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ANALTICA AVANADA 2S 2011

Aulas 3 e 4 Preparo de Amostras

Prof. Rafael Sousa Departamento de Qumica - ICE rafael.arromba@ufjf.edu.br

Notas de aula: www.ufjf.br/baccan

Consideraes sobre amostragem Preservao de amostras

CONTEDO

Tratamentos convencionais (dissoluo, abertura, digesto, ...) Tratamentos preliminares Detalhes sobre o preparo de amostras para determinaes inorgnicas Detalhes sobre o preparo de amostras para preparo anlises cromatogrficas Exemplos de procedimentos de preparo de amostras Consideraes sobre segurana no laboratrio
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BIBLIOGRAFIA
1) D. A. Skoog, D. M. West and F. J. Holler, Fundamentals of Analytical Chemistry Chemistry, 7th Ed., Thomson Learning, 1996 2) J. Mendham, R. C. Denney, J. D. Barnes, M. Thomas Vogel - Anlise Qumica Quantitativa Quantitativa, 6a ed., LTC, 2002 3) D. C. Harris, Anlise Qumica Quantitativa Quantitativa, 7a ed., LTC, 2008 4) F. J. Krug Mtodos de preparo de amostras: fundamentos sobre o preparo de amostras orgnicas e inorgnicas para anlise elementar 1 ed., 2010 5) S. Mitra Sample Preparation Techniques in Analytical Chemistry John Wiley & Sons, Inc., 2003

Preparo de amostra ?

AAS ICP OES ICP-MS HPLC GC CE

Sample preparation involve digestion, extraction and preparation of the digestion, ca. analytes before the analysis, so this step is time limiting, requiring ca. 61% of analysis, limiting, the total time to perform the complete analysis, and is responsible for 30% of analysis, the total analysis error. J. Braz. Chem. Soc. 14 (2003) 174 error.
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O Preparo de Amostra na Anlise Qumica


Definio do problema analtico Escolha do mtodo de anlise Amostragem Tratamento da amostra (e separao da espcie de interesse) Calibrao Medida analtica Avaliao dos resultados Ao
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AAS ICP OES ICP-MS HPLC GC CE

1) Amostragem a coleta de uma poro (ou alquota) de uma amostra para a realizao da anlise, geralmente no laboratrio

Reduo do tamanho da amostra


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Amostragem Dever levar a resultados representativos e reprodutivos

Na prtica:
Estabelecer ou seguir um protocolo de amostragem apropriado (amostras homogneas x amostras heterogneas)
Minimizando as incertezas relacionadas amostragem: - Erros sistemticos
- Erros de amostragem

Acondicionar a amostra adequadamente para que se mantenha ntegra at o momento da anlise


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1.1) Tipos de amostras Considerando as caractersticas das amostras:

AMOSTRAS HOMOGNEAS Gases e lquidos, na maioria das situaes lquidos, Qualquer poro representativa desde que no haja partculas

Tipos de amostras

AMOSTRAS HETEROGNEAS Rochas, Minerais, Minrios, Solos e Sedimentos Rochas, Minerais, Minrios, Podem apresentar composio diferente em pores retiradas ao acaso os cuidados com a amostragem e preparao devem ser redobrados. Deve ser considerado que a amostra de laboratrio, com massas entre 0,1 a 10 g, pode representar toneladas de material, exigindo cuidadosa definio do procedimento de amostragem e preparao para anlise.

Os pontos escuros correspondem a determinados compostos e que no se distribuem de forma homognea


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1.2) Exemplos de amostragem gua de um rio ou lago (gua superficial)


Quantos pontos sero amostrados e como? Cada ponto ser amostrado em replicata? replicata? Qual a quantidade mnima de amostra necessria para a realizao das anlises no laboratrio?

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Exemplos de amostragem Slidos particulados e gases (emisses atmosfricas)


1) Adicionar um filtro que adsorva os analitos diretamente na fonte 2) Utilizar uma bomba que aspire as emisses no ambiente, de forma que os analitos fiquem retidos em um filtro

http://www.fasteronline.com.br/products/bomba-de-amostragem-de-ar-222- kithttp://www.fasteronline.com.br/products/bomba-de-amostragem-de-ar-222-3-kit-completo

Tratar os filtros como se fossem a prpria amostra, de acordo com o tipo de anlise a ser realizada
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Exemplos de amostragem Materiais slidos no pulverizados

Retirada de uma ou mais pores representativas

- Processamento - Homogeneizao (quarteamento) (quarteamento)

Obteno da amostra laboratorial (no tamanho adequado)

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2) Acondicionamento da amostra

Coleta de Anomalocardia brasiliana. Nano, RMW. Determinao de ons Metlicos em


Moluscos Bivalves do Manguezal da Regio Petrolfera de So Francisco do Conde Recncavo Bahiano, Bahiano, Tese de doutorado, Unicamp, Campinas SP, 2006.

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Acondicionamento da amostra
Deve evitar que processos fsicos, qumicos e biolgicos alterem a composio da amostra PROCESSOS FSICOS Volatilizao Adsoro em superfcies Difuso PROCESSOS QUMICOS

Reaes fotoqumicas Oxidaes Precipitaes

PROCESSOS BIOLGICOS Biodegradao Reaes enzimticas

ENTRETANTO no h como manter a integridade de uma amostra indefinidamente

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Parmetro
pH e temperatura Br-, Cl- e FCl INO3-, NO2S2-

Preservao
------Refrigerao em 4 oC Refrigerao em 4 oC Refrigerao em 4 oC, adio de ZnAc2 e NaOH at pH 9 Filtrar in situ, acidificar situ, (pH 2) com HNO3 acidificar (pH 2) com HNO3 Refrigerao em 4 oC acidificar (pH 2) com HNO3 Refrigerao em 4 oC, adio de H3PO4 at pH 2 Refrigerao em 4oC Refrigerao em 4oC

Frasco
--Plstico ou vidro Plstico ou vidro Plstico ou vidro Plstico ou vidro Plstico ou vidro

Validade
Imediatamente in situ At 28 dias Imediatamente in situ At 24 horas At 48 horas At 7 dias

Metais dissolvidos Metais totais Cr(VI) Hg Carbono orgnico

Plstico Plstico Plstico Plstico Plstico ou vidro mbar Vidro ou teflon Plstico ou vidro

6 meses 6 meses 24 horas 28 dias 28 dias

PCBs DBO e DQO

7 dias para extrair, 40 dias depois 48 e 28 h (respectivamente) 15

Mitra S, Sample Preparation Techniques in Analytical Chemistry, 2003 Chemistry,

Em posse da amostra:Escolha do Mtodo

A amostra soluo?

Realizao da dissoluo, decomposio ou extrao qumica

Preparo de amostra

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3) Tratamentos preliminares (ou prtratamentos) (ou prtratamentos)


ANLISE DIRETA DE AMOSTRAS SLIDAS

Fluorescncia de raios-X, ablao com laser e ICP-MS/OES, emisso raiosICPatmica com excitao por arco ou fasca, ...
1) Polimento da superfcie a ser analisada 2) Imobilizao da amostra (tecido biolgico) em um resina ANLISE DE AMOSTRAS SLIDOS APS SEPARAO DE UMA FRAO DE COMPONENTES 1) Secagem 2) Moagem 3) Separao de apenas alguns componentes (solubilizao parcial)

- Extrao de espcies inorgnicas em solos - Lixiviao de compostos metlicos solveis (testes com Resduos slidos uso de gua e cido actico) - Extrao com solventes orgnicos (separao de compostos aromticos em solos e sedimentos)

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Tratamentos preliminares
DETALHANDO ALGUNS PRTRATAMENTOS 1) Secagem eliminao da umidade

aquecimento 105 oC em estufa comum 60 0C em estufa com circulao de ar (materiais biolgicos) acondicionamento sob vcuo, em dessecador (garante a preservao completa da amostra) liofilizao sem temperatura congelamento seguido de vcuo com ou

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Tratamentos preliminares
2) Moagem fragmentao da amostra com a diminuio do tamanho de partcula conforme convenincia do mtodo Diminuindo o tamanho das partculas aumenta-se a relao aumentaentre rea superficial e volume de amostra, facilitando a dissoluo Dependendo do mtodo ou dos objetivos da preparao o tamanho das partculas devem ser controlados

MOAGEM

PENEIRAO

Para determinar a Distribuio do Tamanho de Partcula (PSD, em Ingls): Microscopia ptica ou Microscopia eletrnica de varredura
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Tratamentos preliminares Moagem


1) BRITAGEM (minerais)
Consiste na primeira etapa da reduo do tamanho da amostra, em geral, reduzindo para gros de aproximadamente 1 a 5 mm. A liga metlica usada na construo do equipamento deve ser considerada para definir possveis elementos que podero ser incorporados amostra neste processo.

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Equipamentos utilizados
PRENSA:

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BRITADOR:

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Tratamentos preliminares - Moagem

porcelana
2) PULVERIZAO (Pode ser usada aps a britagem) A amostra ser colocada na granulometria desejada. Manualmente por meio de um grau Manualmente, com pistilo, construdo em gata, porcelana, quartzo, ferro ou outro material, dependendo do interesse e da anlise que ser realizada.

gata

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Tratamentos preliminares - Moagem

PULVERIZAO Com sistemas automatizados a pulverizao pode ser conseguida com maior facilidade e rapidez, tanto para volumes maiores como menores, garantindo tambm maior homogeneidade para a composio e para a granulometria. * MOINHOS DE BOLA

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Tratamentos preliminares - Moagem

PULVERIZAO * MOINHOS DE ANIS E CILINDRO (moinho de panelas)

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Tratamentos preliminares - Moagem

PULVERIZAO * MOINHOS DE FACAS Lminas acopladas a um eixo de um motor Diversas geometrias e resistncia mecnica

simples

mais sofisticados

sem controle automtico de tempo e temperatura

com controle automtico de tempo e temperatura

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Tratamentos preliminares - Moagem


Amostras gordurosas Alimentos (chocolate) Tecidos biolgicos - Analitos orgnicos (DNAs) - Analitos inorgnicos

PULVERIZAO POR CRIOGENIA (aplicvel tambm para outros tipos de amostras como ossos e cabelo) * MOINHOS CRIOGNICOS Operam baixas temperaturas (N2 (l)) Aplicam-se a pequenas quantidades (p. ex. 0,1 5 g de amostra)
- Amostra cilindro de policarbonato
(com barras moedoras de ao)

congelamento

- Moagem (agitao do cilindro)


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http://www.inovamaq.com.br/moinho-pulverizadorhttp://www.inovamaq.com.br/moinho-pulverizador-criogenico/

Tratamentos preliminares - Moagem


EX PULVERIZAO CRIOGNICA DE TECIDO DE SEIO*

Antes da moagem

Aps dois ciclos de moagem

*Amostras em estudo pela aluna Stefanny Febraio, do IQ-Unicamp Febraio, IQ-

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Tratamentos preliminares - Moagem


ETAPA FINAL: PENEIRAO Controle do PSD
UTILIZADA PARA SELECIONAR UMA GRANULOMETRIA ESPECFICA AS PENEIRAS PODEM APRESENTAR GRANULOMETRIA EM MESH e mm 80 mesh = 0,177 mm = 80 tyler 100 mesh = 0,149 mm = 100 tyler MAIOR VALOR mesh MENOR VALOR mm
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4) Preparo de amostras para determinaes inorgnicas e orgnicas


DEPENDE DO TIPO DE TCNICA A SER USADA: Tcnicas aplicveis a amostras slidas, lquidas e suspenses - Anlise por ativao neutrnica - Fluorescncia de raios-X - Absoro atmica com forno de grafite Tcnicas aplicveis a amostras slidas - Espectrometria de emisso com arco ou fasca - Anlise elementar, CHN (e S) - Emisso ptica em plasma induzido por laser (LIBS) Tcnicas aplicveis a amostras lquidas (rotinas) - Demais tcnicas espectromtricas - Tcnicas eletroanalticas e de separao

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Preparo de amostras para determinaes Inorgnicas e orgnicas


CUIDADOS GERAIS FRENTE NECESSIDADE DE PREPARAO DA AMOSTRA A amostra no deve causar danos ao recipiente no qual a amostra ser tratada Buscar a mnima manipulao experimental possvel, para evitar contaminaes da amostra oportuno observar que, dentre todas as operaes analticas, a etapa de tratamento das amostras a mais crtica. Em geral, nesta etapa que se cometem mais erros e que se gasta mais tempo. tambm a etapa de maior custo. tempo. Por isso, os passos de um procedimento de tratamento de amostra devero ser sempre considerados cuidadosamente.
F. J. Krug, 2008 Krug,
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O Preparo da Amostra
ALQUOTA DISSOLUO DECOMPOSIO
Via mida Sem aquecimento

Com aquecimento

Via seca

Fuso alcalina

Convencional

Microondas

EXTRAO
Lquido-lquido Slido-lquido Lquido-slido

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Combusto

4.1) Mtodos convencionais para o preparo de amostras


a) DISSOLUO (determinaes em geral) a transformao de uma amostra em uma soluo (geralmente aquosa), envolvendo ou no uma reao qumica Exemplos para determinaes inorgnicas: inorgnicas: Amostra de sal de cozinha: NaCl (s) cozinha: Amostra de calcrio: CaCO3 (s) + 2H+ calcrio: Amostra de plstico: polmero-Pb2+ plstico: polmeroDMF H2O

Na+ + ClCa2+ + H2O + CO2 (g) Pb2+ + polmero (l)

(Soluo aquosa)

http://autismo.nutricao.inf.br/tag/metaishttp://autismo.nutricao.inf.br/tag/metais-pesados/

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Mtodos convencionais para o preparo de amostras


DISSOLUO x DILUIO

A diluio da alquota amostrada ou preparada uma etapa comum maioria das anlises, sendo que algumas poucas amostras necessitam apenas de diluio.

NO CONFUNDIR dissoluo com diluio !

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Mtodos convencionais para o preparo de amostras


Para Casa Pesquisar um procedimento para a dissoluo de uma liga metlica, como preparo prvio anlise qumica de sua composio.

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b) ABERTURA Determinaes inorgnicas em amostras orgnicas ou inorgnicas a transformao qumica de uma amostra slida em uma outra forma slida, a qual facilmente solvel em gua ou cidos diludos DOIS TIPOS: FUSO ALCALINA E COMBUSTO POR VIA SECA A decomposio de amostras por fuso a decomposio de MATERIAIS INORGNICOS alta temperatura e presso ambiente A queima feita na presena de um fundente* e o mtodo aplicado quando se deseja determinar os componentes majoritrios da amostra

Exemplo: Exemplo: Amostra de slica: SiO2 (s) + O2-

SiO32PRODUTO: xidos e/ou carbonatos


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(fuso alcalina)

(*) Hidrxidos de metais alcalinos, carbonatos e boratos

ABERTURA - Equipamentos usados na Fuso alcalina


Geralmente* usamGeralmente* usam-se fornos chamados de muflas (400 550oC)

Antes do aquecimento cadinhos de porcelana (Pt: mais resistente)

Aps o aquecimento

Alguns modelos de muflas

* Outras fontes de aquecimento possveis: chamas e microondas

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ABERTURA - Fuso alcalina


VANTAGENS bastante eficiente para amostras geolgicas e de difcil solubilizao em cidos AplicaAplica-se a grandes quantidades de amostras (que podem ser solubilizadas em pequenos volumes de cido!) DESVANTAGENS Requer at 8 vezes mais tempo do que outros mtodos Consome quantidades grandes de reagentes - Compromete a exatido das anlises (possveis contaminaes) - O fundente, agregado matriz, pode ser uma causa adicional de fundente, interferncias No recomendado para elementos volteis, principalmente As, Hg e Se
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ABERTURA - Combusto
a decomposio de materiais orgnicos alta temperatura e presso ambiente. Parecida com a fuso (cadinhos, muflas, ...), MAS: muflas, - Queima da amostra em ar ou atmosfera de oxignio O O2 atua como agente oxidante - Feita na presena de aditivos para evitar a perda de espcies volteis Mg(NO3)2 Mg(NO recomendado para As, Hg e Pb H2SO4 recomendado para Zn e Sn Produto de queima: queima: resduo inorgnico (cinzas) solvel em cidos diludos (cinzas)
xidos de metais silicatos fosfatos e sulfatos no volteis
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ABERTURA - Combusto
VANTAGENS AplicaAplica-se a grandes quantidades de amostras (que podem ser solubilizadas em pequenos volumes de cido!)

Geralmente no necessita de reagentes, exceto o O2 do ar Aditivos como HNO3, H2SO4 e nitratos podem ser usados para catalisar a oxidao e evitar a perda de analitos volteis ( como se fossem os modificadores qumicos usados em ETAAS!)
DESVANTAGENS Perdas de amostra como aerosol slido aerosol Compromete a exatido das anlises (possveis contaminaes e aderncia nos cadinhos especialmente os de porcelana e slica) No recomendado para elementos volteis como F, Cl, Br, I, As, Ge, Hg, S, Cl, Br, As, Ge, Hg, Se, Tl, Cd e Pb principalmente na forma de cloretos Se, Tl,

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ABERTURA - Decomposio por via seca em frascos de combusto com oxignio


- Mtodo permite recuperar analitos volteis da fase gasosa - A decomposio feita em um frasco (Frasco de combusto de Schniger) Schniger) contendo uma soluo absorvedora de ons:

atmosfera de O2

fio de platina cesta de platina ou slica: colocacoloca-se a amostra embrulhada em Papel de filtro

Ignio: Ignio: - fora do frasco - recursos eltricos (lmpada de IV + lente)

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OBS: Figura retirada de slides didticos do Prof. Edenir R. P. Filho (UFSCAR)

ABERTURA
- Decomposio por via seca em frascos de combusto com oxignio
Caractersticas: Caractersticas: - Utilizado para determinar elementos inorgnicos em tecidos biolgicos - O tipo de frasco deve ser escolhido em funo das espcies a serem determinadas (caso de F-: frascos de polietileno) - O tempo da queima relativamente rpido, podendo-se gastar podendoapenas 8 min para queimar 1 g de amostra - Os produtos de combusto no so absorvidos instantaneamente (usar solues adequadas e agitao) e a combusto pode ser incompleta - Assim como na abertura convencional, pode-se empregar aditivos pode(misturados amostra ou adicionados sobre o papel de filtro)

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c) DIGESTO (ou MINERALIZAO) Determinaes inorgnicas em amostras orgnicas ou inorgnicas

a decomposio de compostos inorgnicos em seus elementos constituintes, bem como a de orgnicos e organelas biolgicas empregando-se empregandocidos minerais e aquecimento

Muito utilizada por converter os analitos em uma forma qumica simples

Calibrao com padres aquosos ! Pequenas alteraes na distribuio dos elementos nas amostras originais so mascaradas quando as amostras esto na forma de soluo aquosa F. J. Krug, 2008 Krug,

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DIGESTO (ou MINERALIZAO)

cidos minerais oxidantes: oxidantes: (decomposio de orgnicos)


CIDO PERCLRICO (HClO4) (HClO Alto poder de oxidao e que deve ser usado combinado com outros cidos (como o ntrico) para evitar a formao de percloratos instveis

CIDO SULFRICO (H2SO4) (H Alto poder oxidante, mas a cintica de reao bastante lenta. Por isso, geralmente usado com outros cidos, sendo que o uso com perclrico perigoso

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cidos minerais oxidantes (decomposio de orgnicos) CIDO NTRICO (HNO3) (HNO


Solubilidade em gua Ponto de fuso Densidade Ponto de Ebulio Presso de Vapor (20 C) solvel -40 C 1.39 g/cm3 (20 C) 121 C (1013 hPa) 9.4 hPa (20 C)

Poder de oxidao moderado, sendo usado em altas altas temperaturas e/ou em conjunto com outros reagentes o cido mais empregado (sozinho ou combinado) - Alta pureza - Formao de nitratos solveis Reao genrica: genrica: (CH2)n + 2HNO3 + calor CO2(g) + 2NO(g) + 2H2O

O poder de oxidao depende da temperatura (fator limitante em sistemas abertos)

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cidos minerais combinados entre si ou com perxido: perxido: COMBINAO DE CIDOS E REAGENTES
HNO3 + H2SO4: melhora a eficincia do ntrico em vaso aberto por possibilitar o uso de temperatura mais altas MAS o sulfrico no indicado para uso na espectrometria atmica (razes instrumentais e relacionadas integridade da amostra) HNO3 + HClO4: melhora a eficincia da digesto atuando como oxidante aps todo o ntrico ter sido consumido HNO3 + HCl: melhora a eficincia da digesto quando a amostra contem HCl: compostos inorgnicos Mas o clordrico no recomendado para uso em GF AAS nem ICP-MS ICPDiversas propores HNO3/ HCl podem ser otimizadas, sendo que a mistura de 3:1 v/v bastante utilizada (gua rgia) HNO3 + H2O2: aumenta a eficincia da digesto devido ser um poderoso agente oxidante. Vantagem: gua o produto de decomposio 46

DIGESTO (ou MINERALIZAO) Determinaes inorgnicas em amostras orgnicas ou inorgnicas O CIDOS FLUORDRICO (HF) TAMBM PODEM SER USADO COM CUIDADO ! Dissoluo de materiais silicatados (rochas, minerais, sedimentos) Tambm pode auxiliar na dissoluo de aos A remoo do on F- necessria: forma complexos estveis com muitos elementos qumicos Alguns mtodos, como a adio de c. brico c. (formao de B2F6 que voltil) As queimaduras com HF no so percebidas no momento e o mesmo pode chegar at os ossos! SE contato: lavar a regio com gua em abundncia Utilizar soluo contendo ons clcio

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Instrumentos para Digesto de Amostras em Frasco Aberto


Formas de aquecimento (sistemas abertos): abertos):

Chapa de aquecimento

Banhos termostticos - sem agitao - com agitao

Bloco digestor

Temperatura

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Digesto de Amostras em Frasco Aberto


Caractersticas: Caractersticas: - Aplica-se a todos os tipos de amostras, exceto slidos refratrios ou Aplicaque contenham compostos refratrios - Permite o uso de quantidades flexveis de amostra - Geralmente demora horas e consome quantidades relativamente grande de reagentes favorece a preconcentrao de impurezas - Exige superviso constante do analista - Favorece a perda de analitos volteis

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