TICIANA ALEXANDRA VALLE

CIDO LACTOBINICO PRODUZIDO POR Zymomonas mobilis:

UMA ALTERNATIVA PARA VETORIZAO DE DROGAS.











JOINVILLE
2009
TICIANA ALEXANDRA VALLE





CIDO LACTOBINICO PRODUZIDO POR Zymomonas mobilis:
UMA ALTERNATIVA PARA VETORIZAO DE DROGAS.





Dissertao de mestrado apresentada como
requisito parcial para obteno do ttulo de
Mestre em Sade e meio Ambiente, na
Universidade da Regio de Joinville.
Orientador: Prof. Dr. Gilmar Sidnei Erzinger
Co-orientador: Prof. Dr. Marco Fabio
Mastroeni







JOINVILLE
2009






























DEDICATRIAS

Deus pela vida e oportunidade de meu aperfeioamento;
Aos meus pais Ademar Valle e Elizette Giovanella Valle, por tudo o que fizeram e
fazem por mim;
Aos meus filhos Luiz e Murilo, que com seus abraos me impulsionaram a alcanar
mais este objetivo.
Ao meu irmo Francis, que apesar da distncia, estava torcendo por mim.
Ao Jar Luiz Vavassori, que com todo seu carinho e pacincia, me ajudou a realizar mais
um sonho de minha vida.


AGRADECIMENTOS

Ao Prof. Dr. Gilmar Sidney Erzinger, que alm de orientador uma pessoa
maravilhosa.
Ao Prof. Dr. Marco Fbio Mastroeni, meu co-orientador e mestre exemplar.
A Profa. Dra. Eloane Malvessi, que com muito desprendimento e simpatia me recebeu
na Universidade de Caxias do Sul (RS).
Ao Prof. ngelo Ruzza, da Universidade Federal de Santa Catarina, pelas colaboraes
nas anlises de Ressonncia Magntica Nuclear (RMN) e Polarimetria.
Ao Prof. Theodoro Marcel Wagner, desta Universidade, pelas colaboraes nas anlises
de Cromatografia lquida de Alta Eficincia (HPLC)
A Pharma Nostra Comercial LTDA, que forneceu amostra de cido lactobinico, sem
custo, incentivando e ajudando assim o desenvolvimento do trabalho.
E a todos meus amigos e funcionrios desta Universidade que direta ou indiretamente
contriburam para realizao deste trabalho.
















RESUMO
As enzimas glicose-frutose oxidorredutase (GFOR) e gluconolactonase (GL)
produzidas por Zymomonas mobilis, em reaes consecutivas, agem catalisando a
bioconverso de glicose e frutose em cido glucnico e sorbitol, respectivamente. Do
mesmo modo, Zymomonas mobilis tem a capacidade de produzir outros cidos
orgnico, a partir de misturas de frutose com diferentes aldoses alternativas glicose.
Dentre estes cidos orgnicos destaca-se o cido lactobinico, resultante da oxidao da
lactose, ocorrendo ainda formao equimolar de sorbitol, produto da reduo da frutose.
O sorbitol apresenta aplicaes voltadas para as indstrias de alimentos e farmacutica e
o cido lactobinico tem importantes aplicaes nas reas mdica e cosmtica, sendo
por isso o foco principal deste trabalho. J foi descrito na literatura que o cido
lactobinico possui atividade potencial na vetorizao de drogas, principalmente anti-
tumorais. O objetivo deste trabalho foi demonstrar que o cido lactobinico da
Universidade de Caxias do Sul (UCS) produzido por Zymomonas mobilis pode ser uma
alternativa de vetorizao associado s drogas anti-tumorais. Utilizando das tcnicas de
anlises instrumentais como, HPLC, RMN e polarimetria, usando como padro de
comparao o sal de referncia (SIGMA), 97% de pureza e outros sais do cido
lactobinico comercializados no Brasil, demonstraram que o cido lactobinico (UCS)
apresenta alto grau de pureza, (< 100%) quando comparado com padro SIGMA, isento
de qualquer substncia ismera ou racmica e possui cadeia aberta, que o torna vivel na
vetorizao de drogas. Ficou tambm demonstrado que os outros sais de cido
lactobinico comercializados no Brasil, para uso em cosmticos, no possuem o grau de
pureza adequado para a vetorizao de drogas em funo da presena de lactona.

Palavras-chave: cido Lactobinico, Zymomonas mobilis, vetorizao de drogas.


ABSTRACT

The enzymes glucose-fructose oxidoreductase (GFOR) and gluconolactonase (GL)
produced by Zymomonas mobilis in consecutive reactions, act by catalyzing the
bioconversion of glucose and fructose into gluconic acid and sorbitol,
respectively. In a similar way, Zymomonas mobilis has the ability to produce other
organic acids from mixtures of fructose with different aldoses alternatives to glucose.
Among these organic acids stands lactobionic acid, resulting from the oxidation of
lactose, occurring still equimolar formation of sorbitol, a product of fructose reduction.
Sorbitol is wide used in food and pharmaceutical industries and lactobionic acid
has important applications in medical and cosmetic industries and is therefore the main
focus of this work. It has been reported in the literature that lactobionic acid has
potential ctivity in drug vectorization, particularly anti tumor. The objective of this
work is to show that lactobionic acid from the University of
Caxias do Sul (UCS) produced by Zymomonas mobilis can be an alternative for
vectorization associated with anti tumor drugs. Using techniques of instrumental
analysis such as HPLC, NMR and polarimetry, and using as a comparison reference salt
(SIGMA) at 97% purity and other salts of lactobionic acid sold in Brazil, showed that
lactobionic acid (UCS) has high purity, (<100%) when compared with standard
SIGMA, and is free of any substance or racemic isomers and has an open chain,
which makes it viable for drug vectorization. It was also shown that other salts of
lactobionic acid sold in Brazil for use in cosmetics do not have the degree of purity
suitable for drug vectorization due to the presence of lactone.


Keywords: Lactobionic acid, Zymomonas mobilis, drug delivery system


LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Estrutura qumica do cido lactobinico.

15
Figura 2 - Esquema de um polarmetro 36
Figura 3 - Curva de Calibrao, utilizando 4 diluies do padro SIGMA

por
cromatgrafo lquido de alta eficincia (HPLC).



44
Figura 4 Percentual de pureza real do cido lactobinico obtida por HPLC
de diferentes amostras, sendo a marca SIGMA

como referncia.

46
Figura 5 - Frmula estrutural do cido lactobinico e seus respectivos
carbonos (2,3,5,6-tetrahydroxy-4-(tetrahydro-3;4;5-trihydroxy-6-
(hydroxymethyl)-2H-pyran-2-yloxy) heanoic.


49
Figura 6 - Frmula estrutural da Lactona e seus respectivos carbono
(tetrahydroxy-3,4-dihydroxy-6(hydroxymethyl)-5-(tetrahydro-3;4;5-
trihydroxy-6-(hydroxymethyl)-2H - pyran-2-yloxy)piyran-2-one.



49
Figura 7 - Espectros de RMN de
13
C do sal de cido lactobinico A (D
2
O,
400MHz, ppm), padro interno C
3
D
6
O(acetona deuterada).


51
Figura 8 - Espectros de RMN de
13
C do sal de cido lactobinico B (D
2
O,
400MHz, ppm), padro interno C
3
D
6
O( acetona deuterada).


51
Figura 9 Espectros de RMN de
13
C do sal de cido lactobinico SIGMA
(D
2
O, 400MHz, ppm), padro interno C
3
D
6
O( acetona deuterada).


52
Figura 10 Espectros de RMN de
13
C do cido Lactobinico obtido por
processo biotecnolgico da UCS (D
2
O, 400MHz, ppm), padro interno C
3
D
6
O
(acetona deuterada).


53











LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Comparao em base da massa de diferentes cidos lactobinico
tendo o sal SIGMA como padro de referncia, obtidas por cromatografia
lquida de alta eficincia (HPLC).

45

Tabela 2 - Avaliao do ndice refrativo obtido na polarimetria para diferentes
cidos lactobinico, tendo o The Merk ndex (2001) []
D
20
+ 22,6
o
como
referncia, e suas diferenas percentuais.


47

Tabela 3 - Espectros de deslocamentos do cido lactobinico observados em
RMN-
13
C

50


















LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

% - percentagem
AHA Alfa-Hidrxi- cido
ANVISA - Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
ASGP-R - Receptor Asialoglicoprotena
Bi - Bismuto
BHA Beta-Hidrxi-cido
CaCO
3
Carbonato de Clcio
EC - Euro-Collins
g/L Gramas por litro
GFOR - Glicose-Frutose Oxidorredutase
GL - Glucono--Lactonase
Gox Glicose oxidase
h - Horas
Hox - Hexose
HPLC Cromatografia Lquida de Alta Eficincia
INBI Instituto de Biotecnologia
INPI - Instituto Nacional de Propriedade Intelectual.
Km Constante de Michaelis
KOH Hidrxido de Potssio
LBA cido Lactobinico
M - concentrao molar (mol/L)
MHz Mega hertz
min - minutos


mL - mililitro
mM - milimolar
NaOH Hidrxido de Sdio
nm - Nanmetro
C Graus Celsius
ppm partes por milho
psi - Libras por polegada quadrada
Pb- Chumbo
Pt/Cr Eletrodo de Platina e cromo
RNM- Ressonncia Magntica Nuclear
m
-1
rotao por minuto
SLS - Soluo de Sacarose e Lactobionato de Sdio
SS - Semi-Sinttico
U/g - unidades por grama de clulas secas
UCS Universidade de Caxias do Sul
UW - Universidade de Wisconsin
mol- micromoles

















SUMRIO
RESUMO
ABSTRACT
LISTA DE FIGURAS
LISTA DE TABELAS
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
1 INTRODUO.......................................................................................................13
2 REVISO BIBLIOGRFICA...............................................................................15
2.1 - O CIDO LACTOBINICO.................................................................................15
2.2 - SNTESE DO CIDO LACTOBINICO BIOTECNOLGICO.........................16
2.3 - UTILIZAO DO CIDO LACTOBINICO.....................................................19
2.3.1 Utilizao em Dermocosmticos.........................................................................22
2.4 - VETORIZAO DE DROGAS.............................................................................23
2.5 DETERMINAO DE GRAU DE PUREZA DE COMPOSTOS
QUMICOS.....................................................................................................................29
2.5.1 - Padronizao e Calibrao...................................................................................29
2.5.2 - Cromatografia Liquida de Alta Eficincia (HPLC).............................................29
2.5.3 Espectroscopia de Ressonncia Magntica Nuclear (RMN)...............................31
2.5.4 Polarimetria e rotao ptico-rotatria................................................................34
2.5.4.1 - Rotao Especfica............................................................................................35

3 - PROCEDIMENTO METODOLGICO...............................................................36

3.1 cido Lactobinico biotecnolgico da UCS..........................................................37
3.1.1 Microrganismo.....................................................................................................37
3.1.2 - Ensaios de biotransformao................................................................................37
3.1.3 Medidas da atividade enzimtica.........................................................................37
3.1.4 Mtodo para separao do cido Lactobinico/ Sorbitol...................................38
3.2 Amostras de cido Lactobinico...........................................................................38
3.3 Anlises Comparativas de Pureza...........................................................................39
3.3.1 - Anlise de espectroscopia RMN.......................................................................39
3.3.2 - Anlise por cromatografia lquida de alta eficincia HPLC.............................39
3.3.2.1 Preparo das amostras para anlise em HPLC...................................................40
3.3.4 - Polarimetria Disperso ptico-rotatria............................................................41
3.3.5 Processamentos dos dados e anlise estatstica...................................................42

4 - RESULTADOS E DISCUSSO.............................................................................43
4.1 Anlises de Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (HPLC)............................43
4.2 Polarimetria e Disperso ptico-rotatria...............................................................47
4.3 Ressonncia Magntica Nuclear (RMN)................................................................48



5 CONCLUSO..........................................................................................................54
6 - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS...................................................................55
APNDICES..................................................................................................................60




























13
1 - INTRODUO

As drogas anti-tumorais devido a suas propriedades farmacolgicas possuem
atuao sistmica e causam extensos efeitos indesejados, inclusive sobre as clulas sadias.
A vetorizao uma estratgia teraputica que consiste na liberao do frmaco em
stios especficos de ao (clulas, tecidos ou rgos) possibilitando o aumento da
eficcia teraputica do ativo, a reduo da toxicidade e a restrio da ao do frmaco ao
tecido lesado. O cido lactobinico apresenta mercado promissor, com importantes
aplicaes nas reas cosmtica e mdica, como na preservao de rgos para
transplante e na vetorizao de drogas antitumorais.
Alguns trabalhos encontrados na literatura correlacionam as propriedades de
vetorizao de drogas anti-tumorais ao cido lactobinico da Sigma

. Outras
companhias Qumicas tambm produzem o cido lactobinico com qualidade
farmacutica, porm de alto agregado, o que poderia inviabilizar o seu uso como parte
da composio de um medicamento.
Estudos desenvolvidos pelo Instituto de Biotecnologia (INBI) da Universidade de
Caxias do Sul (UCS) indicaram a possibilidade de produo de cido
lactobinico/sorbitol, a partir de lactose/frutose, respectivamente. Realizada por processo
de biotransformao, catalisado pelas enzimas periplasmticas glicose-frutose
oxidorredutase (GFOR) e glucono--lactonase (GL) da bactria Gram negativa
Zymomonas mobilis. Recentemente registrando a patente deste processo biotecnolgico.
A produo do cido lactobinico por processo biotecnolgico possibilita a
obteno de um produto isento de resduos txicos em relao catlise orgnica, com
semelhante grau de pureza e ideal para o uso farmacutico.



14
O objetivo deste trabalho foi demonstrar que o cido lactobinico do INBI/
UCS produzido por Zymomonas mobilis pode ser uma alternativa de vetorizao
associado s drogas anti-tumorais.
Pretende-se avaliar o grau de pureza do cido lactobinico produzido por
processo biotecnolgico, utilizando as tcnicas analticas especficas como a
cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC), a Polarimetria e a Ressonncia Magntica
Nuclear (RMN) e compar-lo com o cido lactobinico da marca Sigma, padro
primrio, que foi utilizado nos trabalhos de vetorizao de drogas, com amostra de cido
lactobinico A, fornecida por uma empresa de cosmticos que utiliza como componente
de alguns de seus produtos e amostra B que comercializada no Brasil por uma
distribuidora de matria-primas para indstrias farmacuticas e para farmcias de
manipulao.




























15
2 REVISO BIBLIOGRAFICA

2.1 - O CIDO LACTOBINICO

O cido lactobinico classificado quimicamente como um cido aldnico
oligossacardeo, no qual um carboidrato (galactose) quimicamente ligado a um cido
aldnico (cido glucnico) via uma ligao ter (SELIM et al., 2007). Sua estrutura
qumica apresentada na Figura 1.


Figura 1 - Estrutura qumica do cido lactobinico (SELIM et al., 2007).

Segundo a Real Farmacopea Espaola (2006), o cido lactobinico mescla
propores variveis de cido 4-O--D-galactopiranosil-D-gluconico e 4-O--D-
galactopiranosil-D-glucono-1,5-lactona, ou seja, existe uma mistura da forma cida
(cadeia aberta) e -lactona (cadeia fechada).








16
2.2 - SNTESE DO CIDO LACTOBINICO BIOTECNOLGICO

Os processos enzimticos podem ser utilizados com o intuito de oxidar lactose ao
cido lactobinico e foram, durante as ltimas dcadas, investigadas vrias
possibilidades. Em 1962, Nishizuka e Hayaishi purificaram a enzima lactose
desidrogenase da Pseudomonas graveolens, e caracterizaram-na em detalhes. Esta
enzima catalisa por hidrogenao da lactose para lactobiono--lactona, que
subseqentemente hidrolisada para cido lactobinico. A enzima uma flavoproteina
com pH-timo de 5,6 e um valor de Km (Constante de Michaelis) para lactose de
11mM. A enzima pode utilizar vrias aldoses como substratos, porm possui atividade
de 4 a 5 vezes maior com glicose ou galactose do que com lactose.
A formao de cido lactobinico pela oxidao enzimtica de lactose por
Chondrus crispus pode ser:
[...] A oxidao enzimtica de lactose pode ser uma eficiente
alternativa para sntese j que o mtodo por eletroqumica gera
bromo e outras substncias qumicas perigosas e nocivas. A
enzima hexose oxidase (HOx; D-hexose: O2 1-oxidoreductase;
EC 1.1.3.5) foi primeiramente isolada da alga vermelha marinha,
Chondrus crispus, por Sullivan e Ikawa (1973). Esta enzima tem
apresentado resultado satisfatrio porque no requereu cofator
externo, e em contra partida a enzima glicose oxidase,
comercialmente disponvel (GOx) da Aspergillis niger, foi capaz
de oxidar uma grande gama de substratos (aldoses). Chondrus
crispus encontrada na costa da Inglaterra, onde colhida e
comercializada como uma fonte alimentcia de polissacardeos, a
carragena. A enzima HOx tem-se demonstrado satisfatria para
aplicaes biocatalticas, onde HOx converteu lactose
quantitativamente em cido lactobinico em um reator com
enzimas imobilizadas (HICKS et al.,2001, p.42).



17
No estudo de NISHIZUKA et al. (1962) a enzima lactose desidrogenase foi
obtida de clulas adaptadas de Pseudomonas graveolens, que catalisou a oxidao
estequiomtrica de lactose para lactobiono--lactona. A preparao enzimtica
purificada reagiu com vrias aldoses, n-glicose, n-galactose, n-mannose, n-talose, n-
xilose, n-ribose, n-arabinose, maltose, cellobiose, n-fucose e tambm lactose. A
lactobiono--lactona produzida era hidrolisada para cido lactobinico por outra enzima,
a lactonase.
A capacidade de glicose-frutose oxidorredutase (GFOR) e glucono--lactonase
(GL), enzimas que esto localizadas na regio periplasmticas da bactria Zymomonas
mobilis, de catalisar por bioconverso de glicose e frutose em cido glucnico e sorbitol
foi descrita em vrios trabalhos (ERZINGER et. al, 1996, ERZINGER, 2000,
ERZINGER et al., 2006, SILVEIRA et al, 2007).
De acordo com SATORY et al. 1997 ( apud PEDRUZZI et al., 2007) as enzimas
do complexo GFOR/GL so capazes, no s de oxidar glicose, mas tambm sete outras
aldoses, para produzir os cidos orgnicos correspondentes; em particular a oxidao da
lactose a cido lactobinico.
Entretanto, como a formao equimolarmente de cido glucnico e sorbitol, sendo
a demanda comercial de sorbitol superior do cido glucnico, a aplicao prtica do
processo foi considerada invivel. Como estudos prvios relatam a possibilidade da
oxidao de outras aldoses para a produo de cidos orgnicos por GFOR/GL.
Destaque-se, neste caso, a formao de cido lactobinico, pela oxidao de lactose, que
devido ao seu alto valor agregado, contribuiria para um balano de produo compatvel
com a demanda comercial do sorbitol. A ao enzimtica do complexo GFOR/GL foi
caracterizada para os pares frutose/glicose e frutose/lactose em relao aos efeitos do
pH, temperatura, concentrao de substratos, analisando-se ainda, a cintica enzimtica



18
para cada par de substratos. Foi avaliada a produo de sorbitol, cido glucnico e cido
lactobinico por clulas de Zymomonas mobilis livres e imobilizadas em alginato de
clcio, buscando, no segundo caso, o reaproveitamento das clulas em bioconverses
sucessivas, obtendo a taxa de reao de biotransformao de lactose com o rendimento
de 85% de cido lactobinico ocorrendo ainda a formao equimolar de sorbitol,
produto de reduo da frutose (CARRA et al., 2006).
Segundo SANCHEZ, (1995), a imobilizao um procedimento que promove o
confinamento fsico de clulas ntegras e cataliticamente ativas, em um sistema
reacional, impedindo que estas passem para a fase mvel onde esto contidos o substrato
e o produto.
As vantagens da imobilizao celular com alginato de clcio so relativas ao seu
baixo custo e simplicidade da operao, que realizada em condies suaves, tendo boa
biocompatibilidade com a clula; o que propicia a manuteno da viabilidade celular
(SANCHEZ 1995; QUN et al., 2002).
A utilizao de clulas imobilizadas no processo de bioconverso vantajosa, pois
as clulas podem ser reutilizadas em vrios ciclos sem perda significativa de
produtividade, facilitando, ainda, a separao dos produtos reacionais. Por outro lado,
preciso que sejam definidos novos biorreatores especficos para a conduo do processo
com clulas imobilizadas em maior escala (CARRA et al., 2006).
As enzimas GFOR e GL de Zymomonas mobilis, previamente imobilizadas,
apresentam suas maiores atividades em pH 6,4, por esta razo, durante a produo do
cido lactobinico h a necessidade de manter o pH do meio. A separao do cido
lactobinico por eletro dilise possvel, uma vez que esta substncia o nico
componente inico da bioconverso. O processo de remoo do cido lactobinico
durante o processo de formao pode ser vantajoso, pois torna desnecessria a adio de



19
base ao meio reacional, alm de otimizar e desonerar o processo de purificao
(PERETTI, 2006).
Em 2007, SILVEIRA et al, do Instituto de Biotecnologia da Universidade de
Caxias do Sul, desenvolveram tecnologia de produo do cido lactobinico por
clulas/enzimas de Zymomonas mobilis imobilizadas em alginato de clcio, e processo
de recuperao e de produtos. E j foi publicado o registro de propriedade intelectual
junto ao Instituo Nacional de Propriedade Intelectual (INPI).
Tambm em 2007, PEDRUZZI et al, definiram as condies experimentais de
anlise de uma mistura de cido lactobinico, lactose, frutose e sorbitol em coluna de
PSDVB, em HPLC. Os principais parmetros estudados foram o pH da soluo e a
temperatura da coluna que tem forte influncia na separao e simetria dos picos. Os
cristais de cido lactobinico foram solubilizado em um solvente alcalino contendo
Ca(OH)
2
, (ou em sdio ou hidrxido de potssio) em base equimolar, para prevenir a
formao de lactona. Este um mtodo analtico rpido e simples para quantificao de
cido lactobinico e sorbitol da reao enzimtica com GFOR/GL.

2.3 - UTILIZAO DO CIDO LACTOBINICO

Segundo Nordkvist (2005), so vrias as aplicaes do cido lactobinico. Entre
elas se destaca a proteo contra corroso em materiais de ferro e ao em gua ou
salmoura, que pode ser significantemente reduzido usando em baixas concentraes do
cido oleilamida lactobinico em soluo. Quando comparando com outros produtos
anticorrosivos o cido lactobinico no txico, nem irritante, nem mutagncio e tem a
vantagem se ser biodegradvel.



20
Ainda segundo Nordkvist (2005) o cido lactobinico poderia ser utilizado na
indstria de alimentos reduzindo o tempo de fabricao de queijos e produo de
iogurtes, reduzindo o azedo e amargura, melhorando o gosto e a percepo da acidez.
Por seu gosto levemente adocicado poderia ser utilizado como adjuvante em bebidas e
leite, enriquecidos com ferro para tratamento de anemias principalmente para crianas e
adolescentes.
Uma das mais recentes aplicaes a converso da lactose do leite em cido
lactobinico usando a lactose oxidase, explorando as caractersticas desejveis para
substituir protenas e/ou processo de engorda em queijos e nata. O cido lactobinico
no tem os efeitos no queijo como lactose (cristalizao, colorao e sabor), mas pode
ser at mesmo visto como um acentuador de sabor e de textura e antioxidante sinrgico.
Baseado nos dados toxicolgicos, no h nenhuma razo para preocupaes de
segurana ao usar a lactose oxidase para consumo humano (AHMAD et al., 2004).
Com propriedades emulsionantes, estabilizao de espuma e alta solubilidade em
gua o cido lactobinico pode ser usado em detergentes de louas e sabo em p para
uso domstico, como substituto do fosfato. Esta propriedade est sob patente
(NORDKVIST, 2005).
Para utilizao na indstria farmacutica, Tojimbara et al. 2001, estudaram o
potencial da soluo de sacarose e lactobionato de sdio, chamada de SLS, na
preservao de rgos para transplante, especialmente o fgado. Neste trabalho foram
utilizados porcos e esta soluo se mostrou mais vivel na preservao dos rgos do
que a UW, desenvolvida pela Universidade de Wisconsin, soluo utilizada em
experimentos com ratos transplantados. A superioridade da soluo de SLS pode ser
explicada pela relao invertida de ctions e sua baixa viscosidade. Devido a uma alta
concentrao de sdio e baixa concentrao de potssio podem prevenir que as clulas



21
endoteliais inchem e danifiquem a bomba sdio-potssio da membrana, por
despolarizao do on. Alm de uma baixa viscosidade que pode ser eficaz para limpar
as substncias de ao vasoconstrictoras e mediadores de inflamao no enxerto.
O lactobionato de sdio utilizado em solues para preservao de rgos em
associao com uma gama de outros elementos aditivos. Estas solues foram utilizadas
para proteger rins, fgados, coraes e intestino de danos da isquemia. O lactobionato de
sdio um impermeabilizante (cido 4-O--D-galactopyransil-D-gluconico) com um
peso molecular de 358 daltons. No pode prontamente penetrar na membrana da maioria
das clulas e como tal, previne que estas clulas inchem por causa de seu tamanho e
carga de ons. Ele tambm quela os ons de ferro que passam e que so diretamente
envolvidos na produo de radicais livres hidroxil, reduzindo a oxidao que danificaria
o rgo. Isto sugere que o lactobionato de sdio pode mostrar um efeito protetor alm de
considerada propriedade de impermeabilidade (AHMED, et al., 2001).
Esta propriedade foi tambm relatada por Nordvkvist (2005), a ao quelante de
ons ferro pelo lactobionato de sdio em soluo para armazenamento de rgos para
transplante. Alm disto, o cido lactobinico tambm usado para aumentar a
solubilidade de antibiticos como eritromicina e estabilizar a soluo para formulaes
orais. A eritromicina tem um largo-espectro de ao e usada para o tratamento de
infeces causadas por bactrias Gram positivas, porm, uma porcentagem pequena de
eritromicina usada como droga injetvel na forma de lactobionato de eritromicina. O
lactobionato de eritromicina aumenta a solubilidade em 50-100 vezes mais que a
eritromicina em gua segundo Hoffhine, 1956 (apud NORDKVIST, 2005). Alm disso,
outros sais como o lactobionato de clcio, podem ser usados para o uso humano e
veterinrio na estabilizao de solues de gluconato de clcio como suplemento de
clcio.



22
Recentemente o cido lactobinico, pela sua poro galactose, e o lactitol, que
um derivado de lactose foram apresentados como inibidores da atividade de trans-
sialidase no parasita Trypanossoma cruzi causador da Doena de Chagas . A enzima
trans-sialidase presente na superfcie dos parasitas, captura o cido silico presente em
protenas do meio extracelular do hospedeiro e transfere para as galactoses terminais das
mucinas do parasita. A doena de Chagas um dos principais problemas de sade
pblica na Amrica Latina, em torno de 18 milhes de pessoas infectadas e sem
disponibilidade de tratamento de efetivo ( AGUSTI et al., 2004).

2.3.1 Utilizao em Dermocosmticos

O uso de alfa-hidroxi-cidos em concentraes altas, em torno de 25% do cido
gliclico, cido ltico ou cido ctrico, em peles fotoenvelhecidas, produzem uma
melhora clnica da pele associada a mudanas histolgicas. A epiderme mostra um
aumento significante da densidade, disperso de melanina e um retorno de hidratao.
Isto se deve ao aumento da espessura da pele por causa da sntese de
glucosaminoglicanas, colgeno e fibras possivelmente elsticas (DITRE et al.1996).
Segundo Brody (2005), os alfa-hidroxi-cidos, chamados AHAs, podem
aumentar a sntese de colgeno da pele, melhorando as linhas de expresso e rugas
faciais. Os beta-hidroxi-cidos, chamados de BHAs, alm da sntese de colgeno, tm
possveis capacidades antiinflamatrias e ardem menos na aplicao porque no
penetram na camada dermal. J os poli-hidroxi-cidos (PHAs), de grande peso
molecular, so cidos orgnicos que possuem dois ou mais hidroxilas. Os PHAs
provem benefcios para a pele semelhante aos AHAs. Podem penetrar na pele mais
lentamente, mas podem ser irritantes em pacientes com pele sensvel. Tem ao



23
umectante, por causa das mltiplas hidroxilas, que ajudam a reter a umidade da pele. O
cido lactobinico e seu componente o cido glucnico so os principais agentes deste
grupo. A lactona formada do cido glucnico pode diminuir o aparecimento de linhas de
expresso e melhorar as j existentes. O cido lactobinico possui tambm ao
antioxidante, seguro, no irritante da pele e retarda o envelhecimento da pele,
teoricamente por quelar o ferro inibindo a oxidao de outras substncias, inclusive da
hidroquinona, um agente clareador de manchas. Estas combinaes podem ter
aplicabilidade em tratamentos de microabraso facial.

2.4 - VETORIZAO DE DROGAS

A vetorizao uma estratgia teraputica que consiste na liberao do frmaco
em stios especficos de ao (clulas, tecidos ou rgos) possibilitando o aumento da
eficcia teraputica do ativo, a reduo da toxicidade e a restrio da ao do frmaco ao
tecido lesado (CHIN e FERREIRA, 1998; VASIR et al., 2005).
A vetorizao apresenta como principais vantagens a possibilidade de simplificao
dos protocolos de administrao do medicamento, a reduo do custo da terapia e a
possibilidade de utilizar maiores concentraes do ativo no local desejado, sem causar
efeitos txicos em outros locais do organismo (TORCHILIN, 2000).
Segundo Dallagnol et al. (2006) a microencapsulao uma importante
contribuio para rea farmacutica, pois permite o desenvolvimento de frmulas de
liberao direcionada, cujos agentes ativos so liberados apenas nos rgos onde devem
agir ou onde sero absorvidos. O material encapsulante selecionado em funo das
propriedades fsicas e qumicas do agente ativo, da aplicao pretendida e do mtodo
utilizado para formar as micropartculas.



24
reas que apresentam alguma patologia diferem do tecido normal quanto a
algumas propriedades, como temperatura e pH. reas inflamadas ou neoplsicas
usualmente apresentam acidose e hipertermia. Dessa forma, possvel a utilizao de
nanosistemas que sejam capazes, por exemplo, de desintegrar-se em baixos valores de
pH ou em temperaturas elevadas, liberando o frmaco seletivamente nestes locais
(TORCHILIN, 2000; NAKAYAMA et al., 2006).
Diversos trabalhos envolvendo a vetorizao de frmacos para stios especficos
vm sendo desenvolvidos, utilizando diferentes sistemas. A partir da ltima dcada, vem
crescendo o interesse na vetorizao de frmacos para o tratamento do cncer, uma vez
que possibilita a administrao do medicamento diretamente no local do tumor, com
conseqente diminuio da toxicidade do tratamento (NAKAYAMA et al., 2006; GU et
al., 2007).
(...) a latenciao, transformao do frmaco em forma de
transporte inativo que, in vivo, mediante reao qumica ou
enzimtica, libera a poro ativa no local de ao ou prximo
dele. Uma das formas latentes obtidas mediante este processo
denomina-se pr-frmaco. A latenciao tem sido bastante
utilizada nos ltimos anos, tornando-se uma das principais
ferramentas na arte do planejamento de quimioterpicos
especficos contra os maiores desafios da Cincia na atualidade:
AIDS e cncer (...) (CHIN e FERREIRA,1998, p.75).

Entre os sistemas utilizados na vetorizao de frmacos, destacam-se os
lipossomas, as nanopartculas polimricas, os sistemas micelares e os conjugados



25
frmaco-polmero. Esses sistemas podem ser classificados, de maneira geral, em vetores
passivos e ativos (VAZIR et al., 2005).
Os vetores passivos realizam a liberao do frmaco ou carreador em um local
especfico devido a fatores fsico-qumicos ou farmacolgicos. A distribuio in vivo
desses nanosistemas depende de fatores fsico-qumicos, como tamanho, carga e
hidrofobicidade da sua superfcie externa. Cerca de 90% dos nanosistemas
administrados atravs da via endovenosa so capturados pelo sistema retculo endotelial,
principalmente macrfagos presentes no fgado. Essa tendncia natural uma excelente
oportunidade para a vetorizao passiva de frmacos no fgado, por exemplo (VAZIR et
al., 2005).
Outra estratgia que pode ser utilizada na vetorizao passiva o emprego de
carreadores magnticos. Nesse caso, o frmaco incorporado a micropartculas
magnticas, as quais so administradas por via endovenosa. Mediante a aplicao de um
campo magntico externo, o carreador pode acumular-se em uma rea especfica,
liberando o frmaco (TORCHILIN, 2000).
A vetorizao ativa, por outro lado, envolve a modificao de um nanosistema
frmaco-carreador por meio da incorporao de agentes que apresentem afinidade
seletiva para serem reconhecidos e interagirem com receptores especficos presentes em
clulas, tecidos ou rgos. Anticorpos, peptdeos, acares e cido flico so exemplos
de agentes ligantes que podem ser utilizados com esta finalidade (VAZIR et al., 2005).
Como exemplo pode-se citar o estudo de Park et al. (2005), que prepararam
nanoesferas de um copolmero biodegradvel (metoxi polietilenoglicol/poli -
caprolactona) acopladas a molculas de folato, localizadas na superfcie externa das
partculas. O folato capaz de ligar-se a receptores especficos presentes na superfcie



26
das clulas de alguns tipos de tumores, possibilitando a vetorizao de frmacos no local
desejado.
Alm da utilizao de vetores passivos e ativos, a administrao do frmaco ou
carreadores contendo o frmaco diretamente no local desejado tambm uma estratgia
que pode ser utilizada (TORCHILIN, 2000).
Como exemplo pode-se citar a utilizao de microesferas de poli (cido ltico e
cido gliclico) contendo cisplatina para administrao direta no rgo afetado pelo
tumor atravs de cauterizao arterial (HUO et al., 2005).
Uma importante aplicao da vetorizao de frmacos consiste do
desenvolvimento de sistemas de liberao hepatcito-especficos, uma vez que outros
recursos farmacolgicos empregados no tratamento de doenas hepticas causam vrios
efeitos colaterais, resultantes da liberao inespecfica do frmaco e da sua distribuio
em outros rgos (KIM e KIM, 2002).
Entre os receptores de superfcie celulares, sabe-se que o receptor
asialoglicoprotena (ASGP-R: receptor de galactose) est presente apenas nos
hepatcitos. Alm disso, tambm se encontra presente em vrias linhagens de clulas de
hepatomas humanos. Quando um ligante interage com o receptor de galactose (ASGP-
R), o complexo ligante-receptor rapidamente internalizado e, depois, o receptor
reciclado de volta superfcie da clula. Dessa forma, o receptor ASGP-R apresenta
elevada capacidade de ligao e eficiente captao de ligantes galactosilados. Assim, o
desenvolvimento de sistemas de liberao de frmacos para a endocitose mediada por
receptor de galactose torna-se til para a vetorizao de frmacos s clulas hepticas ou
hepatomas (idem ibidem).
Nos trabalhos de Kim e Kim (2002,2003), Kim et al.(2004) e Selim et al (2007),
propem a utilizao do cido lactobinico SIGMA como agente ligante para a



27
vetorizao ativa de frmacos ao fgado, uma vez que possui uma molcula de galactose
na sua estrutura qumica. O estudo realizado por Kim e Kim (2002) relata a sntese e
caracterizao de nanopartculas polimricas do tipo core shell, formadas a partir da
aglomerao, em meio aquoso, de um conjugado contendo cido lactobinico,
polietileno glicol diamina-terminado e cido clico. As nanopartculas obtidas possuam
formatos esfricos e tamanhos entre 10 a 30 nm.
Em 2003, Kim e Kim relatam a sntese de nanopartculas polimricas a partir de
um conjugado de polietileno glicol biotinilado e cido lactobinico SIGMA. A sntese
do conjugado foi identificada por meio de espectroscopia. Dados de espectroscopia de
fluorescncia mostraram que o conjugado aglomerava em gua, formando
nanopartculas do tipo core shell. Mediante a utilizao de um microscpio eletrnico
de transmisso, verificou-se que as nanopartculas apresentavam formato esfrico, com
tamanho entre 30 e 60 nm. O frmaco anti-tumoral cido trans-retinico foi incorporado
s nanopartculas para avaliar a eficcia do sistema como carreador de frmacos. A
cristalinidade do frmaco e das nanopartculas contendo o frmaco foi avaliada por
difrao de raios-X.
Em 2004, Kim et al. desenvolveram um novo processo no qual o cido
lactobinico SIGMA foi conjugado quitosana hidrossolvel com o objetivo de
atingir-se a hepatcito-seletividade. A composio de galactose na quitosana
galactosilada (ou seja, ligada ao cido lactobinico) foi determinada por ressonncia
magntica nuclear (RMN). O conjugado foi complexado com DNA plasmidial em vrias
propores quitosana galactosilada/DNA e o complexo resultante foi caracterizado por
espalhamento de luz dinmico, retardao em gel e turbidimetria para determinar o
tamanho de partcula, formao de complexo e estabilidade do complexo,
respectivamente. A citotoxicidade e eficincia de captao da quitosana galactosilada



28
foram estudadas em linhagens de clulas de hepatoblastoma humano HepG2 e clulas de
carcinoma epitelial de crvix humano HeLa. O estudo de citotoxicidade mostrou que a
quitosana galactosilada obtida a partir de quitosana hidrossolvel no possui efeito
citotxico sobre as clulas. A eficincia de captao nas HepG2, que possuam
receptores asialoglicoprotena (ASGP-R), foi maior que a observada nas HeLa (sem
ASGP-R).
No trabalho de Selim et al. (2007), os autores utilizaram uma superfcie de
nanopartculas de magnetita superparamagntica que foi modificada com cido
lactobinico SIGMA para aumentar a sua captao intracelular e habilidade de
vetorizao aos hepatcitos. Nanopartculas modificadas com cido maltotrinico foram
tambm sintetizadas como controle. Os experimentos de cultura de clulas mostraram
que as nanopartculas modificadas com cido lactobinico foram internalizadas nos
hepatcitos e, por meio de espectrometria de absoro atmica, verificou-se que a
quantidade captada de magnetita modificada com cido lactobinico pelos hepatcitos
foi maior que a de magnetita no modificada e modificada com cido maltrotrinico.
Uma soluo de nanopartculas modificadas com cido lactobinico foi injetada em
coelhos e as imagens de ressonncia magntica obtidas mostraram que as nanopartculas
acumularam-se seletivamente nos hepatcitos. Segundo os autores, os resultados obtidos
demonstram que as nanopartculas de magnetita modificadas com cido lactobinico
apresentam um grande potencial para serem usadas como agentes de contraste para o
diagnstico de doenas do fgado.








29
2.5 DETERMINAO DE GRAU DE PUREZA DE COMPOSTOS QUMICOS

2.5.1 - Padronizao e Calibrao

Os processos de calibrao e padronizao so importantes. A calibrao determina
a relao entre a resposta analtica e a concentrao do analito. Geralmente isso
realizado pelo uso de padres qumicos ( CROUCH, 2006).
A calibrao realizada obtendo-se o sinal de resposta como uma funo da
concentrao conhecida do analito. Uma curva de calibrao preparada colocando-se
os dados em forma de grfico ou ajustando-os por meio de uma equao matemtica
adequada. E validao feita utilizando para anlise um material de referncia padro,
ou seja, uma substncia vendida que tem certificado quanto a conter as concentraes
especificadas para um ou mais analitos (idem ibidem).

2.5.2 - Cromatografia Liquida de Alta Eficincia (HPLC)

A Cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao dos compostos de uma
mistura, realizada atravs da distribuio destes componentes entre duas fases, que esto
em contato ntimo. Uma das fases permanece estacionria enquanto a outra move-se
atravs dela. Durante a passagem da fase mvel sobre a fase estacionria, os
componentes da mistura so distribudos entre as duas fases, de tal forma que cada um
dos componentes seletivamente retido pela fase estacionria, resultando em migraes
diferenciais destes componentes (BONATO, et al. 1997) .
A Cromatografia Liquida de alta Eficincia uma das tcnicas analticas mais usadas
para separar compostos de uma amostra. Tambm conhecida por HPLC destaca-se por



30
sua alta sensibilidade, adequao na separao de vrias espcies de compostos, desde
no-volteis a termicamente frgeis e sua grande aplicabilidade a substncias de
interesse industrial e pblico (HOLLER et al, 2002).
A eficincia de uma coluna de HPLC deve aumentar
significantemente conforme o tamanho de partculas
decresce. Para obter vazes do eluente com fases
estacionrias com tamanhos de partcula de 2 a 10 m,
comuns na cromatografia lquida moderna, so
requeridas presses de bombeamento de at alguns
milhares de libras por polegada quadrada (psi). Como
conseqncia dessas altas presses, o equipamento
necessrio para HPLC tende a ser mais sofisticado e
caro do que os encontrados para outros tipos de
cromatografia (HOLLER et al, 2002).
O HPLC constitudo de:
Reservatrios de fase mvel e sistemas de tratamento de solventes: Todo
equipamento de HPLC conta com um ou mais reservatrios de vidro ou ao inoxidvel
para colocao dos solventes. Existem vrios meios de remoo de gases dissolvidos,
poeira e material particulado que podem interferir na eficincia do detector e tambm
evita-se danos nos sistemas de bombeamento, de injeo e entupimento da coluna (idem
ibidem).






31
Sistema de bombeamento: este sistema rigoroso e inclui a gerao de presso de
at 6000 psi (libras por polegada quadrada), sada com ausncia de pulso, velocidade de
fluxo variando de 0,1 a 10 mL/min., controle de fluxo e reprodutividade relativa de fluxo
de 0,5% ou maiores, e componentes resistentes a corroso (idem ibidem).
Sistema de injeo de amostra: quando a amostra j estiver diluda uns poucos
dcimos de micro litro, uma micro-seringa introduzida atravs de um septo de
elastmero auto-selante. Em injees por stop-flow, o fluxo do solvente interrompido
momentaneamente, um adaptador no topo da coluna removido e a amostra injetada
diretamente no incio da coluna (idem ibidem).
Colunas para Cromatografia Lquida: constitudas de ao inoxidvel ou de vidro (para
presses mais baixas) diferem entre si no tamanho e na fase estacionria.
Fases Estacionrias para colunas: o material com o qual a coluna preenchida,
podendo ser chamada tambm de recheio da coluna. As colunas preenchidas com as
partculas da fase estacionria so denominadas colunas empacotadas.
Detectores: tem um volume interno mnimo para reduzir o alargamento da banda,
existem os detectores no seletivos que detectam as propriedades tanto da fase mvel
quanto do soluto e os detectores seletivos que detectam as propriedades somente do
soluto (idem ibidem).

2.5.3 Espectroscopia de Ressonncia Magntica Nuclear (RMN)

Segundo BRUICE (2006) na sntese de uma substncia orgnica fundamental
confirmar a estrutura molecular da mesma. A tcnica instrumental da Espectroscopia por
Ressonncia Magntica auxilia na determinao estrutural, ou seja, identifica o esqueleto



32
carbono-hidrognio, e em muitos casos, pode ser utilizada para determinar a estrutura
inteira.
Nesta tcnica analtica os eltrons so carregados e giram em 2 estados de spin.
Alguns ncleos tambm possuem estados de spin + e - e essa propriedade permite
que eles sejam estudados por RMN, como so H
1
, C
13
, N
15
, Fe
19
e P
31
. Como os ncleos
de hidrognio (prtons) foram os primeiros ncleos estudados pela ressonncia
magntica nuclear, a designao RMN
1
H ressonncia magntica nuclear de
hidrognio e no caso de RMN
13
C ressonncia nuclear de carbono 13.

Estes ncleos carregados giram criando um campo magntico. Quando aplicado
um campo magntico sobre o ncleo giratrio da amostra em questo, tende a alinhar-se
a favor (estado de spin de menor energia) ou contra (estado de spin de maior energia)
o campo magntico.
Cada ncleo envolvido por uma nuvem de eltrons em movimento constante.
Sob a influncia do campo magntico, se foram esses eltrons a circularem no sentido
em que se opem ao campo. Isso possui o efeito de blindar parcialmente o ncleo de
receber a fora total do campo externo. Segue que se deve alterar um pouco quer a
freqncia quer o campo para ocasionar ressonncia no ncleo blindado (EWING,
1990).
O valor do deslocamento depende da vizinhana qumica do prton, pois essa a
fonte de variaes na blindagem por eltrons e se chama deslocamento qumico. Apesar
de se medir o deslocamento qumico como um campo ou uma freqncia, na verdade
uma razo da variao necessria do campo para campo aplicado ou da variao da
freqncia para a freqncia-padro designada por e definida em partes por milho
(idem ibidem).



33
A diferena de energia entre os estados de spins (alta energia) e (baixa
energia) depende da fora do campo magntico aplicado. Quanto maior a fora do
campo magntico no qual o ncleo exposto, maior a diferena de energia entre os
estados spins e . Para os magnetos disponveis atualmente apenas uma pequena
quantidade de energia necessria para excitar o spin.
Quando os ncleos retornam a seus estados de origem
emitem sinais eletromagnticos, cuja freqncia depende
da diferena de energia entre os estados de spins e . O
espectrmetro de RNM detecta esses sinais e os apresenta
como um registro de freqncia do sinal versus sua
intensidade, ou seja, refere-se ao giro de l para c do
ncleo entre os estados spins e em resposta a radiao
rf (radiofreqncia do espectro magntico).
(BRUICE, 2006).
Os espectrmetros atuais operam em uma freqncia operacional entre 60 e 900
MHz. Quanto maior esta freqncia operacional e mais forte o seu magneto, melhor a
resoluo (separao de sinais) do espectro de RMN.
Para fazer a leitura no RMN, dilui-se uma amostra de aproximadamente 0,5 ml de
solvente e coloca-se em um tubo de ensaio, o qual submetido em um campo magntico
poderoso, girando o tubo sobre seu eixo longitudinal. Estima-se a posio das molculas
no campo magntico e assim tem-se um grande nmero da resoluo do espectro (idem
ibidem).







34
2.5.4 Polarimetria e Disperso ptico-rotatria

Este instrumento pode ser utilizado na anlise de muitas substncias opticamente
ativas que podem apresentar ismeros pticos e solues racmicas. Estes equipamentos
so projetados para medir a atividade ptica e concentrao de solutos opticamente
ativos. Atuam atravs de microprocessador de medio contnua e automtica de leituras
atualizadas que feita por uma lmpada de halognio e filtros de interferncia, com o
uso de at cinco comprimentos de onda. O analisador est diretamente ligado a um
codificador ptico, garantindo alta preciso, linearidade e eliminao de problemas de
folga (BOBBIO, 1989).
Uma propriedade algumas vezes mostrada pela matria a sua capacidade para
polarizar a luz. Um feixe de radiao normal pode ser imaginado como um feixe de
ondas com seu movimento vibratrio distribudo sobre uma srie de planos, cada um
deles incluindo a linha de propagao (idem ibidem).
Vrias substncias transparentes que so caracterizadas por uma falta de simetria
em sua estrutura molecular ou cristalina apresentam a propriedade de girar o plano da
luz polarizada. Essas substncias so chamadas opticamente ativas. Provavelmente os
exemplos mais familiares so quartzo e acares, mas muitos outros compostos
orgnicos e inorgnicos tambm apresentam essa propriedade. A extenso que o plano
gira varia grandemente de um composto ativo para outro. Diz-se que a rotao
dextrgiro (+) se tiver sentido horrio para um observador que olha em direo fonte
de luz e levgiro (-), se for anti-horria. Para qualquer composto dado, a extenso da
rotao depende do nmero de molculas no caminho da radiao ou, no caso das
solues, da concentrao e do comprimento do recipiente. (EWING, 1990)




35
2.5.4.1 - Rotao Especfica

Para determinar a concentrao de substncias oticamente ativas preciso
conhecer a rotao especfica destas substncias. Quando o tubo polarimtrico est
vazio, com gua ou qualquer substncia oticamente inativa (sem carbono assimtrico), o
prisma analisador marcar 0, e com uma substncia oticamente ativa, o prisma
analisador gira at uma determinada posio, que correspondente ao nmero de graus
de que o plano de polarizao girado ( o ngulo ); valor este denominado de
rotao especfica. Este valor depende de fatores como:
- Concentrao da soluo no tubo,
- Comprimento do tubo polarimtrico,
- Temperatura da soluo,
- Comprimento de onda da luz utilizada,
- Solvente.
Portanto podemos definir mais precisamente rotao especfica como a rotao
em graus, produzida em um plano de luz polarizada por um grama de substncia,
dissolvido em 1 ml de soluo, quando o comprimento da cela do polarimetro dado em
d decmetros. Experimentalmente, so fixadas as trs ltimas variveis para se
determinar a rotao especifica (temperatura da soluo a 20 graus Celsius,
comprimento de onda da luz de sdio correspondente a linha D = 589,44nm e o
solvente preferencialmente usado gua). A figura 1 apresenta o esquema de um
polarmetro, onde (1) uma fonte de luz , (2) um filtro polarizador fixo , (3) um tubo
contendo a amostra (4), (6) um filtro polarizador para anlise , que (5) ao ser girado
registra o sentido levgiro (-) ou dextrgiro (+), e indica o ngulo em graus (de 0 a 180)
(EWING, 1990).



36


Figura 2 - Esquema de um polarmetro (EWING, 1990).

















37
3 - PROCEDIMENTO METODOLGICO

3.1 cido Lactobinico biotecnolgico da UCS

Produzida e fornecida pelo INBI/UCS, que tem a patente depositada no INPI sob
nmero 0700421-4.

3.1.1 Microrganismo

O microrganismo utilizado nos ensaios foi Zymomonas mobilis ATCC 29191
imobilizadas em alginato de sdio.

3.1.2 - Ensaios de biotransformao

Os ensaios de biotransformao foram realizados em reator de 500 mL, contendo
240 mL de soluo 0,7M de frutose/lactose e utilizando clulas de Zymomonas mobilis
imobilizadas. O sistema foi mantido a 39 C, sob agitao magntica e pH controlado
em 6,4 pela adio automtica de soluo de NaOH 7N, pois conforme vai ocorrendo
formao de cido lactobinico, o meio vai acidificando prejudicando a
biotransformao.

3.1.3 Medidas da atividade enzimtica

A atividade enzimtica de GFOR/GL foi determinada a partir da incubao de
determinado volume de suspenso de clulas permeabilizadas de Zymomonas mobilis,
correspondente concentrao de 4 g/L, em reator de 300 mL, contendo 100 mL de
soluo de carboidratos em concentraes variadas. O sistema foi mantido a 39 C, sob



38
agitao magntica, e pH automaticamente controlado em 6,4 pela adio de soluo de
NaOH 1N contida em pipeta de 5mL, acoplado a um controlador automtico de pH
(Consort modelo R735). Uma unidade de GFOR/GL (U) foi definida como a massa
(mol) de cido lactobinico formado por hora, sendo a atividade expressa em unidades
por grama de clulas secas (U/g).

3.1.4 Mtodo para separao do cido Lactobinico/ Sorbitol

Do caldo resultante do final do processo de bioconverso, foram retiradas as
clulas imobilizadas, permanecendo o sorbitol, o cido lactobinico e ainda residuos dos
substratos como frutose e lactose. Acrescenta-se lcool etlico 75 GL ao caldo, que
precipita o cido lactobinico e o sorbitol fica em suspenso. Esta soluo fica em
repouso por aproximadamente 12 horas a uma temperatura relativamente baixa (em
torno 0 C) para que a recuperao seja mais elevada. O precipitado contendo o cido
lactobinico separado e o processo repetido por mais duas ou trs vezes. Depois este
precipitado dessecado em dessecador com slica. E o sorbitol pode ser posteriormente
recuperado pela evaporao do lcool etlico.

3.2 Amostras de cido Lactobinico

Para as anlises comparativas do cido lactobinico produzido por processo
biotecnolgio da UCS foi utilizado o cido Lactobinico SIGMA

com grau de pureza

de 97%, sendo de grau primrio (lote 086k0887, nmero de referncia L 2398), amostra
de cido Lactobinico A, sem lote informado, que utilizado por uma empresa de
cosmticos como componente de alguns de seus produtos, e o cido Lactobinico B,



39
(lote LB7F022KO), comercializado por uma distribuidora de matrias-primas para
indstrias farmacuticas e para farmcias de manipulao,. Ambas so empresas de
renome e possuem certificao da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA).

3.3 Anlises Comparativas de Pureza

3.3.1 - Anlise de espectroscopia - RMN

Os espectros de RMN-
13
C foram obtidos em um aparelho de Varian AS-400
(400 MHz), do laboratrio do Departamento de Qumica da UFSC. Utilizou-se D
2
O
(gua deuterada) como solvente para todas as amostras analisadas, sendo uma
especificao do equipamento e o resfriamento interno foi feito pelos gases hlio e
nitrognio lquido. Os deslocamentos qumicos () so expressos em parte por milho
em relao ao solvente, neste caso especfico foi colocado algumas gotas de acetona
deuterada (C
3
D
6
O) para obter um ponto de calibrao dos deslocamentos qumicos no
que se refere aos sinais de
13
C. O sinal da acetona deuterada 29,68 29,80. As
determinaes dos sinais foram feitas por um sistema de computador ligado ao aparelho
de ressonncia magntica e o tempo gasto para cada amostra foi de 25 min.

3.3.2 - Anlise por cromatografia lquida de alta eficincia HPLC.

As anlises das amostras foram feitas utilizando um cromatgrafo lquido de alta
eficincia da marca Merck-Hitachi modelo D-7000 IF com detector de ndice de
Refrao da Marca Merck-Hitachi RI-71 e amostrador automtico marca Merck-Hitachi
modelo L-7100, do Laboratrio de Anlises Instrumental da UNIVILLE.



40
A coluna usada foi da marca Transgenomic com fase estacionria de poliestireno
com grupo funcional H
+
(prtons) modelo ICE-ION-300, acondicionada no forno da
marca Merck-Hitachi modelo L7100, a 70
0
C, por ser especfico para cido lactobinico
e foi calibrado para todos os picos possveis para outros acares que possam estar
presentes. O eluente usado foi cido sulfrico 8,5 mM (pH 1,80) por ser uma coluna
fortemente trocadora de prtons e injetado o volume da amostra de 20l.
Em 2007, PEDRUZZI et al. relatam um mtodo para avaliar as condies
experimentais para a completa separao e quantificao de misturas contendo cido
lactobinico, sorbitol, lactose e a frutose. Esta mistura aparece na bioconverso
enzimtica da lactose e a frutose catalisada pelas enzimas glicose-frutose oxidorredutase
(GFOR) e glucono- lactonase (GL) por clulas Zymomonas mobilis. A separao foi
realizada por cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC). Os principais parmetros
estudados foram o pH do eluente H
2
SO
4
0,450 mM (pH 3,1) e da temperatura da coluna
a 75
0
C, que teve forte influncia sobre a separao e pico de simetria.

3.3.2.1 Preparo das amostras para anlise em HPLC

A curva de calibrao foi feita utilizando com o padro primrio do cido
lactobinico da marca Sigma-Aldrich (lote 086k0887, nmero de referncia L 2398)
preparados a partir de 0,10g do cido lactobinico dissolvida em gua Milli-Q em balo
volumtrico de 20 mL, seguindo com uma srie de quatro diluies usando 5 ml da
diluio anterior dissolvidas tambm em gua Milli-Q em bales volumtricos de 20 ml.
As amostras A, B e UCS foram pesadas 0,05g aproximadamente e dissolvidas
com gua Milli-Q completadas at a marca de 50 ml em bales volumtricos. Estas
anlises foram feitas em duplicata.



41
3.3.4 - Polarimetria Disperso ptico-rotatria

Para as anlises de polarmetria foi utilizado um polarmetro da marca Schmidt &
Haensch, modelo Palatronic E, do Laboratrio de Engenharia Qumica da UFSC. O
polarmetro tem uma cela de 1,07 dm de caminho ptico. Para calibrar a cela foi usado
como solvente a gua destilada. Retirado o solvente e colocado a soluo de
concentrao conhecida, ou seja 0,5g/10 ml de cada amostra de cido lactobinico em
gua destilada. O comprimento de onda da luz incidente uma lmpada de vapor de
sdio cujo lambda igual a 589 nm. O processo iniciou-se quando foi colocado a cela no
equipamento, com tempo do processo 30 min por amostra. Os resultados foram obtidos,
com amostras em duplicata, usando a frmula de rotao especfica abaixo e
referenciada pelo The Merk Index 14 edio (2006).




Onde: C concentrao em g/ mL; c o comprimento da cela do polarmetro em
decmetros; abs a leitura da absorbncia e []
D
20
a disperso ptico-rotatria a
temperatura de 20 C.









42
3.3.5 Processamentos dos dados e anlise estatstica

Os dados foram armazenados em planilha utilizando-se o programa Excel-Office
2003, da Microsoft

. As anlises estatsticas foram realizadas no programa SigmaPlot

2001, verso 7.0 da SSPS Inc. Para verificao de significncia entre as amostras
utilizou-se o teste para comparao de mdias t-Student. Tais variveis so apresentadas
sob forma de mdia, desvio-padro e freqncia relativa (%). O nvel de significncia
adotado foi de 5%.




















43
4 - RESULTADOS E DISCUSSO

Neste captulo so apresentados e discutidos os resultados obtidos nos ensaios
realizados. Para todos os ensaios de avaliao comparativa foi utilizado o cido
Lactobinico da SIGMA

, grau primrio, lote 086k0887 e nmero de referncia L 2398.

Sua utilizao se deve, porque este foi o cido lactobinico referncia nos trabalhos
sobre vetorizao de frmacos mencionados na reviso bibliogrfica.
Neste trabalho no foi possvel obter revises bibliogrficas dos produtores de
cido lactobinico sobre o tipo de matrias primas utilizadas, o processo de produo
(catlise qumica ou processo biotecnolgico) e como ocorrem as etapas de purificao
dos mesmos.

4.1 Anlises de Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (HPLC)

Os ensaios descritos a seguir, tiveram a finalidade de verificar o comportamento
do cido lactobinico da UCS frente ao padro SIGMA

e em relao s diferentes
amostras comerciais quanto ao grau de pureza e a presena de diferentes compostos
oriundos dos processos de purificao que, eventualmente, pudessem causar problemas
na vetorizao de drogas.
Para esta anlise foi adotado o mtodo de cromatografia lquida de alta eficincia
(HPLC), conforme PEDRUZZI e colaboradores em 2007, anteriormente mencionado. A
curva de calibrao, apresentada na figura 2, demonstra que, em baixas concentraes os
cromatogramas apresentaram, alm do pico do cido lactobinico entre o tempo de
reteno 15 a 17 min, um segundo pico menor entre o tempo de reteno 18 a 20 min. E
em concentraes maiores observou-se a extino deste pico. Este fato pode ser



44
justificado porque os acares podem, em baixas concentraes, gerar misturas
racmicas ou de ismeros pticos.

0 5 10 15 20
-10
0
10
20
30
A
c

L
a
c
t
o
b
i

n
i
c
o
I
n
t
e
n
s
i
d
a
d
e
Tempo de Reteno / min

Figura 3 - Curva de Calibrao, utilizando 4 diluies do padro SIGMA

por
cromatgrafo lquido de alta eficincia (HPLC).

Nos experimentos para a determinao de grau de pureza por HPLC, foram feitas
anlises com oito amostras preparadas em duplicata de cada cido Lactobinico
disponvel, na relao peso(g) por volume (mL), nos quais foram observados os valores
tericos (calculados) e reais (dados pelo HPLC). As amostras foram preparadas como
descrito no item 3.3.2.1. Os cromatogramas esto no anexo e os resultados obtidos esto
abaixo na Tabela 1.




45
Tabela 1 - Comparao em base da massa de diferentes cidos lactobinico tendo
SIGMA como padro de referncia, obtidas por cromatografia lquida de alta
eficincia (HPLC).

SIGMA [g/L ] UCS [g/L] B [g/L] A [g/L ]
Amostra Terico real terico real Terico real terico Real
1,100 1,102 1,115 1,252 1,185 0,991 0,880 0,564
0,916 0,964 0,930 1,050 0,975 0,783 0,735 0,466
0,950 0,969 0,952 1,072 1,005 0,785 0,736 0,489
0,970 0,991 0,955 1,074 1,030 0,835 0,776 0,540
0,980 0,995 0,965 1,069 1,030 0,769 0,780 0,540
1,005 0,979 1,028 1,171 1,065 0,879 0,805 0,499
1,065 1,058 1,035 1,160 1,085 0,829 0,810 0,486
1
2
3
4
5
6
7
8 1,075 1,083 1,088 1,233 1,124 0,981 0,875 0,577
Mdia 1,008 1,018 1,009 1,135 1,062 0,857 0,800 0,520
despv 0,066 0,055 0,069 0,080 0,068 0,087 0,055 0,041
P value 0,553 0,992 0,005 0,005

Os resultados obtidos neste experimento demonstraram que o cido lactobinico
SIGMA apresenta uma diferena de 1% entre a amostra real e a amostra terica, esta
diferena no foi significante (p=0,553). O cido lactobinico da UCS apresentou
aproximadamente 12% de diferena entre as amostras terica e real, tambm no
demonstrou significncia (p=0,992) este fato pode ser justificado, uma vez que a curva
de calibrao foi feita com o padro SIGMA com apenas 97% de grau de pureza. A
anlise de significncia entre as amostra sugerem que estes sais no apresentam
substncias ismeras ou racmicas. Os cidos lactobinico B e A obtiveram uma
diferena entre o terico e o real de aproximadamente 80 e 65%, respectivamente.



46
E comparando com o SIGMA e UCS observou-se uma diminuio do valor real em
relao ao terico e demonstra uma diferena significativamente entre as amostras
(p 0,005 para ambas ). Estes dados sugerem a presena de outras substncias presentes
na amostras, sendo provavelmente substncias ismeras ou racmicas.
Figura 4 - Percentual de pureza real do cido lactobinico obtida por HPLC de
diferentes amostras, sendo o padro referncia SIGMA

.
Nos resultados obtidos por estas anlises, descontando a perda pela pureza do
padro, ficam evidentes as observaes anteriormente descritas (Tabela 1 e Figura 4),
demonstrando que o cido lactobinico, produzido pelo processo biotecnolgico
desenvolvido pela UCS, apresentou grau de pureza superior s demais amostras
utilizadas e inclusive, superior ao cido lactobinico SIGMA

, produto este referncia
na literatura cientfica para a vetorizao de drogas. Logo, o cido lactobinico da UCS
se torna uma alternativa vivel para a vetorizao de frmacos anti-tumorais.
Observa-se tambm que as amostras de cido lactobinico comerciais
apresentam grau de pureza inferiores, com provvel presena de outros compostos que
inviabilizam sua utilizao para a vetorizao de frmacos, porm, podendo ser



47
utilizados para outras especificidades farmacuticas na qual a presena de ismeros
pticos podem apresentar vantagens na sua aplicao.

4.2 Polarimetria e Disperso ptico-rotatria

O ensaio a seguir, teve como finalidade verificar a rotao ptica das amostras do
cido lactobinico provenientes Sigma, UCS, A e B em relao ao padro de rotao
ptica da literatura oficial do The Merk ndex 14 edio (2006).

Tabela 2 Avaliao do ndice refrativo obtido na polarimetria para diferentes cidos
lactobinico, tendo o The Merk ndex 14 edio (2006) []
D
20
+ 22,6
o
como referncia,
e suas diferenas percentuais.

cido Lactobinico
[]
D
20
Diferenas percentuais comparadas
com []
D
20
+ 22,6
o

SIGMA
+ 27,10
o

19 %
+ 22,50
o

0 % UCS
B
+ 24,86
o

10 %
A
+ 36,16
o

60 %

Segundo o The Merk Index 14 edio (2006) o ndice refrativo obtido na
polarimetria para o cido lactobinico em tempo final de []
D
20
+ 22,6
o
. Comparando
os resultados obtidos com a literatura oficial conforme a Tabela 2, a rotao ptica final
para cido Lactobinico da UCS foi de []
D
20
+ 22,5, o que comprova que sal UCS
no apresenta nenhuma substncia ismera ou racmica.
Ao analisarmos estes resultados com os outros cidos lactobinico estudados
pode se observar que o SIGMA obteve desvio ptico superior a 19% quando
comparado ao The Merck ndex (2006), este fato pode ser justificado porque esta



48
amostra possui 97% de grau de pureza. As amostras B a A apresentaram 10 e 60%
respectivamente, de presena de ismeros pticos, porm, estas anlises apenas
inviabilizam estes para a vetorizao de drogas, uma vez que os mesmos so utilizados
na rea de cosmticos na qual a presena de ismeros no interferem na sua utilizao.

4.3 Ressonncia Magntica Nuclear (RMN)

Os ensaios descritos a seguir, tiveram a finalidade de verificar o comportamento
do cido lactobinico da UCS frente ao padro SIGMA

e, em relao a possveis
diferenas estruturais e e, em comparao as amostras comerciais da possibilidade
de conter diferentes compostos oriundos dos processos de purificao, que
eventualmente pudessem causar problemas na vetorizao de drogas.
Correlao Heteronuclear
1
H
13
C de longa distncia com deteco de hidrognio:
HMBC, que tambm ocorre com deteco de hidrognio, utiliza os acoplamentos de
duas ou mais ligaes e d um espectro extremamente til. Nesta tcnica obtm-se
indiretamente as correlaes carbono-carbono e as correlaes entre carbonos
tetrassubstituidos e hidrognio prximos.
A interpretao do experimento HMBC requer um grau de flexibilidade, uma vez
que nem sempre encontramos o que estamos buscando. Atravs da tcnica acima
mencionadas poderemos determinar quais os cidos lactobinico que possuem as
estruturas na forma e , se eles esto puros ou na forma de misturas racmicas, ou
ainda com outras substncias que possuem atividade ptica.
Nos espectros das amostras do SIGMA, B e A aparecem sinais de
deslocamento qumicos dobrados, uma vez que h uma mistura de cido lactobinico



49
(cido 4-O--D-Galactopyranosil-d-gluconico) e Lactona (4-O--D-galactopyranosil-D-
glucono-1,5-lactona). Estas estruturas esto demonstradas nas figuras 5 e 6.



O
HO
HO
OH
OH
O
HO
OH OH
OH
O
OH
1
1'
2
2'
3
3'
4
4'
5
5'
6
6'

Figura 5 - Frmula estrutural do cido lactobinico e seus respectivos carbonos
(2,3,5,6-tetrahydroxy-4-(tetrahydro-3;4;5-tryhydroxy-6-(hydroxymethyl)-2H-pyran-2-
yloxy) heanoic.


O
O
O
HO
O
OH
OH
OH
OH
OH
HO
1
2
3
4
5
6
1'
2'
3'
4'
5'
6'
acid

Figura 6 - Frmula estrutural da Lactona e seus respectivos carbono (tetrahydroxy-3,4-
dihydroxy-6(hydroxymethyl)-5-(tetrahydro-3;4;5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)-2H -
pyran-2-yloxy)piyran-2-one.



50
Estes resultados so obtidos atravs dos espectros de deslocamentos do cido
lactobinico e da lactona em Espectros de RMN de
13
C (D
2
O, 400MHz, ppm) tendo
como padro interno acetona deuterada (C
3
D
6
O) apresentado na Tabela 3.

Tabela 3 - Espectros de deslocamentos do cido lactobinico observados em
RMN-
13
C

DESLOCAMENTOS QUMICOS
C1 178,50 ppm
C1 103,84 ppm
C2 72,91 ppm
C2 72,03 ppm
C3 69,00 ppm
C3 71,80 ppm
C4 72,91 ppm
C4 71,45 ppm
C5 71,45 ppm
C5 75,68 ppm
C6 62,25 ppm
C6 61,38 ppm
O
HO
HO
OH
OH
O
HO
OH OH
OH
O
OH
1
1'
2
2'
3
3'
4
4'
5
5'
6
6'



Os deslocamentos qumicos para a lactona foram retirados dos espectros de RMN das
amostras de A, B e SIGMA. Os sinais correspondentes a lactona provavelmente foram
aqueles que possuram o sinal de menor intensidade, j que, faz parte da impureza, mas
pode ser comprovado pela presena de 2 carbonos anomricos na intensidade
aproximada de 103,70 e 103,19 ppm, e com a presena de 24 picos, sendo alguns
sobrepostos.







51
176 168 160 152 144 136 128 120 112 104 96 88 80 72 64 56
Chemical Shift (ppm)
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
I
n
t
e
n
s
i
t
y
1
7
5
.
5
3
1
7
5
.
4
9
1
7
3
.
2
8
1
0
3
.
6
9
1
0
3
.
2
1
8
1
.
1
3
8
1
.
0
1
7
5
.
8
3
7
5
.
6
4
7
5
.
4
8
7
2
.
9
6
7
2
.
7
7
7
1
.
6
0
7
1
.
0
1
6
8
.
7
4
6
8
.
5
5
6
2
.
1
0
6
1
.
0
5
6
0
.
9
1
5
9
.
7
4
O
O H
O H
OH
OH
O
O H
OH OH
OH
O
OH
O
O
O
O H
O
OH
OH
OH
OH
OH
O H


Figura 7 - Espectros de RMN de
13
C do sal de cido lactobinico A (D
2
O, 400MHz,
ppm), padro interno C
3
D
6
O( acetona deuterada).
.
176 168 160 152 144 136 128 120 112 104 96 88 80 72 64 56
Chemical Shift (ppm)
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
I
n
t
e
n
s
i
t
y
1
7
5
.
6
0
1
7
3
.
3
8
1
0
3
.
8
5
1
0
3
.
6
7
1
0
3
.
6
4
1
0
3
.
1
7
8
1
.
2
6
8
1
.
1
9
8
0
.
9
1
7
5
.
7
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7
5
.
6
2
7
5
.
4
5
7
2
.
7
3
7
1
.
5
7
7
1
.
2
2
6
8
.
7
3
6
8
.
5
8
6
8
.
4
5
6
2
.
0
8
6
1
.
0
4
6
0
.
9
1
5
9
.
7
5
O
O H
O H
OH
OH
O
O H
OH OH
OH
O
OH
O
O
O
O H
O
OH
OH
OH
OH
OH
O H


Figura 8 - Espectros de RMN de
13
C do sal de cido lactobinico B (D
2
O, 400MHz,
ppm), padro interno C
3
D
6
O( acetona deuterada).




52
176 168 160 152 144 136 128 120 112 104 96 88 80 72 64 56
Chemical Shift (ppm)
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
I
n
t
e
n
s
i
t
y
1
7
5
.
5
1
1
7
3
.
3
1
1
0
3
.
6
6
1
0
3
.
1
8
8
0
.
9
7
8
0
.
3
5
7
5
.
6
2
7
5
.
4
6
7
1
.
7
6
7
1
.
5
8
7
0
.
9
8
6
8
.
7
3
6
2
.
0
7
6
1
.
0
4
5
9
.
7
2
O
O H
O H
OH
OH
O
O H
OH OH
OH
O
OH
O
O
O
O H
O
OH
OH
OH
OH
OH
O H


Figura 9 Espectros de RMN de
13
C do sal de cido lactobinico SIGMA (D
2
O,
400MHz, ppm), padro interno C
3
D
6
O( acetona deuterada).



Os dados para a amostra do cido lactobinico de UCS por sua vez, demonstra
um produto de alto grau de pureza, formado por um nico composto, que se caracteriza
como sendo o cido lactobinico. O espectro de
13
C mostra claramente os deslocamentos
qumicos somente do cido lactobinico com a presena de 12 picos apenas. O espectro
de
13
C mostra um deslocamento bem caracterstico em 103,84 ppm referente ao carbono
anomrico da ligao 1,4-Gluconosil, observado na Figura 10.



53
176 168 160 152 144 136 128 120 112 104 96 88 80 72 64 56
Chemical Shift (ppm)
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
I
n
t
e
n
s
i
t
y
1
7
8
.
6
6
1
0
3
.
8
4
8
1
.
9
2
7
5
.
6
8
7
2
.
9
2
7
1
.
4
6
6
9
.
0
1
6
2
.
2
6
6
1
.
3
8
O
O H
O H
OH
OH
O
O H
OH OH
OH
O
OH


Figura 10 Espectros de RMN de
13
C do cido Lactobinico obtido por processo
biotecnolgico da UCS (D
2
O, 400MHz, ppm), padro interno C
3
D
6
O (acetona
deuterada).

















54
5 CONCLUSO

Neste captulo so apresentadas as principais concluses deste trabalho. Bem
como algumas consideraes finais.
O cido Lactobinico produzido por processo biotecnolgico da UCS
possui grande potencial para a utilizao na vetorizao de drogas anti-
tumorais em virtude de seu alto grau de pureza, cadeia aberta e no ter a
presena de ismeros, observados em HPLC, polarimetria e por RMN.
O cido Lactobinico produzido por processo biotecnolgico da UCS foi
superior em qualidade (< 100%) quando comparado com padro
SIGMA (97%) referncia utilizado nos processos de vetorizao
descritos na literatura;
Os cidos Lactobinico comercializados no Brasil (A e B), que possuem
grau farmacutico, no se apresentam como viveis para vetorizao de
drogas em funo da presena de lactona, sub-produto este do processo
industrial de produo.
Apesar das amostras A e B no serem puras do ponto de vista qumico, podem ser
utilizadas para produtos dermocosmticos, pois a presena da lactona muito importante
para efeito umectante e antienvelhecimento, a qual estes produtos so utilizados e
vendidos.
Pode ainda ser estudado outras aplicabilidades para o cido lactobinico
biotecnolgico desenvolvido pela UCS. Bem como, a mdio e longo prazo, estudos de
desenvolvimento de vetores para drogas anti-tumorais utilizando-se deste cido
lactobinico.





55
6 - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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60
APNDICE


















D-7000 HSM: Samples Series: 0402 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
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Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
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Series:0402
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Vial Type: UNK
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Sample Description:
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2
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9
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,

c
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 12,71 2199331 0,000000 BB 43,493
2 15,99 c. Lactobinico 2857408 1,10222 BB 56,507
5056739 1,10222 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0402 Report: modified System: UNIVILLE
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D-7000HPLC SystemManager Report
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Processed: 04/12/09 08:42
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Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Sig 0,916 g/L
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Series:0402
Vial Number: 10
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
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2
,
7
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1
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0
3
,

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5
SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 12,74 2424852 0,000000 BB 49,003
2 16,03 c. Lactobinico 2500120 0,964396 BB 50,524
3 20,05 23401 0,000000 BB 0,473
4948373 0,964396 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0402 Report: modified System: UNIVILLE
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D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 01/07/09 14:57 Reported: 04/12/09 08:39
Processed: 04/12/09 08:38
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0402\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Sig 0,950 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0402
Vial Number: 5
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
1
2
,
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0
1
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
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V
)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 12,73 2470984 0,000000 BB 49,504
2 16,01 c. Lactobinico 2512644 0,969227 BB 50,339
3 19,96 Glicose 7820 0,000000 BB 0,157
4991448 0,969227 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0402 Report: modified System: UNIVILLE
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D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 01/07/09 15:49 Reported: 04/12/09 08:40
Processed: 04/12/09 08:40
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0402\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Sig 0,970 g/L
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Series:0402
Vial Number: 7
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
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Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 12,74 2354399 0,000000 BB 47,709
2 16,01 c. Lactobinico 2568268 0,990684 BB 52,043
3 19,91 Glicose 12217 0,000000 BB 0,248
4934884 0,990684 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0402 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 01/07/09 16:15 Reported: 04/12/09 08:41
Processed: 04/12/09 08:40
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0402\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Sig 0,980 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0402
Vial Number: 8
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
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Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 12,71 2275638 0,000000 BB 46,806
2 16,01 c. Lactobinico 2579914 0,995176 BB 53,064
3 19,92 Glicose 6340 0,000000 BB 0,130
4861892 0,995176 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0402 Report: modified System: UNIVILLE
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D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 01/07/09 13:39 Reported: 04/12/09 08:37
Processed: 04/12/09 08:36
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0402\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Sig 1,005 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0402
Vial Number: 2
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
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2
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
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Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 12,69 2392408 0,000000 BB 48,446
2 15,99 c. Lactobinico 2537087 0,978656 BB 51,376
3 19,91 Glicose 8764 0,000000 BB 0,177
4938259 0,978656 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0402 Report: modified System: UNIVILLE
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Analyzed: 01/07/09 14:05 Reported: 04/12/09 08:37
Processed: 04/12/09 08:37
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0402\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Sig 1,065 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0402
Vial Number: 3
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
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Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 12,69 2290556 0,000000 BB 45,470
2 15,99 c. Lactobinico 2742603 1,05793 BB 54,444
3 19,85 Glicose 4305 0,000000 BB 0,085
5037464 1,05793 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0402 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 01/07/09 14:31 Reported: 04/12/09 08:38
Processed: 04/12/09 08:37
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0402\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Sig 1,075 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0402
Vial Number: 4
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
1
2
,
6
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1
5
,
9
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,

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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
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Column Type: RP18 Developed by: gilmar
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Solvent A: gua
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Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
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Calculation Method: EXT-STD
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5077825 1,08277 100,000
Peak rejection level: 1500
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Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
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Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 10,96 3446919 0,000000 BB 48,612
2 16,03 c. Lactobinico 3245761 1,25202 BB 45,775
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4 22,39 1644 0,000000 BB 0,023
7090703 1,25202 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0401 Report: modified System: UNIVILLE
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D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 30/06/09 14:04 Reported: 04/12/09 08:49
Processed: 04/12/09 08:48
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0401\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Cx 0,93 g/L
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Series:0401
Vial Number: 5
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
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Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 12,73 3003026 0,000000 BB 50,742
2 16,01 c. Lactobinico 2721133 1,04965 BB 45,979
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5918216 1,04965 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0401 Report: modified System: UNIVILLE
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D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 30/06/09 15:21 Reported: 04/12/09 08:52
Processed: 04/12/09 08:51
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0401\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Cx 0,952 g/L
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Vial Number: 8
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
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Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 10,95 4164024 0,000000 BB 40,140
2 13,20 3092677 0,000000 BB 29,812
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10373805 1,07217 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0401 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 30/06/09 13:38 Reported: 04/12/09 08:48
Processed: 04/12/09 08:47
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0401\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Cx 0,955 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0401
Vial Number: 4
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
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2
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0
SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
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Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 10,91 8707373 0,000000 BB 55,411
2 13,03 3873739 0,000000 BB 24,651
3 16,01 c. Lactobinico 2783152 1,07357 BB 17,711
4 20,08 347421 0,000000 BB 2,211
5 22,40 2577 0,000000 BB 0,016
15714262 1,07357 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0401 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 30/06/09 13:12 Reported: 04/12/09 08:47
Processed: 04/12/09 08:46
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0401\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Cx 0,965 g/L
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Vial Number: 3
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
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Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 12,86 2905934 0,000000 BB 50,099
2 16,02 c. Lactobinico 2770438 1,06867 BB 47,763
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5800335 1,06867 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0401 Report: modified System: UNIVILLE
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D-7000HPLC SystemManager Report
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Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0401\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Cx 1,028 g/L
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Vial Number: 10
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
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Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 13,01 2796285 0,000000 BB 43,094
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6488758 1,17104 100,000
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D-7000 HSM: Samples Series: 0401 Report: modified System: UNIVILLE
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D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 30/06/09 12:46 Reported: 04/12/09 08:46
Processed: 04/12/09 08:45
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0401\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Cx 1,035 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0401
Vial Number: 2
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
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Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 12,61 2544268 0,000000 BB 43,980
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5784996 1,15991 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0401 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 30/06/09 15:47 Reported: 04/12/09 08:53
Processed: 04/12/09 08:52
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0401\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Cx 1,088 g/L
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Series:0401
Vial Number: 9
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
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N-Meth 1
Sens 10
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 12,92 3027092 0,000000 BB 46,373
2 16,03 c. Lactobinico 3196465 1,23300 BB 48,968
3 21,27 Frutose 304114 0,000000 BB 4,659
6527671 1,23300 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0405 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 03/07/09 11:14 Reported: 04/12/09 08:18
Processed: 04/12/09 08:17
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0405\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: San 1,185 g/L
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Series:0405
Vial Number: 4
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
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,
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1
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1
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
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- 10
0
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V
)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 11,01 364500 0,000000 BB 9,916
2 12,11 721520 0,000000 BB 19,628
3 12,67 20312 0,000000 BB 0,553
4 15,98 c. Lactobinico 2569572 0,991187 BB 69,903
3675904 0,991187 100,000
Peak rejection level: 1500
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System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: San 0,975 g/L
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Vial Number: 6
Vial Type: UNK
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Sample Description:
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2
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N-Meth 1
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Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 10,97 354020 0,000000 BB 7,693
2 12,65 2217880 0,000000 BB 48,195
3 15,97 c. Lactobinico 2029962 0,783037 BB 44,112
4601862 0,783037 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0405 Report: modified System: UNIVILLE
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D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 03/07/09 11:40 Reported: 04/12/09 08:18
Processed: 04/12/09 08:18
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0405\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: San 1,005 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0405
Vial Number: 5
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
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1
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 11,01 359566 0,000000 BB 11,628
2 12,16 679844 0,000000 BB 21,986
3 12,69 18356 0,000000 BB 0,594
4 16,00 c. Lactobinico 2034392 0,784746 BB 65,792
3092158 0,784746 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0405 Report: modified System: UNIVILLE
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D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 03/07/09 12:32 Reported: 04/12/09 08:20
Processed: 04/12/09 08:19
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0405\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: San 1,030 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0405
Vial Number: 7
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 10,98 351024 0,000000 BB 7,514
2 12,67 2154781 0,000000 BB 46,127
3 15,98 c. Lactobinico 2165650 0,835378 BB 46,359
4671455 0,835378 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0405 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 03/07/09 10:22 Reported: 04/12/09 08:16
Processed: 04/12/09 08:16
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0405\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: San 1,030 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0405
Vial Number: 2
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
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0
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N-Meth 1
Sens 10
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Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 11,01 411127 0,000000 BB 12,915
2 12,11 757597 0,000000 BB 23,800
3 12,67 16297 0,000000 BB 0,512
4 15,99 c. Lactobinico 1994213 0,769248 BB 62,648
5 19,99 Glicose 3990 0,000000 BB 0,125
3183224 0,769248 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0405 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 03/07/09 09:56 Reported: 04/12/09 08:15
Processed: 04/12/09 08:14
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0405\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: San 1,065 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0405
Vial Number: 1
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 10,26 12785 0,000000 BB 0,363
2 11,03 402266 0,000000 BB 11,429
3 12,09 806966 0,000000 BB 22,928
4 12,67 17795 0,000000 BB 0,506
5 15,99 c. Lactobinico 2279808 0,879413 BB 64,774
3519620 0,879413 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0405 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 03/07/09 10:48 Reported: 04/12/09 08:17
Processed: 04/12/09 08:16
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0405\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: San 1,085 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0405
Vial Number: 3
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
1
1
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0
1
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 11,01 394780 0,000000 BB 11,822
2 12,11 778827 0,000000 BB 23,323
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4 15,98 c. Lactobinico 2149962 0,829326 BB 64,384
3339254 0,829326 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0405 Report: modified System: UNIVILLE
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D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 03/07/09 12:58 Reported: 04/12/09 08:21
Processed: 04/12/09 08:20
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0405\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: San 1,124 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0405
Vial Number: 8
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
1
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 10,99 349188 0,000000 BB 6,976
2 12,69 2113513 0,000000 BB 42,221
3 15,99 c. Lactobinico 2543097 0,980974 BB 50,803
5005798 0,980974 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0403 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 02/07/09 12:18 Reported: 04/12/09 08:30
Processed: 04/12/09 08:29
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0403\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Acros 0,880 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0403
Vial Number: 5
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
1
1
,
0
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1
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1
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N-Meth 1
Sens 10
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Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 11,00 390426 0,000000 BB 14,846
2 12,13 721024 0,000000 BB 27,417
3 12,65 9275 0,000000 BB 0,353
4 13,95 23374 0,000000 BB 0,889
5 15,97 c. Lactobinico 1461554 0,563780 BB 55,576
6 20,09 22250 0,000000 BB 0,846
7 21,12 Frutose 1915 0,000000 BB 0,073
2629818 0,563780 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0403 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 02/07/09 11:01 Reported: 04/12/09 08:33
Processed: 04/12/09 08:32
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0403\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Acros 0,735 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0403
Vial Number: 2
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
1
1
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0
1
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Ret ent i on Ti me ( mi n)
0
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 11,01 396509 0,000000 BB 16,895
2 12,17 706320 0,000000 BB 30,096
3 12,67 7664 0,000000 BB 0,327
4 13,94 14863 0,000000 BB 0,633
5 15,99 c. Lactobinico 1207643 0,465836 BB 51,457
6 20,14 12309 0,000000 BB 0,525
7 21,13 Frutose 1586 0,000000 BB 0,068
2346894 0,465836 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0404 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
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Processed: 04/12/09 08:25
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0404\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Acros 0,736 g/L
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Series:0404
Vial Number: 9
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
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1
0
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9
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2
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0
SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
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0
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Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 10,98 346545 0,000000 BB 9,036
2 12,65 2176408 0,000000 BB 56,747
3 13,94 24574 0,000000 BB 0,641
4 15,98 c. Lactobinico 1266843 0,488672 BB 33,031
5 20,10 20887 0,000000 BB 0,545
3835257 0,488672 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0404 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 02/07/09 13:40 Reported: 04/12/09 08:25
Processed: 04/12/09 08:24
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0404\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Acros 0,776 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0404
Vial Number: 8
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
1
0
,
9
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,
9
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1
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Ret ent i on Ti me ( mi n)
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 10,98 370714 0,000000 BB 9,126
2 12,66 2256628 0,000000 BB 55,555
3 13,93 21970 0,000000 BB 0,541
4 15,98 c. Lactobinico 1399121 0,539697 BB 34,444
5 20,09 11779 0,000000 BB 0,290
6 21,13 Frutose 1764 0,000000 BB 0,043
4061976 0,539697 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0403 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 02/07/09 13:10 Reported: 04/12/09 08:28
Processed: 04/12/09 08:28
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0403\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Acros 0,780 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0403
Vial Number: 7
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
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0
,
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 10,99 364564 0,000000 BB 9,460
2 12,67 2049637 0,000000 BB 53,185
3 13,96 18926 0,000000 BB 0,491
4 15,99 c. Lactobinico 1400868 0,540371 BB 36,351
5 20,11 18013 0,000000 BB 0,467
6 21,11 Frutose 1766 0,000000 BB 0,046
3853774 0,540371 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0403 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 02/07/09 10:35 Reported: 04/12/09 08:34
Processed: 04/12/09 08:33
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0403\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Acros 0,805 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0403
Vial Number: 1
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
1
1
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1
1
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6
SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Ret ent i on Ti me ( mi n)
0
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 11,01 395678 0,000000 BB 15,759
2 12,13 786599 0,000000 BB 31,328
3 12,64 7405 0,000000 BB 0,295
4 13,97 17624 0,000000 BB 0,702
5 15,98 c. Lactobinico 1293280 0,498870 BB 51,508
6 20,06 10235 0,000000 BB 0,408
2510821 0,498870 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0403 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 02/07/09 11:52 Reported: 04/12/09 08:32
Processed: 04/12/09 08:31
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0403\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Acros 0,810 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0403
Vial Number: 4
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
1
1
,
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0
1
2
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1
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1
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9
SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Ret ent i on Ti me ( mi n)
0
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 11,00 404210 0,000000 BB 16,883
2 12,15 683576 0,000000 BB 28,551
3 12,65 8713 0,000000 BB 0,364
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5 15,99 c. Lactobinico 1259906 0,485996 BB 52,622
6 20,09 19016 0,000000 BB 0,794
2394246 0,485996 100,000
Peak rejection level: 1500
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D-7000 HSM: Samples Series: 0403 Report: modified System: UNIVILLE
Page Indicator 1 / 6
D-7000HPLC SystemManager Report
Analyzed: 02/07/09 12:44 Reported: 04/12/09 08:29
Processed: 04/12/09 08:28
Data Path: C:\Win32App\HSM\samples\DATA\0403\
Processing Method: LACTOBI|NICO
System(acquisition): UNIVILLE
Application: Samples
Sample Name: Acros 0,875 g/L
Injection from this vial: 1 of 1
Series:0403
Vial Number: 6
Vial Type: UNK
Volume: 20,0 ul
Sample Description:
Chrom Type: HPLC Channel : 2
1
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,
9
9
1
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3
1
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SAMP 200 SAMP 400
N-Meth 1
Sens 10
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24
Ret ent i on Ti me ( mi n)
0
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)
Acquisition Method: LACTOBI|NICO
Column Type: RP18 Developed by: gilmar
Pump A Type: L-7100
Solvent A: gua
Solvent B: H2SO4 8,5 mN
Solvent C: Solvent D:
Method Description: Mtodo para determinar cidfo lactobinico. Coluna
transgenomiuc IC Sep ICE-ION-300, eluente H2SO4 8,5 mN.
Curva de calibrao srie 399 e cpia na srie 400.
Chrom Type: HPLC Channel : 2
Peak Quantitation: AREA
Calculation Method: EXT-STD
No. RT Name Area Conc 1 BC Area %
g/L
1 10,99 364183 0,000000 BB 14,003
2 12,13 678785 0,000000 BB 26,100
3 12,63 10544 0,000000 BB 0,405
4 13,93 24983 0,000000 BB 0,961
5 15,97 c. Lactobinico 1496641 0,577314 BB 57,548
6 20,09 23899 0,000000 BB 0,919
7 21,14 Frutose 1643 0,000000 BB 0,063
2600678 0,577314 100,000
Peak rejection level: 1500
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Catalogao na publicao pela Biblioteca Universitria da Univille

Valle, Ticiana Alexandra
V181a cido lactobinico produzido por zymomonas mobilis : uma alternativa para
vetorizao de drogas / Ticiana Alexandra Valle ; orientador Gilmar Sidnei
Erzinger ; co-orientador Dr. Marco Fabio Mastroeni Joinville: UNIVILLE, 2010.

93 f. : il. ; 30 cm

Orientador: Gilmar Sidnei Erzinger
Co-orientador: Marco Fabio Mastroeni
Dissertao (Mestrado em de Sade e Meio Ambiente
Universidade da Regio de Joinville

1. cido lactobinico. 2. cido lactobinico biotecnolgico. 3.
Zymomonas mobilis. 4. Bioqumica. I. Valle, Ticiana Alexandra. II.
Mastroeni, Marco Fabio. III. Ttulo.

CDD 572