Plantas Transgnicas

PLANTAS
TRANSGNICAS

15

5.2

A transformao gentica a transferncia (introduo) de

um ou vrios genes em um organismo sem que haja a fecundao ou
o cruzamento. Os organismos transformados geneticamente recebem
o nome de transgnicos e os genes inseridos so denominados de
transgenes. Estes organismos tambm so chamados de organismos
geneticamente modificados (OGMs). Portanto, vegetais transformados
geneticamente so chamados de plantas transgnicas.
A principal vantagem para o melhorista no uso da tecnologia
dos transgnicos a possibilidade de transferncia de caractersticas
(genes) de plantas no relacionadas (ou seja, sexualmente
incompatveis) ou mesmo de animais e microorganismos. No
melhoramento convencional, a troca de genes est limitada somente
a espcies que so sexualmente compatveis.
Neste captulo vamos estudar as tcnicas utilizadas para a
produo de uma planta transgnica, apresentar alguns exemplos

16

Bespalhok F., Guerra e Oliveira

de plantas transgnicas e discutir os benefcios e riscos da utilizao

dessa tecnologia.
COMO FAZER UMA PLANTA TRANSGNICA
Os passos necessrios para a obteno de uma planta transgnica
podem ser resumidos em: (a) isolamento e clonagem de um gene
til; (b) transferncia desse gene para dentro da clula vegetal; (c)
integrao desse gene ao genoma da planta; (d) regenerao de plantas
a partir da clula transformada; (e) expresso do gene introduzido nas
plantas regeneradas; (f) transmisso do gene introduzido de gerao
em gerao.
A transformao gentica em vegetais s foi possvel a partir
do desenvolvimento das tcnicas de cultura de tecido vegetais. Essas
tcnicas possibilitam a obteno (regenerao) de uma planta a partir
de uma nica clula vegetal. Por meio das diferentes tcnicas que sero
apresentadas neste captulo, possvel introduzir uma seqncia de
DNA (gene) em uma clula e ento regenerar uma planta transgnica
a partir dessa clula transformada.
Os mtodos de transformao de plantas podem ser divididos
em: indiretos (atravs do uso da Agrobacterium tumefaciens) e diretos
(bombardeamento).
A. Uso de Agrobacterium tumefaciens como vetor
A transferncia de DNA por meio da Agrobacterium tumefaciens
o mtodo mais usado na obteno de plantas transgnicas de plantas
dicotiledneas.
A Agrobacterium tumefaciens uma bactria gran-negativa
que possui um plasmdeo (DNA extracromossomal) chamado de
plasmdeo Ti (indutor de tumor) que possui a habilidade de transferir

Plantas Transgnicas

17

uma parte de seu DNA para a clula vegetal que est infectando. Esse
DNA chamado de T-DNA, e contm genes envolvidos na produo de
reguladores de crescimento vegetais e opinas. Em condies naturais,
quando o T-DNA transferido para a clula vegetal essa produzir
substncias que serviro de alimento (opinas) para o patgeno e
levaro a clula vegetal a se multiplicar, formando tumores ou calos.
FIGURA 5.1
Por meio da manipulao gentica do plasmdeo Ti, foi possvel
a substituio das seqncias nativas na regio de transferncia
do plasmdeo (T-DNA) por genes de interesse. Assim, quando o
Agrobacterium contendo um plasmdeo Ti manipulado infecta uma
clula vegetal, ele transferir o gene de interesse para dentro da clula
transformada.
A infeco com Agrobacterium geralmente feita em tecidos
vegetais tais como folhas. Em geral, coloca-se o Agrobacterium em
co-cultivo com o tecido a ser transformado por 24-48 horas, sendo
em seguida transferido para meio com antibiticos com a finalidade
de matar a bactria e selecionar as clulas transformadas, que sero
ento regeneradas. FIGURA 5.2
O nmero de espcies transformadas por Agrobacterium
muito grande, entre as quais esto includas as seguintes: tomate ( ),
soja ( ) e algodo ( ). Uma limitao na utilizao de Agrobacterium
que essa bactria no consegue infectar de forma eficiente a maioria das
monocotiledneas. Pr isso foram desenvolvidos mtodos alternativos
de transformao de plantas.
B. Bombardeamento
A transformao por meio do bombardeamento de microprojteis
um mtodo mecnico de introduo de DNA que pode ser usado na
maioria das espcies ou gentipos. Ela pode ser usada em espcies
que no so infectadas de forma eficiente pelo Agrobacterium, tais

18

Bespalhok F., Guerra e Oliveira

como os cereais.
Esse mtodo de transformao constitudo de um acelerador
(tambm chamado de canho) que impeli microprojteis metlicos
(partculas) carregando DNA para dentro de clulas, tecidos ou orgos
vegetais intactos, que so posteriormente regenerados. Existem vrios
modelos de aceleradores, mas os mais utilizados atualmente utilizam o
gs hlio comprimido para gerar a fora necessria para a acelerao
de partculas. Entre os prottipos mais utilizados temos o Biolistic
PDS 1000/He da empresa BioRad que utiliza altas presses
de hlio. (FIGURA 5.3) As partculas metlicas mais utilizadas no
bombardeamento so as de tungstnio e ouro.
As partculas so preparadas com a precipitao do DNA.
O mtodo mais utilizado para precipitao de DNA utiliza CaCl2 e
espermidina associado com partculas de tungstnio. A transformao
por bombardeamento ocorre sob vcuo, para aumentar a eficincia de
penetrao das partculas.
necessria a calibrao das condies de bombardeamento
para cada espcie e material celular utilizado. Devem ser testadas vrias
alturas de disparo, um ou mais tiros, adio de osmticos no meio,
etc. Um bombardeamento muito forte pode levar morte das clulas,
enquanto um muito fraco leva a uma baixa ou nula transformao.
Por esse mtodo foram transformadas vrias espcies tais como
soja ( ) e milho ( ). O bombardeamento de partculas tambm tem sido
utilizado para a transformao de cloroplastos ( ) e mitocondrias ( ).
C. Marcadores de Seleo
Marcadores de seleo so necessrios para aumentar a
produo de clulas e plantas transgnicas. Um marcador de seleo
permite o crescimento preferencial das clulas transformadas na
presena do agente seletivo, evitando o crescimento das clulas no
transformadas. Genes que conferem resistncia a antibiticos ou

Plantas Transgnicas

19

herbicidas podem ser usados como marcadores de seleo.

O agente de seleo mais usado na transformao vegetal
o gene NPT II (de neomicina fosfotransferase, tipo II), que confere
resistncia a antibiticos como canamicina e geneticina. Os meios de
seleo so acrescidos de doses entre 15 e 100 mg/l de canamicina,
que so txicas para clulas vegetais no transformadas.
Genes de resistncia a herbicidas tambm tem sido usados com
freqncia como marcadores de seleo. Entre os mais usados, temos
o gene BAR que confere resistncia ao herbicida Basta (princpio
ativo fosfonotricina ou PPT).
Para cada protocolo de transformao, necessrio determinar
a dose do agente seletivo adequada para a espcie e tipo celular usados.
Uma dosagem muito alta pode provocar a morte de todas as clulas
e uma subdosagem pode levar ao aparecimento de escapes (plantas
no transformadas).
III. EXEMPLOS DA APLICAO DA TRANSGENIA
As caractersticas modificadas atravs da transformao
gentica podem ser divididas em: caracterstica do tipo input e
caractersticas do tipo output.
Caractersticas do tipo input so aquelas relacionadas com o
processo produtivo. Esse tipo de caracterstica visa principalmente
a reduo do custo de produo e abrangem por exemplo plantas
transgnicas com resistncia a herbicida, doenas e insetos. A maioria
das plantas transgnicas j liberadas para plantio comercial contm
transgenes para caractersticas do tipo input.
Caractersticas do tipo output so aquelas relacionadas com o
consumidor, visando principalmente agregar valor ao produto final,
atravs da melhoria nutricional ou melhor conservao ps-colheita.

20

Bespalhok F., Guerra e Oliveira

A. Resistncia a herbicidas
Entre as caractersticas que tem causado maior impacto est
a resistncia aos herbicidas. A competio com plantas daninhas
um dos principais fatores que afetam a produtividade das culturas.
Plantas transgnicas com resistncia a herbicidas facilitam e tornam
mais barato o controle de plantas daninhas.
A soja Round up Ready da empresa Monsanto possui
resistncia ao herbicida glifosato (Round up). Esta resistncia
foi obtida pela introduo do gene EPSPS clonado da bactria
Agrobacterium tumefaciens estirpe CP4. A EMBRAPA possui um
acordo comercial com a Monsanto e j lanou vrias cultivares de
soja resistentes ao herbicida glifosato. Nesse caso, a transferncia do
transgene foi feita atravs do mtodo dos retrocruzamentos, utilizando
a soja RR como pai doador e as cultivares da EMBRAPA como pai
recorrente.
O milho Liberty link da empresa Aventis possui resistncia
ao herbicida glufosinato (Basta). Esta resistncia foi obtida atravs
da introduo do gene PAT, que foi clonado da bactria Streptomyces
hygroscopicus.
B. Resistncia a insetos
O uso de inseticidas a forma mais comum de controle de
pragas nas plantas cultivadas. A utilizao de plantas transgnicas com
resistncia a insetos pode reduzir a necessidade de aplicao desses
agrotxicos, com conseqente reduo dos custos de produo.
O genes cry (ou genes BT), que codificam a toxina da bactria
Bacillus thrurigienses, tem sido utilizados na obteno de plantas
transgnicas resistentes a insetos. Variedades transgnicas de algodo
(Bollguard) e milho (Yieldguard) resistentes a insetos da ordem
Lepdoptera foram obtidos pela introduo do gene Bt-Cry1A(b).

Plantas Transgnicas

21

Grandes reas variedades de algodo e milho Bt esto sendo plantadas

nos Estados Unidos e outros pases.
C. Resistncia a doenas
O controle gentico de doenas atravs do uso de variedades
resistentes o mtodo de controle preferido por ser mais barato e de
fcil utilizao ( ). A transgenia pode ser uma alternativa para a obteno
de cultivares resistentes a doenas quando fontes de resistncia no
forem encontradas no germoplasma da espcie.
A maior contribuio da transgenia na gerao de plantas
resistentes a doenas at o momento vem do desenvolvimento de
estratgias contra doenas virais (Arago, 200?) Essa resistncia
tem sido obtida principalmente atravs da introduo de seqncias
genmicas dos prprios patgenos, estratgia que denominada de
resistncia derivada do patgeno.
Entre as primeiras plantas transgnicas resistente a viroses
liberadas para plantio comercial est o mamoeiro resistente ao vrus
da mancha anelar (PRSV) no Hava. Esse mamoeiro transgnico
foi liberado em 1998, sendo que a resistncia foi obtida atravs da
introduo de partes do gene que codifica a capa protica do vrus
PRSV. No Brasil, a EMBRAPA est testando mamoeiros transgnicos
contra o vrus da mancha anelar em Cruz das Almas (Bahia).
Nos Estados Unidos, alm do mamoeiro, vrias outras plantas
j foram aprovadas para comercializao, como abboras resistentes
aos vrus WMV (watermelon mosaic vrus), ZYMV (zucchini yellow
mosaic vrus) e CMV (cucumber mosaic vrus) e batatas resistentes
aos vrus PLRV (potato leafroll vrus) e PVY (potato vrus Y) (Arago,
200?)
D. Alterao do amadurecimento

22

Bespalhok F., Guerra e Oliveira

Diferentes estratgias podem ser usadas na obteno de plantas

transgnicas com maturao alterada. O processo de maturao pode
ser alterado desligando genes responsveis pela sntese do etileno,
bloqueando a ao do etileno e desligando genes expressos durante
a maturao.
A primeira planta transgnica liberada para o plantio comercial
foi o tomate Flavr Sarv da empresa Calgene, em 1994. Esse tomate
possua um gene antisenso para a enzima poligaracturonase (degrada
a pectina da parede durante o amadurecimento), possuindo uma vida
de prateleira mais longa que um tomate convencional.
A estratgia antisenso utilizada quando se quer diminuir ou
bloquear a ao de um gene. Nesse caso, a planta transformada com
um fragmento de DNA do gene alvo em orientao oposta orientao
normal. A transcrio do transgene gera um RNA (RNA antisenso)
que complementar ao RNAm do gene que se quer alterar. O RNA
antisenso se liga ao RNAm do gene alvo, bloqueando sua traduo e
a formao da protena correspondente. FIGURA 5.4
E. Qualidade nutricional
Um dos grandes objetivos do melhoramento de plantas a
obteno de variedades com maior qualidade nutricional. Vrios
grupos de pesquisa esto desenvolvendo projetos visando a obteno
de variedades com maior valor nutritivo atravs da transgenia.
Milhes de pessoas nos pases subdesenvolvidos sofrem de
deficincia em vitamina A, que pode levar a problemas de viso
principalmente em crianas. O arroz a principal fonte de alimento no
mundo, mas uma fonte muito pobre em vitamina A e seus precursores.
Pela insero de dois transgenes da planta Narcisso e um transgene da
bactria Erwinia foi possvel obter arroz transgnico com capacidade de
produzir cerca de 20 vezes mais beta caroteno (precursor da vitamina

Plantas Transgnicas

23

A) que o arroz convencional. Esse arroz foi chamado de arroz dourado

(golden rice).
IV. CONSIDERAES SOBRE BENEFCIOS E RISCOS DO
USO DE PLANTAS TRANSGNICAS
A produo e utilizao de plantas transgnicas tem provocado
um grande debate tanto na comunidade cientfica como na mdia.
Geralmente pessoas com diferentes pontos de vista apresentam os
benefcios e riscos do uso dessa tecnologia para o melhoramento,
produtores, meio ambiente e consumidores.
A. Pontos positivos
Para o melhorista, a principal vantagem da utilizao de
transgnicos parece ser a possibilidade da utilizao de genes que no
poderiam ser obtidos pela hibridao. Outra vantagem a possibilidade
de introduo de um gene especfico sem a necessidade de cruzamentos
e retrocruzamentos. Com isto existe a possibilidade de diminuio
no nmero de geraes e, consequentemente, do tempo necessrio
para o desenvolvimento de um novo cultivar. Este impacto deve ser
mais evidente em espcies perenes que geralmente tem ciclo de vida
longo.
O produtor pode ser beneficiado com o uso de plantas
transgnicas principalmente pela diminuio do custo de produo e
do uso de agrotxicos. Plantas transformadas com resistncia a insetospragas e doenas necessitam de menos aplicaes de defensivos.
Para o meio ambiente, o uso de plantas transgnicas pode levar
a um menor uso de defensivos, diminuindo a poluio ambiental.
O consumidor ainda no tem se beneficiado de forma expressiva
da transgenia pois a grande maioria das plantas transgnicas liberadas
so do tipo input. Entretanto, futuramente pode haver melhoria da
qualidade dos alimentos e menor uso de defensivos qumicos.

24

Bespalhok F., Guerra e Oliveira

B. Pontos negativos
A transgenia no aumenta a produtividade de modo direto,
pois as tcnicas de transformao genticas s tem a capacidade
de introduzir um ou pouco genes. A produtividade um carter
quantitativo, governado por muitos genes.
A integrao do transgene no genoma da planta ao acaso e
pode levar a alterao na expresso de outros genes da planta.
O uso da transgenia limitado pela capacidade de regenerao
das espcies. Espcies que tem no tem capacidade de serem
regeneradas por cultura de tecidos no podem ser transformadas.
Para a utilizao de variedades transgnicas os agricultores tem
que pagar royalties para as empresas detentoras das patentes, o que
pode acarretar na elevao do custo das sementes e a necessidade de
compra de sementes a cada safra. Alm disso, existe uma concentrao
da transgenia em poucas Empresas Multinacionais.
Em certos locais existem plantas daninhas que podem cruzar
naturalmente com plantas cultivadas. Neste caso, deve ser considerado
a possibilidade de fluxo gnico entre plantas transgnicas resistentes
a herbicidas e essas plantas daninhas.
O uso de genes para resistncia a insetos-pragas, principalmente
em plantas perenes, pode levar ao aparecimento muito rpido de
indivduos resistentes. Por isso, o uso de plantas transgnicas com
resistncia a pragas deve ser utilizada dentro das estratgias do manejo
integrado de pragas.
A introduo de novos genes (protenas) pode levar ao
aparecimento de alergias em pessoas suscetveis. Por isso existe uma
grande discusso da necessidade ou no de identificar nos rtulos os
produtos que contenham plantas geneticamente modificadas.

Plantas Transgnicas

25

V. CONCLUSES
A produo de plantas transgnicas, apesar de trazer uma
srie de vantagens para o melhorista, no diminui a importncia do
melhoramento convencional. Na verdade, as tcnicas de engenharia
gentica vieram apenas auxiliar o melhorista a fazer um trabalho mais
eficiente.