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Espectrofotometria
6.1 Introdu c ao

Medir e basicamente chacoalhar o objeto sob estudo, e ver o que acontece. Uma maneira boa de cutucar mol eculas, e com radia ca o eletromagn etica (luz). A palavra espectrofotometria designa um m etodo de an alise baseado em medidas de absor ca o de radia ca o eletromagn etica. A t ecnica que aqui se descreve est a restrita a uma pequena regi ao de comprimento de onda da radia ca o eletromagn etica, que corresponde ` a luz vis vel: e a faixa entre 400 e 700 nm (1 nanometro = 109 m, 400 nm = 0,4 m.)

6.2

Absor c ao de Radia c ao

V arias coisas podem acontecer com a radia ca o luminosa que atinge uma certa subst ancia (ver Figura 6.1) A radia ca o incidente pode sofrer reex ao, refra ca o, espalhamento ou ser absorvida pelo material. Disso resulta que somente uma parte da radia ca o incidente e transmitida atrav es do material. Se conseguirmos de alguma forma eliminar os efeitos de espalhamento e reex ao, temos que, a parcela da radia ca o incidente que n ao foi transmitida sofreu absor ca o por parte do material. Nessas condi co es, poderemos retirar de dados referentes ` as intensidades de radia ca o incidente e transmitida pelo mesmo. De verdade, o processo de absor ca o ocorre ao n vel molecular. Assim, como acontece num atomo, cada mol ecula caracteriza-se por possuir n veis de energia moleculares quantizados, os quais podem ser ocupados pelos el etrons das mol eculas. Por outro lado, a radia ca o carrega energia, sendo que o valor dessa energia depende do comprimento de onda da radia ca o. A absor ca o da radia ca o se d a quando a energia que ela transporta e igual ` a diferen ca entre dois n veis de energia da mol ecula; nessa situa ca o, a energia da radia ca o e transferida para a mol ecula e ocorre a chamada absor ca o de radia ca o. Como mol eculas de subst ancias diferentes t em diferentes n veis moleculares de energia, ocorre que cada subst ancia absorve a radia ca o de maneira peculiar. Dito de outra forma, os comprimentos de onda que uma certa subst ancia absorver ao s ao caracter sticos da sua estrutura e outras subst ancias absorver ao outros comprimentos de onda. Esse fato traz uma importante consequ encia; se levantarmos dados referentes ` a intensidade de luz absorvida (ou transmitida) por uma subst ancia, em fun ca o dos comprimentos de onda da radia ca o, estaremos obtendo uma curva chamada espectro de absor ca o da

Figura 6.1: Reex ao, refra ca o, espalhamento e absor ca o fazem com que a luz que sai da amostra tenha uma intensidade menor do que a luz que incide.

6.3. Lei de Lambert-Beer

Figura 6.2: Experimento ao qual se refere a lei de Lambert-Beer.

subst ancia. O importante e que cada subst ancia tem um espectro caracter stico e, desse modo, se queremos identicar um material desconhecido, poderemos faz e-lo a partir de sua curva de absor ca o, comparada com curvas de subst ancias conhecidas. Uma vez conhecido o espectro de absor ca o de uma dada subst ancia pode-se tamb em determinar em que quantidade essa subst ancia se apresenta em uma solu ca o analisada. Isso e feito atrav es da medida da intensidade de luz que atravessa a amostra, como veremos a seguir.

6.3

Lei de Lambert-Beer

Lambert estudou a transmiss ao de luz por s olidos homog eneos. Beer estendeu o trabalho de Lambert ao estudo de solu co es. Com a contribui ca o de Beer, podem-se apresentar as conclus oes dos dois pesquisadores na forma de uma lei conhecida como a Lei de Lambert-Beer. Atrav es dessa lei, intensidades da radia ca o incidente e emergente podem ser relacionadas com as concentra co es do material presente na solu ca o. Vamos discorrer brevemente sobre essa lei, com os seguintes esclarecimentos: 1. S ao considerados desprez veis os efeitos de reex ao, refra ca o e espalhamento. 2. A radia ca o incidente deve ser monocrom atica, isto e, conter somente um comprimento de onda. Isto posto, vamos considerar a situa ca o ilustrada na Figura 6.2. I0 e I s ao, respectivamente, as intensidades da radia ca o incidente e transmitida pela amostra. O que foi observado por Beer, ao estudar a radia ca o incidente sobre solu co es, e que a intensidade transmitida decai exponencialmente com o aumento do caminho percorrido na solu ca o (comprimento b da Figura 6.2), e tamb em com o aumento da concentra ca o c: I = I0 10abc sendo c a concentra ca o do material em estudo, b o comprimento interno do recipiente que contem a solu ca o, e a um fator caracter stico do comprimento de onda da radia ca o e da natureza do material dominado absortividade. absorvedor, tanto do solvente como do soluto. E A grandeza que medimos experimentalmente e a transmit ancia T que e a raz ao entre a intensidade incidente e a transmitida: T = I/I0 (6.1) Em rela ca o a essa grandeza, a lei de Lambert-Beer assume ent ao a forma T = 10abc Normalmente os espectrofot ometros apresentam tamb em a medida de outra grandeza que e a absorb ancia A, denida como A = log10 T (6.2)

6.4. Instrumenta c ao Assim, em rela ca o ` a absorb ancia a lei de Lambert-Beer e escrita A = log10 T = log10 (1/T ) = log10 (10abc ) e portanto, A = abc

(6.3)

Neste experimento vamos nos preocupar com uma aplica ca o imediata dessa lei: para uma solu ca o de dada subst ancia, em um certo solvente, analisada a um certo comprimento de onda da radia ca o, pode-se tra car uma curva da absorb ancia A em fun ca o da concentra ca o c; a partir dessa curva ser a poss vel determinar a concentra ca o de qualquer amostra dessa solu ca o.

6.4

Instrumenta c ao

De maneira global, um espectrofot ometro tem tr es partes: Fonte de radia c ao normalmente e uma l ampada incandescente. Existe tamb em um controle de intensidade da radia ca o, mas e fundamental um meio de controle do comprimento da onda (por exemplo, ltros ou monocromatizadores como prismas ou grades de difra ca o). No nosso aparelho, pode-se selecionar o comprimento de onda da luz incidente atrav es de um controle manual. Amostra deve estar contida em um recipiente apropriado do tipo tubos de ensaio ou cubetas. Como normalmente medidas comparativas s ao feitas (uma medida com s o solvente, outra com solvente e soluto), as cubetas v em emparelhadas. As cubetas s ao fabricadas o mais semelhante poss vel. Assim, no resultado nal, somente o soluto faz uma contribui ca o ` a absor ca o. Detetor e um elemento sens vel ` a radia ca o e que pode nos dar uma medida da intensidade da mesma; varia desde foto-mol eculas at e o pr oprio olho. Um indicador no aparelho converte o sinal do elemento em um n umero. Os instrumentos em geral disp oe de duas escalas: uma delas nos d aa transmit ancia T (Eq. 6.1) e a outra d a a absorb ancia A (Eq. 6.2) direto, evitando a necessidade de uma calculadora.

6.5

Experimento

Medida do espectro de absor c ao de um corante

Cada grupo vai medir o espectro de absor ca o de dois corantes. Divida o grupo em dois, cada um sendo respons avel para as medidas de um corante. A receita para medir o espectro segue: 1. Ligue o aparelho, e espere cinco minutos para o aquecimento e estabiliza ca o dos circuitos. 2. Ajuste o comprimento de onda para o valor m nimo ( = 400 nm). 3. Sem cubeta no aparelho, tem um obst aculo entre a l ampada e o detetor. A transmit ancia neste situa ca o deve ser zero: regule a transmit ancia T para zero, usando o bot ao apropriado. , 4. Coloque uma cuba com somente solvente na porta-amostra do aparelho. Nesta situa ca o, vamos denir a transmit ancia sendo 100% (T = 1). Portanto, regule a transmit ancia para 100 %, usando o bot ao apropriado. Este ajuste e feito para que, ao analisarmos a solu ca o, tenhamos eliminado a absor ca o por parte do solvente e a cuba. Ao contr ario do ajuste do item anterior, a regulagem da transmit ancia 100 % deve ser feita para todo valor de , uma vez que o solvente pode absorver diferentemente em cada . 5. Retire a cuba com o solvente e coloque em seu lugar a que contem a solu ca o. O indicador dar aa transmit ancia T ou a absorb ancia A, dependendo da posi ca o de um bot ao. Anote os dois. 6. Varie a intervalos adequados, repetindo sempre os itens (4) e (5). 7. Fa ca um gr aco com dois eixos verticais, um para T , outro para A. Coloque os dados das duas solu co es no mesmo gr aco.

Medida da curva de concentra c ao

Vai agora xar um comprimento de onda e obter dados da absorb ancia de uma das duas solu co es em fun ca o da concentra ca o do solu ca o.

6.6. Relat orio

1. A partir dos dados da parte anterior, xe o comprimento de onda no valor correspondente ` a m axima absor ca o. 2. Coloque o solvente no porta-amostras e fa ca os ajustes de transmit ancia zero e 100%, como na parte anterior. 3. Me ca a absorb ancia, dilua a solu ca o e repita, at e n ao conseguir medir mais porque a transmit ancia (T ) cou perto de 100% (a absorb ancia A cou muito pequena). 4. Fa ca o gr aco dos seus dados (A contra a concentra ca o normalizada, c/c0 ) e compare com Eq. 6.3. (A proporcionalidade e vericada?)

6.6

Relat orio

Como sempre, vamos nos preocupar sobretudo com uma apresenta ca o boa dos dados e a discuss ao dos mesmos. Descreva eventuais diculdades que tinha com o seu aparelho. Discuta a rela ca o entre o seu espectro e a cor da solu ca o que usou. A lei de Lambert-Beer (proporcionalidade entre concentra ca o e absorb ancia) foi vericada?