APOSTILA

DE
IMUNOLOGIA
ESTAGIO OBRIGATORIO
7 PERIODO

Profa: Las de Paula

INTRODUO
A Imunologia o estudo das respostas do organismo que fornecem
imunidade, ou seja, proteo s doenas. Ainda que o sistema imune
seja muito complexo, certos componentes do sistema imune so
facilmente detectados, como por exemplo, os anticorpos.
O sistema imunolgico baseia-se nas relaes Antgeno-Anticorpo.
Antgenos (Ag) so substncias estranhas que induzem uma resposta
imune por causar uma produo de anticorpos e/ou linfcitos
sensibilizados que reagem especificamente com a substncia;
Imungeno.
Anticorpo (Ac) - Protena do soro que foi induzida por e reage
especificamente a uma substncia estranha (antgeno);
Imunoglobulina.
Todos os testes baseados em reaes Ag/Ac ou dependem da
formao de rede ou teremos de encontrar forma de evidenciar a
formao de complexos Ag/Ac. Todos os testes baseados em reaes
Ag/Ac podem ser usados para detectar tanto o Ag ou Ac.

VDRL (Venereal Diseases Research Laboratory)

PRINCPIO DE AO
Metodologia: Reao de floculao.
A combinao de lecitina, colesterol e cardiolipina possui semelhana
imunolgica com antgenos de Treponema pallidum, consistindo em
um antgeno no treponmico.
A interao dos anticorpos da amostra com este antgeno produz
floculao que pode ser detectada ao microscpio ptico.

AMOSTRA
Preparo do Paciente
Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes
mdicas.
Amostras utilizadas
Soro ou lquido cefalorraquidiano (lmpido e isento de fragmentos de
cogulos). No utilizar soros hemolisados ou lipmicos, pois podem
produzir aglutinao inespecfica.

A amostra estvel por 05 dias entre 2 e 8 C. No preciso

inativar o soro. recomendvel jejum de 8 horas antes da coleta de
sangue.
Estabilidade e armazenamento da amostra
A amostra estvel por 05 dias entre 2 e 8 C. No preciso
inativar o soro.

COMPONENTES DO KIT
Nmero 1 - Antgeno para VDRL em suspenso - conservar entre
2 e 8 C. No congelar. Homogeneizar bem antes de usar. Contm:
Cardiolipina 0,44 mol/L, lecitina 3,12 mol/L e colesterol 23,2 mol/L
em tampo fosfato 10 mmol/L pH 6,0.
Preparo do Reagente de Trabalho
O Reagente N 1 pronto para o uso. Agit-lo antes da execuo do
teste.

ESTABILIDADE.

Os reagentes so estveis at a da data de validade impressa no

rtulo quando conservados de acordo com a temperatura
recomendada. Evitar a contaminao do produto durante o uso para
no afetar a sua estabilidade.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

1 - Somente para uso diagnstico in vitro;
2 - O Antgeno (Reagente N 1) e a amostra devem estar
temperatura ambiente no momento do uso;
3 - No congelar o reagente;
4 - No utilizar plasma;
5 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os
critrios de biossegurana de acordo com a legislao vigente.
6 - O reagente no deve entrar em contato com materiais de
borracha.

LIMITAES DO MTODO
Estima-se que 1 a 2% dos pacientes com sfilis secundria
apresentam VDRL negativo ou fracamente positivo quando se utiliza o
soro no diludo. A positivao do exame somente ocorrer nas
diluies maiores - efeito prozona. Recomenda-se, portanto, testar
todas as amostras sem diluir e diludas 1:10 com NaCl 0,85%.
Pode ocorrer resultado falso-positivo em certas patologias como:
tuberculose, mononucleose infecciosa, hansenase, hepatite, doenas

do colgeno (lpus eritematoso, artrite reumatide), doenas autoimunes, malria e cncer.

EQUIPAMENTOS
Tcnica Manual
Condies de Reao

Lmina Escavada
Microscpio
Agitador rotativo
Pipetas para medir amostras e reagentes
Cronmetro

PROCEDIMENTO DO TESTE
Procedimento Manual
Em um poo da placa escavada, pipetar:
Amostra sem diluir.........................50 L
Reagente N 1 ................. 1 gota (20 L)

Em outro poo da placa escavada, pipetar:

Amostra diluda 1:10*.........................50 L
Reagente N 1 ...................... 1 gota (20 L)
* Alm do teste sem diluio realizado tambm um teste com uma
diluio de 1:10 com NaCl 0,85% (para todos os testes), a fim de
evitar o efeito prozona. Vide Limitaes do Processo. (250ul de
salina/25ul soro)

Em seguida agitar manualmente com movimentos circulares ou

em um agitador por 4 minutos a 180 rpm. Em seguida,
examinar no microscpio no aumento de 100 X (ocular de 10x e
objetiva de 10x).

RESULTADOS
Positivo - Reativo: ocorre floculao com formao de grumos de
tamanhos variveis. Suspenso de aspecto heterogneo. Neste caso,
proceder a diluio da amostra e realizar a prova semi-quantitativa.

Negativo - No Reativo: ausncia de floculao, suspenso de

aspecto homogneo.

Positivo

Negativo

SIGNIFICADO CLNICO
O mtodo indicado para teste de triagem. O diagnstico final no
deve ser baseado somente no resultado laboratorial, devendo ser
correlacionado com os sinais e sintomas do paciente.
Pacientes com infeco sifiltica tratada podem apresentar resultados
positivos em ttulos baixos (cicatriz sorolgica).
O VDRL pode ser utilizado para acompanhar a teraputica, pela
rpida resposta representada pela queda de ttulos ou mesmo pela
negativao e modificaes mais lentas ou mesmo inexistentes para
os testes treponmicos.

ASLO (Antiestreptolisina O)
PRINCPIO DE AO
Metodologia: Ltex.
Partculas de ltex revestidas com estreptolisina O purificadas e
estabilizadas mostram ntida aglutinao quando misturadas, em uma
rea do carto-teste, com um soro contendo nveis elevados de
anticorpos antiestreptolisina.

AMOSTRA
Preparo do Paciente
Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes
mdicas.
Amostras utilizadas
Utilizar soro, sem prvia diluio.
Estabilidade e armazenamento da amostra
A temperatura de armazenamento dever ser de 2 a 8 C.

No congelar.
Manter ao abrigo da luz e evitar umidade.

COMPONENTES DO KIT
Nmero 1 - Ltex ASO - conservar entre 2 e 8 C. No congelar.
Contm:
Partculas de Ltex sensibilizadas em suspenso.
Nmero 2 - Controle Positivo - conservar entre 2 e 8 C. Contm:
Soro com concentrao > 200 UI/mL, Azida sdica 15,38 mmol/L.
Nmero 3 - Controle Negativo - conservar entre 2 e 8 C. Contm:
Soro com concentrao inferior a 100 UI/mL, Azida sdica 15,38
mmol/L.
Os controles positivo e negativo foram analisados para deteco de
anticorpos anti HIV e antgeno HBs, com resultados negativos.
Entretanto, para maior segurana, considerar e manusear como
Potencialmente Infectantes.

ESTABILIDADE
Os reagentes so estveis at a da data de validade impressa no
rtulo quando conservados entre 2-8 C. Deixar em temperatura
ambiente antes de utilizar. Homogeneizar bem antes de usar. No
congelar. Evitar a contaminao do produto durante o uso para no
afetar a sua estabilidade.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

1 - Somente para uso diagnstico in vitro;
2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de
resultados exatos;
3 - A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta
de agentes contaminantes;
4 - No congelar os reagentes;
5 - Usar sempre os reagentes do mesmo lote;
6 - No utilizar soro lipmico. No utilizar soro hemolisado.
No utilizar plasma;
7 - Manusear com cuidado os Reagentes N o 2 e 3, pois contm Azida
sdica;
8 - Os controles positivo e negativo so lquidos humanos e foram
analisados para deteco de anticorpos Anti-HIV e Anti-HBs, com
resultados negativos. Entretanto, para maior segurana, considerar e
manusear como Potencialmente Infectantes;
9 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os
critrios de biossegurana de acordo com a legislao vigente.

EQUIPAMENTOS

Tcnica Manual

Lamina ou placa de fundo escuro

Esptulas
Pipetas para medir amostras e reagentes
Cronmetro

PROCEDIMENTO
Procedimento Manual
Em cada crculo da placa colocar:
Crculo N 1
Controle negativo
25L
Controle positivo
---Soro
---BIO - LTEX ASO
25L
(previamente homogeneizado)

Crculo N 2
---25L
---25L25L

Crculo N 3
------25L

Homogeneizar com o auxlio de uma esptula utilizando toda a

extenso de cada crculo da lmina. Logo aps, agitar a lmina
com movimentos circulares por dois minutos. Efetuar a leitura
com uma luz artificial, utilizando um fundo escuro para facilitar
a interpretao do teste. Uma aglutinao clara indica a
presena de Anti-estrepitolisina O numa concentrao igual ou
superior a 200 UI/mL. Neste caso, realizar a prova semi
quantitativa.
PROVA SEMI QUANTITATIVA
1 - Realizar diluies da amostra com salina, a partir da amostra
inicial (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, etc);
2 - Seguir o processo descrito na prova qualitativa para cada uma das
diluies.
Ser considerado como ttulo, a maior diluio do soro que apresentar
aglutinao.

RESULTADOS
POSITIVO: Ntida aglutinao.
NEGATIVO: Ausncia de aglutinao (suspenso homognea).

CLCULOS
Os valores sero expressos em UI/mL.
Amostra
Concentrao UI/mL
Sem diluio.................................200
1:2............................................400

1:4............................................800
1:8............................................1600
O resultado pode ser expresso em ttulo ou em UI/mL.
UI/mL = 200 x ttulo da ltima diluio (n da diluio).
Teste negativo: expressar o resultado como negativo ou menor que
200 UI/mL.
Unidade de Medida: UI/ML
VALORES DE REFERNCIA
At 200 UI/mL
Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada
laboratrio dever criar sua faixa de valores de referncia, de acordo
com a populao atendida.

SIGNIFICADO CLNICO

A Estreptolisina O uma exoenzima imunognica txica produzida

por muitos estreptococos -hemolticos do grupo A. Tendo em conta a
grande quantidade de exoenzimas liberadas in vivo, a determinao
da resposta dos anticorpos frente presena de Estreptolisina O
converteu- se em um procedimento rotineiro para o diagnstico e
tratamento da febre reumtica, glomerulonefrite aguda, escarlatina,
amigdalite, erisipela, sepsis puerperal e outras infeces
estreptoccicas do grupo A.

LIMITAES DO MTODO
No utilizar plasma, soros hemolisados ou lipmicos, pois
podem produzir aglutinao inespecfica.
Ao correlacionar mtodos para determinao da Antiestreptolisina O,
verificar a sensibilidade dos reagentes.
Os resultados obtidos s devem ser comparados quando expressos
em UI/mL.

FATOR REUMATIDE (FR / LTEX)

PRINCPIO DE AO
Metodologia: Ltex.
Quando a suspenso de ltex misturada em uma rea do cartoteste com soro contendo nveis aumentados de fator reumatide,
observa-se uma aglutinao ntida no perodo mximo de minutos. A
aglutinao visvel em amostra com concentrao igual ou superior
a 8 UI/mL, de acordo com as referncias estabelecidas pelos Padres
Internacionais da OMS.

AMOSTRA

Preparo do Paciente
Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes
mdicas.
Amostras utilizadas
Utilizar soro, sem prvia diluio.
Estabilidade e armazenamento da amostra
A temperatura de armazenamento dever ser de 2 a 8 C.
No congelar.
Manter ao abrigo da luz e evitar umidade.
COMPONENTES DO KIT
Nmero 1 - Ltex FR - conservar entre 2 e 8 C. No congelar.
Contm:
Partculas de Ltex sensibilizadas em suspenso.
Nmero 2 - Controle Positivo - conservar entre 2 e 8 C. Contm:
Soro com concentrao igual ou superior a 8 UI/mL, Azida sdica
15,38 mmol/L.
Nmero 3 - Controle Negativo - conservar entre 2 e 8 C. Contm:
Soro com concentrao inferior a 8 UI/mL, Azida sdica 15,38 mmol/L.
Os controles positivo e negativo foram analisados para deteco de
anticorpos anti HIV e antgeno HBs, com resultados negativos.
Entretanto, para maior segurana, considerar e manusear como
Potencialmente Infectantes.

ESTABILIDADE

Os reagentes so estveis at a da data de validade impressa no

rtulo quando conservados de acordo com a temperatura
recomendada. Evitar a contaminao do produto durante o uso para
no afetar a sua estabilidade.
CUIDADOS E PRECAUES
1 - Somente para uso diagnstico in vitro;
2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de
resultados exatos;
3 - A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta
de agentes contaminantes;
4 - No congelar os reagentes;
5 - Usar sempre os reagentes do mesmo lote;
6 - No utilizar soro lipmico. No utilizar soro hemolisado.
No utilizar plasma;
7 - Manusear com cuidado os Reagentes N o 2 e 3, pois contm Azida
sdica;
8 - Os controles positivo e negativo so lquidos humanos e foram
analisados para deteco de anticorpos Anti HIV e AntiHBs, com
resultados negativos. Entretanto, para maior segurana, considerar e
manusear como Potencialmente Infectantes;
9 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os
critrios de biossegurana de acordo com a legislao vigente.

EQUIPAMENTOS
Tcnica Manual
Lamina ou placa de fundo escuro
Esptulas
Pipetas para medir amostras e reagentes
Cronmetro
PROCEDIMENTO
Procedimento Manual
Em cada crculo da placa colocar:
Crculo N 1
Controle negativo
25L
Controle positivo
---Soro
---BIO - LTEX FR
25L
(previamente homogeneizado)

Crculo N 2
Crculo N 3
------25L
------25L
25L25L

Homogeneizar com o auxlio de uma esptula utilizando toda a

extenso de cada crculo da lmina.
Logo aps, agitar a lmina com movimentos circulares por dois
minutos. Efetuar a leitura com uma luz artificial, utilizando um
fundo escuro para facilitar a interpretao do teste. Uma
aglutinao clara indica a presena de Fator Reumatide numa
concentrao igual ou superior a 8 UI/mL. Neste caso, realizar a
prova semi quantitativa.

PROVA SEMI QUANTITATIVA

1 - Realizar diluies da amostra com salina, a partir da amostra
inicial (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, etc);
2 - Seguir o processo descrito na prova qualitativa para cada uma das
diluies.
Ser considerado como ttulo, a maior diluio do soro que apresentar
aglutinao.

RESULTADOS

POSITIVO: Ntida aglutinao.

NEGATIVO: Ausncia de aglutinao (suspenso homognea).
CLCULOS
Os valores sero expressos em UI/mL.
Amostra
Concentrao UI/mL
Sem diluio...................................8
1:2............................................ 16
1:4............................................ 32
1:8............................................ 64

1:16............................................128
O resultado pode ser expresso em ttulo ou em UI/mL.
UI/mL = 8 x ttulo da ltima diluio (n da diluio).
Teste negativo: expressar o resultado como negativo ou menor que 8
UI/mL.
VALOR DE REFERNCIA
At 8 UI/Ml.
Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada
laboratrio dever criar sua faixa de valores de referncia, de acordo
com a populao atendida.

SIGNIFICADO CLNICO

Fator Reumatide refere-se a um grupo de macroglobulinas

(antiglobulinas) que reagem com o fragmento Fc das Imunoglobulinas
IgG. Na artrite reumatide o achado do Fator Reumatide representa
o dado sorolgico mais importante, presente em cerca de 75% dos
pacientes. O seu nvel plasmtico pode estar significativamente
aumentado na velhice, doenas do tecido conjuntivo, hepatopatias
crnicas, sfilis, tuberculose, hansenase, endocardite bacteriana
mononucleose, sarcoidose, calazar, rubola, neoplasias, infestaes
parasitrias, transfuses de sangue, transplante renal, sndrome de
Sjgren.

LIMITAES DO MTODO

No utilizar plasma, soros hemolisados ou lipmicos, pois

podem produzir aglutinao inespecfica.
Ao correlacionar mtodos para determinao do Fator Reumatide,
verificar a sensibilidade dos reagentes.
Os resultados obtidos s devem ser comparados quando expressos
em UI/mL.

PROTENA C REATIVA- PCR

PRINCPIO DE AO
Metodologia: Ltex.
O mtodo fundamenta-se em uma reao de aglutinao de
partculas de ltex recobertas com Gama-globulinaanti-PCR,
especialmente tratadas para evitar aglutinaes inespecficas. A
aglutinao visvel em amostra com concentrao de PCR igual ou
superior a 6,5 mg/L, de acordo com as referncias estabelecidas pelos
Padres Internacionais da OMS.

AMOSTRA
Preparo do Paciente

Colher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes

mdicas.
Amostras utilizadas
Utilizar soro, sem prvia diluio.
Estabilidade e armazenamento da amostra
O analito estvel por 2 dias entre 2 e 8 C.

COMPONENTES DO KIT
Nmero 1 - Ltex PCR - conservar entre 2 e 8 C. No congelar.
Contm: partculas de ltex sensibilizadas em suspenso.
Nmero 2 - Controle Positivo - Conservar entre 2 e 8 C. Contm:
soro com concentrao igual ou superior a 6,5 mg/L, Azida sdica
15,38 mmol/L.
Nmero 3 - Controle Negativo - Conservar entre 2 e 8 C. Contm:
soro com concentrao inferior a 6,5 mg/L, Azida sdica 15,38
mmol/L.
Os controles positivo e negativo foram analisados para deteco de
anticorpos anti HIV e antgeno HBs, com resultados negativos.
Entretanto, para maior segurana, considerar e manusear como
Potencialmente Infectantes.

ESTABILIDADE

Os reagentes so estveis at a da data de validade impressa no

rtulo quando conservados de acordo com a temperatura
recomendada. Evitar a contaminao do produto durante o uso para
no afetar a sua estabilidade.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

1 - Somente para uso diagnstico in vitro;

2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de
resultados exatos;
3 - A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta
de agentes contaminantes;
4 - No congelar os reagentes;
5 - Usar sempre os reagentes do mesmo lote;
6 - No utilizar soro lipmico. No utilizar soro hemolisado.
No utilizar plasma;
7 - Manusear com cuidado os Reagentes N o 2 e 3, pois contm Azida
sdica;
8 - Os controles positivo e negativo so lquidos humanos e foram
analisados para deteco de anticorpos Anti HIV e AntiHBs, com
resultados negativos. Entretanto, para maior segurana , considerar e
manusear como Potencialmente Infectantes;
9 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os
critrios de biossegurana de acordo com a legislao vigente.

EQUIPAMENTOS

Tcnica Manual
Lmina ou placa de fundo escuro
Esptulas
Pipetas para medir amostras e reagentes
Cronmetro

PROCEDIMENTO

Procedimento Manual
Em cada crculo da placa colocar:
Crculo N 1
Crculo N 3
Controle negativo
--Controle positivo
--Soro
25L
BIO - LTEX PCR
25L
(previamente homogeneizado)

Crculo N 2

25L

---

---

25L
---

--25L25L

Homogeneizar com o auxlio de uma esptula utilizando toda a

extenso de cada crculo da lmina. Logo aps, agitar a lmina
com movimentos circulares por dois minutos. Efetuar a leitura
com uma luz artificial, utilizando um fundo escuro para facilitar
a interpretao do teste.
Uma aglutinao clara indica a presena de Protena C Reativa
numa concentrao igual ou superior a 6,5 mg/L. Neste caso,
realizar a prova semi quantitativa.

PROVA SEMI QUANTITATIVA

1 - Realizar diluies da amostra com salina, a partir da amostra
inicial (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 etc);
2 - Seguir o processo descrito na prova qualitativa para cada uma das
diluies.
Ser considerado como ttulo a maior diluio do soro que apresentar
aglutinao.

RESULTADOS

POSITIVO: Ntida aglutinao.

NEGATIVO: Ausncia de aglutinao (suspenso homognea).

CLCULOS
Os valores sero expressos em mg/L.
Amostra
Concentrao mg/L
Sem diluio............................6,5

1:2.......................................13
1:4.......................................26
1:8.......................................52
1:16.....................................104
1:32.....................................208
O resultado pode ser expresso em ttulo ou em mg/L.
mg/L = 6,5 x ttulo da ltima diluio (n da diluio).
Teste negativo: expressar o resultado como negativo ou menor que
6,5 mg/L.
Unidade de Medida: mg/L

VALORES DE REFERNCIA

At 6,5 mg/L
Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada
laboratrio dever criar sua faixa de valores de referncia, de acordo
com a populao atendida.

SIGNIFICADO CLNICO

A Protena C Reativa um til indicador de processo inflamatrio em

atividade, quer seja de origem infecciosa (pneumonia, tuberculose)
ou no infecciosa (febre reumtica em atividade, artrite reumatide,
lpus eritematoso). Est presente tambm, em vrias outras
condies patolgicas como no infarto agudo do miocrdio, doenas
neoplsicas, trauma intenso, viroses, queimaduras. A determinao
de sua concentrao plasmtica constitui um teste eficaz no
acompanhamento da teraputica utilizada e prognstico das
inflamaes.

LIMITAES DO MTODO

No utilizar plasma, soros hemolisados ou lipmicos, pois

podem produzir aglutinao inespecfica.
Ao correlacionar mtodos para determinao da Protena C Reativa,
verificar a sensibilidade dos reagentes. Os resultados obtidos s
devem ser comparados quando expressos em mg/L.

BETA-hCG Imunocromatografia
PRINCPIO DO TESTE

O teste -hCG um teste imunocromatogrfico rpido, para deteco

qualitativa de Gonadotrofina Corinica Humana (-hCG) em
amostras de urina ou soro humano, indicado para o diagnstico
precoce da gravidez.

AMOSTRA

Preparo do Paciente

Pode ser utilizada uma amostra colhida a qualquer hora do dia.

Entretanto prefervel usar a primeira amostra da manh, que
contm concentrao mais elevada de hCG. Usar recipientes limpos e
secos, que no contenham traos de detergente ou sabo.
Centrifugar ou filtrar toda urina turva.
Amostras utilizadas
Urina e/ou soro.
O teste deve ser executado o mais rpido possvel, de preferncia nas
primeiras 24 horas aps a coleta. Para anlises tardias, armazenar a
amostra a 2-8C por no mximo 72 horas.
Estabilidade e armazenamento da amostra
O hCG estvel na urina por 2 dias entre 2-8 C ou at um ms na
amostra congelada.

COMPONENTES DO KIT
Tiras reagentes

MATERIAIS NECESSRIOS E NO FORNECIDOS

Recipiente para coleta da amostra
cronmetro

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

- No comer ou fumar durante a manipulao das amostras.

- Calar luvas de proteo durante a manipulao das amostras.
- Lavar as mos aps o procedimento.
- Evitar respingos ou formao de aerossol.
- Descontaminar e descartar todas as amostras, componentes do kit
de reao e materiais potencialmente contaminados, como se fossem
lixo contaminado, em um recipiente apropriado.
- No usar o kit de testes se a embalagem estiver danificada ou o selo
violado.
- Todas as amostras devem ser tratadas como potencialmente
contaminadas.
- Somente abrir a embalagem da tira reagente na hora de sua
utilizao.
- Executar o teste imediatamente aps retirar a tira reagente da bolsa
de alumnio.
- No reutilizar a tira reagente.
- Se for utilizar amostras refrigeradas ou congeladas, deixar que as
amostras atinjam a temperatura ambiente antes de iniciar os
procedimentos.

- Recomenda-se deixar as amostras a temperatura ambiente por 20 a

30 minutos antes de realizar o teste. Homogeneizar a amostra.
- No misturar os componentes do kit, no utilizar nmeros de lotes
diferentes.
- O teste foi desenvolvido para ser conservado a uma temperatura
entre 15 -30oC (no recomendado o armazenamento deste
produto em refrigerador).

LIMITAES DA METODOLOGIA
1- Nos resultados duvidosos deve-se repetir o teste com nova
amostra de urina, colhida 3 a 5 dias aps a coleta anterior.
2- Em caso de gravidez extra-uterina, toxemia, morte fetal ou ameaa
de aborto, a excreo de hCG frequentemente diminuda. Essas
condies podem levar a um resultado falso negativo.
3- Na gravidez precoce com muito baixa concentrao de -hCG o
resultado pode ser negativo. Neste caso, o teste deve ser repetido em
uma nova amostra colhida aps 48 horas.
4- Como nveis elevados de -hCG so tambm encontrados em
doenas trofoblsticas gestacional e no-gestacional (mola
hidatiforme, coriocarcinoma e neoplasma no trofoblstico), o
diagnstico de gravidez deve ser confirmado aps afastar estas
patologias.
5- Nveis elevados de -hCG podem permanecer detectveis por
vrias semanas aps parto normal, cesrea e aborto espontneo ou
teraputico.
6- Amostras de urina que no sejam a primeira da manh podem no
conter uma concentrao suficiente de -hCG para positivar o teste.
Desta forma, um resultado negativo, onde ainda suspeita-se do
diagnstico da gravidez, deve ser confirmado com uma nova amostra
da primeira urina da manh.
7- Se a amostra de urina estiver diluda devido ao uso de diurticos
ou ingesto excessiva de gua, os nveis de hCG decrescem
artificialmente e podem no ser detectados. Se a gravidez ainda
suspeita, o teste deve ser repetido com a primeira urina alguns dias
depois.
8- Como em qualquer procedimento diagnstico, o resultado deste
teste deve ser sempre interpretado com outras informaes clnicas
disponveis.
9- Urina de mulheres em tratamento com certos medicamentos
podem dar falsos resultados positivos ou negativos.

PROCEDIMENTO DO TESTE

Amostra de urina:
1 Coletar a urina em qualquer recipiente limpo e seco.
2 Remover a tira reagente do envelope tocando apenas na parte
escrita hCG;

3 Colocar cuidadosamente a tira no coletor de plstico contendo a

urina. Segurar a tira na posio vertical durante 10-20
segundos.
4 Respeitar o limite mximo da tira indicado pela seta.
5 Remover a tira reagente de dentro da amostra e coloc-la em
uma superfcie plana e seca. Aguardar o resultado.
6 Interpretar o resultado do teste em at 5 minutos. No
interpretar o resultado aps 5 minutos. Qualquer reao que
ocorra na tira aps 5 minutos no deve ser considerada.

Amostra de soro:

1 Coletar e preparar a amostra seguindo as normas de

Biossegurana locais.
2 Separar uma alquota do soro (1ml) e transferir para um tubo de
ensaio limpo e seco.
3 Colocar cuidadosamente a tira na amostra. Segurar a tira na
posio vertical durante 10-20 segundos.
4 Respeitar o limite mximo da tira indicado pela seta.
5 Remover a tira reagente de dentro da amostra e coloc-la em
uma superfcie plana e seca. Aguardar o resultado.
6 Interpretar o resultado do teste em at 5 minutos. No
interpretar o resultado aps 5 minutos. Qualquer reao que
ocorra na tira aps 5 minutos no deve ser considerada.

RESULTADOS
NEGATIVO: quando aparecer somente uma linha colorida na janela
de resultados: a Linha Controle C. Como indicado na ilustrao a
seguir, esta linha deve aparecer sempre.

POSITIVO: Quando aparecer duas linhas coloridas na janela de

resultados: a linha Controle C e a Linha Teste T como indicado na
ilustrao a seguir.

INVLIDO: Quando nenhuma linha aparecer na janela de resultados

dentro de 5 minutos; ou quando a Linha Controle C no aparecer na
janela de resultados dentro de 5 minutos (conforme ilustrado abaixo).

Neste caso, considere o teste invlido. Repetir o teste com uma nova
tira.

INTERFERNCIAS
As seguintes substncias podem
resultados:
Acetaminofeno 20mg/dL
cido acetilsaliclico 20mg/ dL
cido ascrbico 20mg/ dL
Atropina 20mg/ dL
Bilirrubina (no soro) 40mg/ dL
Triglicrides (no soro) 1200mg/ dL
Cafena 20mg/ dL
cido Gentsico 20mg/ dL
Glicose 2g/ dL
Hemoglobina 1mg/ dL
Bilirrubina 2mg/ dL

provocar

interferncias

nos

SIGNIFICADO CLNICO
A gonadotrofina corinica humana (hCG) um hormnio glicoprotico
produzido pela placenta durante a gravidez.
Homens sadios e mulheres sadias no-grvidas no possuem nveis
de hCG detectveis.
Normalmente, encontra-se presente no soro e urina de mulheres
grvidas aps o stimo dia da concepo.
O hCG secretado 6 a 8 dias aps a concepo, aumentando
rapidamente at um pico de 50.000 a 200.000 mUI/mL na 6 a 8
semana. A partir de ento, sua concentrao comea a cair, atingindo
aps a 20 semana, um plateau de 5.000 a 20.000 mUI/mL para o
restante da gravidez.
Aps o parto, o nvel de hCG cai rapidamente e geralmente volta ao
normal dentro de alguns dias.
Alm da gravidez, valores altos de hCG podem ser encontrados em
enfermidades trofoblsticas de origem gestacional e no gestacional
(Mola Hidatiforme). Essas situaes devem ser identificadas antes de
se fazer o diagnstico de uma gravidez.

FENOTIPAGEM ABO
PRINCPIO DO TESTE

Detectar a presena ou a ausncia dos antgenos A e B nas hemcias.

A prova direta se baseia na aglutinao das hemcias da amostra em
teste em presena de anti-soros conhecidos contendo anticorpos AntiA e Anti-B.

AMOSTRA

No necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para

a coleta das amostras de sangue. Para melhores resultados utilizar,
de preferncia, amostras recentemente colhidas ou em conformidade
com os critrios locais de aceitao de amostras. As amostras de
sangue devem ser anticoaguladas com Citrato EDTA ou CPD-A.

COMPONENTES DO KIT
Conservar entre 2-8C.
Anticorpos monoclonais, prontos pra uso, em frascos de 10ml
- Soro anti-A
- Soro anti-B

MATERIAIS

Tubos para suspenso

Suporte para tubos
Pipetas
Centrifuga de tubos

ESTABILIDADE
Os reativos so estveis at o vencimento da data de validade
impressa no rtulo do produto e na caixa quando conservados entre
2-8C. Manter os frascos bem vedados na temperatura recomendada
e evitar a contaminao durante o uso.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

- Os reagentes no podem ser congelados, pois o congelamento

promove a liberao do anticorpo.
- No trocar as tampas dos frascos.
- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos
reagentes e amostra biolgica.
- Recomendamos o uso das Boas Prticas em Laboratrio Clnico para
a execuo do teste.
- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras
devem ser manuseadas como materiais potencialmente infectantes.
- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues
normativas locais, estaduais e federais de preservao do meio
ambiente.
- Recomendamos o uso de equipamentos de proteo individual (EPI)
como avental, culos de segurana, luvas descartveis e outros que
se fizerem necessrios para a realizao do teste.
- No deve ser utilizada a boca para pipetagem de reagentes,
amostra ou qualquer outra substncia.

LIMITAES

Reaes fracas podem ocorrer quando: recm-nascidos

que no tenham antgenos A ou B bem expressos; nas
leucemias e outras doenas malignas; pacientes
recentemente transfundidos e deteco fraca das
variantes A ou B que requerem leitura microscpica.
Na presena de crioaglutininas, lavar os eritrcitos de 4 a
6 vezes com soluo fisiolgica a 0,85% aquecida a 37 oC,
para permanecer somente os caracteres ABO.
O antgeno B pode ser ocasionalmente adquirido em
pacientes do grupo A, devido deacetilao do antgeno
A por enzimas bacterianas, particularmente associadas
com infeco intestinal. Estes pacientes sero AB com a
presena de anti-B no sangue. A reduo do pH do sangue
para 6.0 reduzir ou eliminar o antgeno B adquirido.
Em algumas patologias comum a formao de
aglutinao das hemcias observadas microscopia. Esta
anormalidade causada por alteraes na superfcie das
clulas. Este fenmeno habitualmente encontrado em
hiperproteinemias
tais
como
Mieloma
Mltiplo,
Macroglobulenemia de Waldenstrom, Sndrome de
Hiperviscosidade e Cirrose.
Resultados falso-positivo ou reaes fracamente positivas
podem ocorrer com amostras de sangue de subgrupos A e
B ou aps estocagem prolongada.
Variveis relativas ao procedimento tcnico, tais como:
tcnica;
suspenses
muito
concentradas
ou
diludas;
centrifugaes
ou
incubaes
inadequadas; amostra e salina contaminadas ou
vidraria suja podem causar falsas reaes positivas
ou negativas.

PROCEDIMENTO DO TESTE

PREPARAO DAS AMOSTRAS DE SANGUE

Preparar a suspenso de hemcias a 5% em suspenso salina
isotnica com a seguinte tcnica:
1 Dispensar 1 mL de salina isotnica no tubo de suspenso.
2 Pipetar 50 L de concentrado de hemcias e homogeneizar

PROCEDIMENTOS

Teste em tubo
1 Identificar 2 tubos: um com o A e outro com o B (alm do
nmero do paciente).
2 Pipetar 50 L (1 gota) da suspenso de hemcias a 5 % em
cada tubo.

3 Pipetar 50 L (1 gota) do Anti-A e 50 L (1 gota) do Anti-B nos

respectivos tubos.
4 Homogeneizar.
5 Centrifugar por 1 minuto a 1000 rpm ou 20 segundos a 3400
rpm.
6 Ressuspender suavemente as suspenses de hemcias e
observar a aglutinao macroscpica.

RESULTADOS:
a) Princpio
Positivo: excluindo-se as limitaes do teste (vide a seguir), a
aglutinao dos eritrcitos pelo reagente indica a presena de
antgeno correspondente.
Negativo: excluindo-se todas as limitaes do teste, a ausncia de
aglutinao dos eritrcitos pelo reagente indica a ausncia de
antgeno correspondente.
b) Reaes para grupos ABO
Anti- A

Anti- B

+
negativo
+
negativo

negativo
+
+
negativo

Grupo
Sanguneo
A
B
AB
O

Reaes fracas podem indicar a presena de subgrupos de A (ABO1)

ou B (ABO2), o que requer procedimentos adicionais. Para uma
interpretao correta, deve-se fazer uma fenotipagem completa
(prova direta com anti-A, anti-B e prova reversa com hemcias A 1, A2,
B e O).

TIPAGEM REVERSA
Enquanto a tipagem direta do grupo sanguneo ABO (descrito acima)
realizado com hemcias do paciente suspensas em soluo
fisiolgica contra soros comerciais (anti-A, anti-B e anti-AB); a
TIPAGEM REVERSA utiliza o soro ou plasma do paciente contra
hemcias fenotipadas A1 e B (comerciais). Alm destas duas
hemcias A1 e B, o servio poder utilizar hemcias A2 e O
(comerciais).

AMOSTRA

No necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para

a coleta das amostras de sangue. Para melhores resultados utilizar,
de preferncia, amostras recentemente colhidas ou em conformidade
com os critrios locais de aceitao de amostras. As amostras de
sangue podem ser colhidas com anticoagulantes (Citrato EDTA ou
CPD-A) ou sem anticoagulante.

COMPONENTES DO KIT
Conservar entre 2-8C.
Hemcias fenotipadas, prontas para uso, em frascos de 10ml
- Hemcias A1
- Hemcias B

MATERIAIS

Tubos para suspenso

Suporte para tubos
Pipetas
Centrifuga de tubos

ESTABILIDADE
Os reativos so estveis at o vencimento da data de validade
impressa no rtulo do produto e na caixa quando conservados entre
2-8C. Manter os frascos bem vedados na temperatura recomendada
e evitar a contaminao durante o uso.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

- Os reagentes no podem ser congelados, pois o congelamento

promove a lise das hemcias.
- No trocar as tampas dos frascos.
- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos
reagentes e amostra biolgica.
- Recomendamos o uso das Boas Prticas em Laboratrio Clnico para
a execuo do teste.
- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras
devem ser manuseadas como materiais potencialmente infectantes.
- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues
normativas locais, estaduais e federais de preservao do meio
ambiente.
- Recomendamos o uso de equipamentos de proteo individual (EPI)
como avental, culos de segurana, luvas descartveis e outros que
se fizerem necessrios para a realizao do teste.
- No deve ser utilizada a boca para pipetagem de reagentes,
amostra ou qualquer outra substncia.

PROCEDIMENTOS
Teste em tubo

1 Identificar 2 tubos: um com o A1 e outro com o B (alm do

nmero do paciente).
2 Pipetar 100 L do plasma do paciente em cada tubo.
3 Pipetar 50 L (1 gota) da hemcia A1 e 50 L (1 gota) da
hemcia B nos respectivos tubos.
4 Homogeneizar.
5 Centrifugar por 1 minuto a 1000 rpm ou 20 segundos a 3400
rpm.
6 Ressuspender suavemente as suspenses de hemcias e
observar a aglutinao macroscpica.

RESULTADOS:

a) Princpio
Positivo- presena de aglutinao
Negativo- ausncia de aglutinao
A1

negativo
+
+
negativo

+
negativo
+
negativo

Grupo
Sanguneo
A
B
O
AB

FENOTIPAGEM RhD
PRINCPIO DO TESTE
A fenotipagemRhD se baseia na aglutinao das hemcias da
amostra em teste em presena de anti-soroanti-D

AMOSTRA

No necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para

a coleta das amostras de sangue. Para melhores resultados utilizar,
de preferncia, amostras recentemente colhidas ou em conformidade
com os critrios locais de aceitao de amostras. As amostras de
sangue devem ser anticoaguladas com Citrato EDTA ou CPD-A.

COMPONENTES DO KIT
Conservar entre 2-8C.
Anticorpos monoclonais, prontos pra uso, em frascos de 10ml
- Soro anti-D
- Soro controle Rh

MATERIAIS

Tubos para suspenso

Suporte para tubos
Pipetas

Centrifuga de tubos

ESTABILIDADE
Os reativos so estveis at o vencimento da data de validade
impressa no rtulo do produto e na caixa quando conservados entre
2-8C. Manter os frascos bem vedados na temperatura recomendada
e evitar a contaminao durante o uso.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

- Os reagentes no podem ser congelados, pois o congelamento

promove a liberao do anticorpo.
- No trocar as tampas dos frascos.
- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos
reagentes e amostra biolgica.
- Recomendamos o uso das Boas Prticas em Laboratrio Clnico para
a execuo do teste.
- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras
devem ser manuseadas como materiais potencialmente infectantes.
- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues
normativas locais, estaduais e federais de preservao do meio
ambiente.
- Recomendamos o uso de equipamentos de proteo individual (EPI)
como avental, culos de segurana, luvas descartveis e outros que
se fizerem necessrios para a realizao do teste.
- No deve ser utilizada a boca para pipetagem de reagentes,
amostra ou qualquer outra substncia.

PROCEDIMENTOS
Teste em tubo
1 Identificar 2 tubos: 1 para o anti-soroanti-D e 1 para o soro
controle-Rh e com o nmero do paciente;
2 Adicione 1 gota da suspenso de hemcias a 5% da amostra a
cada um dos tubos;
3 Coloque 1 gota do anti-soroanti-D no tubo D e 1 gota do soro
controle Rh no tubo Rh e homogeneze;
4 Centrifugue os tubos por 1 minuto a 1000 rpm ou 20 segundos
a 3400 rpm.
5 Agitar suavemente os tubos para pesquisar ou no a presena
de aglutinao.
Observao: Se houver aglutinao no controle Rh o resultado
da fenotipagem estar INVLIDO. A reao com controle Rh
deve ser sempre NEGATIVA.

RESULTADOS

Anti-D

Controle Rh

Interpretao

+ ou -

Resultado invlido

negativo

RhD Positivo

negativo

negativo

Determinar D fraco

DETERMINAO DO D FRACO
PRINCPIO DO TESTE

O antgeno D fraco determinado atravs do teste indireto da

antiglobulina humana (AGH). O teste indireto da AGH para a
determinao do antgeno D fraco se baseia na aglutinao de
hemcias sensibilizadas com anticorpos anti-D, em presena de soro
antiglobulina humano.

AMOSTRA

No necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para

a coleta das amostras de sangue. Para melhores resultados utilizar,
de preferncia, amostras recentemente colhidas ou em conformidade
com os critrios locais de aceitao de amostras. As amostras de
sangue devem ser anticoaguladas com Citrato EDTA ou CPD-A.

COMPONENTES DO KIT
Conservar entre 2-8C.
- Soro anti-IgG (soro de Coombs)
O produto fornecido em frascos de 10 ml acompanhados de contagotas. Cada gota equivale a 50l.

MATERIAIS

Tubos para suspenso

Suporte para tubos
Pipetas
Centrifuga de tubos

ESTABILIDADE
Os reativos so estveis at o vencimento da data de validade
impressa no rtulo do produto e na caixa quando conservados entre
2-8C. Manter os frascos bem vedados na temperatura recomendada
e evitar a contaminao durante o uso.

CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS

- Os reagentes no podem ser congelados, pois o congelamento

promove a liberao do anticorpo.
- No trocar as tampas dos frascos.

- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos

reagentes e amostra biolgica.
- Recomendamos o uso das Boas Prticas em Laboratrio Clnico para
a execuo do teste.
- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras
devem ser manuseadas como materiais potencialmente infectantes.
- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues
normativas locais, estaduais e federais de preservao do meio
ambiente.
- Recomendamos o uso de equipamentos de proteo individual (EPI)
como avental, culos de segurana, luvas descartveis e outros que
se fizerem necessrios para a realizao do teste.
- No deve ser utilizada a boca para pipetagem de reagentes,
amostra ou qualquer outra substncia.

PROCEDIMENTO DO TESTE
1 Colocar em um tubo de ensaio uma gota de reagente anti-D e
identific-lo. Em um segundo tubo, colocar uma gota de controle
Rh como controle negativo.
2 A cada tubo acrescentar uma gota de suspenso de hemcias a
5% previamente preparada em soluo fisiolgica. Misturar bem.
3 Incubar os dois tubos a 37 C durante 15 minutos.
4 Centrifugar a 3.400 r.p.m. por 15 segundos ou a 1.000 r.p.m. por
um minuto.
5 Agitar suavemente os dois tubos para pesquisar ou no a presena
ou no de aglutinao.
6 Lavar as hemcias dos dois tubos por trs vezes com soluo
fisiolgica. Aps a ltima lavagem, desprezar o sobrenadante,
secando as bordas do tubo para retirar toda soluo fisiolgica.
7 A cada tubo adicionar duas gotas de Soro Anti-IgG (SORO DE
COOMBS). Misturar bem.
8 Centrifugar a 3.400 r.p.m. por 15 segundos ou a 1.000 r.p.m. por
um minuto.
9 Agitar suavemente os tubos para pesquisar ou no a presena de
aglutinao.

RESULTADOS:

- Se no houver aglutinao em nenhum dos tubos, o sangue deve

ser classificado como Rh negativo.
- Se houver aglutinao apenas no tubo que recebeu o reagente AntiD, o sangue portador do Fator Du e deve ser considerado Rh
positivo.
- Se houver aglutinao em ambos os tubos, a determinao do Fator
Du fica prejudicada e portanto, estaremos diante de hemcias j
sensibilizadas por algum anticorpo. Se o sangue for de um doador, o
mesmo no poder ser usado para fins transfusionais.
- Se no ocorrer aglutinao no tubo anti-D e se o controle Rh estiver
negativo, preciso validar esse resultado com o controle de Coombs,

para garantir que o anti-soro AGH est funcionando e o teste foi bem
realizado.

VALIDAO DOS RESULTADOS COM CONTROLE DE

COOMBS
1 Adicione uma gota de reagente controle de Coombs aos tubos
anti-D com resultado negativo com anti-soro AGH;
2 Homogeneze e centrifugue os tubos de reao;
3 Leia e interprete os resultados

RESULTADOS
Anti- D

Controle Rh

Controle de
Coombs

Interpretao

+ ou
negativo

No realizado

Resultado invlido

negativo

No realizado

Rh positivo (D
fraco)

negativo

negativo

Rh negativo

negativo

negativo

negativo

Resultado invlido

COOMBS INDIRETO
PRINCPIO DO TESTE

A prova de Coombs indireto atualmente chamada de pesquisa de

anticorpos irregulares (PAI). Esta prova avalia a presena de
anticorpos irregulares circulantes no soro de doadores de sangue,
receptores, gestantes, pacientes com suspeita de anemia hemoltica
por presena de anticorpos, entre outros.
O teste antiglobulina humano baseia-se na aglutinao de hemcias
sensibilizadas previamente com anticorpos humanos ou fraes do
complemento atravs do anti-soro AGH (SORO DE COOMBS).

AMOSTRA

No necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para

a coleta das amostras de sangue. Para melhores resultados utilizar,
de preferncia, amostras recentemente colhidas ou em conformidade

com os critrios locais de aceitao de amostras. As amostras de

sangue podem ser colhidas com ou sem a adio de anticoagulantes.

COMPONENTES DO KIT
Conservar entre 2-8C.
- Soro anti-IgG (soro de Coombs)
O produto fornecido em frascos de 10 ml acompanhados de contagotas. Cada gota equivale a 50l.

MATERIAIS
-

Tubos de vidro
Pipetas Pasteur
Banho-Maria a 37C
Centrfuga
Salina Isotnica.

PROCEDIMENTO DO TESTE
Este teste utilizado na pesquisa de anticorpos bloqueadores
(incompletos), os quais se fixam as hemcias in vitro, mas no as
aglutinam. Para que a reao seja observada necessrio a adio do
Soro Anti-IgG (SORO DE COOMBS) ao teste.
O teste de Coombs Indireto realizado em pesquisas de anticorpos
bloqueadores, pesquisa de antgenos (usando o soro classificador
apropriado) e provas de compatibilidade, desde que tais reaes no
dependam do complemento para sua deteco.
1 Colocar em tubo de ensaio uma gota de suspenso de hemcias
a 5% escolhidas para o teste (geralmente O positivo),
previamente preparadas em soluo fisiolgica.
2 Adicionar duas gotas de soro a ser utilizado no teste.
3 Acrescentar 2 gotas de albumina bovina a 22%.
4 Incubar o tubo em Banho-Maria durante 15-30 minutos a 37 C.
5 Preparar tambm os controles positivo e negativo**
6 Lavar as hemcias do tubo por trs vezes em soluo
fisiolgica, secando as bordas do tubo a ltima lavagem para
retirar toda soluo.
7 Acrescentar duas gotas de Soro Anti-IgG (SORO DE COOMBS).
Misturar bem.
8 Centrifugar a 3.400 r.p.m. por 15 segundos ou a 1.000 r.p.m.
por 1 minuto.
9 Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presena ou no de
aglutinao.
**Controle positivo e controle negativo para o teste de
Coombs Indireto
1 Na execuo do teste de Coombs Indireto de primordial
importncia realizar em paralelo os controles Positivo e
Negativo.

2 Colocar em 2 tubos de ensaio uma gota de suspenso a 5% de

hemcias O Rh Positivo, previamente preparadas em soluo
fisiolgica. Identific-los.
3 Adicionar ao tubo Controle Negativo uma gota de soluo
fisiolgica e ao Controle Positivo uma gota de reagente Anti-D.
4 Executar o mesmo procedimento tcnico descrito para o teste
de Coombs Indireto a partir do item n 3.

RESULTADOS
Positivo (presena de aglutinao): Presena de anticorpos livres no
soro do paciente, os quais correspondem a um ou mais antgenos
presentes nas hemcias usadas no teste.

LIMITAES

I
Resultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer:
1 Quando as hemcias no forem apropriadamente lavadas ou
globulinas humanas estiverem presentes na vidraria, resultando
numa neutralizao das antiglobulinas humanas.
2 Quando os anticorpos se eluem das hemcias durante
incubao inadequada, no permitindo uma apropriada
sensibilizao dos glbulos.
3 Quando hemcias e/ou reagente no so adequadamente
conservados na temperatura indicada, perdendo sua
reatividade.
4 Quando o Soro Anti-IgG (SORO DE COOMBS) foi omitido durante
o teste
II
Resultados FALSO-POSITIVO podem ocorrer:
1 Quando hemcias do teste de Coombs Direto Positivo so
usados durante o procedimento tcnico do teste de Coombs
Indireto.
2 Quando so utilizadas Amostras de sangue contaminado.
3 Quando foi realizada uma centrifugao excessiva.
4 Quando o soro, as hemcias e Soro anti-IgG (SORO DE
COOMBS) estiverem excessivamente frios, detectando a
presena de aglutininas frias.

COOMBS DIRETO
PRINCPIO DO MTODO:

Este teste empregado na pesquisa de anticorpos (gamaglobulinas)

j fixados s hemcias, como ocorre na Doena Hemoltica do RecmNascido, Anemia Hemoltica Adquirida e em pacientes que tenham
recebido transfuses incompatveis.

PROCEDIMENTO:

1 Colocar em um tubo de hemlise uma gota da suspenso de

hemcias do paciente a 5%, previamente preparadas em
soluo fisiolgica ou no prprio soro.
2 Lavar as hemcias do tubo por trs vezes com soluo
fisiolgica. Desprezar o sobrenadante, secando as bordas do
tubo, na ltima lavagem para retirar toda soluo.
3 Acrescentar duas gotas do Soro Anti-IgG (Soro de Coombs).
Misturar bem.
4 Centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos ou a 1000 rpm por 1
minuto.
5 Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presena ou no de
aglutinao.
RESULTADOS:
Positivo: presena de aglutinao
Negativo: ausncia de aglutinao

Sorologia para Dengue

O teste ELISA Panbio de captura para IgMAnti-Dengue destina-se
deteco qualitativa de anticorpos IgM contra dengue, como auxiliar
no diagnstico clinico laboratorial de pacientes com sintomas clnicos
compatveis com a febre da dengue.

PRINCPIO DE AO
Metodologia: Ensaio imunoenzimtico
Quando presentes, os anticorpos sricos da classe IgM se combinam
com anticorpos IgM ligados superfcie de poliestireno dos
micropoos das tiras do teste.
Uma mistura do concentrado de antgenos 1 a 4 do vrus da Dengue
diludo com o diluente do antgeno para se obter o volume de
trabalho correto (os antgenos so produzidos usando um sistema de
expresso da clula do inseto e imunopurificao por anticorpo
monoclonal (MAb) especfico). Adiciona-se ao antgeno diludo um
igual volume do anticorpo monoclonal conjugado HRP (enzima), o
que permitir a formao de complexos antgenos-MAb. Aps a
lavagem da placa para remoo do soro residual, adiciona-se placa
o complexo antgeno-MAb.
Aps incubao, os micropoos so lavados e adiciona-se um sistema
de substrato incolor (tetrametilbenzidina/perxido de hidrogniocromgeno TMB). O substrato hidrolisado pela enzima (HRP), e o
cromgeno adquire cor azul. O desenvolvimento de cor indicativo
da presena de anticorpos IgMAnti-Dengue na amostra sob teste.