Tecnologiafermentações

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Tecnologia das Fermentaes

Cintica de Utilizao de Substrato, Formao de Produtos e Produo de Biomassa.
Forma de Conduo do Processo: Sistemas Descontnuo, Descontnuo Alimentado e Contnuo
Autor: Professor Dr. Dile P. Stremel

01) Tente descrever como o crescimento populacional e o ambiente no qual se desenvolve uma cultura
celular. Quais fenmenos ocorrem, dificuldades de modelagem cintica, etc.
De acordo com a morfologia, durante o crescimento celular, organismos unicelulares que se dividem aumentam
em biomassa de acordo com o nmero de clulas presente. Quando considerando organismos como os mofos ou
bolores (fungos), o comprimento e nmero de miclios(conjunto de hifas) aumentam enquanto o organismo cresce. O
crescimento dos mofos aumenta em tamanho e densidade mas no necessariamente em nmeros.
Associados com o crescimento esto dois outros processos: consumo de material do ambiente celular e
liberao de metablitos e produtos finais no meio. As alteraes nos processos variam amplamente enquanto o
crescimento ocorre. As clulas consomem nutrientes e convertem substratos do ambiente em produtos. A clula gera
calor e por sua vez a temperatura do meio fixa a temperatura das clulas. Interaes mecnicas ocorrem atravs da
presso hidrosttica e efeitos de fluxo do meio para as clulas e das mudanas na viscosidade devido ao acmulo de
clulas e produtos metablitos celulares.
O Ambiente no qual o microorganismo se desenvolve, ou meio, nota-se que um sistema multicomponente que
deve conter todos os nutrientes enquanto a clula cresce e diferentes produtos se. A clula produz componentes que
influenciam o pH do meio, que por sua vez influencia a atividade celular e processos de transporte. Durante o curso
de reaes celulares, a temperatura do caldo, pH, fora inica e propriedades reolgicas podem mudar com o tempo.
O ambiente celular freqentemente um sistema multifsico consistindo de meio lquido disperso com gs ou
um sistema lquido-lquido no qual fases imiscveis esto presentes, ou algumas vezes um sistema trifsico com duas
fases lquidas e uma gs Quanto caracterstica da populao celular, cada clula um sistema multicomponente
complexo que no homogneo, nem mesmo a nvel celular. Muitas reaes independentes ocorrem simultaneamente
na clula, sujeito a controles de adaptao internos. Estes controles internos proporcionam clula a capacidade e a
propriedade de se adaptar a atividades e tipos de reaes que ocorrem na clula como funo do ambiente celular.
Em longos tempos de cultivo podem ocorrem mutaes ou o sistema pode forar um deslocamento gentico da
populao. Alm do mais, em uma cultura de crescimento , encontra-se significante heterogeneidade clula a clula.
Isto , a nvel unicelular, diferentes clulas na populao em um dado ponto no tempo e em um dado ponto ou regio
no espao variam com respeito idade.
Claramente, no possvel formular um modelo cintico que inclua todas as caractersticas mencionadas. No
entanto possvel formular algumas aproximaes e simplificar a representao do sistema de forma a representar a
cintica populacional. Com respeito ao ambiente prtica
comum formular o meio de forma
que todos os
componentes, exceto um estejam presentes em concentraes suficientemente elevadas, de forma que a variao nas
concentraes dos demais no altere significativamente as taxas globais. Desta forma um nutriente torna-se limitante
e deve-se considerar somente a concentrao deste componente quando analisando os efeitos da composio do meio
na cintica de crescimento. Ocasionalmente necessrio incluir no modelo outros componentes do meio, tal como
produto inibitrio que acumula no meio em ordem para obter uma descrio adequada para a cintica celular.
Controles externos so necessrios para regular e manter constante alguns parmetros ambientais tais como: pH,
temperatura e concentrao de oxignio dissolvido. De outra forma necessrio uma descrio multicomponente do
ambiente no modelo para representar adequadamente o intervalo desejado de comportamento cintico.
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02) possvel formular um modelo com todos os fenmenos envolvido, explique?

No, geralmente procura-se simplificar o modelo, pois a considerao de inmeros fenmenos envolvidos pode
ser complexa, mesmo porque a considerao de um modelo complexo requer um conhecimento bastante amplo do
mecanismo celular e dos mecanismos de adaptao dos microorganismos. Mesmo a considerao de um meio
multifsico muitas vezes requer conhecimento experimental de alguns parmetros, o que muitas vezes no possvel.
As dificuldades de formulao encontram restries, principalmente na determinao experimental para dar suporte
formulao.
03) O que um modelo no estruturado ? e estruturado. Qual mais idealizado e por qu?
Um modelo pode ser estruturado ou no estruturado, de acordo com o nmero de componentes utilizados na
representao celular. Representaes celulares que so multicomponentes so chamados estruturados, enquanto
representaes celulares por um componente nico so no estruturados.
O modelo mais idealizado o modelo no estruturado, pois considera a clula como um componente nico e
neste caso no se tem uma viso do caminho de reaes biolgicas na clula. Quando se incorpora caractersticas do
ciclo celular no modelo, a validade e a faixa de aplicaes do modelo celular aumenta.
04)
De acordo com o balano material para o reator batelada, se voc estivesse modelando o crescimento, qual
parmetro teria de ser estimado e de que forma voc procederia?
Para um biorreator batelada, o balano para o crescimento celular pode ser expresso pela equao 01, onde V
o volume do biorreator.
d
(VX ) = V rx
dt
A velocidade de reao proporcional ao numero de clulas presente ou quantidade de biomassa (X)
(01)
rx = x X
(02)
A velocidade especfica de crescimento depende das fases de crescimento no biorreator, um parmetro a ser
estimado para a equao 03. Considerando o crescimento na fase exponencial constante
dX
= xX
dt
Ou:
x =
(03)
1 dX
= d [lnX ]/ dt
X dt
(04)
Integrando a equao desde uma concentrao inicial de inoculo (Xo), conhecida, obtm-se 05. Atravs de um
ajuste linear com os dados experimentais da fase exponencial, pelos mnimos quadrados pode-se obter o valor de
ln X = ln X o + x t
Com o valor estimado pode-se calcular qualquer valor de X para um determinado tempo de fermentao
t -t
X = X 0e x lag
(05)
(06)
3
05) Descreva o Reator Bioqumico abaixo e escreva a equao para o componente i, supondo que o processo
no est no estada estacionrio. Que tipo de equaes resultam para i componentes?.
(a)
Xf
Sf
Cif
X
V
S
Ci
X
S
Ci
(b)
CSTR para cultivo contnuo de clulas (a) Principais componentes de um CSTR de laboratrio e (b) notao usada na
modelagem e anlise de biorreatores
O reator acima conhecido como quimiostato1. Neste caso o sistema agitado perfeitamente, de forma que as
composies no variam em nenhuma posio do reator. Em um reator com suprimento de oxignio que tambm
exerce agitao no sistema, juntamente com a hlice do agitador. Um rotmetro mede o fluxo de ar necessrio ao
processo. De outra forma, ocorre a formao de gs enquanto ocorre reao biolgica. Uma anlise dos efluentes
atravs de um analisador on-line d uma medida do grau de converso da reao e permite a determinao de outros
produtos atravs de uma inspeo estequiomtrica, tomando por base o CO2 e o O2 efluente.
. Meio estril adicionado por meio de uma bomba peristltica ao biorreator, continuamente e produto
retirado continuamente, assim como o permite a retirada de amostras de lquido para anlise de concentrao de
acar e clulas.
Percebe-se que o processo aerbio devido a necessidade de adio de oxignio ao processo. O sistema de
gases contm filtros de ar, pois a adio de O2 no pode ter contaminao, tem de ser ar estril, neste caso o processo
exige esterilidade.
Modelo
Para desenvolver o modelo no estado transiente ou no estacionrio para o componente i, considera-se que h
acmulo ou variao do componente i ao longo do tempo:
Quimiostato Trata-se de um reator contnuo operando na regio de valores de D para os quais X varia pouco, sendo um processo que varia pouco, cuja composio
qumica constante, atravs da introduo de substrato pela alimentao.
Turbiosdato Designa-se como processo contnuo operando na regio de grande variao de X. Nesse caso ajusta-se a vazo de alimentao de forma a manter X
constante, mantendo a turbidez do meio constante.
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dC i
= F(C if C i ) + V rfi
dt
(08)
Dividindo pelo volume do reator, uma vez que o mesmo no varia, pois a vazo de entrada igual a vazo de
sada :
dC i F
= (Cif Ci ) + rfi
dt
V
(09)
Rearranjando:
-1
dC i
= D(C if C i ) + rfi onde D a taxa de diluio (relao entre a vazo pelo volume, com unidade h )
dt
(10)
Para i componentes, tem-se:
dC1
= D(C1f C1 ) + rf 1
dt
dC 2
= D(C 2f C 2 ) + rf 2
dt
.
dC n
= D(C nf C n ) + rfn
dt
na notao vetorial:
& = D(C C) + r
C
f
(11)
(12)
Neste caso tem-se um sistema de equaes diferenciais ordinrias a serem resolvidas por um mtodo de
integrao numrica do tipo Euler ou Runge-Kutta. Devido natureza no linear da velocidade de reao, a soluo
numrica facilmente implementada em computador, podendo-se incorporar diferentes modelos cinticos para levar
em conta fenmenos de inibio pelo substrato, produto ou pela prpria clula, ou ainda manuteno celular e morte.
06) O que um nutriente limitante? Quando um nutriente passa a no ser limitante?
Antes de considerar os detalhes da dependncia da taxa de crescimento no suprimento de nutrientes, deve-se

revisar as idias gerais e prticas para construo do meio de cultura celular. Ns distinguimos dois tipos de meios
de acordo com sua constituio. Um meio sinttico aquele que tem uma composio qumica bem definida, tal meio
pode ser constitudo com um suplemento mineral como as necessrias fontes de carbono, nitrognio e energia, assim
como vitaminas. Em adio, para fornecer os necessrios ons para a adequada funo celular, a base mineral do
meio tambm contm componentes tampo para reduzir flutuaes de pH durante o crescimento. Meios complexos
contm materiais de composio indefinida, por exemplo extrato de levedura. Outros meios comuns incluem caldo de
carne, infuso de sangue e crebro(BHI), liquor constitudo a base de milho (corn steep liquor), resduos .
O objetivo de se preparar um meio adequado fornecer condies para um bom crescimento e produo de
altas taxas de snteses. Contrrio a intuio, no necessariamente, o suprimento de nutrientes tem de ser adicionado
em grande excesso. Ainda mais concentrao excessiva de um nutriente pode inibir ou at mesmo envenenar o
crescimento da clula, alm de tudo se uma clula cresce muito extensivamente. O metablito acumulado do produto
final
desestabilizar o processo bioqumico normal das clulas. Consequentemente, prtica comum limitar o
crescimento limitando a quantidade de nutriente do meio. Se a concentrao de um elemento essencial do meio

varivel enquanto as concentraes de todos os componentes do meio so mantidas constantes, a taxa de crescimento
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varia de uma forma hiperblica. Uma relao entre a taxa especfica de crescimento e um elemento essencial do
meio foi proposto em 1942. A relao de Monod estabelece que:
max s
Ks + s
(13)
Aqui, max a taxa mxima de crescimento alcanvel quando s>>Ks e as concentraes de todos os
componentes so inalteradas. Ks a concentrao de nutriente limitante na qual a velocidade especfica de
crescimento metade do seu valor mximo, falando superficialmente, a diviso entre o intervalo baixo
de
concentrao, onde se torna fortemente dependente (linear) de s e intervalo alto de concentrao onde se torna
independente de s. Como mostrado na figura 2 os valores de Ks para o crescimento da E-coli em meios de glicose e
tryptophan so 0,22x10-4M e 1,1ng/mL respectivamente. Conhecendo-se a bioqumica celular, sabe-se que a equao
de Monod uma grande simplificao, assim como em outras reas da Engenharia, h equaes simples que
expressam interrelaes embora os significados fsicos dos parmetros sejam desconhecidos ou mesmo no existam.
Figura.2 Dependncia da velocidade especfica de crescimento limitante da E-coli (a) meio com glicose e (b) Meio
com tryptofano (com permisso de Prenctice Hall, Inc, Englewood Cliffs, New Jrsei)
A forma da equao de Monod caracteriza diferentes situaes. Freqentemente o valor de Ks muito pequeno.
Para s muito maior que KS, o que ocorre na maioria das situaes. A equao pode ser compreendida como uma
adequada descrio do desvio de , em relao a max quando a concentrao de s torna-se pequena. Para s muito
menor que KS,, o comportamento de , finito para uma determinada concentrao de finita de s.
07) Explique o fenmeno do wash-out (use o recurso grfico e o modelo matemtico para auxiliar na
explicao)
Quando a taxa de crescimento de uma populao est relacionada de acordo com uma equao de Monod,
coneces emergem entre as condies operacionais do reator, cintica microbial e parmetros estequiomtricos.
Para mostrar este fato, escreve-se um balano de massa em termos de substrato limitante acoplado ao balano de
massa celular uma vez que depende de s. No balano de substrato faz-se uso do fator de rendimento Yxs
Yxs =
massa de clula formada

massa de substrato consumida
(14)
Para entender e modelar a cintica populacional, neste caso emprega-se modelos estruturados, que consideram
somente a massa celular ou concentrao em nmero de clulas para caracterizar a biofase ou fase bitica. A taxa
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lquida de crescimento rx freqentemente considerada como x onde x a massa de clulas por unidade de volume
e tem unidade do recproco de tempo e chamado de velocidade especfica de crescimento das clulas. Usando esta
forma de representao (crescimento balanceado) em um CSTR para o balano de clulas, tem-se:
dX
= D(X f X ) + rx = 0
dt
(15)
No estado estacionrio vlido

dX
= D(X f X ) + rx = 0
dt
(16)
Como no h clulas sendo alimentadas no sistema (alimentao estril) Xf =0

(17)
DX rx = 0
Reescrevendo em termos de velocidade especfica de crescimento

DX = x X
(18)
Esta equao mostra que uma populao diferente de zero mantida dentro do reator, somente se a taxa de
diluio for igual velocidade especfica.
O balano de massa para o substrato escrito ento por:
D(s f s )
1
x = 0
Yxs
(19)
Ou, substituindo , na equao anterior, tem-se:
D(s f s )
1 max s x
=0
Yxs (K s + s )
(20)
Escrevendo um balano celular no estado estacionrio, tem-se:
D(x f x )
max s x
=0
(K s + s )
(21)
As equaes 20 e 21 so o modelo quimiostato de Monod .

Rearranjando: a equao 21, obtm-se 22
max s
(K + s ) D x + D x f = 0
s
(22)
Considerando que a alimentao xf estril, a concentrao de substrato pode ser calculada como funo da
taxa de diluio.
s=
D Ks
( max D )
(23)
Para calcular a concentrao de clulas, considerando-se alimentao estril, recorre-se ao fator de converso
microorganismo/substrato (Yxs):
x (x x f )
(24)
=
s (so s )
Isolando-se o valor da concentrao celular e levando-se em conta que a concentrao na alimentao estril,
Yxs =
tem-se:
x = (s o s )Yxs
(25)
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Substituindo-se o valor da concentrao de substrato, eq. 23 na expresso anterior, tem-se:
DK s
x = Yxs s f
( max D )
(26)
As equaes 23 e 26 contm a dependncia explcita de x e s na taxa de diluio (D=F/V). Para fluxos

pequenos a um dado volume, D tende a zero, ento s tende a zero. Uma vez que todo substrato alimentado consumido
pelas clulas, a concentrao de clulas no efluente : x = Yxs s f
Quando D aumenta continuamente, s aumenta inicialmente linearmente com D e ento mais rapidamente
quando D tende a max . A concentrao celular x declina com o mesmo comportamento, primeiro linearmente em D,
ento diminuindo rapidamente quando D tende a max. Em algum ponto D se aproxima de max , x torna-se zero. A taxa
de diluio simplesmente ultrapassou a mxima taxa possvel de crescimento e o valor de estado estacionrio para x
zero. Esta condio de perda de clulas no estado estacionrio, chamado wash-outocorre para D maior que Dmax ,
onde x=0, neste caso a concentrao de substrato no reator alcana o valor de entrada sf.
D max =
max s f
Ks + sf
(27)
Figura 3 Dependncia da concentrao de substrato do efluente s , concentrao celular x e produtividade celular xD,
em relao taxa de diluio D em cultura contnua (Modelo de Monod, max = 1 h-1; KS = 0,2 g/L; Yxs= 0,5; Sf=
10 g/L)
Note que prximo ao wash out o reator muito sensvel a pequenas variaes em D; uma pequena variao
em D fornece um relativo deslocamento em x e s.
A sensitividade pode ser compreendida se a produo de massa celular o objetivo do cultivo contnuo. A taxa
de produo celular por unidade de volume de reator Dx. Esta quantidade ilustrada na figura 3 e aqui, s mximo.
Calcula-se o valor mximo de concentrao de sada resolvendo a equao:
d(Dx )
=0
dD
(28)
onde a equao 26 usada para escrever x como funo de D. Resolvendo a eq.28, fornece-se:
D max = max 1
Ks
Ks + sf
(29)
Quando sf for muito maior que Ks que o caso freqente, o valor de Dmax, aproxima-se de max e
conseqentemente o wash out se aproxima. Esta situao evidente na figura 3, o que pode requerer uma
desistncia da obteno da mxima produo de biomassa, para evitar a regio de grande sensibilidade. Incluses de
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aspectos prticos de sensibilidade, controlabilidade e confiabilidade em problemas de otimizao, tal como este
devem ser levados em considerao no alcance de objetivos quantificados
Quando analisando a produo de produtos finais de uma fermentao contnua, introduz-se o coeficiente de
rendimento Ypx, definido por:
Ypx =
massa de produto formado

aumento da massa celular
(30)
Em alguns casos Ypx pode variar, mas considerando-se neste caso assumir valor constante. Usa-se este
coeficiente de rendiemnto para escrever o balano de produto. No caso da fermentao contnua em estado
estacionrio, tem-se para o balano de produtos:
D(p f p )
1
x x = 0
Ypx
(31)
Ento:
p = pf +
Ypx x x
=0
(32)
Combinado com equaes anteriores relacionando e x aos parmetros do processo, a equao 32 permite o
clculo da concentrao de produto no efluente. A taxa de produo definida por pD, a qual maximizada para Ypx
constante, quando D tem o valor especificado na eq.29. O objetivo a mxima produo tambm conciliada com os
aspectos de sensibilidade.
Alguns estudos de casos revelam no adequao do modelo de Monod altas e muito baixas taxas de
diluies. Estas explicaes esto nos itens 7.2.2, 7.2.3 e 7.2.4 (Bailey &Olis, 1986). Resumidndo, h a necessidade de
se ampliar ou incluir modificaes nos termos cinticos para levar em conta o metabolismo endgeno, manuteno
celular, ou sugerir taxas especficas de crescimento que levam em conta diferenes dependncias (pg 391, equaes
7.29, 7.30 e 7.31) da cintica de crescimento, como os modelos de Tessier, Moser e Contois.
Outros Modelos de Crescimento
Outros modelos para a velocidade especfica de crescimento foram propostas de acordo com casos particulares
que forneceram bom ajuste a dados experimentais. Por exemplo, Teissier, Moser e Contois, que sugerem os seguintes
modelos:
(
)
(1 + K S )
= max 1 e S / KS
= max
= max
S
BX + S
Tessier
(33)
Moser
(34)
Contois
(35)
As duas primeiras equaes resultam equaes algbricas com solues mais complicados que a forma de
Monod. A equao de Contois contm uma constante aparente a qual proporcional concentrao de biomassa X. O
ltimo termo diminui a velocidade especfica de crescimento quando a desidade da populao aumenta levando a
X 1 .
A velocidade especfica de crescimento pode ser inibida pelos constituintes do meio tal como substrato e
produto. Um exemplo Andrews, a qual propem que a inibio pelo substrato tem a forma:
= max
S
K i + S + S2 / K p
(36)
Fermentao alcolica fornece um exemplo de inibio pelo produto; a fermentao anaerbia da glicose por
levedura foi tratada por Aiba, Shoda e Nagatani com a funo
KP
S
(37)
= max
Ki + S KP + P
possvel que dois ou mais substratos sejam simultaneamente limitantes do crescimento. Enquanto poucos
dados so disponveis, a dependncia de Monod em cada nutriente pode ser expresso por:
9
S1
S1
(38)
K 1 + S1 K 2 + S1
na ausncia de dados convincentes para esta forma, a mesma serve como indicador que o cresciento depende de vrios
nutrientes limitantes.
= max
08) Geralmente em um processo contnuo pode haver perda de viabilidade celular(mote), ou decrscimo na
concentrao celular, qual modificao tem de ser levado em considerao no modelo cintico de
crescimento para este fenmeno?
Como comentado no final do item 07, algumas situaes precisam ser includas no termo cintico, neste caso
devido exausto de nutrientes pode ocorrer o metabolismo endgeno no qual as clulas consomem substancia
celular, ou simplesmente a perda de viabilidade devido ao aparecimento de substncias txicas. Ento necessrio
incluir no modelo um termo a mais no temo de cintico de crescimento. Repare que a cintica linear em relao a
x, mas no linear em relao a s. Neste caso (ke x) a taxa de morte celular
rx =
max s
x kex
Ks + s
(33)
09) Qual forma de velocidade especfica de crescimento dependente da concentrao celular? Explique.
A velocidade especfica de crescimento proposta por Monod apenas funo da concentrao de substrato.
Contois propem o seguinte model dependente da concentrao celularpara levar em conta o efeito inibidor do
crescimento
max s
Bx + s
(34)
10) Proponha Uma velocidade especfica de crescimento, funo exponencial, que seja inibida pela concentrao
de produto?
Pode-se modificar a equao de monod, para levar em conta a inibio pelo produto, existem vrias formas de
inibio, a exponencial uma delas
max s K P P
e
Ks + s
(35)
Na equao KP uma constante de inibio pelo produto, determinada experimentalmente e P a

concentrao de produto. No caso de P aumentar, a velocidade especfica decresce exponencialmente com P,
verifique.
11) Que fatores influem na velocidade de crescimento?

A concentrao de substrato dependendo se limitante ou inibidor, a densidade celular, a concentrao de
produto , a presena de dois ou mais substratos limitantes do crescimento. Outros fatores ambientais importantes,
como a temperatura, pH, atividade da gua(presena de solutos no meio), presso hidrosttica e oxignio dissolvido
influenciam a velocidade especfica de crescimento consideravelmente.
12) Durante um processo de fermentao, ocorre considervel consumo de substrato. Analisando a equao de
Monod, nota-se que deveria haver uma aparente diminuio na velocidade especfica de crescimento, o que
no se observa na prtica, por qu?
Na prtica, procura-se trabalhar com concentrao bem acima da concentrao de substrato limitante, neste caso
o valor de S muito maior que KS e praticamente a velocidade especfica de crescimento igual a velocidade
especfica mxima de crescimento
13) Comente sobre a cintica de formao de produtos.
A mais simples cintica de formao de produtos aparece quando h uma simples coneco entre a formao de
produtos, a utilizao de substrato ou o crescimento celular. A formao de produtos pode ser escrita como:
rp = Yps rs
(36)
ou:
rp = Ypx rx
(37)
10
Tais casos aparecem em fermentaes do tipo I. A fermentao alcolica um exemplo desta classe. Tal cintica
de formao de produtos so algumas vezes chamadas de crescimento associado. Em muitas fermentaes,
especialmente aquelas envolvendo metablitos secundrios, no ocorre significante formao de produtos em um
pequeno tempo de processamento. A fermentao da penicilina exibe tal comportamento, neste caso o modelo cintico
para representao do tipo no associado. No caso no associado, a taxa de produo proporcional
concentrao celular (x) ao invs da taxa de crescimento (rx). O estudo clssico de Leudeking e Piret em
fermentao do cido actico por Lactobacillus delbrueckii um exemplo de processo em que h uma contribuio
cintica associada e no associada:
rp = rx + x
(38)
Esta expresso envolvendo dois termos cinticos, freqentemente chamados de cintica Leudeking-Piret tem sido
til e verstil no ajuste de dados para a formao de produtos de diferentes fermentaes. Esta uma cintica
esperada quando o produto o resultado do metabolismo energtico em fermentaes anaerbias. No caso do primeiro
e segundo termos da equao 39 (aps o sinal de igual), estes podem ser identificados como energia usada para o
crescimento e manuteno, respectivamente.
As figuras a seguir ilustram a classificao de produtos(metablitos) microbianos de acordo com o crescimento
(1)crescimento associado; (2) Crescimento misto; (3) Crescimento no associado).
Metablito primrio: aquele que produzido durante a fase de crescimento exponencial do microrganismo. Um
exemplo tpico deste tipo de metablito a produo de lcool. O etanol um produto do metabolismo anaerbico de
leveduras e algumas bactrias e formado como parte do metabolismo energtico. Uma vez que o crescimento s pode
ocorrer se houver produo de energia, a produo de etanol est associada ao crescimento. Outros exemplos:
aminocidos, nucleotdeos, cidos orgnicos e enzimas.
Metablito secundrio: produzido durante a fase estacionria de crescimento ou idiofase, ou seja a produo no
associada ao crescimento celular. Constituem o grupo mais comum e importante dos metablitos de interesse
industrial. Como exemplo clssico podemos citar a produo de antibiticos. Principais caractersticas dos metablitos
secundrios: - cada tipo formado por relativamente poucos m.o. - no so essenciais para o crescimento e
reproduo celular - sua formao extremamente dependente das condies de crescimento (meio) pois a represso
pode ocorrer - produzidos freqentemente como um grupo de compostos estruturalmente relacionados - podem ser
superproduzidos mais facilmente que os primrios pois no so ligados ao crescimento.
14) Comente sobre modelagem de biorreatores: Processos fermentativos descontnuo, descontnuo alimentado,
semicontnuo, continuos
Processo fermentativo descontnuo:
As fermentaes descontnuas vm sendo utilizadas h muitos anos, e nos dias de hoje ainda so muito
empregadas em diversos processos fermentativos. Tambm conhecidas como fermentaes em batelada, so
constitudas de um reator, muitas vezes mencionado como dorna, que carregado com microorganismos, sendo
inoculada e incubada. No decorrer do processo fermentativo nada adicionado, exceto oxignio (processos aerbios),
antiespumante e cidos ou bases. Uma das caractersticas bsicas deste processo a constncia volumtrica, pois se
admite no haver adies de solues no processo e nem mesmo evaporao com perda de lquido. Consiste no
preparo de inculo e propagao em volumes maiores
A tcnica de preparao compreende duas fases distintas: a de laboratrio e industrial. No laboratrio se faz a
inoculao de um pequeno volume de meio nutriente, incubado em condies favorveis, transferindo-se para um
volume maior e assim sucessivamente. O caso aplica-se at a fase industrial onde o volume necessrio obtido. Os
cuidados dentro do processo variam conforme o objetivo do mesmo:
Vale lembrar que as transferncias devem ser efetuadas na fase logartmica do processo.
11
Os processos fermentativos descontnuos costumam ser classificados em trs grandes grupos:

1.
Cada dorna recebe um inculo.
2.
Processos com recirculao do microorganismo.
3.
Processo por meio de cortes.
A fermentao descontnua pode levar a baixos rendimentos e/ou produtividades, quando o substrato adicionado
de uma s vez no incio da fermentao, exerce efeitos de inibio, represso ou desvia o metabolismo celular a
produtos que no interessam. Apresenta tambm tempos mortos, perodos em que o fermentador no est sendo
utilizado, como na carga e descarga. Entretanto possui algumas vantagens de bastante importncia. Apresenta menos
risco de contaminao, tem grande flexibilidade de operao, pode realizar fases sucessivas no mesmo recipiente, tem
capacidade de identificar todos os materiais relacionados quando se est desenvolvendo um determinado lote de
produto. Usada na indstria farmacutica. Tambm de grande aplicao na indstria de alimentos, dentro da
produo de diversos itens: iogurte, chucrute, cerveja, vinho entre outros.
A velocidade especfica de crescimentona fase esponencial tambm pode calcular a partir do tempo de duplicao
celular, atravs da equao obtida substituindo-se a concentrao final pelo dobro da inicial, na eq. 05
ln 2 0.693
(39)
td =
=
x
x
Processo fermentativo descontnuo alimentado
Este processo tambm conhecido como batelada alimentada. Pode ser definido como uma tcnica em que um ou
mais nutrientes so adicionados ao fermentador durante o cultivo e em que os produtos permanecem a at o final da
fermentao. Algumas caractersticas importantes podem ser denotadas:
A vazo de alimentao pode ser constante ou variar com o tempo.
A adio do mosto pode ser de forma contnua ou intermitente.
Pode haver ou no mudana de volume, pois depende da concentrao de substrato e da taxa de evaporao.
Cada condio de trabalho, pode levar a diferentes perfis de concentrao de substrato, clulas e produtos.
interessante observar que ao contrrio do sistema clssico descontnuo, neste caso podemos ter um perfil de
concentrao de microorganismos decrescente, pois a adio de mosto a dorna passa a ser um valor importante. Vale
salientar que aps o enchimento da dorna, o processo passa a ter caractersticas clssicas. A seguir observamos uma
figura que ilustra o modo de operao de tal processo.
F
mosto
Inculo
Figura 4. Modo de operao processo descontnuo alimentado
Devido diversidade de aplicaes que encontramos, algumas variaes podem ocorrer para realizar ajustes e
adequ-los a necessidade. Abaixo denotamos alguns deles e suas caractersticas principais:
Processo descontnuo alimentado repetitivo trata-se de retirar rapidamente um determinado volume de meio
fermentado da dorna, sendo recomposto at seu valor mximo atravs da adio de mosto. Este processo tem por
objetivo aproveitar como inculo o microorganismo que est crescendo com alta velocidade de crescimento e trabalhar
com clulas que esto na fase produtiva por mais tempo, respectivamente, levando ao aumento de produtividade do
sistema. Este processo utilizado para produo de leveduras e antibiticos.
12
Processo descontnuo alimentado estendido tem por finalidade estender o perodo de fermentao, mantendo
nveis de concentrao de substrato no reator adequado para que as clulas continuem com atividade fermentativa
direcionada para a formao do produto desejado.
Alm dessa classificao o processo tambm pode ser de duas formas:
Controlada por mecanismo de retroalimentao:O fornecimento pode ser controlado como funo da
concentrao deste no meio de fermentao, direto ou indireto como densidade otica, pH, etc
No controlado por sistema de retroalimentao: O substrato fornecido ininterruptamente at o final da fase de
enchimento da dorna.
Abaixo descrevemos algumas finalidades do processo de fermentao descontinua alimentada:
- Minimizao dos efeitos de controle do metabolismo celular. A utilizao deste processo importante porque
regula a concentrao do meio, no propiciando uma superproduo de enzima ou produto que afete na
eficincia do microorganismo, alterando por conseqncia sua sobrevivncia.
- Preveno da inibio por substrato ou precursores. O controle de vazo na alimentao permite que se evite
o trabalho em condies inibitrias, melhorando a produtividade e/ou rendimento desses processos
fermentativos
- Minimizao da formao de produtos de metabolismo txico. O controle da velocidade de fornecimento de
substrato ao sistema permite que se mantenha a velocidade de crescimento celular em intervalos desejados
e/ou minimize a formao de produtos txicos para as clulas.
Superao de problemas freqentes de estabilidade em processo contnuo
- Para controlar problemas como: contaminao, mutao e instabilidade de plasmdeo.
Em alguns casos o processo contnuo forma produtos indesejveis, ou mesmo acarreta perdas por evaporao,
ento se utiliza o processo descontnuo alimentado que controla estes produtos formados (como a espuma na formao
do etanol) e tambm repe lquido perdido (como na produo de antibiticos).
Processos semicontnuos
O processo semicontnuo, quando uma vez colocados no reator o meio de fermentao e o inculo, as
operaes que se seguem obedecem sequencia:
Operao 1 Aguarda-se o trmino da fermentao
Operao 2 Retira-se parte do meio fermentado, mantendo-se no reator o restante do meio fermentado
Operao 3 Adiciona-se ao reator um volume de meio de fermentao igual ao volume de meio
fermentado retrado na operao 2
Um processo semicontnuo assim considerado quando uma srie de operaes realizada em seqncia.
Primeiro aguarda-se o trmino da fermentao, depois se retira parte do meio fermentado, mantendo-se o restante no
reator, adicionando ao reator um volume de meio de fermentao igual ao volume de meio fermentado. Pode-se dizer
que o meio fermentado no retirado do reator serve de inculo ao meio de fermentao adicionado. Classifica-se como
semicontnuo porque tanto o fluxo de entrada do meio no reator quanto sada de material fermentado so
intermitentes.
Nos interessa saber de que maneira a frao do volume retirado do fermentador interfere na produtividade do
processo.
13
Processos Contnuos:
O processo contnuo extremamente verstil quanto s suas possibilidades de operao
Contnuo em um nico estgio (um nico reator)
1. sem reciclo de clulas.
2. com reciclo de clulas
Contnuo em mltiplos estgios (n reatores em srie)
1. com uma nica alimentao (com ou sem reciclo de clulas)
2. com mltiplas alimentaes (com ou sem reciclo de clulas)
Nos diversos tipos de operaes, tambm teremos distintos comportamentos de estado. Estes distintos
comportamentos sero descritos a seguir.
Modelagem para reator contnuo ideal sem reciclo de clulas
O meio de cultura contendo o substrato limitante em uma determinada concentrao, alimentado a uma
vazo constante. Admite-se agitao perfeita, sendo o reator considerado homogneo. Abaixo temos representado o
esquema de funcionamento:
Figura 5 - Sistema contnuo em um nico estgio, sem reciclo de clulas

A modelagem para este caso j foi discutida anteriormente no item 07, as equaes resultantes para o modelo
do sistema da figura 5 pode ser resumido:
dX
= D( X o X ) + X
dt
(63)
dS
X
= D (S 0 S)
dt
YXS
(64)
dP
= D( Po P) + P X
dt
(65)
Agora podemos fazer duas consideraes:

1. Normalmente temos uma alimentao de meio esterilizado, ento Xo=0
2. Considerando no estado estacionrio, ento dX / dt = 0 .
Temos ento que:
=D
X = YX
KS D
S0
max D
(66)
(67)
Produtividade em clulas:
PX = DX + DYX
S S 0
K SD
max D
(68)
O arraste de clulas, embora no recomendvel, usualmente utilizado para a determinao da velocidade

especfica de crescimento max. Para tanto parte-se de um valor constante, v=D, impondo-se uma vazo especfica de
alimentao nitidamente superior a max de forma a obter um decrscimo na concentrao celular no reator.
14
Sistema contnuo com reciclo de clulas.

Sistema com reciclo interno de clulas
Neste sistema uma frao de clulas mantida no reator, seja atravs de uma simples sedimentao, ou
atravs do emprego de um filtro na sada de lquido do reator. primeira vista parece estranho o fato de se considerar
a existncia de uma purga, conforme apresentado abaixo, de fato sua existncia no estritamente necessria. Essa
sada direta do caldo fermentado, sem filtrao, permite maior controlabilidade do processo em termos de
manuteno do estado estacionrio do sistema. Na figura abaixo observamos esquema de funcionamento:
cF
X,S
F
So
(1-c)F
hX, S
Figura 6 - Sistema continuo em um nico estagio, com reciclo interno de clulas
No caso de um tratamento de resduos, onde o objetivo a degradao da matria orgnica, temos valores
mais baixos de concentraes residuais de substrato, significando desta maneira menor tempo de residncia
para atingir os valores necessrios de degradao.
Sistema com reciclo externo.
Neste sistema o lquido efluente circula atravs de um separador de clulas, de maneira que uma corrente
concentrada de clulas retorna ao fermentador, enquanto uma outra (filtrada ou permeado), sai praticamente isenta de
clulas. Abaixo observamos um esquema do sistema:
F So
FS,X,S
(1-c)F
hX S
cF
gX S
aFs
gX S
Figura 7 - Sistema contnuo em um nico estgio com reciclo externo de clulas
Sistemas contnuos com mltiplos estgios:

Observa-se neste sentido alguns tipos de processos:
-
Sistemas com uma nica alimentao
Sistemas com mltiplas alimentaes
15
Sistema com reciclo de clulas, com uma ou com mltiplas alimentaes.
De um modo geral, os sistemas em mltiplos estgios proporcionam diferentes ambientes para o

desenvolvimento de clulas, ao se mudar de um estgio para outro. Assim podemos empregar condies otimizadas
distintas em cada reator. Poderia-se usar por exemplo um reator para otimizar as condies de cultivo e no outro
maximizar a produo. A modelagem matemtica empregada similar aos exemplos anteriores demonstrados, sendo
que devemos no caso de mltipla alimentao, devemos considerar as vrias correntes de alimentao.
Figura 8 - Sistema contnuo em mltiplos estgios com uma alimentao e com reciclo
Figura 9 Sistema contnuo em mltiplos estgios, com mltiplas alimentaes e com reciclo

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Tecnologia das Fermentaes

Autor: Professor Dr. Dile P. Stremel

comum formular o meio de forma

02) possvel formular um modelo com todos os fenmenos envolvido, explique?

Para i componentes, tem-se:

06) O que um nutriente limitante? Quando um nutriente passa a no ser limitante?

Antes de considerar os detalhes da dependncia da taxa de crescimento no suprimento de nutrientes, deve-se

crescimento limitando a quantidade de nutriente do meio. Se a concentrao de um elemento essencial do meio

massa de clula formada

No estado estacionrio vlido

Como no h clulas sendo alimentadas no sistema (alimentao estril) Xf =0

Reescrevendo em termos de velocidade especfica de crescimento

Ou, substituindo , na equao anterior, tem-se:

Escrevendo um balano celular no estado estacionrio, tem-se:

As equaes 20 e 21 so o modelo quimiostato de Monod .

Substituindo-se o valor da concentrao de substrato, eq. 23 na expresso anterior, tem-se:

As equaes 23 e 26 contm a dependncia explcita de x e s na taxa de diluio (D=F/V). Para fluxos

massa de produto formado

Na equao KP uma constante de inibio pelo produto, determinada experimentalmente e P a

11) Que fatores influem na velocidade de crescimento?

Os processos fermentativos descontnuos costumam ser classificados em trs grandes grupos:

Cada dorna recebe um inculo.

Processos com recirculao do microorganismo.

Processo por meio de cortes.

Figura 4. Modo de operao processo descontnuo alimentado

Figura 5 - Sistema contnuo em um nico estgio, sem reciclo de clulas

Agora podemos fazer duas consideraes:

O arraste de clulas, embora no recomendvel, usualmente utilizado para a determinao da velocidade

Sistema contnuo com reciclo de clulas.

Figura 6 - Sistema continuo em um nico estagio, com reciclo interno de clulas

Sistema com reciclo externo.

Figura 7 - Sistema contnuo em um nico estgio com reciclo externo de clulas

Sistemas contnuos com mltiplos estgios:

Sistemas com uma nica alimentao

Sistemas com mltiplas alimentaes

Sistema com reciclo de clulas, com uma ou com mltiplas alimentaes.

De um modo geral, os sistemas em mltiplos estgios proporcionam diferentes ambientes para o

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