CURSO DE ENGENHARIA AMBIENTAL

Adriana Bee





AVALIAO DA BIOAUMENTAO EM SOLOS CONTAMINADOS COM LEO
DIESEL PROVENIENTES DE POSTOS DE COMBUSTVEIS








Santa Cruz do Sul
2014

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Adriana Bee








AVALIAO DA BIOAUMENTAO EM SOLOS CONTAMINADOS COM LEO
DIESEL PROVENIENTES DE POSTOS DE COMBUSTVEIS




Trabalho de Concluso apresentado ao
Curso de Engenharia Ambiental da
Universidade de Santa Cruz do Sul para
obteno do ttulo de Bacharel em
Engenharia Ambiental

Orientador: Prof. Dr. Diosnel Antonio
Rodriguez Lopez




Santa Cruz do Sul
2014


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NDICE DE FIGURAS


Figura 1 reas contaminadas at Dezembro de 2012 ........................................................... 10
Figura 2 Distribuio da contaminao por atividade ........................................................... 11
Figura 3 Montagem do sistema de biorremediao em fase de testes ................................ 26



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NDICE DE TABELAS


Tabela 1 Fraes tpicas de petrleo...................................................................................... 12
Tabela 2 Tcninas de biorremediao ................................................................................... 17
Tabela 3 Vantagens e desvantagens da biorremediao ........................................................ 19
Tabela 4 Fatores que influenciam a biodegradao de um contaminante no solo ................ 19
Tabela 5 Condies timas para degradao de hidrocarbonetos em solos .......................... 20



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SUMRIO


1. INTRODUO ....................................................................................................................... 5
2. OBJETIVO GERAL............................................................................................................... 7
2.1. Objetivos Especficos ......................................................................................................... 7
3. JUSTIFICATIVA ................................................................................................................... 8
4. REFERENCIAL TERICO ................................................................................................. 9
4.1. Fontes de Contaminao Ambiental ................................................................................. 9
4.2. Hidrocarbonetos derivados de petrleo ......................................................................... 12
4.3. Gasolina, leo Diesel e leos Lubrificantes .................................................................. 13
4.4. Legislao Vigente ............................................................................................................ 16
4.5. Mtodos de biorremediao de reas contaminadas .................................................... 16
4.6. Biorremediao ................................................................................................................ 18
4.7. Fatores que afetam a microbiota do solo ....................................................................... 20
4.8. Atenuao Natural ........................................................................................................... 22
4.9. Bioaumentao e Bioestimulao .................................................................................... 22
5. CRONOGRAMA .................................................................................................................. 24
6. METODOLOGIA ................................................................................................................. 25
6.1. Montagem dos Sistemas ................................................................................................... 25
6.2. Caractersticas do solo a ser tratado .............................................................................. 26
6.3. Seleo e inoculao dos micro-organismos .................................................................. 26
6.4. Controle do pH, temperatura e umidade ....................................................................... 27
6.5. Contagem de micro-organismos aerbios mesfilos viveis e bolores e leveduras .... 28
6.6. Anlise qumica de hidrocarbonetos de petrleo (BTEX, PAH, TPH Fingerprint e n-
alcanos ....................................................................................................................................... 28
7. REFERNCIAS .................................................................................................................... 29




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1. INTRODUO

O solo possui grande importncia para o homem e a natureza, pois uma base para a vida
e um habitat para as pessoas, animais, plantas e outros organismos. Grande parte de nossos
alimentos provm do solo, que como parte integrante dos sistemas naturais, cumpre papel
importante nos ciclos da gua e dos nutrientes. O solo um espao com intensa atividade
microbiolgica, meio para a decomposio, equilbrio e renovao qumica, protetor de
recursos hdricos, em especial s guas subterrneas, em funo de suas propriedades filtrante,
de tamponamento e de converso de substratos (SEABRA, 2005).
A crescente contaminao de solos e gua subterrnea por hidrocarbonetos derivados de
petrleo, principalmente em funo da frequncia com que os episdios de contaminao so
verificados e da gravidade com que o meio ambiente afetado, tem ganhado destaque nas
ltimas dcadas. Embora os grandes vazamentos acidentais de petrleo sejam preocupantes e
tm ganhado espao na mdia, estima-se que a principal fonte de contaminao por derivados
de petrleo seja devida a pequenos vazamentos de combustvel ocasionados em reservatrios,
falhas mecnicas ou humanas ocorridas nas operaes de descarga e at mesmo por acidentes
ocorridos no transporte deste produto qumico (MENEGHETTI, 2007).
Algumas tcnicas j foram desenvolvidas para o tratamento de reas contaminadas por
petrleo e seus derivados. Dentre essas, as tcnicas fsico-qumicas, que envolvem o emprego
de substncias qumicas e fatores fsicos como, por exemplo, temperatura e presso, so de
uso frequente em funo da elevada eficincia e ao rpido perodo de tratamento. Porm, alm
do alto custo, esses tratamentos apresentam inconvenientes, como a gerao de grandes
volumes de rejeitos contaminados (guas e solventes), e risco de poluio atmosfrica atravs
da volatilizao de alguns compostos (RISER-ROBERTS, 1998; KHAN, HUSAIN &
RAMZI, 2004).
Sendo assim, nas ltimas duas dcadas, a aplicao de processos biolgicos no tratamento
de solos contaminados por hidrocarbonetos de petrleo esto despertado o interesse das
comunidades cientfica e industrial. So processos de tratamento que utilizam organismos
como bactrias, fungos e/ou vegetais, com a finalidade de reduzir ou eliminar compostos
orgnicos perigosos ao meio ambiente e sade humana, que se acumularam no ambiente.
Entre as principais vantagens do emprego dos processos biolgicos est o seu baixo custo,
comparando-se com os processos convencionais (DAVIS et al., 1995). Outras importantes
vantagens so o fato de serem processos naturais, com baixo consumo de energia e que
6

causam poucas mudanas nas caractersticas fsicas, qumicas e biolgicas do meio
(SEABRA, 2005).
De modo geral, a biorremediao baseia-se na degradao bioqumica dos contaminantes
por meio da atividade de micro-organismos presentes ou adicionados no local de
contaminao (BERNOTH et al., 2000).
Os hidrocarbonetos so degradados principalmente por bactrias e fungos e a adaptao
destas comunidades microbianas, por exposio prvia aos hidrocarbonetos, aumenta as taxas
de degradao dos mesmos. A adaptao provocada por enriquecimento seletivo de micro-
organismos usurios dos hidrocarbonetos e a ampliao do conjunto de genes catabolizantes
de hidrocarbonetos (JACKSON et al., 1996).
Frente a essa realidade, e com enfoque na necessidade de tecnologias de remediao mais
acessveis e menos impactantes, o presente estudo avalia a eficincia das tcnicas de
bioaumento e bioestmulo em comparao com a atenuao natural, na degradao de
hidrocarbonetos derivados de petrleo de um solo contaminado.

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2. OBJETIVO GERAL

O objetivo geral dessa pesquisa estudar a biorremediao de um solo contaminado com
hidrocarbonetos derivados de petrleo por meio bioaumentao com cepas de fungos.

2.1. Objetivos Especficos

- Avaliar a capacidade de biorremediao por meio da tcnica de bioaumentao e
bioestimulao de um solo contaminado com leo diesel, utilizando cepas de Aspergillus
fumigatus e Cephalosporium sp., em um reator de mistura completa;

-Comparar os resultados da bioaumentao com os da atenuao natural.


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3. JUSTIFICATIVA

Esse estudo justifica-se pela atual situao atribuda aos postos de combustveis, em
relao ao nmero de reas contaminadas produzidas por esta atividade. Os solos
contaminados dessas instalaes, devido a derrames de leos lubrificantes utilizados em
veculos e a derrames de combustveis, se tornaram um grande problema ambiental pela
dificuldade de tratamento. Segundo a Portaria 016/2010 da FEPAM os resduos Classe I
contendo material inflamvel no podero mais ser destinados a aterros de resduo classe I ou
a centrais de recebimento e destinao de resduos Classe I. A destinao final do mesmo
dever ser realizada por reprocessamento, recuperao, reciclagem, tratamento biolgico, co-
processamento ou incinerao.
Com base nessas condies props-se uma pesquisa na ao microbiolgica sobre esse
resduo, baseada na bioaumentao de cepas de micro-organismos isoladas em laboratrio.


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4. REFERENCIAL TERICO

4.1. Fontes de Contaminao Ambiental

A sbita introduo de compostos qumicos xenobiticos, ou a massiva realocao de
recursos naturais para diferentes nichos ambientais, pode frequentemente sobrecarregar a
capacidade de autodepurao dos ecossistemas receptores, resultando assim na acumulao de
poluentes para nveis problemticos ou mesmo perigosos, assim os avanos na cincia e
tecnologia desde a revoluo industrial tm permitido aos humanos explorar de forma mais
intensa os recursos naturais, o que tem gerado distrbios importantes nos ciclos de energia
globais. (LIU E SUFLITA, 1993).
Principalmente a partir da dcada de 70, o Brasil passou por um forte desenvolvimento
econmico e industrializao, os quais exigiram uma grande estruturao da cadeia produtiva
dos derivados de petrleo, desde novas descobertas de campos de petrleo passando pela
formao de vrios plos petroqumicos e o aumento das redes de distribuio (MARIANO,
2006).
Cada vez mais o mundo atual est dependente do petrleo e de seus derivados para a
manuteno de sua atividade industrial. Durante a explorao, o refino, o transporte e as
operaes de armazenamento do petrleo e/ou de seus derivados podem ocorrer
derramamentos acidentais ocasionando assim, a contaminao de solos, rios, etc (AISLABIE
et al., 2004 apud MARN et al., 2006).
Os transportes no Brasil so predominantemente rodovirios, dependendo basicamente de
combustveis fsseis e bicombustveis para manter o ciclo econmico da nao. Fica
demonstrada, dessa forma, a importncia da cadeia de postos de abastecimento de
combustveis, estrategicamente, disposta em todo territrio nacional (BARROS, 2006).
Quando ocorre o derramamento de gasolina em solos, por exemplo, uma das principais
preocupaes a contaminao das guas subterrneas, que tambm podem contaminar,
especialmente, os aquferos que so usados como fontes de abastecimento de gua para o
consumo humano (CUSTANCE et al., 1992).
Acidentes envolvendo o transporte de combustveis por navios, caminhes ou dutos e
principalmente devido a vazamentos provenientes de tanques de armazenamento subterrneo,
os quais esto sujeitos a fortes processos corrosivos so algumas das origens das
contaminaes de solos e gua. Assim as preocupaes relacionadas ao potencial de
contaminao desses elementos vm crescendo. (SPILBORGHS, 1997).
10

No Brasil, postos de gasolina so responsveis por mais da metade dos casos de
contaminao do solo e aquferos, em grande parte devido falta de um acompanhamento
eficaz e os longos tempos de vida dos tanques de armazenamento subterrneo de
aproximadamente 25 anos (BRITO et al., 2010 apud KRONBAUER, 2013).
De acordo com a ANP (2013), a revenda de combustveis trata-se de um mercado extenso,
com cerca de 90 mil agentes regulados, espalhados por todo o territrio nacional. No ano de
2012, contabilizou-se 119.838 mil m de derivados de petrleo vendidos em todo o territrio
nacional, dentre esses, englobam gasolina C, gasolina de aviao, GLP, leo combustvel,
leo diesel, QAV e querosene iluminante. O Brasil em 2012 foi responsvel pelo consumo de
2.805 mil barris/dia de petrleo (ANP, 2013).
O comrcio de combustveis um ramo econmico que tende a crescer cada vez mais,
assim como tambm fonte contaminao do meio ambiente.
Em maio de 2002, a CETESB divulgou pela primeira vez a lista de reas contaminadas,
registrando a existncia de 255 reas contaminadas no Estado de So Paulo. O registro das
reas contaminadas frequentemente atualizado, e, aps a ltima atualizao, ocorrida em
dezembro de 2012, foram totalizados 4.572 registros no Cadastro de reas Contaminadas e
Reabilitadas no Estado de So Paulo.
A Figura 01 a seguir apresenta a evoluo do nmero de reas contaminadas
cadastradas.
Figura 1 reas contaminadas at Dezembro de 2012

Fonte: CETESB, 2014.

11

Do total de reas contaminadas 3.510 registros, aproximadamente 77 % corresponde
contaminao por postos de combustveis, como possvel observar na Figura 02, a seguir.

Figura 2 Distribuio da contaminao por atividade

Fonte: CETESB, 2014.

A contribuio de 77% do nmero total de reas registradas atribuda aos postos de
combustveis resultado do desenvolvimento do programa de licenciamento que se iniciou
em 2001, com a publicao da Resoluo CONAMA n 273, de 2000. No atendimento
Resoluo e contando com o apoio e sugestes da Cmara Ambiental do Comrcio de
Derivados de Petrleo, a CETESB desenvolveu e vem conduzindo o programa, que dentre
outras aes, exige a realizao de investigao confirmatria, com o objetivo de verificar a
situao ambiental do empreendimento a ser licenciado, bem como a realizao da troca dos
tanques com mais de 15 anos de operao. Os principais grupos de contaminantes
encontrados nas reas contaminadas foram: solventes aromticos (basicamente representados
pelo benze no, tolueno, etilbenzeno e xilenos presentes na gasolina vazada nos postos de
combustvel), combustveis lquidos, hidrocarbonetos policclicos aromticos (PAHs), metais
e solventes halogenados (CETESB, 2014).

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4.2. Hidrocarbonetos derivados de petrleo

O petrleo um combustvel fssil, resultado da transformao e decomposio de
matria orgnica de animais pr-histricos e plantas aquticas, acumulado ao longo de
milhes de anos (de 15 a 500 milhes de anos) no fundo dos mares, pntanos e lagos
(FAVERA 2008).
Tal como a sociedade est atualmente organizada, a importncia do petrleo extensa e
fundamental. O petrleo no apenas umas das principais fontes de energia utilizadas pela
humanidade, pois alm de sua importncia como fornecedor de energia, os seus derivados so
a matria-prima para a manufatura de inmeros bens de consumo e, sendo assim, tm um
papel cada dia mais presente e relevante na vida das pessoas (MARIANO, 2005).
O petrleo pode ser definido como um lquido viscoso, em geral de colorao escura, que
ocorre naturalmente, cuja composio qumica varia de lugar para lugar. formado por uma
mistura de diferentes hidrocarbonetos com diferentes pontos de ebulio, sendo matria-prima
de grande importncia para a economia. (CARRARO, 1977 apud BURGER, 1997).
Os derivados do petrleo so obtidos a partir da destilao do petrleo em fraes com
diferentes pontos de ebulio, como pode ser observado na Tabela 01.

Tabela 1 Fraes tpicas de petrleo
Frao Temperatura de
Ebulio (C)
Composio
Aproximadamente
Aplicaes
Gs residual
Gs Liquefeito de
Petrleo - GLP
At 40 C
1
-C
2
C
3
-C
4
Gs combustvel engarrafado,
uso domstico e industrial
Gasolina 40-175 C
5
-C
10
Combustvel de automveis,
solvente
Querosene 175-235 C
11
-C
12
Iluminao, combustvel de
avies a jato
Gasleo Leve 235-305 C
13
-C
17
Diesel, fornos
Gasleo Pesado 305-400 C
18
-C
25
Combustvel, matria prima
para lubrificantes
Lubrificantes 400-510 C
26
-C
38
leos lubrificantes
Resduos Acima de 510 C
38+
Asfalto, piche,
impermeabilizantes
Fonte: Adaptado de Thomas, 2004.

As principais classes de hidrocarbonetos constituintes do petrleo so os alifticos e os
cclicos. Os hidrocarbonetos alifticos se dividem em: n-alcanos ou parafinas, alcanos
ramificados ou isoprenides e alcenos. Os hidrocarbonetos cclicos so divididos em ciclos
alcanos ou naftenos e aromticos. Em mdia, o petrleo apresenta cerca de 30 % de alcanos,
50 % de ciclo alcanos e 15 % de aromticos (UNEP, 1991).
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Conforme Borsato et al. (2009), os hidrocarbonetos constituintes do petrleo tem sua
composio varivel em: 83 a 87 % de carbono e 11 a 15 % em hidrognio, alm de pequenas
quantidades de nitrognio (0 a 0,5%), enxofre (0 a 6%), oxignio (0 a 3,5%), chamados de
compostos orgnicos polares, e mnimas pores de organometlicos.
Uma grande famlia de vrias centenas de compostos qumicos originados do refino do
petrleo cru chamada de hidrocarbonetos totais de petrleo (TPH) (PATNAIK, 1996).
Os HTP so uma mescla de muitos compostos diferentes e todas as pessoas esto
expostas a eles de diferentes fontes, incluindo postos de gasolina, leo derramado sobre os
pavimentos ou ainda, no ambiente de trabalho (ATSDR 1999).
De acordo com o tamanho de suas cadeias de carbono, decorrentes das fraes destiladas
do petrleo, os hidrocarbonetos totais de petrleo so divididos em trs grupos, so eles:
TPH-GRO (Gasoline Range Organics), TPH-DRO (Diesel Range Organics) e TPH-ORO
(Oil Range Organics). Os compostos com cadeias de carbono entre C5 a C10, como exemplo
a gasolina, compreendem o TPH-GRO, enquanto que o TPH-DRO, representado pelo leo
diesel possui cadeias de carbono na faixa C11 a C28. J os compostos com cadeias de C20 a
C36 como os leos lubrificantes, so os constituintes do TPH-ORO, os mais difceis de serem
degradados em funo do tamanho e complexidade das cadeias (PHASE SEPARATION
SCIENCIE INC., 2010).
Os hidrocarbonetos totais de petrleo (HTP) correspondem ao somatrio das fraes dos
hidrocarbonetos resolvidos de petrleo (HRP) e a mistura complexa no resolvida (MCNR).
Por MCNR entende-se o conjunto de compostos que no pode ser resolvido por cromatografia
gasosa, sendo considerada a frao mais biodegradada ou intemperizada dos hidrocarbonetos
presentes no meio ambiente, enquanto que HRP refere-se frao recente, no degradada. A
concentrao de HTP vincula o sedimento com as concentraes das fraes de
hidrocarbonetos saturados e aromticos do petrleo ou outros resduos das atividades
petroleiras vertidas sobre o solo, e um parmetro usado para avaliao expedita do estado de
contaminao ambiental (VOLKMAN et al. 1980).

4.3. Gasolina, leo Diesel e leos Lubrificantes

A gasolina basicamente composta por hidrocarbonetos que possuem uma cadeia
carbnica relativamente pequena, quando comparada aos hidrocarbonetos constituintes do
leo bruto e do leo diesel e um dos principais derivados do petrleo utilizados no cotidiano
dos habitantes das cidades (FERREIRA, 2010).
14

De acordo com Ramos (2006), a gasolina resultante de uma complexa mistura de
hidrocarbonetos hidrofbicos volteis e possui a maior parte dos seus constituintes
classificados como alifticos ou como aromticos. Os compostos alifticos que no contem
anel benznico incluem constituintes como butano, pentano, hexano e octano, enquanto os
compostos aromticos que contem pelo menos um anel benznico incluem benzeno, tolueno,
etilbenzeno e os ismeros do xileno, orto, meta e para (BTEX).
Alguns dos hidrocarbonetos constituintes da gasolina apresentam baixos pontos de
ebulio, podendo passar para a fase gasosa temperatura ambiente. Alm da perda de parte
do combustvel, a volatilizao gera tambm poluio atmosfrica. Os hidrocarbonetos
volteis mais importantes so conhecidos pela sigla BTEX (CORSEUIL & FERNANDES,
1999 apud NIVEN, 2005).
Os compostos BTEX penetram pela mucosa nasal, atingindo o sistema nervoso central
(SNC) e a medula ssea vermelha, so nocivos sade humana tambm pelo seu potencial
mutagnico e carcinognico. A curto prazo, a exposio a altas concentraes causa enjos,
alucinaes e perda de conscincia, e a longo prazo pode provocar leucemia e leses
irreparveis ao SNC, fgado e rins (CORSEUIL & FERNANDES, 1999).
A gasolina composta por hidrocarbonetos definidos como leves, que so os de cadeia
carbnica com tomos de C
5
a C
10
carbonos, cadeias menores do que as encontradas em leo
diesel, por exemplo.
O leo diesel, tambm um derivado do petrleo, e constitudo, segundo Gallego et. al.
(2001) por uma mistura complexa de alcanos normais, ramificado, cclico e compostos
aromticos que englobam de 2000 a 4000 hidrocarbonetos, em que os hidrocarbonetos
alifticos predominam (80 a 90 %), e aromticos de 20 a 10% que apresentam cadeia
carbnica com 11 a 28 tomos.
um produto inflamvel, medianamente txico, voltil, isento de material em suspenso
e com odor forte e caracterstico (PETROBRAS 03/2003 apud MAZZUCO, 2004).
Dos hidrocarbonetos totais de petrleo que compem o leo diesel, incluem-se os
hidrocarbonetos policiclicoaromticos (HPA), como naftaleno, metilnaftaleno,
dimetilnaftaleno, acenaftileno, acenafteno, fluoreno, fenantreno, antraceno, fluoranteno,
pireno, benzo(a)antraceno, criseno, benzo(b)fluoranteno, benzo(k)fluoranteno,
benzo(a)pireno, dibenzo(a,h)antraceno, enzo(g,h,i)perileno, indeno(1,2,3-cd)pireno, e os
monoaromticos (BTEX), como benzeno, tolueno, etilbenzeno, o-xileno, m-xileno, p-xileno
(MAZZUCO, 2004).
15

Os sinais de toxicidade aguda aps exposio oral ao diesel so nusea, vmito e diarreia.
A exposio cutnea aguda pode causar irritao local e nos olhos, a sensao de ardncia,
queimao e lacrimejamento. A inalao de grandes quantidades de vapores de diesel ou a
ingesto de fluidos a base de diesel podem causar sintomas como tontura, dor de cabea e
vmito. O principal risco associado exposio aguda ao diesel a pneumonia qumica
resultante da aspirao do vmito (secundrio a ingesto) ou inalao de aerossol (ou
aspirao de lquido). Outros efeitos associados exposio aguda ao diesel so arritmia
cardaca e falncia renal aguda (FIT, 2012).
O leo combustvel derivado de petrleo, tambm chamado leo combustvel pesado ou
leo combustvel residual, a parte remanescente da destilao das fraes do petrleo,
designadas de modo geral como fraes pesadas, obtidas em vrios processos de refino. A
composio bastante complexa dos leos combustveis depende no s do petrleo que os
originou, como tambm do tipo de processo e misturas que sofreram nas refinarias, de modo
que pode-se atender as vrias exigncias do mercado consumidor numa ampla faixa de
viscosidade (PETROBRAS, 2014).
leos lubrificantes, sintticos ou no, so derivados de petrleo e empregados em fins
automotivos ou industriais, que aps o perodo de uso recomendado pelos fabricantes dos
equipamentos, deterioram-se parcialmente, formando compostos oxigenados (cidos
orgnicos e cetonas), compostos aromticos polinucleares de viscosidade elevada (e
potencialmente carcinognicos), resinas e lacas. Esto presentes no leo usado os aditivos que
foram acrescidos ao bsico no processo de formulao de lubrificantes e que ainda no foram
consumidos, metais de desgaste dos motores e das mquinas lubrificadas e contaminantes
diversos, tais como gua, combustvel, poeira e outras impurezas, alm dos produtos de
degradao do leo bsico. (RAMOS, 2001).
Os leos lubrificantes esto entre os poucos derivados de petrleo que no so totalmente
consumidos durante o uso (HAMAD, 2005).
Quando inalados os vapores so depressores do sistema nervoso, podendo causar irritao
das vias respiratrias, nuseas, dor de cabea, tontura, vertigem, confuso, inconscincia, at
o coma e a morte em exposies severas. Pode causar tambm, dermatites. A ingesto causa
vmitos, diarreia e dificuldade respiratria. No vmito o principal risco a pneumonite
qumica e edema pulmonar (FISPQ, 2011).

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4.4. Legislao Vigente

Com toda a problemtica ambiental de possveis contaminaes de solo e guas,
principalmente, os rgos ambientais esto cada vez mais rgidos nas adequaes dos
poluidores legislao ambiental existente.
No Brasil, a principal base legal que regulamenta a atividade de posto de abastecimento de
combustvel na Resoluo CONAMA n. 237/97, e na Resoluo CONAMA n. 273/2000. A
primeira Resoluo cita a atividade de posto de abastecimento de combustvel como sujeita ao
licenciamento ambiental e a segunda padroniza os procedimentos e o licenciamento dessas
entidades, bem como de todas as demais atividades que possuem armazenagem de
combustveis. Alm dessas duas Resolues existem tambm outras legislaes, como as
normas tcnicas expedidas pela Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT), e as
legislaes estaduais especficas de cada Estado (LORENZETT et al., 2011).
Existe ainda, a Resoluo CONAMA n 420, 2009 que dispe sobre critrios e valores
orientadores de qualidade do solo quanto presena de substncias qumicas e estabelece
diretrizes para o gerenciamento ambiental de reas contaminadas por essas substncias em
decorrncia de atividades antrpicas.
O Estado do Rio Grande do Sul prev na partir da Portaria 016/2010 da FEPAM que os
resduos Classe I, que so aqueles que possuem caractersticas de inflamabilidade,
corrosividade, reatividade, toxicidade e patogenicidade no podero mais ser destinados a
aterros de resduo classe I ou a centrais de recebimento e destinao de resduos Classe I. A
destinao final do mesmo dever ser realizada por reprocessamento, recuperao,
reciclagem, tratamento biolgico, co-processamento ou incinerao.

4.5. Mtodos de biorremediao de reas contaminadas

Existem diversas alternativas de remediao de solos contaminados e estas devem ser
aplicadas conforme as condies intrnsecas e singulares a cada stio contaminado. As
tcnicas de remediao devem atender tanto as caractersticas fsico-qumicas dos
contaminantes, como tambm aplicabilidade das mesmas nas condies hidrogeolgicas
especficas do stio impactado. Todos esses fatores devero ser observados para que atendam
a legislao ambiental e que tambm sejam compatveis com o risco que a contaminao
representa (NOBRE, 2003).
17

As alternativas que utilizam solues mais naturais e com menores impactos no subsolo
vm ganhando maior destaque nos ltimos anos. (NOBRE E NOBRE, 2005).
Apesar de fundamentada em um nico processo bsico (biodegradao), as tcnicas de
bioremediao envolvem variaes de tratamentos in situ (no local) e ex situ (fora do
local) que podem envolver inmeros procedimentos. Enquanto algumas estratgias so
especficas para a bioremediao em solos e gua subterrnea como o caso da bioventilao,
a maioria se aplica aos tratamentos de superfcie (MENEGHETTI, 2007).
Alguns processos de tratamento ex situ e in situ so apresentados na tabela a seguir.

Tabela 2 Tcninas de biorremediao
Tcnica Caracterstica
Land farming Sistema de tratamento de fase slida para solos
contaminados: pode ser feito in situ ou ex situ.
Compostagem Aerbico, o processo de tratamento termofilico em que
material contaminado seja misturado com um agente
espessante, pode ser feito usando pilhas estticas ou pilhas
aeradas.
Bioreatores Biodegradao num contentor ou num reactor, pode ser
usado para tratar lquidos ou pastas
Biofiltros O uso de colunas de stripping microbianas para tratar as
emisses atmosfricas.
Bioventilao Mtodo de tratamento de solos contaminados por desenhar o
oxignio atravs do solo para estimular a atividade
microbiana.
Bioaumentao A adio de culturas bacterianas para um meio contaminado;
freqentemente usado tanto in situ e ex situ de sistemas.
Bioestimulao Estimulao das populaes microbianas indgenas em solos
ou guas subterrneas, fornecendo nutrientes necessrios.
Biorremediao
intrinseca
Biorremediao sem assistncia do contaminante, apenas
acompanhamento regular feito.
Bombeamento e
tratamento
guas subterrneas para a superfcie, o tratamento, e
reinjeo.
Fonte: Adaptado de Boopathy (2000).

As tecnologias de bioremediao in situ (bioestimulao, bioventilao,
bioaumentao) possuem baixo custo relativo quando comparadas com as tecnologias ex
situ (landfarming e compostagem como biopilhas e bioreatores). Entretanto, h uma grande
dificuldade de aplic-las na recuperao de solos impactados por petrleo e/ou derivados
quando estes apresentam caractersticas argilosas, bastante comuns no Brasil. (RAIMUNDO
E RIZZO, 2002). Portanto, muitas vezes opta-se por tecnologias ex situ para a remediao de
materiais com essas caractersticas.
18

4.6. Biorremediao

A biorremediao pode ser definida como o processo de tratamento que utiliza a
ocorrncia natural de microrganismos para degradar substncias toxicamente perigosas,
transformando-as em substncias menos ou no txicas, ou ainda um processo no qual
organismos vivos, plantas ou micro-organismos so utilizados tecnologicamente para
remediar ou reduzir poluentes ambientais (MARTINS et al., 2003 apud GAYLARDE et al.,
2005).
Durante muitos anos acreditou-se que qualquer composto orgnico deveria ser
biodegradvel. Somente aps a descoberta de compostos organoclorados, que so resistentes
degradao, esse conceito foi mudado, adotando-se ento o termo de substncias
recalcitrantes para aquelas substncias que so mais dificilmente degradadas por meio dos
micro-organismos (LIMA, 1994 apud DEOTTI, 2005).
Algumas tcnicas de biorremediao podem ser utilizadas em todas as tecnologias,
visando otimizao do processo de degradao dos poluentes pelos microrganismos. Dentre
estas se destacam: a adio de nutrientes (bioestimulao) que aumenta a atividade
microbiana nativa; adio de linhagens microbianas exgenas degradadoras (bioaumentao);
a adio de enzimas comerciais, que favorecem a oxidao de molculas de difcil degradao
em molculas de fcil assimilao pelos microrganismos ou ainda adio de surfactantes, que
auxilia a metabolizao dos compostos poluentes, facilitando o transporte destes substratos
orgnicos para o interior das clulas microbianas ou diminuindo as interaes superficiais
contaminante/solo (RAIMUNDO E RIZZO, 2003).
Uma das maiores vantagens da biorremediao para o tratamento de compostos oleosos
a sua relao custo-eficcia, comparada algumas tcnicas fsicas, que so caras e
necessitaro tambm de um acompanhamento contnuo para atingir resultados esperados
(Baptista et al., 2005). Alm do custo, a biorremediao tem vantagens distintas sobre
mtodos de correo fsico-qumicos, pois pode atingir a completa degradao dos poluentes
orgnicos, sem grande interferncia na flora e fauna do local, utilizando quantidades muito
menores de substncias qumicas (ANG et al., 2005 apud MROZIKA E SEGET, 2010).

19

A tabela a seguir, apresenta algumas vantagens e desvantagens da biorremediao.

Tabela 3 Vantagens e desvantagens da biorremediao
Vantagens Limitaes
Biodegrada substncias perigosas ao invs de
apenas transferir o contaminante de um meio
para o outro
No uma soluo imediata
Baixo custo (at 85%) Necessita de maior entendimento de seu
funcionamento
Possvel tratamento in situ Mtodo pouco evoludo no Brasil
Produtos utilizados no apresentam risco ao
meio ambiente e no so txicos
Acompanhamento durante o processo
Tratamento de resduos considerados de
difcil degradao
Muitas molculas no so biodegradveis
Uso em reas de proteo ambiental,
indstria de alimentos, entre outras
Substncias txicas ao micro-organismo
inviabiliza o tratamento
Fonte: Adaptado de Calaa, 2010

A biorremediao emergiu como uma boa tcnica para o tratamento ambiental de
compostos orgnicos, tais como hidrocarbonetos de petrleo, devido sua flexibilidade e
adaptabilidade em locais diferentes (BAPTISTA et al., 2005).
Vrios fatores, assim como concentraes dos mesmos, podem afetar a biorremediao de
solos. Alguns deles podem ser observados a seguir.

Tabela 4 Fatores que influenciam a biodegradao de um contaminante no solo
Fatores Qumicos e
Fsicos do Contaminante
Fatores Qumicos e
Fsicos do Solos
Fatores Biolgicos
Composio qumica Temperatura Distribuio dos micro-
organismos no solo
Estado fsico Potencial redox Tipos de micro-organismos
degradadores
Concentrao Umidade Tcnica de inoculao
Toxicidade pH Tcnica de adaptao
Solubilidade em gua Teor de matria orgnica Produo de metablitos
txicos
Nutrientes
Fonte: Adaptado de (Von Fahnestock et. al., 1998).


20

Para que ocorra o melhor processo de biorremediao dos solos existem algumas
condies timas de operacionalidade.

Tabela 5 Condies timas para degradao de hidrocarbonetos em solos
Fator Ambiental Nvel timo
Nutrientes C:N:P = 100:10:1
Temperatura 25-35C (mesfila)
Umidade 50-85% capacidade de campo do solo
pH 5,5-8,5
Fonte: Adaptado de Alvarez e Ilman, 2006.

Dentre as vrias tcnicas de biorremediao que podem ser realizadas as mais utilizadas
so a atenuao natural, a bioaumentao e a bioestimulao (MARTINS, 2003 apud LIN et
al., 2010).
Os microrganismos desenvolvem naturalmente a atenuao natural, ou podem ser
estimulados para uma biodegradao controlada do contaminante. Faz-se necessrio a
utilizao de microrganismos especficos, capazes de reduzir a toxicidade do poluente no
meio, ou ainda estimular a microbiota j existente no local para que ocorra a degradao em
situaes onde se detecta a presena de poluentes persistentes. (MARIANO, 2006 apud
MROZIKA E SEGET, 2010).

4.7. Fatores que afetam a microbiota do solo

O solo e as guas subterrneas possuem elevado nmero de micro-organismos que, vo se
adaptando, gradualmente, s fontes de energia e carbono disponveis, sejam esses acares
facilmente metabolizveis, ou compostos orgnicos complexos como os BTEX (formado
pelos hidrocarbonetos: benzeno, tolueno, etil-benzeno e xilenos) (MARIANO, 2006).
Devido a abundncia, a diversidade de espcies, e a versatilidade catablica e anablica,
bem como a capacidade de adaptao a condies ambientais adversas, os micro-organismos
so considerados biodegradadores eficientes. (MORAES E TORNISIELO, 2009).
Sabe-se que quanto maior for a versatilidade enzimtica e o nmero de clulas
metabolicamente ativas, maior ser a eficincia da degradao do contaminante (FERREIRA,
2010).
A diversidade da microbiota do solo ainda pouco conhecida, porm, alguns gneros
bacterianos apresentam destaque no que diz respeito biorremediao de compostos
xenobiticos, principalmente queles derivados de combustveis fsseis (FERREIRA, 2010).
21

Conforme ZoBeli (1946) citado por Zhongyun (1998) existem mais de 100 espcies de
micro-organismos com propriedades de oxidao de hidrocarbonetos distribudas no solo. Os
micro-organismos no solo incluem bactrias, fungos, algas e protozorios.
Cunha e Leite (2000) observaram a biodegradao de gasolina em diversos tratamentos de
solo contendo inculos com diferentes consrcios de culturas bacterianas. O sistema de
tratamento constitudo somente da microflora autctone apresentou valores mdios de
degradao de 50% dos hidrocarbonetos.
Capelli et al. (2001) estudaram o processo de biorremediao de hidrocarbonetos, mas de
leo cru utilizando microrganismos indgenas. O perodo de teste com micro-organismos
inoculados e indgenas teve durao de 45 dias. Ao final do procedimento, os hidrocarbonetos
totais foram reduzidos em 70%.
Richard e Vogel (1999) tambm analisaram um consrcio de bactrias capazes de
degradar leo diesel. Depois de 50 dias de incubao o consrcio conseguiu biodegradar 90%
do diesel inicial.
O nmero de bactrias no solo muito elevado, e pode variar de alguns bilhes a 3
trilhes em cada quilograma de solo. Podem ser encontradas no solo, sob a forma de mantas,
moitas e filamentos, denominados colnias, ao redor ou superpostas s partculas de solo,
onde houver alimentao (BRADY, 1994).
Os fungos, por sua vez, so encontrados no solo em comunidades variando de 10
4
e 10
6

organismos por grama de solo. Bactrias e actinomicetos se desenvolvem melhor em valores
de pH na regio alcalina e neutra, ao contrrio deles, os fungos so predominantes em solos
cidos em que sofrem menor competio. Os fungos podem ser encontrados em solos com pH
de 3,0 a 9,0, porm o valor timo varia para cada espcie (CARDOSO et al., 1992).
A umidade ideal para o desenvolvimento desses organismos est localizada entre 60-70%
da capacidade de reteno de gua do solo. Em geral, os fungos so aerbios, mas podem se
desenvolver em regies mais profundas do solo, pois apresentam resistncia a altas presses
de CO
2
. Quanto temperatura, predominam espcies mesfilas, mas podem ser encontrados a
uma ampla faixa (CARDOSO et al. 1992).
Os fungos operam com maior eficincia do que as bactrias. Cerca de 50% das
substncias decompostas pelos fungos podem transformar-se em tecidos do organismo,
comparando com cerca de 20% para a bactria. Eles conseguem transformar uma maior
frao de carbono e nitrognio dos componentes submetidos a processamento e eliminam
como subprodutos quantidades menores de dixido de carbono e de amnio (BRADY, 1994).

22

4.8. Atenuao Natural

Os micro-organismos desenvolvem naturalmente a atenuao natural.
A reposta de sistemas hidrogeolgicos contaminao envolvendo processos qumicos,
fsicos e biolgicos que, sob condies favorveis, agem sem interveno humana, reduzindo
toxicidade, massa, mobilidade, volume ou concentrao de contaminantes no solo com o
tempo se chama de atenuao natural. (BOSCOV E GIMENEZ, 2008).
O processo de atenuao natural de um poluente orgnico do solo no passa por
adequao de qualquer condio ambiental nem possui acrscimo de e pode ocorrer de
maneira contnua devido ao processo de adaptao natural da microbiota nativa do solo
impactado a ser remediado. Os microrganismos presentes utilizam o composto orgnico
poluente como fonte de carbono, ocasionando assim uma reduo da sua concentrao ao
longo do tempo. Alm da atenuao natural, o solo est sujeito ao processo de intemperizao
natural, onde, no s os processos biolgicos esto envolvidos, como tambm, processos
qumicos e fsicos so responsveis pela reduo da concentrao de poluente no solo
(lixiviao, volatilizao, etc.). No entanto, o tempo envolvido no processo de atenuao
natural costuma ser bastante longo (meses ou anos) o que torna necessria, muitas das vezes a
remoo do solo impactado e encaminhamento do mesmo para tratamento ex-situ
(BAPTISTA E RIZZO, 2004).
Bento et al. (2003), estudaram a degradao de hidrocarboneto de petrleo em solos
contaminados com leo diesel atravs da atenuao natural, bioaumentao e bioestimulao
e observaram que passadas 12 semanas de incubao, a bioaumentao havia apresentado os
melhores resultados, porm a atenuao natural foi mais efetiva que a bioestimulao.

4.9. Bioaumentao e Bioestimulao

A adio de microrganismos no sistema de biorremediao com o intuito de estimular a
biodegradao dos contaminantes presentes chamada de bioaumentao. Essa tcnica pode
ser desenvolvida utilizando culturas exgenas ou isoladas da prpria microflora presente no
solo a ser tratado (SEABRA, 2005).
Para tratamentos de contaminantes muito recalcitrantes, em contaminaes recentes e
onde se pretende aplicar a degradao acelerada, fica sendo a bioaumentao, a tcnica mais
apropriada (MOREIRA E SIQUEIRA, 2002).
23

Os micro-organismos selecionados devem apresentar algumas caractersticas para que se
tenha sucesso na aplicao dessa tcnica, tais como: capacidade para degradar a maior parte
dos contaminantes, estabilidade gentica, alto nvel de atividade enzimtica, alm da
capacidade de competir com a populao intrnseca do solo (LEAHY & COLWELL, 1990).
Sabe-se que os fungos so micro-organismos produtores de um sistema enzimtico
complexo, capazes de degradar substncias qumicas de estrutura complexa, produzindo
molculas mais simples e mais facilmente assimilveis. Em funo desses mecanismos de
degradao, a utilizao de fungos e enzimas, obtidas a partir desses micro-organismos, uma
alternativa biolgica vivel para a remediao de solos contaminados por petrleo (BRITO,
2004 apud LEMOS, 2001).
A bioestimulao consiste na tcnica em que nutrientes orgnicos e inorgnicos so
adicionados ao solo visando a estimulao da atividade dos microrganismos degradadores
(MIELNICZUK, 1991).
Segundo Gaylarde et al. (2005), a tcnica definida como sendo o favorecimento de
populaes de micro-organismos autctones, adicionando-se aos sistemas contaminados
nutrientes na forma de fertilizantes orgnicos e inorgnicos e compostos inorgnicos como
oxignio (O
2
), causando assim o aumento da populao de micro-organismos autctones
(OLIVEIRA E LEMOS, 2005).
Os microrganismos se nutrem dos diversos compostos orgnicos desenvolvendo seu
metabolismo, como tambm fazendo sua manuteno e reproduo, culminando ento na
remoo do contaminante (ALVAREZ E ILLMAN, 2006 apud MARIANO et al., 2008).
Considerando a utilizao da bioestimulao, os hidrocarbonetos, podem ou no, serem
alvo dos micro-organismos como fonte de alimento, j que essa classe de compostos
orgnicos , supostamente, degradada mais rapidamente do que em um processo de
degradao natural, como resposta ao elevado nmero de micro-organismos desenvolvidos,
causado pelo aumento dos nveis de nutrientes (SARKAR, et. al. 2005).

24

5. CRONOGRAMA
Maro Abril Maio Junho Julho Agosto Setembro Outubro Novembro
Estudo e
Definio do
Projeto
X X
Leitura de
Artigos
X X X
Definio dos
Objetivos e
Justificativa
X
Confeco da
Reviso
Terica
X X X
Montagem do
Sistema
X X
Isolamento e
Seleo dos
Micro-
organismos
X X
Incio do
Processo de
Tratamento
X X
Anlise do solo X X
Inoculao dos
Micro-
organismos
X X
Adio de
Nutrientes
X
Monitoramento
pH
X X
Monitoramento
Temperatura
X X
Monitoramento
da Umidade
X X
Promoo da
Aerao
X X
Contagem de
micro-
organismos
X X
Contagem de
bolores e
leveduras
X X
Anlise de
TPH, BTEX e
PAH
X X
Descrio
Discusso dos
Resultados
X X
Defesa X

25

6. METODOLOGIA

6.1. Montagem dos Sistemas

Para a realizao deste trabalho ser montado um reator de mistura completa, com
aquecimento eltrico, capaz de operar a temperatura constante. A mistura ser realizada por
meio de revolvimento. Para isso o reator ser montado em um suporte, o qual estar
conectado a um eixo. Este eixo ser constado, por sua vez, a um sistema de coroa-pinho,
acoplado a um redutor de velocidade, ligado a um motor. Dessa forma, as rotaes do motor
sero reduzidas pelo redutor de velocidade, e assim, controlar a rotao do sistema. Este
reator possui defletores instalados em seu interior, que tm a finalidade de revolver o solo.
Os recipientes sero instalados com ngulo de aproximadamente 45 com a horizontal
para que o revolvimento do solo a ser tratado seja eficiente, sem a acumulao do material em
cantos, evitando assim, zonas mortas.
Em um dos recipientes ser adicionado somente solo contaminado que sofrer apenas com
a atenuao natural, e em outro, ser realizada a bioaumentao associada bioestimulao.
Os cilindros sero envolvidos com uma resistncia de 30W para que a temperatura seja
mantida constante e uniforme a 30C nos reatores, e ser adicionado ainda, uma manta
asfltica em seu entorno.
O processo de biorremediao ser testado no sistema por um perodo de 60 dias.

26

Na Figura 03 observa-se a montagem do sistema.
Figura 3 Montagem do sistema de biorremediao em fase de testes

Fonte: Arquivo do autor, 2014.

6.2. Caractersticas do solo a ser tratado

O solo que receber o processo de biorremediao proveniente de postos de
combustveis. O mesmo est altamente contaminado com hidrocarbonetos derivados de
petrleo. Dependendo da estrutura do solo (argiloso ou mais arenoso) ser adicionado
material estruturante na forma de serragem, para aumentar a sua porosidade.

6.3. Seleo e inoculao dos micro-organismos

Bisognin (2012), em sua dissertao de mestrado, isolou centenas de micro-organismos
contidos em um sistema de remediao de solos contaminados. Os consrcios foram
formados a partir das cepas previamente isoladas. A seleo dos micro-organismos foi
27

realizada com base em sua capacidade de degradao do leo diesel, estudada por meio do
uso do indicador redox 2,6-Diclorofenol-indofenol.
Kronbauer (2013) observou, em um processo de biorremediao, que os fungos das
espcies Aspergillus fumigatus e Cephalosporium sp. apresentaram bons resultados quanto
degradao de compostos derivados de petrleo. Assim, propem-se utilizar esses micro-
organismos para realizao de bioaumento do solo contaminado.
Os micro-organismos sero cultivados em 10 mL do meio BH contendo: (g.L
-1
:
MgSO
4
7H
2
O: 0,2; CaCl
2
.2H
2
O: 0.02; KH
2
PO
4
: 1.0; NH
4
PO
4
: 1.0; NH
4
NO
3
: 1.0; FeCl
3
:0,05),
adicionado ainda, 1,5% de leo diesel. Na soluo preparada ser adicionado o micro-
organismo e inserida em tubos de ensaio, e ser mantida sob agitao em uma Incubadora
Shaker MA 420 marca Marconi, a uma rotao de 100 rpm, e uma temperatura de 27 C2
at o desenvolvimento das colnias.
A seguir, cada fungo ser estriado em placa de Petri que conter meio mineral BH, que
ser acrescido de 1,5% de gar-gar e 1,5% de leo diesel. Aps o estriamento as placas sero
mantidas invertidas em estufa, a temperatura de 27C2.
Os micro-organismos sero ento novamente inoculados em meio lquido BH, a partir do
qual sero extradas alquotas para posterior centrifugao.
O processo de centrifugao ser efetuado em uma centrfuga High Speed Brushless
Centrifuge MPW 350R, a uma rotao de 10000 rpm, durante 10 minutos a 4 C. Os pellets
sero lavados duas vezes e centrifugados nas mesmas condies.
Os pellets sero ressuspendidos em meio BH para posterior padronizao atravs da
escala de McFarland. Sero utilizadas populaes de 1,5 x 10
8
UFC/mL, que representa 0,5 na
escala. Ser utilizado 1 mL de inculo microbiano para cada 100 g de solo seco.

6.4. Controle do pH, temperatura e umidade

O controle do pH, temperatura e umidade do sistema ser realizado. O pH de cada
sistema ser observado uma vez por semana durante os 60 dias de teste, diluindo-se o solo em
gua deionizada a uma relao de 1:5, e a seguir, verificado com um pHmetro PHS-3B marca
PHTEK.
A temperatura ser medida com um termmetro digital tipo espeto da marca INCOTERM
trs vezes por semana, e a umidade ser verificada a cada 15 dias.
28

A umidade ser verificada, retirando certa quantidade de solo do sistema. A seguir, a
mesma ser deixada a 105C durante 24 horas para secagem completa. A amostra ser pesada
antes e aps sua estada no forno, com a diferena de massa obtida, se observar a umidade.

6.5. Contagem de micro-organismos aerbios mesfilos viveis e bolores e leveduras

Foi realizada contagem dos micro-organismos aerbios mesfilos viveis e contagem de
bolores e leveduras por um laboratrio tercerizado, no tempo zero, em 30 e 60 dias.

6.6. Anlise qumica de hidrocarbonetos de petrleo (BTEX, PAH, TPH Fingerprint e
n-alcanos

A anlise de BTEX, PAH, TPH fingerprint e n-alcanos foi realizada por laboratrio
terceirizado, no tempo zero, 10, 20, 40 e 60 dias.



29

7. REFERNCIAS

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