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Contagem_de_plaquetas_6725661.doc Criado por Rubens de Oliveira Santos pagina 1
CONTAGEM MANUAL DE PLAQUETAS PELO MÉTODO DE MASPES & JAMRA
INTRODUÇÃO
A contagem de plaquetas é uma prática rotineira em laboratórios, mesmo naqueles com hematologia totalmente automatizados. Dentre as principais limitações da automação, destaca-se a elevação do coeficiente de variação (CV) em trombocitopenias, sendo relatado um CV de 10% nas contagens entre 40 mil a 50 mil/mm
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, chegando a 50% em contagens abaixo de 20 mil plaquetas/mm
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(1). Convém mencionar que uma contagem exata é extremamente importante nas trombocitopenias graves. No Brasil é muito difundido o uso de equipamentos CC-530
®
 e CC-550
®
, fabricados pela CELM. Tais sistemas de automação em hematologia satisfazem o binômio custo-benefício para laboratórios de pequeno e médio porte, porém apresentam como limitação não realizarem a contagem de plaquetas. Adicionalmente, ainda é rotineira a realização manual do hemograma e que os sistemas totalmente automatizados de hematologia apresentam limitações para contagem de plaquetas em diversas situações.
INTERFERÊNCIAS PRÉ-ANALÍTICAS
As interferências pré-analíticas respondem pela maior parte das contagens de plaquetas diminuída. A coleta torna a fase mais crítica. Os erros podem ser atribuídos a:
 Coleta traumática, coleta demorada, venopunção múltipla. Conseqüências:
 Agregação plaquetária
 Microcoágulos
 Coágulos
 Agregação plaquetária dependente de EDTA
 Satelitismo plaquetário
SIGNIFICADO CLÍNICO
As contagens de plaquetas mais precisas são importantes no tratamento de um paciente trobocitopênico, a diferença de um número de plaquetas de 5.000 e 20.000 mm
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 representa uma diferença real em risco de sangramento potencialmente fatal (2).
 
150 mil a 400 mil/mm
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: intervalo de referência normal;
 
De 100 mil a 150 mil/mm
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: o paciente permanece, geralmente, assintomático e com o tempo de sangramento normal;
 
Inferior a 50 mil a 100 mil/mm
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: hemorragias após trauma grave; o tempo de sangramento está ligeiramente prolongado;
 
Inferior a 50 mil/mm
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: aparecimento de lesões purpúricas após trauma ligeiro e hemorragias após cirurgia envolvendo mucosas, isto é, contra-indica a cirurgia;
 
Inferior a 20 mil/mm
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: hemorragias espontâneas (geralmente petéquias, mas também intracranianas ou outras).
METODOLOGIAS
MÉTODOS INDIRETOS
Os métodos indiretos consistem em verificar a proporção de plaquetas em esfregaço de sangue corado e relacionar estes dados com o número de eritrócitos por milímetro cúbico. A contagem de plaquetas é feita obrigatoriamente em objetiva de imersão onde os eritrócitos se encontram bem soltos, sendo que esta afirmação apresenta conotações subjetivas.
 
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Limitações dos métodos indiretos:
 Elevado coeficiente de variação
 Dificuldade em padronização da técnica.
Método de Fônio
A técnica consiste em contar as plaquetas existentes em cinco campos, que devem conter cerca de 200 hemácias cada campo, logo se faz regra de três, relacionando o número de plaquetas contado, o número de hemácias contado e o número de hemácias por mm
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 de sangue.
Método de Nosanchuk
Este método advém de estudos com contadores automatizados, determinam o número de plaquetas pela multiplicação por um fator de 20.000, que transforma o número de plaquetas por campo em número de plaquetas por milímetro cúbico, o fator determinado foi obtido em estudos com contadores automatizados. Neste tipo de estimativa não se faz necessário correlacionar eritrócitos e plaquetas, tampouco saber a contagem de eritrócitos.Mas por outro lado, requer, de modo determinante que a análise da média de plaquetas por campo ao final da contagem de dez campos. Deve ser realizada obrigatoriamente em local onde a extensão de eritrócitos seja nítida e majoritariamente solta, mas ainda assim com alguns eritrócitos ainda se tocando, independente do número de eritrócitos por campo, o que requer de uma ótima prática, por isso operadores menos experientes devem dobrar os cuidados com sangues anêmicos, porque a região ideal para avaliação dos eritrócitos certamente terá menor número de células que aquela mesma região de esfregaço corado de um paciente normal, ou seja, não anêmico e com número maior de eritrócitos.
MÉTODO DIRETO AUTOMATIZADO
Os métodos diretos de contagem de plaquetas podem ser realizados por sistemas automatizados ou contagem em câmara de Neubauer.
Método Direto Automatizado
São duas as tecnologias básicas de contagem de células: Impedância elétrica e tecnologia de contagem de células por difração da luz. Atualmente grande parte dos contadores automatizados baseia-se no princípio de impedância elétrica ou de sinais ópticos para contar plaquetas no sangue periférico, usando o volume de partículas para contá-las (3). Dentre as limitações dos métodos automatizados destacam-se:
 Presença de macroplaquetas
 Presença de agregados plaquetários
 Alto coeficiente de variação em trombocitopenias inferiores a 40 mil/mm
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MÉTODO DIRETO EM CAMARA DE NEUBAUER
Todos os métodos em câmara apresentam como limitações:
 São trabalhosos
 Erros inerentes devido à distribuição irregular de células na câmara de contagem
Método de Brecher & Cronkite
Está fundamentado em determinar as plaquetas em câmara de Neubauer após diluição de sangue total em oxalato de amônio a 1% (lise os eritrócitos), desta forma obter o número de plaquetas/mm
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 de sangue. Para esta técnica se faz diluição 1:20, diluindo 20󰂵L de sangue total em 400󰂵L de diluente, encher a câmara e deixá-lo em repouso por 20 minutos em câmara úmida, fazer a leitura e determinar o número total de plaquetas observados nos cinco quadrados do quadrante central do retículo, ou seja, no local também destinado à contagem de hemácias. Desvantagens:
 Erros inerentes à contagem em câmara
 Detritos celulares que dificultam a contagem
 
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Método de Todd & Sanford
Trata-se de um método direto de contagem de plaquetas em câmara de Neubauer. A amostra é previamente diluída 1:200 numa das seguintes diluições (4): a) Líquido de Rees e Ecker: citrato de sódio 3,8 g, formol 40% 0,2 mL, azul de cresil brilhante 0,1 g e água destilada 100,0 mL. Este líquido preserva as hemácias, permitindo contagem simultânea; b) Líquido de Leake e Guy: oxalato de sódio 1,6 g, formol 40% 6,0 mL, Cristal de violeta 0,05g e água destilada 100,0 mL; c) Liquido de Wright e Kinnicutt: duas partes de solução aquosa de azul de cresil brilhante e três partes de solução aquosa de cianeto de potássio 1:1400. A diluição é colocada em câmara de Neubauer. Deixa em repouso em câmara úmida por 10 minutos e procede a leitura em aumento de 400 vezes. Conta-se as plaquetas nos cinco quadrantes da região central (destinado à contagem de eritrócitos). O resultado é multiplicado por 10.000. Desvantagens:
 Erros inerentes à contagem em câmara
 Presença de vários elementos fugurados na área de contagem (eritrócitos)
METODOLOGIA DE MASPES & JAMRA (3)
Trata-se de um procedimento de contagem de plaquetas manual e direto descrito em 1955 e modificado posteriormente por Oliveira & Barreto em 2003. No processo de separação dos eritrócitos do plasma, tanto por sedimentação espontânea, quanto por baixa força centrifuga, as plaquetas se arranjam de uma maneira uniforme distribuídas no plasma e mantém em valores constantes, embora boa parte de plasma livre de plaquetas fique retida entre os eritrócitos sedimentados, o que torna o plasma sobrenadante superconcentrado de plaquetas (3). Alternativamente, o valor de plaquetas no plasma pode ser corrigido empregando a tabela (anexo 1) com índices calculados através da fórmula:
plaq/mm
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 sangue
 = plaq/mm
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 plasma x {[100 – (Ht + Ht/2)]/100}
 AMOSTRA
 Sangue total com EDTA
MATERIAIS E EQUIPAMENTOS
 Material para determinação de hematócrito (manual ou automatizado)
 Centrífuga
 Câmara de Neubauer
 Microscópio
 Placa de Petri 100 mm com algodão umedecido
 Tubos de ensaio 12x75 mm (tubos de hemólise)
 Pipetadores automáticos
Solução diluidora (formalina 1%)
Formol 40% 1,0 mL NaCl 0,85% q.s.p. 100 mL
QUADRANTES DE CONTAGEM
Os quadrantes no retículo de Neubauer destinados à contagem são os mesmos recomendados para eritrócitos e estão indicados na figura 1 como H1, H2, H3, H4 e H5:
576648e32a3d8b82ca71961b7a986505