Exposio a um m.o => Contaminao Infeco Contaminao Presena de m.o Infeco estabelecimento do m.

.o no organismo do hospedeiro Patogenicidade: capacidade de causar doena Virulncia: grau de patogenicidade Ciclo infeccioso tradicional: 1. Entrada 2. Estabelecimento 3. Multiplicao Fuga aos mecanismos de defesa do hospedeiro 4. Danos 5. Sada Organismo patognico causador de doena Invasivo Invaso => danos celulares; Toxignico Secreo de toxinas Infeco, subsistncia e multiplicao sobre ou nos tecidos do hospedeiro Portais de entrada: Pele e mucosas Tractos urogenital, digestivo e respiratrio Placenta Determinantes de virulncia Caractersticas genticas, estruturais ou bioqumicas que conduzem ao estado de doena num hospedeiro ADERNCIA: Supefcie celular; Matriz celular (inflamao) Especfica: ligaes especficas entre receptor celular/adesina Inespecfica: interaces hidrfobas, electrostticas, dipolares; interaco de cpsulas e EPS. Atravs de : Pili; Estruturas macromoleculares superficiais; Patogenidade microbiana: INVASO: Induo de endocitose e produo de enzimas que provocam solubilizao tecidular Produo de substncias extracelulares bacterianas invasinas: - Hialuronidase - Colagenase - Neuraminidase - Estreptocinase e estafilocinase - Hemolisinas e leucocidinas - Fosfolipases

- Lecitinases - Coagulases MOLCULAS ANTIFAGOCTICAS DE SUPERFCIE: Ex. cpsula => - Mmica da membrana do hospedeiro - Aco leuccitos dificultada - Aderncia SECREO DE TOXINAS: Exotoxinas: protenas solveis libertadas no meio extracelular durante o crescimento e metabolismo microbianos. Letais para a clula a baixa concentrao. Ex: Citotoxinas; Neurotoxinas; Enterotoxinas.
Endotoxinas: substncia txicas, no proteicas,

biologicamente activas a concentraes elevadas (ex: LPS); libertao ocorre normalmente aps lise celular bacteriana => Febre e choque sptico EVASO IMUNITRIA: Variao antignica: converso, inverso e rearranjos cromossomais modificaes da superfcie (pili, flagelos, cpsulas, LPS, etc) => ac. sintetizados em infeces anteriores no reconhecem os novos ag. Ex: Neisseria ghonorrhoeae e N. meningitidis Variao de fase: interrupo faseada da expresso de factores de Virulncia. - PRODUO DE ENZIMAS DEGRADATIVOS: lipases, proteases - AQUISIO de FERRO: Ligao directa a transportadores Produo de enzimas degradativos dos grupos hmicos Produo de siderforos MECANISMOS INTRACELULARES DE SOBREVIVNCIA: catalase, etc INTERFERNCIA COM A ACTIVIDADE DOS FAGCITOS: Evitar contacto Evitar digesto Sobreviver no interior Ataque directo Factores de virulncia codificados em: Bacteriofagos (vrus que infectam bactrias) Plasmdeos Transposes

Ilhas de patogenicidade: inseres cromossomais extensas (25kb a 190kb) flanqueadas de sequncias que sugerem recombinao; codificam genes de virulncia No Patogneo Patogneo

Aquisio de factores de virulncia Novas oportunidades de sobrevivncia Ou Produo de doena Factores de regulao de virulncia: Sinais/estmulos externos (temperatura, ies, Fe, pH, nutrientes, fase de crescimento, nveis de oxignio) Escolha do microambiente a ocupar Induo em cascata de factores de virulncia Expresso temporal de determinados genes
Sistemas reguladores: protenas sensoras de alteraes

externas Densidade populacional Ex: Vibrio cholerae: Emergncia do patogneo dependeu da aquisio sequencial de factores de virulncia: 1. Factores reguladores 2. Local de insero para um bacteriofago 3. Bacteriofago que funciona como factor de colonizao para um 2 vrus 4.Toxina codificada pelo 2 vrus Aparecimento de doenas infecciosas: Alteraes demogrficas e comportamentais Alteraes climticas e do solo Viagens, mobilidade e comrcio Adaptao e alterao microbianas Quebra de medidas de sade pblica Novas focos infeco Controlo de um microorganismo reduo do n ou da actividade microbiana Preveno de: Transmisso de doenas; Contaminao e deteriorao de substncias

Uso de agentes fsicos, qumicos e quimioteraputicos alterao de factores ambientais e nutricionais MORTE (perda irreversvel da capacidade de reproduo)

Descontaminao: tratamento de objectos ou superfcies para inibio do crescimento bacteriano (ex: limpeza de mesa) Desinfeco: processo de do n de m.o. de objectos ou superfcies atravs de agentes fsicos e qumicos especficos (ex: lcool, betadine, etc) Esterilizao: morte ou remoo total de m.o Agente cida: morte do m.o (ex: bactericida) Agente esttico: inibio do crescimento (ex: bacteriosttico) Agente ltico: morte por lise celular (ex: bacterioltico) Pontos de ataque a um m.o.: Danos na parede celular Danos na membrana (alterao da permeabilidade) Alterao de protenas e cidos nucleicos Alterao do metabolismo Controlo de microrganismos agentes fsicos: temperatura T >T mx => efeitos letais ( desnaturao molecular; inibio enzimtica;fluidez membranar) TD10: tempo de reduo decimal tempo necessrio para diminuir 10x a densidade da populao original, a uma dada temperatura Tempo de morte trmica: tempo para o qual todas as cls esto mortas, a uma dada temp.

Organismo mesfilo T<Tmin => inibio ou cessao do crescimento Estabilizao das estruturas secundrias do mRNA => traduo acessibilidade da RNA polimerase para o DNA

 fluidez de membrana alterao de funes associadas

a membrana Processos de controlo: Esterilizao em autoclave: 121C, 15 min., p= 1.1kg/cm2; Destruio de clulas vegetativas e esporos Pasteurizao: baixa, alta e UHT aquecimento a temp. inferior ao ponto de ebulio; Leite e substncias sensveis ao calor; Impede contaminao e disperso de patogneos alimentares; Valores utilizados para destruio de M. tuberculosis, estreptococos e estafilococos Fervura: 100C, 30 min. Destruio de clulas vegetativas, mas no de esporos Incinerao: destruio fsica dos m.o Calor seco: 160C, 2h 170C, 1h Agentes fsicos: Remoo de gua: desidratao Calor; Evaporao; Congelamento; Liofilizao; Adio de sal ou acar; Presso osmtica Presso Radiao: Ionizante (X e y); UV Filtrao: esterilizao de lquidos sensveis ao calor Filtros de 0.22 m => remoo de bactrias e vrus Filtros de 0.45 m => remoo de bactrias Controlo de microrganismos agentes qumicos Agente antimicrobiano qumico: Antisptico: agente qumico usado em tecidos vivos; toxicidade baixa ou nula (ex: solues iodadas, sabes, gua oxigenada, etc) Desinfectante: agente qumico com toxicidade elevada, podendo ser aplicado a objectos (ex: detergentes, compostos clorados, ozono, etc) Conservante: agente inibidor do crescimento microbiano. Toxicidade nula ou baixa Quimioteraputico: agente de toxicidade selectiva usado no tratamento de doenas infecciosas ou causadas pela proliferao de clulas malignas. Origem biolgica ou sinttica Agente antimicrobiano qumico:

 MIC (CMI) : concentrao mnima inibidora do

crescimento: a mais fraca concentrao capaz de inibir completamente, in vitro, o crescimento visvel de um m.o. MBC (CMB): concentrao mnima bactericida: A mais fraca concentrao que, aps 18h de contacto, elimina 99,9% de uma populao microbiana Requisitos de um agente antimicrobiano qumico: Actividade de largo espectro; Solubilidade; Toxicidade nula ou baixa para o homem; Txico para o m.o. em questo; Homogneo; Estvel; Capacidade de penetrao da superfcie a testar; No corrosivo; Fcil manuseamento; Barato; Acessvel Efeitos celulares dos agentes qumicos Efeito bacteriosttico (GRAFICO) Efeito bactericida (GRAFICO) Efeito bacterioltico (GRAFICO) Exs de agentes antimicrobianos qumicos e modo de aco (excluem-se os antibiticos)

Controlo de microrganismos agentes quimioteraputicos

Agente quimioteraputicos: Naturais (antibiticos), sintticos ou semi-sintticos Requisitos: - Destruio/inibio do crescimento de m.o - Impedir o desenvolvimento de formas resistentes - Fcil absoro pela clula infectada - No produo de efeitos secundrios no hospedeiro toxicidade selectiva - No destruio do microbiota normal do hospedeiro Alguns marcos histricos: 1881, Tyndall: culturas bacterianas em meio lquido cessavam crescimento na presena de bolores 1900, P. Ehrlich: corantes celulares com toxicidade selectiva 1929, Fleming: penicilina 1930, Domagk:sulfamidas 1952,Walkman: estreptomicina Principais grupos de agente quimioteraputicos: - Danos nas membranas - Inibidores de sistemas enzimticos especficos - Anlogos estruturais de substratos de reaco - Inibidores de sntese da parede celular - Inibidores da snteseProteica Danos na membrana citoplasmtica: Afectam permeabilidade e organizao membranar leakage dos contedos citoplasmticos Maioria exibe selectividade reduzida toxicidade elevada Ex: polimixinas, gramicidinas e tirocidinas (produzidas por Bacillus sp) Polienos: nistatina (Streptomyces noursei) e anfoterricina (fungicida; Streptomyces nodosus) Inibidores de sistemas enzimticos especficos: Analogia com substratos enzimticos => inibio competitiva Ex: sulfamidas Inibio da sntese da parede: Inibio da sntese de peptidoglicano No txicos, especficos 1. Bacitracina: (B. subtilis) : inibio da sntese de cs. teicoicos 2. -lactmicos: contm anel -lactmico Inibio da sntese da parede: -lactmicos: Aco:

Ligao s PBPs penicillium binding proteins: transpeptidases que realizam o cross-linking dos polmeros lineares de peptidoglicano Complexo antibitico PBP: Inibio da transpeptidao Estmulo da produo de autolisinas Ex:Penicilina: Penicillium sp Cefalosporinas: Cephalosporium acremonium Cicloserina: Streptomyces sp Vancomicina: Streptomyces orientalis Penicilinas sem-sintticas: amoxicilina, ampicilina, meticilina Inibio da sntese proteica: 1. Aminoglicsidos(Efeitos secundrios e desenvolvimento de resistncias bacterianas) : Ligao subunidade 30S Exs: estreptomicina, canamicina, gentamicina e neomiocina (produzidos por Streptomyces) 2. Macrlidos: Ligao subunidade 50S bloqueio da transpeptidao e translocao Exs: eritromicina, oleandomicina e espiramicina (produzidos por Streptomyces) 3. Tetraciclinas (largo espectro): Bloqueio da ligao do aminoacil-tRNA ao stio A Grande variedade, produzidos por Streptomyces 4. Cloranfenicol (actual sntese qumica) Inibio do enzima peptidiltransferase Produzido por Streptomyces Anlogos de estrutura: Compostos sintticos, estruturalmente semelhantes, na sua maioria, a factores de crescimento. Ex: anlogos de vit, a.a., purinas e pirimidinas Exs: sulfamidas: anlogos do c. p-aminobenzico, 1 substrato na via de sntese do c. tetrahidroflico Isoniazida: anlogo de nicotinamida Quinolonas : bloqueio da sntese de cs nucleicos

Peptidos antimicrobianos: Grupo abundante e diversificado de molculas produzidas por vrias clulas e tecido de plantas e animais Presentes em surfactantes, fluidos bronco-alveolares, clulas epiteliais, saliva, domnios antimicrobianos de ovalbumina, hemoglobina, lisozima Exs: Defensinas do homem, insectos

Muitas defensinas so molculas anfiflicas, com regies + (rosa) e regies hidrfobas (verde). ocorre interaco electrosttica com as membranas microbianas, insero do peptidos na membrana e formao de poros membranares => danos intracelulares Mecanismos de resistncia a antibiticos Resistncia a agentes antimicrobianos: capacidade, natural ou adquirida de resistncia de um organismos a um agente quimioteraputico ao qual normalmente sensvel Microorganismos produtores de antibiticos => possuem mecanismos de neutralizao/destruio dos antibiticos que produzem => trocas genticas com organismos no resistentes Resistncia natural: Cromossmica R-plasmids (resistance-plasmids) Mutaes: Ex: E. coli: (meio ptimo, tgerao = 30) Densidade populacional x tamanho do genoma x tx mutacional = = 107/109 cl/mL x 4.6 x106 pb x 10-10/pb 105 - 106 cl mutadas/mL

Inactivao de antibiticos por modificao estrutural Produo de penicilase (- lactamnases) Enzs de modificao de aminoglicsidos Enzs de modificao de cloranfenicol Inibio competitiva entre metabolito essencial e anlogo Desenvolvimento de vias metablicas alternativas: duplicao de vias essenciais Produo de enzimas alterados no susceptveis de alterao/inactivao Produo de enzimas em quantidades superiores s de inactivao PBPs adicionais imunes inactivao por -lactmico Alterao das molculas alvo: Modificao das PBPs => afinidade ao -lactmico Alteraes das protenas ribossomais Mecanismos de resistncia a antibiticos Impermeabilidade membranar e efluxo de sustncias => penetrao do antibitico impedida + excreo de antibiticos Ex: Gram -. Membrana externa < susceptibilidade entrad de antibiticos

Porinas => Entrada de nutrientes essenciais Impossibilidade de entrada de molculas > 1 kDa Canais rodeados de aminocidos carregados => no entrada de substncias lipoflicas Entrada de - lactmicos e aminoglicsidos Reduo de permeabilidade em algumas espcies: n de porinas Perda de porinas especializadas Efeito 2x Bombas de efluxo Multiresistncia: Resistncia a duas ou mais classes de antibiticos ( S. aureus resistente meticilina MRSA, Streptococcus pneumoniae resistente vancomicina, Mycobacterium tuberculosis multiresistente) Aquisio de pDNA ou transposes pSa de S. aureus: resistncia para cloranfenicol, estreptomicina, espectinomicina, canamicina e gentamicina Cassetes de resistncia Estratgias para diminuio de resistncia: consumo Uso rotativo de antibiticos Desenvolvimento de novas drogas antimicrobianas Terapia combinada