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Nutrigenmica: implicaes da interao nutriente-genoma

Fernanda Aparecida Domenici
Ps-doutoranda Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto Universidade de So Paulo Laboratrio de Nutrio Dr Helio Vannucchi Departamento de Clnica Mdica

ferdomenici@yahoo.com Av. Bandeirantes, 3900. Ribeiro Preto, SP FMRP-USP Anexo A, Bloco B, 2o andar (16) 3602-3248 (16) 3602-3355

Definies
Genoma
Constituio gentica ou conjunto de todos os genes contidos no DNA.

Genmica
Estudo envolvendo mapeamento, sequenciamento e anlise de todos os genes presentes no genoma de um dado organismo.

Gene

DNA

Exon 1

Intron 1

Exon 2

Intron 2

Exon 3

Transcri Transcrio (S (Sntese de RNA)

RNA nuclear

Exon 1

Intron 1

Exon 2

Intron 2

Exon 3

Splicing Splicing

Exon 1 RNA mensageiro

Exon 2

Exon 3

Tradu Traduo (S (Sntese de Prote Protena)

Protena

Projeto Genoma Humano

1985 Projeto Genoma Humano Concluso - 2003 Genes doenas predisponentes a determinadas

Descoberta de diferenas individuais em sequncias de gene que resulta em resposta diferencial a fatores ambientais.

 Fevereiro de 2001: primeiras publicaes nas revistas Nature e Science com 90% de preciso;

14 abril 2003 trmino oficial do projeto;

Metodologia:

seqenciamento

seriado

de

clones genmicos;

A partir do isolamento de DNA so construdas bibliotecas de DNA genmico.

 Com o conhecimento do genoma humano, o estudo de suas mltiplas seqncias de bases nitrogenadas e a determinao de suas funes especficas abriu uma nova perspectiva na preveno, no diagnstico e no tratamento das molstias nutricionais;

A influncia de alteraes e mutaes genticas podem ser diagnosticados por moderna tecnologia genmica; Nutrigenmica: rea biolgica que integra as tecnologias genmicas aplicada s cincias nutricionais.

http://www.genome.gov/

-V ar ia e sg en t ica s 0, 1 %

peso/ altura cor de cabelo, pele, olhos

susceptibilidade a doenas crnicas no-transmissveis (DCNT)

respostas a medicamentos e dieta necessidades nutricionais

Populaes minoritrias:

-V ar ia e sg en t ica s

alta incidncia de doenas crnicas

Diabetes

(ndios Pima)

DCV

(mulheres afro-americanas e mexicanas,

0, 1 %

homens afro-americanos >50 anos )

Certos tipos de cncer

(60% afro-americanos:

> risco de cncer de prstata)

Polimorfismos - SNPs

 Uma mutao definida como qualquer alterao na seqncia de bases ou rearranjo no DNA; Quando est presente em 1% ou mais na populao considerada polimorfismo; Deteco so utilizados endonucleases de restrio;

A regio que pode conter a mutao amplificada por PCR e o produto obtido submetido digesto pela endonuclease adequada.

SNPs
Polimorfismos de nucleotdeo nico

Polimorfismo

Um gene com muitos alelos diferentes, mas nenhum deles predominante na populao.

SNP *
Sequncia
5 3

GATTACA CTAATGT GATCACA CTAGTGT

3 5

SNP: T4C Protena: S2A

5 3

3 5

* SNP = Single Nucleotide Polymorphism

Gentipo

O SNP pode gerar uma protena com Resposta Fenotpica Dieta atividade alterada (maior, menor ou igual)

Variabilidade quanto absoro e metabolismo de nutrientes

Necessidades de micronutrientes

Menor atividade enzimtica

SNPs
Metilenotetraidrofolato redutase - MTHFR
Cdon 222 Cdon 222 ..AACCGTATAAGG.. ..TTGGCATAATCC.. Valina DNA: C677T

necessidade de cido flico

..AACCGCATAAGG.. ..TTGGCGTAATCC.. Alanina

Ala

Val
http://www.genomica.net/RICERCA/HAPMAP/novelli.htm

 MTHFR: MTHFR

Enzima

participa

do

metabolismo da homocistena;

Polimorfismos no gene da enzima MTHFR: Hiperhomocisteinemia C677T, A1298C e G1793A;

Metodologia: PCR seguido por digesto com enzimas de restrio;

Enzimas de restrio: Hinf I, MboII e BsrBI.

Tudo determinado pelo genoma?

Estilo de vida e fatores ambientais

Gentipo Fentipo

= gentica = Doena

Constituio

Gentipo Genes Expresso Gnica

Fatores externos

Sade ou

RNA

Biomarcadores
Metablitos

Fentipo Protenas

Gentipo Fentipo

= gentica = Doena

Constituio Sade ou

Gentipo Genes

Dieta Efeitos Fentipo

Expresso Gnica DIETA RNA

Biomarcadores
Metablitos

Fentipo Protenas

http://www.genome.gov/

Gentipo X Fatores externos

Dieta, atividade fsica e ingesto de etanol

Triglicrides sricos, LDL colesterol (Dependem da variabilidade gentica)

Interaes: dieta, genoma e sade

Galactosemia e Fenilcetonria Hipercolesterolemia familiar

Interaes: dieta, genoma e sade

Intolerncia lactose
Polimorfismos no gene que codifica a lactase Estado nutricional de Ca+

NUTRIGENMICA?

Genmica Nutricional ou Nutrigenmica

Definio
Estudo da interao de componentes da dieta com o genoma e seu impacto sobre a reduo do risco de doenas crnicas notransmissveis.

Genmica Nutricional ou Nutrigenmica

Objetivo
Espera-se que a pesquisa em nutrio baseada no conhecimento sobre o genoma humano, possa contribuir para o estabelecimento de recomendaes nutricionais mais adequadas, a fim de possibilitar uma interveno personalizada, visando a preveno, tratamento ou mesmo controle de determinadas doenas.

Nutrigenmica x Nutrigentica
Nutrigenmica
Estudo de como componentes da dieta alteram a expresso molecular da informao gentica em cada indivduo

Nutrigentica
Estudo de como a variabilidade gentica influencia a resposta dieta.

Absoro Utilizao/metabolismo Tolerncia Requerimento nutricional Nutrientes Compostos Bioativos

Nutrigenmica

Variao Gentica

Nutrigentica

Expresso Gnica

J Am Diet Assoc 2008; 108: 1480-1487.

Paradigma da pirmide
As recomendaes nutricionais assumem que todos os indivduos sejam: ... Culturalmente ... Socio-economicamente ... Fisiologicamente ... Geneticamente ................................... IDNTICOS

Novas diretrizes admitem diferenas

Alimentos Funcionais
Definio
So alimentos, no so frmacos Contm naturalmente substncias funcionais Fazem parte do padro alimentar normal O efeito cientificamente caracterizado Tem ao preventiva e no curativa Agem em pequenas doses e longo tempo de ao

Alimentos Funcionais
Alimento Funcional - ANVISA

O alimento ou ingrediente que alegar propriedades funcionais ou de sade pode, alm de funes nutricionais bsicas, quando se tratar de nutriente, produzir efeitos metablicos e ou fisiolgicos e ou efeitos benficos sade, devendo ser seguro para consumo sem superviso mdica.

Compostos Bioativos
Definio
Substncias orgnicas presentes nos alimentos funcionais No so indispensveis e nem sintetizados pelo organismo humano Ao protetora sade quando presentes na dieta em quantidades significativas.

Compostos Bioativos
Antioxidantes Flavonides Sulfurados e Nitrogenados cidos Graxos Poliinsaturados Pr e Probiticos

Compostos Bioativos
Ao biolgica
Atividade antioxidante Modulao de enzimas de detoxificao Estimulao do sistema imune Reduo de agregao plaquetria Controle do metabolismo hormonal Reduo da presso sangunea

Compostos Bioativos
Classe Vitaminas Minerais Carotenides Composto -tocoferol cido flico selnio zinco licopeno lutena -caroteno genistena resveratrol quercetina epigalocatequina sulforafano curcumina clorofilina Fonte leos vegetais frutas, vegetais, leguminosas gros, peixes carnes, vegetais tomate vegetais verdes vegetais amarelo-alaranjados soja uvas, vinho tinto frutas, vegetais ch verde broclis aafro, mostarda, curry vegetais verdes

Flavonides

Isotiocianato Fenlicos Clorofila

Antioxidantes
O que ?
Compostos que podem agir diretamente na neutralizao da ao dos radicais livres ou participar indiretamente de sistemas enzimticos com essa funo Estresse Oxidativo

Vitamina C Glutationa cido rico Vitamina E Carotenides

Peroxidao Lipdica Oxidao de Protenas Leso DNA / RNA

Antioxidantes
VITAMINA C

Inibir a formao de metablitos nitrosos carcinognicos Efeito protetor contra os danos causados pela exposio s radiaes e medicamentos

Antioxidantes
CAROTENIDES Licopeno
Ao protetora contra cncer Intermdio do seqestro de radicais livres, modulao do metabolismo do carcinoma, inibio da proliferao celular, aumento da diferenciao celular via retinides, estimulao da comunicao entre as clulas e aumento da resposta imune.

Caroteno

Beta caroteno ao preventiva contra doenas cardiovasculares por inibir a oxidao de lipoproteinas

Antioxidantes
VITAMINA E

Um dos principais mecanismos da defesa endgena do organismo

Antioxidantes
Sangue Vitamina C Carotenides Vitamina E cido rico Bilirrubina

Ceruloplasmina (liga cobre)

Transferrina (liga ferro)

Peroxissomo Vitamina C Cobre-ZincoSuperxido-Dismutase Mitocndria Glutationa peroxidase (selnio)

Catalase
MangansSuperxidoDismutase

Citosol

Ncleo

Membrana Celular

Enzimas Vitamina E de reparo do DNA

Carotenides

FONTES DE ANTIOXIDANTES

VITAMINA C: frutas ctricas como laranja, limo, morango e em vegetais como brcolis, repolho, couve-flor, pimento verde. VITAMINA E: germe de trigo, abacate, manteiga, sementes, brcolis, beterraba, folhas verdes e cereais integrais CAROTENIDES: cenoura, batata-doce, abbora, papaia, manga, carambola, nectarina, pssego , espinafre, brcolis, couve, agrio, nabo, mostarda, aspargo, ervilha, ameixa.

Flavonides
Com < 10mg flavonas/Kg: Com < 50mg flavonas/Kg:

Antioxidantes Funcionam como seqestradores de radicais e algumas vezes como quelantes de metais agindo tanto na etapa de iniciao como na propagao do processo oxidativo Os produtos intermedirios, formados pela ao destes antioxidantes, so relativamente estveis devido ressonncia do anel aromtico apresentada por estas substncias.

Com > 50mg flavonas/Kg:

Flavonides
Subclasse: Isoflavona

Previnem DAC, cncer, osteoporose e alvio sintomas menopausa

25g/dia PTN de soja reduz em mdia 9,5% COL, 12,5% LDL e 10,5% TG

40g de PTN de soja isolada/dia (90 mg de isoflavona) o contedo mineral e a densidade ssea na coluna lombar aps 6 meses

Sulfurados e Nitrogenados
O que ?
Compostos Orgnicos usados na proteo a carcinognese e mutagenese

Glicosinolatos Isotiocinatos Indis

Ativadores de enzimas na detoxificao do fgado

Sulfurados e Nitrogenados

Compostos sulfurados Alicina Hipotensor, hipoglicemiante, antitumoral, hipocolesterolmico, antifngico e antioxidante

900 mg de alho/dia (1/2 ou um dente de alho) COL total em aproximadamente 9%

cidos Graxos Poliinsaturados

-3 e -6

Semente Linhaa

Salmo

leos Vegetais Atum Nozes

Sardinha

cidos Graxos Poliinsaturados

Linhaa
c. Graxos -3 (EPA e DHA) TG e col srico risco CHD Efeito favorvel sobre os nveis de TG, PA, mecanismos de coagulao e ritmo cardaco, preveno de cncer e incidncia arteriosclerose 57% c. Graxos -3 aterosclerose e agregao plaquetria risco CHD 10 g linhaa/dia desencadeou diversas mudanas hormonais associadas com a reduo do risco de cncer de mama.

Probiticos
O que so?
Origem Humana

Microrganismos vivos, administrados em quantidades adequadas, que conferem benefcios sade do hospedeiro.
Utilizados para prevenir as infeces entricas e Iogurtes e leites fermentados alimentos mais comumente suplementados Col e risco de Cncer clon gastrointestinais.

Probiticos
Benefcios sade: Controle da microbiota intestinal; Estabilizao da microbiota aps o uso de antibiticos; Promoo da resistncia gastrointestinal colonizao por patgenos; cidos ltico e actico, bacteriocinas e outros compostos antimicrobianos; Digesto da lactose em indivduos com intolerncia; Estimulao do sistema imune; Alvio da constipao; absoro de vitaminas e minerais.

Prebiticos
O que so?
Origem Vegetal

Oligossacardeos no digerveis, porm, fermentveis, cuja funo mudar a atividade e a composio da microbiota intestinal, promovendo a sade do hospedeiro.
Inulina
Chicria

FOS
Chicria

Alho Alcachofra Cebola

Prebiticos
Benefcios sade:

Modulao de funes fisiolgicas, como absoro de Ca;

Metabolismo lipdico;

Modulao da composio da microbiota intestinal, que exerce papel essencial na fisiologia intestinal;

Reduo do risco de cncer de clon.

Quais so os mecanismos pelos quais os componentes da dieta modulam a expresso gnica?

Componentes dos alimentos afetam a expresso gnica Nvel transcricional

Forma direta

Forma indireta

Forma direta: receptores nucleares calcitriol (vitamina D), cido retinico (vitamina A), cidos graxos

Forma indireta: ativao de quinases para fosforilao de fatores de transcrio sulforafano, catequinas

Dieta pode influenciar eventos genticos e epigenticos associados com alguns processos de cncer

Reparo DNA Regulao hormonal

Metabolismo carcingenos

CBAs
Ciclo celular Apoptose Diferenciao

Journal of Nutrition 2004, 134: 2492S-2498S

Estudos associam alimentos com incidncia e gravidade de:

Cardiovascular Obesidade Diabetes Cncer Outras doenas crnico-no transmissveis

Esto sendo estudados inmeros polimorfismos afetando diferentes enzimas e protenas relacionados a diversas condies clnicas. Em cada caso, a dieta deve ser individualizada.

Polimorfismos associados com diferentes condies clnicas

Polimorfismo ApoE, ApoA-1 Leptina Perilipina GPL-1, GPL-2 (Glucagon peptide like) MTHFR

Funo Transporte do Colesterol Controle do apetite Regulao da liplise Insulina Glucagon Metabolismo do cido flico

Fentipo Doenas cardiovasculares Obesidade

Diabetes tipo II Hiperhomocisteinemia

Codificao do gene MTHFR

Cromossomic region 1p36,3 (Goyette et
exon 1
intron

al., 1994 and 1998)

exon 10 exon 11
intron

exon 2
intron

exon 3
intron

exon 4

exon 5
intron

exon 6
intron

exon 7
intron

exon 8
intron

exon 9

intron

intron

17 Kb

Mutation C677T

Mutation A1298C

Mutation G1793A

Vrias mutaes do gene da MTHFR foram descritas.

Mutations C677T e A1298C (higher frequency)

Frosst et al. (1995) Van der Put et al. (1998)

Mutation G1793A
Rady et al. (2002)

59

Via metablica do cido flico

Dimetil-glicina
THF

MTHFR 5,10-metileno tetrahidrofolato

Remetilao

Metionina
SAM

MS + B12

Transmetilao
SAH

5 metil -THF

Betana

Homocistena
CS + B6

Colina Cistationina Transulfurao

Cistena

Sulfato

Polimorfismo na MTHFR x Hiperhomocisteinemia

Polimorfismo na MTHFR
nveis de folato nveis de homocistena

Leso endotelial

Leso endotelial x Doenas cardiovasculares

Estresse oxidativo Oxidao do LDL-colesterol

Leso endotelial

Aumento da atividade das plaquetas Aumento da proliferao de clulas musculares lisas

Doenas Cardiovasculares

Homocisteinemia x cido Flico

14 12 10 8 6 4 2 0 Basal Aps

Mediana das concentraes plasmticas de homocistena (mol/L) dos indivduos diabticos, Mutao C677T antes e aps a suplementao com Mutao A1298C Mutao G1793A cido flico, de acordo com as trs mutaes do gene que codifica a MTHFR.

Homocistena (mol/L)

Melo SS, Vannucchi H, 2003

Polimorfismos da MTHFR em Renais Crnicos

n = 89 PACIENTES

50 40
Nmero de casos

30 20 10 0
C677T A1298C G1793A SEM MUTAO

Mutaes
Domenici et al., 2007

Modulao da expresso gnica

Alcoolismo x -tocoferol Expresso gnica

Biomarcadores do estresse oxidativo glutationa peroxidase, superxido dismutases, catalase Modulao da expresso gnica pela vitamina E

Cncer x Sulforafano Expresso gnica

Benzopireno (carnes assadas) mutao Glutationa S-transferase (GST) detoxifica o benzopireno Alimentos crucferos (brcolis, couve-flor): sulforafano induz a expresso de GST

Funo Imune x mega 3 Expresso gnica

Modulao de genes envolvidos na funo leucoucitria e resposta inflamatria. Uso teraputico: transplantes ( rejeio) artrite reumatide asma

Martins de Lima et al., 2007.

Princpios da Nutrigenmica
1 fatores de risco para doenas 2 3 4
CBA da dieta alteram a expresso gnica CBAs podem consistir em

Influncia da dieta sobre a sade depende da constituio gentica de cada indivduo

Genes regulated bypela diet play role papel in Genes regulados dieta atm em doenas chronic diseases crnicas

Nutrio personalizada dieta baseda em variaes genmicas individuais - estabelecimento de recomendaes nutricionais adequadas.

http://nutrigenomics.ucdavis.edu/

Definies
Genoma utilizao de recursos da moderna genmica na avaliao da funo dos genes dando condies para os cientistas nutricionais determinar quais os componentes da alimentao que exercem um papel organofuncional importante na nutrio e na sade. Transcriptoma termo dado ao produto inicial da expresso gnica de um organismo, ou seja, o conjunto de RNAs mensageiros que codificam as informaes que a clula precisam em um determinado momento. Proteoma estudar todas as protenas produzidas por uma espcie, utilizando as tecnologias genmicas aplicadas ao estudo do genoma com adaptaes especficas para as protenas. Metaboloma uma subrea da nutrigenmica que tem por objetivo o estudo de todo o compartimento metablito das clulas, tecidos e fludos orgnicos.

DNA
Genoma

Expresso

RNA

Traduo

Protena

Metabolismo

Metablito
Metaboloma

Transcriptoma

Proteoma

Sequenciamento SNP

Array qRT-PCR

2D Gel MALDI-TOF ESI-MS/MS

GC-HPLC LC/MS or GC/MS FTR, NMR

Genmica Funcional

Dieta

Perspectivas futuras
Nutrigenmica

DNA

D I E T A

Nutritranscriptmica

Transcritos (RNA)

Nutriprotemica

Protenas

Nutrimetabolmica

Metablitos

F E N T I P O S

Entender como a dieta influencia a regulao metablica e como a dieta pode ser modificada para melhorar a sade.
Biotechnology Advances 2008; 26: 169.

Centros de Excelncia em Nutrigenmica

Links interessantes:

http://www.nutrigenomicabrasil.org http://nutrigenomics.ucdavis.edu/ http://www.nutrigenomics.nl/ http://www.nugo.org/everyone

The End