CULTURA E TESTE DE

SENSIBILIDADE: TRADIÇÃO X
AUTOMAÇÃO
III Encontro Nacional de Tuberculose
Salvador, 18 a 21 de junho de 2008

Maria Alice da Silva Telles

PROFICIÊNCIA

Teste de sensibilidade
FATORES QUE PODEM INFLUIR NO
RESULTADO DO TESTE

 PROFICIÊNCIA DA EQUIPE
Cultura de micobactérias e identificação

Critérios de resistência

 PADRONIZAÇÃO E REALIZAÇÃO DOS

PROCEDIMENTOS
A padronização é difícil e os procedimentos
são complexos
FATORES QUE PODEM INFLUIR NO
RESULTADO DO TESTE

 POTÊNCIA E ESTABILIDADE DA DROGA

Cálculo da potência
Condições de armazenamento
Diluição correta
Inativação pelo calor (coagulação)
Prazo de validade
 ATIVIDADE DA DROGA

Alteração da atividade de determinadas

drogas quando incorporada em diferentes
meios de cultura
FATORES QUE PODEM INFLUIR NO
RESULTADO DO TESTE
 TIPO DO MEIO DE CULTURA (sólido, líquido)
pH do meio
Metodologia usada para o teste
Padronização do inóculo
 QUALIDADE DA CULTURA ORIGINAL
Crescimento,idade da cultura, meio de cultura
 LEITURA E RELATO DOS RESULTADOS
Tempo de incubação
Leitura – contagem das colônias
interpretação dos resultados – critério de
resistência
Teste de sensibilidade

Tradicional e automatizado
 MÉTODOS CONVENCIONAIS
LOWENSTEIN JENSEN (LJ)
 LIMITAÇÕES

 PREPARO DO MEIO LJ, DAS SOLUÇÕES ESTOQUE

DE DROGAS
 DILUIÇÕES DA DROGA PARA INCORPORAÇÃO NO
MEIO LJ
 COAGULAÇÃO DO MEIO COM AS DROGAS -
POTÊNCIA DA DROGA
 MÉTODOS CONVENCIONAIS
LOWENSTEIN JENSEN (LJ)
 LIMITAÇÕES

 LEITURA – INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS POR

TÉCNICO EXPERIENTE (SUBJETIVO)
 MÉTODO DAS PROPORÇÕES –NECESSIDADE DE
FRASCOS GRANDES E SEMEADURA DE DUAS
DILUIÇÕES PARA CONTAGEM DAS COLÔNIAS O QUE
limita a capacidade resolutiva do laboratório (limita o
número de testes realizados por mês)
 TEMPO DE INCUBAÇÃO: 28 e 42 dias
 MÉTODO AUTOMATIZADO

 Princípio – Baseado no método das proporções

 Monitoramento contínuo do crescimento

 Redução do tempo do exame
 TEMPO DE INCUBAÇÃO - 5 A 12 DIAS (SIRE) E 7 A 21 DIAS (PZA)

 LISTAGEM COM INTERPRETAÇÃO DOS

RESULTADOS

 Controle maior dos fatores que influenciam a

qualidade do teste
 MÉTODO AUTOMATIZADO

 VANTAGENS
 CONTROLE DE QUALIDADE DOS MEIOS, DAS
DROGAS E DO ENRIQUECIMENTO

 A DROGA É LIOFILIZADA NA QUANTIDADE

ADEQUADA PARA UM LOTE DE 40 TESTES

 A DILUIÇÃO DAS DROGAS É FEITA COM ÁGUA

DESTILADA NO MOMENTO DO USO -
PADRONIZADA
 Validação do método
automatizado no Brasil
Giampaglia CMS, Martins MC, Vieira GBO, Vinhas AS, Telles MAS,
Palaci M, Marsico AG, Hadad DJ, Mello FCQ, Fonseca LS, Kritski A.
Multicentre evaluation of an automated BACTEC 960 system for
susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Int J Tuberc
Lung Dis 11(9):986-991, 2007.
 VALIDAÇÃO DO MÉTODO BACTEC
MGIT960 NO BRASIL
 ESTUDO COMPARATIVO EM 3 LABORATÓRIOS
USANDO AS MESMAS CEPAS EM ESQUEMA
TRIPLO CEGO
 INSTITUTO ADOLFO LUTZ – SÃO PAULO
 RAZÃO DA RESISTÊNCIA x MGIT  960
 UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPÍRITO SANTO
 BACTEC 460 x MGIT  960
 UNIVERSIDADE ESTADUAL DO RIO DE JANEIRO
 MÉTODO DAS PROPORÇÕES x MGIT  960
VALIDAÇÃO DO MÉTODO BACTEC
MGIT960 NO BRASIL
Comparação dos resultados das cepas Sensíveis e
Resistentes (Método PADRÃO* e MGIT960)
MÉTODO RESULTADO S I R E TOTAL
SEN RES SEN RES SEN RES SEN RES
PADRÃO CONCORDANTE 64 51 65 55 64 53 65 47 464
DISCORDANTE 1 10 0 1 1 2 0 4- 19
-RR 5-RR -460 -RR 1-RR 460
3-460 1-MP
2-MP
MGIT960 CONCORDANTE 65 60 64 55 65 54 65 50 478
DISCORDANTE 0 1 1 1 0 1 0 1 5
TOTAL 65 61 65 56 65 55 65 51 483
*MÉTODO USADO NOS LABORATÓRIOS ONDE FORAM REALIZADOS OS ESTUDOS
INCUBAÇÃO DOS TESTES NO
EQUIPAMENTO

Leitura única do
código de barras
para o conjunto
de tubos do TS
 REMOÇÃO DO TESTE FINALIZADO

TS FINALIZADO TS FINALIZADO
SEM ERRO DETECÇÃO ERRO

+ !
O SISTEMA
INDICA QUE O
TESTE FOI
FINALIZADO
EMISSÃO DE RELATÓRIO COM INTERPRETAÇÃO
RESULTADOS
(SENSÍVEL-S, RESISTENTE-R, ERRO)

E200
 TEMPO DE LIBERAÇÃO DOS RESULTADOS DOS
TESTES DE SENSIBILIDADE PARA M. tuberculosis
LABORATÓRIO DE MICOBACTÉRIAS DO INSTITUTO ADOLFO LUTZ
2004 E 2005

50
% N0 DE CEPAS COM RESULTADOS LIBERADOS

40
30 MGIT
20 RR
10
0

TEMPO EM DIAS DESDE O RECEBIMENTO ATÉ A LIBERAÇÃO DO RESULTADO

CULTURA
 MÉTODOS CONVENCIONAIS
LOWENSTEIN JENSEN (LJ)

 VANTAGENS

 CUSTO BAIXO – MAIS ACESSÍVEL – R$ 5,00

 Menos contaminação

 Visualização do aspecto da colônia

 MÉTODO AUTOMATIZADO
diferencial

 Redução do tempo

 Maior positividade – incremento de 20 a

30%

+
 MÉTODO AUTOMATIZADO

 LIMITAÇÕES

 CUSTO DO MEIO É ALTO

 Cultura meio líquido manual – R$ 13 a 15,00
 Cultura automatizada – R$ 19 a 25,00

 MEIO LÍQUIDO: POSSÍVEL CONTAMINAÇÃO MAIOR

 Não visualiza a colônia

CUSTO EFETIVIDADE
 CUSTO (efetividade??)
 Custo envolve :
 Infra-estrutura do laboratório (água, luz, equipamentos, limpeza,
biossegurança, etc)
 Horas de trabalho (salário)
 Categoria profissional (salário)
 Material do teste
 Efetividade envolve:
 Agilidade do resultado
 Introdução da terapia correta o mais cedo possível
 Redução de transmissão
 Redução de resistência (transmissão de resistência)
 Redução de tempo de internação
 Agilização da cura
 Evitar a morte
 CUSTOS
Meio sólido Meio líquido

•Cultura - R$ 5,00 •Cultura manual

R$ 13,00 –
•Teste de 15,00
sensibilidade •Automatizada
R$ 60,00 R$ 19,00 –
25,00
•TS automatizado
R$ 200,00
 TEMPO

 SÓLIDO  AUTOMATIZADO

 CULTURA  CULTURA
 15 a 60 dias  8 a 42 dias

 TS  TS
 30 a 42 dias  5 a 13 dias
 TB or not TB???
 Fator corda – baciloscopia
+ indicativo de TB
atípico indicativo de MNT
 PNB – ácido p-nitrobenzóico
negativo TB
positivo MNT
Monteiro PHT, Martins MC, Ueki SMY, Giampaglia CMS, Telles MAS.Cord
formation and colony morphology for the presumptive identification of
Mycobacterium tuberculosis complex. Brazilian Journal of Microbiology (2003) 34:
171-174
 Publicações

 Giampaglia CMS, Martins MC, Inumaru VTG, Butuem IV, Telles

MAS. Evaluation of a rapid differentiation test for the
Mycobacterium tuberculosis complex by selective inhibition with –
nitrobenzoic acid and thiophene-2-carboxylic acid hydrazide. Int J
Tuberc Lung Dis 9(2):206–209, 2005.

 Giampaglia CMS, Martins MC,Chimara E, Oliveira RS, Vieira GBO,

Marsico AG, Mello FCQ, Fonseca LS, Kritski A, Telles MAS.
Differentiation of Mycobacterium tuberculosis from other
mycobacteria with –nitrobenzoic acid using MGIT960. Int J
Tuberc Lung Dis 11(7):803-807, 2007.