Quim. Nova, Vol. 33, No.

6, 1285-1290, 2010

Sabine Neusatz Guilhen, Maria Aparecida Faustino Pires e Elizabeth Sonoda Keiko Dantas*
Centro de Qumica e Meio Ambiente, Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares, Universidade de So Paulo, Av. Lineu Prestes,
2242, 05508-000 So Paulo - SP, Brasil
Fernanda Villibor Xavier
Fundao de Medicina Tropical do Tocantins, Av. Dionsio Farias, 838, 77814-350 Araguana TO, Brasil

Artigo

VALIDAO DE METODOLOGIA ANALTICA PARA DETERMINAO DE MERCRIO TOTAL EM

AMOSTRAS DE URINA POR ESPECTROMETRIA DE ABSORO ATMICA COM GERAO DE VAPOR FRIO
(CV-AAS). ESTUDO DE CASO

Recebido em 31/8/09; aceito em 1/2/10; publicado na web em 3/5/10

VALIDATION OF AN ANALYTICAL METHOD FOR THE DETERMINATION OF TOTAL MERCURY IN URINE SAMPLES
USING COLD VAPOR ATOMIC ABSORPTION SPECTROMETRY (CV-AAS). CASE STUDY. Mercury is a toxic metal used
in a variety of substances over the course history. One of its more dubious uses is in dental amalgam restorations. It is possible to
measure very small concentrations of this metal in the urine of exposed subjects by the cold vapor atomic absorption technique. The
present work features the validation as an essential tool to confirm the suitability of the analytical method chosen to accomplish such
determination. An initial analysis will be carried out in order to evaluate the environmental and occupational levels of exposure to
mercury in 39 members of the auxiliary dental staff at public consulting rooms in the city of Araguana (TO).
Keywords: validation; mercury amalgam; CV-AAS.

INTRODUO
O mercrio um metal txico empregado em uma variedade de
produtos e processos. Ocorre naturalmente no ambiente e existe sob
as formas metlica ou elementar, inorgnica e orgnica. O mercrio
elementar um metal lquido temperatura ambiente, inodoro, de cor
prateada e aparncia brilhante. Com a exceo dos gases nobres, o
nico elemento cujo vapor monoatmico temperatura ambiente.1
O vapor de mercrio facilmente absorvido pelo corpo devido
a sua lipossolubilidade, mas seu tempo de vida bastante limitado
por ser rapidamente oxidado de mercrio elementar (Hg0) a mercrio
mercrico (Hg2+). O on Hg2+ liga-se a grupamentos sulfidrila (-SH)
e seleno-hidrila (-SeH) de protenas e enzimas. Alguns complexos
Hg-SH so capazes de mimetizar molculas endgenas dos stios de
ligao de protenas na membrana plasmtica e de stios de ligao
de protenas e enzimas intracelulares.2
O mercrio elementar (Hg0) solvel em gorduras (lipossolvel),
o que lhe permite atravessar membranas celulares e ser absorvido pelo
organismo. A absoro ocorre principalmente pelas vias respiratria
e digestiva. A primeira , indubitavelmente, a mais importante via de
introduo no organismo para o vapor de mercrio elementar, pois este
absorvido do ar e se difunde rapidamente atravs da membrana alvolocapilar, passando para o sangue e estabelecendo-se nos eritrcitos.1,3
Segundo a Organizao Mundial da Sade,4 o teor de mercrio
total urinrio considerado normal (pessoas no expostas) de at 4
g L-1. No Brasil, a Norma Regulamentadora 7 (NR-7),5,6 que dispe
sobre os parmetros do controle biolgico da exposio ocupacional a
agentes qumicos, prope a utilizao do mercrio urinrio total como
indicador biolgico da exposio (IBE) de trabalhadores ao mercrio
e seus compostos. Estabelece ainda o valor de 50 g L-1 como ndice
biolgico mximo permitido de mercrio total urinrio e 10 g L-1
como valor de referncia indicando normalidade.
Uma aplicao um tanto polmica do mercrio no amlgama
dental, uma liga composta de mercrio (Hg0), prata (Ag0), estanho
*e-mail: esdantas@ipen.br

(Sn0), cobre (Cu0) e, possivelmente, outros elementos metlicos como

o zinco (Zn0).7 crescente a preocupao com os riscos sade decorrentes da exposio ao vapor de mercrio liberado na preparao
do amlgama dental em consultrios odontolgicos.8 Entretanto,
existem poucas evidncias para sustentar ou refutar inteiramente
tais alegaes.
Recentemente, a Fundao de Medicina Tropical do Tocantins
iniciou um estudo para avaliar os nveis de exposio ambiental e
ocupacional ao mercrio no atendimento odontolgico de consultrios pblicos de Araguana. Em colaborao com este estudo, o
Laboratrio de Anlises Qumicas e Ambiental do Centro de Qumica
e Meio Ambiente do Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares
(IPEN) se responsabilizou pela realizao das anlises das amostras
de urina dos indivduos expostos quanto ao teor de mercrio total
por espectrometria de absoro atmica com vapor frio (CV-AAS).
Para tanto, foi necessrio primeiramente definir uma metodologia
analtica adequada e valid-la para garantir a qualidade dos resultados.
Neste contexto, portanto, este estudo representa uma etapa prvia
s anlises propriamente ditas e tem por objetivo validar a metodologia analtica a ser empregada na determinao de mercrio total em
amostras de urina por CV-AAS.
O desempenho da metodologia analtica foi testado quanto aos
seguintes parmetros: limite de deteco e limite de quantificao,
seletividade, linearidade, exatido e preciso. Os ensaios foram
realizados com material de referncia certificado, o que assegura a
rastreabilidade dos resultados.
PARTE EXPERIMENTAL
Na literatura, possvel encontrar variadas metodologias para
determinao de mercrio total em urina.9-12 A metodologia analtica
foi selecionada da literatura com base na estrutura do laboratrio
analtico e dos recursos disposio do analista.
A metodologia adotada foi descrita por Lopez-Colon e Lozano10
e consiste na determinao de mercrio total em amostras de urina
por espectrometria de absoro atmica com gerao de vapor frio.

1286

Guilhen et al.

Materiais
Tubos de polipropileno de 15 mL (120 x 17 mm) da Sarstedt, micro e macropipetas automticas Wheaton Socorex Calibra, bqueres
e bales volumtricos foram utilizados na preparao dos reagentes.
Reagentes
Os reagentes utilizados foram: material de referncia certificado
(MRC) de mercrio em gua (SRM 1641d; 1,590 0,018 mg kg-1) e
de elementos txicos em urina liofilizada (SRM 2670a; 95,1 0,98 g
L1), ambos do National Institute of Standards and Technology (NIST,
Gaithersburg, MD, USA), Triton X-100 (C33H60O10,5) p.a. da Merck,
dicromato de potssio (K2Cr2O7) da CAAL Reagentes Analticos,
cido ntrico 65% (HNO3) p.a. da Merck, cido sulfrico 95-97%
(H2SO4) p.a. da Merck, permanganato de potssio (KMnO4) p.a. da
Merck, boro-hidreto de sdio (NaBH4) p.a. da Merck, cido clordrico
37% (HCl) p.a. da Merck, hidroxilamina clordrica (NH2OH.HCl)
p.a. da Nuclear, hidrxido de sdio (NaOH) p.a. da Merck e uma
soluo padro de mercrio em HNO3 5% (1000 mg L1) da Merck.
Equipamentos
Utilizou-se um espectrmetro de absoro atmica PerkinElmer
AAnalyst 800 acoplado a um sistema PerkinElmer de injeo em fluxo
FIAS 400, cujas condies de operao esto descritas na Tabela 1,
uma balana Gehaka BG400 e uma estufa da tica.
Tabela 1. Condies operacionais para a anlise de Hg por CV-AAS
Variveis
Tempo de integrao (s)
Lmpada
Comprimento
de onda (nm)
Slit (nm)
Temperatura
da clula (C)

Velocidade
da bomba

Digesto da amostra de urina

A um tubo de polipropileno com capacidade para 15 mL foram
adicionados: 1 mL de urina, 0,5 mL de soluo de Triton X-100 0,2%
(v/v), 0,1 mL de soluo estabilizadora K2Cr2O7 0,5% em HNO3 50%
(m/v), 1 mL de HNO3 e 2 mL de H2SO4. A mistura foi ento aquecida
com o tubo fechado temperatura constante de 60 C, pelo perodo
de 12 h (overnight), para digesto da amostra.
As perdas de mercrio foram evitadas ao mximo por meio da adio
de dicromato de potssio e Triton. A soluo de dicromato de potssio
em meio cido oxida o mercrio, mantendo-o em soluo na forma de
ons Hg2+. A soluo de Triton adicionada previne perdas devido
ao bacteriana. A urina uma amostra biolgica e, portanto, sujeita
ao de bactrias que convertem os compostos de mercrio solveis em
compostos volteis de mercrio. Ambos os reagentes, portanto, evitam
perdas por vaporizao. Alm disso, o aquecimento foi feito em tubo
fechado, o que dificulta ainda mais as perdas por vaporizao.
Oxidao com KMnO4
Aps a digesto, a soluo deve ser retirada da estufa e deixada
temperatura ambiente para esfriar e, em seguida, KMnO4 5% (m/v)
deve ser adicionado em quantidade suficiente para que a soluo
adquira uma cor prpura, indicando o excesso do oxidante em soluo. Se a cor da soluo persistir por cerca de 15 min, significa que
o KMnO4 est em excesso, o que garantir a completa oxidao de
todos ons de mercrio em soluo a Hg2+. A reao de oxidao do
mercrio elementar (Hg0) a mercrio mercrico (Hg2+) ou mercrio
(II) pelo KMnO4 mostrada na Equao 1.
3Hg(aq) + 2KMnO4(aq) + H2O(l) 3HgO(aq) + 2MnO2(aq) + 2KOH(aq) (1)

Condies de operao
20
EDL de Hg

A reao de oxidao do on mercuroso (Hg22+) ou mercrio (I)

ao on Hg2+ pelo KMnO4 mostrada na Equao 2.

253,7

3Hg 2 O (aq) + 2KMnO 4(aq) + H 2 O (l) 6HgO (aq) + 2MnO 2(aq) +

2KOH(aq)
(2)

0,7
100
Etapa

Quim. Nova

Tempo Bomba 1 Bomba 2

Vlvula
(s)
(U min-1) (U min-1)

Prefill

15

100

120

Fill

10

100

120

Fill

15

120

Inject

Solues
As solues utilizadas foram: Triton X-100 0,2% (v/v); HNO3
50% (v/v); K2Cr2O7 0,5% (m/v); KMnO4 5% (m/v); soluo redutora
NaBH4 0,2% e NaOH 0,05% (m/v); HCl 3% (v/v); NH2OH.HCl 10%
(m/v); soluo diluente HNO3 10% e H2SO4 20% (v/v); e soluo
estoque de 500 g L-1 de Hg (v/v), preparada a partir de uma soluo
padro de mercrio em HNO3 5% (1000 mg L1) da Merck. A gua
utilizada no preparo das solues foi do tipo ultrapura destilada 18,3
M cm1.
Etapa experimental
O procedimento analtico pode ser dividido em trs etapas distintas: digesto, oxidao com permanganato de potssio (KMnO4) e
reduo com boro-hidreto de sdio (NaBH4). A execuo cuidadosa de
cada uma destas etapas determina a qualidade dos resultados obtidos
no processo como um todo.

Aps 1 h em repouso, adicionam-se 15 L de hidroxilamina colordrica 10% (m/v) para reduzir o excesso de permanganato em soluo.
A soluo ento readquire seu aspecto inicial (incolor). Por fim, a
soluo diluda a um volume final de 10 mL com soluo diluente.
Reduo com NaBH4
A soluo contendo ons Hg2+ introduzida por injeo em fluxo
e direcionada ao compartimento de reao, onde ser reduzida a Hg0
pela soluo redutora de boro-hidreto de sdio (m/v) e uma soluo
carregadora de cido clordrico 3% (v/v). A reao entre o NaBH4 e
o HCl gera os seguintes produtos:
NaBH4(aq) + 3H2O(l) + HCl(aq) H3BO3(aq) + NaCl(aq) + 8H*(aq)

(3)

A espcie H* gerada reduz os ons Hg2+ na soluo da amostra:

nHg2+(aq) + H*(aq)(excesso) nHg0(g) + H2(g)(excesso)

(4)

O vapor de Hg0 ento conduzido por um gs de arraste (argnio,

Ar) para o compartimento da amostra, posicionado no caminho ptico
do espectrmetro, e quantificado.
Validao analtica
O desempenho da metodologia analtica influenciado essencialmente pela qualidade das medidas instrumentais e pela confiabilidade
estatstica dos clculos envolvidos no tratamento dos dados.13

Vol. 33, No. 6

Validao de metodologia analtica para determinao de mercrio total

1287

Segundo a ANVISA,14 a validao deve garantir, atravs de

estudos experimentais, que a metodologia atenda s exigncias das
aplicaes analticas, assegurando a confiabilidade dos resultados. O
desempenho da metodologia analtica sob investigao precisa ser
consistente com a aplicao para a qual ela se destina.15
A validao analtica um processo demorado, que requer um
grande nmero de ensaios e clculos estatsticos, aumentando o custo
das anlises. Portanto, necessrio selecionar os parmetros que tm
o maior impacto sobre a qualidade dos resultados e a rapidez com
a qual so obtidos. Por isso, muitas vezes, no economicamente
pertinente realizar todos os ensaios de validao sugeridos nos guias
encontrados na literatura.14,16-20
Os parmetros selecionados no presente estudo para testar o
desempenho da metodologia adotada10 foram: curva analtica, faixa
de trabalho e faixa linear de trabalho, linearidade, seletividade, limite
de deteco, limite de quantificao, exatido e preciso.

-1, menor a disperso do conjunto de pontos experimentais, ou seja,

menor o erro em y. Nestas condies, o ajuste da funo matemtica
escolhida para a curva analtica ser mximo.
Um coeficiente de correlao maior que 0,999 considerado
como evidncia de um ajuste ideal dos dados para a linha de regresso.23-25 A ANVISA14 recomenda um coeficiente de correlao maior
ou igual a 0,99 e o INMETRO16 considera um valor de r superior a
0,90 como sendo o valor usualmente requerido. O mtodo ser considerado livre de tendncias (unbiased) se a reta contiver a origem.
Portanto, a obteno de um r superior a 0,9 assegura a linearidade da
relao entre o sinal medido (y) e a concentrao (x) para o intervalo
de concentraes em questo.
A correlao entre as variveis de estudo, em termos dos valores
de r, pode ser interpretada conforme a Tabela 2.

Curva analtica
A curva analtica a representao grfica da relao entre a
resposta obtida (y) e a concentrao de analito (x). A maneira mais
simples de descrever esta dependncia atravs do modelo de regresso linear representado por uma equao matemtica (equao
da reta) em que y est em funo de x:

Valor de r
r=1
0,91 < r < 0,99
0,61 < r < 0,91
0,31 < r < 0,60
0,01 < r < 0,30
r=0

y = ax + b

(5)

O ajuste da curva pelo mtodo dos mnimos quadrados fornecer

os coeficientes de regresso que, no caso de um ajuste linear, correspondem ao intercepto da reta com o eixo y ou coeficiente linear (b)
e a inclinao da reta ou coeficiente angular (a).
A relao matemtica entre x e y previamente determinada
empiricamente a partir de solues de concentraes conhecidas
de analito (ou padres analticos), dando origem curva analtica.21
Faixa de trabalho, faixa linear e faixa linear de trabalho
A faixa de trabalho representa o intervalo de concentrao no
qual o mtodo de determinao de mercrio ser aplicado. O limite
inferior da faixa de trabalho, normalmente, estipulado pelos valores
dos limites de deteco (LD) e quantificao (LQ) do mtodo. A
faixa de trabalho adotada neste estudo compreende um intervalo de
concentraes de 0 a 12 g L-1.
A faixa de concentraes na qual a sensibilidade pode ser considerada constante a faixa linear.
A faixa linear de trabalho estabelecida atravs da confirmao
de que o mtodo capaz de fornecer um grau aceitvel de exatido,
preciso e linearidade quando aplicada s amostras contendo quantidades de analito dentro da faixa de trabalho especificada. Nesta
faixa, portanto, o sinal medido (y) ter uma relao linear com a
concentrao do analito (x).
Linearidade
A linearidade corresponde capacidade do mtodo de fornecer
resultados linearmente correlacionados s concentraes do analito
em uma determinada faixa de aplicao.18,22 A Lei de Beer estabelece
que a relao entre o sinal medido (y) e a concentrao do analito (x),
descrita pela Equao 1, s vlida para o intervalo correspondente
faixa linear da curva analtica.
A adequao do ajuste da curva fornecida pelo coeficiente de
correlao de Pearson, r, tambm conhecido como coeficiente de
correlao produto-momento ou, simplesmente, r de Pearson.
O coeficiente de correlao apresenta uma faixa de magnitude
entre -1 e 1 (-1 r 1) e indica o quanto a reta pode ser considerada
adequada como modelo matemtico.16 Quanto mais prximo de 1 ou

Tabela 2. Correlao entre as variveis de estudo, em termos dos valores de

r. Adaptada da ref. 26
Tipo de correlao
Perfeita
Fortssima
Forte
Mdia
Fraca
Nula

Seletividade
A matriz da amostra pode conter componentes que interferem
no sinal analtico de interesse. A seletividade avalia o grau de interferncia destes componentes sobre o sinal medido. A resposta obtida
deve corresponder exclusivamente ao analito.27
A seletividade foi avaliada para a metodologia empregada,
comparando-se dois grupos de amostras: um contendo a matriz (urina)
e outro, no qual a matriz est ausente, ambos com concentraes de
analito idnticas em cada nvel de concentrao de interesse.
O material de referncia certificado 1641d da NIST foi empregado
como padro de mercrio, assegurando a rastreabilidade dos resultados obtidos. Alquotas distintas deste material foram adicionadas aos
dois grupos de amostras (com e sem urina) de forma a se obter trs
diferentes concentraes da faixa de trabalho: 1,59; 4,77 e 7,95 g L-1.
O nmero de amostras paralelas (n) em cada nvel de concentrao
correspondeu a 7, conforme recomendao do INMETRO.16
Para avaliar os resultados obtidos, aplicaram-se os testes F de
Fisher-Snedecor e o t de Student.
Limite de quantificao e limite de deteco
Medir a capacidade de deteco e quantificao particularmente til quando o analito que se deseja mensurar est presente
em quantidades muito baixas na amostra. Para validar um mtodo
analtico, suficiente indicar a concentrao do analito a partir da
qual a quantificao e a deteco se tornam problemticas.
O limite de quantificao (LQ) ou mnimo valor quantificvel,
por sua vez, expresso em termos da concentrao correspondente
preciso desejada (10%), levando-se em considerao o desvio
padro relativo (DPR%) calculado para uma determinada faixa de
concentrao. O limite de deteco (LD) ou mnimo valor detectvel
considera os riscos (falso positivo) e (falso negativo).
Limite de quantificao
O limite de quantificao (LQ) a menor concentrao de analito que pode ser determinada com um nvel aceitvel de preciso e
veracidade. O LQ pode ser obtido a partir da anlise de 7 replicatas
do branco da amostra:16

1288

Guilhen et al.

LQ = X + (kQ).s

(6)

O fator de multiplicao kQ dependente da preciso (DPR%)

desejada no limite de quantificao.

DPR(%) = 100/kQ

(7)

Por exemplo, se a preciso ou DPR% desejada no limite de

quantificao for de 10%, kQ ser igual a 10.
Limite de deteco
O limite de deteco (LD) representa a mnima concentrao ou
quantidade de um analito que produz um sinal que o analista consiga
distinguir, a um nvel de confiana especificado, do sinal produzido
pelo branco.
O LD do mtodo foi calculado com base no desvio padro obtido para uma srie de 7 (n) replicatas do branco da amostra (matriz
na qual o analito est ausente ou presente em concentraes muito
pequenas) adicionadas com a menor concentrao aceitvel do
analito. Os valores de desvio padro obtidos so ento aplicados na
seguinte frmula:16

LD = X + (kD).s

(8)

onde, X a mdia dos valores obtidos para cada amostra adicionada,

kD o fator de multiplicao correspondente ao t de Student para um
nvel de confiana de (1- )x100% e (n 1) graus de liberdade e s
corresponde ao desvio padro calculado.
Exatido
improvvel que um resultado obtido experimentalmente seja
exatamente igual ao valor de referncia convencionalmente aceito
como verdadeiro.16,18,28 A exatido (accuracy) o grau de concordncia entre o resultado de uma medio e um valor verdadeiro do
mensurando.29 A exatido do mtodo foi avaliada a partir da realizao de ensaios com material de referncia certificado e testes de
recuperao do analito.
A interpretao dos resultados obtidos pode ser feita com auxlio
de algumas ferramentas matemticas como o erro relativo, o teste F,
o ndice Z (Z Score) e o erro normalizado.
A recuperao ou fator de recuperao (R) definida como a
proporo da quantidade da substncia de interesse, presente ou
adicionada na amostra, recuperada por meio do mtodo analtico.21
Reflete, portanto, a quantidade de determinado analito efetivamente
quantificada em relao quantidade real presente na amostra.
Quando a recuperao obtida a partir da anlise de material de
referncia certificado (MRC), calcula-se:

R% = (C/CMRC).100

(9)

onde: C a mdia das recuperaes obtidas para n repeties e CMRC

a concentrao verdadeira. O material de referncia certificado
2670a da NIST foi empregado na avaliao da exatido do mtodo.
Preciso
A preciso avalia a disperso dos resultados entre ensaios independentes, repetidos de uma mesma amostra, amostras semelhantes
ou padres, em condies definidas16,18 e pode ser expressa pelo
desvio padro relativo (DPR%), tambm conhecido como coeficiente
de variao.
Para avaliar a preciso, o desvio padro relativo foi calculado para
uma srie de 7 replicatas independentes do material de referncia certificado 2670a da NIST, em 3 diferentes concentraes da faixa de trabalho.

Quim. Nova

De acordo com Huber,30 os mtodos empregados para quantificar

o analito em escalas macro requerem um DPR% de 1 a 2%. Para a
anlise de traos, aceitvel um DPR% de at 30%, dependendo
da complexidade da amostra. A Tabela 3 mostra a relao entre a
concentrao do analito e a preciso esperada.
Tabela 3. Relao entre a concentrao do analito e a preciso esperada.
Adaptada da ref. 30
Porcentagem
de analito (%)
100
10
1
0,1
0,01
0,001
0,0001
0,00001
0,000001
0,0000001

Proporo
de analito
1
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
10-8
10-9

Unidade

DPR(%)

100%
10%
1%
0,1%
100ppm
10ppm
1ppm
100ppb
10ppb
1ppb

1,3
2,8
2,7
3,7
5,3
7,3
11
15
21
30

RESULTADOS E DISCUSSO
A linearidade foi investigada para as concentraes da faixa de
trabalho para uma srie de 6 pontos distribudos no intervalo de 0
a 12 g L-1. O coeficiente de correlao obtido foi igual a 0,998. O
mtodo pode, portanto, ser considerado linear, pois o coeficiente
de correlao obtido a partir da curva analtica superior ao valor
recomendado pela ANVISA14 (r 0,99). Alm disso, pode-se dizer
que a correlao entre as variveis x (concentrao) e y (sinal obtido),
de acordo com a Tabela 2, fortssima.
A seletividade foi testada para avaliar a influncia dos efeitos da
matriz sobre os resultados. Os resultados (em g L-1) para um nmero
de amostras paralelas equivalente a 7 (n) encontram-se resumidos na
Tabela 4. Pelos resultados obtidos podemos concluir que a matriz no
tem um efeito significativo sobre a preciso do mtodo na faixa de
concentraes de estudo.
Para estimar o limite de quantificao, a preciso do mtodo foi
examinada para uma faixa de concentraes do analito de 0,1 a 1 g
L-1 (primeiro ponto da curva analtica) e 7 replicatas para cada nvel
de concentrao. A mdia (X) e o desvio padro (s) foram calculados
com base nos resultados obtidos para cada concentrao e aplicados
na equao do desvio padro relativo (DPR%):

DPR% = (s/X).100

(10)

Com base nos valores de DPR% calculados, foi possvel decidir

a concentrao limite, isto , a menor concentrao de mercrio
que pode ser determinada com a preciso desejada que, no caso,
corresponde a 10%.
Tabela 4. Valores de DPR% obtidos no estudo do LQ
Concentrao (g L-1)
DPR (%)

1,0
3

0,8
2

0,6
3

0,4
5

0,3
7

0,2
22

0,1
123

De acordo com os valores de DPR% apresentados na Tabela 4,

pode-se atribuir concentrao de 0,3 g L-1 a denominao de menor concentrao aceitvel do analito, pois a menor concentrao
que pode ser determinada dentro da preciso desejada. O limite de
quantificao (LQ) , portanto, 0,3 g L-1.
O limite de deteco foi calculado da seguinte forma:

LD = 0 + (kD).s

(11)

Vol. 33, No. 6

Validao de metodologia analtica para determinao de mercrio total

onde o fator de multiplicao (kD) corresponde ao valor de t de Student

para um nvel de confiana de 99% e 6 graus de liberdade (t = 3,143)
e s o desvio padro obtido para uma srie de 7 (n) replicatas do
branco da amostra adicionadas com a menor concentrao aceitvel
do analito (LQ). O LD calculado foi igual a 0,07 g L-1.
A preciso foi determinada a partir do desvio padro relativo
(DPR%) calculado para uma srie de medies (n = 7) sucessivas do
analito sob condies de repetitividade. O desvio padro foi calculado
para cada concentrao investigada na faixa de trabalho. Todos os
resultados ficaram abaixo do limite considerado como aceitvel (at
20%) para que se considere o mtodo preciso.30 Pode-se concluir,
portanto, que o mtodo adotado preciso.
A exatido foi avaliada comparando-se os valores obtidos
experimentalmente dos valores certificados a partir do estudo da
recuperao. Tambm se calculou o erro relativo, o ndice Z e o erro
normalizado. Os resultados podem ser observados na Tabela 5. Podese observar que o erro maior para as concentraes mais prximas
aos extremos (inferior e superior) da curva analtica, como previsto
pela lei de Beer. Com base nos valores de Z obtidos, pode-se afirmar
que o mtodo capaz de gerar resultados satisfatrios, pois |Z| 2
em todas as concentraes.16
O material de referncia certificado 2670a da NIST foi empregado
no ensaio da recuperao e os resultados obtidos para uma srie de 7
medies independentes em cada nvel de concentrao so mostrados
na Tabela 5. O t de Student foi calculado para avaliar a exatido do
mtodo. O mtodo pode ser considerado exato se o valor de t obtido
estiver dentro do intervalo estabelecido pelo valor tabelado de t para
(n 1) graus de liberdade e nvel de confiana de 99%. Todos os
valores calculados de t (tcalculado) so inferiores ao valor de t tabelado
(ttabelado) em todos os nveis de concentrao investigados. O mtodo
pode, portanto, ser considerado exato.
Tabela 5. Conjunto de resultados obtidos atravs dos ensaios de validao
Parmetro
r

Resultados
0,999

Resultados
(g L-1)
F
F
tcalculado
ttabelado
s/ Matriz c/ Matriz calculado tabelado
1,43
1,54
1,00
1,21
Seletividade
4,88
4,99
1,93
0,79
4,28
3,05
8,82
8,78
1,15
0,18
LD
0,07 g L-1
LQ
0,30 g L-1
Concentrao
Resultados
DPR
(g L-1)
(g L-1)
(%)
1,90
1,83
5,8
Preciso
4,75
4,73
2,6
9,51
9,19
4,4
Concentrao Resultados ER
Recuperao
Z
tcalculado ttabelado
(g L-1)
(g L-1) (%)
(%)
1,90
1,83
3,66 0,65
96,3
1,59
Exatido
4,75
4,73
0,40 0,15
99,6
0,38
3,14
9,51
9,19
3,42 0,80
96,6
1,96
r = coeficiente de correlao; LD = limite de deteco; LQ = limite de
quantificao

Aplicao da metodologia em amostras reais de Tocantins

A metodologia analtica foi aplicada em uma anlise inicial para
determinao de mercrio total em 39 amostras de urina enviadas pela
Fundao de Medicina Tropical do Tocantins. Estas amostras fazem
parte de um estudo referente aos riscos da exposio ao mercrio no

1289

atendimento odontolgico de consultrios da rede pblica da cidade

de Araguana (TO).
Do total de amostras analisadas, 6 (15%) apresentaram nveis de
mercrio urinrio superiores ao limite de normalidade equivalente
a 10 g L-1. A concentrao obtida para uma das amostras ficou na
concentrao limiar [(10,01 0,03) g L-1] e o resultado obtido para
o restante das amostras ficou abaixo de 10 g L-1, o que revela uma
exposio ao mercrio, ainda que dentro do limite de normalidade.
A mdia dos resultados obtidos foi de 6 g L-1 em uma faixa de
concentrao de 1 a 23 g L-1 com at 11% de preciso.
CONCLUSO
A validao analtica comprovou a adequao da metodologia
adotada para quantificar Hg total em amostras de urina por espectrometria de absoro atmica com vapor frio. Todos os testes foram
efetuados de modo a abranger a faixa de concentrao na qual se
pretende aplicar o mtodo de determinao de mercrio. A menor
concentrao de Hg que pode ser determinada com uma preciso
aceitvel corresponde a 0,30 g L1 (LQ). Alm disso, o limite de
deteco do mtodo (LD = 0,07 g L1) assegura a determinao de
Hg em quantidades trao. Entretanto, a relevncia dos ensaios de validao recai sobre os parmetros que confirmam a boa performance do
mtodo na faixa de aplicao. O desempenho satisfatrio do mtodo
nesta faixa essencial para que se possa extrair um significado bioqumico dos resultados, levando em conta os limites pr-estabelecidos.
Os resultados devem possibilitar ao analista dizer se o teor de Hg
urinrio (HgU) determinado est ou no dentro da faixa de normalidade (at 10 g L1). Neste quesito, os testes para verificar a exatido
e a preciso do mtodo foram fundamentais para demonstrar que os
erros associados aos resultados no so estatisticamente significantes
e que os mesmos so confiveis. Alm disso, a metodologia permite
uma recuperao quase que total do analito investigado.
A metodologia adotada representa, portanto, uma importante
ferramenta para avaliar a exposio ao Hg e os resultados obtidos
constituem uma evidncia de que esta exposio possa ter, de fato,
alguma influncia sobre os nveis de Hg no organismo. Ainda que
direcionada questo do amlgama dental, esta metodologia pode
tambm ser aplicada para investigar outros casos nos quais exista
uma exposio ao Hg, salvo exposies aos compostos orgnicos
de Hg, para as quais a urina no o IBE mais adequado. Espera-se,
com isso, que o laboratrio possa, futuramente, ampliar a sua rea
de atuao. Uma anlise inicial permitiu constatar o teor de Hg urinrio (HgU) de 39 indivduos pertencentes ao estudo da Fundao
de Medicina Tropical do Tocantins, 6 dos quais apresentaram nveis
de HgU superiores ao limite de normalidade. Os resultados obtidos
encontram-se em uma faixa de concentrao de 1 a 23 g L1 com
at 11% de preciso. Testes adicionais devero ser realizados para
constatar se existe alguma alterao em funo do tempo e da carga
de exposio dos indivduos aos quais correspondem as amostras
analisadas.
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