IBP1894_12 VALIDAO DE METODOLOGIA ANALTICA APLICADA A DETERMINAO DOS COMPONENTES DO GS NATURAL. Elizandra C.S. Elias1, Cristiane R.

Augusto1, Claudia C. Ribeiro1, Denise C.G.S. Teixeira1, Andreia L. Fioravante1, Ftima A. Fagundes1, Marceli C. Silva1
Copyright 2012, Brazilian Petroleum, Gas and Biofuels Institute - IBP
This Technical Paper was prepared for presentation at the Rio Oi & Gas Expo and Conference 2012, held between September, 1720, 2012, in Rio de Janeiro. This Technical Paper was selected for presentation by the Technical Committee of the event according to the information contained in the final paper submitted by the author(s). The organizers are not supposed to translate or correct the submitted papers. The material as it is presented, does not necessarily represent Brazilian Petroleum, Gas and Biofuels Institute opinion, or that of its Members or Representatives. Authors consent to the publication of this Technical Paper in the Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012 Proceedings.

Resumo
A validao de mtodos analticos um dos requisitos mais importantes na implantao do sistema da qualidade. O objetivo do presente trabalho consiste no desenvolvimento e validao de uma metodologia analtica para determinao da composio dos principais componentes do gs natural por cromatografia gasosa. Dois cromatgrafos a gs foram selecionados para a determinao da composio desta amostra, permitindo uma comparao dos resultados: um cromatgrafo a gs especialmente configurado para anlise de gs natural de acordo com os requisitos da Norma ISO 6974:2000 Natural Gas Determination of composition with defined uncertainty by gas chromatography, bem como uma metodologia analtica previamente validada atravs de participaes em comparaes internacionais (CCQM-K23 a, b e c) para anlise destes componentes; e um micro cromatgrafo a gs. Procedeu-se comparao dos resultados obtidos pela anlise no equipamento com a metodologia previamente validada e dos resultados obtidos atravs da nova metodologia analtica desenvolvida para determinao dos mesmos componentes do gs natural utilizando-se o micro cromatgrafo. Os resultados obtidos foram analisados segundo os critrios descritos pela Norma ISO 5725:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results partes 1 e 2 e o clculo da estimativa da incerteza de medio seguiu a metodologia descrita na Norma ISO 6143:2001 Gas analysis Comparison methods for determining and checking the composition of calibration gas mixtures. Os resultados analticos obtidos foram satisfatrios, apresentando um desvio relativo de aproximadamente 1% em relao ao valor certificado.

Abstract
The validation of an analytical method is one of the most important requirements to implement a quality control system in any analytical laboratory. This paper aims to present the development and validation process of an analytical methodology to study the composition of the main components of natural gas using gas chromatography. Two GC systems were selected for the determination of the chemical composition in a natural gas sample to compare the results. The first equipment was a GC CP 3800SP, Varian, with specific configuration to analyze natural gas, according to the ISO 6974:2000 Natural Gas Determination of composition with defined uncertainty by gas chromatography, using a previously methodology validated. The second one was a Micro GC 4900, Varian, using a new analytical methodology developed to analyze the same components of natural gas. The results obtained in both equipments for the same natural gas sample, were compared and analyzed according to the ISO 5725:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results parts 1 e 2. The standard uncertainty of measurement was calculated according to the ISO 6143:2001 Gas analysis Comparison methods for determining and checking the composition of calibration gas mixtures. The analytical results obtained were satisfied, with a relative standard deviation of 1% comparing to de certified value.

______________________________ 1,2 Doctor, - Inmetro 3 Specialist, Inmetro 4,5 Master, Inmetro 6,7 Bachelor in Chemistry - Unigranrio

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1. Introduo
A validao de metodologias analticas um requisito crucial para que os laboratrios possam demonstrar e comprovar que seus ensaios conduzem a resultados analticos confiveis e adequados aos objetivos pretendidos (DOQCGCRE-008, rev. 04:2011 - Orientao sobre validao de mtodos de ensaios qumicos). Pode ser definido como o processo que confere validade a um mtodo analtico, instrumento ou equipamento, cujas especificaes so aceitas como corretas, conferindo confiabilidade aos resultados obtidos (Leite, 2008; Guia EURACHEM, 2002). Em geral, o resultado de uma medio somente uma aproximao ou estimativa do valor do mensurando e este s ser completo quando acompanhado pela declarao da incerteza das estimativas da medio. Sendo assim, quando se relata o resultado de medio de uma grandeza, obrigatrio que seja dada alguma indicao quantitativa da qualidade do resultado, de forma tal que aqueles que o utilizam possam avaliar sua confiabilidade. Sem essa indicao, resultados de medies no podem ser comparados, seja entre eles mesmos ou com valores de referncia fornecidos numa especificao ou numa norma. , portanto, necessrio que haja um procedimento prontamente implementado para caracterizar a qualidade de um resultado de uma medio (Borges, 2004). Segundo a norma ABNT NBR ISO/IEC 17025:2005, a validao de mtodos analticos comprova atravs de evidncias objetivas que requisitos para uma determinada aplicao ou uso especfico esto sendo atendidos. A validao de um mtodo estabelece, por meio de estudos sistemticos de laboratrio, que o mtodo adequado finalidade, isto , suas caractersticas de desempenho so capazes de produzir resultados correspondentes s necessidades de problema analtico (Anvisa, 2008). Ter um resultado validado significa que o procedimento, que abrange desde as condies operacionais do equipamento at todo o procedimento analtico, seja confivel e aceito como correto. Para tanto, necessrio que os laboratrios disponham de meios e critrios objetivos para demonstrar que os mtodos utilizados conduzem a resultados confiveis, e que garantam a qualidade e a credibilidade de seus produtos ou servios com base nas normas de credenciamento estabelecidas por rgos responsveis (Leite, 2008). As caractersticas de desempenho de um mtodo de ensaio devem estar claramente declaradas em um procedimento documentado e compreendem: a especificidade e a seletividade; a faixa de trabalho e a faixa linear de trabalho; a linearidade; a sensibilidade; os limites de deteco e de quantificao; a exatido e a tendncia (bias); a preciso; a robustez e a incerteza de medio. A aplicao de testes estatsticos adequados, tais como: T de Student, Fisher, Cochran, Grubbs, ANOVA, testes de hipteses, torna as decises menos subjetivas fazendo com que o processo de validao seja mais objetivo, fcil de demonstrar e implementar (Borges, 2004). No Brasil, o Instituto Nacional de Metrologia, Qualidade e Tecnologia (Inmetro) disponibiliza um guia para procedimento de validao de mtodos analticos com orientaes sobre validao de mtodos de ensaios qumicos, o DOQ-CGRE-008, rev. 04 (2011), que reuniu as principais normas, a fim de auxiliar os laboratrios na tarefa de demonstrar que um mtodo de ensaio qumico, nas condies em que praticado, e tem as caractersticas necessrias para a obteno de resultados de medio com a qualidade exigida. Deste modo, autores sugerem que o planejamento e a execuo da validao possam seguir da seguinte forma (DOQ-CGRE-008, rev. 04, 2011; Leite, 2008; ABNT NBR ISO/IEC 17025: 2005): Definir a aplicao, o objetivo e o escopo do mtodo; Desenvolver um procedimento operacional para validao; Definir os experimentos de validao; Verificar se as caractersticas de desempenho do equipamento esto compatveis com o exigido pelo mtodo em estudo; Verificar a disponibilidade dos materiais que sero utilizados (padres e amostras); Executar os experimentos preliminares de validao; Ajustar os parmetros do mtodo e/ou critrios de aceitao, caso seja necessrio; Desenvolver um procedimento operacional para execuo de rotina do mtodo; Definir critrios de revalidao, caso haja mudanas de pessoal, parmetros operacionais do equipamento, periodicidade de uso e etc; Definir o tipo e frequncia de verificaes de controle de qualidade das medies analticas para a rotina de trabalho. Portanto, o presente trabalho tem como objetivo apresentar um modelo de validao de metodologias analticas, desenvolvidas pelo Laboratrio de Anlise de Gases (Labag) da Diviso de Metrologia Cientfica e Industrial (DIMCI) do Inmetro, para a determinao da concentrao dos componentes presentes em amostras de gs natural por meio da tcnica de cromatografia gasosa (CG). O gs natural tem excelentes caractersticas tcnicas, econmicas e ambientais, permitindo que este combustvel se apresente como alternativa para a matriz energtica do pas. A comercializao do gs natural exige o 2

Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012 controle das suas caractersticas fsico-qumicas em funo do mercado consumidor. Assim, existe a necessidade de que os ensaios produzam resultados confiveis e rastreveis, por meio de mtodos analticos devidamente validados, propiciando a reduo dos custos associados produo de bens e servios, mediante a sistematizao, racionalizao e ordenao dos processos, com a conseqente economia para clientes e fornecedores (Loureno, 2003).

2. Materiais e Mtodos
Foram utilizados dois cromatgrafos gasosos com configuraes distintas entre si para a determinao da composio qumica da amostra de gs natural, permitindo, assim a comparao dos resultados obtidos. Dentre os equipamentos utilizados, destacam-se o cromatgrafo gasoso, modelo CG CP3800SP, da marca VARIAN (Figura 1), espacialmente configurado para a anlise de gs natural, conforme os requisitos da Norma ISO 6974:2000 Natural Gas Determination of Composition with defined uncertainty by gas chromatography, bem como uma metodologia analtica previamente validada atravs de participaes em comparaes internacionais para anlise dos mesmos componentes, CCQM K23 a, b e c (2004; 2006). O segundo equipamento analtico utilizados foi o micro cromatgrafo gasoso, modelo CG CP4900, da marca VARIAN (Figura 2).

Figura 1. Cromatgrafo gasoso modelo CG CP3800SP, da marca VARIAN.

Figura 2. Micro cromatgrafo gasoso modelo CG CP4900, da marca VARIAN.

Os ensaios foram realizados em condies de repetitividade e as condies de anlise selecionadas esto apresentadas nas Tabelas 1 e 2. Para anlise dos componentes presentes em uma amostra de gs natural, utilizaram-se padres de referncia com concentraes distintas. Padres e amostra foram injetados nesta ordem e analisados em trs dias diferentes a fim de comparar os resultados obtidos atravs de ambos os equipamentos. Os resultados foram analisados, de acordo com o documento orientativo DOQ-CGCRE-008 rev. 04 Orientao sobre validao de mtodos de ensaios qumicos e a norma interna NIT-LABAG-003, rev. 02 - Utilizao do programa de clculo de incerteza B-Least para certificao de misturas gasosas. Os clculos so baseados nas normas ISO 5725:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results parts 1 e 2 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results Parts 1 e 2; e ISO 6143:2001 Gas analysis Comparison methods for determining and checking the composition of calibration gas mixtures. O clculo do Limite 3

Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012 de Deteco e do Limite de Quantificao foi realizado conforme o guia Q2(R1) ICH (International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use) de 1994.

Tabela 1. Condies de analise do cromatgrafo gasoso modelo CG CP3800SP, da marca VARIAN.

Cromatgrafo Gasoso modelo CG CP3800SP

Parmetros Analticos
Temperatura do injetor: Coluna cromatogrfica: Detector: Temperatura do detetor: Gs de arraste:

Condies de Anlise
220oC Coluna WCOT Fused Slica 60m x 025mm Coluna Hayesep T 0,5m x 2mm Coluna Hayesep Q 0,5m x 2mm Coluna Molsieve 13 x 1,5m x 2 mm Detetor por condutividade trmica (DCT) 200oC Hlio

Tabela 2. Condies de anlise do micro cromatgrafo gasoso modelo Micro CG CP4900, da marca VARIAN.

Cromatgrafo Gasoso modelo CG CP4900

Parmetro Analticos
Temperatura do Injetor Temperatura da coluna Tempo de injeo Presso Coluna cromatogrfica Temperatura da coluna Detetor Temperatura do detetor Gs de arraste

CANAL A
110oC 90C 50 ms 20 psi Molsieve 5 x 1,5m x 2mm 80oC Detetor por condutividade trmica (DCT) 110oC Hlio Metano Nitrognio

CANAL B
110oC 90C 70 ms 18 psi Pora Q, U 80 C Detetor por condutividade trmica (DCT) 110oC Hlio Butano Dixido de Carbono
o

CANAL C
110oC 100C 70 ms 18 psi PLOT Al2O3/KCl -Detetor por condutividade trmica (DCT) 110oC Hlio Propano

CANAL D
110oC 70C 120 ms 14 psi CP-SIL 5 & CB -Detetor por condutividade trmica (DCT) 110oC Hlio i-Butano n-Butano n-Pentano n-Hexano

Componentes da Amostra Analisados

Para analisar a linearidade das curvas de calibrao traadas foram utilizadas as reas dos picos cromatogrficos dos respectivos componentes presentes nos padres de referncia e na amostra. A partir das concentraes conhecidas dos componentes presentes nos padres utilizados para traar a curva de calibrao e dos resultados de rea de todos estes componentes e da amostra, estimou-se uma correlao linear entre estes fatores. Desta forma, plotou-se as concentraes conhecidas utilizadas xi, contra as respostas do instrumento yi , estabelecendo uma curva de calibrao que representasse da melhor maneira possvel o conjunto de pontos (xi, yi) obtidos (Figura 3 e Figura 4). Representando uma relao linear como y = a + bx , valores para a e b foram obtidos atravs do mtodo numrico dos mnimos quadrados, que um modelo matemtico de correlao entre os valores numricos de x e de y (sendo a = intercepto e b = inclinao da curva).

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METANO - GS NATURAL
1400000

CG_3800

reas dos picos

1300000

METANO - GS NATURAL
1400000 1200000

CG_3800

reas dos picos

1300000 1100000
80 82 84 86 88 90 92 94

Concentrao (% mol/mol)
1200000

Micro CG Figura 3. Estudo da linearidade das curvas de calibrao para o componente metano presente no s natural analisado 20000000 pelo equipamento CG 3800SP. 1100000
80 82 84 86 88 90 92 94

METANO - GS NATURAL

reas dos picos

Concentrao (% mol/mol)
18000000

METANO - GS NATURAL
20000000 16000000

Micro CG

reas dos picos

18000000 14000000
81 82 83 84 85 86 87 88 89

Concentrao (% mol/mol)
16000000

14000000 81 82 83 84 85 86 87 88 89

Concentrao (% mol/mol)

Figura 4. Estudo da linearidade das curvas de calibrao para o componente metano presente no s natural analisado pelo equipamento Micro CG 4900.

3. Discusso dos Resultados

A partir dos resultados de medio obtidos, representados pelas reas dos picos cromatogrficos de cada componente presente nos padres de referncia utilizados para traar as curvas de calibrao e dos resultados das reas dos picos cromatogrficos dos componentes presentes na amostra de gs natural, foi possvel estabelecer uma comparao entre os mtodos atravs dos principais parmetros analticos abordados em validao de mtodos. Com os resultados obtidos, foi possvel realizar um tratamento estatstico dos resultados, para verificao da existncia de valores suspeitos (outliers), segundo os critrios descritos na Norma ISO 5725:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Parts 1 e 2 e a possvel retirada dos mesmos foi realizada atravs do Teste de Grubbs. Alm disso, tambm foi realizado o Teste-F e o Teste-T, com o objetivo de avaliar a no existncia de diferena entre as varianas e as mdias. Desta forma, foi possvel estudar se os valores mdios obtidos ao longo do estudo e o valor reportado no certificado do material de referncia utilizado possuam uma diferena significativa. O clculo da concentrao dos componentes da amostra, bem como o clculo da estimativa da incerteza padro de medio foi executado com o auxlio de um programa especfico denominado B-Least, desenvolvido por pesquisadores do Instituto Nacional de Metrologia da Alemanha (BAM), segundo a metodologia descrita na Norma ISO 6143:2001- Gas analysis Comparison methods for determining and checking the composition of calibration gas mixtures. Os resultados analticos obtidos foram satisfatrios para a maioria dos componentes, apresentando valores de incerteza relativa menores que 1%, conforme apresentado na Tabela 3.

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Tabela 4. Resultados analticos obtidos nos dois equipamentos analticos.

Componentes da amostra presente no cilindro D340038 DADOS DO CERTIFICADO Concentra Incerteza o Expandida (%mol/mol) (%mol/mol) 86,8879 0,072 7,0302 0,0016 0,4026 0,006 0,5902 0,0012 0,03022 0,0015 0,03011 0,00012 1,0009 0,00012 0,03011 0,00012 1,0009 0,002 1,5019 0,0035 RESULTADOS DO CG 3800SP Concentra o (%mol/mol) 86,84 7,02 2,49 0,4022 0,5900 0,0301 0,0300 0,0311 1,004 1,4960 Incerteza Expandida (%mol/mol) 0,4 0,041 0,015 0,0032 0,0037 0,0004 0,0004 0,0003 0,0063 0,0086 Incerteza Relativa (%) 0,47 0,59 0,60 0,79 0,63 1,32 1,19 1,00 0,63 0,57 RESULTADOS DO MICRO CG Concentrao (%mol/mol) 87,29 5,48 2,52 0,5003 0,5960 0,0306 0,0284 0,0324 0,8600 1,4680 Incerteza Expandida (%mol/mol) 0,63 0,47 1,56 0,81 0,64 1,22 0,78 0,96 9,89 7,85 Incerteza Relativa (%) 0,63 0,47 1,56 0,81 0,64 1,22 0,78 0,96 9,89 7,85

Metano Etano Propano i-Butano n-Butano i-Pentano n-Pentano n-Hexano Nitrognio Dixido de Carbono

A Tabela 4 apresenta os resultados para os componentes: metano, etano e propano presentes na amostra de gs natural. Os resultados foram satisfatrios e apresentam um desvio relativo de aproximadamente 1% em relao ao valor certificado.

Tabela 4. Resultados analticos. Amostra (D340038)

Dados do Certificado (%mol/mol) Resultados analticos (%mol/mol) Erros Relativos (%) METANO
CG 3800SP MICRO CG

ETANO
CG 3800SP MICRO CG

PROPANO
CG 3800SP MICRO CG

86,8879 86,84 0,06

86,8879 87,29 -0,46

7,0302 7,02 0,15

7,0302 5,48 22,00

2,496 2,49 0,24

2,496 2,52 -0,95

4. Concluses
Com base nos conceitos de validao de mtodos e no objetivo deste trabalho, que foi de apresentar um modelo de validao de metodologias analticas para a determinao da concentrao dos componentes presentes em amostras de Gs Natural por meio da tcnica de Cromatografia Gasosa (CG), pode-se concluir que: As tcnicas estatsticas so ferramentas fundamentais para a validao de mtodos analticos j que contribuem para a obteno de parmetros importantes para a avaliao da confiabilidade metrolgica das medies realizadas. Para comparar resultados de medies, seja com requisitos especificados ou com outros resultados de suma importncia respeitar as questes relacionadas com a metrologia, aliados aos requisitos da norma NBR ISO/IEC 17025:2005. Os testes estatsticos comprovaram que a metodologia esta estatisticamente comparvel ao valor certificado para a maioria dos componentes, apresentando um erro relativo de aproximadamente 1% em relao ao valor certificado.

5. Agradecimentos
Agradece-se ao CNPQ, INMETRO.

6. Bibliografia
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria ANVISA. Http://www.anvisa.gov.br. Acesso em: julho de 2008 6

Rio Oil & Gas Expo and Conference 2012 BORGES, R. M. H: Estatstica: uma ferramenta para Validao de Ensaios. Inmetro 2004. Guia EURACHEM. Primeira Edio Brasileira do Guia EURACHEM/ CITAC, 2 ed.,2002. Determinando a Incerteza na Medio Analtica. QUAM 2002. Guia Q2(R1) ICH (International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use) Instituto Nacional de Metrologia, Qualidade e Tecnologia (INMETRO), Orientaes sobre Validao de Mtodos de Ensaios Qumicos, DOQ-CGCRE-008, Reviso 4: julho de 2011. ISO 5725:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results parts 1 e 2 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results parts 1 e 2. ISO 6143:2001 - Gas analysis Comparison methods for determining and checking the composition of calibration gas mixtures. ISO 6974:2000 Natural Gas Determination of Composition with defined uncertainty by gas chromatography. LEITE, Flvio - Validao em Anlise Qumica - Editora tomo, 5 Edio, 2008. LOURENO, S. R. Gs natural: perspectivas e utilizao Dissertao de Mestrado, Universidade de Campinas, SP, 2003. NIT-LABAG003 rev. 02 - Utilizao do programa de clculo de incerteza B-Least para certificao de misturas gasosas. Report International Comparison CCQM K23 a and c Natural Gas 2004. Report International Comparison CCQM K23b Natural Gas 2006 Draft B. Requisitos Gerais para Competncia de Laboratrios de Ensaio e Calibrao, ABNT NBR ISO/IEC 17025: 2005.

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8. References (Times New Roman, 12, Bold, Left Aligned)

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