Introduo ca Materiais e Mtodos e Resultados e Discusso a

TNA5741 - Efeitos Biolgicos das Radiaes o co

Camila Zanette

Junho/2011
Camila Zanette TNA5741 - Efeitos Biolgicos das Radiaes o co

Introduo ca Materiais e Mtodos e Resultados e Discusso a

Sumrio a

Introduo ca Prote nas Antigenicidade Objetivos Materiais e Mtodos e Resultados e Discusso a Mudanas nas propriedades estruturais c Mudanas nas propriedades imunoqu c micas

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Prote nas Antigenicidade Objetivos

Introduo ca

Esterilizao de materiais mdico-hospitalares; ca e Imobilizao de materiais bioativos; ca Irradiao de alimentos; ca etc.

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Prote nas Antigenicidade Objetivos

Prote nas
Importncia no material biolgico; a o Atividade biolgica espec o ca; Causa de alergias em alimentos;

Figura: Interao Ag-Ac ca

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Prote nas Antigenicidade Objetivos

Antigenicidade

Antigenicidade de prote nas causa alergia em comidas; Pode ser modicada pela radiao ca Aplicaes: comidas menos alergnicas, vacinas. co e

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Prote nas Antigenicidade Objetivos

Objetivos

Descrever o efeito da radiao na estrutura e nas propriedades ca imunoqu micas das prote nas usando ovalbumina e soro albumina bovina como prote nas modelo para obter dados bsicos para a a modicao de prote ca nas por radiao. ca

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Materiais Ovalbumina (OVA) Albumina de Soro Bovino (BSA) Antissoros Antissoro de coelho para OVA Antissoro para BSA comprado de Sigma Chemical Co.

Figura: Ovalbumina
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Irradiao ca Solues de Prote co nas (0,2% em Tampo Fosfato 0,01M, pH a 7,4) Irradiado Co-60 Taxas de dose 1-10 KGy/h Borbulhada com Nitrognio e Oxignio e e Imunodifuso a Anlise de Ouchternoly a 5L das amotras de Ant genos (100 150L ant geno/mL) Incubado a 25 C por 15h

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Figura: Esquema da Imunodifuso a

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Medida da Massa Molecular Espectrofotmetro a Laser o Dicro smo Circular (CD) Espectropolar metro CD espectra

Figura: CD
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Hidrofobicidade Utilizando cido cis-parinrico - Mtodo Fluorimtrico a a e e SDS-PAGE Eletroforese em gel (poliacrilamida gel)

Figura: Eletroforese em gel

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Protein Blotting PVDF Bloqueio da Reao ca Antissoro de coelho anti-IgG de coelho

Figura: Esquema da Immunoblotting (Western Blot)

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Mudanas nas propriedades estruturais c Mudanas nas propriedades imunoqu c micas

Massa Molecular

Mudana na massa c molecular O2 previne agregao ca Agregao em N2 ca e maior em BSA

Figura: Mudana na massa molecular da c OVA e BSA pela radiao. ca

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Mudanas nas propriedades estruturais c Mudanas nas propriedades imunoqu c micas

Hidrofobicidade por radiao ca

OVA - aumenta rapidamente com baixas doses e depois diminui. BSA - reduz drasticamente com baixas doses.

Figura: Mudana na hidrofobicidade da c OVA e BSA pela radiao. ca

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Mudanas nas propriedades estruturais c Mudanas nas propriedades imunoqu c micas

Hidrofobicidade por tratamento trmico e

Desnaturao das ca prote nas

Figura: Mudana na hidrofobicidade da c OVA e BSA pelo tratamento trmico e

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Mudanas nas propriedades estruturais c Mudanas nas propriedades imunoqu c micas

Hidrofobicidade
O tratamento trmico causa o e desdobramento da prote globular na S tios hidrofbicos o cam expostos e so degradados pela a radiao ca Hidrofobicidade diminui em prote nas desnaturadas
Figura: Mudana na hidrofobicidade da c OVA e BSA desnaturadas termicamente pela radiao. ca

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Mudanas nas propriedades estruturais c Mudanas nas propriedades imunoqu c micas

Elipticidade []222nm

[]nativa /[]irradiada A estrutura secundria a das prote nas e composta facilmente por radiao ca

Figura: Mudana na []222nm da OVA e c BSA pela radiao ca

Propriedades f sico-qu micas e estrutura de prote nas desnaturadas por radiao so diferentes das desnaturas por calor ca a Radiao causa alterao conformacional nas prote ca ca nas

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Mudanas nas propriedades estruturais c Mudanas nas propriedades imunoqu c micas

Figura: Imunodifuso da OVA irradiada a

OVA natural revelou um arco de precipitao claro ca Arco diminuiu de intensidade com o aumento da dose Antigenicidade perdida pela radiao e o O2 aumenta a destruio e ca ca
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Mudanas nas propriedades estruturais c Mudanas nas propriedades imunoqu c micas

Figura: Imunodifuso da BSA irradiada a

BSA mais radiossens do que a OVA em N2 e vel

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Mudanas nas propriedades estruturais c Mudanas nas propriedades imunoqu c micas

Figura: SDS-PAGE da OVA irradiada

Compostos de baixa massa molecular foram formados no in cio Induz quebra de ligao pept ca dica Fragmentos degradados da OVA Bandas com pequena mobilidade em altas doses Produo de agregados proticos ca e
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Mudanas nas propriedades estruturais c Mudanas nas propriedades imunoqu c micas

Figura: Immunoblotting da OVA irradiada

Bandas correspondentes aos fragmentos degradados so vizualizados ` a a baixas doses Reatividade foi observada mesmo em altas doses Parte principal da estrutura perdida da estrutura antignica e e conformacional com a radiao - ep ca topos Immunoblotting mais sens que o mtodo de imunodifuso e vel e a
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Mudanas nas propriedades estruturais c Mudanas nas propriedades imunoqu c micas

Ovomucide (OM) - inibidor da protease da clara do ovo o Efeito da radiao na antigenicidade e atividade inibitria da ca o tripsina Poss reduzir mais a alergenicidade da OM pela radiao do vel ca que o tratamento trmico e Deteco de ovos irradiados ca

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Obrigada