Rev. Inst. Med. trop.

So Paulo
31 (2): 126-131, maro-abril,, 1989

BIOSSEGURANA NO LABORATRIO

R . I S H A K (1), A . C . L I N H A R E S (2) & M . O . G . I S H A K

(1)

RESUMO
Nos ltimos dez anos tem sido travada u m a luta com a finalidade de prevenir
a transmisso de agentes infecciosos dentro de laboratrios. A grande fonte de disper
so de patgenos por meio de aerossis, pode ser eliminada satisfatoriamente com
o uso de cmaras de segurana biolgica. R e g r a s gerais e especficas de biossegu
r a n a devem ser cumpridas por todos os usurios de laboratrios que manuseiam
patgenos ou materiais potencialmente contaminantes e, eventualmente, avaliados
por u m comit de biossegurana independente. O surgimento da sndrome de imunodeficincia adquirida deve servir.como fator de estmulo adoo de normas eficazes
de segurana laboratorial.
U N I T E R M O S : B i o s s e g u r a n a : Infeco laboratorial.

INTRODUO
Prevenir a transmisso de agentes infeccio
sos, dentre outros produtos nocivos sade hum a n a , o grande problema de segurana labora
torial que deveria ser incutido em todos os usurios iniciantes e nos c h a m a d o s ''experientes"
que se utilizam de u m espao de laboratrio para
o preparo de " i n c u a s " culturas de c^ilas ou
a separao de sangue p a r a os mais variados
fins ou aqueles que m a n u s e i a m patgenos de
reconhecida importncia mdica.
Entretanto, apesar de todos os perigos de
contaminao de naturezas infecciosa e qumica, os riscos potenciais que so enfrentados no
dia a dia em u m laboratrio, n a maioria das vezes, so obscuros e silenciosos, e esperam a oportunidade certa de causar o seu dano.

1. V i d r a r i a s e objetos perfurantes: so comuns

os acidentes ao colocar-se u m a pera ou outro
auxiliar de pipetagem n a ponta de u m a pipeta
ou no manuseio de vidrarias quebradas dentro de receptculos etc. O descarte de agulhas
no passado, era efetuado aps a cobertura
com a respectiva c a p a . A p s o advento d a
Sndrome de Imunodeficincia A d q u i r i d a ( S I D A / A I D S ) observou-se que o nmero de perfuraes acidentais provenientes deste ato
no estava dentro dos limites aceitveis. Desta forma prefervel que exista um recipiente
adequado e nico para o desprezo de agulhas
e seringas imediatamente aps o uso, sem cobrir a agulha. O desprezo de vidraria quebrada e agulhas deve ser feito em local apropriado que no o lixo geral;

Como itens de segurana geral temos os seguintes a serem considerados:

2. Produtos qumicos de natureza txica: deter

gentes podem ser custicos ou causar irrita

(1) U n i v e r s i d a d e F e d e r a l d o P a r . C e n t r o d e C i n c i a s B i o l g i c a s , D e p a r t a m e n t o d e P a t o l o g i a , L a b o r a t r i o d e V i r o l o g i a .
(2) I n s t i t u t o E v a n d r o C h a g a s , F S E S P / B e l m , P a r , B r a s i l .
E n d e r e o p a r a c o r r e s p o n d n c i a : D r . R i c a r d o I s h a k C a i x a P o s t a l 3005 66.000 B e l m , P a r , B r a s i l

o n a pele, olhos e t c ; desinfetantes qumicos

como o hipoclorito de sdio podem m a n c h a r
tecidos, causar irritao n a pele ou mesmo
corroer metais; produtos qumicos comumente usados em cultura de clulas, como o dimetil sulfxido, solvente poderoso que penetra
atravs da pele e pode carregar consigo substncias infecciosas, qumicos mutgenos ou
carcinognicos;
3. Gases: C 0 , N no so perigosos quando a
exposio feita a pequenas quantidades, porm c a u s a m a s f i x i a q u a n d o l i b e r a d o s em
grandes quantidades; a liberao de 0 requer
ventilao m x i m a devido ao risco de fogo;
a vedao de ampolas deve ser feita com cuidado para no haver refluxo de oxignio ou
defeitos n a m i s t u r a g s / o x i g n i o ; cilindros
que contm gases devem estar fixos, evitando
o risco mecnico de queda dos mesmos;
2

4. Nitrognio liquido: so trs os maiores riscos

associados ao nitrognio queimadura, asfix i a e exploso; quando as ampolas so submersas em N lquido, existe u m a diferena
de presso entre o exterior e o interior d a ampola; se esta no estiver perfeitamente fecha
da h a v e r a entrada de N , a q u a l c a u s a r
a exploso d a ampola no momento de descongelamento; a inalao de grandes quantidades de N pode levar asfixia, e devido b a i x a
temperatura do mesmo o seu manuseio sem
luvas de proteo pode resultar em queimaduras;
2

5. Fogo: B i c o s de gs e lcool para esterilizao

devem ser mantidos afastados; a esterilizao
pelo fogo deve ser feita com cuidado redobrado e o material esterilizado mantido longe do
lcool;
6. Radiao: o uso de radioistopos segue regras
que devem ser obedecidas com cuidado; seu
cumprimento assegurado por rgos de fiscalizao e que no ser objeto de anlise no
presente artigo. P o r outro lado, no trabalho
rotineiro, todo cuidado deve ser observado
para a proteo contra as irradiaes de lmpadas u l t r a v i o l e t a n a pele e nos olhos; barreiras de vidro ou plstico devem ser sempre utilizadas porque h o risco de leso de retina
e de cncer de pele.

RISCO BIOLGICO DE CONTAMINAO

A necessidade de proteo contra u m risco
biolgico definida pela (i) fonte do material;
(ii) pela natureza d a operao ou experimento
a ser efetuado e (iii) pela condio n a q u a l o experimento ser realizado. No h controvrsias sobre o risco de contaminao quando se trabalha
com patgenos conhecidos, pois para estes existem normas e classificaes que regem os nveis
de conteno adequados p a r a os seus m a n u seios . Entretanto, o desenvolvimento de novas
tcnicas como a hibridizao celular inter-especfica, o uso de novos patgenos em locais no
considerados como de conteno m x i m a , o uso
de linhagens celulares transformadas, todos introduzem riscos para os quais ainda no se dispe de informaes epidemiolgicas suficientes
p a r a avaliar o impacto que as modernizaes
de tecnologia acarretam. A s comisses de segur a n a internacional reunem-se, em geral, quando se detecta o risco.
2 6

importante ento que c a d a instituio de

pesquisa aponte u m C o m i t de B i o s s e g u r a n a
que atue nas seguintes funes:
a) no aconselhamento p a r a desenvolver e melhorar as regras p a r a a segurana no trabalho:
b) prover u m a reviso geral de biossegurana
dentro das atividades desenvolvidas pela instituio em questo sob u m ponto de vista
rigoroso e imparcial.
essencial que a responsabilidade com a
biossegurana envolva no apenas o cientista
coordenando ou realizando u m projeto, como
tambm todos os usurios do laboratrio, inclusive aqueles do corpo administrativo, os quais
tambm devem obedecer regras especficas.

CMARAS DE SEGURANA
A l m de regras de ordem prtica que devem
ser seguidas, a proteo contra a contaminao
laboratorial sob a forma de aerossol, feita primariamente atravs do uso de cmaras de segur a n a microbiolgica . essencial que o operador seja protegido, assim como no se permita
que seja eliminado qualquer agente ou outro ele
mento p a r a o meio ambiente.
5

Inicialmente importante fazer a distino

entre cmaras de fluxo laminar ordinrias e de
segurana.
A s cmaras de fluxo laminar ordinrias no
so projetadas p a r a dar proteo ao operador.
S o capelas com presso positiva, com u m fluxo
de ar de dentro p a r a fora da rea de trabalho
da m e s m a , que no recirculado e sim eliminado
para o interior do laboratrio. E s t a s cmaras de
fluxo horizontal do a proteo adequada para
a cultura de clulas, reagentes e t c , porm n u n c a
devem ser utilizadas com radioisotopes, m u t genos, vapores t x i c o s , m a t e r i a i s infectantes
etc At mesmo o simples trabalho de cultura
de clulas pode ser questionado nestas cmaras,
em v i s t a da presena de vrus endgenos c u j a
patogenicidade desconhecida p a r a o homem.
E x i s t e m trs tipos de cabines de s e g u r a n a
com projees e utilizaes diferentes, graduadas em classes de acordo com o grau de segurana proporcionado:
Classe I possuem u m fluxo de ar de fora
para dentro e protegem apenas o operador, no
mantendo a esterilidade dos reagentes trabalhados;
Classe I I projetada para proteger o operador e material trabalhado, possuindo u m fluxo
de ar estril em direo ao espao do trabalho
e u m fluxo de ar de fora para dentro entrando
por u m a abertura frontal;
C l a s s e I I I teoricamente so cabines de
conteno m x i m a para usos de patgenos de
alta periculosidade (e.g., varola, febre de L a s s a ,
raiva, H I V e t c ) ; so projetadas com luvas fixas
na parte frontal, formando u m a barreira fsica
entre o material e o operador.
Atualmente existem Padres de S e g u r a n a
definidos em pases como os E U A , Inglaterra,
A u s t r l i a , A l e m a n h a Oriental e J a p o . O p a
dro definido n a Inglaterra exige que o operadoi
que trabalha em u m a cabine Classe I ou I I tenha
u m a exposio a aerossis em u m a quantidade
que no ultrapasse I O " d a exposio que teria
a qualquer aerossol infeccioso produzido se o
trabalho fosse efetuado em um balco de laboratrio sem qualquer mecanismo a u x i l i a r de conteno .
4

C o n v m lembrar de que estas cabines so

suscetveis influncia do meio externo, n a qual
movimentos do operador, de portas, pessoas ao
redor, c a u s a m distrbios no fluxo de ar, podendo
levar contaminantes para o interior, assim como
trazer patgenos p a r a o operador e visitantes
inesperados e circunstanciais. U m a das formas
de corrigir tais ocorrncias a colocao das
C m a r a s em lugares adequados no laboratrio,
colocar portas de correr, efetuar vedaes absolutas, observar normas de segurana etc.
A manuteno de salas com presso negativa ou u m pouco a b a i x o (2-3mm de H g ) das salas
ao redor so prticas adequadas para aumentar
a segurana de cmaras asspticas a fim de evitar a sada de qualquer espcimen sendo m a n u seado para o meio externo .
3

A l m destas cmaras, existem a i n d a aquelas produzidas para o trabalho com produtos txicos, carcinognicos e radioistopos, as capelas
qumicas. S o cmaras que devem obedecer o
grau de segurana daquelas de Classe I I e dotadas principalmente de u m a abertura frontal mn i m a , fluxo de g u a e boa ventilao.
A instalao e teste de cmaras de segurana devem ser criteriosamente estudadas e avaliadas de tempo em tempo, para se ter certeza
que o funcionamento est correto.
NVEIS DE CONTENO LABORATORIAL
O s t r a b a l h o s e x e c u t a d o s em laboratrio,
obedecem a u m gradiente de periculosidade de
acordo com o patgeno que est sendo m a n u seado. D e s t a forma, costuma-se admitir quatro
nveis de conteno laboratorial:
N v e l 1 (Mnimo): adequado p a r a patgenos
com nvel m n i m o de risco p a r a o operador; o
trabalho feito em geral em balco aberto sem
nenhum equipamento especial de conteno requerido. H necessidade de se observar a l g u m a s
prticas como: manter as portas fechadas, descontaminar superfcies diariamente, descontaminar material a ser lavado ou descartado, proibir comida, bebida, fumo, pipetagem com a boca,
evitar a formao de aerossol etc.
N v e l 2 (Baixo risco): o pessoal tcnico deve
ser mais treinado para manusear patgenos, o

acesso ao laboratrio limitado quando da manipulao com microorganismos e os procedimentos capazes de produzir aerossol devem ser
efetuados em cmaras de segurana. A d i c i o n a l mente deve-se fazer u m programa eficaz de con
trole de insetos e outros animais, no utilizar
jalecos fora d a rea laboratorial, no manter
plantas, agulhas e lixo no interior do laboratrio,
assim como criar u m sistema de notificao e
registro de acidentes no laboratrio, de exposio aos patgenos trabalhados e de v i g i l n c i a
mdica v i n c u l a d a principalmente aos casos de
absentesmo posterior aos acidentes e/ou exposies a agentes patognicos.
N v e l 3 (Risco moderado): o laboratrio j
deve possuir u m a arquitetura especial e equipamento de conteno adequada para o manuseio
de patgenos potencialmente letais. T o d o material deve ser esterilizado dentro d a rea laboratorial ou enviado em frascos p r o v a de vazamento para u m a unidade de esterilizao. No
deve ser permitida a entrada de pessoas estranhas ao servio, as quais devem ser orientadas
sobre o risco de contaminao; deve-se criar protocolos escritos para as situaes de emergncia;
a descontaminao tem de ser eficaz; no usar
roupas de rua e cobrir-se at os sapatos (de preferncia com botas prova d'agua); uso obrigatrio de luvas e mscaras (especialmente em biotrios); e usar filtros nas linhas de vcuo.
N v e l 4 (Alto Risco): o pessoal do laboratrio
deve ter conhecimento e treinamento completo
no manuseio de patgenos sabidamente capazes
de produzir doena severa ou fatal no homem,
assim como devem compreender as funes dos
nveis de conteno, do equipamento e das caractersticas do laboratrio. E s t a rea deve ser
claramente demarcada dentro de u m espao fsi
co. O uso de C m a r a s Classes I ou I I pode ser
feito apenas se todos os usurios mostrarem evid n c i a de i m u n i z a o anterior ao agente em
questo, de outra forma, a manipulao de patgenos requer C m a r a s de Classe I I I ou roupas
especiais pressurizadas.
E m u m a conteno de Nvel 4 as portas de
vem ser mantidas fechadas e o nmero de chaves
limitado estritamente aos usurios. entrada
e sada, deve haver troca de roupa e banho em
u m a ante-sala que permita este fluxo de pessoas.
Deve haver u m espao para quarentena e obser-

vao de operadores suspeitos de contaminao

e suporte mdico de casos potenciais ou confirmados de doena associada ao laboratrio. T o d o
m a t e r i a l s a d o deste n v e l de conteno tem
obrigatoriamente de ser esterilizado (UV, calor,
banho qumico) ou filtrado (ar).
PRECAUES EM BIOSSEGURANA
T o d o indivduo trabalhando com agentes infecciosos ou material suspeito de conter patgenos est exposto ao risco de infeco. D a importante que precaues apropriadas sejam tom a d a s , j que mesmo u m a cultura de clulas
no i n o c u l a d a pode ser u m a fonte de patgenos
virais. aconselhvel que todo o pessoal de laboratrio tenha u m a amostra de sangue coletada
anualmente.
REGRAS GERAIS DE BIOSSEGURANA
1. T o d o material contaminado deve ser marcado apropriadamente e esterilizado por autoclave, ou U V (superfcies e ar). A contaminao do sistema hidrulico por agentes infecciosos no pode ocorrer.
2. D e v e m existir em estoque, p r x i m a s do local
de t r a b a l h o , solues de desinfetantes, incluindo-se formalina a 20% e etanol a 70%.
3. G a i o l a s com animais, garrafas de gua e restos de animais assim como ovos infectados
devem ser autoclavados e os tcnicos que trab a l h a m com tal material devem ser instrudos
a seguir fielmente as normas de segurana.
4. T o d a s as vacinas disponveis devem ser criteriosamente utilizadas p a r a os operadores e
usurios do laboratrio
REGRAS ESPECFICAS DE BIOSSEGURANA
Manter todos os frascos contendo material
infectante fechados quando no estiverem
em uso;
No colocar pipetas contaminadas n a superfcie do balco de trabalho; no andar com
pipetas pelo laboratrio; no descartar fluidos contaminados n a p i a ; no causar derramamento de material;
No produzir aerossol desnecessariamente
(macerao com gral e pistilo, agitao vio
lenta, sonicao, abertura de vasilhames com

presso interna maior que a ambiente, inoculao de animais por v i a i n t r a n a s a l , coleta

de fluidos de animais ou de ovos embrionados
etc);
No pipetar com a boca;
No comer, beber ou fumar no laboratrio
ou estocar c o m i d a ou bebida nos refrigeradores ou locais de rea tcnica;
No levar l u v a p a r a fora da rea de trabalho,
e lavar as mos antes de sair do laboratrio;
Vestir jalecos no local de trabalho, mas troclos antes de sair;
Desinfectar os balces ao final do d i a ;
U r i n a , fezes, sangue total, p l a s m a , soro e outros fluidos orgnicos devem ser considerados como material contaminado at p r o v a
em contrrio. E m virtude disto, evite sujar-se
com qualquer destes materiais;
L a v a r sempre com gua e sabo a parte do
corpo i m e d i a t a m e n t e aps o contato c o m
qualquer espcimen do laboratrio;
Cobrir cortes e abrases de pele, principalmente das mos, antes de manusear qualquer
espcimen laboratorial;
E v i t a r perfuraes com agulhas e outros objetos pontiagudos, principalmente aqueles su
jos com sangue; substitu-los, eventualmente, por instrumentos plsticos;
No colocar recipientes contendo s u b s t n cias lquidas ou qualquer outro objeto, por
mais leve que seja, sobre o equipamento de
laboratrio, p a r a se evitar problemas que incluem danos eltricos e obstruo d a ventilao;
Despejar todo o material de anlise de forma
segura, esterilizando tudo o que for necessrio;
Voc deve ter conscincia d a s u a segurana
em seu local de trabalho. No acredite que
seu trabalho incuo s porque voc ainda
no foi infectado no laboratrio. U m dia isto
pode acontecer, e o que pior, pode ser fatal.
T e n h a cuidado!

BIOSSEGURANA E A SNDROME DE
IMUNODEFICINCIA ADQUIRIDA
A s normas aqui propostas assumem particular relevncia quando se observa a acelerada
e x p a n s o d a S I D A / A I D S no m u n d o e constituem u m apanhado geral de regras largamente
difundidas.
Qualquer unidade laboratorial que se utilize
de fluidos orgnicos como o sangue ou pores
do mesmo, est em risco de se ver um dia frente
ao manuseio de espcimens contaminados pelo
H I V . D e s t a forma, mais do que n u n c a essencial
que as normas de s e g u r a n a aqui delineadas,
e outras particulares de cada laboratrio, sejam
fielmente respeitadas e seguidas.
Por outro lado, o trabalho com pacientes soropositivos para o H I V ou com a S I D A / A I D S ,
requer que sejam estabelecidas regras m n i m a s
complementares p a r a bloquear a transmisso ao
operador. D e s t a forma, o trabalho com o H I V
dever obedecer:
a notificao da existncia de u m trabalho
desta natureza para fins de avaliao por u m
Comit independente;
a existncia de mecanismos de conteno e
preveno d a infeco, tais como: a sinalizao do perigo biolgico, a presena de fonte
de gua de fcil acesso, desinfetantes prximos ao local de trabalho, equipamento de uso
exclusivo como geladeira, centrfuga e t c ;
u m a rotina r g i d a de trabalho l i m i t a n d o o
acesso de usurios, mantendo portas fecha
das, prevendo a sistemtica utilizao de jalecos, aventais plsticos, culos de proteo,
luvas e dando o descarte adequado ao material infectante aps s u a esterilizao;
cuidados especficos a serem seguidos para
o derramamento de material e seu descarte
adequado: so recomendadas concentraes
variveis de hipoclorito para a descontaminao e limpeza de materiais variados como
pipetas, ponteiras (hipoclorito a 0,25%), superfcies, objetos e equipamentos (hipoclorito
a 0,1% ou glutaraldedo a 2%). C o n t a m i n a es grosseiras devem ser limpas com soluo
de hipoclorito a 1 %; essencial o uso de cubas
fechadas para autoclavao;

 manuteno de livro de ocorrncia p a r a registro de acidentes, infeces, doenas, assistncia mdica e t c ;

orientao correta p a r a recebimento de materiais de outros laboratrios; n u n c a demais
lembrar que a vedao dos frascos contendo
soros para teste deve ser completa e que os
frascos devem ser embalados em sacos plsticos individuais antes de serem enviados;
limpeza diria do laboratrio.
Reenfatizamos o cuidado quanto ao uso de
seringas e agulhas, particularmente no momento da colheita do sangue: N U N C A tentar repor
a capa de plstico que originalmente recobria
a a g u l h a ; u m a vez coletado o espcimen, deposite-o em u m frasco apropriado, injetando-o atravs d a a g u l h a ; ao trmino desse ltimo procedimento, descartar a seringa a c o p l a d a a g u l h a
(NO T E N T E S E P A R - L O S ! D E S N E C E S S R I O . . . ) em u m recipiente apropriado (e.
g., u m a c a i x a de papelo suficientemente rgido)
cujo destino ser a cremao.

interest in methods and procedures for the safe

handling of microbiological material. T h e major
laboratory safety problem is aerial transmission,
however, protection against airborne hazards is
efficiently achieved by the use of microbiological
safety cabinets. Biosafety rules should be strictly followed by all members of a laboratory. E v a luation of these procedures should be effectively
performed by an independent biosafety committee. T h e upsurge of A I D S should stimulate the
adoption of safe working procedures in the laboratory.
AGRADECIMENTOS
S r a . F T I M A M O N T E I R O pela paciente
datilografia do manuscrito.

REFERNCIAS

1.

BRITISH

BIBLIOGRFICAS

S t a n d a r d 5726. S p e c i f i c a t i o n s for

microbiolo-

gical safety cabinets. L o n d o n , B r i t i s h S t a n d a r d s I n s t i t u

Por ltimo convm enfatizar que mais importante que a conteno fsica do laboratrio
para evitarem-se os acidentes, so as prticas
seguras que devem ser seguidas pelo pessoal de
laboratrio. A s pessoas que trabalham no labo
ratrio devem entender todos os procedimentos,
funcionairlento dos equipamentos e as instala
es, assim como devem saber da natureza dos
agentes infecciosos, carcinognicos ou emissores de radiaes que so manipulados e as conseqncias d a s u a m a n i p u l a o errnea, displicente, despreocupada e irresponsvel.

t i o n , 1979.
2.

C A S A L S , J . Arboviruses, arenaviruses and

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SUMMARY

6.

LABORATORY

s a f e t y for a r b o v i r u s e s a n d c e r t a i n

other

v i r u s e s of v e r t e b r a t e s . T h e S u b c o m m i t t e e o n A r b o v i r u s

LABORATORY

SAFETY

L a b o r a t o r y S a f e t y of the A m e r i c a n C o m m i t t e e o n A r t h r o p o d b o r n e V i r u s e s . A m e r . J . t r o p . M e d . Hyg:., 29: 1359-1381,

1980.

T h e occurrence of laboratory-acquired infections have elicited in the last ten years an intense

R e c e b i d o p a r a p u b l i c a o e m 08/8/1988