Juliana Dreyer, et al.

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Anlise micolgica durante a decomposio cadavrica
Mycological analysis during the cadaveric decompositon
Cristne Souza Goebel, Flvio de Matos Oliveira, Luiz Carlos Severo, Juliane Bentes Picano
4
, Clarice
Sampaio Alho
5
Mestre em Biologia Celular e Molecular pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Professora Assistente
da Universidade Federal de Cincias da Sade de Porto Alegre, RS- Brasil.
Doutor em Cincias Pneumolgicas pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Laboratrio de Micologia,
Santa Casa-Complexo Hospitalar de Porto Alegre, RS-Brasil.
Doutor em Medicina pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Pesquisador 1B do CNPq, Professor
Associado da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Laboratrio de Micologia do Hospital Santa Rita, Santa
Casa-Complexo Hospitalar de Porto Alegre, RS-Brasil.
Mestre em Biologia Celular e Molecular pela Pontfcia Universidade Catlica do Rio Grande do Sul. Faculdade
de Biocincias, Laboratrio de Gentca Humana e Molecular. Porto Alegre, RS-Brasil.
4
Doutora em Fisiopatologia e Patologia Molecular pela Universitat de Barcelona, UB, Espanha, Pesquisadora e
Professora da Faculdade de Biocincias, Pontfcia Universidade Catlica do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS-Brasil.
Resumo
Introduo: Assim como na entomologia forense, onde os insetos fornecem informaes para a medicina legal, os fungos, que
tambm aparecem na superfcie dos corpos de humanos e animais em decomposio, podem ser uma ferramenta tl para a
Tanatologia. Devido s variaes climtcas, geogrfcas e ecolgicas das diferentes regies do mundo, as informaes acerca do
padro fngico tero diferentes contribuies na micologia forense. Objetvo: Analisar o crescimento dos fungos em cadveres
de sunos em decomposio na regio metropolitana da capital do Rio Grande do Sul, Brasil, durante o vero. Mtodos: Foram
utlizados dois sunos expostos em ambiente aberto no municpio de Viamo, durante o vero (ms de dezembro). As colheitas
de amostras fngicas foram realizadas com um intervalo de 5, 10, 15, 20 e 30 (dias aps a exposio). Resultados e Concluso:
Em 30 dias de exposio os fungos isolados foram predominantemente Candida spp e Penicillium spp. Este o primeiro trabalho
que trata do tema no Brasil.
Palavras-Chave: Medicina legal. Micologia. Tanatologia.
Abstract
Introducton: As well as in forensic entomology, where the insects provide informaton to legal medicine, fungi, which also
appear on the surface of human bodies and decaying animals, can be a useful tool for Thanatology. Due to climatc, geographical
and ecological diferent regions of the world, informaton about the diferent contributons in patern will have fungal Mycology
forensics. Objectve: Analyze the growth of fungi in rotng pig corpses in the metropolitan region of Rio Grande do Sul, Brazil,
during the summer. Methodology: Two pigs were exposed in an open environment in the municipality of Viamo during the
summer (December). Fungal samples were collected with an interval of 5, 10, 15, 20 and 30 (days afer treatment). Results and
Conclusion: In 30 days of exposure fungi Candida spp. isolates were predominantly and Penicillium spp. This is the frst work that
deals with the theme in Brazil.
Keywords: Forensic Medicine. Mycology. Thanatology.
ARTIGO ORIGINAL
ISSN 1677-5090
2010 Revista de Cincias Mdicas e Biolgicas
Correspondncia / Correspondence: Clarice Sampaio Alho. Pontfcia
Universidade Catlica do Rio Grande do Sul. Av. Ipiranga, 6681, Prdio
12C, sala 233. 90619-900 Porto Alegre, RS, Brasil. E-mail: csalho@
pucrs.br
INTRODUO
A entomologia forense uma ferramenta tl nas
investgaes criminais no s para determinar o intervalo
de tempo de morte ou verificar uso de drogas, como
tambm para identfcar o uso de venenos, a estao do
ano que ocorreu a morte, a localizao geogrfca, os stos
especfcos do trauma no corpo do cadver, ou a identfcao
de artefatos no s no corpo, mas tambm na cena do
crime
4
. E devido s diferenas climticas
3
,geogrficas e
caracterstcas ecolgicas
5
peculiares de cada regio, dados
de entomologia forense tm sido descritos em diversas
localidades como Estados Unidos da Amrica, Canad, Itlia,
Alemanha, Espanha, Colmbia, ndia, Malsia e Tailndia
2
.
Assim como os insetos e artrpodes, os fungos
tambm aparecem na superfcie de humanos e animais e,
desta forma, a micologia tambm pode ser utlizada como
uma ferramenta para auxiliar na elucidao dos itens citados
acima
6
.
Espcies fngicas apresentam distribuio restrita
e especfca, exigncias ecolgicas, produo de esporos
sazonal e outros fatores teis para a Tanatologia
7
.
Rev. Cinc. Md. Biol., Salvador, v.12, n.1, p.28-32, jan./abr. 2013
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Osso neoformado por distrao osteognica: anlises histolgicas e fsicas Juliana Dreyer, et al.
Estudos de micologia forense relatam, por
exemplo, a identfcao de fungos na dentna humana
aps 50 anos decorridos da morte do cadver
8
, e
a identificao de espcies fngicas em um corpo
mumifcado ou em restos de esqueleto humano. O fungo
predominantemente encontrado o Erotum repens
9
.
Como colonizador da superfcie da pele e ossos
9
em outro
estudo, a identfcao das espcies fngicas, Penicillium
sp. e Aspergillus terrous em um homem de 71 anos
encontrado no fundo de um poo de seis metros, onde a
parte inferior de seu corpo estava submerso na gua
10
,foi
a prova essencial no processo penal
10
.
Com a fnalidade de se ampliar o conhecimento
da micologia forense nas investigaes criminais
11
,
desenvolvemos este trabalho analisando o crescimento
fngico em cadveres sunos na tentatva de incrementar
esta ferramenta.
MATERIAIS E MTODOS
Sunos: O Sus scrofa domestcus tem pele com
pelagem espaada que recobre uma espessa camada de
tecido adiposo. Entre os mamferos em que os rgos
e o corpo apresentam compatibilidade morfolgica
com o homem, o suno considerado como o mais
prximo, sendo bem aceita e regulada sua utlizao
na investigao. Esse animal apresenta semelhanas
anatmicas e fsiolgicas com humanos, e seus hbitos
alimentares e a fsiologia digestva so tambm similares.
Os animais aqui utilizados no foram abatidos pelos
propsitos do experimento e sim para os fns comerciais
da fazenda de produo/abate
12
,
13
, juntamente com
os demais animais do lote destnado comercializao
no frigorfco/aougue. Os animais foram adquiridos da
fazenda de produo/abate, antes da sua comercializao
em frigorfco/aougue. Essa medida garantu a preciso
sobre os dados da morte do animal, cuja exatdo permite
a qualidade do experimento.
Foram utlizados dois sunos de 6 Kg expostos
em ambiente aberto no municpio de Viamo na regio
metropolitana da capital do Rio Grande do Sul, Brasil,
durante o vero (ms de dezembro). Os sunos foram
acondicionados em gaiolas para evitar ao predadora.
Simulao do encontro dos cadveres: Uma
gaiola foi exposta ao sol e a outra na mata fechada
protegida da exposio solar. Cada gaiola foi monitorada
com um termmetro analtico, para controlar as
temperaturas mximas e mnimas, e tambm com um
higrmetro, para controlar a umidade do local. Com o
intuito de simular casos reais de homicdios de vtmas
com idade inferior a 10 anos de idade, j ocorridos no
Brasil, o animal exposto ao sol foi acondicionado dentro
de um saco plstco.
Colheitas: Aps a exposio dos dois sunos
(tempo 0), as colheitas de amostras fngicas foram
realizadas com um intervalo de 5, 10, 15, 20 e 30 dias
aps a exposio. As colheitas ocorreram sempre no
turno da manh, no horrio entre 9h 25 min e 10h 45
min.
Colheita para anlise do crescimento fngico:
Para o exame direto foi realizado esfregao com um swab
estril de cada regio do suno, o qual foi posteriormente
corado pela tcnica prata metenamina (Gomori-Grocoh).
Para o exame de cultivo fngico as amostras foram
colhidas com swab estril da superfcie de trs regies
do corpo de ambos os sunos. Foram utlizados gar
Sabouraud com cloranfenicol e gar Mycosel (gar
Sabouraud com cloranfenicol e ciclohexamida) para inibir
o crescimento bacteriano, incubados a 25C e observados
diariamente para anlise do crescimento fngico por
at 30 dias aps a colheita do material. Os cultvos que
apresentaram crescimento fngico foram analisados
macro e microscopicamente.
RESULTADOS
Os dados de temperatura e umidade esto apostos
na Tabela 1. O estado de decomposio do suno exposto
ao sol e do suno exposto na sombra (mata fechada) esto
ilustrados nas fguras 1 e 2, respectvamente.
Anlise micolgica durante a decomposio cadavrica
Tabela 1. Temperatura e umidade relatva do ar no local do suno exposto ao sol (A) e exposto sombra (B)
Rev. Cinc. Md. Biol., Salvador, v.12, n.1, p.28-32, jan./abr. 2013
Juliana Dreyer, et al.
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A anlise do exame direto est demonstrada na
Tabela 2. Os resultados do exame direto foram negatvos
at o dia 15. A partr do dia 20 de exposio, o exame direto
apresentou-se positvo para as amostras da ndega (Figura 3-A)
e da cabea do suno exposto ao sol, e para todas as amostras a
partr do dia 30 de exposio (Figura 3-B), com exceo apenas
da amostra da ndega do suno exposto sombra.
As anlises do crescimento fngico das cinco
colheitas esto na Tabela 3 e na Figura 3-C. Os fungos
predominantemente isolados foram Candida spp. e Penicillium
spp. Tambm foram visualizados blastos artrocondios
sugestvo de Trichosporon sp. (Figura 3-D), nas amostras do dia
5 de exposio da ndega e do dia 20 de exposio do lombo
do suno exposto na sombra. Aspergillus favus foi isolado nas
amostras do dia 15 de exposio da cabea do suno exposto
na sombra.
Cristne Souza Goebel, et al.
Tabela 2. Exame direto com colorao de prata: Anlise do crescimento fngico de amostras
provenientes do suno exposto ao sol (A) e do exposto sombra (B).
Figura 1. Suno exposto ao sol (acondi-
cionado no interior de um saco plst-
co) em cada dia de coleta exposto ao
sol (A) e do exposto sombra (B)
Figura 2. Suno exposto sombra (inte-
rior da mata fechada) em cada dia de
coleta
Figura 3. A- Exame direto. Anlise do esfregao das amostras do dia 20 de exposio da ndega do suno exposto ao sol. Colorao
prata. Visualizao de blastocondios com brotamento sugestvo de Candida spp. B- Exame direto. Anlise do esfregao das
amostras do dia 30 de exposio do lombo do suno exposto sombra. Colorao prata. Visualizao de blastocondios sugestvo
de Candida spp. Representatvo dos demais exames direto a partr do dia 30 de exposio, com exceo apenas da amostra da
ndega do suno exposto sombra. C- Padro do crescimento fngico nos meios de cultvo gar Sabouraud com cloranfenicol e
Mycosel; D- Microscopia do cultvo das amostras do dia 5 de exposio da ndega e do dia 20 de exposio do lombo do suno
exposto na sombra. Artrocondios sugestvo de Trichosporon sp.
(-) negatvo.
Rev. Cinc. Md. Biol., Salvador, v.12, n.1, p.28-32, jan./abr. 2013
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Osso neoformado por distrao osteognica: anlises histolgicas e fsicas Juliana Dreyer, et al.
Tabela 3. Exame do cultvo: Anlise do crescimento fngico em meio de cultvo de amostras provenientes do suno exposto ao
sol (A) e do exposto sombra (B)
Anlise micolgica durante a decomposio cadavrica
DISCUSSO
Nossos resultados no demonstraram uma
diferena significativa do padro de crescimento
do suno exposto ao sol e sombra. Observou-se o
predomnio de crescimento de Candida spp., o qual
um fungo colonizador natural da pele e das mucosas
14
. Contudo, a deteco direta deste fungo no se
deu nos primeiros dias, o que pode ser explicado
por no haver quantidade suficiente para positivar
o teste. Tambm foram evidenciados Penicillium spp.
e Aspergillus favus, sendo estes dois fungos ubquos
e frequentemente encontrados como saprfitos
15
, j
descritos como presentes em outros animais
16
. Dois
estudos prvios com fungos em cadveres relataram
Erotum repens
1
, Penicillium sp. e Aspergillus terrous
10

como as espcies predominantemente encontradas em
cadveres humanos, provavelmente pelo fato destes
fungos serem, respectvamente, tambm colonizadores
naturais da pele e ossos, ou encontrados no ambiente.Em
duas amostras do suno exposto sombra (ndega-dia 5
e lombo-dia 20) foram visualizados blatos artrocondios
sugestvo de Trichosporon sp. O gnero Trichosporon
composto de 17 espcies
17
. Este gnero apresenta na
microscopia da colnia artrocondios e blastocondios,
sendo que a confrmao e a diferenciao das espcies
so realizadas com base no padro de assimilao de
carboidratos e outras propriedades bioqumicas
17
. um
fungo ubquo, podendo ser encontrado, por exemplo, na
gua, no solo, nas plantas, como tambm pode fazer parte
da microbiota de humanos e de alguns animais
18
.
A negatvidade do exame de cultvo do dia 0 a 15
um resultado que pode ser tl na Tanatologia. Ainda
mais relevante, foi a positvidade no exame direto a partr
do dia 20 para duas amostras, e a partr do dia 30 para
cinco das seis amostras. Este perodo de 20 a 30 dias
foi o necessrio para que os fungos se reproduzissem
e atngissem um nmero adequado a sua identfcao
no exame direto. Esse dado pode ser complementar
na estimativa do intervalo de tempo de morte em
investgaes criminais. No entanto, corroborando com
Menezes et al.
11
sabe-se da necessidade de estudos
complementares. Como citam Ishii et al.
19
, pode-se
ter a expectatva de tornar a micologia forense uma
ferramenta tl e confvel nas investgaes criminais.
Na regio metropolitana da capital do Rio
Grande do Sul, Brasil existe uma mdia de trs mortes
dirias decorrentes de homicdio e/ou suicdio (Dados
do Departamento de Criminalstica do Instituto
Geral de Percias do RS). A ampla maioria deles tem
identificao facilitada atravs dos meios clssicos.
Contudo, eventualmente, a micologia forense poder
ser necessria, como foi o caso publicado por Hitosugi,
et al. 2006
10
para elucidar tais itens.
Em 30 dias de exposio os fungos isolados foram
predominantemente Candida spp e Penicillium spp.
Esse trabalho um esforo no sentdo de contribuir
neste campo do saber que, para o qual at o presente
momento no havia dados para o Brasil.
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