Objetivo

Preparao de lmina por meio de esfregao para diferenciao de bactrias

gram-negativas e gram-positivas. Preparao de meios de cultura.

Introduo
A tcnica de Gram, um mtodo de colorao de bactrias que permite
diferenciar bactrias com diferentes estruturas de parede celular a partir
das coloraes que estas adquirem aps tratamento com agentes qumicos
especficos. Bactrias que apresentam colorao azul-violeta so chamadas
de Gram-positivas e as que adquirem colorao vermelha so chamadas
Gram-negativas. As bactrias Gram-positivas possuem uma capacidade de
reter o corante em seu citoplasma durante um tratamento com etanolacetona pois sua parede celular mais espessa que a parede celular das
bactrias Gram-negativas.
A autoclave utilizada para esterilizao de materiais por meio do contato
do material contaminado com o vapor de gua em temperaturas elevadas
por um perodo de tempo. A autoclave formada por um cilindro metlico
resistente que possui uma resistncia que servir para aquecer a gua,
possui tambm uma tampa com parafusos de orelhas que permite fech-la
hermeticamente. Ainda na tampa temos a vlvula de segurana e de ar.
Possui tambm uma chave para o controle da temperatura e um registro
para indicar a presso e a temperatura de seu interior.

Materiais
Preparao de lmina

Agulha
Bico de Bunsen
Lmina
Microscpio
Soluo Fisiolgica de NaCl
Colnia de Bactrias
Lugol
Violeta genciano
Colorao de gram
lcool-acetona
Fucsina Fenicada

Preparao de meios de cultura

Autoclave
CLED
Mac Conkey
Agar Nutriente
gua destilada
Placa de Petri

Metodologia
Preparao da Lmina:
Foi utilizado para preparao da lmina, colnias de bactrias da que foram
obtidas da mo, bebedouro, celular e sabo.
Dividimos uma lmina em quatro partes e em cada uma foi desenhada um
crculo.
Dentro de cada crculo foi colocada uma gota de soluto fisiolgico.
Em seguida, com o auxlio da agulha foi realizado o esfregao em cada um
dos quatro crculos marcados na lmina com cada uma das colnias de
bactrias obtidas.
Esperamos que a lmina secasse e ento realizamos a fixao do material
passando a parte de trs da lmina pela chama do bico de Bunsen cinco
vezes rapidamente.
Colocamos ento a colorao de gram por um minuto. Aps este tempo
lavamos a lmina rapidamente.
Colocamos em seguida o Lugol por um minuto. Aps este tempo lavamos a
lmina rapidamente.
Passamos lcool-acetona por um minuto para que as gram-negativas
fossem descoloridas. Aps este tempo lavamos a lmina rapidamente.
Colocamos em seguida a Fucsina fenicada por trinta segundos para que esta
pudesse colorir as gram-negativas. Aps este tempo lavamos a lmina
rapidamente.
Esperamos a lmina secar para que pudssemos v-las no microscpio.

Preparao dos meios de culturas:

Preenchemos a autoclave com gua destilada at que a mesma cobrisse a
resistncia para que no danificasse o aparelho.
Embalamos o material com papel craft para que no fosse contaminado
novamente ao ser retirado da autoclave.
Inserimos o material na autoclave e fechamos a autoclave.
Deixamos o material por vinte minutos a uma temperatura de 121 e
presso de 1atm.
Retiramos os materiais e esperamos que eles esfriassem a temperatura
ambiente em uma estufa.

Em seguida distribumos os meios de cultura em diversas placas de Petri.

Resultados
Ao visualizarmos as lminas no microscpio, pudemos observar que as
bactrias presentes na mo foram cocos gram-positivos, as bactrias
presentes no bebedouro foram cocos gram-positivos e bacilos gramnegativos, as bactrias presentes no celular foram cocos gram-positivos e
as bactrias presentes no sabo foram bacilos gram-negativos.

Concluso
Conclumos o experimento com sucesso, onde foi possvel identificar qual
colorao cada bactria adquiriu e com isso caracteriza-la.
Todo o material foi esterilizado e os meio de cultura foram preparados para
que pudessem ser usados na prxima aula.

Referncias Bibliogrficas
COMO
funciona
uma
autoclave.
Ponto
Cincia.
Disponvel
em:<http://objetoseducacionais2.mec.gov.br/bitstream/handle/mec/15228/C
omo%20funciona%20uma%20autoclave.pdf?sequence=2>. Acesso em: 01
abr. 2015.

TORTORA, G.J. et al. Microbiologia. 10. ed., 2011.

PREPARAO DE LMINAS
UTILIZANDO A TCNICA GRAM E
PREPARAO DE MEIOS DE CULTURA

Docente: Elisabeth Loshchagin Pizzolitto

Discente: Marcel Guilherme de Oliveira Nischida

26/03/2015 FCFAR/UNESP Cmpus de Araraquara