Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria www.anvisa.gov.

br Consulta Pblica n 33, de 28 de junho de 2011

A Diretoria Colegiada da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, no uso da atribuio que lhe confere o inciso IV do art. 11 do Regulamento da ANVISA, aprovado pelo Decreto n. 3.029, de 16 de abril de 1999, c/c o inciso II, e 1 e 3 do art. 54 do Regimento Interno aprovado pela Portaria n. 354 da ANVISA, de 11 de agosto de 2006, republicada em 21 de agosto de 2006 em reunio realizada em 21 de junho de 2011, adota a seguinte Consulta Pblica e eu, Diretora-Presidente Substituta, determino a sua publicao: Art. 1 Fica aberto, a contar da data de publicao desta Consulta Pblica, o prazo de 60 (sessenta) dias para que sejam apresentadas crticas e sugestes relativas proposta de Resoluo que dispe sobre os requisitos mnimos para a validao de mtodos bioanalticos, em Anexo. Art. 2 Informar que a proposta de Resoluo est disponvel na ntegra no stio da Anvisa na internet e que as sugestes devero ser encaminhadas por escrito, em formulrio prprio, para um dos seguintes endereos: Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria/ Coordenao de Bioequivalencia COBIO, SIA Trecho 5, rea Especial 57, Braslia- DF, CEP 71.205-050; ou para o Fax: (61) 3462-5562; ou para o e-mail: cp33.2011@anvisa.gov.br. 1 A documentao objeto dessa Consulta Pblica e o formulrio para envio de contribuies permanecero disposio dos interessados no endereo http://www.anvisa.gov.br/divulga/consulta/index.htm. 2 As contribuies recebidas sero pblicas e permanecero disposio de todos no stio da Anvisa na internet. 3 As contribuies no enviadas no formulrio de que trata o pargrafo anterior ou recebidas fora do prazo no sero consideradas para efeitos de consolidao do texto final do regulamento. Art. 3 Findo o prazo estipulado no art. 1 a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria poder articularse com os rgos e entidades envolvidos e aqueles que tenham manifestado interesse na matria, para que indiquem representantes nas discusses posteriores, visando consolidao do texto final. Pargrafo nico. A consolidao do texto final do regulamento e o Relatrio de Anlise de Contribuies sero disponibilizados no stio da Anvisa na internet aps a deliberao da Diretoria Colegiada.

MARIA CECILIA MARTINS BRITO ANEXO PROPOSTA DE RESOLUO EM CONSULTA PBLICA Resoluo da Diretoria Colegiada - RDC n Dispe sobre os requisitos mnimos para a validao de mtodos bioanalticos empregados em estudos com fins de registro e ps-registro de medicamentos. A Diretoria Colegiada da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, no uso da atribuio que lhe confere o inciso IV do art. 11 do Regulamento aprovado pelo Decreto n 3.029, de 16 de abril de 1999, e tendo em vista o disposto no inciso II e nos 1 e 3 do art. 54 do Regimento Interno aprovado nos termos do Anexo I da Portaria n 354 da ANVISA, de 11 de agosto de 2006, republicada no DOU de 21 de agosto de 2006, em reunio realizada em ___ de _________ de 20__,

adota a seguinte Resoluo de Diretoria Colegiada e eu, Diretor-Presidente, determino a sua publicao: CAPTULO I DAS DISPOSIES INICIAIS Seo I Objetivo Art. 1 Esta Resoluo possui o objetivo de estabelecer os requisitos mnimos para a validao de mtodos bioanalticos empregados em estudos para registro e ps-registro de medicamentos no Brasil.

Seo II Definies Art. 2 Para efeito desta Resoluo so adotadas as seguintes definies: I- amostra branco: amostra de matriz processada isenta de analito e padro interno; II- amostra de controle de qualidade (CQ): amostra de matriz adicionada do analito, usada para validar e monitorar o desempenho de um mtodo bioanaltico; III- amostra de controle de qualidade de alta concentrao (CQA): amostra de matriz adicionada do analito em concentrao entre 75 (setenta e cinco) e 85% (oitenta e cinco por cento) da maior concentrao da curva de calibrao; IV- amostra de controle de qualidade de baixa concentrao (CQB): amostra de matriz adicionada do analito em concentrao at 3 (trs) vezes o limite inferior de quantificao do mtodo (LIQ); V- amostra de controle de qualidade de diluio (CQD): amostra de matriz adicionada do analito em concentrao acima da maior concentrao da curva de calibrao (LSQ), analisada por meio de procedimento e proporo de diluio pr-definidos e especificados pelo laboratrio bioanaltico; VI- amostra de controle de qualidade de mdia concentrao (CQM): amostra de matriz adicionada do analito em concentrao entre CQB e CQA; VII- amostra de controle de qualidade do limite inferior de quantificao (CQLIQ): amostra de matriz adicionada do analito em concentrao igual ao limite inferior de quantificao (LIQ); VIII- amostra em estudo: amostra biolgica que objeto de anlise; IX- amostra hemolisada: amostra biolgica contendo hemcias lisadas em grau pr-definido e especificado pelo laboratrio bioanaltico; X- amostra lipmica: amostra com alto teor de lipdeos, proveniente de coleta ps prandial; XI- amostra processada: amostra pronta para anlise instrumental; XII- amostra zero: amostra de matriz processada com adio apenas de padro interno (PI); XIII- amostras de fontes distintas: amostras biolgicas originadas de diferentes indivduos ou de diferentes lotes de mistura de amostras; XIV- analito: composto qumico especfico a ser mensurado em uma matriz biolgica; XV- corrida analtica das amostras em estudo: anlise de um conjunto de amostras processadas sob as mesmas condies, com quantificao por meio da mesma curva de calibrao e validada pelos mesmos CQs; XVI- curva de calibrao: equao que representa a relao entre a resposta do instrumento e a concentrao conhecida do analito; XVII- efeito matriz: o efeito na resposta do analito ou PI causado por componentes da matriz biolgica; XVIII- efeito residual (carryover): aumento do sinal do analito ou PI causado por contaminao proveniente de amostras analisadas anteriormente; XIX- estudo de estabilidade: ensaio que visa determinar se a concentrao de um analito se mantm dentro de limites especficos, numa dada matriz, sob condies especficas; XX- exatido: concordncia entre o resultado de um ensaio e um valor de referncia; XXI- limite inferior de quantificao (LIQ): menor concentrao do analito na curva de calibrao preparada na matriz; XXII- limite superior de quantificao (LSQ): maior concentrao do analito na curva de calibrao preparada na matriz; XXIII- matriz: meio no qual os analitos em estudo sero quantificados; XXIV- matriz biolgica: matriz de origem biolgica no qual os analitos em estudo sero quantificados; XXV- matriz substituta: matriz que substitui a matriz biolgica das amostras em estudo; XXVI- mtodos bioanalticos: mtodos analticos utilizados na determinao quantitativa de analitos em matrizes biolgicas; XXVII- mtodos cromatogrficos: mtodos que empregam cromatografia para separar o analito de outros componentes da amostra;

XXVIII- padro de calibrao: matriz qual foi adicionada uma quantidade conhecida de analito, utilizado para construir a curva de calibrao; XXIX- padro interno (PI): composto qumico adicionado em uma mesma quantidade aos padres de calibrao, CQs e amostras em estudo, proveniente de uma soluo padro de mesma concentrao; XXX- preciso: proximidade dos resultados obtidos em uma srie de medidas de uma amostragem mltipla de uma mesma amostra; XXXI- seletividade: capacidade do mtodo de diferenciar e quantificar o analito e PI na presena de outros componentes da amostra; XXXII- soluo primria: soluo preparada a partir da diluio do padro do analito ou padro interno; XXXIII- soluo de trabalho: soluo preparada a partir da diluio da soluo primria; XXXIV- substncia qumica caracterizada: substncia de referncia utilizada na inexistncia de uma substncia de referncia farmacopeica, devendo ser caracterizada por meio de ensaios adequados cujos resultados devem ser devidamente documentados; XXXV- substncia qumica de referncia farmacopica: substncia ou mistura de substncias estabelecidas e distribudas pela Farmacopia Brasileira ou por outros cdigos reconhecidos, conforme a legislao vigente, devendo possuir alto grau de pureza e uniformidade; XXXVI- substncia qumica de trabalho: substncia ou mistura de substncias estabelecidas por comparao com uma substncia qumica de referncia (SQR), por meio de ensaios farmacopeicos ou devidamente validados e registrados; XXXVII- validao: confirmao, por meio de estudos experimentais, de que os requisitos especficos para um determinado uso pretendido so atendidos; XXXVIII- validao parcial: realizao de parte dos ensaios da validao total em decorrncia de modificao no mtodo bioanaltico validado; e XXXIX- validao total: realizao de todos os ensaios de validao de um mtodo bioanaltico.

CAPTULO II DAS DISPOSIES GERAIS Art. 3 Para molculas passveis de anlise por mtodos cromatogrficos, estes devem ser a primeira escolha. Pargrafo nico. Na hiptese do caput deste artigo, caso no seja utilizado um mtodo cromatogrfico, deve ser apresentada justificativa tcnica. Art. 4 Deve ser utilizado PI sempre que mtodos cromatogrficos forem empregados. Pargrafo nico. Para mtodos no cromatogrficos, o uso de PI pode ser dispensado desde que justificado tecnicamente. Art. 5 Os ensaios podem ser ajustados ou modificados quando utilizadas tcnicas alternativas, devendo-se buscar aplicar os fundamentos desta Resoluo. Art. 6 Antes da implementao de um mtodo bioanaltico, deve ser realizada validao total. 1 A validao deve conter ensaios de preciso, exatido, curva de calibrao, efeito residual, efeito matriz, seletividade e estabilidade conforme as especificaes de cada ensaio. 2 O estudo de estabilidade de longa durao pode ser concludo aps a anlise das amostras em estudo, desde que iniciado antes da anlise da primeira amostra. Art. 7 Sempre que ocorrerem modificaes no mtodo bioanaltico j validado, deve ser realizada validao parcial. Pargrafo nico. Quando o impacto da modificao for desconhecido, deve ser realizada a validao total. Art. 8 Devem ser utilizadas, preferencialmente, substncias qumicas de referncia. Pargrafo nico. Substncias qumicas caracterizadas, ou de trabalho, podem ser admitidas, desde que sejam minimamente determinados a identidade, o teor, o perfil quantitativo de impurezas e a data de validade.

CAPTULO III DOS ENSAIOS DE VALIDAO Seo I Seletividade Art. 9. Devem ser analisadas amostras da matriz biolgica obtidas de, no mnimo, 6 (seis) fontes distintas. 1 Quando a matriz biolgica for plasma, devem ser empregadas 4 (quatro) amostras normais, uma lipmica e uma hemolisada. 2 Quando a matriz biolgica for sangue total, devem ser empregadas 5 (cinco) amostras normais e uma lipmica.

 3 Quando forem utilizadas outras matrizes biolgicas, suas caractersticas devem ser avaliadas e testadas. Art. 10. Os resultados devem ser comparados com aqueles obtidos de amostras do LIQ. 1 As respostas de picos interferentes no tempo de reteno do analito devem ser inferiores a 20% (vinte por cento) da resposta do analito nas amostras do LIQ. 2 As respostas de picos interferentes no tempo de reteno do PI devem ser inferiores a 5 % (cinco por cento) da resposta do PI nas amostras do LIQ. Art. 11. Caso uma ou mais amostras analisadas apresentem interferncia significativa no tempo de reteno do analito ou PI, novas amostras de, no mnimo, outras seis fontes distintas devem ser testadas. Pargrafo nico. Caso uma ou mais amostras do segundo grupo apresentem interferncia significativa, o mtodo deve ser alterado visando elimin-la. Art. 12. A interferncia de outros frmacos, metablitos, produtos de degradao formados durante o preparo da amostra, nicotina, cafena e outros possveis interferentes deve ser avaliada sempre que necessrio. Art. 13. A possibilidade de converso de um metablito no composto original durante os procedimentos da anlise deve ser avaliada e controlada sempre que necessrio. Seo II Efeito residual Art. 14. Devem ser injetadas, no mnimo, 3 (trs) amostras branco logo aps a injeo de uma ou mais amostras do LSQ. 1 Os resultados devem ser comparados com aqueles obtidos de amostras do LIQ. 2 As respostas de picos interferentes no tempo de reteno do analito devem ser inferiores a 20% (vinte por cento) da resposta do analito nas amostras do LIQ. 3 As respostas de picos interferentes no tempo de reteno do PI devem ser inferiores a 5 % (cinco por cento) da resposta do PI nas amostras do LIQ. Art. 15. Se o efeito residual for inevitvel, procedimentos especficos devem ser adotados na execuo do mtodo com o objetivo de controlar seu efeito, evitando que a preciso e a exatido do mtodo sejam afetadas. Seo III Efeito matriz Art. 16. As matrizes biolgicas devem ser processadas e, ento, adicionadas de analito e PI na mesma concentrao do CQB e CQA. 1 Quando a matriz biolgica for plasma, devem ser analisadas 8 (oito) amostras plasma de fontes distintas adicionadas de analito e PI, sendo quatro normais, duas lipmicas e duas hemolisadas. 2 Quando a matriz biolgica for sangue total, devem ser analisadas 6 (seis) amostras de sangue de fontes distintas adicionadas de analito e PI, sendo 4 (quatro) normais e 2 (duas) lipmicas. 3 Quando outras matrizes biolgicas forem utilizadas, devem ser analisadas 6 (seis) amostras de fontes distintas adicionadas de analito e PI. Art. 17. Para cada amostra deve ser obtido o fator de matriz normalizado por PI (FMN), conforme a frmula a seguir: FMN= Resposta do analito em matriz/Resposta do PI em matriz Resposta do analito em soluo/Resposta do PI em soluo Art. 18. O Coeficiente de variao (CV) dos FMNs relativos a todas as amostras deve ser inferior a 15% (quinze por cento). Pargrafo nico. Caso o CV dos FMNs relativos a todas as amostras de plasma seja superior a 15% (quinze por cento) devido ao resultado discrepante das amostras hemolisadas, novo CV dos FMNs sem estas amostras pode ser calculado e as amostras em estudo hemolisadas no podero ser analisadas. Art. 19. Amostras em estudo com grau de hemlise superior ao grau de hemlise aprovado neste teste no podero ser analisadas. Art. 20. Caso a metodologia bioanaltica no permita a avaliao do efeito matriz conforme descrito acima, deve ser aplicado procedimento alternativo. Seo IV Curva de calibrao

Art. 21. Deve ser construda uma curva de calibrao que inclua a anlise da amostra branco, da amostra zero e de, no mnimo, 6 (seis) amostras de diferentes concentraes do padro do analito adicionadas de PI. Pargrafo nico. As amostras da curva de calibrao devem ser inicialmente adicionadas do padro do analito e do PI e depois serem submetidas ao mesmo procedimento de preparao a que sero submetidas as amostras em estudo. Art. 22. A curva de calibrao deve ser construda utilizando-se a mesma matriz proposta para o estudo. Art.23. Deve ser apresentada justificativa cientfica para a faixa de concentrao contemplada pela curva de calibrao. Art. 24. Deve ser apresentada a equao que representa a relao entre a resposta do instrumento e as concentraes conhecidas do analito. 1 As respostas das amostras branco e zero no devem ser utilizadas na construo da equao. 2 Deve ser adotado preferencialmente o modelo matemtico mais simples, geralmente o linear. 3 Caso seja proposto um modelo no linear, deve ser demonstrado matematicamente que o modelo linear no adequado. 4 Para modelos no lineares devem ser includas no mnimo 8 (oito) amostras de diferentes concentraes na curva de calibrao. 5 Caso a varincia do erro no seja constante em toda a faixa de quantificao do mtodo analtico, deve ser utilizada a ponderao que apresentar o menor valor para soma dos erros relativos dos valores nominais dos padres de calibrao versus seus valores obtidos pela equao da curva. 6 A equao da curva no deve incluir padres de calibrao que no atendam aos critrios de aprovao. 7 Quando um padro de calibrao no for aprovado, a curva de calibrao deve ser recalculada sem este padro. 8 Quando um padro de calibrao atender aos critrios de aprovao, este no deve ser excludo da equao da curva. Art. 25. Os padres de calibrao esto aprovados quando atenderem aos seguintes critrios: I - desvio menor ou igual a 20% (vinte por cento) em relao concentrao nominal para os padres do LIQ; e II - desvio menor ou igual a 15% (quinze por cento) em relao concentrao nominal para os outros padres de calibrao. Art. 26. A curva de calibrao deve atender aos seguintes critrios para ser aprovada: I - no mnimo 75% (setenta e cinco porcento) dos padres de calibrao aprovados conforme os critrios anteriores; e II - no mnimo 6 (seis) padres de calibrao de concentraes diferentes, incluindo o LIQ e o LSQ, aprovados conforme os critrios anteriores. Seo V Preciso Art. 27. A preciso deve ser determinada em uma mesma corrida (preciso intracorrida) e em, no mnimo, 3 (trs) corridas diferentes (preciso intercorridas). 1 Em cada corrida devem ser realizadas, no mnimo, 5 (cinco) determinaes em, pelo menos, 5 (cinco) concentraes: CQLIQ, CQB, CQM, CQA e CQD. 2 Todos os valores obtidos devem ser includos no clculo da preciso intracorrida e intercorridas. Art. 28. A preciso deve ser expressa como desvio padro relativo (DPR) ou coeficiente de variao (CV%), no se admitindo valores superiores a 15% (quinze por cento), exceto para o LIQ, para o qual se admite valores menores ou iguais a 20% (vinte por cento), segundo a frmula a seguir: CV% = Desvio padro Concentrao mdia experimental X 100

Pargrafo nico. O CV da preciso intercorridas deve ser calculado com base em todos os valores obtidos. Seo VI Exatido Art. 29. A exatido deve ser determinada em uma mesma corrida analtica (exatido intracorrida) e em corridas diferentes (exatido intercorridas). 1 Em cada corrida devem ser realizadas, no mnimo, 5 (cinco) determinaes em, pelo menos, 5 (cinco) concentraes: CQLIQ, CQB, CQM, CQA e CQD. 2 Todos os valores obtidos devem ser includos no clculo da exatido intracorrida e intercorridas.

Art. 30. A exatido expressa pela relao entre a concentrao mdia determinada experimentalmente e a concentrao terica correspondente, no se admitindo valores mdios fora da faixa de 85% (oitenta e cinco por cento) a 115% (cento e quinze por cento) do valor nominal, exceto para o CQLIQ para o qual no se admitem valores mdios fora da faixa de 80% (oitenta por cento) a 120% (cento e vinte por cento) do valor nominal, segundo a frmula a seguir: Concentrao mdia experimental Valor nominal

Exatido =

X 100

Art. 31. No mnimo 67% (sessenta e sete por cento) das replicatas de cada concentrao devem apresentar desvio inferior a 15% (quinze por cento) do valor nominal, exceto para as replicatas do CQLIQ, para o qual se admitem desvios menores ou iguais a 20% (vinte por cento). Seo VII Estabilidade do analito em matriz biolgica Art. 32. Deve ser demonstrada a estabilidade do analito na matriz biolgica por meio dos seguintes ensaios: I - ensaio de estabilidade aps ciclos de congelamento e descongelamento; II - ensaio de estabilidade de curta durao; III- ensaio de estabilidade de longa durao; e IV- ensaio de estabilidade ps-processamento. Art. 33. As condies de realizao dos ensaios de estabilidade devem reproduzir as condies de coleta, armazenamento, preparo e anlise das amostras em estudo. Art. 34. Os ensaios de estabilidade devem utilizar um conjunto de amostras de matriz biolgica adicionadas de solues recm preparadas do analito, PI e o mesmo anticoagulante a ser usado nas amostras em estudo. Art. 35. Devem ser empregadas, no mnimo, 3 (trs) amostras de CQB e CQA, as quais devem ser analisadas imediatamente aps serem submetidas s condies de ensaio aplicveis. Art. 36. A concentrao das amostras deve ser determinada por meio de uma curva de calibrao recm preparada. Art. 37. A estabilidade demonstrada quando no se observar desvio superior a 15% (quinze por cento) da mdia das concentraes obtidas com relao ao valor nominal. Pargrafo nico. Todas as concentraes obtidas devem ser includas no clculo da mdia. Subseo I Estabilidade aps ciclos de congelamento e descongelamento Art. 38. As amostras devem ser congeladas temperatura indicada para o armazenamento e mantidas por, no mnimo 24 (vinte e quatro) horas, sendo ento submetidas ao descongelamento temperatura ambiente. 1 Quando completamente descongeladas, as amostras devem ser novamente congeladas temperatura indicada para o armazenamento por 12 (doze) a 24 (vinte e quatro) horas, e assim sucessivamente, quantificando-se o analito nas amostras aps o ltimo ciclo. 2 O nmero de ciclos de congelamento e descongelamento deve ser igual ou maior ao nmero de ciclos a que sero submetidas as amostras em estudo. Subseo II Estabilidade de curta durao Art. 39. As amostras do ensaio de estabilidade de curta durao devem ser analisadas aps permanecerem em temperatura ambiente, ou na temperatura de processamento estabelecida para o mtodo bioanaltico, por tempo superior ao que as amostras em estudo sero mantidas nas mesmas condies durante o estudo. Subseo III Estabilidade de longa durao Art. 40. As amostras devem ser analisadas aps serem armazenadas por perodo que exceda o intervalo de tempo compreendido entre a coleta da primeira amostra em estudo e a anlise da ltima. Pargrafo nico. A temperatura utilizada no ensaio deve reproduzir a temperatura a que forem armazenadas as amostras em estudo. Subseo IV

Estabilidade ps-processamento Art. 41. As amostras devem ser processadas e mantidas sob as mesmas condies de anlise das amostras em estudo. Pargrafo nico. O perodo deve ser superior durao da corrida analtica mais longa em que o mtodo for empregado. Seo VIII Estabilidade das solues-padro Art. 42. Deve ser demonstrada a estabilidade das solues-padro do analito e do PI nas concentraes empregadas no estudo (soluo primria e solues de trabalho) por tempo superior ao perodo de uso ou armazenamento das mesmas. 1 As solues devem ser analisadas aps serem mantidas sob as mesmas condies de temperatura e armazenamento a que sero submetidas as solues utilizadas no estudo. 2 A estabilidade das solues primria e de trabalho deve ser testada por meio de uma diluio apropriada levando-se em considerao a linearidade do mtodo bioanaltico e a faixa de medio do detector. 3 As respostas instrumentais provenientes das solues em estudo devem ser comparadas com aquelas obtidas utilizando-se solues recm preparadas do analito e do PI. 4 Caso a anlise seja feita em replicata, devem ser comparadas as mdias das respostas da soluo em estudo e da soluo recm preparada. Art. 43. As solues sero consideradas estveis quando no se observar desvio superior a 10% (dez por cento) do valor obtido das solues recm preparadas. Seo IX Mtodos em que a matriz biolgica isenta de analito no est disponvel Art. 44. Quando a matriz biolgica isenta do analito no estiver disponvel a seletividade deve ser testada pela comparao das inclinaes de, no mnimo, 6 (seis) curvas de adio padro em 6 (seis) amostras de fontes distintas de matriz biolgica (contendo um nvel basal do analito) e da curva padro em soluo ou matriz substituta. 1 O mtodo considerado seletivo se as inclinaes das curvas no forem significativamente diferentes. 2 Deve ser definido previamente um modelo estatstico para comparao das inclinaes. Art. 45. Quando a matriz biolgica isenta do analito no estiver disponvel, os ensaios de validao da curva de calibrao, preciso e exatido podem ser realizados utilizando padres de calibrao e CQs em soluo ou matriz substituta, desde que atendido ao disposto no art. 44. Pargrafo nico. Para a corrida analtica das amostras em estudo, devem ser utilizados padres de calibrao e CQs na mesma matriz empregada na validao. Art. 46. Os estudos de estabilidade em matriz biolgica devem ser realizados na mesma matriz biolgica das amostras em estudo e os resultados avaliados de acordo com um dos procedimentos a seguir: I - comparao das concentraes obtidas das amostras recm-preparadas com as obtidas das mesmas amostras aps o perodo de estabilidade em estudo; ou II - comparao com os valores nominais, desde que a matriz seja previamente analisada e o nvel basal do analito completado a fim de atingir as concentraes do CQB e CQA. CAPTULO IV CRITRIOS DE APLICAO DO MTODO VALIDADO Art. 47. O mtodo aplicado anlise das amostras em estudo deve ser o mesmo mtodo validado, incluindo a utilizao do mesmo anticoagulante, tcnica de extrao e condies analticas. Art. 48. Cada corrida analtica das amostras em estudo deve conter: I - curva de calibrao; II - amostras de CQB, CQM e CQA; e III - amostras em estudo de um ou mais voluntrios do estudo. 1 Todas as amostras devem ser processadas e extradas como um nico lote. 2 Todas as amostras de um mesmo voluntrio devem ser analisadas numa mesma corrida, com exceo das amostras de reanlise. 3 O nmero de amostras de CQB, CQM e CQA a ser incorporado em cada corrida analtica no deve ser inferior a 5% (cinco por cento) do nmero de amostras em estudo e no deve ser inferior a 6 (seis) CQs, sendo uma duplicata de cada concentrao. 4 No caso de corridas de reanlise com amostras diludas, devem ser includas amostras de CQD.

 5 As amostras de CQB, CQM, CQA e CQD devem ser distribudas entre as amostras em estudo de forma balanceada na corrida analtica, sempre em igual nmero de replicatas de cada concentrao. Art. 49. Devem ser consideradas apenas as concentraes quantificadas entre o LIQ e o LSQ. 1 Amostras de concentraes superiores ao LSQ devem ser diludas e reanalisadas. 2 Concentraes abaixo do LIQ devem ser consideradas como zero. Art. 50. Para aprovao da corrida analtica, no mnimo 67% (sessenta e sete por cento) do total de CQs e no mnimo 50% (cinquenta por cento) dos CQs de cada concentrao devem apresentar desvio menor ou igual a 15% (quinze por cento) em relao aos seus respectivos valores nominais. CAPTULO V REANLISE Art. 51. As amostras em estudo devem ser reanalisadas quando: I - apresentarem concentrao acima do LSQ; II - apresentarem problemas analticos que impossibilitem ou invalidem a quantificao; ou III - apresentarem resposta do analito acima do LIQ em amostras do tempo pr-dose. Art. 52. No devem ser realizadas reanlises por motivos farmacocinticos. Art. 53. No devem ser realizadas reanlises de padres de calibrao e CQs. Art. 54. Os procedimentos relativos reanlise devem estar pr-estabelecidos em procedimento operacional padro. CAPTULO V DAS DISPOSIES FINAIS E TRANSITRIAS Art. 55. Fica revogada a Seo Mtodos Bioanalticos do Anexo da Resoluo-RE 899 de 9 de maio de 2003 e a alnea d do Item 2 do Anexo da Resoluo-RE 1170, de 19 de abril de 2006. Art. 56. O descumprimento das disposies contidas nesta resoluo constitui motivo para reprovao de estudos bioanalticos protocolados na ANVISA com fins de registro e ps-registro de medicamentos. Art. 57. Esta resoluo entra em vigor em 180 (cento e oitenta) dias aps sua publicao.

DIRCEU BRS APARECIDO BARBANO