Embondeiro

palavras-chave
Adansonia digitata, polpa do fruto de baob, embondeiro, calabaceira, fenis,

indoles, ftalatos, capacidade antioxidante, mtodo Folin-Ciocalteu, actividade
antiradicalar, DPPH
.
, espectrometria de massa com ionizao por electrospray.
resumo

O presente trabalho teve como objectivo o estudo e caracterizao qumica
dos compostos extractveis da polpa do fruto da rvore Adansonia digitata,
baob, ou calabaceira, como mais conhecida em Cabo Verde, local de onde
so provenientes os frutos estudados. Em muitas regies este fruto tropical
africano uma importante fonte nutricional, e de inmeras e relevantes
aplicaes teraputicas nas regies da qual endmico.
A partir da obteno de vrios extractos, usando metanol e uma mistura de
acetona/gua, estudou-se a capacidade antioxidante e poder antiradicalar de
cada um dos extractos isolados, pelo mtodo de Folin-Ciocalteau e por
espectrofotometria usando o radical DPPH
.
, respectivamente, de forma a
atestar as propriedades apontadas a este fruto na literatura.
Usando ESI-MS/MS de modo negativo e positivo, estudou-se qualitativamente
a presena de vrias substncias no extracto de metanol aps fraccionamento
em clorofrmio. A identificao das substncias em cada espectro de ESI-
MS/MS foi feita atravs da massa do io molecular e respectivos ies
fragmento, atravs da consulta de bases de dados online e literatura recolhida.
Foi encontrada uma srie de artefactos formados durante o procedimento
experimental, revelou-se a presena de cido cumrico como espcie
maioritria na fraco estudada e do indole-3-carbinol, uma substncia
biologicamente activa, pouco usual em frutos, que contribui para a explicao
de algumas propriedades reportadas a este mpar fruto tropical africano.

Keywords

Adansonia digitata, baobab fruit pulp, embondeiro, calabaceira, phenolics,
indols, phthalates, antioxidant capacity, Folin-Ciocalteu method, antiradical
activity, DPPH
.
, electrospray mass spectrometry.
abstract

The aim of the present work was the study and chemical characterization of
extractable substances, in the fruit pulp of the tree Adansonia digitata, baobab,
or calabaceira, as is better known in Cape Verde, place of where the fruits
studied are from. In many regions this african tropical fruit is an important
nutritional source and with numerous and important therapeutic applications in
regions where it is endemic.
From several extracts, using methanol and a mixture of acetone/water, it was
studied the antioxidant capacity and antiradical power, for each of one isolated
extractes, by Folin-Ciocalteu method, and by spectrophotometry, using the
DPPH
.
Radical, respectively, in order to testify the properties pointed in the
literature for this fruit.
Using ESI-MS/MS in negative and positive mode, it was qualitatively studied
the presence of several substances in the methanol extract after fractionation in
chloroform. The identification of substances in each ESI-MS/MS spectrum was
made by the mass of the molecular ion and ions fragments, by comparison in
online databases, and literature collected. A series of artefacts were found
formed during the experimental procedure. Coumaric acid was found to be the
main specie in the studied fractions, and indole-3-carbinol, a biologically active
substance, unusual in fruits, was also found, what contributes to the
explanation of some functional properties reported in this unique african tropical
fruit.

ndice Geral

NDICEDEFIGURAS........................................................................................................................................I
NDICEDETABELAS......................................................................................................................................VI
GLOSSRIODEABREVIATURAS...................................................................................................................VIII
1 OBJECTIVOS...........................................................................................................................................1
2 INTRODUO.........................................................................................................................................2
2.1. ARVORE(ADANSONIADIGITATA)...................................................................................................................2
2.2. OFRUTO.....................................................................................................................................................4
2.3. PROPRIEDADESNUTRICIONAISDOFRUTODEBAOB.............................................................................................5
2.4. PRINCIPAISAPLICAESDEBAOB....................................................................................................................7
2.5.1. Propriedadesantioxidantes..............................................................................................................8
2.5.3. Actividadesantipirticas,analgsicaseantiinflamatrias...........................................................10
2.5.4. Actividadeantidiarreicaedeantidesintrico.................................................................................10
2.6. COMPOSTOSFENLICOSNANATUREZA............................................................................................................11
2.7. PROPRIEDADESANTIOXIDANTESDOSCOMPOSTOSFENLICOS..............................................................................12
2.8. DIFERENTESCLASSESDECOMPOSTOSFENLICOSNANATUREZA...........................................................................14
2.8.1. cidosfenlicos..............................................................................................................................14
2.8.2. Flavonides.....................................................................................................................................16
2.8.3. Calconasedihidrocalconas...........................................................................................................16
2.8.4. Flavonas,flavanonaseisoflavonaseantocianinas........................................................................17
2.8.5. Tocoferis.......................................................................................................................................18
2.8.6. Taninos,catequinas,proantocianidinas.........................................................................................19
2.9. ALCALIDES...............................................................................................................................................19
2.9.1. Definio........................................................................................................................................19
2.9.2. Classificaodealcalides.............................................................................................................20
2.9.2.1. Alcalidesverdadeiros....................................................................................................................21
2.9.2.2. Protoalcalides...............................................................................................................................21
2.9.2.3. Pseudoalcalides............................................................................................................................22
2.9.3. Ocorrnciaeaplicaes..................................................................................................................22
2.10. PREPARAODEEXTRACTOSDEORIGEMVEGETAL.............................................................................................23
2.11. MTODOSESPECTROFOTOMTRICOS...............................................................................................................25
2.11.1. Quantificaodefenistotais........................................................................................................25
2.11.2. Mediodopoderantiradicalardepolifenis................................................................................25
2.12. ESPECTROMETRIADEMASSACOMIONIZAOPORELECTROSPRAY(ESIMS)..........................................................26
2.12.1. Mecanismodeproduodeies....................................................................................................27

2.12.2. Instrumentao..............................................................................................................................29
2.12.3. Analisador......................................................................................................................................30
2.12.4. Aplicaes.......................................................................................................................................31
3 MATERIAISEMTODOS.......................................................................................................................33
3.1. AMOSTRA..................................................................................................................................................33
3.2. PREPARAODOSEXTRACTOS.......................................................................................................................35
3.3. QUANTIFICAODEFENISTOTAISPELOMTODOFOLINCIOCALTEU....................................................................35
3.4. MEDIODOPODERANTIRADICALARDOSCOMPOSTOSEXTRACTVEISPORESPECTROFOTOMETRIAUTILIZANDODPPH
.
..36
3.5. PREPARAOGRADUALEMSOLUESDECLOROFRMIO/METANOL.....................................................................37
3.6. IDENTIFICAOECARACTERIZAODOSEXTRACTOSEMESIMS..........................................................................37
4 DISCUSSO/RESULTADOS....................................................................................................................39
4.1. QUANTIDADEDEEXTRACTOISOLADOEPURIFICADO...........................................................................................39
4.2. QUANTIFICAODEFENISTOTAISPELOMTODOFOLINCIOCALTEU....................................................................40
4.3. MEDIODOPODERANTIRADICALARDOSCOMPOSTOSEXTRACTVEISPORESPECTROFOTOMETRIAUTILIZANDODPPH
.
..42
4.4. PREPARAOGRADUALEMSOLUESDECLOROFRMIO/METANOL.....................................................................46
4.5. IDENTIFICAOECARACTERIZAODOSEXTRACTOSEMESIMS..........................................................................46
4.5.1. AnliseemESIMSdemodopositivo..............................................................................................47
4.5.2. AnliseemESIMSdemodonegativo............................................................................................52
5 CONCLUSES.......................................................................................................................................59
5.1. EXTRACO,QUANTIDADEEMFENISEACOANTIOXIDANTE............................................................................59
5.2. SUBSTNCIASISOLADASDAFRACOESTUDADA...............................................................................................60
5.3. CONSIDERAESGERAIS...............................................................................................................................62
6 REFERNCIAS.......................................................................................................................................64
ANEXO.....................................................................................................................................................69

Pgina | I

ndice de Figuras

2Introduo
11
15
16
16
17
17
18
19
20
21
3
4
4
4
Figura2.1Baob(Calabaceira,Adansoniadigitata).
Figura2.2Frutodebaobverdeaindanarvore.
Figura2.3Frutodebaobaberto.
Figura2.4Frutodebaobsecoaberto.
Figura 2.5 Biossntese de fenilpropanides, lignanas, ligninas, suberinas, flavonides

taninosapartirdafenilalania.
20
Figura2.6Estruturaqumicadoscidoshidroxibenzicos(a)ehidroxicinmicos(b).
Figura2.7Estruturadoesqueletobasedosflavonides.
Figura2.8Estruturaqumicadeumacalcona.
Figura2.9Estruturaqumicadeumaflavona(a)eflavanona(b)eisoflavona(c).
Figura2.10Estruturaqumicadasantocianinas.
Figura2.11Estruturaqumicadotocoferoletocotrienol.
Figura2.12Biossntesedeproantocianidinas,taninoscondensados.
29
Figura2.13Estruturaqumicadamorfina.
Figura2.14Exemplodegruposqumicosdealcalidesverdadeiros.
31

Pgina | II

3MateriaiseMtodos
Figura3.1Frutodebaob.
Figura3.2Frutodebaobaberto.
Figura3.3Pormenordointeriordofrutodebaob.
Figura3.4Pormenordapolpa.
Figura3.5Sementesdofrutodebaobab.
Figura1.6Pobtidoapstrituraodapolpa.
32
32
32
33
33
33
Figura2.15Exemplodedoisprotoalcalides.
31
Figura2.16Estruturaqumicadacafena,pseudoalcalide.
31
Figura2.17Estruturaqumicageraldosftalatos.
31
Figura2.18ReacodareduodoDPPH
.
porumcompostoantioxidante.
Figura2.19Esquemadoprocessodeionizaoporelectrospray.
34
Figura2.20Gruposfuncionaisdemdia,altapolaridade,necessriosparaqueocorra
umaeficienteionizao.
21
23
22
26
28
29

Pgina | III

4Discusso/Resultados
38 Figura2.1Aparnciadoextractoemmetanol.
Figura4.2Aparnciadoextractoemacetona/gua.
Figura4.3Aparnciadoresduoresultantedasextraces.
Figura4.4RectadeCalibraoparaospadresdecidoglico.
Figura 4.5 Percentagem de DPPH

.
no meio reaccional em funo da concentrao de
amostraparaoextractoemmetanol.

.
amostraparaoextractoemacetona/gua.
Figura 4.7 Espectro de ESIMS [M + H]

+
, do extracto em metanol fraco de 80% de
clorofrmio.
Figura4.8EspectrodeESIMS/MSdoiomolecular453m/z[M+H]
+
Figura4.9Esquemadefragmentaodaespciea453m/z.
Figura4.10EspectrodeESIMS/MSdoiomolecular467m/z[M+H]
+
Figura4.11Exemplodaformaodosfragmentos2e3doiomolecular467m/z[M+H]
+
Figura4.12Exemplodaformaodosfragmentos4e5doiomolecular467m/z[M+H]
+
Figura4.13AmpliaodoespectrodeESIMS[MH]
dafracoem80%declorofrmio
comindicaodasespciesinicasposteriormenteanalisadas.
Figura4.14EspectrodeESIMS/MSdoiomolecular146m/z[MH]
38
38
39
42
52
43
46
47
47
48
49
51
49

Pgina | IV

5Concluses
Anexo

Figura4.15Exemplodaformaodosfragmentos131e116m/zapartirdoiomolecular
a146m/z,doindole3carbinol.
Figura 4.16 Exemplo da formao do fragmento a 119 m/z a partir do io molecular do

cidocumricoa163m/z.

Figura4.19Exemplodaformaodofragmentoa119m/zapartirdoiomoleculara325
m/z.
Figura4.20Exemplodaformaodofragmentoa179m/zapartirdoiomoleculara325
m/z.
53
53
54
55
55
56
72
Figura5.1Aspectodosaglomeradosdapolpadofrutodebaobestudados.
Figura5.2Indoleidentificadonafracoestudada.
62
64
Figura1ExemplodasemelhanaentreosespectrosdeESIMSde[MH]
doextractode
80%emclorofrmio(emcima)edoextractode60%emclorofrmio(embaixo).
Figura2EspectrodeESIMS/MSdoiomolecular293m/z[MH]
Figura3Exemplodaformaodosfragmentosdoiomoleculara293m/z.
70
70
71

Pgina | V

72
73
Figura6Exemplodaformaodosfragmentosdoiomoleculara311m/z.

Pgina | VI

ndice de Tabelas

2Introduo
3MateriaiseMtodos
4Discusso/Resultados
Tabela4.1Registodaleituradeabsorvnciasparaospadresdecidoglico.
Tabela4.2Registodasabsorvnciaseconcentraodefenistotaisparacadaamostra.
Tabela 4.3 Registo das absorvncias e %DPPH

.
calculado para as vrias solues
preparadasdoextractoemmetanol.
39
40
41
2
Tabela2.1NomenclaturadasespciesdeAdansonia.
Tabela2.2Composiodapolpadebaob.
Tabela2.3Contedoemmineraisdapolpaedassementesdebaob.
16
Tabela2.4Composioemaminocidosdassementesedapolpadebaob.
16
Tabela2.5Contedoemacidoascrbico(mg/100gproduto)dealgumasfrutas.
Tabela2.6Capacidadeantioxidantesolvelemgua(mmolequivalentesdeTrolox/g)
7
Tabela2.7Classesdecompostosfenlicosnasplantas.
6
9
6
9
5
14
Tabela3.1VolumesausarparaprepararaleituradaAbsparaocontrolo.
Tabela3.2VolumesausarparaprepararaleituradaAbsparacadadiluiodaamostra.
36
36

Pgina | VII

.
preparadasdoextractoemacetona/gua.
Tabela4.5 Registo dosvolumesdeclorofrmiousadosedasmassasobtidasparacada

fracodoextractoemmetanol.
Tabela4.6CompostosidentificadosporESIMS/MSdemodopositivoerespectivosies
molecularesefragmentos.
Tabela4.7CompostosidentificadosporESIMS/MSdemodonegativoerespectivosies
molecularesefragmentos.
43
45
50
57

Pgina | VIII

Glossrio de Abreviaturas

AbsAbsorvncia
ARPPoderantiradicalar.
DPPH
.
Radical1,1difenil2picrilhidrazilo
EC
50
Quantidadedeamostraparareduziraconcentraodoradical1,1difenil2
picrilhidraziloem50%.
ESElectrospray
ESIMSElectrosprayionizationmassspectrometry
FTICRFouriertransformioncyclotronresonance
IUPACInternationalUnionofPureandAppliedChemistry
MicromassQToF2massspectrometerEspectrmetrodemassa,hbrido,incorporando
umquadrupolo(MS1)eumanalisadordetempodevooortogonal,equipadocomuma
fontedeionizaoporelectrospray
MWmassamolecular
m/zRazomassa/carga
ToFTempodevoo.

Estudo e Caracterizao qumica dos compostos extractveis em metanol da polpa de baob (Adansonia digitata).
Pgina | 1

1 Objectivos

Nos ltimos anos, tem-se verificado uma crescente preocupao com os cuidados
de sade e sabe-se que a ingesto de alimentos ricos em antioxidantes diminui o risco
de ocorrncia de certas enfermidades. Na tentativa de neutralizar os efeitos
prejudiciais dos danos oxidativos torna-se conveniente o uso na dieta de nutrientes
com actividade antioxidante, derivados especialmente de fontes naturais.
Numerosos estudos sugerem que o consumo de frutos contendo compostos
fenlicos e outros fitonutrientes, contribui significativamente para o bem-estar e sade
do homem, principalmentes os primeiros, principais responsveis pela actividade
antioxidante destes.
Os compostos fenlicos so estruturas qumicas que apresentam grupos hidroxilo e
anis aromticos, nas formas simples ou de polmeros, esto presentes em vegetais e
frutos podendo estar na forma livre ou ligados a acares e protenas.
Estudos anteriores apresentam a polpa de baob como uma grande fonte de
vitamina C, o que explica a sua elevada capacidade antioxidante. Esta ainda
amplamente usada na medicina tradicional africana como antipirtico, analgsico,
antidiarreico, anti-inflamatrio entre outros. Tendo em conta estas caractersticas,
outro grupo de substncias: os alcalides, substncias com inmeras actividades
biolgicas reconhecidas, usados como agentes farmocolgicos, so uma famlia de
substncias que se deve ter em conta no estudo das inmeras propriedades relatadas
para polpa do fruto de baob. Confirmadas que esto estas propriedades benficas,
parece razovel considerar a polpa do fruto de baob como um ingrediente valioso na
alimentao ou de aplicao teraputica para a promoo da sade.
Como a presena de compostos fenlicos e alcalides na polpa do baob pode
explicar a grande variedade de propriedades teraputicas relatadas, este trabalho tem
como objectivo o estudo da capacidade antioxidante e actividade antiradicalar em dois
extractos da polpa do fruto e caracterizao qumica do extracto em metanol da polpa
deste fruto tropical africano.

Pgina | 2

2 Introduo

2.1. A rvore (Adansonia digitata)

O gnero Adansonia da famlia Malvaceae (Bombacaceae) conhecido por vrios
nomes como baob, monkey bread ou calabaceira. O gnero Adansonia engloba 8
espcies, em que uma delas cresce na Austrlia, uma em frica e as restantes esto
restritas ilha de Madagscar (Tabela 2.1).

Tabela 2.1 Nomenclatura das espcies de Adansonia.
1

Espcie Sinnimos Distribuio

A. digitata L. A. baobab L. (1763), Difunde-se por toda a frica
A.baobab Gaertn (1791),
A. sphaerocarpa A. Chev
(1901), A. sulcata A. Chev
(1906), A. digitata var.
Congolensis A. Chev. (1906)

A. grandidieri Restrita a Madagscar

A. suarezansis Restrita a Madagscar

A. gibbosa A. gregori Mueller Restrita a NW Austrlia
(1857), A. rupestris
W. Saville Kent (1897),
A. stanburyana Hochreutiner
(1908)

A. rubrostipa A. fony Baill & Restrita a Madagscar
H. Perrier (1952)

A. madagascarensis A. bernieri Baill. Restrita a Madagscar
& Poisson (1912)

A. za A. bozy Jum & H. Perrier, Restrita a Madagscar
A. alba Jum & H. Perrier

A. perrieri Restrita a Madagscar

Pgina | 3

A Adansonia digitata L. (Figura 2.1) uma espcie endmica africana, difundindo-
se ao longo das regies mais quentes e mais secas da frica Tropical, sendo uma
rvore de grande porte, decdua com altura compreendida entre 5 e 25 m
(excepcionalmente 30 m), podendo alcanar vrias centenas ou milhares de anos sob
condies favorveis. uma das espcies vegetais de maior longevidade (6000 anos),
s a sequia e o cedro japons podem competir com a longevidade do baob.

A Adansonia digitata pretence
2
: ao Reino: Plantae; Diviso: Magnoliophyta; Classe:
Magnoliopsida; Ordem: Malvales; Famlia: Malvaceae (Bombacaceae) Gnero:
Adansonia.

A Adansonia digitata, apresenta ramos grossos, largos e espalhados e um tronco
robusto e muito espesso na base, chegando a atingir 10-14 m ou mais em dimetro. A
forma do tronco varia, sendo cnica em rvores jovens, em rvores mais velhas pode
ser cilndrica, em forma de garrafa ou com ramificaes perto da base.
3

Este gnero de rvores, apresenta uma elevada capacidade de reteno de gua.
Medies em razes expostas demonstraram que so relativamente rasas (< 1,8 m)
mas, espalham-se para uma distncia superior ao comprimento das rvores,
permitindo-lhe ser eficiente a controlar a sua perda de gua. Sobrevive bem em
climas secos e resistente ao fogo. Esta adaptao permite que cresa em zonas com
baixa pluviosidade anual.
4

Figura 2.1 - Baob (Calabaceira, Adansonia digitata).

A propagao basicamente realizada por sementes. As sementes podem ser
recolhidas de frutos escolhidos ou dos que caem da rvore. Depois de esmagar a
concha lenhosa dura da fruta, as sementes podem ser extradas da polpa seca e cida.

Pgina | 4

As sementes de baob possuem uma casca muito dura e a germinao geralmente
menos que 20%.
1

No cultivo, a dormncia pode ser terminada pela imerso da semente em gua
quente por alguns minutos ou pelo corte da proteco da semente
9
. A escarificao
cida (imerso das sementes em cido sulfrico, por 6 a 12 horas temperatura entre
19C e 25C) o mtodo de pr-tratamento ptimo para o final da inibio da
proteco da semente de baob e possibilitar a germinao.
1,5

2.2. O Fruto

A Adansonia digitata possui um fruto em que a polpa est
contida numa cpsula externa muito resistente, o epicarpo
(Figura 2.2). A parte interna do fruto, o mesocarpo, apresenta
quando maduro, um sabor ligeiramente cido.
6

O epicarpo de baob de cor castanha avermelhada
apresenta uma forma ovide e lenhosa, com 15-30 cm de
comprimento e at 15 cm de dimetro, depois de amadurecer
(Figura 2.3)
6
. No interior, a polpa encontra-se dividida em
pequenos aglomerados, que contm filamentos (fibras
castanhas) que subdividem a fruta nos segmentos, sendo
necessria para a sua separao apenas um ligeiro processo
mecnico, sem nenhuma extraco, concentrao ou
tratamento qumico, assegurando assim as caracterstica de um
alimento minimamente processado.
6
O mesocarpo por sua vez apresenta uma colorao branca amarelada e contm
numerosas sementes castanhas, duras, redondas ou ovides, de at 15 mm de
comprimento.
6

Figura 2.3 Fruto de baob aberto. Figura 2.4 - Fruto de baob seco aberto.
Figura 2.2 Fruto
de baob verde
ainda na rvore.

Pgina | 5

2.3. Propriedades nutricionais do fruto de baob

A polpa de baob contm uma particularmente elevada capacidade antioxidante,
muito por causa do seu elevado contedo em vitamina C, destacando-se por ser uma
das mais importantes fontes naturais de cido ascrbico, contendo nveis que variam
de 2,8-3,0 g/kg, apresentando aproximadamente seis vezes mais do que o ndice de
uma laranja.
7
O fruto contm tambm outras vitaminas, como a riboflavina (vitamina B2),
necessria para o crescimento do organismo e para manter a integridade das fibras
nervosas, peles e olhos, e a niacina (vitamina PP ou B3), importante para a regulao
de diversos processos metablicos.
8
A doura da polpa devida frutose, sacarose e contedo de glucose. O sabor
cido caracterstico do fruto devido presena de cidos orgnicos, como o cido
ctrico, tartrico, mlico, succnico bem como o cido ascrbico.
6

A composio global da polpa de baob apresentada na Tabela 2.2.

Tabela 2.2 Composio da polpa de baob.
3,6

Constituintes (base de peso seco)

Aucares totais (%) 23,2
Aucares redutores (%) 19,9
Pectina total (% cido galacturnico) 56,2
Amido (%)
Protena (%N) 2,6
Gordura (%) 0,2
Fibra crua (%) 5,7
Cinzas (%) 5,3
cido ascrbico (mg/100g) 300,0

Humidade (%) 6,7
pH 3,3

O contedo em minerais da polpa e das sementes do fruto de baob
demonstrada na tabela 2.3.

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Tabela 2.3 Contedo em minerais da polpa e das sementes de baob.
16

Elemento Semente Polpa de baob
Macroelementos (mg/100g)
Potssio 910 20 1240 30
Sdio 28.3 2.2 27.9 0.10
Clcio 410 10 295 10
Magnsio 270 30 90 2
Microelementos (mg/100g)
Ferro 6.4 0.2 9.3 0.2
Cobre 2.6 0.2 1.6 0.1
Zinco 5.2 0.0 1.8 0.0

A polpa e as sementes so excelentes fontes de potssio, clcio e magnsio, mas
so fontes fracas de ferro, zinco e cobre. O ndice elevado de clcio da polpa e das
sementes da polpa tornam o baob uma atraente fonte natural de suplemento de
clcio para as mulheres grvidas ou em amamentao, bem como para as crianas e
adultos em geral.
16

A composio em aminocidos da semente e da polpa de baob apresentada na
tabela 2.4.

Tabela 2.4 Composio em aminocidos das sementes e da polpa de baob
16

Aminocidos Sementes (g/100 g protenas) Polpa (g/100 g
protenas)
cido asprtico 10,3 6,4
cido glutmico 23,7 6,5
Serina 6,1 3,2
Histidina 2,2 1,2
Glicina 8,6 2,9
Treonina 3,8 2,8
Arginina 8,0 7,6
Alanina 7,1 3,3
Prolina 6,9 2,2
Tirosina 1,5 20,6
Metionina 1,0 0,2
Valina 5,9 4,8
Fenilalanina 4,0 4,4
Isoleucina 3,6 2,2
Leucina 7,0 4,3
Lisina 5,0 1,7
Cistena 1,5 1,0

As sementes e a polpa de baob apresentam quantidades elevadas de cido
asprtico, cido glutmico e arginina, e quantidades baixas de aminocidos sulfurados.
As sementes contm uma quantidade relativamente elevada de aminocidos
essenciais (arginina, leucina, valina e lisina). excepo da arginina que era mais

Pgina | 7

elevada, o perfil de aminocidos concordou com o perfil apresentado para o baob de
Burkina-Faso
16,17
. Em contraste com outras protenas da semente da planta, a
protena da semente do baob contm uma quantidade elevada de lisina. Porque a
quantidade da lisina limitada na maioria dos cereais, pode ser possvel usar a
protena da semente de baob para melhorar a qualidade de protena do cereal,
especialmente nas regies ridas e semi-ridas.
9

O valor energtico da polpa de baob (320,3 4,4 kcal/100 g)
9
semelhante
ao das folhas. As folhas jovens frescas tm um contedo de protena de 4% e so
ricas em vitaminas A e C. Em termos de contedo em minerais, a folha de baob
constitui uma excelente fonte de clcio, ferro, potssio, magnsio, mangans,
molibdnio, fsforo e zinco. Isto indica que as folhas de baob podem servir como
uma importante fonte de protena e minerais para as populaes que a utilizam como
fonte de alimentao.
1,10

2.4. Principais aplicaes de baob.

O baob apresenta inmeras aplicaes quer medicinais quer no medicinais em
toda a frica. aproveitada toda a rvore desde as sementes, at as folhas e casca da
rvore.
As sementes de baob so consumidas secas ou assadas, usando-se muitas vezes
como substitutas do caf. Como so caracterizadas como uma potencial fonte de
protena no Sudo so esmagadas e adicionadas a sopas e outros pratos.
A casca da rvore que produz uma fibra forte usada no processo de fabrico de
cordas, tapetes, bolsas e chapus. As fibras finas da parte interna da casca so usadas
na tecelagem. A madeira, de cor clara principalmente usada como combustvel,
sendo tambm utilizada na construo de instrumentos musicais.
1,3,11

As folhas da rvore de baob constituem uma fonte de alimentao para
populaes rurais em muitas zonas de frica, especialmente na regio central do
continente. So fontes importantes de protenas, sendo geralmente usadas como
legumes em sopas ou cozidas e comidas como os espinafres. Uma vez secas e
misturadas com cereais, so tambm comidas, j que so ricas em clcio, ferro,
protenas e lpidos.
1,10,11
A polpa do fruto de baob comida a fresco, apresentando um sabor doce-
amargo, semelhante ao do tamarindo (fruto originrio das savanas africanas mas de
uma famlia diferente o baob), muito apreciado pelo povo africano, podendo tambm
ser processada de modo tradicional para obter doces. usada na preparao do sumo

Pgina | 8

de baob, onde a polpa seca raspada do fruto e misturada com gua, sendo depois
misturado acar. Este sumo uma bebida altamente nutritiva. So tambm
utilizadas para preparar bebidas alcolicas espirituosas de baixo teor alcolico, atravs
da mistura com outros componentes. Em Cabo Verde misturada com a aguardente
de cana-de-acar, resultando numa bebida de nome ponche de kalbisera.
1,12

O fruto de baob apresenta inmeras aplicaes teraputicas, sendo usada como
antipirtico ou febrfugo, analgsico, antidiarreico, anti-inflamatrio, no tratamento da
disenteria, sarampo, varicela, entre outros.
13

muito usado na medicina tradicional africana e por essa razo designada
tambm de pequena farmcia ou rvore do qumico
14

O leo extrado das sementes usado para aliviar dores de dentes, sendo tambm
usados em casos de diarreia e soluos. Um preparado de p de raiz seco dado a
pacientes com malria como um tnico.
1
Na medicina indiana, a casca de baob usada como um refrigerante antipirtico.
usado p de folhas para promover a transpirao excessiva e tambm so usadas
folhas jovens esmagadas no tratamento de inchaos dolorosos. O sumo da polpa
usado em casos de diarreia e disenteria.
1

A casca, bem como a polpa e as sementes de baob parecem conter um antdoto
para o envenenamento causado por algumas espcies de cobras . No Malawi, o
extracto de baob vertido sobre a ferida de animais mortos, para neutralizar o
veneno antes da carne ser comida.
1,13

2.5. Propriedades benficas para a sade da polpa de baob

2.5.1. Propriedades antioxidantes

A polpa da fruta de baob contm vrios compostos antioxidantes, entre eles
destaca-se a grande quantidade de cido ascrbico, contendo nveis de vitamina C que
variam de 2.8-3 g/kg, apresentando aproximadamente seis vezes mais do que o
ndice de uma laranja (Tabela 2.5).
7
Foram feitos estudo no sentido de determinar a capacidade antioxidante do fruto,
das folhas de Adansonia digitata em comparao com frutos bem conhecidos (laranja,
kiwi, ma e morango), ricas em vitamina C, afim de conduzir a uma avaliao
comparativa. Foram tambm considerados no estudo, extractos de sementes de uva,
por serem ricas em antioxidantes. Todos os frutos foram analisados na sua forma
natural, como preparao fresca, evitando qualquer processo fsico-qumico adicional.
7

Pgina | 9

Tabela 2.5 - Contedo em acido ascrbico (mg/100 g produto) de algumas frutas.

Como se pode ver na tabela 2.6, a capacidade antioxidante solvel em gua mais
elevada foi observada para as folhas e polpa de baob, correspondendo a 6-7 mmol/g
de Trolox. Convm tambm notar que a capacidade da polpa e das folhas era
ligeiramente mais elevada do que o extracto de sementes de uva, rico em
antioxidantes.
7

Tabela 2.6 - Capacidade antioxidante solvel em gua (mmol equivalentes de
Trolox/g)
7

Como se pode verificar a capacidade antioxidante solvel em gua da polpa e
folhas secas de baob muito elevada quando comparada com outros frutos. Esta
elevada capacidade antioxidante poder ser devida no s presena de elevadas
quantidades de cido ascrbico mas tambm devido presena de outras substncias
com iguais propriedades antioxidantes como o caso dos compostos fenlicos.

2.5.2. Fonte de fibras solveis com actividade prebitica

A polpa de baob apresenta uma quantidade de 25% de fibras solveis e 25% de
fibras insolveis, que podem representar at 45g/100g de produto.
18
As fibras
Frutos Nome cientfico mg cido ascrbico/100g produto
Baob Adansonia digitata 150 - 499
Kiwi Actinidia chinensis 52-120
Laranja Citrus sinensis 46
Ma Malus sylvestris 6
Pssego Prunus persica 4 13
Morango Fragaria x ananassa 61
Produtos

Trolox (mmol/g)
Polpa de baob 6.96 0.057
Folhas secas de baob 6.39 0.344
Polpa fresca de Kiwi 0.34 0.007
Polpa fresca de laranja 0.10 0.009
Polpa fresca de morango 0.90 0.004
Polpa fresca de mac 0.16 0.014
Extracto vegetal 90% OPC 6.16 0.233

Pgina | 10

dietticas so hoje consideradas componentes importantes da nossa dieta, porque
desempenham um papel importante na fisiologia do sistema digestivo.
O consumo frequente de fibras dietticas, est associado a uma dieta rica em
vegetais, cereais e frutos e relacionado com a reduo do risco de neoplasias no
sistema digestivo, particularmente o cancro do clon e reduo de vrias desordens a
nvel orgnico como o excesso de peso ou a ocorrncia de diarreias.
18

As fibras insolveis no so digeridas no intestino, promovendo o esvaziamento
gstrico, devido sua capacidade de aumentar o volume fecal e estimular os
movimentos peristlticos. So usadas principalmente na preveno de diarreias e na
induo da sensao de saciedade, importante em dietas de baixas calorias. A polpa
de baob devido a apresentar quantidades elevadas tanto de fibra solvel como
insolvel parece ter interessantes propriedades, j demonstradas em vitro, no
crescimento de culturas de bactrias da microflora intestinal.
18

As fibras solveis servem de alimento a algumas bactrias da microflora intestinal,
funcionando como prebiticos (alimento para os microrganismos probiticos).
Estimulam o crescimento e a actividade metablica de um nmero limitado de grupos
de microrganismos (Bifidobacteria, Lactobacilli), importantes na manuteno de vrias
funes no organismo humano (aumentam a digesto de lactose, estimulam o sistema
imunolgico e reduzem os processos inflamatrios, inibem estirpes de bactrias
patognicas e contribuem para a diminuio do colesterol plasmtico).
18

2.5.3. Actividades antipirticas, analgsicas e anti-inflamatrias

Experincias realizadas em ratos demonstraram que doses entre 400 e 800 mg/kg
determinam um efeito anti-inflamatrio considervel nestes animais. Este efeito
comparvel com o produzido por 15 mg/kg de fenilbutazona, anti-inflamatrio
utilizado como padro interno. Esta actividade pode ser devida presena de esteris,
saponinas e tri-terpenos. A polpa apresenta tambm uma actividade analgsica e
antipirtica nos ratos na dose oral de 800 mg/kg. Este efeito semelhante ao causado
por 50 mg/kg de cido acetilsaliclico. Esses resultados podem explicar a grande
aplicao da Adansonia digitata como antipirtico e febrfugo na medicina popular.
15

2.5.4. Actividade antidiarreica e de antidesintrico

Um estudo conduzido em 160 crianas, com idade mdia de oito meses,
demonstrou que a soluo aquosa da polpa de baob muito eficaz na re-hidratao
das crianas afectadas com diarreia.
16

Pgina | 11

Pensa-se que os principais constituintes responsveis por esta actividade sejam os
taninos, responsveis por um efeito adstringente, celulose, cido ctrico e outros
constituintes tpicos da polpa de baob.
17

2.6. Compostos fenlicos na natureza

Os compostos fenlicos so originrios do metabolismo secundrio das plantas.
So essenciais para o crescimento e reproduo das plantas, formando-se sob
condies de stress como infeces, ferimentos e radiaes UV. Actuam como agentes
antimicrobianos e contribuem para a pigmentao.
19
Representam um grupo muito
diversificado de fitoqumicos derivados da fenilalanina e da tirosina.

Figura 2.5 - Biossntese de fenilpropanides, lenhanos, lenhinas, suberinas,
flavonides e taninos a partir da fenilalania.
20

Pgina | 12

Nos alimentos os compostos fenlicos contribuem para a adstringncia, cor, sabor,
odor e estabilidade oxidativa dos produtos, dado que possuem actividade
antioxidante. Alm de alguns apresentarem capacidades protectoras para a sade e
outras propriedades antinutricionais de grande importncia na indstria alimentar.
Os compostos fenlicos so uma classe de compostos qumicos muito diversificada
(Figura 2.4), que possuem um ou mais anis aromticos aos quais se ligam
substituintes hidroxilo. Possuem uma estrutura varivel e por isso so multifuncionais,
existindo cerca de cinco mil fenis identificados. Este grupo de compostos engloba
desde molculas simples at molculas com alto grau de polimerizao. Esto
presentes nos vegetais na forma livre ou ligados a acares (glicosdeos) e
protenas.
21

Os compostos fenlicos no esto uniformemente distribudos na planta. Os
fenlicos solveis esto localizados ao nvel dos vacolos celulares. Nos tecidos as
camadas exteriores da planta contm nveis superiores de compostos fenlicos do que
as camadas mais internas.
Ribreau-Gayon
22
classificou estes compostos em trs categorias. Pouco
distribudos na natureza, na forma de polmeros e largamente distribudos na
natureza.
Na famlia dos compostos fenlicos pouco distribudos na natureza, encontra-se um
nmero bem reduzido, embora com certa frequncia. Neste grupo esto os fenis
simples, o pirocatecol, a hidroquinona e o resorcinol. Pertencem ainda a esta famlia
os aldedos derivados dos cidos benzicos, que so constituintes dos leos essenciais,
como a vanilina. Os que esto na forma polmeros no se apresentam na forma livre
nos tecidos vegetais, esta famlia engloba os taninos e as lenhinas.
Na famlia dos compostos largamente distribudos na natureza esto os compostos
fenlicos encontrados geralmente em todo o reino vegetal. Este grupo pode-se dividir
em flavonides (antocianinas, flavonis e seus derivados), cidos fenlicos (cidos
benzicos, cinmicos e seus derivados) e cumarinas.

2.7. Propriedades antioxidantes dos compostos fenlicos

Muitos destes compostos fenlicos tm uma importante capacidade antioxidante.
De acordo com o seu modo de aco, os antioxidantes podem ser classificados em
primrios e secundrios. Os primrios actuam interrompendo a cadeia da reaco
atravs da doao de electres ou hidrognio aos radicais livres, convertendo-os em
produtos termodinamicamente estveis e/ou reagindo com os radicais livres,
formando o complexo lipdico-antioxidante que pode reagir com outro radical livre.

Pgina | 13

Os antioxidantes secundrios actuam retardando a etapa de iniciao da auto-
oxidao, por diferentes mecanismos que incluem complexao de metais, captao
de oxignio, decomposio de hidroperxidos para formar espcies no radicais,
absoro da radiao ultravioleta ou desactivao do oxignio singuleto.
Os compostos fenlicos so includos na primeira categoria, de interruptores de
radicais livres, sendo muito eficientes na preveno da auto-oxidao.
Os antioxidantes fenlicos interagem, preferencialmente, com o radical peroxilo
(ROO
.
) por ser este mais prevalente na etapa da auto-oxidao e por possuir menor
energia do que outros radicais, facto que favorece a remoo do seu hidrognio. O
radical fenoxilo resultante, embora relativamente estvel, pode interferir na reaco
de propagao ao reagir com um radical peroxilo, via interaco entre radicais. O
composto formado, por aco da luz ultravioleta e temperaturas elevadas poder
originar novos radicais, comprometendo a eficincia do antioxidante, que
determinada pelos grupos funcionais presentes e pela posio que ocupam no anel
aromtico, bem como, pelo tamanho da cadeia desses grupos.
23

Este mecanismo de aco dos antioxidantes, presentes em extractos de plantas,
possui um papel importante na reduo da oxidao lipdica em tecidos, vegetais e
animais, pois quando incorporado na alimentao humana no conserva apenas a
qualidade do alimento, mas tambm reduz o risco de desenvolvimento de patologias,
como o cancro e aterosclerose.

A actividade anticarcinognea dos compostos fenlicos tem sido relacionada com a
inibio do cancro do clon, esfago, pulmo, fgado, mama e pele. Os compostos
fenlicos aos quais atribudo este potencial so o resveratrol, quercetina, cido
cafico e flavonis.
24

Pgina | 14

2.8. Diferentes classes de compostos fenlicos na natureza

A diversidade estrutural dos compostos fenlicos deve-se grande variedade de
combinaes que ocorrem na natureza. Estas combinaes podem ser categorizadas
em diferentes classes (Tabela 2.7). A sua ocorrncia muito vasta na natureza, mas
esto presentes principalmente em espcies vegetais.

Tabela 2.7 - Classes de compostos fenlicos nas plantas.

Classe de compostos fenlicos
Esqueleto de
carbono
Fenis simples, benzoquinonas C
6
cidos hidroxibenzicos C
6
-C
3
Acetofenol, cidos fenilacticos C
6
-C
2

cidos hidroxicinmicos, fenilpropanides,
Cumarinas, Isocumarinas, Cromonas

C
6
-C
3

Naftoquinonas C
6
-C
4

Xantonas C
6
-C
1
-C
6

Antraquinonas C
6
-C
2
-C
6

Flavonides, Isoflavonides C
6
-C
3
-C
6

Neolenhanos (C
6
-C
3
)
2

Biflavonides (C
6
-C
3
-C
6
)
2
Lenhinas (C
6
-C
3
)
n

Taninos condensados (C
6
-C
3
-C
6
)
n

2.8.1. cidos fenlicos

Os cidos fenlicos caracterizam-se por terem um anel benznico, um grupo
carboxlico e um ou mais grupos hidroxilo e/ou metoxilo conferindo propriedades
antioxidantes para os vegetais.
Os cidos fenlicos consistem em dois grupos, derivados do cido hidroxibenzico
e derivados do cido hidroxicinmico (Figura 2.5). Os cidos hidroxibenzicos incluem
os cidos p-hidroxibenzico, protocatecuico, vanlico e sirngico, que tm estrutura
comum, C
6
-C
1
, enquanto os cidos hidroxicinmicos, so compostos aromticos com
trs carbonos que formam uma cadeia lateral (C
6
-C
3
), como os cidos cafico, ferlico,

Pgina | 15

p-cumrico e sinptico e, sendo os mais comuns. Esto presentes nos tecidos vegetais
principalmente na forma de steres.
24

a)

cido p-hidroxibenzico: R
1
= R
2
= H
cido protocatecuco: R
1
= OH R
2
= H
cido vanlico: R
1
= OCH
3
R
2
= H
cido sirngico: R
1
= R
2
= OCH
3

b)

cido cumrico: R
1
= R
2
= H
cido cafico: R
1
= OH R
2
= H
cido ferlico: R
1
= OCH
3
R
2
= H
cido sinptico: R
1
= R
2
= OCH
3

Figura 2.6 - Estrutura qumica dos cidos hidroxibenzicos (a) e hidroxicinmicos (b).

Os cidos hidroxicinmicos, ferlico e cumrico so antioxidantes mais activos do
que os derivados do cido benzico, tais como cido protocatecuico, sirngico e
vanlico. Isso deve-se dupla ligao presente na molcula dos derivados do cido
cinmico, que participa na estabilidade do radical por ressonncia de deslocamento do
electro desemparelhado, enquanto que os derivados do cido benzico no
apresentam essa caracterstica.
25

COOH
R
1
HO
R
2
COOH
R
2
HO
R
1

Pgina | 16

2.8.2. Flavonides

Os flavonides so compostos largamente distribudos no reino vegetal,
encontram-se presentes em frutas, folhas, sementes e em outras partes da planta na
forma de glicosdeos ou agliconas. So compostos de baixa massa molecular,
consistindo em 15 tomos de carbono, organizados na configurao C
6
-C
3
-C
6
.
O esqueleto base dos flavonides consiste em dois anis aromticos, denominados
anel A e B, unidos por trs carbonos que formam um anel heterocclico, denominado
anel C (Figura 2.6).

O
A
B
C

Figura 2.7 Estrutura do esqueleto base dos flavonides.

A disposio do anel C responsvel pela diversidade de compostos que integram
o grupo flavonide, resultando em importantes classes de flavonides como calconas,
flavonis, flavonas, flavanonas, flavanis (ou catequinas), isoflavonas e antocianinas.
Substituies dos anis A e B originam diferentes compostos dentro de cada classe de
flavonides, estas substituies podem incluir oxigenao, alquilao, acetilao e
sulfonao.

2.8.3. Calconas e di-hidrocalconas

As calconas so flavonides, nos quais os dois anis aromticos A e B se
encontram ligados por um sistema carbonlico ,-insaturado. O composto mais
simples, representado por essa estrutura (Figura 2.7), designado por calcona.

O
2`
3`
4`
5`
6`
5
6
4
2
3
Figura 2.8 - Estrutura qumica de uma calcona.

Pgina | 17

2.8.4. Flavonas, flavanonas e isoflavonas e antocianinas

O termo flavona usado para designar o composto no substitudo (Figura 2.8).
Assim, na designao genrica de flavonas esto envolvidos compostos que possuem
aquela estrutura bsica, com substituintes em determinadas posies dos anis A e B
e da posio 3. As flavanonas so compostos relacionados com as flavonas, diferindo
no estado de oxidao, devido existncia ou no de ligao dupla no anel C. As
isoflavonas so ismeros posicionais das flavonas, como se mostra na Figura 2.8.

2.8.4.1. Antocianinas

As antocianinas so baseadas numa nica estrutura aromtica, a cianidina e todas
derivam deste pigmento por adio ou remoo de grupos hidroxilos ou por metilao
ou glicolisao. O R corresponde a um acar, as antocianinas no glicosiladas ou
aglconas designam-se antocianidinas. Consoante as condies de pH do meio estas
molculas so responsveis pela cor de diferentes tecidos vegetais.

Figura 2.10 Estrutura qumica das antocianinas.
Figura 2.9 - Estrutura qumica de uma flavona (a) e flavanona (b) e isoflavona (c).
a b
c
2`
3`
4`
5`
6`
5
6
4
2
3
O
A
B
O
7
8
9
10
HO
OH
2`
3`
4`
5`
6`
5
6
4
2
3
O
A
B
O
7
8
9
10
HO
OH
2`
3`
4`
5`
6`
5
6
4
2
3
O
A
O
7
8
9
10
HO
OH
O
OR
R
4
R
6
R
1
R
2
R
3
X
R
5

Pgina | 18

Existem seis antocianidinas comuns (resultantes da hidrlise cida das
antocianinas), as de cor magenta, cianidinas so de longe as mais abundantes. As de
cor laranja, vermelha so devido pelargonidina que tem menos um grupo hidroxilo
que as cianidinas, enquanto que as roxas e as azuis geralmente so devido
delfinidina que tem mais um grupo hidroxilo que a cianidina.

2.8.5. Tocoferis

Os tocoferis so compostos monofenlicos, existentes em vegetais,
principalmente em sementes oleaginosas e folhas, que possuem actividade
antioxidante e de vitamina E. Esto agrupados em duas sries de compostos que
possuem estrutura qumica semelhante e recebem o nome genrico de tocis e
tocotrienis. Os compostos da srie dos tocis possuem uma cadeia saturada ligada ao
anel e so denominados tocoferis, enquanto que os da srie tocotrienis possuem
cadeia insaturada. A nomenclatura destes compostos recebe o prefixo de , , ,
dependendo do nmero e posio do grupo metilo ligado ao anel aromtico (Figura
2.10). O -tocoferol o composto que apresenta maior actividade de vitamina E.

-tocoferol: R
1
= R
2
= R
3
= CH
3
-tocoferol:R
1
= R
3
= CH
3
; R
2
=H
-tocoferol: R
2
= R
3
= CH
3
; R
1
=H
-tocoferol: R
1
= R
2
= H
3
; R
3
=CH

O
R
CH
3
R
3
R
2
HO
R
1
CH
3
CH
3 CH
3
CH
3
R
CH
3
CH
3 CH
3
CH
3
R
Tocotrienol
Tocoferol
Figura 2.11 Estrutura qumica do tocoferol e tocotrienol.

Pgina | 19

2.8.6. Taninos, catequinas, proantocianidinas

Os taninos possuem um peso molecular relativamente alto, constituem uma classe
de compostos fenlicos e, segundo a estrutura qumica, so classificados em taninos
hidrolisveis e taninos condensveis.
As proantocianidinas como agentes taninicos condensados, contribuem para a
adstringncia nos frutos, so percursores incolores das antocianinas.
23
A combinao
dos compostos taninicos com as protenas da saliva produz uma sensao de secura
na mucosa, seguida de contraco da membrana, conhecida como adstringncia.

Os taninos hidrolisveis so steres de cido glico e elgicos glicosilados,
formados a partir do chiquimato, onde os grupos hidroxilo do acar so esterificados
com os cidos fenlicos. Os taninos elgicos so muito mais frequentes que os glicos,
e provvel que o sistema bifenlico do cido hexaidroxidifenlico seja resultante da
ligao oxidativa entre dois cidos glicos.
23

2.9. Alcalides

2.9.1. Definio

A definio do termo alcalide no simples e, em muitos casos, fonte de
controvrsia. As tentativas de definir o termo alcalide, remonta altura de
descoberta destes compostos. Friedrich Sertrner, isolou pela primeira vez a morfina
(Figura 2.12), um dos alcalides de maior importncia para a histria mundial. O
termo alcalide foi pela primeira vez mencionado em 1819 por W. Meiner. Este
O
OH
OH
HO
R
OH
OH
O
OH
OH
HO
R
OH
OH
Figura 2.12 Biossntese de proantocianidinas, taninos condensados.
29

Pgina | 20

observou que estes compostos pareciam ser
alcalinos e por isso designou-os de alcalides.
Os alcalides so definidos como compostos
farmacologicamente activos, de carcter alcalino e
de sabor amargo, derivados de aminocidos, que
contm um ou mais tomos de azoto num anel
heterocclico, distribudos largamente por
diferentes grupos de plantas, mas tambm em
animais. A palavra alcalide derivada do rabe,
al-qali (uma de carbonato de sdio), de onde o
termo alcalino deriva.
32

A natureza biolgica e qumica deste grupo de compostos leva concluso que esta
definio to ampla como restrita. Winterstein e Tier apontaram cinco caractersticas
gerais: (1) pequena ou grande toxicidade que actua principalmente ao nvel do
sistema nervoso central; (2) a caractertica bsica da sua estrutura qumica; (3) a
existncia de um azoto incorporado num anel heterocclico; (4) uma sntese a partir
de aminocidos ou dos seus imediatos derivados; (5) uma distribuio limitada na
natureza.
32

2.9.2. Classificao de alcalides

Os alcalides podem ser classificados em termos da sua actividade ecolgica e
biolgica, estrutura qumica e percurso biosinttico.
Do ponto de vista da sua actividade biolgica, possvel dividir os alcalides em:
molculas neutras ou bases fracas; alcalides derivados dos animais; alcalides
marinhos; de fungos e de bactrias.
Os alcalides so geralmente classificados pelos seus precursores moleculares
comuns, baseado no seu percurso biolgico usado para a construo molecular. De
um ponto de vista estrutural, os alcalides so divididos de acordo com o seu forma e
origem. Existem trs principais tipos de alcalides: alcalides verdadeiros,
protoalcalides e pseudoalcalides. Os alcalides verdadeiros e protoalcalides so
derivados de aminocidos, enquanto que os pseudoalcalides no so derivados
destes compostos.
32

Figura 2.13 Estrutura qumica
da morfina.

Pgina | 21

Figura 2.15 Exemplo de dois protoalcalides.
31

2.9.2.1. Alcalides verdadeiros

Os alcalides verdadeiros derivam de aminocidos, e possuem um anel
heterocclico com um tomo de azoto. Estes alcalides so substncias altamente
reactivas com actividade biolgica, mesmo quando presentes em baixas
concentraes. Todos os alcalides verdadeiros tem um sabor amargo e aparecem na
forma de um slido branco. Os alcalides verdadeiros formam sais solveis em gua.
Alm disso, muitos deles so substncias cristalinas bem definidas que se unem a
cidos para formar sais. Os alcalides verdadeiros podem ocorrer em plantas no
estado livre, como sais e como N-xidos. Estes alcalides ocorrem num nmero
limitado de espcies e famlias. Os percursores primrios dos alcalides verdadeiros
so aminocidos como a L-ornitina, L-lisina, L-fenilalanina / L-tirosina, L-triptofano e
L-histidina. Exemplos de alcalides verdadeiros incluem substncias como a cocana,
quinina, dopamina morfina.
32

2.9.2.2. Protoalcalides

Os protoalcalides so compostos em que o tomo de azoto derivado do
aminocido no faz parte do anel heterocclico. Alguns deste tipo de alcalides incluem
compostos derivados da L-tirosina e L-triptofano. Possuem um anel, sendo uma
minoria do grande conjunto de alcalides. Serotonina e mescalina so bons exemplos
deste tipo de alcalides.
32

Figura 2.14 Exemplo de grupos qumicos de alcalides verdadeiros.
31

N
H
N N
Indole
Quinolina Piridina
NH
2
O
O
O
N
H
NH
2
HO
Mescalina Serotonina

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2.9.2.3. Pseudoalcalides

Os pseudoalcalides so compostos em que o esqueleto base de carbono no
deriva de aminocidos. So derivados de precursores da biodegradao de
aminocidos. Podem tambm resultar de reaces de aminao e transaminao de
diferentes precursores de aminocidos, ou de outros precursores que no de
aminocidos. O azoto inserido na molcula deriva de diferentes terpenos e esterides.
Os pseudoalcalides podem ser acetatos, derivados da fenilalanina ou terpenos, assim
como, de esterides. Exemplos so compostos como a coiina, capsaicina e cafena.
32

2.9.3. Ocorrncia e aplicaes

Os alcalides so substncias muito bem conhecidas pelas suas actividades
biolgicas, desde os primrdios da civilizao, servindo de aplicao na medicina
tradicional de inmeras civilizaes.
Do ponto de vista biolgico, os alcalides so um especial grupo de substncias
qumicas activas a diferentes nveis celulares no organismo, podendo tomar parte dos
processos biolgicos nas plantas, animais ou microorganismos, so portanto
compostos resultantes do metabolismo secundrio, tendo depois um papel a
desempenhar no metabolismo. Na medicina, o termo alcalide significa um qualquer
grupo de substncias azotadas de origem vegetal, normalmente de estrutura
complexa. Reconhecidos como um grande grupo de compostos com actividade
biolgica, qumica, farmacolgica ou fisiolgica, sem os alcalides os feitos alcanados
na batalha contra inmeras doenas como a malria, leucemia e cancro, assim como a
doena de Parkinson no teriam sido possveis.
31

A indstria farmacutica usou e continua a usar alcalides de plantas para o
desenvolvimento de agentes antimalria (quinina e cloroquina), agentes
anticancergenos (taxol, vimblastina) e agentes promotores da circulao sangunea
no crebro, vasodilatadores cerebrais (vincamina). Muitos deles influenciam o sistema
Figura 2.16 Estrutura qumica da cafena, pseudoalcalide.
31

Pgina | 23

Figura 2.17 Estrutura qumica geral dos ftalatos.
nervoso central nos animais, fornecendo possibilidades de alterao nas
funcionalidades dos organismos. Hoje em dia existem mais de 8000 compostos
naturais e seus derivados reconhecidos como alcalides. Estes ocorrem
frequentemente na forma de sais, mas podem ocorrem em combinao com acares,
enquanto outros aparecem na forma de amidas e steres.
31

2.10. Preparao de extractos de origem vegetal

A recolha de constituintes naturais da matriz de um fruto, como o caso dos
fenis ou alcalides um processo difcil, devido principalmente grande actividade
enzimtica a que esto sujeitos.
O processo de extraco deve ser feito com o maior cuidado, de forma a evitar
modificaes qumicas na amostra, o que resultar na formao de artefactos.
Estes artefactos, compostos que se formam devido ocorrncia de processos de
oxidao ou isomerizao do contedo original durante o processo de extraco uma
preocupao constante neste tipo de trabalhos. Um exemplo a isomerizao do
trans-resveratrol ao seu ismero cis.
28
, outro a formao de ftalatos, ou steres do
cido ftlico, substncias adicionadas ao plstico para aumentar a sua maleabilidade.
A estrutura dos ftalatos consiste num anel benznico ligado a dois cidos ftlicos,
ligados a dois substituintes R e R variveis (Figura 2.16).

De forma a evitar estes processos degradativos da matriz natural podem ser
usados mtodos de proteco como a adio de antioxidantes durante a extraco ou
o uso atmosferas inertes. As condies empregues durante a extraco devem por
isso evitar o quanto possvel a oxidao, degradao trmica e outras modificaes
qumicas e bioqumicas na amostra.
28

OR
OR'
O
O

Pgina | 24

Os mtodos utilizados para anlises de compostos fenlicos por exemplo, podem
ser classificados em determinao de compostos fenlicos totais, quantificao
individual e/ou de um grupo ou classe de compostos fenlicos.
19
A anlise de compostos fenlicos e de alcalides influenciada pela natureza do
composto, o mtodo de extraco empregado, o tamanho da amostra, o tempo, as
condies de armazenamento, o padro utilizado e a presena de compostos que
podem funcionar como interferentes tais como ceras, gorduras, terpenos e clorofilas.
Ainda no se desenvolveu um mtodo satisfatrio para a extraco de todos ou de
uma classe especfica de compostos presentes nos alimentos. A solubilidade dos
compostos fenlicos varia de acordo com a polaridade do solvente utilizado, o seu
grau de polimerizao e as suas interaces com outros constituintes dos alimentos
que podem levar formao de complexos insolveis. Os solventes mais utilizados
para a extraco destes compostos so o metanol, etanol, acetona, gua, acetato de
etilo, propanol, dimetilformaldedo e as suas combinaes, enquanto que os alcalides
so apenas ligeiramente solveis em gua, mas muito solveis em etanol, benzeno e
clorofrmio.
32

Outro aspecto importante no desenvolvimento de mtodos de quantificao de
compostos fenlicos e alcalides a dificuldade de se encontrar um padro especfico
e conveniente, devido complexidade das substncias fenlicas e alcalides presentes
nos alimentos e as diferenas de reactividade entre estas substncias e os
reagentes.
23 32
Os extractos de materiais de plantas so sempre uma mistura de diferentes
classes de substncias solveis no sistema de solventes utilizado. So necessrios
usar passos adicionais para remover compostos que sejam indesejados consoante o
caso, sejam substncias no fenlicas, ceras, cidos gordos, terpenos ou clorofilas.
Um exemplo a tcnica de extraco em fase slida (SPE) e fraccionamento baseado
em acidificao, a tcnica mais correntemente utilizada para remover compostos
fenlicos no desejados ou substncias no fenlicas de um extracto.
19
Os perodos de extraco podem variar desde 1 minuto a 24 horas, sendo que
perodos de extraco mais longos aumentam a possibilidade de ocorrncia de
oxidaes e outras alteraes, a menos que se adicionem agentes redutores e
protectores ao sistema de solventes.
19

Pgina | 25

2.11. Mtodos espectrofotomtricos

Os mtodos espectrofotomtricos so usados para quantificao de compostos
fenlicos e para determinao da capacidade antioxidante total. Estes so baseados
em diferentes princpios e so usados para quantificar tanto fenlicos totais, como
uma classe de fenlicos especficos.

2.11.1. Quantificao de fenis totais

O mtodo Folin-Ciocalteu o mtodo colorimtrico de oxidao/reduo mais
utilizado para a determinao de compostos fenlicos totais. Baseia-se na reduo do
cido fosfomolibdnio fosfotungstnio pelos grupos hidroxilo dos compostos
fenlicos produzindo um complexo de colorao azul, o qual absorve a 765nm, ou
seja, na zona do infravermelho.
A reaco ocorre em meio alcalino e a soluo saturada de carbonato de sdio
(Na
2
CO
3
) a base mais indicada. O nmero de grupos hidroxilo ou potencialmente
oxidveis controla a quantidade de cor formada. O grupo fenlico deve estar na forma
de fenolato para ambos os anies molibdano e tungsofosfato produzam a oxidao. As
molculas reduzidas so azuis e as no reduzidas so amarelas. Estas ltimas
decompem-se lentamente a pH alcalino, o qual necessrio para a manuteno do
fenol na forma de fenolato. Um aspecto importante a ser considerado neste mtodo
a escolha do padro. Os mais utilizados so o cido glico e a catequina.
Este mtodo espectrofotomtrico no um mtodo especfico, pois detecta todos
os grupos fenlicos presentes no extracto, incluindo protenas extraveis. Outra
desvantagem a interferncia pela reduo de substncias como o cido ascrbico.
19

2.11.2. Medio do poder antiradicalar de polifenis

A actividade antiradicalar pode ser determinada por um mtodo
espectrofotomtrico baseado na reduo do radical estvel 1,1-difenil-2-picrilhidrazil
(DPPH
.
) pelos compostos antioxidantes numa amostra. Esta reaco pode ser
acompanhada pela medio do decrscimo da absorvncia do DPPH
.
a =515nm
(mximo de absorvncia), em que a colorao violeta do DPPH
.
em soluo se
transforma em amarelo plido.
Os resultados so expressos em termos de ARP (Poder Antiradicalar), definido
como [(1/EC
50
) x 100], em que EC
50
representa a quantidade de amostra necessria
para reduzir a concentrao inicial de DPPH
.
em 50%. Quanto menor for o valor de

Pgina | 26

EC
50
maior ser o poder antioxidante da amostra. A figura 2.15 mostra a reaco de
reduo do DPPH
.
por um composto antioxidante.
30

Substncias que so capazes de promover esta reaco so considerados
sacadores de radicais e consequentemente antioxidantes. A estequiometria da reaco
do DPPH com um composto antioxidante pode ser descrita pelas seguintes equaes:

DPPH
.
+ aox + H
.
DPPH(H) + R
.
(1)

DPPH(H) + R
.
DPPH
.
+ aox + H
.
(2)

DPPH
.
+ R
.
produto (3)

R
.
+ R
.
produto (4)

R
.
+ R
.
produto + aox (5)

(1) envolve a remoo de hidrognio do antioxidante presente na sua forma
protenada, ou transferncia electrnica entre o DPPH e antioxidante ligada captura
de um proto, sendo esta a hiptese mais provvel.
(2) tem em conta a reversibilidade do passo inicial.

2.12. Espectrometria de massa com ionizao por electrospray (ESI-MS)

A espectrometria de massa uma tcnica analtica poderosa que usada para
identificar compostos desconhecidos, quantificar materiais conhecidos e elucidar as
propriedades qumicas e estruturais de molculas. A deteco de compostos pode ser
conseguida para quantidades to pequenas como 10
-15
g. Isto significa que os
N
N
.
NO
2
NO
2
NO
2
N
NH
NO
2
NO
2
NO
2 HOR
Figura 2.18 Reaco da reduo do DPPH
.
por um composto antioxidante.

Pgina | 27

compostos podem ser identificados em concentraes muito baixas (uma parte em
10
12
) em misturas quimicamente complexas.
Os princpios cientficos em que a tcnica se baseia so simples. A essncia da
tcnica envolve a gerao de ies que so depois detectados. A sofisticao est nos
mtodos que so usados para a gerao desses mesmos ies e no modo de os
analisar.
33

Uma das tcnicas de ionizao, em maior expanso, por electrospray. Esta
tcnica passou por duas fases distintas de investigao e desenvolvimento. A primeira
decorreu antes de 1970 e centrou-se mais nos aspectos fundamentais do processo de
produo de carga assim como no modo experimental de o concretizar. A segunda
fase deu-se a partir de 1970 com destaque para o trabalho desenvolvido em 1984 por
Yamashita e Fenn, considerados pioneiros da espectrometria de massa de ionizao
por electrospray. A partir deste trabalho a tcnica sofreu um incremento notrio com o
desenvolvimento e construo de fontes inicas comercializveis baseadas no princpio
de carregar gotas electricamente.
H essencialmente trs caractersticas que fazem com que seja considerada uma
tcnica distinta das outras tcnicas de ionizao. A primeira destas caractersticas a
capacidade para produzir ies multiplamente carregados, com nmero de cargas
elevado, reduzindo, assim a razo m/z, de tal modo que seja possvel analisar
compostos de elevada massa molecular at centenas de kDa, em praticamente todos
os tipos de analisadores. Uma segunda caracterstica que as amostras a analisar
devem ser introduzidas em soluo, o que faz com que seja possvel o acoplamento
com muitas tcnicas de separao. Por ltimo e no menos importante o facto de ser
o electrospray uma tcnica de ionizao suave permitindo que as interaces no
covalentes entre molculas que existem em soluo sejam preservadas na fase
gasosa.
33

2.12.1. Mecanismo de produo de ies

A produo de ies em electrospray requer essencialmente dois passos: disperso
de gotas altamente carregadas quase presso atmosfrica seguida de condies que
permitam a evaporao da gota.
As solues so primeiramente pulverizadas electrostaticamente com formao de
gotas pequenas e altamente carregadas. A nebulizao da soluo nalguns casos
facilitada pela ajuda de um gs nebulizador. Posteriormente as molculas de analito
devem de alguma forma ser separadas do solvente na forma de ies (Figura 2.18).

Pgina | 28

Este passo de formao de ies como em muitas das tcnicas de ionizao
consideradas suaves provavelmente o menos compreendido no processo global do
electrospray. Alguns mecanismos tm sido propostos para a desadsoro de ies a
partir de gotas carregadas sendo que o modelo de resduo de carga de Dole, aplicado
a macromolculas, foi talvez o primeiro a servir de base para a actual tcnica de
electrospray. Neste modelo considerado que medida que o solvente se evapora a
densidade de carga superfcie aumentar at que as foras repulsivas de Coulomb
entre as cargas superficiais excedero a tenso superficial levando diviso da gota
inicial. Se este processo de diviso continuar e se a soluo original for
suficientemente diluda ser alcanado um estado no qual cada gota conter uma
nica molcula que reter parte da carga inicial, ou seja formar-se-o macro ies.
Um outro mecanismo, para a gerao de pequenos ies, o da evaporao inica,
sugere que a evaporao do solvente conduz a uma instabilidade das gotas com
razes elevadas de densidade de carga superficial/raio da gota. A energia
electrosttica associada com a gota carregada torna-se ento suficientemente grande
para desadsorver ies do analito para a fase gasosa.
34
Tanto em modo negativo, como
positivo, para uma eficiente ionizao necessria a existncia de grupos funcionais
nos compostos de alta ou mdia polaridade (Figura 2.19).

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Figura 2.19 Esquema do processo de ionizao por electrospray.
34

Modo Positivo ([M+H]
+
, [M+NH4]
+
, [M+Na]
+
)
Geralmente mais do que um grupo requerido.

Mais do que um grupo requerido.

Modo Negativo [M-H]
-
, [M+Cl]
-
, [M+HCO2]
-

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2.12.2. Instrumentao

As fontes inicas dos espectrmetros de massa esto em geral situadas numa
regio de alto vcuo. No caso da fonte de ionizao por electrospray ela encontra-se
presso atmosfrica e a evaporao do solvente muitas vezes completada por
intermdio de um fluxo contra corrente de um gs, em geral, azoto. Os ies gerados
so depois transferidos desta zona de alta presso para a zona de alto vcuo do
analisador de massa.
34

Muitos so os sistemas de electrospray que tm sido construdos, diferindo entre si
nalguns dos componentes, mas na sua essncia so constitudos por:
- sistema de introduo de amostra
- regio da fonte onde os ies so gerados
- um orifcio para amostragem de ies
- um sistema de transferncia inica onde os ies so transportados para o
analisador de massa.

Em primeiro lugar um capilar de ao inoxidvel, mantido a um potencial
relativamente elevado em relao a um contra-elctrodo, onde o analito em soluo
introduzido e pulverizado na sua extremidade, sendo que o sinal do potencial aplicado
determina a polaridade das gotas e dos ies formados. A presso entre o capilar e o
contra-elctrodo presso atmosfrica, sendo em seguida os ies amostrados
atravs de um cone ou orifcio passando os ies a uma zona intermdia mantida a
uma presso mais baixa por meio de uma bomba rotatria. Os ies atravessam em
seguida um skimmer em direco ao analisador que se encontra a alto vcuo. O
skimmer funciona como um separador de momento sendo que os ies amostra mais
pesados passam atravs dele enquanto que as molculas mais leves de gs e solvente
so bombeadas.
34

2.12.3. Analisador

O analisador mais utilizado e mesmo o primeiro a ser comercializado em ESI-MS
o quadrupolo. Isto deve-se em princpio ao facto de os quadrupolos serem
relativamente baratos, fceis de usar e capazes de fornecer bom rigor nos valores de
Figura 2.20 Grupos funcionais de mdia, alta polaridade, necessrios para que
ocorra uma eficiente ionizao.

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massa medidos. No entanto a resoluo limitada e a transmisso diminui
linearmente com m/z sendo o limite superior de m/z cerca de 3000. Analisadores de
sector podem fornecer melhor rigor, maior resoluo e mesmo maior sensibilidade que
os quadrupolos, em instrumentos que dispem de um detector de array. A
combinao de ES a instrumentos de sector de dupla focagem foi concretizada apesar
desta combinao ser problemtica devido necessidade de utilizao de potenciais
elctricos da ordem dos kV para acelerao dos ies, a existncia dos quais pode
provocar descargas elctricas na zona de presso intermdia. Em consequncia, neste
tipo de associao de analisador de sector a fontes funcionando presso atmosfrica,
h necessidade de sistemas de bombeamento adicionais para que haja um decrscimo
de presso mais gradual.
33

Outro tipo de analisadores tm sido usados em combinao com electrospray
sempre com o intuito de melhorar quer a resoluo, quer o rigor na medida quer a
sensibilidade. Entre eles so de salientar o de ressonncia ciclotrnica de ies com
transformadas de Fourier, FTICR, e o de tempo de voo, ToF. O primeiro um
instrumento capaz de fornecer elevado poder de resoluo e elevada sensibilidade
bem como medida de massa rigorosa e na verdade a combinao de ESI com FTICR
est a tornar-se numa das tcnicas mais poderosas para anlise estrutural de grandes
biomolculas. Esta combinao apresentou at recentemente muitas dificuldades
experimentais, basicamente, por causa da presso muito baixa, 10
-6
a 10
-7
Pa,
necessria para se obter as melhores condies de funcionamento do instrumento.
Presentemente os espectrmetros ESI/FTICR dispem de 3 a 5 estgios de
bombeamento diferencial para conseguir a reduo de presso desejada. Quanto ao
segundo, o ToF, existie o problema do acoplamento de uma fonte contnua como a de
electrospray a um instrumento pulsado como o ToF sem haver perda de sensibilidade,
o que foi conseguido com a chamada injeco inica ortogonal, assim como foi
conseguida uma elevada resoluo com o uso de reflectores electrostticos.
34

2.12.4. Aplicaes

A ESI-MS sofreu um rpido crescimento tornando-se numa tcnica analtica
fundamental para anlise de uma vasta gama de compostos polares, no volteis e
termicamente instveis, indo de compostos de baixa massa molecular at
biopolmeros de elevada massa molecular. Os melhores resultados analticos so, em
geral, obtidos para analitos que so inicos em soluo e de acreditar que os ies
observados na fase gasosa so pelo menos um reflexo qualitativo dos ies na soluo

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amostra original, retendo aspectos da sua estrutura e associaes no covalentes. O
maior sucesso da tcnica tem sido na sua aplicao na anlise de molculas biolgicas
no volteis. Em princpio todas as molculas que podem ser carregadas so
acessveis a uma anlise por ESI-MS. Entre estas encontram-se os pptidos e
protenas que podem ser protonados principalmente nas zonas bsicas, ou seja nos
grupos terminais amino, hidratos de carbono, drogas, produtos naturais, pesticidas e
outras molculas de pequena dimenso.
33

Pgina | 33

3 Materiais e Mtodos

3.1. Amostra

O fruto de baob (Figura 3.1) foi colhido em 2007 em Cabo Verde. O fruto maduro
apresenta forma varivel, desde forma ovide a mais cilndrica, de epicarpo lenhoso.
A polpa do fruto maduro apresentava-se desidratada e pulvurulenta, de cor
esbranquiada tendo sido separada da cpsula externa. O contedo interno do fruto
constitui cerca de 60% do peso total do fruto, encontrando-se dividido em pequenos
aglomerados como se pode observar nas figuras 3.2 e 3.3, do pormenor do interior do
fruto. Foram retirados e separados os filamentos de fibras e resduos de sementes
castanhas (Figura 3.5) que representam 35% do peso total do fruto, que se misturam
com a polpa (figura 3.4). Atravs de um ligeiro processo mecnico separou-se as
sementes que se misturam com a polpa, tendo sido esta triturada num almofariz at
se obter um p, representando 25% do peso total do fruto (Figura 3.6).

Figura 3.3 Pormenor do interior do fruto de baob.
Figura 3.1 Fruto de baob. Figura 3.2 Fruto de baob aberto.

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Figura 3.5 Sementes do fruto de baob.
Figura 3.4 Pormenor da polpa.
Figura 3.6 P obtido aps triturao da polpa.

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3.2. Preparao dos Extractos

Solventes e Reagentes: n-Hexano (pureza: 99%), proveniente da Panreac Qumica,
SA (Barcelona, Espanha). Metanol (pureza>99,5%), proveniente da Fluka. cido
actico. Acetona.

Mtodos: 20g de amostra foram extradas com 200mL de n-hexano temperatura
ambiente e sob agitao para remover material lipdico. O material insolvel foi
extrado 5 vezes com 200mL de metanol em condies acdicas, adicionando 1mL de
cido actico a cada extraco com 200mL de metanol para extrair os fenis de baixo
peso molecular e dissolver acares e cidos orgnicos. O extracto em metanol foi
depois filtrado atravs de um filtro de placa sinterizada G3, sendo a soluo filtrada
concentrada por evaporao a presso reduzida a 40C. (Extracto em metanol)
O resduo resultante das extraces em metanol foi tratado 3 vezes com 200mL de
uma mistura acetona/gua (6:4 v/v) de forma a extrair os compostos fenlicos
polimerizados. Depois de cada extraco as suspenses foram centrifugadas a 15000g
durante 15 minutos, os sobrenadantes foram combinados e concentrados. (Extracto
em acetona)
Os extractos em metanol e acetona foram purificados similarmente usando um
cartucho Sep Pack C18. Os acares foram eludos da coluna usando 10 vezes 30mL
de cido actico (2% v/v em gua). A fraco fenlica foi eluda usando 5 vezes 30mL
de cido actico (2% v/v em metanol), os extractos foram posteriormente liofilizados.
O resduo insolvel resultante foi lavado 3 vezes com gua, centrifugado e
liofilizado. (Resduo)

3.3. Quantificao de fenis totais pelo mtodo Folin-Ciocalteu

Solventes e Reagentes: cido actico (pureza: 99%), proveniente da Panreac
Qumica, SA (Barcelona, Espanha). cido glico (pureza: 99%), proveniente da
Panreac Qumica, SA (Barcelona, Espanha). Carbonato de sdio anidro (pureza
mnima: 99,5%) da Pronalab (Lisboa, Portugal). Etanol (pureza mnima: 99,5%) da
Panreac Qumica, SA (Barcelona, Espanha). Reagente de Folin Ciocalteau da Panreac
Qumica, SA (Barcelona, Espanha).

Mtodos: Foi preparada uma soluo do extracto em metanol (1mg/mL em cido
actico diludo, 2,5% v/v em gua), denominado M
1
. A soluo foi homogeneizada
com ultrasons e centrifugada durante 10 minutos, recolhendo-se o sobrenadante. A

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partir da soluo M
1
foi preparada uma soluo M
1/2
correspondente diluio de 1:2
da primeira usando o mesmo solvente (cido actico diludo, 2,5% v/v em metanol).
Para o extracto em acetona purificado (1mg/mL em acetona/gua/cido actico
60:39:1 v/v) foi feito o mesmo procedimento, preparando-se as solues A
1
e A
1/2
correspondentes diluio para metade da primeira.

Para efectuar a recta de calibrao usaram-se solues de cido glico com
concentraes de 50, 100, 150, 200, 250 e 500mg/L (P1, P2, P3, P4, P5 e P6
respectivamente), a partir de uma soluo me de cido glico de 5g/L. A 0,5mL das
solues padro e amostra foi adicionado 250L de reagente Folin-Ciocalteu. A
mistura foi homogeneizada em vortex e deixada em repouso 3 minutos para que a
reaco ocorra, sendo adicionado depois 1mL de Na
2
CO
3
(20%) e 3,25mL de gua de
forma a completar 5mL, a mistura uma ltima vez homogeneizada em vortex e
deixada em repouso durante 2 horas temperatura ambiente e no escuro. A
absorvncia foi lida a 765nm contra um branco (0,5mL de gua mais reagentes) num
espectrofotmetro de UV-Vis.

3.4. Medio do poder antiradicalar dos compostos extractveis por
espectrofotometria utilizando DPPH
.

Solventes e Reagentes: Acetato de sdio (pureza: 99%), proveniente da Panreac
Qumica, SA (Barcelona, Espanha). cido Clordrico 6M. Soluo-me de DPPH
.
.
Metanol.

Mtodos: Preparou-se uma soluo-me de DPPH
.
pesando-se 2,5g de DPPH
.
e diluiu-
se em 100mL de metanol. (Soluo preparada no prprio dia e guardada no escuro.)
Para o extracto em metanol preparou-se 6 solues amostra de concentrao 1; 0,5;
0,25; 0,1; 0,05 e 0,025mg/mL, respectivamente M(1); M(0,5); M(0,25); M(0,1);
M(0,05); M(0,025). Para o extracto em acetona/gua 7 solues amostra de
concentrao: 1; 0,5; 0,25; 0,1; 0,05; 0,025; 0,0125mg/mL respectivamente A(1);
A(0,5); A(0,25); A(0,1); A(0,05); A(0,025) e A(0,0125).

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Em cuvetes de plstico foram adicionadas as seguintes quantidades:

Tabela 3.1 Volumes a usar para preparar a leitura da Abs para o controlo.

Tabela 3.2 Volumes a usar para preparar a leitura da Abs para cada diluio da
amostra.

Aps agitao deixou-se em repouso 30 minutos. A absorvncia para o controlo e para
a amostra foi lida a =515nm.

3.5. Preparao gradual em solues de clorofrmio/metanol

Solventes e Reagentes: Metanol. Acetona. cido actico. Clorofrmio

Mtodos: Preparou-se 5 mL em metanol de soluo de concentrao 10g/L a partir de
do extracto em metanol em condies acdicas adicionando cido actico (2,5% v/v).
A 5mL de soluo foi-se adicionando uma quantidade sequencial de clorofrmio at se
observar precipitao. Os precipitados foram recolhidos aps centrifugao durante 30
minutos. Os precipitados e sobrenadante recolhidos foram concentrados por
evaporao rotativa a 40C, liofilizados e registadas as suas massas.

3.6. Identificao e caracterizao dos extractos em ESI-MS
Volume Soluo DPPH
.

1,87x10
-4
M (L)
3900
Volume Metanol (L) 100
Volume Total (L) 4000
Volume Soluo DPPH
.

1,87x10
-4
M (L)
3900
Volume Amostra (L) 100
Volume Total (L) 4000

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As anlises por espectrometria de massa foram efectuadas num espectrmetro
Micromass Q-Tof-2 mass spectrometer, equipado com uma fonte de ionizao de
electrospray. As fraces em clorofrmio liofilizadas foram dissolvidas em gua ultra
pura e introduzidas directamente na fonte do espectrmetro de massa atravs de um
sistema de bombagem que termina em seringa, com um fluxo de 10 L/min.
As anlises de infuso foram efectuadas no modo positivo, sendo os espectros ESI-MS
e MS/MS obtidos usando Q-TOF 2 (Micromass, Manchester, UK), aplicando uma
voltagem de 3000V, voltagem do cone de 35V, com a fonte de ionizao a 80C e
temperatura no capilar a 150C.
O espectro de massa Tandem (MS/MS) dos ies moleculares foi obtido usando a
dissociao por induo de coliso (CID), usando rgon como gs de coliso e
variando a energia de coliso entre os 20 e 35V. Cada espectro foi produzido por
acumulao durante 1-2min, usando um intervalo de massa nominal at m/z 2000.

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4 Discusso/Resultados

4.1. Quantidade de extracto isolado e purificado

Dos 20g de amostra inicial de polpa do fruto de baob foram obtidas as seguintes
quantidades para cada extracto purificado:

m(extracto em metanol) = (0,1671 0,0001)g 167mg

m(extracto em acetona/gua) = (0,0739 0,0001)g 74mg

m(resduo) = ( 8227,5 0,0001)g 8,2g

Figura 4.1 Aparncia do extracto em metanol.
Figura 4.2 Aparncia do extracto
em acetona/gua.
Figura 4.3 Aparncia do resduo resultante das extraces.

Pgina | 40

4.2. Quantificao de fenis totais pelo mtodo Folin-Ciocalteu

Tabela 4.1 Registo da leitura de absorvncias para os padres de cido glico.

Padro
[Padro] /
(mg/L)
A
765
A
765
mdia
Desvio
padro
P1 50
0,039
0,037 0,004
0,034
P2 100
0,070
0,075 0,006
0,079
P3 150
0,122
0,124 0,002
0,125
P4 200
0,165
0,165 0,001
0,164
P5 250
0,231
0,232 0,001
0,233
P6 500
0,505
0,492 0,018
0,479

Figura 4.4 Recta de Calibrao para os padres de cido glico.
Recta de Calibrao
y = 1,027E-03x - 2,656E-02
R
2
= 0,9971
0,000
0,100
0,200
0,300
0,400
0,500
0,600
0 100 200 300 400 500 600
[Padro] / (mg/L)
A
7
6
5

Pgina | 41

Tabela 4.2 Registo das absorvncias e concentrao de fenis totais para cada
amostra.

Amostra A
700
A
700
mdia
[Fenis totais]
(mg/g)
Desvio
Padro
M
1

0,650
0,668 ______ ______
0,685
M
1/2

0,348
0,345 361,8 4,10
0,342
A
1

0,577
0,574 ______ ______
0,570
A
1/2

0,240
0,244 263,0 4,80
0,247

Os valores de absorvncia das solues de concentrao de 1mg/mL para ambos os
extractos encontram-se fora da zona de linearidade da recta, no sendo por isso
possvel o clculo da correspondente concentrao de fenis totais. Apenas os valores
de absorvncias das amostras das solues diludas para metade a partir das solues
de 1mg/mL que entram dentro dos limites da recta de calibrao. Para o clculo da
concentrao de fenis totais (mg/g de resduo seco), em cada extracto usou-se a
seguinte frmula:

[Fenis totais]
M1
= 2* [Fenis totais]
M1/2
(mg/g de resduo seco)

Obteve-se portanto para o extracto em metanol uma concentrao de fenis totais
de 724mg/g de resduo seco em equivalentes de cido glico, enquanto que para o
extracto em acetona/gua esse valor foi relativamente mais baixo de 526mg/g de
resduo seco em equivalentes de cido glico.
Estes valores indicam que em ambos os extractos considerados a quantidade de
fenis, por equivalentes de cido glico elevadssima, sendo maior no extracto em
metanol, como seria de prever, devido a neste estarem grande parte dos compostos
fenlicos de baixo peso molecular, equivalentes ao padro cido glico usado. Quando
comparados estes valores com os existentes para outros frutos verifica-se que estes
so muito superiores aos encontrados para mas e pras (20 a 60 mg/g de resduo
seco), por exemplo.
37

Pgina | 42

4.3. Medio do poder antiradicalar dos compostos extractveis por
espectrofotometria utilizando DPPH
.

Para cada soluo amostra, M e A, dos extractos em metanol e acetona/gua,
caculou-se a percentagem de DPPH
.
presente aps a reaco com os compostos
antioxidantes dos extractos, usando a seguinte frmula:

%DPPH
.
= (Aamostra / Acontrolo)*100

.
preparadas do extracto em metanol.

Amostra
[Amostra]
g/mL
A
515

A
515

mdia
Desvio
padro
%DPPH
.

M(1) 0,025
0,336
0,335 0,001 45
0,334
M(0,5) 1,25E-02
0,463
0,466 0,004 62
0,469
M(0,25) 6,25E-03
0,567
0,564 0,004 76
0,561
M(0,1) 3,13E-03
0,624
0,623 0,002 83
0,621
M(0,05) 1,57E-03
0,697
0,698 0,001 94
0,699
M(0,025) 7,90E-04
0,733
0,735 0,002 98
0,736
Controlo 0
0,749
0,746 0,005 100
0,742

Pgina | 43

.
no meio reaccional em funo da concentrao
de amostra para o extracto em metanol.

%DPPH
.
= m*[Amostra]+b

EC
50
= [Amostra] para o qual DPPH
.
= 50

EC
50
= (50-b)/m = 0,0160 g/mL

ARP = (1/EC
50
) = 63%

y = -2949,1x + 96,897
R
2
= 0,9444
0
20
40
60
80
100
120
0,00E+00 2,00E-03 4,00E-03 6,00E-03 8,00E-03 1,00E-02 1,20E-02 1,40E-02
[Amostra] (g/mL)
%
D
P
P
H

Pgina | 44

Tabela 4.4 - Registo das absorvncias e %DPPH
.
preparadas do extracto em acetona/gua.

Amostra
[Amostra]
g/mL
A
515

A
515

mdia
Desvio
padro
%DPPH
.

A(1) 0,025
0,210
0,211 0,001 30
0,212
A(0,5) 1,25E-02
0,350
0,350 0,001 49
0,349
A(0,25) 6,25E-03
0,478
0,476 0,003 67
0,474
A(0,1) 3,13E-03
0,567
0,565 0,003 80
0,563
A(0,05) 1,57E-03
0,642
0,644 0,002 91
0,645
A(0,025) 7,90E-04
0,677
0,676 0,002 95
0,674
A(0,0125) 4,00E-04
0,699
0,699 0,001 99
0,698
Controlo 0
0,706
0,708 0,002 100
0,709
Figura 4.6 - Percentagem de DPPH
.
amostra para o extracto em acetona/gua.
y = -4069,6x + 96,878
R
2
= 0,9830
0
20
40
60
80
100
120
0,00E+00 2,00E-03 4,00E-03 6,00E-03 8,00E-03 1,00E-02 1,20E-02 1,40E-02
%
D
P
P
H
[Amostra] (g/mL)

Pgina | 45

%DPPH
.
= m*[Amostra]+b

EC
50
= [Amostra] para o qual DPPH
.
= 50

EC
50
= (50-b)/m = 0,0115 g/mL

ARP = (1/EC
50
) = 87%

Obteve-se uma percentagem de 63% de poder antiradicalar para o extracto em
metanol e uma percentagem de cerca de 87% para o extracto em acetona/gua, isto
, 63% e 87% da quantidade de DPPH
.
em soluo foi reduzido a DPPH pelo conjunto
de substncias presentes na amostra, que funcionam como dadores de hidrognio.
Estes valores de ARP, demonstram que ambos os extractos da polpa considerados,
apresentam uma actividade antiradicalar notvel, principalmente o valor de 87% de
ARP para o extracto em acetona/gua, que s tem comparao com o encontrado
para extractos de dispiros secos.
35

O valor de 63% de ARP do extracto em metanol por sua vez, est em linha com os
valores encontrados para outros frutos como a laranja, pra e kiwi, frutos conhecidos
igualmente pela sua importante capacidade antioxidante.
36

Pgina | 46

4.4. Preparao gradual em solues de clorofrmio/metanol

Tabela 4.5 Registo dos volumes de clorofrmio usados e das massas obtidas para
cada fraco do extracto em metanol.

Volume
metanol
Volume de
Clorofrmio
Massa recolhida
(mg)
Fraco em
50% de
clorofrmio
3mL
3mL 0,633 0,001
Fraco em
60% de
clorofrmio
6mL 7,285 0,001
Fraco em
80% de
clorofrmio
8mL 6,812 0,001
Fraco em
90% de
clorofrmio
13mL 0,803 0,001
Sobrenadante _________ 9,162 0,001

As fraces em 60% de clorofrmio e 80% de clorofrmio foram as que
apresentaram maior quantidade de material precipitado, sendo portanto as fraces
utilizadas para anlise espectroscpica.

4.5. Identificao e caracterizao dos extractos em ESI-MS

Neste estudo as duas fraces, foram injectadas em ESI-MS e examinados os
espectros de massa tanto em modo positivo como negativo. De uma forma geral no
modo positivo, foram observados poucos ies, ao invs, em modo negativo o nmero
de ies revelados foi muito maior e em suficiente abundncia. Todos os ies de
abundncia mais elevada foram sujeitos a uma anlise por MS/MS de forma a se obter
mais informao estrutural sobre as espcies em questo.

Pgina | 47

4.5.1. Anlise em ESI-MS de modo positivo

Para as duas amostras, o espectro de ESI-MS mostrou uma mistura complexa de
compostos, sendo que para o espectro da fraco em 80% de clorofrmio se
observara dois picos predominantes, revelando uma espcie inica principal a m/z 453
[M + H]
+
e uma outra a m/z 467 [M + H]
+
, de menor intensidade. (Espectro 4.1)

Para o io m/z 453 o espectro de ESI-MS/MS (Figura 4.8) apresenta como
fragmento maioritrio uma espcie a m/z 293 (Fragmento3), atribudo perda de
160Da do io molecular resultante da remoo do fragmento maior com formao de
um carbocatio estabilizado por ressonncia, como pode ser observado na figura 4.9
pela espcie a m/z 293. Os fragmentos a m/z 425 e 407 (fragmento 2 e 1
respectivamente) tambm foram positivamente identificados estando representados
igualmente na figura 4.9.

Figura 4.7 Espectro de ESI-MS [M + H]
+
, do extracto em metanol fraco de 80% de
clorofrmio.

Pgina | 48

Figura 4.9 Esquema de fragmentao da espcie a 453 m/z.
Fragmento 3
Fragmento 2
Fragmento 1
Io Molecular
- 160 Da
- 46 Da
- 28 Da
Figura 4.8 Espectro de ESI-MS/MS do io molecular 453 m/z [M + H]
+

Io molecular: m/z 453
O
O
O O
O
O O
O
O
Clivagem
Rearranjo 1,5H
Clivagem
Fragmento 2: m/z 407

Pgina | 49

O espectro de ESI-MS/MS do io a 467 m/z apresenta o mesmo padro de
fragmentao, perda de 160, 46 e 28Da que o io a 453 m/z, o que nos leva a supor
que se tratam de compostos idnticos.

Fragmento 1:
O primeiro pico depois do pico do io molecular no espectro de ESI-MS/MS da
espcie inica corresponde ao fragmento a 439 m/z, correspondente perda da
molcula neutra (CH
2
CH
2
) de 28Da como verificado na espcie inica analisada
anteriormente por um rearranjo 1,5H.

Fragmentos 2 e 3:
O pico mais abundante presente no espectro (Figura 4.11) corresponde ao
fragmento a 421 m/z que resulta da perda de um dos grupos
.
OCH
2
CH
3
da estrutura
do io 467 m/z por clivagem , este fragmento uma das indicaes da diferena
estrutural da espcie inica 467 m/z do io a 453 m/z.
A presena do fragmento a 407 m/z resulta da perda do nico grupo
.
OCH
2
CH
2
CH
3
presente na estrutura que por isso apresenta uma menor intensidade de sinal do que
o pico a 421 m/z que resulta de uma fragmentao idntica da estrutura do io
molecular.
Figura 4.10 Espectro de ESI-MS/MS do io molecular 467 m/z [M + H]
+

Fragmento 1
Fragmento 4
Fragmento 3
Fragmento 2
Io Molecular
Fragmento 5

Pgina | 50

Fragmentos 4 e 5:
Os ies a 307 m/z e 293 m/z formam-se por clivagem por deslocalizao da
carga no anel aromtico. O pico a 307 m/z apresenta maior intensidade de sinal, uma
vez que na dissociao do io molecular a carga fica localizada preferencialmente no
fragmento de maior energia de ionizao pela regra de Stevenson.

O
O
O O
O
O O
O
O
O
O O
O
O O
O
O
O
O
O
O
O O
O
O
Clivagem
Clivagem
Fragmento 2: 421 m/z Fragmento 3: 407 m/z
Io molecular: 467 m/z
- 46 Da - 60 Da
Figura 4.11 Exemplo da formao dos fragmentos 2 e 3 do io molecular 467 m/z [M + H]
+

O
O
O O
O
O
O
O O
O
O O
O
O
O
O O
O
O
Clivagem
Clivagem
- 174 Da
- 160 Da
Fragmento 4: 307 m/z
Figura 4.12 Exemplo da formao dos fragmentos 4 e 5 do io molecular 467 m/z [M + H]
+

Pgina | 51

As estruturas das espcies inicas identificadas atrs carecem de informao
relativa sua estereoqumica, sendo que as estruturas apresentadas tem apenas um
objectivo indicativo. Na ausncia de um nome geral para os compostos apresentado
o seu nome IUPAC.
Em baixo, na tabela apresentado um resumo das informaes retiradas dos
espectros de cada um dos compostos e atrs j dissecadas.

Tabela 4.6 Compostos identificados por ESI-MS/MS de modo positivo e respectivos
ies moleculares e fragmentos.

Ies ESI-MS (m/z)
Nome do Composto MW
Ies
Desprotonados
[M+H]
+
m/z
Ies MS/MS
m/z
Tetraetil (2-metoxi-1,3-
fenileno) dimetileno
dimalonato
452 453,2
293(100), 407(58),
425(49)
Trietilmetil (2-metoxi-1,3-
fenileno) dimetileno
dimalonato
466 467,2
421(100), 307(97),
439(21), 407(9),
293(26)

Pgina | 52

4.5.2. Anlise em ESI-MS de modo negativo

A anlise em ESI-MS de modo negativo, revelou para as duas fraces uma
mistura complexa de compostos, sendo que as duas fraces a 60% e 80% em
clorofrmio apresentaram espectros similares, o que indica que apesar do
fraccionamento efectuado, os espectros obtidos apresentaram sensivelmente as
mesmas espcies inicas com idntica abundncia relativa, como pode ser observado
na figura 1 em anexo. O margem do espectro apresentada de m/z 50 a 675 foi a que
apresentou melhor resoluo e o maior nmero de espcies de abundncia relativa
considervel.
Em baixo na figura 4.13 est representada uma ampliao do espectro de ESI-MS
[M H]
-
das fraces estudadas com indicao das espcies posteriormente
analisadas por ESI-MS/MS [M H]
-
.

Ambas as fraces a 67% e 73% apresentam o mesmo contedo.

A anlise dos cromatogramas em modo negativo revelou a presena de vrios
compostos, que foram positivamente identificados pelos picos dos ies moleculares e
Figura 4.13 Ampliao do espectro de ESI-MS [M H]
-
da fraco em 80% de
clorofrmio com indicao das espcies inicas posteriormente
analisadas.

Pgina | 53

correspondentes fragmentaes indicadas nos respectivos espectros de ESI-MS/MS
pelas molculas desprotonadas geradas em modo de ionizao negativo [M - H]
-
. Das
vrias espcies inicas presentes no espectro, apenas as que apresentaram espectros
mais limpos e com melhor resoluo foram estudados.

Espcie a m/ z 146
A primeira espcie ao qual foi sujeita a anlise o espectro de ESI-MS/MS foi a
espcie inica a 146 m/z.
A partir da massa do io molecular e aps consulta em bases de dados online,
chegou-se estrutura apresentada na figura 4.15, do indole 3-carbinol.
38

O fragmento a 131 m/z, de maior abundncia relativa depois do correspondente
ao do io molecular a 146 m/z e 144 m/z de menos 2Da que o segundo, forma-se
pela perda do azoto da estrutura do io molecular. Observa-se tambm a formao de
um fragmento a 128 m/z, de menos 18Da que o io molecular, indicativo da perda de
uma molcula de gua. O fragmento 2, indicado no espectro 4.5 a 116 m/z, resulta da
perda do grupo lcool da estrutura do io molecular (Figura 4.15).

Figura 4.14 Espectro de ESI-MS/MS do io molecular 146 m/z [M H]
-
Io Molecular
Fragmento 1
Fragmento 2
-H
2
O

Pgina | 54

Espcie a m/ z 163

No espectro de ESI-MS/MS do pico a 163 m/z encontrado um cido fenlico
recorrente em inmeros frutos, o cido cumrico. Com apenas um nico fragmento,
resultante da perda de 44Da do io molecular, com formao da espcie a 119 m/z,
perda de CO
2
caracterstico nos cidos fenlicos e perda predominante no espectro
desta substncia.

Figura 4.16 Exemplo da formao do fragmento a 119 m/z a partir do io molecular
do cido cumrico a 163 m/z.
Fragmento: 119 m/z
-44Da
Perda de CO
2

OH
O
HO
-H
+
OH
-H
+
Figura 4.15 Exemplo da formao dos fragmentos 131 e 116 m/z a partir do io
molecular a 146 m/z, do indole-3-carbinol.
N
H
CH
2
OH
-H
+
N
H
-H
+
Io Molecular: 146 m/z Fragmento 2: 116 m/z
Perda de 30Da
CH
2
OH
-H
+
Perda de 15Da

Pgina | 55

-
Io Molecular
Fragmento

Pgina | 56

Espcie a m/ z 325

O pico a 325 m/z o de maior abundncia relativa na figura 4.13 e apresenta um
valor de 162Da superior ao pico correspondente ao do cido cumrico e um fragmento
a 163 m/z o que leva a supor que seja uma espcie derivada do cido cumrico atrs
identificado.

OH
O
O
O
HO
HO
HO OH
-H
+
OH
O
HO
-H
+
Io Molecular: 325 m/z
-162 Da
Perda de C
6
H
11
O
5
.

a 325 m/z.
-

Io Molecular
Fragmento 1
Fragmento 2

Pgina | 57

A espcie inica identificada corresponde ao cido cumrico ligado a uma hexose
como facilmente entendido pela perda de 162Da, - perda da unidade de hexose
presente na estrutura -, dando origem ao fragmento 1 a 163 m/z, a espcie inica do
cido cumrico. O io [M-H-147]
-
fragmento 2 a 179 m/z o terceiro pico de maior
abundncia relativa, formando-se directamente de igual forma do io molecular.

a 325 m/z.
OH
O
O
O
HO
HO
HO OH
-H
+
Perda de C
6
H
11
O
5
.
- 147Da
Io Molecular: 325 m/z
O
HO
HO
HO OH
OH
- H
+

Pgina | 58

Outras espcies inicas foram estudadas a partir do seu espectro de ESI-MS/MS,
no se conseguindo obter evidncias cientficas credveis que pudessem levar a
apontar inequiocamente a presena de outras substncias, quer como constituintes da
polpa de baob, ou artefactos formados durante o processo experimental. Um desses
exemplos a espcie a 367 m/z, que apesar de possuir uma abundncia relativa
considervel no espectro de ESI-MS (Figura 4.13), revelou um espectro de ESI-MS/MS
apenas com um fragmento, no sendo possvel avanar com qualquer possibilidade
para a identidade do composto em causa, tanto pela escassa informao no espectro
de ESI-MS/MS em anexo (Figura 5), como pela carncia de indcios na bibliografia e
bases de dados online consultadas, sobre espcies inicas quela razo massa/carga.
Alm disso, tal e qual no espectro de ESI-MS de modo positivo, foram identificadas
mais duas substncias da famlia dos ftalatos, apresentadas em anexo nas figuras 2,
3, 4 e 6. No caso da espcie a 146 m/z, - indole 3-carbinol -, esta apresenta um io
molecular de massa par e portanto um nmero mpar de massa molecular, como o
descrito na regra do azoto, indicativo de na estrutura termos um nmero mpar de
tomos de azoto, como indicado na tabela em baixo.

Tabela 4.7 Compostos identificados por ESI-MS/MS de modo negativo e respectivos
ies moleculares e fragmentos.

Ies ESI-MS (m/z)
Nome do composto MW
Ies
Desprotonados
[M-H]
-
m/z
Ies MS/MS
m/z
Indole 3-Carbonil 147 146,1
144 (100), 131(60),
128(10), 116(9)
cido Cumrio 164 163,1 119(100)
Derivado glucosilado do
cido cumrico
326 325,2 163(82), 179(62)

Pgina | 59

5 Concluses

O fruto da rvore de baob apresenta caractersticas singulares, e os relatos das
inmeras aplicaes da polpa do fruto de baob, principalmente em frica, suscitaram
o interesse para o estudo da composio dos seus diversos componentes. Trata-se de
um fruto que quando se apresenta maduro, seco, sem vestgios de amido e
riqussimo em pectinas com quantidades de cido ascrbico (vitamina C) na ordem
dos 3g/kg, quase seis vezes mais do que o encontrado para a laranja. A sua polpa em
virtude destas caractersticas nutricionais uma importante fonte da nutrio humana
em frica, sendo usada igualmente para a cura de diversas doenas.
Neste trabalho foi feito o estudo relativo composio fenlica e actividade
antioxidante da polpa do fruto seco de baob (Figura 5.1). Foram isolados dois
extractos em metanol e acetona/gua em quantidades apropriadas para posterior
estudo. O material insolvel, precipitado (Resduo), sobrou em grandes quantidades, e
um factor a ter em conta para futuros estudos, principalmente no que concerne ao
seu contedo em pectinas e fibras.

5.1. Extraco, quantidade em fenis e aco antioxidante.

Os dois extractos isolados, em metanol e acetona/gua apresentaram valores de
concentrao de fenis totais significativos. O contedo de compostos fenlicos foi
maior no extracto em metanol, o que pode contribuir, pelo menos em parte para a
Figura 5.1 Aspecto dos aglomerados da polpa do fruto de baob estudados.

Pgina | 60

actividade antioxidante demonstrada, apesar do extracto em acetona/gua apresentar
maior capacidade antiradicalar DPPH
.
(mtodo usado para determinar a capacidade de
inibio de radicais livres de uma amostra, usando o radical livre muito estvel
DPPH
.
).
O extracto em metanol apresentou uma concentrao de fenis de 724mg/g por
equivalentes de cido glico e um poder antiradicalar de 63%, enquanto o extracto em
acetona/gua um valor de 526mg/g por equivalentes de cido glico, mas um poder
antiradicalar superior, de 87%. Este maior valor de ARP para o extracto em
acetona/gua, pode ser explicado pela sua previsivelmente maior quantidade em
polifenis, como ser de esperar, em comparao com o extracto em metanol,
sugerindo que os compostos com elevada actividade antioxidante encontram-se
principalmente nesta ltima fraco.
Estes resultados confirmam a elevada capacidade antioxidante na polpa do fruto
de baob, como o relatado utilizando Trolox para aferir a capacidade antioxidante
solvel em gua da polpa
7
, o que indica a presena de grandes quantidades de
substncias, que actuam como sacadores ou por meios de reduo de radicais livres e
de inibio da perodixao lipdica, o que contribui para a preveno ou reduo do
desenvolvimento de patologias associadas ao stress oxidativo, sendo este um dos
factores para o uso deste fruto tropical africano nas inmeras aplicaes medicinais
relatadas.
Ambos os extractos estudados demonstram assim uma grande quantidade em
compostos de elevada capacidade antioxidante e, uma grande quantidade em
compostos fenlicos, principalmente quando comparadas com outros frutos
37
, que
podem ser usados como forma de aditivo alimentar de origem natural ou suplemente
farmacutico, usando como fonte a polpa do fruto de baob.

5.2. Substncias isoladas da fraco estudada.

Usando o extracto em metanol e aps subsequentes fraccionamentos em
clorofrmio, os seus perfis foram caracterizados por injeco directa das fraces em
ESI-MS de modo positivo e negativo.
Para identificao das espcies qumicas presentes na fraco estudada foi feita
uma anlise por ESI-MS/MS, onde se confirmaram as massas dos ies moleculares e
fragmentos formados. A primeira abordagem foi reconhecer as espcies inicas de
maior abundncia relativa e com espectro de ESI-MS/MS de melhor resoluo, com
compostos fenlicos j encontrados noutros frutos.

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Em ESI-MS de modo positivo, apenas foram identificadas duas espcies inicas de
abundncia relativa considervel, sendo que as duas apresentam a mesma estrutura,
pelo que devero ser compostos similares, apenas se distinguindo pela presena numa
das espcies de mais um grupo CH
2
, relativo a uma diferena de 14Da entre os dois
compostos. Ambos os compostos apresentam uma estrutura prxima de substncias
de origem sinttica, derivados do cido ftlico. Trata-se de um metoxifenilo ligado por
dois grupos metilo a dois dietilo malonatos e no caso da espcie de 466MW, apresenta
um grupo propilo. A presena destas duas substncias, - compostos maioritrios na
fraco estudada pela anlise de ESI-MS de modo positivo -, assim como as espcies
identificadas a 293 e 311 m/z -, correspondem a artefactos, substncias que se
devem ter formado durante o procedimento experimental, no sendo constituintes da
polpa do fruto estudado. Estas substncias, encontradas no espectro de ESI-MS de
modo negativo e as duas no Espectro de ESI-MS de modo positivo, correspondem
inequivocamente famlia dos ftalatos, constituintes do plstico, possivelmente
formados durante o armazenamento das fraces em clorofrmio recolhidas em porta
amostras de plstico, enquanto se esperava pela sua injeco no ESI-MS.

Das espcies identificadas em ESI-MS de modo negativo, apenas foram
encontradas duas usuais e largamente distribudas em inmeros frutos, o cido
cumrico a 163 m/z e o mesmo na forma glucosilada, a 325 m/z, espcie de maior
abundncia relativa no espectro de ESI-MS de modo negativo, presente na fraco
estudada. O cido cumrico um cido fenlico, do grupo dos cidos hidroxicinmicos
e dos antioxidantes mais activos dos cidos fenlicos
24
, encontrando-se difundido por
vrios frutos.

A 146 m/z foi identificada o indole-3-carbinol (Figura
5.2), substncia encontrada principalmente em vegetais
(brcolos, couve-flor, couve de Bruxelas, repolho),
geralmente na forma de glucosdeo. Ocorre na forma livre,
s aps a ruptura dos tecidos vegetais.
Potente antioxidante, anticarcinogneo com efeito
protector, actua de forma sinrgica com outros nutrientes.
um fitonutriente que interage com a vitamina C, o que
poder ser uma caracterstica importante para a actividade
biolgica da polpa do fruto de baob, dada a grande quantidade de vitamina C desta.
Os complexos de indole ligam-se a compostos com actividade carcinognica e
activam enzimas que funcionam como desintoxicantes, grande parte delas
N
H
OH
Figura 5.2 Indole
identificado na fraco
estudada.

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constituintes do trato gastrointestinal. A biotransformao de produtos com base em
indoles feita pelos cidos do estmago. O produto mais activo o ascorbigen,
considerado um metabolito activo da vitamina C, formado directamente do indole-3-
carbinol, na presena de cido ascrbico.
39
Entre as particularidades do indole-3-carbinol est o seu efeito protector da
estrutura do DNA. Durante a formao de tumores (massas de clulas anormais), por
alterao do DNA, existe um gene de defesa no nosso organismo (p53), que induz a
apoptose (morte celular programada) que conduz morte destas clulas anmalas
impedindo que cresam e se espalhem. Os estrognios, nomeadamente o estradiol,
podem converter-se em 2-hidroxiestrona ou 16-hidroxiestrona, altamente
carcinognica pois causa danos ao nvel do material gentico das clulas de DNA e
inibe a apoptose das clulas cancergenas. O indole-3-carbinol facilita a converso de
estradiol em 2-hidroxiestrona reduzindo a taxa de converso deste em 16-
hidroxiestrona, e por isso a actividade carcinognica da mesma. Este mantm assim o
balano estognio/testosterona equilibrado, sendo por isso fudamental para o sistema
endcrino tanto da mulher como do homem, actuando ao nvel da inibio do cancro
da mama, do colo do tero e da prstata por exemplo.
40

5.3. Consideraes gerais

Dos dois extractos isolados, apenas o extracto em metanol foi submetido a um
fraccionamento em clorofrmio, uma vez que o fraccionado seria alvo de uma anlise
em ESI-MS, com o intuito de encontrar compostos de baixo peso molecular. Foi
portanto apenas considerado o extracto em metanol que abarcaria os compostos de
menor peso molecular. As fraces obtidas, e considerados para anlise em 60% e
80% de clorofrmio acabaram por revelar sensivelmente o mesmo padro de espectro
por ESI-MS, no tendo sido por isso distinguidos.
Tanto no espectro de ESI-MS de modo positivo, como no de modo negativo,
encontrou-se vrios artefactos, substncias previsivelmente formadas durante o
processo experimental, principalmente no primeiro caso em que as duas substncias
de maior abundncia relativa no espectro correspondem a este tipo de substncias, tal
e qual como os dois ftalatos identificados no espectro de ESI-MS de modo negativo.
Constata-se que o principal cido fenlico presente no extracto em metanol da
polpa do fruto de baob o cido cumrico como pde ser observado no espectro de
ESI-MS de modo negativo, pelas espcies inicas a 163 e 325 m/z.

Pgina | 63

A presena do ndole-3-carbinol o facto de maior relevo neste estudo, uma vez
que a sua presena em frutos no usual, estando difundido principalmente em
vegetais, o que demonstra a particularidade do fruto estudado, considerado um
autntico man nos pases por onde se encontra difundida o gnero Adansonia.
A quantidade de fenis totais substncias com reconhecidas propriedades
benficas para a sade humana -, mostrou que para o extracto em acetona/gua, a
quantidade encontrada est dentro dos valores encontrados para outros frutos
abundantes neste tipo de substncias, enquanto para o extracto em metanol, o valor
de 724mg/g em equivalentes de cido glico encontrado, indica o quo rico este
extracto em termos de compostos fenlicos, quando comparado com outros frutos.
37
O
estudo da capacidade antioxidante, usando o mtodo da reduo do DPPH
.
, confirmou
as indicaes j existentes, revelando para o extracto em acetona/gua uma
capacidade antiradicalar superior a 80%, apenas encontrada para extractos de
dispiro seco
35
, enquanto que o extracto em metanol revelou um valor de 63%,
considervel s por si, mas em linha com o usualmente encontrado noutros frutos.
36

A actividade antioxidante, assim como a grande quantidade em fenis totais nos
dois extractos analisados, demonstraram claramente as potencialidades da polpa do
fruto de baob. A presena do indole-3-carbinol, encontrado no extracto de metanol
um indicador da existncia na polpa deste fruto de substncias biologicamente activas
com propriedades, como as descritas no seu uso tradicional pelas populaes
(imunoestimulante, anti-inflamatrio, analgsico, pesticida, antipirtico e arma eficaz
contra a diarreia e a disenteria), sendo um vlido contributo nutricional, alm de um
substituinte de muitas drogas teraputicas de origem ocidental.

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Pgina | 72

Anexo

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Figura 1 Exemplo da semelhana entre os espectros de ESIMS de [M H]
-
do
extracto de 80% em clorofrmio (em cima) e do extracto de 60% em
clorofrmio (em baixo).
Figura 2 Espectro de ESI-MS/MS do io molecular 311 m/z [M H]
-
.

Pgina | 74

Figura 3 Espectro de ESI-MS/MS do io molecular 367 m/z [M H]
-
.

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Adansonia digitata, polpa do fruto de baob, embondeiro, calabaceira, fenis,

Figura 2.5 Biossntese de fenilpropanides, lignanas, ligninas, suberinas, flavonides

Figura 4.5 Percentagem de DPPH

Figura 4.6 Percentagem de DPPH

Figura 4.7 Espectro de ESIMS [M + H]

Figura 4.16 Exemplo da formao do fragmento a 119 m/z a partir do io molecular do

Tabela 4.3 Registo das absorvncias e %DPPH

Tabela4.5 Registo dosvolumesdeclorofrmiousadosedasmassasobtidasparacada

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