UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPRITO SANTO PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM QUMICA DISCIPLINA SEMINRIOS II

LAB-ON-A-CHIP
Discente: Lucas de Almeida Gama
LAB-ON-A-CHIP: NICIO, DEFINIO E CARACTERSTICAS Desde meados dos anos 50 ocorrem grandes esforos por parte dos pesquisadores para o desenvolvimento de tecnologias mais baratas e melhores que as convencionais, sendo a diminuio da escala dos sistemas um dos pontos principais de pesquisas. Com o passar dos anos foram sendo criadas a Microtecnologia, Nanotecnologia, Sistemas Microeletromecnicos, Microssistemas, Lab-On-a-Chip e demais nomes bastante sugestivos, porm uma palavra resume todas estas reas: MINIATURIZAO. Exemplos dessas miniaturizaes so vistas no cotidiano, basta percebermos a sutileza dos processos ao nosso redor como: sensores de injees eletrnicas, DVDs, Blue-Ray, dosadores de colesteris, chip de processamento em computadores entre outros inmeros exemplos [1][2]. O termo Lab-On-a-Chip (LOC) surgiu na dcada de 1960 e a integrao da anlise biolgica e/ou qumica, atravs de microfludos, com a tecnologia dos chips para criar processamento laboratorial automatizado em miniaturas de poucos milmetros quadrados (Fig. 1). Os LOCs so dispositivos com sistemas microeletromecnicos, em conjunto, que so conhecidos como Micro Total Analysis Systems (TAS). O termo Lab-On-a-Chip normalmente usado quando alteramos a escala de simples ou mltiplos processos de laboratrio para o tamanho de um chip j o termo TAS indica que o sistema dedicado a uma sequncia de processos, melhorados, de anlises qumicas [2][3].

FIG. 1. Miniaturizao de laboratrio, Lab-on-a-Chip. (Fonte: www.gene-quantification.de acessado em 29/10/2013)

O campo da microfludica tem quatro ramos de origem: anlise molecular, biodefesa, biologia molecular e microeletrnica. Primeiro veio a anlise. A microfludica se originou juntamente com os mtodos de microanlise - cromatografia em fase gasosa (GC), cromatografia lquida de alta presso (HPLC) e eletroforese capilar (CE), - nas quais o formato capilar revolucionou a anlise qumica. Esses mtodos (combinadas com a potncia do laser na deteco ptica) tornou possvel conseguir simultaneamente sensibilidade elevada e de alta resoluo utilizando pequenas quantidades de amostra. Com o sucesso destes mtodos de microanlise, parecia bvio desenvolver novos formatos, mais compactos e mais verstil para eles, e olhar para outras aplicaes de mtodos de microescala em qumica e bioqumica [4]. O segundo veio da motivao para o desenvolvimento de sistemas microfludicos com - aps o fim da guerra fria - as armas qumicas e biolgicas que representavam grandes ameaas militares e terroristas. Para combater essas ameaas, a Defense Advanced Research Projects Agency (DARPA) do Departamento de Defesa dos EUA apoiou uma srie de programas na dcada de 1990 que visassem o desenvolvimento de sistemas microfludicos de campo projetados como detectores para ameaas qumicas e biolgicas. Estes programas foram o principal estmulo para o rpido crescimento da tecnologia microfludica acadmica [4][5]. A terceira fora motivadora veio do campo da biologia molecular. A exploso da genmica na dcada de 1980, seguida pelo advento de outras reas de microanlise

relacionadas com a biologia molecular, por exemplo o sequenciamento de DNA, que assim foi necessrio mtodos analticos com maior rendimento e maior sensibilidade e resoluo do que j havia sido contemplado na biologia. A quarta contribuio foi da microeletrnica. A esperana inicial era de que os sistemas de slicio, da microeletrnica, seriam utilizados associados a outras tecnologias. Alguns dos primeiros trabalhos em microssistemas fludicos, na verdade, utilizaram silcio e vidro, mas estes materiais foram substitudos rapidamente por plsticos. Para as anlises de amostras biolgicas em gua, os dispositivos fabricados em vidro e o silcio so geralmente desnecessrios ou inapropriados. De silcio, em particular, caro, e opaco a luz visvel e ultravioleta, por isso no podem ser utilizados com mtodos pticos de deteco convencionais. mais fcil de fabricar os componentes requerido para sistemas de microanlise - especialmente bombas e vlvulas - em elastmeros do que em materiais rgidos pois nem vidro, nem silcio tem todas as propriedades (especialmente a permeabilidade a gases) necessrias para o trabalho com clulas de mamferos vivos. Assim, os dispositivos microfluidicos no se desenvolveram como clones de dispositivos microeletrnicos de silcio. Grande parte da investigao exploratria em sistemas microfludicos foi realizada num polmero polidimetilsiloxano, ou PDMS - cujas propriedades so inteiramente distintas das dos silcio. PDMS um elastmero macio opticamente transparente.

FIG. 2. Molcula de polidimetilsiloxano, PDMS.

A manipulao de fludos em quantidades micromtricas vem se desenvolvendo como um novo campo distinto tendo o potencial de influenciar as reas da sntese qumica e anlise biolgica. Porm, devido ao fato de ser uma cincia em estgio inicial de desenvolvimento h problemas intrnsecos tais como escolher um foco para qual aplicao antes do desenvolvimento e analisar a comercializao, sendo necessrios para solucionar os problemas, imaginao e criatividade [4].

As primeiras aplicaes da tecnologia microfludica foram em anlises, para as quais oferecem um certo nmero de capacidades teis: a capacidade de utilizar quantidades muito pequenas de amostras e reagentes, conseguir separaes e deteces com alta resoluo e sensibilidade; baixo custo; curto tempo para a anlise. Dispe fundamentalmente de novas capacidades de controle de concentraes de molculas no espao e no tempo. Embora tenha inmeras vantagens e to poucas desvantagens ainda est em processo de ampliao e desenvolvimento, necessitando assim, que no perca o objetivo de tornar uma tecnologia til para a sociedade atravs da Lab-On-a-Chip em laboratrios e industrias e o seu principal objetivo de ser um sistema home-test para diversos pacientes [2][3][4]. LOC pode proporcionar vantagens que so especficas para cada tipo de montagem, porm possui algumas vantagens tpicas como: Baixo consumo de lquidos (menos resduos, reduo de custos e menor volumes de amostras necessrios para o diagnstico); Anlise e tempo de resposta mais rpidos devido a curtas distncias de difuso, aquecimento rpido, alta superfcie em comparao aos volumes utilizados; Melhor controle de processo por causa de uma resposta mais rpida do sistema (por exemplo, controle trmico de reaes qumicas); Compactabilidade dos sistemas devido integrao de muita funcionalidade e pequenos volumes; Permite a anlise de alto rendimento; Plataforma mais segura para o produto qumico, estudos radioativos ou biolgicos devido integrao de funcionalidade, os volumes de fluido de menores dimenses e as energias armazenadas no sistema. E algumas das desvantagens da LOC so: Tecnologia nova e, por conseguinte, ainda no totalmente desenvolvida; Efeitos fsicos e qumicos como foras capilares, rugosidade da superfcie, interaes qumicas dos materiais de construo nos processos reacionais tornam-se mais dominante em pequena escala. Isto as vezes pode tornar os processos em LOCs mais complexos do que em equipamento de laboratrio convencional;

 Princpios de deteco em uma escala reduzida nem sempre possuem forma positiva, levando a baixa relao sinal-rudo; Embora as precises geomtricas e preciso em micro fabricao sejam altos, eles so bastante pobres de uma forma relativa, em comparao com engenharia de preciso, por exemplo [2]. O PRESENTE DA MICROFLUDOS Um sistema de microfludos tem de ter uma srie de componentes genricos: um mtodo de introduo de reagentes e amostras (provavelmente como fluidos, de preferncia, embora com a opo de utilizar p); mtodos para mover esses fluidos dentro do chip, e por combinao, mistur-los; e vrios outros dispositivos (tais como detectores para trabalho de microanlise, e componentes para a purificao de produtos dos sistemas utilizados em uma sntese). O campo tem, at agora, infelizmente, centrado na demonstrao de conceitos para esses componentes. Existem hoje mtodos suficientes de fabricao, e uma gama suficiente de componentes, para que seja possvel comear a aplicar sistemas microfludicos para a resoluo de problemas (em vez de simplesmente a demonstrao de princpios). A mais desenvolvida das suas aplicaes , provavelmente, seu uso s condies de anlise de pH, fora e composio inica, co-solventes, e concentrao; estes procedimentos tm o potencial para rastrear inmeras condies, para separar a nucleao e crescimento de cristais, e minimizar o dano para os cristais por um tratamento, uma vez que se formaram. Parte dessa tecnologia j est disponvel comercialmente e outras aplicaes para as quais existem demonstraes laboratoriais incluem separaes acoplada a espectrometria de massas para o desenvolvimento de drogas, bioanlises, anlise e manipulao de amostras que consiste de uma nica clula, ou uma nica molcula, e sntese de compostos orgnicos com tomografia por emisso de psitrons (PET). O desenvolvimento de sistemas de microanlise prticos, especialmente aqueles para bioanalises, continua rapidamente, embora, dado o seu foco inicial, esta rea tem sido mais empregada de forma muito lenta usos em rotinas. Parte do problema existir limitada tecnologia em duas partes do ciclo de anlise: na preparao da amostra e na deteco. Amostras biolgicas - particularmente em amostras clnicas (tais como sangue ou fezes), ou aquelas obtidas por amostragem ambiental (como o solo) - so
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muitas vezes diludas ou complicadas. Antes destas amostras poderem ser analisadas por dispositivos microfludicos, elas devem ser convertidos para uma forma que seja compatvel com a inteno da anlise, e, em seguida, introduzida no dispositivo analtico. Tendo o chip de microfludica como apenas uma pequena parte de um sistema em que a introduo da amostra e a deteco so muito mais complicada do que a operao do chip pode ser inapropriado em alguns casos, mas no impede as vantagens potenciais dos dispositivos microfludicos. Outros problemas convencionais, tais como bombas, vlvulas e armazenamento de reagentes on-chip, tambm exigem solues melhores do que os disponveis at o momento [4]. PRIMEIRA FIGURA:

Triagem eficiente para otimizao das condies de cristalizao de protena. Dispositivos microfludicos so adequados para as condies de seleo em que as protenas se cristalizar, como demonstrado inicialmente por Quake. a, um dispositivo no qual as gotas que contm as protenas so presos em poos nos microcanais. As gotculas so ento submetidas a diversos condies de cristalizao. b, Uma micrografia ptica de gotculas tingidos nas cavidades do aparelho. c, gotas que contm protenas cristalizadas. As gotculas so produzidas num dispositivo de microfluidos, em seguida, recolhido num capilar de vidro. Este procedimento tem o potencial para rastrear um grande nmero de condies, para separar a nucleao e crescimento de cristais, e para minimizar os danos aos cristais pelo tratamento, uma vez que se formaram.

SEGUNDA FIGURA:

FUTURO A esperana original para microfludica, e que ainda motiva muitos pesquisadores que trabalham no campo, que vai ser uma tecnologia prtica uma amplamente utilizada num nmero diferente de aplicaes. Porm, ela deve se tornar bem sucedida comercialmente, em vez de continuar a ser um campo com base em demonstraes de conceito e trabalhos acadmicos. O impacto dos sistemas microfludicos - como acontece com outras ferramentas, como lasers, Espectroscopia de RMN (ressonncia magntica nuclear) e sonda microscpicas de varredura - s se tornam aparentes quando todo mundo est usando eles. Microfludos devem ser capazes de resolver os problemas para os usurios que no so especialistas em mecnica dos fluidos, tais como mdicos, bilogos celulares, policiais ou funcionrios de sade pblica. Para estas aplicaes, as empresas devem assumir a tarefa de tornar os sistemas apropriados amplamente disponveis e com baixo custo. O mundo em desenvolvimento no tem acesso a muitas das melhores tecnologias de diagnstico mdico, eles foram projetados para laboratrios climatizados, armazenamento refrigerado de produtos qumicos, um fornecimento constante de reagentes e calibradores, energia eltrica estvel, pessoal altamente treinado e transporte rpido das amostras. Sistemas microfludicos permitem a miniaturizao e integrao de funes complexas, o que poderia mover ferramentas de diagnstico sofisticados fora do laboratrio do mundo desenvolvido. Estes sistemas devem ser barato, mas tambm preciso, confivel, robusto e bem adaptada aos contextos mdicos e sociais do mundo em desenvolvimento [4][5]. Entre as mais interessantes e importantes das aplicaes potenciais de sistemas microfludicos esto aquelas para as quais ela foi originalmente direcionada: aplicaes biomdicas e afins que necessitam de pequenas quantidades de amostra, operao de rotina por pessoal no qualificado, e de baixo custo. Existe uma semelhana atraente numa srie destas aplicaes, e os volumes das anlises adequadas poderiam, em princpio, ser bastante grande (centenas de milhes de testes por ano). Este grupo de aplicaes que incluem prestao de servios e acompanhamento no desenvolvimento de economias, casa de sade e de uso em consultrios mdicos em pases desenvolvidos economias, usos de segurana nacional e contraterrorismo, uso, em primeiro lugar respondedores (policiais, paramdicos e bombeiros), aplicaes em medicina veterinria, e incorporao ambiental e

monitoramento qualidade de alimentos. Sistemas de diagnstico para as economias em desenvolvimento requerem baixo custo da tecnologia, adaptvel microfludicos para o seu sucesso [4]. A microfludica uma cincia e uma tecnologia. Ela oferece grande - talvez at mesmo revolucionrios - recursos para futuro. Ela tambm est em sua infncia, e uma grande quantidade de trabalho precisa ser feito antes que possa ser reivindicada a ser mais do que um campo ativo de pesquisa acadmica. No entanto, os fundamentos do campo so muito fortes: muito da tecnologia do mundo requer a manipulao de fluidos e estender essas manipulaes para pequenos volumes, com controle dinmico preciso sobre as concentraes, enquanto descobrindo e explorando novos fenmenos ocorrendo nos fluidos ao nvel microescala. Desde sntese a sntese da reia no laboratrio de Whler em 1828, o conjunto de ferramentas do qumico foi predominantemente constituda por componentes macroscpicos fabricados a partir de vidro. Exemplos incluem frascos de fundo redondo, tubos de ensaio, colunas de destilao, condensadores de refluxo e outros. Apesar dos avanos na qumica orgnica experimental e mecanicista durante o sculo passado, de salientar que as tcnicas experimentais bsicas e equipamentos associados mantiveram-se praticamente inalteradas. H uma srie de razes pelas quais a qumica sinttica tradicional executada no referido equipamento, porm a aplicao de tcnicas de cultivo nas indstrias de semicondutores tm permitido a criao de uma nova plataforma instrumental capaz de manipular eficientemente, processar e analisar reaes moleculares em micrmetros escala nanomtrica. Mesmo nesta fase inicial do desenvolvimento de sistemas de reao dos microfludicos, fica claro que as vantagens geradas pela miniaturizao pode afetar a sntese molecular semelhante maneira que o circuito integrado definiu a revoluo do computador ao longo dos ltimos 50 anos [4][6].