo e a temperaturas menores
causa desnaturao e coagulao das protenas vitais, as enzimas, enquanto o
calor seco causa oxidao dos constituintes orgnicos da clula (queima
lentamente)
os endosposporos bacterianos so as formas mais resistentes de vida
o
clulas vegetativas de bactrias - mortas de 5-10 min a 60-70 C

o
clulas vegetativas de fungos - mortas de 5-10 min a 50-60 C

o
esporos de fungos - mortas de 5-10 min a 70-80 C
o calor mido utilizado para matar os microrganismos pode ser na forma de :

vapor, gua fervente, gua aquecida a temperaturas abaixo do seu ponto de
o
ebulio (100 C)
(a) Vapor d'gua
o vapor d'gua sob presso a mais prtica e segura aplicao do calor

mido. O aparelho destinado a este fim a AUTOCLAVE, desenvolvida no
sculo XIX
1 - vazo; 2 - cano de sada; 3 - sada; 4 - cmara de exausto; 5 - vapor para a cmara; 6 - vlvula de segurana; 7 manmetro; 8 - vlvula operadora; 9 - porta; 10 - maaneta; 11 - fecho de segurana; 12 - tela removvel; 13 - termmetro; 14 regulador de presso; 15 - injetor de ar de condensao automtica; 16 - revestimento de vapor; 17 - vapor; 18 - ar.
Procedimento do funcionamento da autoclave :
1. a cmara de parede dupla da autoclave primeiramente lavada com vapor

fluente para remover todo o ar
2. ento preenchida com vapor puro e mantida a uma determinada temperatura

e presso por um perodo especfico de tempo. essencial que todo o ar
39
3.
residual inicialmente presente na cmara seja completamente substitudo por

vapor d'gua - se o ar estiver presente reduzir a temperatura interna da
autoclave , e a temperatura e no a presso no interior da cmara que mata
os microrganismos
2
uma autoclave usualmente operada uma presso de 15 lb/pol , na qual a
o
temperatura de vapor de 121 C. Leva mais tempo para um calor penetrar em
um material viscoso ou slido do que em um matterial fluido. Quanto maior o
volume mais tempo para o calor penetrar
Tempo de exposio (min, a 121 o
123 C)
Recipiente
Tubos de ensaios
18 x 150 mm
12 - 14
32 x 200 mm
13 - 17
38 x 200 mm
Frascos Erlenmeyer
50 ml
15 - 20
500 ml
17 - 22
1.000 ml
20 - 25
2.000 ml
Garrafas de diluio, 100 ml
Frascos de soro, 9.000 ml
30 - 35
13 - 17
50 - 55
12 - 14
(b) gua Fervente
gua levada ao ponto de ebulio : 100 C

mata microrganismos vegetativos presente no lquido
os materiais ou objetos contaminados no so esterilizados com seguraa pos
o
alguns endosporos bacterianos podem resistir a 100 C por mais de 1 hora
gua em ebulio no considerado um mtodo de esterilizao
o
(c) Temperaturas abaixo do seu ponto de ebulio (100 C) - Pasteurizao
aquecimento lento a baixas temperaturas

mata as clulas vegetativas de patgenos, mais no esteriliza
2. Calor Seco
calor seco ou ar quente em temperaturas suficientemente altas levam os

microrganismos morte. Leva mais tempo que o calor mido
h materiais que no podem ser esterilizados por calor mido, neste caso o
calor seco o preferido
3. Incinerao
uma prtica de rotina : ala ou agulhas de semeaduras bacteriolgicas no

bico de Bunsen
Baixas Temperaturas
40
temperaturas abaixo de 0 C inibiro o metabolismo dos microrganismos em

geral. No mata, preserva-os como forma de latncia
o
o
o
Ex. freezer domstico: - 20 C; freezer: - 70 C; nitrognio lquido: -196 C
Radiaes
energia na forma de ondas eletromagnticas transmitidas atravs do espao

ou atravs de um material
as radiaes magnticas so classificadas de acordo com seus comprimentos
de onda : Quanto maior, menos energia (contedo energtico)
radiaes de alta energia (comprimento de onda baixo) podem matar as
clulas, inclusive microrganismos - raios X, gama e luz UV
Formas de Radiaes :
1. Radiao Ionizante
as radiaes de alta energia tem energia suficiente para causar ionizao das
molculas - rompendo as molculas em tomos ou grupo de tomos (H2O ---H+ + OH ) - e os radicais hidroxilas por exemplo so altamente reativos e
destroem compostos celulares como o DNA e protenas
exemplos: raios X e raios gama. Alm de microbicidas os raios de alta energia
so capazes de penetrar em pacotes de produtos e esterilizar seus interiores
so mais utilizados para esterilizar alimentos e equipamentos mdicos
2. Radiao No-Ionizante
a radiao UV tem um comprimento de onda entre 136 a 400 nm, que ao invs
de ionizar uma molcula excita os eltrons - resultando em uma molcula que
reage diferente das molculas no-irradiadas. O DNA sofre a maior avaria
a maior atividade bactericida ocorre no comprimento de onda prximo de 260
nm (mais fortemente absorvido pelo DNA)
lmpadas especiais que emitem luz UV com comprimento de onda microbicida
so utilizadas para matar microrganismos - apenas os microrganismos da
superfcie de um objeto so mortos
Filtraes
as membranas filtrantes so teis para esterilizao, e separao de diferentes

tipos de microrganismos e para coletar amostras microbianas
tamanho dos poros que retem ou no os microrganismos :
bactrias - 0.5 a 1.0 m (geral)
leveduras - 1.0-5.0 m x 5-30 m
alguns tamanhos de poros comerciais : 0.25 m ; 0.45 m ; 0.5 m ; 1 m
Dessecao
clulas microbianas vegetativas quando dessecadas interrompem suas

atividades metablicas, levando a um declnio na populao total vivel
41
no processo chamado liofilizao os microrganismos so submetidos

desidratao extrema em temperaturas de congelamento mantidas em
ampolas fechadas vcuo
Agentes Qumicos
Aplicao dos compostos qumicos
reduo do nmero de microrganismos na superfcie de material inanimado

(assoalhos, mesas, e utensilios domsticos)
em leses de pele para prevenir a infeco
eliminao de microrganismos patognicos da gua potvel e de piscinas
No existe um nico composto qumico que seja ideal para todos os propsitos. Assim
importante conhecer algumas propriedades para que se possa escolher o mais adequado:
1. as vantagens que o agente apresenta quando utilizados em determinadas

situaes
2. as principais categorias de agentes qumicos antimicrobianos

3. algumas de suas caractersticas e suas utilizaes prticas
4. e como atuam nos microrganismos
Definio de Trmos
Esterilizante - um composto qumico que realiza uma esterilizao. Estril um termo
absoluto, ou seja, um material est estril ou no. No pode ser "parcialmente estril" ou
"quase estril"
Desinfetante - uma substncia qumica que mata as formas vegetativas de microrganismos
patognicos, mais no necessariamente suas formas esporuladas. Refere-se normalmente a
substncias utilizadas em objetos inanimados
Germicida - sinnimo do desinfetante; entretanto os microrganismos mortos por um germicida
no so necessariamente patgenos. So usados mais termos especficos como fungicida,
bactericida, etc
Anti-sptico - um composto qumico usualmente aplicado na superfcie do corpo humano
para prevenir a multiplicao dos microrganismos. Mata os microrganismos, ou inibe seu
crescimento e sua atividade metablica
Saneador - agente que mata 99,9% dos microrganismos contaminantes de uma rea. So
normalmente aplicados em objetos inanimados (copos, talheres, pratos e utenslios em
restaurantes), e tambm na limpeza de equipamentos de laticneos e industrias de alimentos
As normas de sade pblica determinam que em certos lugares, a populao microbiana no
deve exceder um nmero especfico. em atendimento a estas determinaes utiliza-se um
SANEADOR
Caractersticas de um agente qumico ideal
1. Atividade antimicrobiana - a capacidade de uma substncia de inibir ou

preferencialmente matar os microrganismos - Esta sempre a primeira
exigncia
42
2. Solubilidade - a substncia deve ser solvel em gua ou outros solventes
(lcool) em quantidades necessria ao seu uso efetivo
3. Estabilidade - o armazenamento da substncia durante um perodo razovel

no deve resultar em uma perda significativa de ao antimicrobiana
4. Ausncia de toxicidade - no deve prejudicar o homem ou os animais

5. Homogeneidade - as preparaes devem ser uniformes em sua composio
(os componentes ativos devem estar presentes em cada aplicao)
6. Inativao mnima por material estranho - alguns compostos qumicos

7.
8.
9.
10.
11.
12.
antimicrobianos combinam facilmente com protenas, diminuindo a quantidade

de substncia qumica disponvel para agir contra os microrganismos
Atividade em temperatura ambiente ou corporal - no deve ser necessrio
aumentar a temperatura alm daquela normal encontrada no ambiente, onde
os compostos qumicos so utilizados
Poder de penetrao - a ao antimicrobiana limitada ao local de aplicao,
entretanto a ao na superfcie algumas vezes necessrias
Ausncia de poderes corrosivos e tintoriais - os componentes no devem
corroer ou desfigurar metais nem corar ou danificar os tecidos
Poder desodorizante - o desinfetante ideal deve ser inodoro ou apresentar um
odor agradvel
Capacidade detergente - um agente antimicrobiano que tem propriedades
detergente tem a vantagem de ser capaz de remover mecanicamente os
microrganismos da superfcie que esta sendo tratada
Disponibilidade a baixo custo - o produto deve ser facilmente encontrado e de
baixo custo
Principais Grupos de Desinfetantes e Anti-spticos :

1. Fenol e Compostos Fenlicos:
soluo de fenol 5% mata rapidamente as formas vegetativas dos

microrganismos, porm os esporos so muito mais resistentes
o fenol por ser txico e apresentar odor desagradvel no muito utilizado
como desinfetante ou anti-sptico. Tem sido substituido por vrios derivados
qumicos, os quais so menos txicos para os tecidos e mais ativos para os
microrganismos. Exemplos : lysol - desinfetante produzido a partir de uma
soluo de sabo contendo o-fenilfenol, o-benzil-p-clorofenol e xilenol, usado
para desinfetar objetos inanimados (assoalhos, paredes e superfcies de mesa,
termmetro retal); hexaclorofeno - atua como um bacteriosttico em bactrias
Gram +, particularmente em estafilococos
mecanismo de ao : fenol e derivados, alteram a permeabilidade seletiva da
membrana, desnaturam e inativam protenas como enzimas, causando uma
perda de substncias intracelulares (lisam as clulas). Dependendo da
concentrao utilizada podem ser bacteriosttico ou bactericida
2. lcoois
em concentrao entre 70 e 90 % as solues de etanol so eficientes contra

as formas vegetativas dos microrganismos
no utilizado para esterilizar um objeto porque no mata os endosporos
bacterianos (Bacillus anthracis pode sobreviver no lcool por 20 anos)
o metanol no utilizado como agente bactericida - altamente txico. Quanto
maior for a cadeia de carbono do lcool maior suas propriedades bactericida,
porm os lcoois maiores como o proplico e isoproplico j no so mais
solveis em gua
os lcoois proplicos e isoproplicos 40 a 80% so bactericidas para clulas
vegetativas. O lcool etlico 70% e o lcool isoproplico 90% (mais eficiente
43
contra vrus) so utilizados como anti-spticos de pele e como desinfetantes de

termmetro clnicos de uso oral, e de certos instrumentos cirrgicos
Mecanismo de ao : capazes de desnaturar protenas; como so solventes de
lipdeos, lesam as estruturas lipdicas da membrana das clulas microbianas
3. Halognios
iodo cloro e bromo - fortes agentes oxidantes e altamente reativos - destruindo os
componentes vitais da clula microbiana
(1) Iodo e compostos Iodados :
o iodo puro um elemento cristalino preto azulado com brilho metlico, pouco
solvel em gua mais altamente solvel em lcool e iodeto de potssio ou
sdio
tradicionalmente usado como agente anti-sptico. um agente microbicida de

alta eficincia contra todos as espcies bacterianas. tambm esporicida,
fungicida, virucida e amebicida
usados principalmente para assepsia da pele. Tambm desinfecta pequenas

quantidades de gua; na sanitificao de utenslios de alimentao; desinfecta
o ar (vapores de iodo)
mecanismos de ao : destruio de compostos metablitos essenciais dos
microrganismos por meio de oxidao. Ex. inativao do aminocido tirosina
(2) Cloro e Compostos Clorados
o cloro na forma gasosa (Cl2) ou em combinaes qumicas representa um dos

desinfetantes mais largamente utilizados
o gs comprimido em forma lquida a escolha universal para a purificao de
guas de abastecimento, pblica, piscinas e estaes de tratamento de gua e
esgoto.
pelo fato da dficil manipulao do cloro gasoso, se utiliza muito os compostos
inorgnicos clorados, como os hipocloritos e cloraminas, esta ltima mais
estvel, mais o cloro liberado num perodo maior que nos hipocloritos
para ser efetivo a concentrao do cloro deve atingir 0.5 a 1.0 ppm. Uma
soluo de hipoclorito 1% usada como desinfetante domstico; de 5 a 12%
como alvejantes e desinfetantes domsticos e como sanitificantes em
instalaes de laticneos e indstrias de alimentos
mecanismo de ao :
Cl2 + H2O ------- HCl + HClO
HClO ------- HCl + O (poderoso agente oxidante que pode destruir subst. celulares)
*o cloro pode tambm combinar diretamente com as protenas celulares e destruir suas
atividades biolgicas
4. Metais Pesados e seus Compostos - Hg, Pb, Zn, Ag, Cu
antigamente a gua era armazenada em recipientes de prata (Ag) e cobre (Cu)

pois as pessoas notavam que ali a gua de beber era conservada
o HgCl2 era amplamente usado. Hoje tem sido substitudo por outros agentes
menos txico e e menos corrosivos
44
*ao oligodinmica - a capacidade de quantidade extremamente pequenas de certos metais,
particularmente a prata de exercer efeito letal sobre as bactrias - acredita-se que a atividade
desses ons metlicos se deve inativao de certas enzimas que se combinam com o metal
compostos contendo Hg orgnico possuem maior atividade antomicrobiana e

menos toxicidade que os inorgnicos - mercuriocromo, mertiolate
o sulfato de cobre efetivo como um algicida em resduos abertos de gua e
piscinas, tem tambm ao fungicida
mecanismo de ao : inativam as protenas celulares combinando-se com
alguns componentes da protena
Detergentes ou Surfactantes
compostos que diminuem a tenso superficial, utilizados para a limpeza de

superfcies
a ao umectante deve-se ao fato de serem compostos anfipticos (possuem
uma parte polar e outra apolar), como por exemplo os sabes
Quimicamente os detergentes so classificados em :
1. Detergentes Aninicos - a propriedade detergente do composto reside na

-
2.
3.
poro aninica. Ex. sabo - [C9H19COO] Na

Detergentes Catinicos - a propriedade detergente do composto reside na
+ poro catinica. Ex. cloreto de cetilpiridnico - [Ar-N C16H33] Cl
Detergentes No-Inicos - no ionizam quando dossolvidos na gua. Ex.
polissorbato 80; octoxinol. No so antimicrobianos
muitos detergentes antimicrobianos pertencem ao grupo catinico, dos quais
os COMPOSTOS QUATERNRIOS DE AMNIO so mais largamente usados
Compostos Quaternrios de Amnio
Estrutura Geral
so bactericidas (Gram-positivas e Gram-negativas) mesmo em concentraes

muito baixas
apresentam uma combinao de propriedades que fazem dele um excelente
anti-sptico, desinfetante e sanificante :
1. baixa toxicidade
2. alta solubilidade em gua
3. alta estabilidade em soluo
4. no so corrosivos
largamente aplicados em assoalhos, paredes e outras superfcies em hospital,
enfermarias e outros estabelecimentos pblicos. E tambm em equipamentos
em instalaes de processamento de alimentos
45
mecanismo de ao : desnaturao de protenas das clulas, interferncias

com os processos metablicos, e leso da membrana citoplasmtica
Alguns desinfetantes, antispticos e detergentes mais comumente usados

Agente
Qumico
Concentrao
(%)
Nvel de
Atividade
Aplicaes
Compostos
Fenlicos
0.5 - 3.0
desinfeco de objeto
inanimado
intermedirio
lcoois
70 - 90
antisepsia da pele,
desinfeco de instrumento
cirrgico
intermedirio
Iodo
Compostos
Clorados
Compostos
Quaternrios
Compostos
Mercuricos
antisepsia da pele, pequenos

intermedirio
cortes, desinfeco da gua
0.5 - 5.0
desinfeco de gua,
superfcies no metlicas,
equipamento de laticnios,
materiais domsticos
baixo
0.1 - 0.2
saneamento ambiental de
superfcies e equipamentos
baixo
antisepsia da pele,
desinfeco de instrumentos
baixo
* alta - mata todas as formas de vida microbiana, inclusive os esporos bacterianos

intermedirio - mata o bacilo da tuberculose, fungos e vrus, mais no os esporos bacterianos
baixo - no mata esporos bacterianos, nem o bacilo da tuberculose ou os vrus em um tempo
aceitvel
Avaliao do poder antimicrobiano dos desinfetantes e anti-spticos
o agente qumico testado contra um microrganismo especfico (organismoteste) - usualmente Staphylococcus aureus representando os Gram + ou
Salmonella representando as Gram os 3 procedimentos amplamente usados no laboratrio so : (1) tcnica de
diluio em tubo; (2) tcnica de inoculao em placa; (3) tcnica de coeficiente
fenlico
Esterilizantes Qumicos
so particularmente utilizados para a esterilizao de materiais medido

sensveis ao calor. Os principais so :
1. xido de Etileno
lquidos a temperaturas abaixo de 10.8 C, acima disso torna-se gs;

seus vapores so altamente irritantes para os olhos e a mucosa .
so inflamveis mesmo a baixa concentrao
tem um grande poder de penetrao; atravessa e esteriliza o interior de
grandes pacotes com objetos, roupas e mesmo certos plsticos - as seringas
descartveis p. ex.
apresenta a desvantagem de agir a baixa velocidade, necessitando de vrias
horas de exposio para ser eficiente
46
utilizados rotineiramente para a esterilizao de materiais mdicos e

laboratoriais. No programa espacial pelos cientistas americanos e russos para
a descontaminao dos compostos das naves espaciais
mecanismos de ao : inativa as enzimas e outras protenas que tem tomos
de hidrognio lbeis (grupos sulfidrilas
2. -Propiolactona
lquido incolor em temperatura ambiente; p.e = 155 C; no inflamvel; e

causa bolhas quando em contato com a pele e irritao nos olhos
bactericida, esporicida, fungicida e viricida
no apresenta poder de penetrao, mais considerado mais ativo contra os
microrganismos que os xidos de etileno. Ex. necessrio 2 a 5 mg/l de propiolactona para fins de esterilizao de material, contra 400 a 800 mg/l do
xido de etileno
desvantagem: alm de seu baixo poder de penetrao provavelmente
apresente propriedades carcinognica, o que torna seu uso como esterilizante
restringido
3. Glutaraldedo
lquido oleoso, incolor; e 2% j tem um largo espectro de atividade

antimicrobiana
efeito contra vrus, clulas vegetativas e esporuladas de bactrias e fungos
utilizado na medicina para esterilizar instrumentos urolgicos, equipamentos
respiratrios
4. Formaldedo
um gs que se mostra estvel somente em alta concentrao e temperatura

extremamente txico e seus vapores intensamente irritantes mucosa
em temperatura ambiente polimeriza-se formando uma substncia slida
incolor (paraformaldedo) que libera o formaldedo pelo aquecimento
o formaldedo em soluo utilizado para desinfeco de certos instrumentos.
Na forma gasosa pode ser utilizado para desinfeco e esterilizao de reas
fechadas
mecanismo de ao : inativao de constituintes celulares (protenas e cidos
nuclecos)
Mecanismos de ao de vrios compostos qumicos antimicrobianos em clula bacteiana :
47
CAPTULO 7: Os Principais Grupos de Microrganismos
Eubactrias e Arqueobactrias
Caractersticas Morfolgicas da Bactrias
Embora existam milhares de espcies bacterianas diferentes, os organismos isolados
apresentam uma das trs formas :
1. Elipsoidal ou Esfrica (COCOS) - apresentam tipos e arranjos diferentes:
diplococos - dois cocos

estreptococos - vrios cocos arranjados em cadeias
ttrades - cocos arranjados em 4 - quadrado
estafilococos - cocos arranjados em cachos de uva
sarcina - cocos arranjados em forma cbica
2. Cilndricas ou Bastonetes (BACILOS)
diplobacilos - ocorrem em pares

estreptobacilos - ocorrem em cadeias
3. Espiraladas ou Elicoidais - ocorrem predominantemente como clulas isoladas

Exigncias Nutricionais para a maioria das Bactrias
limites: 4 - 9
pH :
timo: 6.5 - 7.5
o
limites 0 - 79 C
Temperatura :
o
timo 20 - 37 C
Gases :
aerbias, microaerfila, facultativas ou

anaerbias
Luz :
alguns grupos fotossintticos
Concentrao de carbono
no meio :
0.5 - 1.0 %
48
Carbono :
autotrficos ou heterotrficos
Classificao
Existem dois grupos principais de bactrias : Eubactrias e Arqueobactrias. As diferenas
fundamentais entre estes grupos so :
1. Quanto composio da parede celular - eubactrias: peptidoglicano;

arqueobactrias: constituida de protenas ou polilissacardeo
2. Quanto estrutura qumica dos fosfolipdeos da membrana citoplasmtica 3.

4.
eubactrias: cidos graxos de cadeia longa; arqueobactrias: contm lccois

de cadeia longa ramificada (fitanis)
Quanto sntese protica - eubactrias: o aminocido usado para iniciar a
cadeia protica sempre o formilmetionina; arqueobactrias: o aminocido a
metionina
Alm do mais as arqueobactrias so notveis por formarem produtos finais
incomuns do metabolismo, que as eubactrias no podem produzir, como o
gs metano, ou ainda por habitar ambientes extremamente adversos que
muitas eubactrias no podem tolerar
1. Eubactrias
So divididas em dois grupos :
1. Com parede celular

Gram-Negativas ( 12 subgrupos )
Gram-Positivas ( 6 subgrupos )
2. Sem parede celular

Micoplasmas
Principais Caractersticas diferenciais do grupo das eubactrias :
GRUPOS
CARACTERSTICAS
Gram-Negativas
Espiroquetas
helicoidais, com flagelo, vivem na

gua,lodo,insetos,animais e humanos; vrias so
patgenas ao homem. Ex. Borella, Leptospira,
Spirochaeta
Bacilos aerbios ou
Microaerfilos
helicoidais, com flagelos ou no, vivem na gua,

solo, animais; alguns so patgenos ao homem. Ex.
Campylobacter
Cocos e Bacilos aerbios
bastonetes ou cocos, vivem na gua, solo; alguns

so patgenos ao homem e animal. Ex. Acetobacter,
Brucella, Xanthomonas, Rhizobium, Neisseria
Bacilos anaerbios facultativo
bastonetes retos ou vibries, vivem na gua, solo,

plantas intestino do homem e de animais; alguns
so patgenos. Ex. Enterobacter, Erwinia,
Escherichia, Proteus, Salmonella, Shigella, Vibrio,
Yersinia, Serratia
49
Bactrias anaerbias
bastonetes e cocos, vivem no trato intestinal e

causam infeces teciduais. Ex. Fusobacterium
Riqutsias e Clamdeos
bastonetes e cocos, muitas so patgenas ao

homem e animal, necessitam de hospedeiros vivos
para se desenvolverem. Ex. Coxella, Rickttsia
Fototrficas anoxignicas
bactrias prpuras e verdes, anaerbios,

fotossintticas, vivem em ambiente aqutico, no
patgenos. Ex. Rhodopseudomonas, Chlorobium
Fototrficas oxignicas
cianobactrias, fotossintticas, produzem O2, vivem

no solo e na gua, no patognicos. Ex. Anabaena,
Glocotricha
Bactrias deslizantes
bastonetes ou filamentos, sem flagelos, vivem no

solo e na gua, no patognicos. Ex. Beggiotoa
Bactrias com bainha
bastonetes em cadeia ou filamentos, envolvidas por

uma bainha tubular, saprfitas aquticas, no
patognicas. Ex. Crenothrix
Bactrias gemulantes e/ou

apendiculares
saprfitas aquticas e do solo, no patognicas. Ex.

Ancalomicrobium
Quimiolitotrficas
obtm energia pela oxidao da amnia, nitrito,

compostos sulfurados, vivem no solo e gua, no
patognicos. Ex. Nitrobacter, Nitrosomonas
Gram-Positivas
Cocos
aerbios, facultativos ou anaerbios, saprfitas ou

parasitas, alguns so patognicos. Ex. Deinococcus,
Staphylococus, Streptococcus, Sarcina
Bactrias esporuladas
bastonetes ou cocos, formam endosporos, aerbios,

facultativos ou anaerbios, vivem no solo, gua,
insetos, animais, humanos, alguns so patognicos.
Ex. Bacillus, Clostridium
Bacilos regulares
aerbios ou facultativos, vivem no solo, gua,

produtos alimentcios, alguns causam doenas
humanas. Ex. Lactobacillus, Listeria
Bacilos irregulares
clulas exibem salincia (forma de Y ou V), aerbios

facultativos ou anaerbios, alguns so patognicos.
Ex. Actinomyces, Propionibacterium
Micobactrias
bastonetes aerbios, lcool-cido resistentes,

saprfitas ou parasitas, alguns patognicos ao
homem. Ex. Mycobacterium
Actinomicetos
aerbios do solo que formam miclio, hifas

ramificadas, multiplicam-se por fragmentao ou por
produo de esporos, alguns produzem antibiticos.
Ex. Nocardia, Streptomyces
Micoplasmas
assumem vrias formas, pois no tem parede

celular, no inibidos pela penicilina, possuem
esteris como os eucaritos, habitam na mucosa do
homem e de outros animais. Mycoplasma
2. Arqueobactrias
So divididas em dois grupos :
50
1. Com parede celular
Produtoras de metano
Bact;erias haloflicas extremas
Arqueobactrias dependente de enxofre
2. Sem parede celular

Termoplasmas
Principais Caractersticas diferenciais do grupo das arqueobactrias :
GRUPOS
CARACTERSTICAS
Metanognicas
anaerbias, produz grande quantidade de metano, cocos, Gram-,

vivem em lodoal, aude, brejos, estao de tratamento de gua
de esgoto. Ex. Methanosarcina, Methanobacterium,
Methanospirillum
Haloflicas
extremas
crescem em 17 a 23% de sal (gua do mar = 3% de NaCl), vivem

em lagos salgados (mar morto),tanques industriais que produzem
sal, alimentos salgados com sal, contm pigmento carotenide.
Ex. Bacteriorrodospsina
Dependentes de
enxofre
vivem em fonte de gua quente cidas, crescem a 50 ou 87 C,

no crescem em pH menor que 4.0 ou 5.5, aerbias, obtm
energia da oxidao do enxofre ou de acares e aminocidos.
Ex. Sulfolobus, Thermoproteus
Termoplasmas
ausncia de parede celular, temperatura tima: 55 a 59 C, pH

timo: 2, as clulas desintegram-se em pH 7
Eucaritos
Os microrganismos eucaritos podem ser divididos em 3 principais grupos : Fungos, Algas e
Protozorios. De um modo geral os microrganismos eucaritos so facinantes devido a seu
ciclo de vida complexo, sua morfologia varivel, seus mtodos alternativos de reproduo, seus
efeitos como agentes de doena e como fonte de interesse econmico e seu papel no
ambiente
Caractersticas Morfolgicas e Nutricionais dos microrganismos Eucaritos
Principais caractersticas que diferenciam os microrganismos eucaritos :
Microrganismos Arranjo Celular
Modo de Nutrio
Motilidade
Miscelnea
no-mvel
esporos
sexuais ou
assexuais
Fungos
unicelular ou
multicelular
quimioheterotrfico
pela absoro de
nutrientes solveis
Algas
unicelular ou
multicelular
fotoautotrfico pela
absoro de
nutrientes solveis
principalmente pigmentos
no-mvel
fotosintticos
unicelular
quimioheterotrfico
pela absoro ou
injesto de
partculas de
principalmente
mvel
Protozorios
51
alguns
formam
cistos
alimentos
1. Fungos
possuem parede celular, com algumas excees, diferentemente das clulas

animais
no possuem clorofila (no-fotosintticos)
formam esporos que so dispersos por correntes de ar
Exigncias Nutricionais para a maioria das espcies

limites: 2 - 9
pH :
timo: 5.6
o
limites 0 - 62 C
Temperatura :
o
timo 20 - 30 C
Gases :
aerbios estritos
Luz :
nenhum
Concentrao de carbono
no meio :
4%
Carbono :
heterotrficos
Classificao
Baseia-se primariamente em :
1. caractersticas dos esporos sexuais e corpos de frutificao presentes durante

os estgios sexuais
2. da natureza de seus ciclos de vida

3. caractersticas morfolgicas de seus miclios vegetativos ou de suas clulas
Os fungos so divididos em 3 grupos : Fungos Limosos, Fungos Inferiores
Flagelados, Fungos Terrestres
Fungos Limosos
apresentam tanto caractersticas de fungos como de protozorios, mais no

so considerados fungos tpicos nem protozorios tpicos
assemelham-se aos protozorios por no possuirem parede, apresentar
movimentos amebides e por nutrir-se por injesto de partculas.
assemelham-se aos fungos por formar corpos de frutificao e esporngios
divididos em duas classes principais :
o Acrasiomycetes ou Celulares - clulas amebides, se alimentam de
bactrias e se agregam para formar corpos de frutificao que
produzem esporos; ex. Dictyostelium discoideum
o Myxomycetes ou Acelulares - multicelulares, plasmdio sem parede
que se transforma em esporngio altamente organizado; ex. Physarum
polycephalum
Fungos Inferiores Flagelados
52
incluem todos os fungos, com exceo dos limosos, que produzem clulas
flageladas
alimentam-se pela absoro de nutrientes
a grande maioria so filamentosos
divididos em quatro classes principais :
o Chytridiomycetes - clulas mveis com 1 nico flagelo chicoteante
localizado na extremidade posterior; ex. Allomyces macrogynus
o Hyphochytridiomycetes - clulas mveis com 1 nico flagelo do tipo
falso, localizado na poro anterior; ex. Rhizidiomyces arbuscula
o Plasmodrophoromycetes - clulas mveis com 2 flagelos chicoteantes
anteriores desiguais, parasitas obrigatrios em plantas superiores,
estgio vegetativo como plasmdio; ex. Plasmodiophora brasicae
o Oomycetes - clulas mveis com 2 flagelos inseridos lateralmente; ex.
Saprolegnia ferax
Fungos Terrestres
so os mais conhecidos. Incluem as leveduras, bolores, orelhas de pau, fungos

em forma de taa, ferrugem, carvo, bufa-de-lobo, e cogumelos
todos caracterizam-se pela nutrio atravs da absoro
com exceo das leveduras, que so geralmente unicelulares, a maioria
produz um miclio bem desenvolvido constitudo de hifas septadas ou no
no possuem clulas mveis
a reproduo assexuada ocorre atravs de brotamento, fragmentao e
produo de esporangispors ou condeas. A reproduo sexuada culmina na
produo de zigosporos, ascosporos e basidiosporos
divididos em quatro classes principais :
o Zygomycetes - reproduo sexual por gamentagial, zigoto: zigosporo
com parede celular espessa, reproduo vegetativa por meio de
esporangisporo no interior de esporngio, ex. Rhizophus stolonifer,
Mucor rouxii
o Ascomycetes - esporos sexuais produzidos endogenamente em um
asco, reproduo vegetativa por condeos. ex. Saccharomyces
cerevisiae, Neurospora crassa
o Basidiomycetes - esporos sexuais produzidos exogenamente em
basdios (clulas em forma de clava), engloba os fungos comestveis,
ex. Agaricus bisporus
o Deuteromycetes - reproduo sexual desconhecida, reproduo
vegetativa por meio de condeos que se originam de conidiforos, ex.
Candida albicans
Em geral aqueles fungos que possuem todos os estgios sexuais so conhecidos como :
FUNGOS PERFEITOS, enquanto aqueles que no possuem todos os estgios sexuais
conhecidos so chamados FUNGOS IMPERFEITOS ou DEUTEROMICETOS. Quando passase a conhecer estes estgio sexual o organismo ento reclassificado numa das outras 3
classes. Um exemplo so algumas espcies de Aspergillus, Penicillium e Candida, que j
foram reclassificados dos Deuteromycetes para os Ascomycetes
2. Algas
so fotoautotrficas (algumas crescem heterotroficamente), quando crescem

fotosintticamente produzem oxignio e utilizam CO2 como nica fonte de
carbono
vivem em ambientes marinhos ou de gua doce
Classificao :
So geralmente classificadas conforme as seguintes caractersticas :
53
1. natureza e propriedade de pigmentos - clorofila a, b, c; carotenides; etc
2. natureza dos produtos de reserva e armazenamento - amido, gorduras, leos,
3.
4.
5.
laminarina, crisolaminarina, paramilon

tipo, nmero de insero e morfologia de flagelos
composio qumica e caractersticas fsicas da parede celular - celulose,
pectina, cidos algnicos, compostos pcticos, ou sem parede celular
morfologia e caractersticas das clulas e flagelos
Divididas em 6 grupos principais :
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Algas Verdes
Algas Marrons
Algas Vermelhas
Algas Douradas
Algas Dinoflageladas
Algas Euglenides
Importncia Econmica
para a fertilidade do solo - assim como certas bactrias as algas verdes,

marrons e vermelhas fixam o N2 atmosfrico
para a sntese de vitaminas - o caroteno produzido por algumas algas o
precursor da vitamina A. Os peixes que injerem algas produtoras de vitamina D
liposolveis armazenam a vitamina nos seus rgos, assim o peixe se torna
fonte da vitamina direta ao homem e animal
algas como alimentos - a alga vermelha cultivada no Oriente como produto
alimentar; o gar empregado em muitos alimentos comuns do homem, como
agente de clarificao dos sucos de frutas
algas e doenas - poucas so patognicas, algumas liberam toxinas que so
letais aos peixes; Prototheca cauna causam doenas ao homem e animal
Liquens
so organismos compostos, resultantes da associao de algas e fungos

crescem em rochas, cascas de rvores, podem crescer em baixas
temperaturas existentes nas elevadas altitudes e nos ambientes polares
a maior parte dos fungos liquenizados fazem parte dos Ascomycetes, e as
algas liquenizadas da classe das Algas Verdes
sempre uma nica espcie de fungo associada a uma nica espcie de alga
reproduzem-se predominantemente por processos vegetativos
A alga fornecem carboidratos e vitaminas ao fungo e fungo fornece gua e sais minerias s
algas
3. Protozorios
so microrganismos com caractersticas semelhantes a animais, incluindo

locomoo, ingesto de alimentos, e ausncia de parede celular rgida
presentes em gua doce e marinhas, no solo, ou podem ser simbiticos dentro
ou sobre hospedeiros
Exigncias Nutricionais para a maioria dos protozorios :

pH :
limites: 3.2 - 8.7
54
timo: 6.0 - 8.0

o
Temperatura :
timo 16 - 25 C
Luz :
alguns efetuam a fotosntese
Os principais grupos de especial interesse na microbiologia :
1. Flagelados - reproduo assexuada por fisso binria, reproduo sexuada
2.
3.
conhecida em alguns grupos, autotrficos e/ou heterotrficos, formas

amebides com ou sem flagelos, 1 ou muitos flagelos comensais, simbiticos e
parasitas, ex. Leishmania, Trypanosomas, Giardia, Trichomonas
Amoeba - a maioria so de vida livre, corpos nus ou com esqueleto externo ou
interno, movimento amebide, alimentao por meio de pseudpodes,
reproduo assexuada por fisso binria, reproduo sexuada, quando
presente, por gametas flagelados, ex. Amoeba
Ciliados - o maior filo, todos possuem clios como organela de locomoo,
muitos possuem boca, presentes dois tipos de ncleos : macroncleo, que
controla o metabolismo, e microncleo que controla a reproduo, reproduo
assexuada por fisso binria, reproduo sexuada nunca envolve a formao
de gamentas livres, so amplamentes distribuidos : guas doces, salgadas, em
solos; 1/3 das espcies so parasitas, e as outras de vida livre, ex. Didimium,
Paramecium
55
CAPTULO 8: Metabolismo Microbiano
Metabolismo de todos os organismos - crescimento e reproduo

Ciclo do dixido de carbono (CO2) e Oxignio (O2)
Autotrficos - podem usar o CO2 da atmosfera como nica fonte de carbono (bactrias
fotossintticas e plantas), a partir da qual constroi todas suas biomolculas contendo carbono
Heterotrficos - no podem usar o CO2 da atmosfera, podem obter carbono a partir de um
ambiente na forma de molculas orgnicas complexas como a glicose (animais superiores e
muitos microrganismos)
Ciclo do Nitrognio na biosfera
As bactrias fixadoras de nitrognio fixam aproximadamente 193.000.000 de toneladas de

nitrognio por ano. So necessrias 10 molculas de ATP (adenosina trifosfsto) para fixar 1
molcula de nitrognio
A amnia (NH3) necessria para todos os seres vivos, que utilizam para a biossntese de
aminocidos, nucleotdeos
Catabolismo e Anabolismo
Catabolismo - a quebra de macromolculas em pequenos compostos
Anabolismo ou Biossntese - sntese de macromolculas a partir de compostos pequenos
56
Esquema Geral
Bioenergtica
Termodinmica Bioqumica - estudo das alteraes energticas que acompanham as reaes
bioqumicas
Os sistemas biolgicos so essencialmente isotrmicos, e usam energia qumica para
propulsionar os processos da vida, e os sistemas biolgicos seguem as Leis Gerais da
Termodinmica :
57
1. a energia total de um sistema mais a energia de seu meio circundante
permanence constante (lei da conservao da energia)
2. a entropia total de um sistema deve aumentar se um processo ocorre

espontaneamente. A entropia a distribuio ao acaso do sistema, extenso
desordem
para manter os processos vitais todos os organismos devem obter energia livre do seu
ambiente
G = E - TS onde ;
G = alterao de energia livre do sistema;
G negativo - reao exergnica (perda de energia livre);
G positivo - reao endergnica (anabolismo)
E = alterao total na energia interna da reao - ENTALPIA
S = alterao da ENTROPIA
T = temperatura absoluta
nos autotrficos o processo exergnico simples, a reao procede espontneamente;

p. ex. as plantas verdes utilizam energia da luz solar
os heterotrficos obtm energia livre do seu metabolismo ao desdobramento de
molculas orgnicas complexas de seu meio ambiente. Em todos esses processos o
ATP desempenha um papel central na transferncia de energia livre dos processos
exergnicos (catabolismo) para os endergnicos (anabolismo)
Grupo Fosfato de Transferncia e ATP
4-
3-
ATP + HOH ------ ADP + Pi - + H

Fosfatos de alta energia atuam como a "moeda energtica" da clula
a maioria dos organismos obtm energia da degradao, isto , da quebra de

nutrientes ou substncias qumicas
durante o catabolismo a energia liberada das molculas dos nutrientes e
armazenada temporariamente em um "sistema de armazenamento de energia" at
sua utilizao. Este sistema serve tambm como um "sistema de transferncia de
energia" quando ela necessria para a sntese de constituintes da clula
58
Oxidao Biolgica
a respirao o processo pelo qual as clulas obtm energia na forma de ATP, a partir
de reaes controlada do hidrognio com o oxignio para formar a gua.
a maior parte da energia derivada da oxidao respiratria capturada no interior da
mitocndria. Este sistema mitocondrial (gerao de energia a partir de um intermedirio
de alta energia, o ATP) chamado FOSFORILAO OXIDATIVA
a fosforilao oxidativa capacita os organismos aerbios a captar uma poro muito
maior de energia livre disponvel dos substratos, em comparao com os anaerbios
fosforilao oxidativa - sntese de ATP - transferncia de eltrons para oxignio - nos
eucaritos ocorre na mitocndria
fotofosforilao - sntese de ATP - luz - nos eucaritos ocorre nos cloroplastos
Transporte dos equivalentes redutores atravs da cadeia respiratria
Principais fontes de energia dos microrganismos
1. quimiotrficos - obtm energia por degradao de nutrientes ou substratos qumicos ( a

2.
3.
4.
energia liberada e armazenada, e os produtos finais acumulados)

quimioheterotrficos - so organismos quimiotrficos, que degradam compostos
orgnicos para obter energia
quimioautotrficos - so organismos quimiotrficos, que degradam compostos
inorgnicos para obter energia
fototrficos - utilizam luz como fonte de energia. Possuem certos pigmentos que
absorvem a luz e armazenam sua energia
Energia Qumica
A energia existe sob vrias formas. A energia qumica a utilizada universalmente pelos
organismos vivos
59
Energia qumica a energia contida em ligaes qumicas das molculas de nutrientes
especiais. Quando estas ligaes so quebradas durante a degradao de um nutriente a
energia qumica liberada
os compostos de transferncia de energia mais utilizados pelas clulas so aqueles

capazes de transferir grande quantidade de energia, chamados compostos de
tranferncia de alto nvel energtico - o mais importante a adenosina trifosfato (ATP)
Produo de ATP pelos microrganismos

Fosforilao a adio de um grupo fosfato a um composto. O ATP formado pela adio de
um grupo fosfato ao ADP. Existe trs vias gerais nas quais isto pode ocorrer :
1. Fosforilao ao nvel do substrato - processo no qual o grupo fosfato de um composto

qumico removido e adicionado diretamente ao ADP
1. Fosforilao Oxidativa - processo no qual a energia liberada pela oxidao de

compostos qumicos (nutrientes) utilizada para a sntese de ATP a partir de ADP.
Todas as reaes de oxidao liberam energia, e os microrganismos captam para a
sntese do ATP
1. a energia liberada por uma srie integrada de reaes de oxidao
sequenciais denominada sistema de transporte de eltrons
2. a energia armazenada temporariamente em forma de fora protomotiva
3. a fora protomotiva fornece energia para a sntese de ATP a partir do ADP
Sistema de Transporte de Eltrons
o
uma srie integrada de reaes de oxidaes sequenciais que libera energia

gradativamente, em vrias etapas, as quais a clula vai utilizando
O doador de eltrons ou composto reduzido pode ser um nutriente que foi

absorvido pela clula ou um composto resultante da quebra de um nutriente, e
aceptor final de eltrons ou composto oxidado, obtido do ambiente em que a
clula esta presente
os organismos aerbios utilizam o oxignio; aps receber os eltrons do ltimo
sistema O/R e o oxignio reduzido a gua. Os organismos anaerbios
utilizam compostos qumicos como o nitrato, o sulfato, ou cido fumrico
o sistema de transporte de eltrons est localizado na membrana
citoplasmtica nas bactrias e na membrana interna da mitocndria nas clulas
eucariticas
o
o
60
Observe que a energia liberada a cada passo na srie sequencial de
oxidao, porm apenas em algumas etapas a quantidade de energia liberada
suficiente para a produo de ATP. Mas esta energia ainda deve ser
primeiramente estocada na forma de fora protomotivas antes de ser utilizada
para produzir ATP
Fora Protomotiva
8. a energia liberada do sistema de transporte de eltrons utilizada pela clula
9.
10.
para bombear prtons para fora da clula tornando assim o lado externo da
membrana altamente cido e o lado interno com cargas negativas
(concentrao de prtons pode ser 100 vezes maior de um lado da membrana)
esta distribuio desigual de prtons e cargas eltricas atravs da membrana
representa uma importante forma de energia potencial - FORA
PROTOMOTIVA - que utilizada na sntese de ATP
existem canais dentro de molculas das enzimas adenosina trifosfatase
(ATPase), a qual atravessa a membrana, atravs dos quais os prtons fluem
para o lado onde esto menos concentrados (como se abrisse uma barragem).
Este fluxo de prtons pode ser utilizado pela clula para realizar trabalho de
fosforilao do ADP para produzir ATP
1. Fotofosforilao - processo no qual a energia da luz utilizada para a sntese de ATP a

partir de ADP. Utilizada pelas cianobactrias, algas e plantas verdes, de um modo
geral, a fotofosforilao ocorre da seguinte maneira :
1. a luz utilizada para produzir a fora protomotiva
2. a fora protomotiva promove ento a sntese do ATP
Processo :
(1) quando a luz absorvida pelas molculas de clorofila presentes no
fotosistema I (PSI), a energia luminosa conduz as molculas a um estado de
excitao - liberao de um eltron de cada molcula (os quais so utilizados
para reduzir NADP (nicotinamida adenina difosfato) a NADPH2
-
2 Chl (PSI) 2e ( NADP + 2H a NADPH2 )

(2) similarmente a luz absorvida pela clorofila de PSII, causando a liberao
de eltrons desse fotosistema. Esses eltrons passam ao longo do sistema de
+
transporte de eltrons e alcanam a Chl de PSI :
-
2 Chl (PSII) 2e (O/R)1 2e (O/R)1 2e (O/R)1 2e (2 Chl (PSI)+ a 2 Chl (PSI) )
61
A diferena do sistema de transporte de eltrons descritos para a fosforilao
oxidativa que nesse sistema, o doador Chl (PSII) e o aceptor final de eltrons
+
Chl (PSI) so fornecidos pela prpria clula e no pelo meio ambiente
Vias de Degradao de Nutrientes
Gliclise ou Via de Embden-Meyerhof
A oxidao de glicose a cido pirvico, usualmente o primeiro estgio no catabolismo de
carboidratos. Muitos microrganismos utilizam esta via, bem como os animais e as plantas.
A decomposio da glicose a cido pirvico pela via de Embden-Meyerhof apresenta algumas

importantes caractersticas :
1. duas molculas de ATP so necessrias para converte a glicose a frutose 1,6difosfato
2. um total de 4 molculas de ATP so produzidas por fosforilao nvel do

substrato
3. a produo lquida de ATP por molcula de glicose = 2

62
4. no processo geral 1 molcula de glicose resulta em 2 de cido pirvico
5. duas molculas de NADH so formadas
A ltima caracterstica um aspecto importante da gliclise, pois a clula possui quantidade
limitada de NAD - utilizada para oxidar as molculas de gliceraldedo-3-fosfato. Assim que deve
existir um meio de regenerar continuamente o NAD a partir de NADH para permitir que a
gliclise continue.
Os seres vivos usam 2 mtodos para regenerar o NAD a partir de NADH : FERMENTAO e
RESPIRAO
Fermentao
um processo independente do oxignio, no qual o NADH2 que produzido durante a gliclise
(ou outra via de degradao) utilizado para reduzir um aceptor orgnico de eltrons
produzido pela prpria clula
Exemplo :
Leveduras --- crescem em meio contendo glicose sob condies de anaerobiose --fermentao alcolica
Leveduras utilizam acetaldedo como aceptor final
2 c. pirvico ---- 2 acetaldedo + 2 CO2
2 acetaldedo + 2 NADH2 --- 2 etanol + 2 NAD
Streptococcus lactis utilizam o prprio cido pirvico como aceptor final
2 cido pirvico + 2 NADH2 ---- 2 cido ltico + 2 NAD
A fermentao um processo pouco eficiente na produo de energia pois os produtos finais
ainda contm grande quantidade de energia qumica
Respirao
um processo de regenerao de NAD utilizando o NADH2 como doador de eltrons para um
sistema de transporte de eltrons.
Se o O2 o aceptor final de eltrons ento temos uma RESPIRAO AERBIA. E se o NO 3
ou SO4 forem os aceptores finais de eltrons ento temos a RESPIRAO ANAERBIA
A respirao apresenta uma grande vantagem sobre a fermentao : no somente o NAD
regenerado mas o sistema de transporte de eltrons produz uma fora protomotiva que pode
ser dirigida para a sntese adicional de molculas de ATP
Fermentao alcolica por leveduras
63
Respirao aerbica por leveduras
Vias Alternativas
Muitas bactrias utilizam outras vias em adio a gliclise para a oxidao de glicose. As vias
alternativas mais comuns so : (1) Via das Pentoses Fosfato; (2) Via de Entner-Doudoroff
Via das Pentoses
a glicose tambm pode ser oxidada via ciclo das pentoses, com liberao de
um par de eltrons que podem entrar na cadeia respiratria.
primeiras reaes do ciclo das pentoses :
Glicose ATP a ADP Glicose 6-fosfato - 2H 6-fosfo-glicnico - 2H e CO2 Ribulose 6-fosfato
um fator importante desta via que se produz importantes intermedirios

usados na sntese de cidos nuclicos; glicose, a partir de dixido de carbono
em fotossntese; e certos aminocidos. Tambm importante pela produo da
coenzima reduzida NADPH a partir de NADP. Apenas uma molcula de ATP
produzida para cada molcula de glicose oxidada
algumas bactrias que utilizam a via das pentoses - Bacillus subtilis,
Escherichia coli, Leuconostoc menseteroides e Enterococcus feacalis
64
Via de Entner-Doudoroff
para cada molcula de glicose a via de Entner-Doudoroff produz 2 molculas

de NADPH e uma molcula de ATP para ser utilizada nas reaes de
biossntese
encontrada em algumas bactrias Gram-negativas, incluindo Rhizobium,
Pseudomonas e Agrobacterium. Geralmente no encontrada entre as Grampositivas
Transporte de Nutrientes para o interior das Clulas

A maioria dos nutrientes so transportados atravs da membrana citoplasmtica por protenas
especiais : protenas carreadoras.
No entanto molculas de gua e alguns nutrientes solveis em lipdeos (constituintes da
membrana) podem passar livremente atravs da membrana por um processo chamado difuso
simples. Mais a maioria no entra na clula por este tipo de transporte. Existem 2 transportes
mediados por carreadores : difuso facilitada e transporte ativo. Os 3 tipos de transporte de
nutrientes para o interior da clula :
1. Difuso Simples - entra livremente at um equilbrio do meio externo com o

meio interno. No requer energia metablica
2. Difuso Facilitada - as molculas dos nutrientes se ligam inicialmente
3.
protena carreadora. No requer energia metablica e tambm ocorre um

movimento de molculas de uma maior concentrao para uma menor, at que
a concentrao do lado interno e do lado externo estejam em equilbrio
Transporte Ativo - a maioria dos nutrientes so transportados para dentro da
clula assim. Ocorre no sentido de uma baixa para uma alta concentrao - a
clula pode concentrar altos nveis de nutrientes que so adequados para as
atividades metablicas, nveis que podem ser centenas de vezes maior dentro
da clula que aqueles existentes fora dela. Requer consumo de energia
metablica
Utilizao da Energia para processos Biosintticos

Em geral :
as vias biosintticas comeam com a sntese das unidades estruturais

necessrias para a produo de substncias mais complexas
as unidades estruturais so ento ativadas, usualmente com a energia de
molculas de ATP. Esta energia necessria para estabilizar as ligaes
covalentes que subsequentemente iro ligar as unidades estruturais
as unidades estruturais ativadas so unidas uma a outra para formar
substncias complexas que se tornam parte estrutural ou funcional da clula
Utilizao da Energia :
1. Biossntese de Compostos Nitrogenados
Aminocidos e Protenas - um dos mais importantes aminocidos que um

microrganismo necessita produzir o cido glutmico
Nucleotdeos e cidos Nuclico
Fixao de N2 :
N2 + 6 e- + 6 H+ + 16 ATP --------- 2 NH3 + 16 ADP + 16 fosfatos
65
2. Biossntese de Carboidratos
Polissacardeos - peptidoglicano, celulose, amido,....
3. Biossntese de Lipdeos
cidos graxos de cadeia longa

Fosfolipdeos
4. Outros Processos
Transporte de nutrientes para o interior da clula

Motilidade
Esquema geral de como uma bactria pode sintetizar as macromolculas

(em um meio com glicose + NH3SO4 + outros sais inorgnicos)
66
CAPTULO 9: Gentica Microbiana
A gentica o estudo das semelhanas - Hereditariedade - e diferenas - Variabilidade

Cromossomos de Clulas Procariticas e Eucariticas
Um cromossomo uma estrutura densa no interior da clula que carrega fisicamente
informaes hereditrias de uma gerao para outra
Diferenas entre os cromossomos de clulas procariticas e eucariticas :
Clulas Procariticas
1.
1. contm somente um cromossomo
2. consiste de uma nica molcula
3.
4.
de DNA de fita dupla na forma

circular
no possui membrana nuclear
enrolado, espiralado e de forma
altamente compacta - cerca de
1200 vezes maior que o tamanho
da clula
2.
3.
4.
Clulas Eucariticas
h mais do que um cromossomo
por clula
cada cromossomo consiste em
uma nica molcula longa de DNA
de fita dupla enrolado em
agregados de protenas histonas
em intervalos regulares
possui membrana nuclear
apresenta forma linear, e a
molcula de DNA cerca de 10
vezes mais longa
Alm do cromossomo uma clula bacteriana pode conter uma ou mais estrutura de DNA
chamados PLASMDIOS - molculas de DNA de fita dupla menores que os cromossomos e
que podem replicar-se independentemente destes
Uma clula que contm somente um de cada tipo de cromossomo um organismo chamado
HAPLIDE. J que as bactrias tem 1 nico cromossomo, elas necessariamente so
haplides. J a maioria das clulas eucariticas so DIPLIDES - contm 2 de cada tipo de
cromossomo
Replicao do DNA
Nas Bactrias
1. cromossomo circular (molcula de DNA de dupla fita)

2. as duas fitas so desenroladas pela enzima DNAgirase (em um local
3.
4.
5.
especfico da molcula de DNA) formando duas forquilhas de replicao. Cada

fita (separadas) serve de modelo para a fita nova, que se forma em
complementariedade com a clula parental: Adenina com Timina (A-T);
Guanina com Citosina (G-C). A enzima DNA polimerase assegura esta
complementariedade pela adio de nucleotdeos fita nova complementar
parental
a medida que vai desenrolando vai formando as outras fitas
as duas fitas novas j esto quase separadas
as duas fitas se separam
Nos Eucaritos
A diferena que a replicao do DNA se inicia em vrios pontos do DNA linear
67
O Gene
Um segmento de DNA que contm a sequncia de nucleotdeos para a produo de uma
determinada protena. Uma vez que as clulas produzem milhares de protenas, uma molcula
de DNA contm milhares de genes, um para cada protena - um gene uma enzima
A forma pela qual as clulas usam a informao no gene para produzir uma determinada
protena :
1. a informao no gene (DNA) copiada para uma molcula de cido

ribonuclico (RNA mensageiro - mRNA) por um processo chamado transcrio
2. o mRNA carrega as informaes transcritas da regio nuclear da clula para os

ribossomos no citoplasma
3. os ribossomos ento executam a traduo, um processo em que a informao

no mRNA utilizada para sintetizar uma protena correspondente a partir de
aminocidos
Variabilidade nos Microrganismos
Variabilidade est associada com duas propriedades fundamentais de um organismo :
1. Seu Gentipo - representa o potencial hereditrio total de uma clula, refere-se
2.
a toda capacidade gentica de um organismo encontrado no DNA - clula

bacteriana (DNA cromossmico e DNA plasmdico); clulas eucariticas (DNA
cromossmico e DNA das mitocndrias; no caso de algas e plantas DNA dos
cloroplastos)
Seu Fentipo - representa a parte do potencial gentico que est atualmente
sendo expressa por uma clula com determinadas condies - uma cor
particular, ou o tamanho de uma colnia bacteriana, utilizao de compostos
qumicos especficos (fonte de energia pelas leveduras); presena de cpsulas
que pode ou no ser produzidas por certas bactrias dependendo de seu meio
ambiente
1 nico gentipo pode resultar em muitos fentipos
Alteraes Fenotpicas
O fentipo de um organismo pode ser influenciado tanto por : (1) condies ambientais; (2)
pelo gentipo
Exemplo :
Bactrias do gnero Azomonas :
na presena de sacarose ---- formam grandes colnias viscosas

na ausncia de sacarose ---- formam pequenas colnias no viscosas
Embora a bactria seja "sempre" potencialmente capaz de produzir o material viscoso - a

presena ou ausncia do acar que determina se esta caracterstica ser expressa
Alteraes Genotpicas
Pode ser resultante da (1) Mutao; ou (2) Recombinao
Mutao
68
mutante - a clula ou o organismo que carrega o gene mutante

tipo selvagem - o organismo parental com o gene normal
para selecionar o mutante p.ex. pode-se adicionar antibiticos ao meio - os
selvagens morrero e os mutantes (resistentes ao antibitico) sobrevivero
Os tipos de mutaes mais comuns :
1. Mutao Pontual - resulta de uma substituio de um nucleotdeo por outro em

um gene (num ponto s)
2. Mutao por Deslocamento - ocorre com a adio ou perda de um ou mais

nucleotdeos no gene - mutao de insero e de deleo
Recombinao
Leva a uma nova combinao de genes nos cromossomos. Nas bactrias este processo pode
ocorrer devido tranferncia de genes cromossmicos de uma clula para outra. H trs tipos
diferentes de transferncia de gene bacteriano :
1. Transformao - a clula receptora adquire os genes de uma molcula de DNA

2.
3.
livre presente no meio

Transduo - o DNA da clula doadora transportado por um vrus
(bacterifago) para a clula receptora
Conjugao - dependente do contato clula-clula; pode envolver a
transferncia de um plasmdio, como o plasmdio F em Escherichia coli
Plasmdio - uma pequena molcula de DNA normalmente circular, auto-replicativa, que no

faz parte do cromossomo bacteriana. Alguns carregam genes para resistncia a antibiticos, ou
para enzimas que degradam substncias qumicas complexas, ou ainda so
bacteriocinognicos
Regulao da Expresso Gnica
Uma clula contm mais de 1000 enzimas diferentes, e cada uma com efetiva atividade
cataltica para algumas reaes qumicas. O controle prprio do metabolismo celular
acompanhado pela regulao das enzimas - regulando a atividade das enzimas ou a sntese
delas
1. Induo Enzimtica - uma protena repressora (ligada regio operadora de

2.
um operon) inativada na presena de um indutor (lactose) - permitindo a

ligao da RNA polimerase ao promotor e a transcrio do operon
Represso pelo produto final - neste caso o repressor inativo e no impede a
transcrio do operon; entretanto se o produto final da via metablica particular
est presente, o repressor ativado, ligando-se na regio do operon e
impedindo a transcrio do operon
69
CAPTULO 10: Vrus
So entidades infecciosas no celulares cujo genoma pode ser DNA ou RNA. Replicam-se
somente em clulas vivas, utilizando toda a maquinaria de biossntese e de produo de
energia da clula para a sntese e transferncias de cpias de seu prprio genoma para outras
clulas
Principais Caractersticas
esto largamente distribudos na natureza

so 100 vezes menores que as bactrias - 0.02 - 0.3 m
todos so parasitas obrigatrios - infectam clulas animais, vegetais e de
microrganismos
possuem corpsculos de incluses - estruturas intracelulares associadas com
infeces a vrus - ao redor das leses variolosas representam agregados ou colnias
de vrus em multiplicao no citoplasma da clula hospedeira
quanto a forma podem ser icosadrico ou helicoidais
Estrutura e Composio
1. Capsdio e envelope - o virio composto de cido nuclico, sede de sua infectividade,

2.
3.
circundado por uma capa protica chamada capsdio responsvel pela especificidade
viral. A partcula completa conhecida pela denominao virio
cidos nuclicos - o vrus pode ter DNA ou RNA, mas nunca so encontrado os dois
juntos no mesmo virio, o que estabelece um contraste com todas as formas celulares
de vida, as quais, sem exceo, contm os dois tipos de cidos nuclicos. A estrutura
dos cidos nuclicos nas partculas virais pode ser linear ou circular
Em adio ao cido nuclico e protena, os viries mais completos possuem lipdeos,
carboidratos, traos de metais e alguns deles substncias semelhantes vitaminas
Replicao dos Vrus

Os vrus no tem atividade metablica independente e so incapazes de reproduo por
cissiparidade, gemulao ou outros processos observados entre as bactrias e outros
microrganismos. Ao contrrio a multiplicao se faz por replicao, na qual as pores
proticas e nuclicas aumentam no interior das clulas hospedeiras
As informaes obtidas a partir do estudo do mecanismo de replicao dos bacterifagos (vrus
que ataca bactrias), servem em geral como modelo bsico para estudo semelhante sobre os
vrus que infectam as clulas eucariticas
Bacterifagos ou Fagos
vrus que infectam as bactrias. H trs tipos morfolgicos bsicos : icosadricos sem
cauda, icosadricos com cauda, filamentosos
h dois tipos principais de fagos : lticos e temperados
Etapas da infeco viral, a nvel celular, comuns a todas as infeces :
1. Adsoro - participao de receptores especficos na superfcie da clula

hospedeira e das macromolculas do virio. Compreende de duas fases, a
primeira uma adsoro preliminar por ligaes inica, facilmente reversvel por
alterao do pH ou concentrao salina do meio; a segunda fase parece ser
mais firme e irreversvel
70
2. Penetrao e Desnudamento - os vrus nus parecem penetrar por fagocitose
3. Replicao Bioqumica - a replicao ativa do cido nuclico e a sntese de
4.
5.
protenas virais comeam aps a dissociao do capsdio e do genoma. Alm

do ATP celular os vrua requerem o uso dos ribossomos da clula, do RNA de
transferncia, de enzimas e de certos processos biossintticos para sua
replicao
Acoplamento - os vrus so capazes de dirigir a sntese dos componentes
essenciais para sua prognie e de acoplar estes materiais sob formas de
viries maduros no ncleo e/ou no citoplasma da clula infectada
Liberao - varia com o agente viral. Em alguns casos a lise celular resulta na
liberao conconmitante das partculas virais; em outros a maturao e a
liberao so relativamente lentas e os viries so liberados sem a destruio
da clula hospedeira
Lticos - que realizam o ciclo ltico, o qual compreende as seguintes etapas :
1.
2.
3.
4.
5.
adsoro do vrus
penetrao do seu genoma
converso da clula hospedeira em uma fbrica produtora de fagos
produo do cido nuclico e protenas do fago
montagem e liberao de partculas do fago maduros
Temperados - podem realizar tanto o ciclo ltico como o ciclo lisognico, que consiste :
1.
2.
3.
4.
5.
adsoro
entrada do genoma
sntese de mRNA do fago para formar uma protena repressora
insero do DNA fgico no cromossomo bacteriano
replicao do profago como parte do cromossomo bacteriano
Isolamento e Identificao dos Vrus

A melhor e mais comumente forma de isolar bacterifagos a partir do habitat do hospedeiro
(bactria). Condies timas de crescimento das clulas hospedeiras constituem a melhor
maneira de isolamento e cultivo dos fagos especficos. Os primeiros trabalhos sobre
crescimento dos vrus foram realizadas em hospedeiros vivos
Cultivo dos Vrus
Os princiapis mtodos : (1) Tcnica do Embrio de Galinha (2) Cogulos de Plasma (3)
Culturas de Tecidos
Patogenicidade
Causa doenas no homem : encefalite, hepatite, sarampo, raiva, varola, febre amarela, cncer,
AIDS....
71

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Curso de Microbiologia Bsica

Captulo 1: Introduo Microbiologia

Microbiologia como uma Cincia

Captulo 2: Caracterizao dos Microrganismos

Isolamento e Cultivo de Culturas puras

Captulo 3: Estrutura das clulas Procariticas e Eucariticas

Captulo 4: Exigncias Nutricionais e o Meio Microbiolgico

Captulo 5: Cultivo e Crescimento dos Microrganismos

Captulo 6: Controle dos Microrganismos

Captulo 7: Os Principais Grupos de Microrganismos

Captulo 8: Metabolismo Microbiano

Captulo 9: Gentica Microbiana

Cromossomos de clulas procariticas e eucariticas

Captulo 10: Vrus

Microbiologia como uma Cincia

1. Caractersticas Morfolgicas - forma e tamanho da clula; composio qumica e

2. Caractersticas Fisiolgicas - p.ex; a necessidade nutricional especfica e as condies

3. Atividades Bioqumicas - como os microrganismos quebram os nutrientes para obter

4. Caractersticas Genticas - a hereditariedade e variabilidade das caractersticas.

7. Classificao - a relao taxonmica entre os grupos no mundo microbiano.

1. Produo de vacina com mtodo mais econmico

4. Utilizado como suplemento alimentar (protena de clula nica - SCP)

7. Usados como "inseticidas biolgicos", no lugar de produtos qumicos; microrganismos

8. Microrganismos capazes de melhorar a capacidade de detergentes caseiros, em

Elementos diferenciais entre clulas procariticas e eucariticas:

Organelas envolvidas por

Concluses do estudo da origem da vida :

1. origem nica das formas de vida

Os primeiros organismos alm de anaerbios, deveriam ser organotrficos fermentativos

Monera (procaritos) - microrganismos primitivos

Diviso dos Reinos (Atual):

1. Eubactrias (clulas procariticas)

A microscopia ptica a mais comumente utilizada no laboratorio de microbiologia. Em geral, o

Principais caractersticas das objetivas do microscpio ptico :

O Microscpico eletrnico possui grande vantagem diante do ptico, apresenta um poder de

coradas ou no, quando

eucariticos, unicelulares, ingerem partculas alimentares, no

eucariticos, considerados semelhantes s plantas, contm

eucariticos, com parede celular rgida, uni ou multicelulares,

fungos multicelulares, produzem estruturas filamentosas (hifas,

fungos unicelulares, apresentam formas variadas (esfrica a ovide;

procariticos, carecem de membrana nuclear e outras estruturas

apresentam vrias formas (esfrica, bastonete e espirilo) e

semelhantes s eubactrias pelo microscpio, porm apresentam

no so celulares como os citados acima, so muito menores (20 a

1. consideraes sobre a origem do material a ser analisado

1. tcnica de esgotamento por meio de estrias superficiais - a amostra semeada na

transferncia peridica para meios novos

As colees de culturas so bancos de microrganismos e outras clulas que esto disposio

1. Tcnica entre lmina e lamnula e gota pendente - utiliza uma suspenso de

microrganismos vivos em uma gota ou uma camada lquida. Estas preparaes (a

As principais etapas do preparo de um espcime microbiano corado para exame microscpico

1. Confeccionar um esfregao, ou uma camada fina do espcime sobre uma

1. Caractersticas Morfolgicas - tamanho, forma e arranjo das clulas

3. Caractersticas Antignicas - os anticorpos produzidos em animais de laboratrios

podem ser usados para detectar a presena de antgenos nicos em culturas

Classificao dos Organismos Vivos

razes latina ou grega, ou o nome latinizado de uma pessoa - masculino, feminino, ou

adjetivo que modifica o nome (Bacillus albus - Bacillus branco)

Ocasionalmente, necessrio subdividir uma espcie em variedades. Tal atitude tomada

Ultra-estrutura dos Microrganismos Procariticos

1. so estruturas externas parede celular. Filamentos finos e ocos, que se

estendem a partir da membrana citoplasmtica atravessando a parede celular,