I - Assunto: BIOQUMICA : DIABETES MELLITUS II - Experimento: Glicose-Oxidase (GOD) III - Objetivo: TESTE ORAL DE TOLERNCIA GLICOSE TOTG DETERMINAO

AO DA GLICEMIA IV - Tempo previsto:

V - Materiais, equipamentos e reagentes : MATERIAL NESCESSRIO PARA AS EXPERINCIAS

VI - Metodologia TERICA: 1 - A INSULINA: - Hormnio peptdico produzido pelas clulas beta das Ilhotas de Langehars pancreticas - Formado por duas cadeias oligopeptdicas ligadas entre si por 2 pontes dissulfeto intercadeias e uma ponte dissulfeto intracadeia. - Sintetizado a partir de um pr-hormnio Pr-insulina. Pr-insulina (84 AA) Insulina (51 AA) + Peptdeo C (33 AA) - Mecanismo de ao: baseado na ligao da insulina a um receptor especfico de membrana, tetramrico e formado por 2 sub-unidades alfa e 2 sub-unidades beta. Este receptor possui ainda atividade de tiosinaquinase intrnseca, e desencadeia um efeito cascata intracelular. - A ao da insulina ainda regulada por feed-back e por outros hormnios que possuem efeitos hiperglicemiantes, como o glucagon, a adrenalina ( - glicogenlise), o cortisol e o GH hipofisrio ( gliconeognese). 2 - AES DA INSULINA: A Insulina o Hormnio central de todo o METABOLISMO INTERMEDIRIO ENERGTICO da clula carboidratos, lipdeos e aminocidos. - Aes sobre o Tecido Adiposo: - - entrada de glicose na clula - - Sntese de AG a partir de glicerol e Acetil-CoA - - Sntese de cidos Graxos - Bloqueia a liplise

Aes sobre o Tecido Muscular: - - entrada de glicose na clula - - a entrada de aminocidos e a biossntese protica - - a sntese de glicognio - Bloqueia a protelise Aes sobre o Fgado ***IMPORTANTE: O Fgado um tecido permevel glicose, e no precisa da insulina para capt-la!!! - - concentrao das enzimas da Cadeia Glicoltica - oferta de Acetil-CoA. - - biossntese protica e a protelise - a gliconeognese e a glicogenlise - a cetognese pela da liplise no tecido adiposo Efeitos sobre o Tecido Sangneo - a concentrao de glicose circulante = hipoglicemia - a concentrao de AG pela inibio da liplise no tec. Adiposo - discreta na concentrao de AA circulantes. 3 - EFEITOS GLOBAIS DAS ALTERAES METABLICAS RESULTANTES: - - da sntese de "substncias de depsito" = Protenas, glicognio e gorduras neutras - Promove a utilizao da glicose pelos tecidos perifricos e bloqueia a sntese de glicose pelo fgado. 4 - O "DIABETES MELLITUS" Doena causada pela deficincia relativa ou absoluta da insulina e, consequentemente, em ambos os casos, de seus efeitos sobre o metabolismo energtico intermedirio. Etiologia: Primria: condicionada geneticamente desencadeada por fatores externos como a obesidade ou a idade avanada. - Secundria: causada pela instalao de outra doena como por exemplo, a pancreatite e a sndrome de cushing. Patognese: 2 mecanismos principais: 1 - Destruio autoimune das clulas beta do Pncreas: Tpica do diabetes tipo I ou insulino-dependente. geralmente condicionada geneticamente, ou desencadeada por vrus / drogas. 2 - Resistncia perifrica insulina + falncia gradual das clulas beta pancreticas : Tpica do diabetes tipo II ou no insulino-dependente. Nestes casos a leso primria desconhecida. Pode ocorrer: - do nmero de receptores para a insulina - Secreo de insulina com defeito e sem ao metablica - Alteraes ps-receptores ( intracelulares) - Est freqentemente associada obesidade e/ou idade. 5 - CLASSIFICAO DO DIABETES MELLITUS Segundo o resultado do Teste Oral de Tolerncia Glicose (TOTG): 1. DM tipo I ou Insulino-dependente 2. DM tipo II ou No-Insulino-dependente ou ainda do obeso/idoso 3. DM gestacional 1 a 5 %; 30 % desenvolve DM 4. Tolerncia Diminuida glicose 6 - SNDROME DO DIABETES AGUDO: - No Msculo: - Depleo do Glicognio - - Oxidao de AG - - Degradao oxidativa de protenas

- No Tecido Adiposo: + - disposio de Acetil-CoA e NADPH+H , com da biossntese de AG e TG - da ao antilipoltica com - da degradao de TG ** No obeso, permanece a ao antilipoltica** - No Fgado: - - Oferta de glicose, AG e AA - Sntese e - degradao do glicognio - - gliconeognese a partir de AA. **H superproduo de Acetil-CoA, com o aparecimento do "fgado graxo" do diabtico. - No Sangue: - - glicemia com glicosria - - AG devido intensa liplise no tecido adiposo - - colesterolemia, LDL e VLDL circulantes, devido ao excesso de Acetil-CoA produzido e processado pelo fgado - - corpos cetnicos, pela mesma razo. 7 - SNDROME DO DIABETES CRNICO: Complicaes tardias da doena: Principalmente sobre o sistema vascular e tecido nervoso, com o surgimento de: - Macroangiopatias: Aterosclerose precoce e acentuada - Microangiopatias: Principalmente reinopatias. - Outras complicaes: Insuficincia Renal, hepatopatias, coagulopatias, maior susceptibilidade a infeces, etc. 8 - SINTOMAS DO DIABETES MANIFESTO: Diabetes Agudo: - Sinal Clssico: Hiperglicemia e glicosria - A hiperglicemia pode levar a um aumento da osmolaridade plasmtica com desidratao tecidual e eventual coma hiperosmolar, principalmente em diabticos do tipo II. Nestes casos a hiperglicemia muito acentuada ( superior a 800,0 mg/dl), e no h cetonemia importante. - Forma mais grave Coma Cetoacidtico, causado pelo excesso de corpos cetnicos no sangue. comum em diabticos do tipo I. Leva perda de sdio e potssio na urina, com conseqncias renais e cerebrais importantes. 9 - DIAGNSTICO LABORATORIAL DO DM: O DM uma doena cujo diagnstico altamente dependente dos resultados de testes laboratoriais. Entre estes testes o mais simples a mais amplamente solicitado o da Glicemia de Jejum. Resultados elevados em 2 ocasies diferentes so sugestivos de DM. A confirmao do diagnstico nestes casos tambm laboratorial: O Teste Oral de Tolerncia Glicose (TOTG) ou Curva Glicmica o procedimento de escolha para confirmao da suspeita. Uma vez confirmado o DM, existem outros exames e protocolos que auxiliam no acompanhamento e controle da doena, tais como o Perfil Glicmico e as dosagens de Hemoglobina Glicosilada e Frutosamina. VII METODOLOGIA EXPERIMENTAL A DETERMINAO DA GLICEMIA: Mtodo: Apesar da existncia de uma grande variedade de mtodos para a determinao da glicemia, hoje a grande maioria dos laboratrios emprega tcnicas enzimticas, timas em preciso, de alto rendimento e relativo baixo custo. Estas tcnicas so ainda de execuo muito simples, e compatveis com equipamentos automatizados. O mtodo mais utilizado Glicose-Oxidase (GOD): Reaes: Glicose + H2O + O2 c. Glicurnico + H2O2 H2O2 + 4-Aminofenazona + Fenol Prod. Rosa Enzimas: Glicose-oxidase Peroxidase

Amostra: Plasma com Fluoreto como anticoagulante. O fluoreto inibe a cadeia glicoltica, impedindo a utilizao da glicose pelas hemcias - 5% por hora Temp. Ambiente. O soro pode ser utilizado desde que a separao e a determinao da glicemia sejam imediatas. A coleta deve ser feita com o paciente deitado ou sentado, livre de tenses ou stress. necessrio um jejum de pelo menos 12-14 horas anterior coleta. Os interferentes so os clssicos: ictercia, lipemia e hemlise. A amostra pode ser conservada por 3 dias em geladeira. Outros lquidos biolgicos podem ser utilizados, tais como lquor, urina, etc.

VIII INTERPRETAES A Valores de Referncia: De 70,0 a 110,0 mg/dl para glicemia de jejum. Cerca de 50-60 % deste valor para lquor. A urina normal no possui glicose.

Interpretao de Dados: A glicemia de jejum o exame de escolha para triagem de pacientes na investigao de "diabetes mellitus". Pacientes com glicemia de jejum superior a 140,0 mg/dl em 2 ocasies diferentes so provveis diabticos. A confirmao da doena deve ser feita atravs de teste dinmico de tolerncia glicose Teste Oral de Tolerncia Glicose - TOTG - ou Curva Glicmica.

VII METODOLOGIA EXPERIMENTAL B

TESTE ORAL DE TOLERNCIA GLICOSE - TOTG: Princpio: A ingesto rpida pelo paciente de alta dose de glicose leva a uma ntida elevao da glicemia na primeira hora; No indivduo normal, h liberao de insulina e a glicemia volta ao normal aps 2 horas. No paciente diabtico, a sobrecarga de glicose evidencia o distrbio Aplicao do Teste: Na suspeita de DM e ausncia de sintomas clssicos - poliria, polidipsia, glicosria. Na classificao do paciente quanto sua tolerncia glicose Em pacientes com glicemia entre 110,0 e 140,0 mg/dl e histrico de DM na famlia Em pacientes com glicosria e glicemia normal Em mulheres que sofreram aborto de repetio Em pacientes com macro e microangiopatias

** Nestes casos o TOTG confirma ou elimina a suspeita de DM!!!

Descrio do Teste: Segundo a NDDG ( National Diabetis Data Group) O paciente: Jejum de 12/16 horas 3 dias de dieta prvia contendo no mnimo 150,0 g de carboidrato/dia. Durante o teste: Sem fumar ou comer e em repouso total; ingesto apenas de gua Coletar uma amostra de glicemia de jejum Administrar ao paciente sobrecarga de glicose: No adulto: 75,0 g Na gestante: At 100,0 g, critrio mdico Em crianas: 1,75 g/ kg de peso. A concentrao da soluo no deve ultrapassar 25,0 g/dl, e o tempo de ingesto deve ser inferior a 5 minutos. As coletas: A cada 30 minutos, at 120 minutos de teste - 5 amostras.

VIII INTERPRETAES B Interpretao dos Resultados: Segundo a NDDG: Paciente Normal: Glicemia de jejum inferior a 110,0 mg/dl Glicemia aps 120 minutos inferior a 140,0 mg/dl Nenhum valor durante o teste superior a 200 mg/dl Tolerncia Diminuda Glicose: Glicemia de jejum inferior a 140,0 mg/dl Glicemia aps 120 minutos entre 140,0 e 200,0 mg/dl No mximo 1 valor durante o teste superior a 200,0 mg/dl "Diabetes Mellitus": Glicemia de jejum superior a 140,0 mg/dl Todos os outros resultados da curva superiores a 200,0 mg/dl Diabetes Gestacional: 1. pelo menos 2 resultados como se segue: Glicemia de jejum superior a 105,0 mg/dl Glicemia de 1 hora superior a 190,0 mg/dl Glicemia de 2 horas superior a 165,0 mg/dl Glicemia de 3 horas superior a 145,0 mg/dl. Fatores que Influenciam no TOTG: Idade: A tolerncia glicose diminui com a idade Atividade fsica: Sedentarismo diminui a tolerncia glicose Dieta prvia: Evitar longo jejum ou dieta pobre em carboidratos Perodo do dia: A resposta ao estmulo maior tarde; recomenda-se fazer o teste sempre pela manh. Drogas: Muitas diminuem a tolerncia glicose. Por exemplo, anticoncepcionais e salicilatos. Infeces: Evitar o teste se existirem. Outras doenas: Obesidade, hiper/hipotireoidismo, disfunes do crtex supra-renal, por exemplo. ACOMPANHAMENTO DA DOENA: So vrios os testes sem valor diagnstico, mas que permitem um monitoramento muito eficiente da doena. Os principais so: Dosagem de hemoglobina glicosilada Dosagem de protenas plasmticas glicosiladas - Frutosamina Dosagem de peptdeo-C Perfil glicmico Curva glicmica abreviada.