Centro Universitrio de Braslia

Faculdade de Cincias da Sade

Biotecnologias em reproduo assistida

na preservao de animais silvestres em extino

LUCIANA MIRANDA MATTOS

Braslia - 2001

Centro Universitrio de Braslia

Faculdade de Cincias da Sade
Licenciatura em Cincias Biolgicas

Biotecnologias em reproduo assistida

na preservao de animais silvestres em extino

Luciana Miranda Mattos

Monografia apresentada Faculdade de

Cincias da Sade do Centro Universitrio de
Braslia como parte dos requisitos para
obteno do grau de Licenciado em Cincias
Biolgicas.

Orientador: Prof: Cludio Henrique Cerri e Silva

Braslia - 2001
2

RESUMO
Este trabalho prope uma abordagem da importncia da conservao e as
biotcnicas que podem ser utilizadas para a preservao e reproduo de animais que
se encontram em perigo de extino. Hoje as biotecnologias utilizadas em vrios
pases do mundo, inclusive no Brasil para reproduo assistida de diversas espcies
de animais silvestres so: Inseminao Artificial, Transferncia de Embries,
Fecundao in vitro, Criopreservao, Injeo Intracitoplasmtica de Espermatozide,
Clonagem, Isolamento de Folculos Pr-Antrais. A reproduo assistida tornou-se o
tratamento de escolha para muitos problemas que afetam a fertilidade animal. A
diversidade biolgica a chave para a manuteno da vida como ns a conhecemos e
no h dvidas que a destruio do habitat o principal fator responsvel pela
reduo da biodiversidade, ou no nmero total de espcies que coexistem no planeta.
O

rpido

crescimento

extradiornariamente

dos

locais

de

populaes

humanas

pressiona

o ecossistema, provocando destruio ambiental em grande

escala, fragmentao do habitat e da populao.

SUMRIO
1. Introduo.............................................................................................................5
2. A extino..............................................................................................................6
3. Espcies em perigo................................................................................................8
4. Aumenta a preocupao.......................................................................................9
5. Preservao X Extino......................................................................................11
6. Ajuda Internacional............................................................................................11
7. Animais em Perigo X Animais em Extino.....................................................12
8. Como resolver o problema..................................................................................13
9. Interveno humana A reproduo assistida.................................................13
10. Processo natural de fertilizao..........................................................................14
10.1.

O ovcito..............................................................................................14

10.2.

O espermatozide.................................................................................14

10.3.

Fertilizao...........................................................................................15

10.4.

Principais causas da infertilidade do macho........................................16

11. A Biotecnologia....................................................................................................17
11.1.

A cincia precursora.............................................................................17

12. Biotecnologias da Reproduo Animal..............................................................18

12.1.

Insemino Artificial (IA) ...................................................................18

12.2.

Fertilizao in vitro (FIV) ...................................................................20

12.3.

Transferncia de embries (T.E.) ou Inovulao...............................23.

12.3.1 Transferncia no-cirrgica...............................................................25

12.3.2. Transferncia cirrgica.......................................................................25
12.4.

Criopreservao ou Vitrificao...........................................................26

12.5.

Injeo Intracitoplasmtica de Espermatozide (ICSI) .......................28

12.6.

Clonagem Transferncia de Ncleo..................................................30

12.6.1. Clonagem somtica............................................................................32

12.7.

Isolamento de Folculos Pr-Antrais (FOPA) .....................................33

13. Uma arca para a salvao...................................................................................34

14. Projeto Arca de No............................................................................................35
14.1.

BBGA Banco Brasileiro de Germoplasma Animal..........................35

15. Concluso.............................................................................................................37
16. Referncias Bibliogrficas..................................................................................38
4

1. INTRODUO
Hoje, milhares de espcies de animais silvestres em todo o mundo esto
correndo o risco de desaparecerem ou j se encontram extintos, existindo apenas
exemplares confinados em cativeiros particulares ou pblicos. Poucas dessas espcies
que se encontram nestas condies so capazes de se reproduzir ou dar origem a
indivduos aptos para a perpetuao da espcie. Aqueles que passam no teste da
reproduo em cativeiro, mal conseguem serem introduzidos em seu ambiente natural
(Martho & Martho, 1993).
Na maioria das vezes estes animais, que ajudam a aumentar a lista dos que
esto desaparecendo, so de rara beleza, sendo muito cobiados por colecionadores,
circos, traficantes entre outros. Como exemplos temos grandes felinos como a onapintada e o tigre de bengala, aves como a arara azul, o urso panda e muitos outros
(Martho & Martho, 1993).
As razes que justificam a preservao de pequenas populaes ameaadas de
extino tm sido destacadas em inmeros documentos e projetos de organismos
nacionais e internacionais. Animais desconhecidos pela cincia, esto desaparecendo
mesmo antes de terem sido estudadas (Bem et al., 1994).
A biotecnologia e a tecnologia de reproduo assistida, tm sido aplicadas
com sucesso para diversas espcies e so claros os benefcios para produo animal,
bem como para a biologia de conservao (Solti et al., 2000).
O objetivo desde trabalho apresentar biotecnologias da reproduo que
podem e esto sendo usadas para a multiplicao de animais silvestres em cativeiro e
que esto em vias de extino devido ocupao humana.

2. A EXTINO
A caa ou pesca excessivas podem levar as espcies extino, pois a
capacidade de crescimento de uma populao depende do nmero de indivduos
capazes de se reproduzir. medida que esse nmero diminui, decresce a taxa de
crescimento da populao. Assim sendo, a caa ou a pesca excessivas podem reduzir
de tal forma uma populao, que sua taxa reprodutiva torna-se menor que a taxa de
mortalidade natural. Quando isso ocorre, mesmo que a caa e a pesca sejam
suspensas, a populao entra em declnio e levada extino. Uma espcie
considerada extinta quando no avistada na vida selvagem por 50 anos. As espcies
ameaadas de extino so aquelas que correm risco de ser extintas caso nada mude
em suas atuais circunstncias (Martho & Martho, 1993).
O tamanho mnimo que uma populao pode atingir sem se extinguir varia,
naturalmente, de espcie para espcie. Depende da sua capacidade reprodutiva, da sua
vulnerabilidade s influncias do meio e do tempo de durao de seu ciclo vital, entre
outras coisas. Das espcies que o homem caa atualmente, muitas esto ameaadas de
extino por suas populaes estarem atingindo o tamanho necessrio recuperao.
Outras, mesmo que a caa pare, j no tero capacidade de se recuperar e, fatalmente,
extinguir-se-o (Martho & Martho, 1993).
Esses problemas esto ocorrendo atualmente com a pesca. O mar, para a
maioria das pessoas, representa uma fonte inesgotvel de alimento. Industriais,
economistas e governantes no encaram o mar como um ecossistema, onde as
populaes esto equilibradas e tm tamanho finito; no respeitam as opinies dos
bilogos, que afirmam que o aumento do esforo de pesca levar diminuio da
quantidade de pescado. Para muitas pessoas, parece absurdo afirmar que o aumento
do nmero de barcos pesqueiros possa levar diminuio da pesca. No entanto, se
lembrarmos que as populaes tm seu tamanho regulado por um sem-nmero de
fatores, percebemos como verdadeira essa afirmao. Muitos pases, cuja economia
baseada em grande parte na pesca, j comeam a sentir os efeitos da pesca
indiscriminada (Martho & Martho, 1993).
Um exemplo que pode mostrar os limites dos recursos do mar o da pesca de
baleias. Em 1933, foram capturadas 28.907 baleias. Em 1966, esse nmero subiu a
57.891. Das vrias espcies apanhadas, a preferida era a baleia azul, que apresentava
maior tamanho. Por volta da dcada de 50, entretanto, o nmero de baleias azuis

diminuiu muito e passou-se a apanhar tambm as espcies menores. A pesca

continuou, e os estoques de baleias declinaram rapidamente. Em 1960, um grupo de
bilogos foi nomeado pela Comisso Internacional da Baleia (ICW) para estudar a
situao das populaes das baleias antrticas. Em seu relatrio, os bilogos previam
que se a pesca ilimitada continuasse, no perodo de 63-64 seriam apanhadas 8.500
unidades de baleia azul. Pretendiam que fossem estabelecidos limites pequenos para a
pesca, no entanto, o limite foi de 10.000 unidades, mas apenas 8.429 foram
capturadas. Alguns pases, como Holanda e Noruega, j abandonaram a pesca de
baleias. Mesmo que a pesca fosse completamente paralisada, provvel que muitas
das espcies de baleias no consigam evitar a extino (Martho & Martho, 1993).
A extino de certas espcies pela caa pode levar, indiretamente, ao prejuzo
de outras populaes. Um exemplo disso ocorreu com a populao de veados do
Arizona, E.U.A. (Martho & Martho, 1993).
A populao que habitava o planalto de Kaibab, antes de 1907, era estvel,
oscilando em torno de 4.000 animais. Esse nmero de veados era inferior
capacidade da pastagem e seu nmero era mantido pelas populaes de predadores
que viviam na regio, como por exemplo, os pumas e coiotes (Martho & Martho,
1993).
Uma campanha para aumentar a populao de veados constitui em eliminar os
predadores. O sucesso foi to grande que, em 1924, a populao de veados chegava
cerca de 100.000 animais. Aconteceu o que no tinha sido previsto: tal populao,
superior capacidade da pastagem, morreu em massa devido falta de alimento. Em
1939, a populao de veados estava abaixo de 10.000 indivduos e o pasto ainda era
insuficiente, pois, em virtude do pisoteamento e pastagem excessiva, entrou em
declnio. Dessa maneira a falta de alimento acabou por matar mais veados de fome do
que o faziam seus predadores naturais (Martho & Martho, 1993).
Um dos exemplos de total extino de espcies relativo aos chamados
Dodos (Fig. 1). Os Dodos eram aves que viviam em ilhas do oceano ndico. O
verdadeiro Dodo, Raphus cucullatus, habitava a ilha Maurcio e extinguiu-se por
volta de 1680. Outras duas espcies aparentadas ao Dodo extinguiram-se entre 1750 e
1800, nas ilhas Reunio e Rodriguez (Martho & Martho, 1993).
De acordo com as descries e figuras da poca, alm de uns poucos vestgios
de esqueletos, o Dodo era uma ave grande, do tamanho aproximado de um peru e
com uma cabea grande, dotada de bico recurvado (Martho & Martho, 1993).

Fig. 1

Desenho de duas espcies de pssaros Dodos. esquerda, Raphus

cucullatus, que habitou a ilha Maurcio. direita, Raphus solitarius, que viveu
na ilha Reunio. Ambas so espcies extintas.
Fonte: Amabis (1990).

Sua extino deveu-se aos seguintes fatores: a caa movida pelos marinheiros
holandeses, que os usavam como alimento, e a introduo de porcos e macacos na
ilha. Os porcos atacavam os ninhos das aves, construdos no cho, e comiam os
filhotes, e os macacos consumiam seus ovos (Martho & Martho, 1993).
Embora no se tenha notcia, neste caso, de que o desaparecimento dos Dodos
tenha causado qualquer transtorno ecolgico, a extino de uma espcie, como esta,
no deixa de constituir, pelo menos, uma agresso s geraes futuras. Fomos
privados do nosso direito de conhecer os Dodos, assim como as geraes que nos
sucedero sero privadas, talvez, de conhecer animais como elefantes e baleias
(Martho & Martho, 1993).

3. ESPCIES EM PERIGO
Existem animais em vastos continentes que tambm esto em perigo de
extino. o caso dos tigres, que antes vagavam pela Rssia. S a subespcie amur
resta agora na Sibria, e sua populao j diminuiu para apenas 180 a 200
exemplares. Consta que os tigres do sul da China no passam de 30 a 80. Na
Indochina, esses animais correm o risco de serem extintos dentro de dez anos. Na
ndia, habitat de aproximadamente dois teros dos tigres do planeta, as autoridades
8

calculam que essas majestosas criaturas podero ser extintas em uma dcada (URL
www.maara.gov.br).
O nmero de rinocerontes e guepardos est em declnio. Na China, os pandasgigantes vagam em grupos de apenas dez animais. A marta vulgar est quase extinta
no Pas de Gales, e o esquilo comum "pode desaparecer da Inglaterra e do Pas de
Gales nos prximos 10 a 20 anos", diz The Times. Do outro lado do Atlntico, nos
Estados Unidos, o morcego o mamfero terrestre mais ameaado de extino (URL
www.maara.gov.br).
A situao nos oceanos no menos desoladora. The Atlas of Endangered
Species (Atlas das Espcies em Extino) classifica as tartarugas marinhas de "talvez
o grupo mais ameaado de extino" dentre as criaturas marinhas. Os anfbios
parecem estar em melhor situao; no entanto, 89 espcies de anfbios chegaram a
estar em "perigo de extino" nos ltimos 25 anos. Cerca de 11% das espcies de
aves no planeta tambm esto ameaadas de extino (URL www.maara.gov.br).
E as criaturas menores, como as borboletas? A situao semelhante. Mais de
um quarto das 400 espcies de borboleta na Europa esto em perigo, 19 das quais
acham-se ameaadas de extino iminente. A enorme Nymphalis polychloros, uma
borboleta da Gr-Bretanha, juntou-se ao Dodo, em 1993, na lista de espcies extintas
(URL www.maara.gov.br).

4. AUMENTA A PREOCUPAO

Quantas espcies se tornam extintas todo ano? A resposta depende do

especialista consultado. Embora nisso haja divergncia entre os cientistas, todos
aceitam o fato de que muitas espcies esto em perigo de extino. O ecologista
Stuart Pimm diz: "A controvrsia em torno da rapidez com que estamos perdendo
espcies fundamentalmente um debate sobre o nosso futuro." E ainda: "Nos ltimos
sculos, aceleramos a taxa de extino das espcies, deixando-a bem alm da taxa
natural.

Nosso

futuro

ser

mais

pobre

em

conseqncia

disso"

(URL

www.maara.gov.br).

Nosso planeta, a Terra, como uma casa. Algumas das pessoas que se
importam com as espcies ameaadas de extino estudam ecologia, termo cunhado
em fins do sculo XIX, a partir da palavra grega oikos, "uma casa". Esse campo de
interesse focaliza as relaes entre os seres vivos e o meio ambiente. No sculo XIX
surgiu um crescente interesse pela preservao das espcies, provavelmente
intensificado por relatos sobre a extino de certas espcies. Nos Estados Unidos, isso
levou criao de parques nacionais e reas protegidas que so verdadeiros
santurios para os animais. Atualmente, calcula-se que existam no mundo todo 8.000
reas de proteo da vida selvagem reconhecidas em nvel internacional. Junto com
outros 40.000 locais que ajudam a preservar o habitat, elas constituem
aproximadamente 10% da superfcie terrestre do planeta (URL www.maara.gov.br).

Fig. 2. guia Americana: espcie j esteve ameaada de extino.

Fonte: Compugrafic (2000).

Muitos interessados nessa questo agora aderem s chamadas causas verdes,

quer em movimentos que divulgam as ameaas de extino, quer em movimentos que
simplesmente instruem as pessoas a respeito da interdependncia dos seres vivos. E,
desde a Cpula da Terra, realizada no Rio de Janeiro em 1992, uma das
caractersticas gerais da poltica dos governos uma maior conscientizao em torno
das questes ambientais (URL www.maara.gov.br).
O problema da extino das espcies global e est crescendo. Mas por qu?
Ser que alguma das tentativas de impedir a extino de certas espcies, como a guia
Americana da Fig. 2, est sendo bem-sucedida? E o futuro? Os artigos que se seguem
daro respostas a essas perguntas.
10

5. PRESERVAO VERSUS EXTINO

A Batalha entre preservao e extino continua intensa. Muitas entidades de

proteo aos animais pressionam os governos a adotar leis de preservao mais
rigorosas,

para

proteo

das

espcies

ameaadas

de

extino

(URL

www.maara.gov.br).
Recentemente, por exemplo, vrios grupos reuniram-se com autoridades
chinesas e conseguiram sua cooperao em esforos para pr fim captura dos ursos
negros tibetanos. Esses animais eram capturados para a extrao da blis e da vescula
biliar, utilizadas na medicina tradicional do Oriente (URL www.maara.gov.br).

6. AJUDA INTERNACIONAL
Proteger uma espcie num pas, mas ca-la at extino em outros lugares,
um mau sinal no que diz respeito sua preservao. por esse motivo que os
acordos internacionais vieram na hora certa. A Conveno Sobre Biodiversidade, o
Tratado do Rio, entrou em vigor no fim de 1993. Alguns dias depois passou a vigorar
o Acordo Para a Preservao dos Morcegos na Europa. A Comisso Internacional
da Baleia criou um santurio de baleias no oceano Antrtico, alm do que j existia
no oceano ndico, no esforo de proteger baleias grandes e baleias mink. Mas o
acordo de mais peso talvez seja a Conveno Sobre Comrcio Internacional de
Espcies Ameaadas de Extino. uma arma poderosa na luta contra o trfico ilegal
de espcies em extino. Peles de leopardo, presas de elefante, ossos de tigre, chifres
de rinoceronte e tartarugas so alguns dos produtos cujo comrcio est proibido. O
acordo inclui ainda madeira e peixes tambm ameaados de extino (URL
www.maara.gov.br).
O homem ainda tem muito a aprender sobre a relao de uma criatura com
outras no reino animal. Os pescadores da frica Oriental que introduziram a percado-nilo no lago Vitria, a fim de incrementar suprimentos de alimento,
desencadearam o que o zologo Colin Tudge chamou de "o maior desastre ecolgico
deste sculo". Cerca de 200 das 300 espcies de peixes nativos daquele lago foram
extintas. Embora recentemente se tenham apresentado provas que pe na eroso do
11

solo a culpa pelos transtornos causados ao equilbrio das espcies, agora os governos
dos trs pases, que tm fronteiras no lago, criaram uma organizao cujo objetivo
determinar que espcies de peixe podem ser introduzidas no lago sem pr em perigo
as espcies nativas (URL www.maara.gov.br).

7. ANIMAIS EM PERIGO X ANIMAIS EM EXTINO

Os animais em perigo nem sempre esto necessariamente ameaados de
extino. Segundo o livro Endangered Species-Elephants (Espcies em Extino:
Elefantes), entre 1979 e 1989, o nmero de elefantes africanos diminuiu de 1.300.000
para 609.000, parte disso em resultado da caa ilegal para a extrao do marfim. Em
seguida, a presso do pblico pela proibio do comrcio do marfim aumentou. No
entanto, a oposio proibio do comrcio de marfim ficou clamorosa (URL
www.maara.gov.br).
Tanto no Zimbbue como na frica do Sul, a poltica de preservao foi to
bem-sucedida que os parques nacionais e reservas ecolgicas ficaram com um
nmero demasiadamente grande de elefantes. Na regio do Zimbbue foi preciso
remover 5.000 elefantes do Parque Nacional de Hwange. A recomendao de grupos
conservacionistas era a transferncia dos animais. As autoridades dos parques
puseram os elefantes excedentes venda e sugeriram que as entidades ocidentais que
se opunham a que eles fossem sacrificados 'pusessem a mo na massa,
financeiramente falando, e os transferissem' (URL www.maara.gov.br).
S que ocorrem falhas. Muita gente se mostra preocupada com a situao
difcil das espcies reintegradas na vida selvagem. O tigre-siberiano sobrevive bem
em cativeiro, mas em liberdade ele necessita de cerca de 260 quilmetros quadrados
de floresta, sem caadores ilegais. E, como diz a revista The Independent on Sunday,
"ponha direto nesse habitat um tigre criado num zoolgico, e quase certo que ele
morrer de fome" (URL www.maara.gov.br).
A realidade que nem toda espcie conta com uma equipe especializada de
protetores. E no s a falta de potencial humano que complica o problema. Ento,
preciso ter uma soluo para o problema das espcies ameaadas de extino (URL
www.maara.gov.br).
12

8. COMO RESOLVER O PROBLEMA

Tigres, tartarugas, rinocerontes, borboletas. A lista das espcies em extino
parece no ter fim. comprovada que realmente cabe ao homem grande parcela da
culpa.
Em vista da situao econmica do mundo, ser razovel esperar que quem
tem de preocupar-se com o seu prprio bem-estar d apoio a programas de
preservao de espcies, por mais nobres que sejam? No nada fcil apoiar a causa
verde na maior parte da frica subsaariana, onde milhes de pessoas passam por
distrbios polticos, guerras tribais, fome e doenas epidmicas. A situao a
mesma em outros lugares (URL www.maara.gov.br).
Para que o problema da extino das espcies seja resolvido preciso efetuar
mudanas radicais. De acordo com The Atlas of Endangered Species, essas mudanas
so "de tal magnitude que s podem ser feitas por governos". Por isso ele
recomendou que nos pases em que os governos so eleitos, responsabilidade de
todo indivduo garantir que, at o ano 2000, s polticos interessados no meio
ambiente sejam eleitos. No realstico esperar isso. Muitos conservacionistas crem
que a flora e a fauna terrestres servem de indicadores ambientais. Quando elas esto
ameaadas, ns, humanos, tambm estamos. Mas essa no a primeira vez na histria
humana em que todas as formas de vida na Terra se vem ameaadas de extino.

9. INTERVENO HUMANA A REPRODUO ASSISTIDA

Um campo em que se relata sucesso o programa de reproduo de animais
em cativeiro, desenvolvido por muitos zoolgicos. "Se todos os zoolgicos do mundo
realmente investissem na reproduo em cativeiro, e se o pblico investisse nos
zoolgicos, juntos eles salvariam todas as espcies de vertebrados que, conforme se
prev, provavelmente precisaro da reproduo em cativeiro no futuro." - Last
Animals at the Zoo (Os ltimos Animais no Zoolgico) (URL www.maara.gov.br).
O zoolgico da pequenina ilha britnica de Jersey faz a reproduo em
cativeiro de animais raros, com o objetivo de reintegr-los na vida selvagem
posteriormente. Em 1975, restavam apenas 100 papagaios de Sta. Lcia em seu
habitat, no Caribe. Sete deles foram enviados para Jersey. At 1989, o zoolgico j

13

havia conseguido mais 14 exemplares, graas reproduo em cativeiro, e devolvidos

alguns deles ao seu habitat em Sta. Lcia. Relata-se que mais de 300 desses
papagaios agora embelezam a natureza nessa ilha (URL www.maara.gov.br).
Providncias similares tm sido bem-sucedidas em outros lugares. A revista
National Geographic diz que os 17 lobos-vermelhos que restavam na Amrica do
Norte reproduziram-se to bem em cativeiro que mais de 60 j foram devolvidos
vida selvagem (URL www.maara.gov.br).

10. PROCESSO NATURAL DE FERTILIZAO

10.1. O ovcito
Naturalmente, os ovcitos dos mamferos no completam toda sua maturao
(diviso meitica) de uma s vez, mas interrompem seu desenvolvimento ainda
dentro do ovrio no estgio de vescula germinativa, na prfase I da meiose
(Yanagimachi, 1988). O reincio do processo de diviso meitica s acontecer pouco
antes da ovulao, quando um conjunto de eventos que envolvem o hormnio
luteinizante (LH) e desbloqueio de fatores inibidores da meiose, ativam o folculo
pr-ovulatrio.
Depois de reiniciada a diviso, esta se desenvolver at o estgio de metfase II,
quando o ovcito novamente paralisa seu processo divisional que s ser reativado
com a entrada do espermatozide na clula. A ativao portanto o requisito
fundamental para a condensao da informao gentica contida na cabea do
espermatozide e a formao do pr-ncleo masculino e maior indicador da
fertilizao. A maturao in vivo envolve componentes endcrinos e sinalizadores,
que devem ser garantidos tambm nas manipulaes in vitro (Gmez et al., 1998).
Incluindo condensao nuclear, ativao protica e ons, como o clcio, diversas
modificaes morfolgicas e metablicas esto envolvidas.

10.2. O espermatozide
Durante o coito, milhes de espermatozides so depositados na vagina

14

(coelho, ovelha, bovino e humanos) ou diretamente no tero (camundongos, ces,

eqinos e sunos). As junes tero-tubrica e o istmo (ampola que corresponde a
cerca da metade do comprimento da tuba), so barreiras naturais para a regulao do
acesso dos espermatozides mveis, e estes podem ser estocados nestes pontos, ou
mesmo no tero. Nas espcies que depositam o smen na vagina, o canal cervical a
primeira seleo sofrida pelos espermatozides. Naturalmente, o nmero de
espermatozides que atingem o ovcito muito pequeno, sendo no mais que 50 em
bovinos, 200 em humanos e assim variando entre as espcies (Yanagimachi, 1988).
Os principais eventos necessrios para o espermatozide ser considerado apto
fertilizao, so a capacitao, a reao acrossomal e a hiperativao. A capacitao
envolve modificaes intracelulares e bioqumicas, e alteraes de membrana
plasmtica que ocorrem durante o trajeto no trato genital feminino, possibilitando ao
espermatozide realizar a reao acrossmica (Yanagimachi, 1988). A reao
acrossmica a exocitose clcio-estimulada que envolve as membranas da cabea do
espermatozide, e tem seu incio no espermatozide fertilizador quando prximo ou
mesmo aps o contato com o ovcito. A etapa final, a hiperativao do
espermatozide, ocorre quase simultaneamente com a reao acrossomal, e s vezes
antes desta quando ativados in vitro. Envolve modificao de componentes de
membrana, mas sua funo para o espermatozide no totalmente clara, parecendo
estar associada com a liberao do espermatozide do istmo, e tambm com a
capacidade de penetrao atravs das clulas do cumulus e da zona pelcida do
ovcito (Yanagimachi, 1988).

10.3. Fertilizao
Na fertilizao, o espermatozide capacitado liga-se zona pelcida do
ovcito, sofre a reao acrossomal e hiperativao. Aps o incio da fuso, o
espermatozide torna-se imvel e sua membrana plasmtica incorporada
membrana do ovcito, ativando as fosfolipases componentes. A hiperpolarizao da
membrana o primeiro sinal da ligao espermatozide-ovo, sendo seguida
imediatamente da liberao de clcio dos estoques internos localizados no retculo
endoplasmtico do ovcito (Gmez et al., 1998). H ainda o influxo de Ca2+ do meio
se este for disponvel, e a alta concentrao deste on promove ento a ativao de

15

enzimas e segundos mensageiros, responsveis pelo estmulo de finalizao da

diviso celular do ovcito e ativao da metfase II (Edwards, 1995). Na insuficincia
de Ca2+ no meio, a ativao no pode ser continuada.
A liberao de grnulos corticais pelo ovcito um dos mecanismos
induzidos pela alta concentrao de clcio, e tem funo de bloqueio polispermia. A
organizao da cromatina e fuso dos pr-ncleos masculino e feminino, leva um
tempo varivel entre as espcies, bem como o incio das clivagens do ncleo ento
diplide (Gmez et al., 1998).

10.4. Principais causas de infertilidade no macho

Segundo Kretser (1995), os problemas de infertilidade esto divididos em
diferentes categorias, tanto de origem adquirida quanto congnita e gentica. A
infertilidade de espermatognese normal, envolve as leses obstrutivas de epiddimo,
vaso deferente ou ducto ejaculatrio, ausncia do vaso deferente, anormalidade e
hostilidade do ambiente epididimrio de causa desconhecida, e ainda a falha na
ligao do espermatozide com o ovcito, impossibilitando a fertilizao. A
espermatognese normal com espermatozide anormal, inclui ausncia de acrossoma,
defeitos do axonema, das fibras ou mitocndrias da pea intermediria e falhas na
condensao da cromatina. Outra categoria de defeitos, so as de baixa produo de
espermatozides, ou hipoespermatognese, de causas diversas. Em todos estes casos,
o espermatozide est presente e sua utilizao pode ser viabilizada.
Em bovinos, as principais causas adquiridas de infertilidade so: nutrio
inadequada (obesidade ou fome), anormalidades esquelticas, problemas nos ps
(pododermatite, laminite), inflamaes diversas no sistema locomotor. Problemas
com a genitlia externa so tambm comuns, como a hidrocele, ruptura da barreira
testicular, orquite, prolapso, fibrose e laceraes de prepcio, hematoma, desvio e
flacidez penianos, desensibilizao nervosa da glande do pnis, inflamaes e
infeces das glndulas sexuais acessrias (Van Camp, 1997).
Dentre as mais comuns causas genticas de infertilidade esto: translocaes
cromossmicas, espermatozides diplides, defeitos de acrossoma, cabea, pea
intermediria e cauda do espermatozide, criptorquidismo, hrnia inguinal, hipoplasia
testicular, hipoplasia de vescula seminal, persistncia de frenulum peniano

16

(Steffen, 1997).
No entanto, em algumas patologias h a ausncia completa do espermatozide
(azospermia), como a cessao da espermatognese, mais comum na fase de
espermatognia e espermatcito primrio, a aplasia de clulas germinativas, a
hialinizao de tbulos seminferos e imaturidade testicular, por deficincia de
estmulo hormonal (Kretser, 1995). Este tipo de deficincia, estimulou trabalhos com
a utilizao de gametas em desenvolvimento.

11. A BIOTECNOLOGIA
11.1. A cincia Precursora
A Biotecnologia a integrao das novas tcnicas decorrentes da moderna
biotecnologia s abordagens bem estabelecidas da biotecnologia tradicional (Agenda
21, 1995).
A Biotecnologia, um campo emergente com grande concentrao de
conhecimento, um conjunto de tcnicas que possibilitam a realizao, pelo homem,
de mudanas animais, vegetais e sistemas microbianos, conducentes a produtos e
tecnologias teis. Em si mesma a biotecnologia no pode resolver todos os problemas
fundamentais do meio ambiente e do desenvolvimento mais pode contribuir muito
para a melhoria deles, como por exemplo: melhor atendimento da sade, maior
segurana alimentar por meios de prticas agrcola sustentveis, melhor
abastecimento de gua potvel, maior eficincia nos processos de desenvolvimento
industrial para transformao de matrias-primas, apoio para mtodos sustentveis de
florestamento e reflorestamento, e a desintoxicao dos resduos perigosos (Agenda
21, 1995).
A biotecnologia tambm oferece novas oportunidades de parceria globais,
especialmente entre pases ricos em recursos biolgicos (que incluem os recursos
genticos) mas carentes da capacitao e dos investimentos necessrios para a
aplicao desses recursos por meio da biotecnologia e pases que desenvolveram a
capacitao tecnolgica necessria do desenvolvimento sustentvel. A biotecnologia
pode contribuir para a conservao de tais recursos por meio, por exemplo, de
tcnicas ex situ (Agenda 21, 1995).

17

A utilizao de mtodos biolgicos de manipulao de seres vivos animais,

vegetais e microorganismos na conservao, produo e desenvolvimento de
recursos naturais tem sido, desde tempos remotos, uma das formas mais importantes
de interveno da inteligncia humana na otimizao de sistemas de informao
criados pela prpria natureza. A finalidade desta interveno aumentar a eficincia
do desempenho dos seres vivos, torn-los mais produtivos e alterar suas
caractersticas originais para incorporar-lhes requisitos que maximizem a capacidade
estrutural e funcional de seus princpios (Pavan et al., 1986).
No Brasil, a aplicao das cincias biolgicas com tal finalidade remonta a
meados do sculo passado. Notadamente, tcnicas laboratoriais e de campo em
microbiologia uma disciplina precursora da moderna biotecnologia foram
aplicadas por pesquisadores de grande valor (Pavan, 1986).

12. BIOTECNOLOGIAS DA REPRODUO ANIMAL

12.1. Inseminao Artificial (IA)
A inseminao artificial (IA) a tcnica singular mais importante j idealizada
para o melhoramento gentico dos animais. J foram desenvolvidos mtodos para IA
em bovinos, ovinos, caprinos, sunos, eqinos, ces, gatos, aves domsticas, uma
variedade de animais de laboratrio e insetos (Hafez, 1995). IA em animais
domsticos oferece vrias vantagens pelo melhoramento gentico, controle de
doenas e aspectos econmicos (Hafez, 1995).
A documentao cuidadosa mais antiga sobre a utilizao desta tcnica surgiu
em 1780 quando Spallanzani, um fisiologista italiano, conseguiu o nascimento de
ces por este mtodo. Outras comunicaes espordicas aparecem no sculo XIX,
porm somente a partir de 1900 que comearam estudos extensos com animais
domsticos na Rssia e logo aps no Japo (Hafez, 1995).
A inseminao artificial uma poderosa ferramenta da veterinria para
multiplicar o rebanho de gado. Funciona to bem que 4% dos bovinos do Brasil
nasceram de smen congelado. De acordo com a Diviso de Fiscalizao de Materiais
de Multiplicao Animal DFIMA, do Ministrio da Agricultura, a tecnologia
utilizada no setor de inseminao artificial em bovinos no pas de alto nvel. Essa
18

viso do Ministrio se confirma em contato estabelecido com firmas e tcnicos

ligados ao setor de inseminao (Pavan, 1986).
Seria excelente se a tcnica tivesse a mesma eficincia com animais silvestres
ameaados de extino. Infelizmente no o que ocorre. Estima-se que as
experincias desse tipo bem-sucedidas no ultrapassem uma dezena pois esta tcnica
bem conhecida apenas em animais domesticados. O problema que os cientistas
no conhecem suficientemente bem a fisiologia de todos os animais nem como
funciona o processo de ovulao e gestao das fmeas. Apesar de haver
caractersticas reprodutivas anlogas entre as espcies, cada uma delas tem
peculiaridades ainda no compreendidas (Veja, editora Abril, 2001). O outro
problema, na opinio dos tcnicos, que estaria dificultando a difuso da inseminao
artificial em maior escala, seria a falta de mo-de-obra especializada no setor bem
como pessoas treinadas para a difuso da tcnica (Pavan et al., 1986).
Segundo informaes obtidas junto a tcnicos e pesquisadores envolvidos com
a inseminao artificial em bovinos, essa tcnica teve um crescimento rpido na
dcada de 70, tendo atingido o auge nos anos de 1975 e 1976 (Pavan et al., 1986).

Fig. 3 Thor: guia Europia nascida pela tcnica de IA.

Foto: AFP/BIOS (2001).

Mas, apesar dos estudos com animais silvestres ainda no estar to evoludo
como nos animais domsticos, pesquisadores escoceses anunciaram uma vitria:
conseguiram reproduzir uma rara guia europia, espcie da qual existem hoje
19

apenas 850 exemplares nas ilhas britnicas. Batizado de Thor, o filhote foi gerado a
partir de smen guardado em um banco gentico. Thor, que aparece na figura 3,
apenas a terceira ave de rapina a ser reproduzida com ajuda da IA. O smen do macho
foi descongelado e aplicado diretamente no rgo reprodutivo da fmea, como se faz
com o gado (Veja, editora Abril, 2001).
A produo de smen de alta qualidade depende de reprodutores que so
mantidos sob boas condies. Quando os machos jovens so adequadamente
alimentados e manejados, o smen pode ser colhido satisfatoriamente (Hafez, 1995).
A colheita do smen pode ser feita com ajuda de manequins (vagina artificial)
e procedimentos de excitao (eletroejaculador ou massagens). Segundo Hafez
(1995), a vagina artificial feita de material emborrachado e esta, estimula a cpula
natural. O eletroejaculador um eletrodo que introduzido no reto do animal, e que
atravs de estmulos eltricos, estimula a ereo peniana e conseqentemente a
ejaculao. Esses mtodos so utilizados com sucesso em mamferos. Em aves, o
macho estimulado com massagens rtmicas na poro caudal externa do corpo, onde
em seguida o smen recolhido.
Para saber o momento certo da IA preciso observar a hora do cio, ou seja, a
prxima ovulao. Ento necessrio observar o comportamento do animal. As
fmeas no devem ser inseminadas aps o parto at que o tero volte ao lugar. Vrios
procedimentos so aplicados para inseminao das vrias espcies (Hafez, 1995)

12.2. Fertilizao in vitro (FIV)

A fertilizao ou fecundao in vitro (FIV) considerada a terceira gerao de
biotecnologia da reproduo, aps a inseminao artificial e a transferncia de
embries (Thibier, 1990). Ela afirmou-se e progrediu rapidamente nestes ltimos
anos em mamferos (Bem, et al., 1994).
A FIV vem se mostrando como uma biotecnologia promissora tanto na
embriologia bsica como na produo animal. Os estudos bsicos da tcnica in vitro
tm contribudo decisivamente para uma maior compreenso dos eventos da
ovognese, da fecundao, do desenvolvimento e da implantao de embries,
demonstrando o potencial desta tecnologia (Bem, et al., 1994).
Os primeiros estudos sistemticos de fertilizao de ovcitos de coelha in

20

vitro por espermatozides recuperados do trato feminino foram comunicados por

Dauzier et al. (1954) e Thibault e Dauzier (1960, 1961). O desenvolvimento e
aplicao da FIV em animais domsticos foram revistos extensivamente por Wright e
Bondioli (1981). A FIV de significado prtico para obter grande nmero de
embries para investigaes cientficas ou para transferncia subseqente a receptoras
apropriadas (Hafez, 1995).
Em bovinos, o primeiro bezerro nascido de FIV a partir de um ovcito, cuja
maturao foi realizada in vitro, nasceu em 1981. A maturao essencial no
processo de FIV pois onde o ovcito adquire capacidade para ser posteriormente
fecundado. Assim, a maturao dos ovcitos depende da eficincia do mtodo de
colheita e principalmente do mtodo de maturao in vitro, pois somente os ovcitos
maturados nuclear e citoplasmaticamente podero ser fecundados (Brackett et al.,
1982).
A possibilidade de formao de bancos de ovcitos congelados e o posterior
descongelamento e fecundao dos mesmos, abre novas alternativas e d maior
flexibilidade aos programas de conservao de recursos genticos animais (Bem,
1996).

Fig. 4 Ovcito bovino na FIV com espermatozides aderidos.

Fonte: Embrapa/Cenargen (2000)

O processo de fertilizao, da maneira como ocorre no oviduto,

extremamente complexo e envolve interaes especficas entre os gametas
masculinos e femininos para formar um indivduo diplide, o zigoto, o qual em seu
devido tempo ir se desenvolver at um novo ser (Bem, 1996).
O termo fertilizao in vitro tem sido adotado como uma forma genrica para
21

expressar os processos que incluem a maturao (MIV), a fertilizao (FIV) e o

cultivo in vitro (CIV) (Bem, 1996).
Hoje em dia o termo produo in vitro (PIV) de embries tem sido utilizado
para definir os trs processos (MIV, FIV e CIV) normalmente desenvolvidos em
seqncia para produo de embries exclusivamente in vitro. A PIV de embries
tem sido utilizada em humanos em todo o mundo, na tentativa de solucionar
problemas de infertilidade tanto masculina como feminina, sendo esta tambm, a
principal indicao para o uso destas tcnicas em outros tipos de mamferos (Bem,
1996).
Segundo Bem et al., (1994), o processo de FIV inicia-se com a puno
folicular (PIV) guiada por um sonda (ultra-som), onde uma agulha introduzida pela
vagina do animal. Os folculos podero ser observado na tela do aparelho. Assim,
permite-se coletar, de forma repetida, os ovcitos intra-ovarianos.
Os ovcitos obtidos, so em seguida maturados, fecundados e cultivados in
vitro (Fig. 4) at a obteno de embries viveis (Fig.5), que so em seguida,
transferidos para as receptoras sncronas (Bem, et al., 1994).
O coelho foi a primeira espcie de mamfero da qual obteve-se descendncia
utilizando-se procedimento in vitro (Chang, 1955). Subseqentemente obteve-se
sucesso em camundongos (Wittihgham, 1977) e gado bovino (Iritani & Niwa, 1977),
e desde ento as pesquisas envolvendo PIV de embries tm crescido
dramaticamente.

Fig. 5 Embrio bovino de 7 dias em ecloso (saindo

da zona pelcida).
Fonte: Embrapa/Cenargen (2001).

22

Algumas centenas de animais, de todas as espcies, incluindo-se primatas e

outros animais silvestres, nascidos de FIV, valorizaram esta tcnica. No entanto, o
rendimento ainda muito baixo considerando que os embries produzidos in vitro
suportam mal o congelamento. Sem dvidas que os resultados vo melhorar,
principalmente com novos meios de cultivo (Rumpf et al., 1994).
Cientistas do zoolgico de Omaha, nos Estados Unidos, conseguiram produzir
um tigre-de-bengala por fertilizao in vitro em 1991. As dificuldades encontradas
em repetir a experincia com a ona pintada so devido s peculiaridades que cada
espcie possui e ainda no so compreendidas. Os cientistas da Universidade de So
Paulo que tentam reproduzir nosso maior felino ainda no superaram todos os
obstculos. A maior dificuldade est em determinar aspectos bsicos, como a
freqncia do cio e a idade exata da maturidade sexual das onas. As tcnicas usadas
por veterinrios brasileiros para produzir artificialmente um filhote de ona pintada
so idnticas s que geram bebes de proveta humanos. Para obter os embries, os
pesquisadores estimularam as fmeas a aumentar a produo de ovcitos e
selecionaram os melhores espermatozides colhidos do macho. A fecundao foi feita
in vitro. Agora precisam aprender como se induz a gravidez nas onas e qual a receita
biolgica para fixar o embrio no tero da fmea (Veja, editora Abril, 2001).
A equipe da USP acredita ter avanado at a metade do caminho. Segundo o
veterinrio Ronaldo Morato da USP, eles j conseguiram produzir seis embries e
pretendem implant-los este ano em duas fmeas (Veja, editora Abril, 2001).

12.3. Transferncia de embries (T.E.) ou Inovulao

A Transferncia de Embries (TE) foi a primeira das modernas tecnologias a
ser incrementada a campo com o gado. Mas para a utilizao de tal tcnica,
necessrio que haja um aprendizado e domnio da Inseminao Artificial (IA) (Bem
et al., 1997).
A Transferncia de Embries (TE) consiste na estimulao hormonal dos
ovrios de um animal doador, para induzir o desenvolvimento e a maturao de
vrios folculos simultaneamente. De seis a oito dias aps a fecundao natural ou a
inseminao artificial, no caso de bovinos, os embries so coletados atravs de uma
lavagem uterina e transferidos para outros animais receptores, que levaro a
23

gestao a termo (Bem et al., 1997).

O termo transferncia de embries constitui de um leque de vrias tcnicas
que se iniciam com a seleo dos animais at a inovulao. Inovulao um termo
tcnico, e consiste na deposio do embrio de um animal doador para o tero de um
outro receptor, quer seja pelo mtodo cirrgico ou transcervical (Bem et al., 1997).
A TE uma tcnica usada em diversos tipos de mamferos, sendo que seus
melhores resultados so com animais domesticados (bovinos, caprinos e sunos)
(Hafez, 1995). Porm, a TE est sendo utilizada em espcies de animais silvestres em
cativeiro que se encontram em ameaa de extino.
Para se ter um programa de TE nas espcies de mamfero em geral, faz-se
necessrio:

Conhecimento morfolgico e fisiolgico da espcie a se trabalhar;

Induo ovariana com ajuda de hormnios do animal doador durante o cio;

Inseminao da doadora e preparao da receptora;

Colheita dos embries na doadora;

Transferncia do embrio para a receptora (Hafez, 1995).

A primeira transferncia embrionria feita com sucesso foi comunicada em

coelhas. As primeiras transferncias embrionrias em animais domsticos tambm

com sucesso foram comunicadas durante a dcada de1970 (Pavan et al., 1995).
Segundo Hafez (1995), a ovulao nos mamferos em geral pode ocorrer
espontaneamente ou como um reflexo a um estmulo. A coelha, a fmea do furo, a
gata e a fmea do mussaranho no ovulam espontaneamente. Na coelha, a ovulao
ocorre 10 a 13 horas aps a cpula ou aps algum outro estmulo, por exemplo,
injeo de hormnio LH, sais ou cobre, estmulo eltrico ou orgasmo provocado pelo
contato de outras fmeas. O momento da ovulao estimado em relao ao tempo
do incio do cio. Nota-se diferena entre espcies quanto s caractersticas do ciclo
estral, mecanismos de ovulao, hora de ovulao, viabilidade do ovo e estgios
embrionrios (Hafez, 1995).
Houve vrias limitaes no desenvolvimento das tcnicas de transferncia de
embries em uma escala prtica comparvel inseminao artificial. Anteriormente,
no haviam mtodos seguros de superovulao e produo de vulos fertilizados em
grande escala, no havendo tambm uma tcnica no cirrgica simples para colheita
24

de embries. Alguns destes problemas esto sendo resolvidos e a transferncia de

embries, como a IA, pode apresentar um significativo papel na reproduo animal
(Hafez, 1995).
Segundo Hafez (1995), TE pode ser feita de duas maneiras: Transferncia
no-cirrgica e transferncia cirrgica.
12.3.1. Transferncia no-cirrgica
Resultados de TE em bovinos no-cirrgica foram resumidos por Foote e
Onuma (1970). Com a tcnica desenvolvida por Sugie (1965), a crvice no
transpassada. Corretamente, o mtodo mais comum depositar os ovos no tero
atravs da crvice com uma palheta de IA, 6 a 12 dias aps o cio (Sreenan, 1978;
Trounson et al., 1978a).
A tcnica para inovulao no cirrgica segue os seguintes passos:

Boa conteno do animal;

Exame do ovrio contendo o corpo lteo;

Anestesia epidural baixa;

Introduo do inovulador no tero;

Deposio do embrio na juno tero-tubria (Rumpf, et al., 1998).

12.3.2. Transferncia Cirrgica

Os embries geralmente so transferidos cirurgicamente. A laparoscopia
medioventral sob anestesia geral o mtodo mais comum. O trato reprodutivo
exposto como para a colheita de ovos. Na transferncia para as tubas, a extremidade
de uma pipeta capilar contendo os embries inserida dentro do infundbulo e
ampola da tuba, onde os embries so ento depositados em uma ou duas gotas do
meio. Quando a transferncia feita para o tero, a parede do corpo uterino
puncionada com uma agulha de ponta romba e os embries so expelidos da
extremidade da pipeta capilar inserida dentro da luz uterina (Hafez, 1995).
Atualmente, cada coleta em bovinos, em mdia, responde com quatro bons
embries congelveis ou transferveis; estes embries quando inovulados resultam em
duas gestaes. Na melhor das hipteses, em mdia, uma vaca pode produzir por ano,
25

quinze produtos (Bem et al., 1997).

Os testes de prognie, principalmente nos pases desenvolvidos, tm sido o
enfoque principal para escolha dos reprodutores e/ou matrizes num programa de TE
e, neste caso, so avaliados dados como: peso ao nascer, peso aps a desmama, ganho
de peso, rendimento de carcaa, habilidade materna e produo (Bem et al., 1997).
Para se fazer um programa de TE, segundo (Rumpf et al., 1998), os animais
escolhidos devem estar entre os mais puros (10 a 20% de um criatrio elitizado).
Outra observao importante avaliar a fertilidade da fmea pelo estudo de seu
passado reprodutivo e se tem boa condio corporal.
O principal objetivo da TE aumentar o nmero de produtos geneticamente
superiores, a partir de doadores (machos e fmeas), previamente selecionados (Rumpf
et al., 1998).
Outro importante objetivo a preservao de animais em perigo de extino
cujo valor gentico no foi estudado, uma necessidade importante. Em animais
domesticados como nos (bovinos, sunos, eqinos e ovinos) existem linhagens cujas
caractersticas zootcnicas conhecidas sero de grande valia para utilizao futura.
Caractersticas como adaptabilidade, rusticidade, prolificidade, resistncia e/ou
tolerncia a doenas e parasitas, so comuns nessas raas locais que sofreram uma
intensa seleo natural atravs dos sculos (Rumpf et al., 1998).
12.4. Criopreservao ou Vitrificao
A preservao das estruturas gamticas atravs do resfriamento ou
congelao, denominada de criopreservao, foi um dos eventos que mais contribuiu
para a difuso do ganho e melhoramento gentico, e para o estudo aprofundado das
diferentes raas e espcies bovinas. A partir do primeiro relato do nascimento de
animais normais de ovcitos criopreservados de camundongos (Whittingham et al.,
1972), diversas outras espcies comearam a ser testadas. No entanto, percebeu-se
que o abaixamento da temperatura, em qualquer grau, afeta de forma muito mais
drstica o ovcito bovino, em relao ao de outras espcies de mamferos (Arav et al.,
1996). Os efeitos do abaixamento da temperatura alteram de forma significativa tanto
aspectos morfolgicos quanto genticos do ovcito, levando a taxas de fertilizao e
desenvolvimento a ficarem comprometidas (Schellander, 1988). Nos ltimos 15 anos,
apesar do grande nmero de pesquisas nesta rea, os progressos realizados podem
26

ser considerados modestos, estando a eficincia da tcnica abaixo de 65% dos

resultados conseguidos com ovcitos no criopreservados.
Segundo Vatja, 1998, diversas metodologias foram testadas at hoje e mais
recente, a vitrificao tem despontado como um caminho bastante promissor. O
fenmeno da vitrificao j conhecido por um longo tempo, mas foi inicialmente
aplicado para a criopreservao pelos pesquisadores Rall & Fahy em no ano de 1985,
trabalhando com embries de camundongo. Especificamente com ovcitos, os
resultados iniciais mostraram taxas de fertilizao e desenvolvimento de 20 38%
em ovcitos vitrificados (Nakagata et al., 1989; Kono et al., 1991; Wood et al.,
1991), e em mdia de 6 14% em ovcitos congelados pelo mtodo convencional
(Whittingham, 1977). Longe ainda de ser o ideal, os resultados mais recentes de
aplicao da vitrificao em embries bovinos so animadores. Alm de sua
simplicidade metodolgica pois no utiliza equipamentos, a vitrificao possibilita
um equilbrio termodinmico onde um mnimo de prejuzo causado pelo frio.
O principal problema na congelao de ovcitos ou outros tipos de clulas e
tecidos so os danos causados pela cristalizao natural da gua nos compartimentos
intra e extracelulares durante o processo, afetando a microestrutura da membrana
celular e das organelas. Os cristais so formados principalmente na descongelao,
podendo ser evitados se o processo for realizado de forma rpida. O autor concluiu
ainda que quanto maior a velocidade de congelao, menor seriam estes cristais, e
menor a sua injria. A desidratao parcial das clulas, e a alta velocidade de
congelao aliadas a uma rpida descongelao seriam ento a combinao ideal.
Fuku et al., (1992) e Otoi et al., (1992) demonstraram a possibilidade de produo de
embries, gestao e inclusive nascimento de bezerros a partir de ovcitos maturos
congelados pelas tcnicas convencionais, utilizando abaixamento lento da
temperatura. No entanto, as taxas de desenvolvimento encontradas esto abaixo de
5%, o que pode ser considerado de baixa eficincia. J Martino et al., (1996) relatou
que a taxa de desenvolvimento de 40% dos ovcitos maturos tratados, e taxas de 15%
de blastocistos produzidos a partir de ovcitos maturos criopreservados em sistemas
de resfriamento ultra-rpido, na presena de etilenoglicol. O estudo portanto tambm
sugere que o resfriamento dos ovcitos em taxas muito rpidas permite que eles
passem muito brevemente pela faixa de temperatura crtica, que est entre + 15oC e
15oC, minimizando os danos causados.
27

12.5. Injeo Intracitoplasmtica de Espermatozide (ICSI)

A injeo intracitoplasmtica de espermatozide diretamente no ovcito
(ICSI), tem sido desenvolvida nas ltimas duas dcadas com fins experimentais e
teraputicos, e faz parte de uma srie de tcnicas que compem a denominada
reproduo assistida. Sua utilizao conhecida desde 1962 nos trabalhos com
equinodermos e anfbios, e o primeiro trabalho com mamferos foi relatado por
Uehara & Yanagimachi (1976), com hamsters. Seu emprego em animais domsticos
mais recente, onde tem sido fundamental no refinamento da tecnologia de
fertilizao, clonagem e produo de animais transgnicos.
O ser humano a principal espcie de aplicao da ICSI, considerando-se que
atualmente um tero dos problemas de infertilidade esto ligados deficincia
reprodutiva masculina (Catt, 1996). A primeira fertilizao e gestao via ICSI no ser
humano foi conseguida acidentalmente, por Palermo e colaboradores (1995). No
entanto, a limitao tica da experimentao com gametas humanos e a incerteza das
conseqncias de tal procedimento, intensificou a necessidade de uso de modelos
experimentais, obrigando expanso do emprego da tcnica tambm para outros
mamferos, principalmente animais domsticos. Dentre os animais experimentais, os
bovinos mostram uma maior proximidade aos humanos, principalmente quanto
forma de ativao do ovcito. Devido aos crescentes sucessos nos ndices de
fertilizao, gestao e nascimento de seres normais, a possibilidade da utilizao
comercial em animais comea a ser discutida com mais nfase. A abordagem
exclusivamente teraputica desenvolvida apenas em animais de companhia, devido
ao carter de seleo de animais e custo de aplicao da tcnica (Catt, 1996).
Os principais focos de aplicao da ICSI so: a obteno de descendentes de
indivduos infrteis ou impossibilitados de fecundar aps defeito adquirido; a
produo de embries fora da estao reprodutiva; a reproduo de espcies
ameaadas de extino; a fecundao de ovcitos que falham na fertilizao, como os
criopreservados; a viabilizao da fecundao a partir de espermatozides sexados;
produo de transgnicos e finalmente, veculo de estudo da fisiologia e da causa de
infertilidade (Catt, 1996).
A ICSI, consiste na deposio de apenas um espermatozide no interior do
citoplasma do ovcito com o auxlio de uma micropipeta de vidro(Fig. 6).
28

Fig. 6 Etapas da ICSI

Fonte: Embrapa/Cenargen (2001)

Alm de materiais de alta preciso, uma srie de procedimentos so

necessrios para preparao tanto do ovcito quanto do espermatozide. Do ponto de
vista tcnico, um dos maiores atrativos da ICSI, a certeza de fecundao
monosprmica. A tcnica tem ainda muito poucas restries quanto ao tipo de smen
utilizado, e at mesmo espermatognias e espermtides podem levar produo de
gestao (Ogura & Yanagimachi, 1995; Sofikitis, 1998), onde no entanto os ndices
de fertilizao e gestao so menores do que com espermatozides maturos. A
disponibilidade de espermatozides vivos (e no necessariamente mveis),
recuperados de ejaculados, epiddimo ou testculos, podem levar a elevadas taxas de
fertilizao (Catt, 1996).
O uso da ICSI no tratamento da infertilidade humana severa e no explicada,
ainda o maior campo de aplicao da tcnica, principalmente quando nem a
fertilizao in vitro eficaz. Schiewe et al., (1996), relataram taxas de 31% de
gestao em embries produzidos por ICSI a partir de espermatozides de pacientes
com disfuno ejaculatria, azospermia e/ou teratozospermia e oligospermia.
A aplicao da ICSI para a preservao e recuperao de espcies ameaadas
de extino pode ser uma das maiores contribuies nos animais. Kurz et al., (1999),
relatou a produo de cinco embries viveis a partir de ICSI dos ovcitos recolhidos
de uma Gorilla gorilla que morreu. No Japo, Hosoi e colaboradores (1998),
realizaram a ICSI em ovcitos de Macaca fuscata, mas ainda no obtiveram
gestaes, que no entanto foram conseguidas com a FIV.
O potencial de uso da ICSI entre duas espcies diferentes vem sendo testado.
O objetivo deste enfoque visa a replicao de material gentico de espcies
ameaadas de extino, produo de espcies hbridas para gestarem outras espcies e
o estudo do mecanismo de fertilizao normal e infertilidade heterloga (Ogura &
Yanagimachi, 1993).
29

Na ausncia de espermatozides competentes para fertilizar o ovcito maturo,

em animais que um dia foram frteis, ou quando ocorre morte repentina de animais de
interesse para se multiplicar e conservar, proposto que as espermtides (redondas,
alongando ou alongadas) podem ser extradas e sejam uma alternativa para produo
de descendentes (Martins & Feliciano Silva, 2000). Estas clulas podem substituir os
espermatozides no processo de fertilizao quando utilizadas pela tcnica de ICSI
(Ogura & Yanagimachi, 1993).
Desta forma, a ICSI utilizando-se das clulas espermatognicas primordiais,
espermatozides imaturos (testicular) e maturos (epididimrio e do ejaculado), tornase uma opo e garantia biolgica, principalmente para aqueles animais em
programas de recuperao e preservao.
Ainda, esta tcnica poder ser utilizada para gerar embries atravs de
fertilizao in vitro de animais que tiveram sua reproduo bloqueada, devido
ausncia de um habitat natural, ou seja, encontram-se em cativeiro. Da mesma forma,
animais em fase terminal de vida ou mortos acidentalmente, podero produzir
descendentes quando o material (testculo) colhido imediatamente, processado e as
clulas espermticas utilizadas pela ICSI.
Em funo do pouco domnio desta tcnica na espcie animal, faz-se
necessrio o seu aprimoramento, principalmente no Brasil, uma vez que a ICSI,
mesmo com os resultados a evoluir em relao aos humanos, j representa um
importante instrumento para a recuperao e conservao dos recursos genticos.

12.6. Transferncia de nuclear (Clonagem)

Muitos trabalhos foram feitos sobre a transferncia de nuclear (TN),
principalmente em camundongos, sunos, bovinos e ovinos. Esta tcnica, vulgarmente
denominada clonagem, consiste na utilizao de embries, os quais, pela separao
dos blastmeros, do origem ao indivduo primrio (Smith , 1988).
Mamferos clonados com xito foram obtidos atravs da transferncia nuclear
a partir de ncleo doador de embries em estdios iniciais do desenvolvimento em
ovcitos enucleados maturos. A figura 7 ilustra a bezerra Vitria da raa Simental,
nascida pela tcnica de transferncia nuclear. Apesar disto, utilizando-se da clonagem
embrionria, o nmero potencial de nascimentos est restrito devido ao limitado
30

nmero de ncleos doadores disponveis em clulas embrionrias e clulas

diferenciadas como possveis fontes doadoras de ncleo para transferncia nuclear
tiveram grandes impactos na clonagem. Em ovinos, o relato do nascimento de trs
proles viveis a partir do ncleo de embries oriundos de clulas epiteliais (Campbell
et al., 1996) gerou novas apreenses dentro da ovelha Dolly(Fig. 8) (Wilmut et al.,
1997). Este foi o verdadeiro incio da nova rea da clonagem somtica em mamferos
domsticos.

Fig. 7 Vitria: primeira bezerra brasileira obtida pela transferncia nuclear

Fonte: Embrapa/Cenargen

Em bovinos, a capacidade do ncleo de uma clula diferenciada em ser

reprogramada aps fuso com um ovcito recipiente enucleado parecia ser muito
mais limitada do que a partir do ncleo de um blastmero. A transferncia nuclear de
clulas somticas teve aumento considervel em seu interesse em vista das numerosas
aplicaes em potencial dentro da biotecnologia. Para a indstria de animais de
produo, no entanto, muito mais desejvel a clonagem de animais adultos do que a
partir de clulas somticas fetais, devido necessidade em se saber o fentipo e a
produo, ou o valor gentico dos potenciais ncleos doadores antes de se efetuar a
transferncia nuclear. Esta condio torna-se agora possvel desde que animais
viveis foram clonados a partir de clulas somticas em ovinos, camundongos e
bovinos, nos ltimos 3 anos (Wilmut et al., 1997; Wakayama et al., 1998; Wells et
al., 1999).
Com o aumento da experincia na tecnologia da transferncia nuclear, parece
que o sucesso da reprogramao nuclear de clulas somticas depende de vrios
31

fatores. Dentre estes fatores, acredita-se ser de grande importncia a sincronizao do

ciclo celular entre o ncleo doador e citoplasma recipiente, assim como a origem e o
grau de diferenciao das clulas doadoras (Heyman, 2000).

12.6.1. Clonagem Somtica

Em bovinos, grande parte do melhoramento gentico alcanado atravs da
Inseminao Artificial (IA) a partir de touros selecionados. Entretanto, o potencial de
difuso de touros de alto valor pode ser interrompido por morte acidental do
progenitor. A clonagem somtica permite assegurar-se desse risco atravs da gerao
de uma genocpia do touro, uma vez que tenha sido provado ser superior. Recentes
trabalhos na Itlia demonstram ser possvel o nascimento de um clone a partir de um
touro idoso utilizado na IA atravs de clulas sangneas linfides como fonte
doadora de ncleo (Galli et al., 1999).

Fig. 8 Dolly: ovelha clonada por transferncia nuclear somtica

Fonte: Embrapa/Cenargen (2000).

A maior parte das clulas somticas pode ser cultivada in vitro com vrias
passagens e resultar em proles vivas aps a transferncia nuclear. Bezerros foram
produzidos utilizando-se fibroblastos de animais adultos (Kubota et al., 2000). Um
perodo em cultura j permite o inserto de um novo gene dentro do ncleo de clulas
somticas por transfeco e a seleo de linhas celulares modificadas. A
32

recombinao homloga ir permitir que um gene de interesse seja inserido em um

local especfico do cromossomo do genoma bovino com o objetivo de facilitar uma
alta expresso, como na glndula mamaria, por exemplo, e produzir protenas
teraputicas e nutritivas diretamente no leite. A utilizao destas clulas somticas
diferenciadas como fonte doadora de ncleo para clonagem ir permitir a produo de
uma primeira gerao de proles idnticas, que seriam todos transgnicos sem haver
mosaicismo (Heyman, et al., 2000)
Se utilizada em escala muito larga, a clonagem somtica poderia levar um
risco em potencial de diminuio da diversidade gentica. Isto poderia acontecer se
milhares de cpias do mesmo animal fossem difundidas dentro da populao, o que
no o caso. Ao contrrio, a clonagem somtica pode ser uma ferramenta valiosa
para manuteno e desenvolvimento de espcies em perigo de extino. Com estoque
do smen de diferentes machos, um nmero limitado de fmeas

pode ser

multiplicado pela clonagem e ento poderiam posteriormente ser inseminadas com o

smen mantido em estoque com intuito de recriar diferentes famlias e restabelecer
um mnimo de diversidade gentica. Recentemente na Nova Zelndia, a clonagem
somtica foi utilizada para preservar a ultima vaca sobrevivente de uma raa bovina e
pelo menos 4 bezerras foram geradas desta nica fmea viva (Wells et al., 1999). Esta
aplicao da clonagem deve ser considerada desde agora, uma vez que j possvel o
estoque de material gentico de animais em risco de extino. O estoque poder ser
feito aps uma pequena biopsia de pele do animal vivo. Em seguida, a multiplica-se
as clulas in vitro e por fim, congela-se estas clulas em nitrognio lquido para
posterior utilizao, quando a eficincia da transferncia nuclear tiver aumentado
(Heyman, et al., 2000).
Alm das dificuldades biolgicas e tcnicas a serem resolvidas visando uma
melhor eficincia, consideraes ticas devem ser observadas. Com relao
aceitao desta nova biotecnologia pelo pblico, tal situao parece ser muito
diferente dentre pases de todo mundo. Pesquisas e aplicaes devem considerar este
aspecto com relao mxima segurana e bem-estar animal. (Heyman, et al., 2000)

12.7. Isolamento de Folculos Pr-Antrais (FOPA)

Uma das ltimas arrancadas da reproduo assistida, a metodologia de
33

obteno de FOPA em bovinos, foi desenvolvida por Figueiredo et al., (1995), nos
laboratrios da Universidade de Lige, na Blgica. Essa

tecnologia

consiste

no

isolamento, caracterizao e cultivo de folculos pr-antrais de 30 a 70m.

bem conhecido que os ovrios dos mamferos contm milhares de folculos
pr-antrais. Entretanto, a grande maioria desses folculos se tornam atrsicos durante
a fase de crescimento e desenvolvimento. Conseqentemente poucos ovcitos viveis
so produzidos durante toda a vida reprodutiva de uma fmea. O sonho de vrias
equipes de pesquisadores no mundo inteiro de prevenir essa morte fatal desses
folculos ovarianos e us-los com propsito reprodutivo (Telfer, 1996).
No caso da espcie bovina, a reciclagem in vitro de ovcitos oriundos desta
numerosa populao de folculos pr-antrais, estimado em 250.000 em mdia num
nico ovrio de vaca, podero ser recuperados e utilizados na multiplicao de
animais de alto valor gentico. Esta tcnica servir tambm para recuperar animais
em vias de extino (Bem et al., 1994).
Os FOPAs so classificados em trs categorias: primordiais que so os
menores, ao redor de 30m de tamanho; primrios com 40 a 60m; secundrios de 60
a 200m. Do ponto de vista citolgico os primordiais so clulas planas, os primrios
compostos por clulas cbicas e os secundrios por vrias camadas de clulas
cbicas. A populao de folculos primrios dominante, ao redor de 80% (Bem et
al., 1994).
O modelo descrito por Figueiredo et al., (1993), para isolamento dos FOPAs
mecnico e por esta metodologia foram separados 2.145, 512 e 298 folculos prantrais por ovrios em mdia de feto, bezerra e vaca respectivamente (Rumpf et al.,
1998) e outras espcies podero ser utilizadas (animais silvestres) para a conservao
e preservao.

13. UMA ARCA PARA SALVAO

Os cientistas crem que a melhor soluo para o problema da extino das
espcies hoje em dia tem a ver com a preservao de seus habitats. Vale notar que a
revista New Scientist trata desse assunto e cita o uso que os conservacionistas fazem
da "metfora da arca de No". A Arca de No foi exatamente o meio pelo qual seres
34

humanos e animais sobreviveram ao dilvio ocorrido nos dias de No.

Deus forneceu a No o projeto da Arca, uma enorme caixa de madeira, feita
para flutuar na superfcie das guas diluvianas. Ela preservou a vida de No, de sua
esposa, de seus trs filhos e das respectivas esposas, junto com representantes de
diferentes espcies de animais, tanto selvagens quanto domsticos. De fato, "toda
sorte de carne em que a fora da vida estava ativa" (Gnesis 7:15) A multiplicidade
de formas de vida que existe hoje, conforme a metfora, diz que aquela Arca serviu
muito bem ao seu objetivo.

14. PROJETO ARCA DE NO

14.1. BBGA Banco Brasileiro de Germoplasma Animal
Segundo Bem et al., (1996), os recursos genticos animais correm o risco de
desaparecerem em razo de inmeros fatores. Para garantir a sobrevivncia de
inmeras espcies foi criado em Braslia o Banco Brasileiro de Germoplasma
Animal, o BBGA, tambm conhecido com Projeto Arca de No. O projeto sitiado
na rea fsica denominada FAZENDA SUCUPIRA com 912 hectares, destinada
pelo Ministrio da Agricultura e da Reforma Agrria (MAARA). Na mesma fazenda,
numa rea de 300 hectares anexa ao BBGA funciona os laboratrios de pesquisa da
EMBRAPA/CENARGEN (Centro Nacional de Recursos Genticos e Biotecnologia),
onde se desenvolvem pesquisas na rea de biotecnologia da reproduo animal, que
serve de suporte para o BBGA.

Fig. 9 Bovinos da raa Crioulo Lageano, espcie bovina ameaada de extino.

Fonte: Embrapa/Cenargen (1997).

35

O BBGA um projeto que tem a finalidade de agrupar os animais domsticos

autctones (nativos) que esto em vias de extino para pesquisas, conservao e
multiplicao. A figura 9 mostra espcimes da raa Crioulo Lageano. Esta espcie
est preservada em bancos de smen do BBGA. Com eles, recupera-se tambm parte
da histria do Brasil, desde a poca dos portugueses e espanhis que por aqui
passaram. Os pesquisadores e tcnicos do BBGA percorrem o Brasil inteiro,
fotografando, filmando e interrogando pessoas e criadores, para se interarem da real
situao dos animais (Bem et al., 1997).
O BBGA, alm da raa e espcies ameaadas, tem como objetivo a
identificao de recursos genticos, o conhecimento de suas caractersticas
fenotpicas e de produo, a caracterizao gentica e avaliao do material coletado,
assim como a valorizao local dos recursos genticos locais (Bem et al., 1997).
Uma das questes que o BBGA vem enfrentando o da determinao racial
ou mesmo confirmao da raa das amostras de animais domesticados que chegam ao
Banco. Muitas vezes as informaes sobre os animais coletados refere-se a um tipo
racial quando na realidade eles pertencem a outro. Observam-se, por exemplo, casos
de animais que so classificados em uma determinada raa de acordo com
caractersticas como cor de pelagem, mas que na verdade pertencem outra raa.
Outra questo sobre o conhecimento da variabilidade gentica dos indivduos que
so conservados e/ou preservados. O estudo das caractersticas genticas dos
indivduos, grupos ou populao de animais em perigo de extino indispensvel
para que se possa preserv-los racionalmente (Bem et al., 1997).
Diante do estado atual em diversidade de recursos genticos animais, e a
velocidade com que esto sendo dizimados os ltimos efetivos, somente tcnicas
modernas de reproduo animal podero viabilizar a recuperao deste material nico
e secular (Bem et al., 1997).

36

15. CONCLUSO
Como se tem observado, temos herdado uma ampla variedade de diversidade
gentica de populaes de animais domsticos e selvagens de nossos ancestrais.
Entretanto, devido s altas fases de extino, nossos descendentes, herdaro uma
riqueza gentica e diversidade de seleo de animais domsticos de produo muito
menor, e ento, necessrio que se tome aes para conserv-los.
Virtualmente todos os biologistas de conservao concordam que a
preservao do habitat o melhor caminho para conservar a biodiversidade. O
povoamento animal de grandes reas de terras livres da interferncia humana pode
proteger muitas espcies, mas esta abordagem tem sido caracterizada como
estranha, dada realidade mundial atual e do futuro (Soul, 1992).
Desta forma, uma estratgia que surge a formao de bancos de recursos
genticos, que so repositores de germoplasma (gametas), embries, produtos
sanguneos, tecidos e DNA para programas de conservao definidos, os quais so
ligados diretamente com as biotecnologias para a execuo do objetivo final, que a
reproduo animal. (Wildt, 1997)
Como parte integrante deste processo de conservao ex-situ, a utilizao do
germoplasma masculino e feminino em criobancos, bem como o uso deste material na
reproduo assistida, tem assumido papel fundamental na multiplicao e preservao
animal.
A situao ideal era no termos a preocupao com a extino dos animais,
bem como com a diminuio dos genes daqueles organismos de interesse humano.
No entanto, nossa realidade outra. Desta forma, as instituies ligadas
conservao, bem como biotecnologias devem atuar de forma itinerante para reverter
esta situao agressiva para todos os indivduos do planeta.

37

16. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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