MATERIAL E MTODOS

REA DE ESTUDO

Os reservatrios Piraquara II e Ira esto inseridos em reas de
proteo ambiental (APA) na bacia hidrogrfica do Iguau, localizados na
Regio Metropolitana de Curitiba. Possuem diferentes estgios de
degradao, o reservatrio Ira considerado Criticamente Degradado a
Poludo e o complexo do reservatrio Piraquara II considerado
Moderadamente Degradado, segundo a classificao do ndice de Qualidade
da gua dos reservatrios (IQAr 1999 - 2008), realizado pelo Instituto
Ambiental do Paran (IAP, 2009). No entanto, segundo dados (no publicados
2011 - 2012) cedidos pela Companhia de Saneamento do Paran (SANEPAR),
o reservatrio Piraquara II apresenta gua de boa tima qualidade, enquanto
as guas do Ira so classificadas como regular a ruim.
O reservatrio do Piraquara II foi formado pelo barramento do rio
Piraquara (RODRIGUES et al., 2005), est localizado no municpio de
Piraquara - PR (SILVA, 2009) caracterizado por apresentar rea de 5,64 km
2
,
profundidade mdia de 3,28 m, tempo de residncia 75 dias, rea de drenagem
de 58 km
2
e cerca de 21 milhes de metros cbicos de gua (BITTENCOURT e
GOBBI, 2006). Segundo EIA/RIMA (2000), o rio Piraquara encontra-se em
processo moderado de eutrofizao, provavelmente pela contaminao de
ambientes adjacentes. Est localizado em uma rea predominantemente rural,
podendo ocorrer interferncia no corpo hdrico por poluio difusa
(BITTENCOURT e GOBBI, 2006).
O reservatrio do Ira, formado pelo barramento do rio Ira, est
localizado entre os municpios de Pinhais-PR, Quatro Barras e Piraquara
(FIGURA 1) e foi inundado em 2000. Apresenta uma rea de 113km, rea
inundada de 15 km, com tempo de residncia de 6 a 8 meses e profundidade
mdia de 4 metros. Recebe contribuio de quatro rios, Curralinho, Cerrado,
Timb e Canguiri, alm do prprio rio Ira e uma alta carga de efluentes
domsticos, industriais e agropecurios, sendo considerado o reservatrio
como eutrfico (COBRAPE, 2000, CETTO et al., 2004, RODRIGUES, et. al.,
2005).
De acordo com o relatrio da Qualidade das guas de rios realizado
pelo IAP (2005 2009), os rios que desguam no reservatrio do Ira so
classificados como: Poluda (Classe III-IV) - Rio Curralinho, com histrico de
declnio progressivo da qualidade dgua. Poluda (Classe IV) - Rio Timb e Rio
Canguiri.
O rio Timb classificado como a principal fonte de lanamentos de
esgotos domsticos e outros materiais orgnicos, contribuindo para a
degradao do reservatrio. Segundo Andreoli e Carneiro (2005), o rio Timb
contribui em grande parte com a concentrao de nitrogenados e fosfatados
alm de aumentar o nvel Demanda Bioqumica de Oxignio (DBO) e Demanda
Qumica de Oxignio (DQO). Totalizando em de 80% a 90% do total
transportado para o reservatrio proveniente dos rios. O rio Curralinho,
Canguiri e Cercado, apresentam concentraes de nutrientes que so
transportados ao reservatrio declinando respectivamente.

AMOSTRAGEM

As diatomceas epifticas foram coletas de caules de macrfitas
aquticas emergentes (Polygnum hydropiperoides Michaux, Polygonaceae e
Ludwigia peruviana (L.) H. Hara, Onagraceae) e anfbia (Alternanthera
philoxeroides (Mart.) Griseb., Amaranthaceae), semestralmente durante o ano
de 2013 (Outono e Primavera) e de acordo com a incidncia e disponibilidade
destes substratos nos dois reservatrios (TABELA 1). Com o objetivo de
abranger a regio da barragem e locais mais montante, que sofrem influncia
dos rios que desguam no reservatrio, foram selecionadas seis estaes de
coleta (Unidade Amostral U.A) em cada local. A amostragem foi realizada em
trplica (pseudorplicas) totalizando 18 amostras em cada reservatrio
(FIGURA 1).





TABELA 1. COORDENADAS DAS UNIDADES AMOSTRAIS (U.A), DATAS DE COLETA E
SUBSTRATO COLETADO NOS RESERVATRIOS PIRAQUARA II E IRA.
RESERVATRIO PIRAQUARA II
U.A Perodo Mcrofita
P1 10/06/13 e 13/11/13 Polygnum hydropiperoides
P2 10/06/13 e 13/11/13 Ludwigea peruviana
P3 10/06/13 e 13/11/13 Althernanthera philoxeroides e Polygnum hydropiperoides
P4 10/06/13 e 13/11/13 Althernanthera philoxeroides e Polygnum hydropiperoides
P5 10/06/13 e 13/11/13 Polygnum hydropiperoides
P6 10/06/13 e 13/11/13 Polygnum hydropiperoides
RESERVATRIO IRA
Curralinho 26/04/13 e 11/11/13 Althernanthera philoxeroides
Timb 26/04/13 e 11/11/13 Althernanthera philoxeroides
Canguiri 26/04/13 e 11/11/13 Althernanthera philoxeroides
RV 1 26/04/13 e 11/11/13 Althernanthera philoxeroides
RV 2 26/04/13 e 11/11/13 Althernanthera philoxeroides
RV 3 26/04/13 e 11/11/13 Althernanthera philoxeroides
Ponto prximo barragem no corpo do reservatrio (RV)

As macrfitas amostradas estavam em estgio adulto com folhas no
senescentes, em torno de 20 centmetros de profundidade abaixo da lmina da
gua. Foram cortados de nove a 12 fragmentos do caule, entre os entre ns,
medindo aproximadamente sete centmetros de comprimento e fixadas em
transeau (BICUDO e MENEZES, 2006).
Transparncia da coluna da gua (m, disco de Sechhi,), o pH (medidor
de pH CONSORT C535) e a temperatura da gua (C, termmetro Incoterm),
foram estimadas em campo. Nitrognio total (mg/L), Fsforo total (mg/L), pH,
Turbidez (NTU), DQO (mg/L), Oxignio dissolvido (mg/L), Slidos dissolvidos
(mg/L), dos reservatrios, foram fornecidos pela SANEPAR com seus
respectivos histricos (2010 2013).
Alquotas de gua (1000 mL), para a estimativa da clorofila-a, foram
obtidas em rplicas prximas s estaes de coleta. Acondicionadas em
frascos escuros e opacos mantidas em gelo at serem filtradas em filtros de
fibra de vidro (GFC) com auxlio de bomba a vcuo. As amostras filtradas foram
mantidas congeladas at se proceder a extrao da clorofila a. Para a extrao
da clorofila a, os filtros foram macerados e deixados sob refrigerao por 24
horas com acetona 90% em tubos individuais. Posteriormente, as amostras
foram centrifugadas a 4000 rpm durante 15 minutos, o sobrenadante foi
reservado e a absorbncia foi mensurada em espectrofotmetro Hitachi 2001.
As concentraes de clorofilas a, b, e c e de feofitina foram calculadas segundo
Jeffrey e Humphrey (1975).


FIGURA 1 MUNICPIO DE PIRAQUARA - PR, RESERVATRIO IRA E PIRAQUARA II,
PONTOS DE AMOSTRAGEM DO EPIFTON. FONTE: Modificado de GOOGLE EARTH 2013.


Preparao das amostras para estudo

Em laboratrio, os caules foram fixados em 200 mL de soluo
transeau (BICUDO e MENEZES, 2006). As amostras com diatomceas
epifticas foram obtidas atravs da raspagem dos caules das macrfitas
aquticas, utilizando lminas de ao envolvidas por papel alumnio e jatos da
soluo transeau da prpria amostra. Subamostras de 10 mL foram tratadas
pela tcnica de Simonsen (1974), modificada por Moreira-Filho e Valente-
Moreira (1981), utilizando-se KMnO
4
(permanganato de potssio) e HCl (cido
clordrico) no processo de oxidao da matria orgnica. Lminas permanentes
foram montadas com volume conhecido (0,5 mL) das subamostras oxidadas,
utilizando Naphrax como meio de incluso. Para a identificao das espcies
e contagem das valvas, utilizou microscpio de luz Olympus CH-2.

Anlise qualitativa e quantitativa das assembleias de diatomceas

A identificao das espcies de diatomceas baseou em literatura
clssica e recente como, Patrick e Reimer (1966), Krammer e Lange-Bertalot
(1986, 1988, 1991a, 1991b), Meltzeltin e Lange-Bertalot (1998, 2005 e 2007),
Lange-Bertalot, Bak e Witkowski (2011) e Silver e Hamilton (2011). Registros
fotogrficos foram providenciados para todos os txons identificados, utilizando
fotomicroscpio Olympus BX 40 com cmera de captura DP071 acoplada.
Amostras e lminas permanentes foram depositadas no Herbrio da
Universidade Federal do Paran (UPCB).
A contagem das valvas nas lminas permanentes foi realizada utilizando
ndice de Rarefao de espcies, no qual o critrio de parada foi estipulado em
uma assntota com 10 campos em que nenhuma espcie nova fosse registrada
e totalizando o mnimo de 300 valvas, baseado em Battarbee (1986). As valvas
quebradas com mais 50% de sua superfcie e passvel de identificao foram
quantificadas. Para estimar uma eficincia no inferior a 80% de confiabilidade
de contagem foi utilizado como base mtodo de Pappas e Stoermer (1996). A
densidade dos txons por cm
2
foi calculada segundo Battarbee (1986) como
segue:

D = Nv * Al/Nc*Ac * Va/Vs * Vf/-Vo * 1/Ar

Onde:
D = Densidade (valvas/cm)
Nv = nmero de valvas contadas
Al = rea da lamnula (cm)
Nc = nmero de campos contados
Ac = rea do campo (cm)
Va = volume total da amostra (ml)
Vs = volume da subamostra utilizada na oxidao (ml)
Vf = volume da subamostra aps a oxidao (ml)
Vo = volume de amostra oxidada utilizado para cobrir a lamnula (ml)
Ar = rea do substrato raspado (cm)


Anlise dos dados

Os dados das densidades valvares das diatomceas foram submetidos
a uma anlise de estatstica descritiva com tabelas e grficos, mostrando o
perfil das variveis ambientais e da comunidade estudada.
O ndice do Estado Trfico (IET) (CARLSON, 1975) modificado por
Lamparelli (2004) foi utilizado para corroborar com a classificao do grau de
trofia dos corpos dgua em reservatrios apresentado pelo IQA (IAP),
utilizando como parmetros o fsforo total, a clorofila-a e a transparncia da
gua.
Anlise de varincia permutacional multivarivel (PERMANOVA) foi
utilizada para verificar o quanto s composies de diatomceas difere, quando
relacionadas aos diferentes graus de trofia da gua entre os reservatrios.
A riqueza ser baseada em dados de incidncia (presena/ausncia)
(CHAZDON et al., 1998) obtidos na curva de rarefao que padroniza as
amostras com base no nmero de indivduos, indicando o nmero espcies
observadas nas amostras. As mdias de abundncia calculada utilizou o
mnimo de 300 valvas em cada contagem, por centmetro quadrado entre os
pontos de coleta, transformada em logaritmo (log [x+1]). O ndice de
dissimilaridade de Bray-Curtis calculou a semelhana das comunidades de
diatomceas entre os pontos amostrados. A semelhana das amostras e a
matriz de dissimilaridade gerada foram avaliadas usando um diagrama de
ordenao pelo mtodo de escalonamento no mtrico multidimensional
(NMDS).
A mdia de riqueza das espcies das pseudorlicas de cada estao de
coleta determinou a -diversidade das U.A dos reservatrios em cada perodo.
E a Partio Aditiva avaliou a -diversidade e a -diversidade de assembleias
de diatomceas nos dois reservatrios comparando as diferentes escalas
espaciais e temporais.
A -diversidade ser estimada atravs das diferenas entre os valores
mdios de riqueza das U.A, obtida pelo ndice de Rarefao, associada com
duas escalas adjacentes e um valor associado com cada escala espacial.
Os componentes particionados foram associados em relao a sua
escala espacial: 1 U.A - variao na composio de espcies entre os pontos
montante e a jusante do reservatrio com escalas locais; 2 Reservatrios -
diferena na riqueza de espcies observadas em escalas de habitat nos
reservatrios no mesmo perodo sazonal; 3 Reservatrios Sazonal - diferena
entre as riquezas de espcies nos reservatrios em escalas de habitat, porm
com perodos sazonais diferentes (FIGURA 2).


FIGURA 2: ESBOO DA ESTIMATIVA DA -DIVERSIDADE E DA -DIVERSIDADE
ESPACIAL E TEMPORAL NOS RESERVATRIOS IRA E PIRAQUARA II.

1 U.A
RESERVATRIO
PIRAQUARA II
RESERVATRIO
IRA
2 - Reservatrios
3 Reservatrios Sazonal
(Outono e Primavera)


Os valores dos componentes e observados so dependentes do
nmero e do tamanho da unidade de amostragem e tambm da distncia entre
eles e a dissimilaridade das condies ambientais (SCHMERA e ERS 2008).
Portanto fundamental a utilizao de modelo nulo para obter uma avaliao
adequada, e a importncia de cada frao avaliada.
Os dois modelos nulos que foram utilizados para Partio Aditiva, foi
proposto por Crist et al. (2003). O modelo tipo I consiste em distribuio
randmica dos indivduos entre todas as unidades de amostras coletadas,
quebrando obiquidade da agregao intraespecfica observada em
comunidades, onde o esperado de sob este modelo ser maior do que os
valores observados. No modelo tipo II, baseado na randomizao por
unidade amostral (sample-based), as unidades amostrais de um nvel so
permutadas dentro do nvel superior. Este modelo mantm a agregao
intraespecfica natural das espcies, sendo til para a determinao de
diferentes habitat (CRIST et. al., 2003).
As fraes observadas sero contrastadas com o esperado, obtido nos
dois modelos nulos. Quando o modelo de hiptese nula produzir valores de
propores elevadas, mostrar que a riqueza observada significantemente
menor que o esperado sob o modelo nulo (Ex; prop
exp
>
obs
= 0,975) e o inverso,
mostra que a riqueza observada significantemente maior.
A definio de como foi ocasionada a beta diversidade das
comunidades de diatomceas dentro de cada reservatrio e entre cada
reservatrio, foi atravs da utilizao de
nes
e
sim
, determinando a ocorrncia
de turnover ou aninhamento, ou a ocorrncia de ambos, nos reservatrios.
(BASELGA, 2010).
As parties e randomizaes sob o modelo nulo baseado no indivduo
foram calculadas usando a funo adipart do pacote vegan (OKSANEN et. al.,
de 2011) e o modelo nulo baseado na amostra usando a funo s.based
(RIBEIRO et al., 2008) e a definio de como ocorreu a beta diversidade
usando o pacote MBI, todos utilizando o programa R (R Development Core
Team 2010).