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Dissertao
apresentada
Escola
Superior
de
PIRACICABA
Estado de So Paulo Brasil
Maio 2004
Dissertao
apresentada
Escola
Superior
de
PIRACICABA
Estado de So Paulo Brasil
Maio 2004
CDD 639.4
Permitida a cpia total ou parcial deste documento, desde que citada a fonte O autor
iv
HOMENAGEM
AGRADECIMENTOS
Ao Prof Dr. Nilson Augusto Villa Nova pelas sugestes quanto aos dados de
ndice pluviomtrico e pelo fornecimento de preciosos contatos;
vi
vii
s Repblicas Zona Rural, Vira Latas, Arado, Deus quis, Caminho do Cu,
Batkverna e Uspeo, pela amizade e inmeras integraes;
SUMRIO
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LISTA DE FIGURAS.................................................................................................
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LISTA DE TABELAS................................................................................................
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RESUMO....................................................................................................................
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SUMMARY................................................................................................................
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1 INTRODUO.......................................................................................................
2 REVISO DE LITERATURA................................................................................
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3 MATERIAL E MTODOS.....................................................................................
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3.4.2 Mexilho.............................................................................................................
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4 RESULTADOS E DISCUSSO.............................................................................
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4.1.2.1 pH....................................................................................................................
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4.1.2.2 Turbidez...........................................................................................................
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4.2 Mexilhes..............................................................................................................
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4.2.1.1 pH....................................................................................................................
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5 CONCLUSES.......................................................................................................
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5.1 Recomendaes.....................................................................................................
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REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS........................................................................
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LISTA DE FIGURAS
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1 Mapa referente aos pontos de coleta de Ubatuba, SP..............................................
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LISTA DE TABELAS
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1 pH em amostras de gua do mar, referente ao fator praias......................................
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3 Turbidez da gua dos pontos de cultivo nos referidos meses de coleta (UNT).......
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RESUMO
O consumo de moluscos bivalves pode representar srios riscos sade
pblica, pois refletem diretamente as condies do meio ambiente. Desta forma
considera-se de extrema importncia o consumo de mexilhes livres de contaminao.
Esta pesquisa objetivou estudar a qualidade microbiolgica das guas e mexilhes de
trs pontos de cultivo do municpio de Ubatuba, SP, a saber: Engenho da Almada, Barra
Seca e Costo do Cedro em um perodo compreendido entre novembro de 2002 e maro
de 2003, totalizando 5 coletas mensais. Analisou-se na gua: Bacillus cereus, Clostrdios
Sulfito Redutores, Aerbios Mesfilos, Staphylococcus aureus, Coliformes totais e
fecais, Enterococos e Salmonella. Nos mexilhes foram analisados os mesmos
microrganismos citados para gua mais o Clostridium perfringens. Os resultados
encontrados tanto para as anlises de gua como dos mexilhes foram satisfatrios,
condizentes com a legislao brasileira em vigor, salvo a coleta do ms de maro, do
cultivo da Barra Seca, onde a mdia dos valores encontrados para coliformes fecais na
gua (5,7x101 NMP/100mL) foi superior ao recomendado pela legislao sendo
xvi
SUMMARY
The consumption of bivalve mollusks can represent serious risks to the public
health, because they reflect the conditions of the environment directly. This way it is
considered of extreme importance the consumption of mussels without contamination.
This work aims of studing the water and mussels microbiology quality from three
different seafood farms in Ubatuba, SP, to know: Engenho da Almada, Barra Seca and
Costo do Cedro from November 2002 to March 2003, totaling five monthly. It was
analyzed in the water: Bacillus cereus, Total Clostridia, Aerobic Mesophilic,
Staphylococcus aureus, total and fecal coliforms, Enterococci and Salmonella. In the
mussels the same microorganisms were analyzed mentioned for water more Clostridium
perfringens. The results found in the water and in the mussels were satisfactory, suitable
with the Brazilian legislation, except for the sample at Barra Secas beach, in March.
The average of the values found at that place for fecal coliformes in the water was
higher (5,7x101 MPN/100mL) than the recommended by the legislation. Even in this
collection, it was also detected Salmonella in 25 g of mussels. Even if the counts of S.
aureus and B. cereus in the mussesls are in agreement with the legislation in vigor cares
xviii
they should be taken with relationship to the storage and the consumption form. The
intensity of seasonal interferences was discovered in the microbial count in the water, in
which was verified that the board of tides and the index of daily heatstroke had a low
negative correlation unlike the index pluviometric it presented high positive correlation
1 INTRODUO
devido
principalmente
caractersticas
ambientais
propcias
ao
2
desenvolvimento desses moluscos, os quais necessitam de guas de temperaturas amenas
e ricas em nutrientes (Beiro et al., 2000).
No estado de So Paulo, estudos bioecolgicos e de aprimoramento das
tcnicas de criao do mexilho Perna perna iniciaram-se em 1976, sendo que a
Amrica Latina devido s suas condies geogrficas tem grande potencial para produzir
e exportar aos mercados dos Estados Unidos, Europa e Japo, os produtos da pesca e da
aqicultura.
A pesca tem sido, h milnios, uma atividade rotineira para as comunidades
costeiras. Incerta e predatria, a extrao dos recursos passou de uma atividade
equilibrada e aceitvel a uma dimenso drstica de sobre-explorao, provocada pelo
crescente aumento populacional e conseqente incremento no esforo de explorao,
acompanhado pelo rpido aprimoramento das tecnologias de captura, por legislaes
imprprias, falta de fiscalizao e desorganizao do setor pesqueiro. Essa poltica vem
ocasionando violentas quedas na biomassa, o que deriva em escassez dos recursos e
quebra nos ciclos naturais, com conseqentes impactos ecolgicos, econmicos e sociais
(Gelli & Carneiro, 2003; Gelli et al.,1998).
A implantao da atividade de maricultura tem sido vista como meio de
elevar a produtividade de reas costeiras, promover o aumento de produo de alimentos
e de desenvolvimento scio-econmico de determinadas regies, diminuir a presso
extrativa sobre os recursos explorados e de incorporar os pescadores a uma atividade
planificada. No Brasil, estudos de custo e benefcio da mitilicultura e outros tipos de
criatrios mostraram viabilidade econmica, com investimentos e custo operacional
relativamente baixos. A atividade poder ajudar a conter o empobrecimento das
comunidades artesanais que, com o declnio dos estoques pesqueiros, ficaram com
poucas alternativas de renda para permanecer em suas terras (Gelli et al.,1998).
A tarefa de se estabelecer normas para a produo e consumo de moluscos
no simples, especialmente quando se considera que o pas no tem tradio como
produtor deste alimento e tambm que o consumo de moluscos pode representar srios
riscos sade pblica, uma vez que os mesmos refletem diretamente as condies do
3
meio ambiente. A segurana do consumidor de moluscos bivalves depende da sanidade
destes, a qual por sua vez depende das condies fsicas, qumicas e microbiolgicas do
ambiente de origem, do manuseio e tecnologia ps-captura, bem como da existncia de
legislao adequada, que baseie a fiscalizao em todas as etapas.
O objetivo desta pesquisa, foi diagnosticar a qualidade microbiolgica da
gua de cultivo e dos mexilhes Perna perna comercializados na regio de Ubatuba,
subsdio fundamental para a estabilidade da produo, com conseqente fixao do
mitilicultor na atividade. Esta investigao parte do projeto de Polticas Pblicas
designado de Diagnstico e intervenes emergentes para a comercializao de
pescado mexilhes no Litoral Norte, regio de Ubatuba, SP, o qual visa a implantao
de uma unidade beneficiadora de produtos pesqueiros na regio.
2 REVISO DE LITERATURA
5
forma intensa e acelerada, aumentando consideravelmente o risco de doenas de
transmisso de origem hdrica. A relao da qualidade da gua com as doenas vem
sendo observada desde a mais remota antiguidade, porm s foi comprovada
cientificamente em 1854 por John Snow, quando demonstrou que a epidemia de clera
em Londres ocorreu devido veiculao hdrica (Guilherme et al., 2000).
6
2.2.1 Descrio da espcie em estudo
Filo mollusca
7
femininas tm uma tonalidade mais alaranjado-avermelhada. Pelo fato dessa espcie ser
tropical e sub-tropical, ela elimina gametas durante todo o ano, porm, de um modo
geral, os perodos de fixao das larvas ocorrem no inverno e no vero, com pequenas
variaes de um ano para o outro (Fernandes, 1981).
O Perna perna uma espcie nativa da frica e hoje tem uma ampla
distribuio no mundo, estando presente do continente africano at o Marrocos, e na
Amrica do Sul, desde a Venezuela, Uruguai e ao longo da costa Atlntica; no Brasil
abundante entre o Rio Grande do Sul e o Esprito Santo (Boffi, 1979; Sidall, 1980;
Souza, 2003). provvel que esta espcie tenha sido introduzida no Brasil, nos sculos
XVI a XIX, durante o trfico negreiro, quando muitas embarcaes mantinham um
intenso comrcio com a frica e traziam em seus cascos os mexilhes incrustados. A
melhor evidncia de sua introduo foi obtida com o estudo das espcies presentes nos
sambaquis. Na maioria dos vestgios arqueolgicos datados de 8.000 a 2.000 anos
A.C.- deixados pelos pescadores, caadores e coletores de moluscos que viviam no
litoral do Estado do Rio de Janeiro no foram encontradas conchas de P. perna. Deste
modo, a existncia de casos recentes do comportamento invasor da espcie, sua
distribuio disjunta nas Amricas, alm da fragilidade de dados que atestem a sua
presena na pr-histria brasileira, reforam a hiptese de que o mexilho P. perna seja
uma espcie extica no Brasil (Souza, 2003).
8
Segundo Cabelli et al. (1983), os melhores indicadores da presena de
patgenos entricos em fontes de poluio fecal devem ter as seguintes propriedades:
estar presente em guas contaminadas por material fecal em densidades mais elevadas
que os patgenos, ser incapaz de crescer em ambientes aquticos mas capazes de
sobreviver por mais tempo que os microrganismos patognicos; apresentar resistncia
igual ou maior que os patgenos aos processos de desinfeco, ser facilmente
enumerados por tcnicas precisas; ser aplicvel a todos os tipos de guas recreacionais
naturais (doce, salobra, salina), estar ausente em guas no poludas e associadas
exclusivamente a despejos de fezes animais e humanas e apresentar densidade
diretamente correlacionada com o grau de contaminao fecal. Esse conjunto de
caractersticas constitui uma definio terica de um indicador, pois nenhum tipo de
bactria preenche totalmente esses requisitos. No entanto, essas caractersticas
restringem os indicadores a alguns grupos de bactrias.
Segundo Geldreich (1967), uma vez descoberto o fato de que as bactrias
patognicas transmitidas atravs da gua contaminada eram responsveis por uma srie
de infeces intestinais, foram desenvolvidos testes bacteriolgicos capazes de indicar a
contaminao fecal da gua.
As condies do ambiente marinho dificultam o isolamento de bactrias
patognicas; fato que explica porque as pesquisas sobre a contaminao microbiana do
litoral limitam-se geralmente determinao das concentraes de bactrias indicadoras
da poluio fecal (Plusquellec, 1983). Os coliformes e, mais recentemente, os
estreptococos fecais so os microrganismos utilizados mundialmente para verificar a
qualidade da gua.
O conceito de utilizar coliformes para deduzir a presena de patgenos
baseou-se num trabalho realizado em 1885 por Excherich, atravs da identificao do
Bacilo de coli como fazendo parte da microflora intestinal natural de animais de sangue
quente. Depois desse trabalho criaram-se correntes de pesquisadores que apoiam
(Geldreich, 1967; Geldreich, 1970) e os que criticam (Dutka, 1973; Dutka & Bell, 1973;
Fair & Morrison, 1967; Gallagher & Spino, 1968; Hendricks & Morrison, 1967; Kfir et
al., 1992) o uso de coliformes para deduzir a presena, na gua, de patgenos como
9
Salmonella, Shigella, Vibrio e enterovrus. Sendo que alguns autores como Andrews et
al. (1975) apoiam somente o uso de coliformes fecais e no os de coliformes totais para
a gua de cultivo, por julgar a segurana do molusco cultivado.
Estudos que buscaram relacionar indicadores de poluio com a presena
de patgenos, demonstraram ser questionvel a utilizao, pelo National Shellfish
Sanitation Program nos Estados Unidos, do NMP Nmero Mais Provvel de
coliformes totais como critrio para classificao das reas de obteno de bivalves
(Jos, 1996).
A colimetria e classificao de guas provenientes de reas onde so
coletados ou cultivados bivalves constitui-se sempre em subsdio cientfico til para as
autoridades envolvidas na fiscalizao e controle da qualidade dos alimentos, uma vez
que a presena desses microrganismos indica as condies sanitrias desses produtos
(Lira et al., 2000; National Advisory Committee on Microbiological Criteria for Foods,
1992).
Como indicador de poluio fecal recente, os coliformes termotolerantes
apresentam-se em grandes densidades nas fezes, sendo portanto, facilmente isolados e
identificados na gua por meio de tcnicas simples e rpidas, alm de apresentarem
sobrevivncia praticamente semelhante das bactrias enteropatognicas. No entanto, a
presena de coliformes termotolerantes nas guas no confere a estas uma condio
infectante. Este sub-grupo das bactrias coliformes no por si s prejudicial sade
humana, apenas indica a possibilidade da presena de quaisquer organismos patognicos
(Cetesb, 2003).
Assim, alta densidade de coliformes termotolerantes em gua marinha
indica um elevado nvel de contaminao por esgotos (Cetesb, 2003), o que poder
colocar em risco a sade dos banhistas e a sanidade de bivalves provenientes dessa
regio, cujas conseqncias so imprevisveis, dependendo basicamente, da sade da
populao que gera esses esgotos, da taxa de filtrao/fator de bioacumulao dos
bivalves, e do grau de imunidade dos consumidores.
O grupo de coliformes totais inclui as bactrias na forma de bastonetes
Gram negativos, no esporognicos, aerbias ou anaerbias facultativas, capazes de
10
fermentar a lactose com produo de gs, em 24 a 48 h, a 35oC. O grupo inclui cerca de
20 espcies, dentre as quais encontram-se tanto bactrias originrias do trato
gastrintestinal de humanos e outros animais de sangue quente, como tambm diversos
gneros e espcies de bactrias no entricas, como Serratia e Aeromonas, por exemplo.
Por essa razo, sua enumerao em gua e alimentos menos representativa como
indicao de contaminao fecal, do que a enumerao de coliformes ou Escherichia
coli (Franco & Landgraf, 1996; Silva et al., 2000).
Para coliformes fecais ou coliformes termotolerantes a definio a mesma
de coliformes totais porm, restringindo-se aos microrganismos capazes de fermentar a
lactose, com produo de gs em 24 h, e temperatura entre 44,5 - 45,5oC. Esta definio
objetivou em princpio, selecionar apenas os coliformes originrios do trato
gastrintestinal. Atualmente, sabe-se, que o grupo dos coliformes fecais inclui pelo menos
trs gneros, Escherichia, Enterobacter e Klebsiella, dos quais dois (Enterobacter e
Klebsiella) incluem cepas de origem no fecal. Por esse motivo, a presena de
coliformes fecais em gua e alimentos menos representativa, como indicao de
contaminao fecal, do que a enumerao direta de E. coli porm, muito mais
significativa do que a presena de coliformes totais, dada a alta incidncia de E. coli
dentro do grupo fecal (Silva et al., 2000).
Cerca de 95% dos coliformes existentes nas fezes humanas e de outros
animais so E. coli e, dentre as bactrias de habitat reconhecidamente fecal, dentro do
grupo dos coliformes fecais, a E. coli, embora tambm possa ser introduzida a partir de
fontes no fecais, o melhor indicador de contaminao fecal conhecido at o momento,
pois satisfaz todas as exigncias de um indicador ideal de poluio. Por esse motivo, as
tendncias atuais se direcionam no sentido da deteco especfica de E. coli, com o
desenvolvimento de diversos mtodos que permitem a enumerao rpida dessa espcie
diretamente (Silva et al. 2000).
As principais vantagens dos coliformes como indicadores so o fato de se
encontrarem normalmente, no intestino humano e animais de sangue quente e serem
eliminadas em grandes quantidades nas fezes. Alm disso, em funo da sua prevalncia
nos esgotos podem ser quantificados na gua recm contaminada, atravs de mtodos
11
simples. Outros microrganismos patgenos no tm sido utilizados como indicadores de
poluio, devido pequena populao presente nas guas poludas e s dificuldades de
serem manipulados em tcnicas de laboratrio. As principais limitaes so o fato de
estarem includas no grupo das espcies de origem no fecal, que podem se multiplicar
nas guas poludas, alm dos mtodos de deteco serem sujeitos a falsos resultados
negativos, por interferncia de Pseudomonas e falsos positivos, atravs de ao
sinergstica de outras bactrias (American Public Health Association - APHA, 1992;
Pelczar et al., 1996; Silva et al., 2000).
A investigao da presena da Pseudomonas aeruginosa, patgeno
secundrio oportunista, foi instituda pela Unio Europia em 1995, visando um melhor
controle microbiolgico da gua. A pesquisa dessa bactria recomendada em paralelo a
outros microrganismos patgenos, alm de coliformes totais e fecais e da contagem
padro de bactrias. As P. aeruginosa so bactrias aerbias estritas, Gram negativas, na
forma de bastonetes, que crescem de 37 a 42oC, so muito resistentes sobrevivendo em
substratos com pequenas quantidades de nutrientes e capazes de inibir as bactrias do
grupo coliforme, que so as que representam na legislao brasileira, o parmetro para
reprovar ou liberar determinada gua para utilizao humana. No Brasil, este grupo de
bactrias tem aparecido com relativa freqncia em exames bacteriolgicos para gua
clorada, no clorada e gua mineral natural (Cavalcante et al., 1998; Guilherme et al.,
2000; Silva et al., 2000).
No Brasil, o Conselho Nacional do Meio Ambiente (CONAMA), rgo que
estabelece a classificao e normaliza os parmetros de qualidade da gua, segundo o
seu uso preponderante, determina que a gua salobra ou salina destinada criao
extensiva ou intensiva de espcies destinadas alimentao humana e que sero
ingeridas cruas, apresentem o NMP de bactrias coliformes fecais inferior a 14/100mL,
com no mais de 10% das amostras excedendo 43 coliformes/100 mL (Brasil, 1986),
concordando com os valores citados por Cook (1991) para reas submetidas ao
monitoramento sanitrio visando a classificao como rea aprovada para a extrao de
bivalves.
12
A contagem padro de bactrias aerbias heterotrficas mesfilas
considerada a tcnica que melhor estima a densidade de bactrias contaminantes em
guas no potvel. A importncia da avaliao do grau de poluio deste tipo de gua
utilizando a contagem padro de bactrias, est relacionada determinao da fonte
poluidora, alm de reforar os padres de qualidade da gua e de traar a sobrevivncia
de microrganismos (APHA, 1992). Esta contagem objetiva estimar o nmero de
bactrias heterotrficas na gua, particularmente como uma ferramenta para acompanhar
variaes nas condies de processo, no caso de gua mineral, ou a eficincia das
diversas etapas de tratamento, no caso de gua tratada, permitindo ainda verificar as
condies higinicas em diferentes pontos da rede de distribuio (Silva et al., 2000).
O grupo de estreptococos fecais engloba as espcies Streptococus e
Enterococcus spp do grupo sorolgico D de Lancefield, que ocorrem em grande
quantidade nas fezes humanas e de outros animais e tm o trato intestinal como habitat
natural. So bactrias lticas na forma de cocos ou cocobacilos, Gram positivos,
imveis, catalase negativos e anaerbios facultativos, cujas principais caractersticas
diferenciadas so a capacidade de hidrolisar a esculina e crescer a 45oC. O grupo dos
enterococos um subgrupo dos estreptococos fecais e inclui as espcies reclassificadas
para o novo gnero Enterococcus spp, capazes de crescer a 10oC, pH 9,6 e na presena
de 6,5% de NaCl. Os estreptococos fecais normalmente no ocorrem em guas e solos
virgens ou no poluda, estando as raras ocorrncias relacionadas diretamente a animais
de vida selvagem ou drenagem do solo por enxurradas. Podem persistir por longo
tempo em guas de irrigao, com alto teor eletroltico, porm no se multiplicam na
gua poluda, sendo sua presena uma indicao de contaminao fecal recente.
Adicionalmente, a identificao da espcie pode dar uma indicao da origem da
contaminao fecal (humana ou animal). Sua maior resistncia aos diversos processos de
tratamento de esgoto, em comparao com os coliformes fecais, permite uma correlao
mais direta com a sobrevivncia sanitria, pois seu habitat no restrito ao trato
intestinal, podendo tambm ocorrer na vegetao e em certos tipos de solo. As principais
aplicaes da contagem de estreptococos fecais e enterococos so a avaliao da
qualidade de mananciais e corpos dgua, a avaliao da qualidade da gua tratada e a
13
avaliao e monitoramento das condies higinicas de sistemas industriais (Silva et al.,
2000).
Os Clostrdios sulfito redutores tm sido utilizados como indicadores de
contaminao fecal em gua, pois sua incidncia no meio aqutico est constantemente
associada a dejetos humanos, sendo sua presena comum em fezes, esgoto em gua
poluda. So esporognicos e os esporos apresentam excepcional longevidade em gua,
em funo da grande resistncia aos desinfetantes e outras condies desfavorveis do
meio ambiente. Por esse motivo so teis na deteco de contaminao fecal remota, em
situaes nas quais outros indicadores, como E. coli j no se encontrariam presentes. O
principal representante deste grupo o C. perfringens, bactria anaerbia Gram positiva,
esporognica, sulfito redutora, com temperatura de crescimento na faixa de 20 a 500C e
tima de 450C. Tem sido utilizado como indicador de contaminao fecal em gua, pois
sua incidncia no meio aqutico est constantemente associada a dejetos humanos,
sendo comum sua presena em fezes, esgotos e gua poluda. Como esporognico, os
esporos apresentam excepcional longevidade em gua, em funo da grande resistncia
aos desinfetantes e outras condies desfavorveis do meio ambiente. Por esse motivo o
C. perfringens tel na deteco de contaminao fecal remota, em situaes nas quais
outros indicadores, como E. coli j no se encontrariam presentes. A deteco de C.
perfringens recomendada como complemento aos outros testes bacteriolgicos de
avaliao da qualidade da gua uma vez que em esgoto e gua poluda sua populao
geralmente excede a de vrus entricos e bactrias patognicas. A ausncia em gua
destinada ao consumo humano tambm pode ser considerada uma indicao segura da
ausncia desse contaminantes (Silva et al., 2000).
O C. perfringens pode ser isolado do solo. Devido sua ampla
distribuio, muito difcil evitar a contaminao dos alimentos com estes organismos,
que ainda podem formar esporos termoresistentes, portanto, o cozimento nem sempre
torna o alimento seguro. O pescado e seus produtos raramente tm sido responsveis por
surtos de envenenamento por C. perfringens, mas menciona-se que estas bactrias se
encontram normalmente em mariscos, e s vezes, tanto o pescado in natura como o
cozido podem estar contaminados com essa bactria (Hernandez, 1985).
14
O C. perfringens como um microrganismo anaerbio e esporulado,
apresenta riscos para produtos embalados a vcuo ou submetidos ao tratamento trmico,
conseqentemente, produtos in natura contaminados com esse microrganismo podem se
constituir em risco se forem utilizados como matria-prima para o processamento
trmico (enlatamento), ou embalados a vcuo.
atribudo a pssaros marinhos a disseminao da Salmonella e outros
patgenos na gua. A Salmonella tem sido relatada como contaminante em vrias
espcies de pescado, principalmente em crustceos como o camaro h evidncias de
que certos sorotipos desse microrganismo faam parte da microflora natural de alguns
crustceos em pases tropicais (Huss et al., 2000; Silva et al., 2000; WHO, 1999).
Segundo Martins (1983a), sob o ponto de vista sanitrio, a pesquisa de
Salmonella e vibrios em moluscos bivalves, constitui em aspecto importante de sade
pblica, pois esse microrganismo tem sido freqentemente relacionado com a veiculao
de gastroenterites e toxinfeces em populaes que os consomem crus ou cozidos
precariamente.
Salmonella est associada a reas intestinais de animais de sangue quente,
mas alguns estudos detectaram Salmonella associada a intestinos de carpa e tilpias
provenientes da piscicultura (Huss et al., 2000).
Vrias espcies de Vibrios conhecidas por serem patognicas para
humanos, tambm tm sido isolados de bivalves. H muito o que se estudar sobre a
ecologia desses microrganismos; sabe-se que quanto ao seu desenvolvimento, o sal
requerido ou aumenta seu crescimento. Estas bactrias fazem parte da microflora natural
de esturios e guas marinhas, sugerindo a natureza nativa destas espcies, podendo se
acumular nos tecidos dos bivalves durante sua alimentao. Com a possvel exceo do
Vibrio cholerae, a presena desses vibrios no tm coneco com poluio (Cook, 1991;
Colwell et al., 1984).
As leveduras so encontradas ao lado de uma grande variedade de formas
microbianas no ambiente marinho e representam contingente importante do total da
microbiota existente. Exercem relevante papel na ecologia, como nos processos de
converso da matria orgnica e inorgnica; e exercem a funo de nutrientes para os
15
habitantes de oceanos e mares, alm de estarem includas entre os possveis indicadores
microbiolgicos de poluio, sendo as espcies mais encontradas nesse meio a Cndida,
Cryptococcus, Deparyomices, Rhodotorula e Trichosporon. H evidncias de que a
contagem de leveduras na gua do mar paralela ao nmero de coliformes, e que quanto
maior a contaminao da gua por resduos de esgotos no tratados, maior o nmero de
leveduras presentes (Paula, 1978).
Nas tcnicas propostas na 14a edio do Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater (APHA, 1975), discute-se a possibilidade da
utilizao de fungos como novos indicadores de poluio, pois a gua altamente poluda
apresenta grande nmero de fungos do solo, incluindo leveduras. Portanto, um aumento
no nmero de fungos indicaria a presena de material orgnico em grandes
concentraes.
Em se tratando de bivalves e outras espcies de pescado, d-se nfase
qualidade da gua, pois a classificao desta fundamental para garantir a sanidade
qumico-microbiolgica do molusco, pois monitorando as guas, os rgos competentes
podero definir qual o local recomendado para a colheita e cultivo de bivalves (National
Advisory Commitee on Microbiological Criteria for Foods,1992).
16
terminam por ser lanados em galerias de guas pluviais, crregos ou praias, o que
naturalmente prejudica a qualidade da gua.
Com relao fisiografia da praia, importante ressaltar que enseadas,
baas e lagunas apresentam condies de diluio bastante inferiores s observadas em
regies costeiras abertas. A menor taxa de renovao da gua dessas regies contribui
para a concentrao dos poluentes, limitando, assim, a capacidade de diluio do meio
receptor, como o caso de muitos cultivos de mexilhes da regio de Ubatuba (Cetesb,
2003; Salati Filho, 2001).
As chuvas constituem-se em uma das principais causas da deteriorao da
qualidade da gua de praias. Esgotos, lixos e outros detritos so carreados para as praias
atravs de galerias, crregos e canais de drenagem na ocorrncia de chuvas, produzindo,
assim, um aumento considervel na densidade de bactrias nas guas litorneas. Deve-se
lembrar ainda, a prtica disseminada na regio litornea de se ligar o sistema coletor de
guas pluviais rede de esgotos, assim como a interligao dos sistemas coletores de
esgoto rede de drenagem pluvial, que tambm so muito prejudiciais qualidade
sanitria da gua das praias (Cetesb, 2003; Salati Filho, 2001).
17
sendo este prato considerado extremamente nutritivo e apresentando desperdcio
mnimo.
O cultivo de moluscos foi realizado, inicialmente, pelos japoneses (2000 a.
c.) e romanos (100 a. c.) alcanando, nos dias atuais, elevado nvel tecnolgico e
dispondo ao consumidor um alimento nutritivo e de grande demanda.
O mexilho apresenta pronunciada variao sazonal na composio de sua
carne, com maior rendimento na poca de desova. O valor energtico de 80 Kcal/100g,
prximo ao dos peixes magros como a merluza (76Kcal/100g), enquanto que as ostras
possuem em mdia 44 Kcal/100g. Apresentam 1 a 7% de glicognio, teor elevado em
relao s outras carnes e peixes, onde este carboidrato se encontra em baixa proporo.
A frao protica do pescado situa-se na faixa de 8,4% a 17%; para mariscos e ostras os
valores mdios so de 6% e 13%, respectivamente (Espnola & Dias, 1980).
Furtado et al. (1998), analisaram sururu (Mytella falcata), e berbigo
(Anomalocardia brasiliana). A espcie M. falcata apresentou teores mdios de umidade
de 30,65% e de protena de 56,44%, enquanto que, para a espcie A. brasiliana os teores
foram 25,62% e 48,14%, respectivamente. O teor de lipdeos mostrou-se menor no
molusco M. falcata, com mdia de 2,9%, enquanto o A. brasiliana expressou um valor
superior com mdia de 7,7% e tambm apresentou-se mais rico nos teores de cinza
(3,13%) e carboidratos (15,18%). A espcie M. falcata revelou um teor mdio de 1,38%
e 8,45% destes componentes. Quanto aos minerais, o zinco apresentou teores de maior
expresso: 70,5 mg para M. falcata e 68,8 mg para A. brasiliana. A quantidade mdia de
clcio encontrada para o M. falcata foi de 53,7 mg e para o A. brasiliana 49,5mg,
comprovando assim a importante colaborao destes bivalves como fontes de nutrientes
na alimentao de populaes litorneas.
Em trabalho realizado concomitantemente a esta pesquisa, foram avaliados
a composio centesimal de mexilhes Perna perna nos mesmos pontos de cultivo e
perodo, sendo encontrado os seguintes valores para umidade, lipdeos, cinza, protena e
carboidrato: 83,9%; 1%; 1,9%; 9% e 4% respectivamente (Porrelli et al., 2003).
18
19
grande quantidade de cidos graxos insaturados,sendo portanto, altamente suceptveis
oxidao acelerada pela presena de luz, calor, irradiao e metais pesados (Beiro et al.,
2000).
20
seguintes gneros bacterianos: Serratia, Pseudomonas, Proteus, Clostridium, Bacillus,
Escherichia, Enterobacter, Shewanella, Lactobacillus, Flavobacterium e Micrococcus.
Conforme se instala e avana a alterao, predominam as espcies de Pseudomonas,
Acinetobacter e Moraxella, enquanto que nas ltimas fases da alterao predominam os
enterococos , os lactobacilos e as leveduras (Jay, 1994).
Nos moluscos cozidos precariamente, encontram-se espcies dos gneros
Alcaligenes, Flavobacterium, Moraxella, Acinetobacter e algumas bactrias Gram
positivas. As principais bactrias patognicas contaminantes em carnes de bivalves so a
Salmonella, sempre envolvida com gastroenterites e tambm responsvel pela febre
tifide; a Shigella que pode causar disenteria e certas espcies de Clostridium que
podem produzir exotoxinas patognicas. Moluscos so os maiores veculos do vrus da
hepatite A (Espnola & Dias, 1980; Beiro et al., 2000).
Muitos gneros de leveduras so encontrados no pescado e produtos
crneos. Entre eles temos: Candida, Cryptococcus, Debaromyces, Hansenula, Pichia,
Rhodotorula, Saccharomyces, Sporobolomyces, Torula, Torulopsis e Trichospora. (Jay,
1987).
A presena de Listeria monocytogenes classifica os produtos citados, a
seguir, como de alto risco, para os quais um programa de controle de Listeria deveria ser
estabelecido. So eles: os produtos cozidos ou prontos para o consumo tais como carne
de caranguejo, camaro, surimi, camaro empanado, alm dos consumidos in natura,
bivalves e pescado defumados a frio. A natureza psicrotrfica da Listeria e outros
psicrotrficos deve ser uma considerao primria de controle em qualquer tentativa de
se prolongar, atravs de armazenagem refrigerada, a vida til de um produto marinho
(Beiro et al., 2000).
21
sade pblica ocasionados, principalmente, quando os moluscos so ingeridos in natura
e a qualidade sanitria do ambiente aqutico onde eles so capturados est
comprometida (Jos, 1996).
Dados epidemiolgicos mostram que o consumo de moluscos bivalves est
associado com doenas de veiculao alimentar e a maior preocupao tem sido a gua
contaminada com esgoto. No entanto, moluscos bivalves podem tambm estar
naturalmente contaminadas com Clostridium botulinum tipo E ou Vibrio spp em guas
no poludas (Jos, 1996).
Fonte de contaminao adicional potencial o manejo do pescado; assim,
desde o momento da captura, ainda nos barcos pesqueiros, este deve ser manipulado de
forma higinica e lavado com gua livre de contaminantes. Outro fator relevante a
cadeia do frio, pois segundo algumas pesquisas, em pases tropicais, as ostras tm sido
comercializadas temperatura ambiente, variando de 25o C a 30o C, fomentando a
contamimao inicial (Germano et al., 1998; Laloo et al., 2000).
O montante de doenas transmitidas por alimentos no conhecido.
Somente em alguns pases foram estabelecidos sistemas de informaes quanto a surtos
de toxinfeces causadas por alimentos e, nestes, s uma pequena frao de casos
computada (World Health Organization - WHO, 1999).
A maioria dos surtos alimentares documentados, envolvendo pescado
marinho nos Estados Unidos, est relacionada com o consumo de moluscos bivalves.
Esta incidncia se deve biologia do animal, qualidade da gua na qual este se
encontra, s tcnicas de manipulao ps captura e ao fato de que estes alimentos,
freqentemente, so consumidos in natura (Cook, 1991).
A importncia dos frutos do mar como veculos de toxinfeces est
condicionada a fatores como a dieta da populao consumidora e o modo tradicional de
preparo do alimento. Assim, a proporo de surtos alimentares envolvendo pescado
significativamente mais alta no Japo devido ao alto consumo de pescado in natura
quando comparado a outros pases como o Canad e Estados Unidos (Huss et al., 2000).
Segundo Laloo et al. (2000), em estudos realizados em Trinidad Tobago a
respeito da qualidade bacteriolgica de ostras in natura comercializadas na regio, havia
22
57,5% delas na faixa das que excederam o padro recomendado pelo ICMF
International Comission on Microbiological Specifications for Foods, de 5,0 X 105
UFC/g de aerbios totais.
Do total de surtos alimentares relatados nos Estados Unidos no perodo de
1988-1992, 35% foram causados por bactrias (Clostridium botulinum, Escherichia coli,
Salmonella, Staphylococcus, Vibrio spp. e Bacillus cereus) atravs dos moluscos
contaminados e 12% atravs de peixes. Segundo Espnola & Dias (1980), 47% dos
surtos alimentares, tendo moluscos como vetores, so causados por microrganismos de
etiologia desconhecida, como hepatites no especificadas e certos tipos de Vibrios (V.
parahaemolyticus, V. vulnificus, V. cholerae), representando um risco ainda maior para
pessoas que consomem bivalves in natura. No caso do V. parahaemolitycus, este
microrganismo responsvel por uma elevao de 20%, nos casos documentados, de
intoxicao alimentar no Japo.
possvel que V. Cholerae possa estar associado com caranguejos e
animais da fauna marinha que possuem concha, e que esta associao possa prolongar
sua sobrevivncia no ambiente marinho (Colwel et al., 1984).
23
acompanham o desenrolar do projeto de modernizao do setor pesqueiro, contribuindo
para a reduo do pescado junto costa (Cardoso, 2001).
Segundo dados levantados pela FAO (2003), a pesca extrativa marinha
mundial teve um decrscimo de 3,45% de 2001 a 2002, vindo este fato intensificar a
importncia da aqicultura.
A categoria dos pescadores artesanais tida como um dos grupos sociais
onde predomina uma situao de pobreza, tendo havido vrias tentativas para reverter tal
situao, pois predominantemente em terra e no no mar que as causas desta situao
so manifestadas, refletindo situaes de moradia, saneamento, nutrio, escolaridade e
sade inadequadas, presentes na maioria das comunidades pesqueiras, visto que a renda
obtida pela pesca extrativa, permite somente um nvel de subsistncia para o pescador
(Cardoso, 2001).
A cadeia de intermediao do pescado talvez seja uma das mais longas do
no setor primrio. Aliando-se ao fato de sua perecebilidade, enquanto mercadoria, estes
fatores resultam numa brutal transferncia de renda do pescador para os setores de
distribuio e comercializao do produto. Tambm, a inconstncia das capturas,
inerente pesca extrativa, compromete o rendimento dos pescadores e a organizao dos
processos de armazenamento e de comercializao por parte dos pescadores artesanais,
impedindo-os, por exemplo, de firmarem contratos regulares de fornecimento de
pescado (Cardoso, 2001).
A produo pesqueira do litoral Norte, que segundo a Companhia de
Entrepostos e Armazns Gerais do Estado de So Paulo (CEAGESP), tem cado 20 % ao
ano desde 98. A demanda existente precisa ser suprida com a compra, por parte de
restaurantes, de pescado do Sul do pas e do Mercosul. A queda nos estoques pesqueiros
tem sido atribuda degradao dos manguezais, pesca predatria, e poluio dos
rios, causando uma reduo de at 75% da renda dos pescadores locais. A diminuio da
renda por sua vez, tem causado abandono da profisso, fato que aliado baixa
escolaridade e pouca qualificao, acaba por dificultar o enquadramento dos pescadores
em outra atividade (Fim..., 2002).
24
No Brasil, a maricultura est representada, basicamente, pelo cultivo de
crustceos e moluscos. O cultivo de moluscos responsvel por 245 t. de toda a
produo aqcola mundial, sendo que os mexilhes representam cerca de 13,3% da
produo de moluscos cultivados (Ostrensky et al., 2000).
Segundo Borghetti & Ostrensky (2000), os moluscos produzidos no Brasil
so o mexilho Perna perna, duas espcies de ostras, a nativa Crassostrea rhizophorae e
a ostra do pacfico Crassostrea gigas, e uma espcie de vieria, Nodipectem nodosus.
Nestes poucos anos da mitilicultura no Estado de Santa Catarina, cerca de
800 produtores ingressaram na atividade, foram criadas 13 associaes de produtores e
construdas 4 unidades de processamento de moluscos. O nmero de empregos diretos
gira em torno de 4000 e cada hectare de cultivo de mexilho tem possibilitado a gerao
de at 52 empregos (Moluscos..., 2002).
25
O Litoral Norte de So Paulo possui uma rea de 1943 km2 abrangendo
quatro municpios: So Sebastio, Ilhabela, Caraguatatuba e Ubatuba. Estes municpios
possuem um total de 184 praias, a maioria com extenso mdia de 1 Km, cobrindo uma
extenso de 128 km (CETESB, 2002).
O municpio de Ubatuba constitudo de 78 praias e segundo dados do
IBGE Censo 2000, possui a populao de 66.448 habitantes, sendo que este nmero
praticamente duplicado nos finais de semana prolongados e na alta temporada. Sendo
que, segundo Salati Filho (2001), a carga poluidora mdia da populao fixa de 2.691
Kg DBO/dia, enquanto que o da populao flutuante principalmente nos finais de
semana e frias de 8.073 Kg DBO/dia, chegando ao mximo de produo de carga
poluidora de 13.455 Kg DBO/dia.
Quatro municpios do Litoral Norte do Estado de So Paulo so atendidos
pela Companhia de Saneamento Bsico do Estado de So Paulo - SABESP, mas apenas
as reas centrais possuem rede de coleta de esgoto, cujo tratamento ou desinfeco
feita base de cloro. Nas praias existem alguns sistemas individuais de tratamento de
esgotos e a disposio final feita por infiltrao no solo atravs de fossas spticas ou
pelo lanamento em corpos dgua (rios, crregos e oceano), aps desinfeco (Salati
Filho, 2001).
Segundo a Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental - CETESB
(2003), os ndices relativos do Litoral Norte referentes a esgoto impressionam no s
pela quantidade de carga poluidora gerada mas, sobretudo, pela quantidade no tratada
cerca de 90%.
Os resultados de anlises efetuadas por Agudo et al. (1982), revela que,
algumas praias do municpio de Ubatuba apresentaram ndices crescentes de
contaminao nos ltimos anos. A mais prejudicada tem sido a praia do Saco da Ribeira,
onde a concentrao de coliformes fecais aumentou em um fator 23, nos ltimos trs
anos, passando de uma concentrao mediana de 1,0x102 CF/100 mL para 2,3x103
CF/100 mL. Outras praias do municpio, onde o nvel de poluio vem aumentando em
menos proporo so Praia das Toninhas, Praia da Enseada, Praia de Perequ-Mirim,
Praia do Lzado e Praia Dura. J nas praias de Itamambuca, Vermelha do Norte,
26
Perequ-Au, Tenrio, Itagu, Praia Grande, Lagoinha e Maranduba, nos ltimos trs
anos, o nvel de poluio pode ser considerado estvel. A Praia Iperoig tem sido
considerada atravs dos anos como uma das mais contaminadas de todo o municpio,
porm com leve tendncia a melhorar nos ltimos anos. Relatrios recentes da Cetesb,
revelam que a qualidade das guas das praias do Litoral Paulista melhoraram em 2002; a
tendncia de melhora na qualidade sanitria da praia paulistas vem se verificando nos
ltimos 4 anos, fato explicado em parte, pelas obras de infra-estrutura de saneamento
bsico implantadas na regio costeira (Relatrio..., 2003).
O municpio de Ubatuba considerado um local excelente para
implantao da maricultura, pois situa-se, relativamente, prximo aos principais centros
consumidores (So Paulo e Rio de Janeiro); uma regio com muitos atrativos
tursticos; apresenta a costa litornea bastante recortada, formando pequenas baas
abrigadas e possui 80% de sua rea inserida no Parque Estadual da Serra do Mar
(CETESB, 2002).
O turismo no Litoral Norte teve grande incremento a partir da dcada de
sessenta, com o advento das ligaes rodovirias, promovendo o afluxo de turistas para
esta regio. problemtica do desenvolvimento urbano e turstico do litoral, soma-se a
problemtica ambiental que ganha corpo nas ltimas dcadas.
Como j sugerido pela FAO (2001), a aqicultura vem destacando-se como
provedora de alimentos e empregos, o que pode ser confirmada, pela adeso de
pescadores locais maricultura. Segundo entrevista Folha de So Paulo (Fim... 2002),
o pescador Euzbio Higino de Oliveira, 58 anos, produtor de um dos pontos de coleta da
presente pesquisa, afirma estar satisfeito com a produo de mexilhes, pois, segundo o
mesmo, em poca de temporada, o faturamento com a venda dos moluscos chega a R$
2.000,00, enquanto que com a pesca extrativa ganhava no mais do que um salrio
mnimo.
Nos laboratrios do Centro de Biologia Marinha da USP (Cebimar USP)
e Instituto de Biocincias da USP, estudos de monitoramento da presena de toxinas
marinhas, iniciaram-se em meados da dcada de oitenta, constatando a existncia das
27
mesmas no litoral de So Paulo, porm em quantidades residuais, sem oferecer perigo
aos consumidores de mariscos (Freitas, 2003).
Dentre eles est o cultivo em estaca que muito utilizado na Frana e apresenta a
vantagem de no expor os bivalves aos predadores do fundo; a desvantagem a
exposio ao ar na mar baixa, reduzindo o tempo hbil de alimentao. O cultivo sobre
27
OSTINI, S; GELLI, V.C. Curso de criao de mexilho. Ubatuba: IPESCA, s.d. 45p.
28
o fundo uma tcnica muito utilizada na Holanda e consiste no transporte de mexilhes
jovens para os locais de cultivo, geralmente em guas calmas e rasas, a vantagem deste
sistema que o marisco permanece todo o tempo submerso, alimentando-se
continuamente, mas tem como maior desvantagem o contato deste com o lodo e,
conseqente presena de resduos minerais no intestino, depreciando o produto final.
Para a implantao do cultivo suspenso, muitos aspectos devem ser levados em
considerao, embora seja uma tcnica muito utilizada no Mediterrneo, com a
vantagem de apresentar baixo custo de implantao e manuteno.
No Litoral Norte de So Paulo existem 77 famlias cadastradas como
produtoras de mexilho Perna perna. Os criadores esto organizados em associaes, e
as fazendas marinhas esto localizadas em 23 praias ao longo do litoral. Cada fazenda
ocupa cerca de 2.000 m2 de lmina dgua e produz em mdia 12 Kg de mexilho por
metro linear de rede (Gelli et al., 2002).
O sistema de cultivo utilizado pelos produtores no Litoral Norte
denominado espinhel, ou long line, devido a sua adaptao s condies
oceanogrficas da Costa paulista, que permitem fcil manejo e pequeno investimento. A
semeadura realizada com base no sistema francs, permitindo que cada sistema
simples implantado produza at duas toneladas de mexilhes, em casca, por safra e em
um perodo que varia de 6 a 9 meses, conforme o local de produo (Pereira et al.,
2003).
As tcnicas de criao de mexilhes foram aprimoradas e difundidas pelo
Instituto de Pesca/ Agncia Paulista de Tecnologia do Agronegcio - APTA/ Secretaria
da Agricultura e Abastecimento - SAA e suas parcerias (Centro de Assistncia Tcnica
Integrada (CATI) So Sebastio e Departamento de Produo Animal - DPA/
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento - MAPA) atravs de cursos e
assistncia tcnica a comunidades de pescadores locais do Litoral Norte do Estado de
So Paulo, resultando no aumento de 9 para 90 produtores nos ltimos cinco anos (Gelli
& Carneiro, 2003). Sendo que, o municpio de Ubatuba conta com 42 mitilicultores.
A Associao dos Maricultores do Estado de So Paulo -AMESP
composta de 115 associados. A implantao do sistema de geo-referenciamento para a
29
implantao da maricultura, a padronizao do cenrio e o zoneamento das fazendas
marinhas, so aes coordenadas pelo Instituto de Pesca, com a participao das demais
parcerias (Secretaria do Meio Ambiente, Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos
Recursos Renovveis - IBAMA, DPA/ MAPA, colnias de pesca, prefeituras municipais
e universidades) que esto propiciando o desenvolvimento ordenado das fazendas
mexilhoneiras na regio (Gelli & Carneiro, 2003).
Estes mesmos autores realizaram um levantamento preliminar em 1989,
quanto s reas mais favorveis mitilicultura no litoral do municpio de Ubatuba e
concluram que a atividade pode ser praticada no municpio, em cerca de 4100 hectares
distribudos ao longo deste litoral; que o potencial de produo desta rea , de acordo
com as mesmas estimativas, de cerca de 125 mil toneladas de mexilhes, em casca, por
ano, e que, do ponto de vista econmico, esse potencial justifica plenamente a
delimitao e a preservao destas reas para fins de prtica da mitilicultura.
Atualmente, a produo de mexilho do Litoral Norte est em torno de 100
toneladas/ano, sendo o municpio de Ubatuba, o local com maior potencial de produo.
A comercializao do mexilho ocorre praticamente durante o ano todo, predominando a
forma a granel, sendo que a oferta maior no vero, perodo em que a produo maior.
A maioria dos produtores de Ubatuba vende o mexilho in natura, vivo na concha,
sendo que alguns os vendem limpos e cozidos e outros comercializam o produto j
pronto para o consumo mariscado, diretamente na praia para o turista. Todas as
iniciativas de criao de moluscos bivalves no pas podem ser consideradas clandestinas,
no que se refere legalizao de uso da rea. Isso ocorre porque a legislao pertinente
(Decreto 2869) permanece com suas normas complementares ainda no aprovadas, o
que pode dificultar a aquisio do Registro do Aqicultor por parte dos criadores e,
conseqentemente, de financiamentos e garantias previstas no corpo do Decreto (Pereira
et al., 2003; Rinaldi et al., 2003).
30
2.6.3 Diagnstico de mercado e consumo
31
O comportamento do consumidor influenciado por variveis sciodemogrfico-culturais, variveis psicolgicas (estilo de vida, motivao) e por situao
de compra. Com relao freqncia do consumo, 39,31% dos paulistanos afirmam
consumir moluscos poucas vezes ao ano e 26,21% apenas nos meses do vero. Apesar
do consumidor preferir em 52,08% das vezes consumir o produto em casa, observa-se
um valor relevante para o consumo em restaurantes (34,38%) (Barni et al., 2002).
Pesquisa da EPAGRI - Empresa de Pesquisa Agropecuria e Extenso
Rural de Santa Catarina, realizada em trs Estados brasileiros, entre eles So Paulo,
atesta-se uma clara preferncia pelo produto a granel, desconchado e fresco (resfriado),
no entanto, devido a sua natureza perecvel e sua limitada capacidade de
armazenamento, premente o desenvolvimento de embalagens, reduo dos custos de
distribuio e um transporte rpido, econmico e confivel. Em 2002, os principais
canais de distribuio dos moluscos na cidade de So Paulo eram: 52,82%
supermercados, 21,13% peixarias de bairro, 19,01% mercado municipal e 3,52% direto
do produtor (Barni et al., 2002).
Atualmente, o mercado distribuidor de moluscos no Estado de So Paulo
tem como caracterstica principal, a clandestinidade. Nesse mercado, a maioria dos
atravessadores comercializa o produto proveniente do extrativismo, no certificado
sanitariamente, adquirido dos produtores por um preo irrisrio e vendido ao
consumidor com um lucro excessivo e sem qualquer garantia.
No caso do mexilho produzido em Ubatuba, no existe nenhuma empresa
que beneficie ou processe esse produto, o que obriga os produtores a comercializarem
sua produo, diretamente, nos bares e restaurantes.
3 MATERIAL E MTODOS
33
34
m2, tem 5 long lines a uma distncia aproximada de 1,5 Km da costa e 1,6 Km do Rio
Indai. A maior parte das sementes coletada na prpria produo e, prximo regio,
existe um berrio, a praia da Me Maria.
O Costo do Cedro localiza-se na regio central de Ubatuba,
aproximadamente a 4,0 Km da principal sada de efluentes orgnicos (esgoto), que
passam por tratamento anteriormente sua devoluo ao ambiente. uma regio de mar
aberto e protegido ao sul, sendo o cultivo constitudo por 700 redes plantadas em cordas
de 1,80 a 2,5m de comprimento, em um local onde a profundidade varia de 4,5 a 6,0m.
35
Foram utilizados frascos de vidro neutro de borossilicato com capacidade
para 1 L, os quais foram previamente envoltos em papel pardo e esterilizados por 2 h,
em estufa Fanem, modelo 315 SE, temperatura de 170-180 0C.
A coleta da gua foi efetuada manualmente, seguindo recomendaes da
CETESB (1988). O frasco foi mergulhado, em contra corrente paralelamente ao
movimento da gua, cerca de 15 a 30 cm abaixo da superfcie da gua junto aos pontos
de cultivo, previamente selecionadas, para evitar a introduo de contaminantes
superficiais, conforme mostra a Figura 3. Inclinou-se o frasco, lentamente, para cima a
fim de permitir a sada do ar e conseqente enchimento do mesmo. Aps a retirada do
frasco da gua, desprezou-se uma pequena poro da amostra, deixando espao
suficiente para permitir a homogeneizao da amostra para anlise. Estes foram
devidamente etiquetados e transportados em vasilhame isotrmico, com gelo, at o local
da anlise (Figura 4).
36
37
38
Figura 7 Lavagem com gua do mar ou gua tratada (dependendo do ponto de cultivo)
e retirada das cracas das valvas.
39
b) Determinao de turbidez por leitura direta em tubo de vidro em
turbidmetro DLA 1000 - Del Lab, sendo os valores expressos em Unidade
Nefelomtrica de Turbidez UNT.
c) Temperatura, atravs de Termmetro Digital Pocket DT-625 (lapiseira)
prova d'gua, com haste 125 mm e com memria min/mx.
3.4.2 Mexilho
Para o mexilho foi analisado o pH em potencimetro digital.
Foram realizadas anlises biomtricas dos mexilhes, atravs das medies
das valvas utilizando um paqumetro, como mostra a Figura 9.
40
41
Provvel, obteve-se NMP de coliformes fecais/mL de amostra e coliformes totais
(APHA, 1998; Hitchins, et al., 2001).
3.5.2.2 Enterococcus sp
Utilizou-se a tcnica de tubos mtiplos, srie de 3 tubos de Nmero Mais
Provvel (NMP). Para a prova presuntiva, inoculou-se 10 mL da gua nos tubos
contendo Caldo Azida Glicose em concentrao dupla. Inoculou-se 1 mL da amostra em
uma srie de 3 tubos contendo Caldo Azida Glicose em concentrao simples, e volume
de 1 mL da diluio 10-1, conforme preparo descrito em 3.5.1 em outra srie de 3 tubos
contendo o mesmo meio e incubou-os a 36C 1C por 48 h. A positividade foi
indicada por turvao e alterao da cor de violeta, para amarelo indicando viragem do
pH por produo de cido. Para a prova complementar, utilizou-se o crescimento em
caldo Ethyl Violet Azide Broth - EVA.
Para prova confirmatria efetuou-se os seguintes testes:
- Colorao de Gram atravs de esfregao da cultura com posterior
identificao;
- Prova da catalase atravs da transferncia de cultura em gar para uma
lmina contendo uma gota de perxido de hidrognio a 3%. A formao de borbulhas
indica positividade;
- Crescimento a 45C atravs de inoculao em caldo BHI - Brain Heart
Infusion, incubao a 45 0C 0,2C por 24 h. A turvao do meio indica positividade;
- Crescimento em NaCl 6,5% atravs de inoculao em caldo BHI com
6,5% de NaCl, incubao a 36 0C 1C por 24 h. A turvao do meio indica
positividade.
Atravs da combinao do nmero de tubos positivos em cada srie de
diluio e utilizando-se a Tabela de Nmero Mais Provvel, realizou-se o clculo de
NMP/100mL (Hartman et al., 1992).
42
43
Foram selecionadas colnias suspeitas, com as seguintes caractersticas, em
cada tipo de meio slido seletivo:
- gar Rambach: vermelhas; alguns sorotipos podem se apresentar com
colorao rosa claro, de cor pssego ou amarelas;
- gar MLCB: negras, lisas, brilhantes e de bordas regulares, alguns
sorovares podem apresentar-se de tamanho pequeno (cerca de 1 mm), de cor azul
intenso ou violeta;
- gar BPLS: incolores ou de cor rosada, translcidas ou ligeiramente
opacas;
- gar XLD: negras, lisas, brilhantes e de bordas regulares, com
alcalinizao do meio indicada pela alterao da colorao do mesmo para rosa escuro.
Para as provas preliminares, inoculou-se cada colnia suspeita em gar TSI
(Triple Sugar Iron Agar) e gar LIA (Lysine Iron Agar), atravs de picada profunda e
estriamento no bisel. Paralelamente, inoculou-se em gar BHI (Brain Heart Infusion)
gar inclinado para verificao de pureza e manuteno da cepa. Incubou-se a 36C
1C por 18 a 24 h.
Para TSI, a reao presuntiva esperada para salmonela bisel alcalino ou
inalterado, com base amarela ou negra, com ou sem formao de gs; para LIA, o bisel
violeta e a base violeta ou negra. Para provas complementares, partiu-se ento de
colnias crescidas em gar BHI, no qual foram inoculadas as colnias com as respostas
esperadas de Salmonella sp em gar TSI e gar LIA, e, em meios para:
- Produo de urease: atravs de inoculao em caldo uria, incubao a
360C 10C por 24 a 30 horas ;
- Utilizao de malonato: atravs de inoculao em caldo malonato, com
incubao a 360C 10C por 24 a 30 horas, sendo que a alterao para azul indica
alcalinizao do meio aps utilizao do malonato;
- Descarboxilao da lisina: atravs de inoculao em caldo moeller
descarboxilase estril, incubao a 360C 10C por 24 a 30 horas. A descarboxilao da
lisina caracterizada pela alcalinizao do meio, o que demonstrado pela no alterao
de cor do indicador presente;
44
- Utilizao de citrato: inoculao em gar citrato de Simmons, incubao a
360C 10C, por 24 a 30 horas, sendo que a alterao para azul indica alcalinizao do
meio aps utilizao do citrato;
- Desaminao da fenilalanina: inoculao em superfcie de gar
fenilalanina, incubao a 360C 10C por 24 a 30 horas, adio de soluo de citrato
frrico a 10%, sendo que a alterao da colorao para verde indica reao positiva;
- Meio SIM: inoculao atravs de picado em meio SIM, incubao a 360C
10C por 24 a 30 horas. A motilidade caracterizada pela difuso do crescimento por
todo o meio. A produo de H2S caracterizada pelo enegrecimento do meio. Aps a
leitura da motilidade e da produco de H2S, feita a adio de algumas gotas de reativo
de Kovacs para verificao de indol, atravs da formao de um anel vermelho
violceo;
- Fermentao da lactose: atravs de inoculao em caldo lactose 1%
acrescido de prpura bromocresol, incubao por 30 horas, sendo a fermentao
caracterizada pela alterao da colorao do caldo para amarela;
- Fermentao do manitol: atravs de inoculao em caldo manitol 1%
acrescido de prpura bromocresol, incubao por 360C 10C por 24 a 30 horas, sendo a
fermentao caracterizada pela alterao da colorao do caldo para amarelo;
- Reao de VM-VP Voges Proskauer: atravs de inoculao em 2 tubos de
caldo VP, incubao de um dos tubos a 360C 10C e o segundo a 220C 10C por 4 dias.
Leitura de VM realizada aps adio de soluo de vermelho de metila A resposta
positiva caracteriza-se pela colorao vermelha. Aps a leitura da reao de VM, foi
feita a adio de soluo de -naphtol 5% e soluo de NaOH, 40%, para leitura de
reao de VP, sendo que a viragem de colorao para rosa escuro indica reao positiva.
Para provas confirmatrias, as colnias suspeitas de Salmonella sp, aquelas
que apresentaram Uria, Malonato Fenilalanina, Indol, Lactose e VP negativas e Lisina,
Citrato, Produo de H2S, Motilidade Manitol e VM positivos, foram submetidas s
seguintes provas:
- Reao de oxidase: utilizaram-se palitos de madeira estreis para
introduzir nas colnias suspeitas. Espalhou-se a cultura sobre papel de filtro impregnado
45
com o reativo especfico para oxidase. Em 10 a 20 segundos, havendo o aparecimento de
colorao escura (azul ou vermelho intenso, dependendo do reativo empregado)
caracteriza reao positiva;
- Reao de PYRase: as colnias foram retiradas com o auxlio de palitos
de madeira estreis, e procedeu-se ao espalhamento da cultura no carto impregnado
com cido L-piroglutmico. Trs minutos aps, adicionou-se soluo tampo e soluo
de para-dimetilaminocinamaldedo. A reao positiva caracteriza-se pela colorao
vermelha;
- Prova da catalase;
- Sorologia: atravs de soro anti-Salmonella Polivalente O.
So consideradas positivas as cepas que apresentaram resultados negativos
para oxidase e pyrase e positivo para catalase. O resultado foi expresso como Presena
ou Ausncia/25 g ou mL de amostra (Bennett et al., 1999).
46
- Coagulase: transferiu-se 0,3 mL de cada tudo de cultivo em BHI para
tubos estreis contendo 0,3 mL de plasma de coelho, incubou-se a 36C 1C por 6 h,
sendo que a resultado positivo expressa-se atravs da formao de cogulos;
- Termonuclease: inativou-se a cultura mantida em caldo BHI, por imerso
em gua ebulio, por 15 min., preencheu-se os orifcios com cerca de 2 mm de
dimetro com gar para ensaio de termonuclease ou no guar azul de toluidina DNA.
Incubou-se a 36C 1C, por 4 h, ou a 50C 2C por 2 h O aparecimento de um halo
rosa no gar azul de toluidina, foi considerada uma prova positiva para termonuclease;
- Catalase.
Foram consideradas S. aureus, as colnias que apresentaram Colorao de Gram
positiva, coagulase, termonuclease e catalase positivos. Considerou-se a diluio
estabelecidas, nas placas submetidas contagem para a quantificao de Staphylococcus
aureus presentes, por mL da amostra (Lancette & Tatini, 2001).
47
colorao rosa indicou positividade. A colorao vermelha indicar a reduo de nitrato
nitrito. O resultado negativo deve ser confirmado pela adio de p de zinco. A
colorao rosa indicar a no reduo do nitrato, enquanto que, a no alterao de cor
indica reao positiva para reduo do nitrato;
- -hemlise: efetuou-se estriamento em superficie gar sangue de carneiro,
incubou-se a 36C 1C, por 24 h. A -hemlise caracterizada pela formao de halo
translcido ao redor do crescimento;
- Decomposio da tirosina: estriou-se a cultura em superfcie de gar
tirosina inclinado, incubou-se a 36C 1C, por 48 h, sendo que a decomposio da
tirosina caracterizou-se por uma zona clara prximo ao crescimento;
- Crescimento rizide: estriou-se a cultura em superfcie de gar nutriente,
incubou-se a 36C 1C, por 48 a 72 h, sendo que o resultado positivo para crescimento
rizide se caracteriza pelo aparecimento de colnias com longas extenses em forma de
razes ou longos fios;
- Presena de corpsculos de incluso cristalina: realizou-se o esfregao, a
partir do gar estoque inclinado mantido em temperatura ambiente por 2 a 3 dias,
coloriu-se com azul de Coomasie, por 3 minutos, sendo que o resultado positivo se deu
pelo aparecimento de cristais tetragonais.
So considerados como B. cereus, as colnias que apresentarem bastonetes
curtos Gram positivos, com extremidades quadradas dispostos em cadeias e esporos
centrais ou sub-terminais; motilidade positiva para 50 a 90% dos casos; reduo de
nitrato, -hemlise, decomposico da tirosina positivos, crescimento rizide e
corpsculos de incluso cristalina negativos.
Os resultados foram expressos em UFC/ml da amostra (Harmon et al.,
1992; Rhodeamel & Harmon, 1995).
48
fundido e resfriado a 46C. As placas foram incubadas invertidas a 36C 1C por 48 h.
Selecionaram-se placas que continham entre 25 e 250 colnias para amostras de
alimentos e entre 30 e 300 colnias para amostras de gua do mar. Considerando a
diluio da placa submetida contagem, efetuou-se o clculo de microrganismos
aerbios mesfilos, estritos e facultativos viveis presentes por mL da amostra (APHA,
1998; Morton, 2001).
49
foram feitas as diluies decimais subseqentes, tantas quanto necessrio para as
contagens, sendo as anlises realizadas em duplicata.
3.5.4.2 Enterococcus sp
Para a prova presuntiva, efetuou-se diluies de 10-1 a 10-3 e foram
semeadas alquotas de 1 mL, em uma srie de 3 tubos, contendo Caldo Azida Glicose,
50
de cada diluio. Incubou-se os tubos a 36C 1C, por 48 h. O restante segue como o
descrito em 3.5.2.2.
51
positivos so aqueles em que observa-se a fermantao da lactose pela produo de
bolhas de gs e a mudana da cor do meio de vermelho para amarelo, e a liquefao da
gelatina atravs da permanncia do estado lquido aps resfriamento;
- Fermentao da rafinose atravs da repicagem em tubo contendo caldo
para fermentao da rafinose (1%), adicionou-se de 1 a 2 mL de Vaspar estril e
incubou-os a 36C 1C por 72 horas. Considerou-se positivo para fermentao da
rafinose pela viragem da cor do indicador vermelho de fenol para amarelo;
So considerados como C. perfringens as colnias que apresentarem
bastonetes retos Gram positivos, com extremidades arredondadas; storm test positivo;
motilidade negativa; reduo de nitrato,fermentao da lactose e da rafinose positiva e
liquefao da gelatina.
Considerando a diluio da placa submetida a contagem, realizado o
clculo de C. perfringens/ por g da amostra em anlise
52
3.5.4.8 Microrganismos aerbios mesfilos (Heterotrficos)
Para esta anlise foram utilizadas as diluies 10-2 e 10-5 (conforme descrito
no item 3.5.3), sendo que o restante segue da mesma maneira como descrito no item
3.4.2.7.
4 RESULTADOS E DISCUSSO
4.1.2.1 pH
54
significativamente; novembro e maro tiveram as menores mdias e diferiram dos
demais, sendo que em fevereiro, ocorreu o valor mdio mais alto como mostra a Tabela
2, certamente como resultado do final de temporada.
Segundo Pinheiro Junior (2000), h uma tendncia do pH da gua decrescer
com o distanciamento da fonte poluidora de despejo de esgoto, isto porque a matria
orgnica em suspenso diluida pela ao das ondas, mars e correntes marinhas.
Pontos de Cultivo
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
8,46 a
8,40 a
8,44 a
Meses
Novembro
Dezembro
Janeiro
Fevereiro
Maro
8,26 b
8,51 a
8,5 a
8,65 a
8,23 b
55
4.1.2.2 Turbidez
56
Tabela 3. Turbidez da gua dos pontos de cultivo nos referidos meses de coleta (UNT).
Meses
Praia da
Praia da
Costo do
Almada
B. Seca
Cedro
Novembro
1,00 A a
0,80 A ab
0,35 B b
Dezembro
0,40 A b
0,70 A b
0,50 A ab
Janeiro
0,50 B b
0,95 A ab
0,30 B b
Fevereiro
0,35 B b
1,15 A a
0,45 B ab
Maro
0,75 A ab
1,00 A ab
0,85 A a
57
dados com os da pesquisa em questo, podemos afirmar que 80% dos valores obtidos
foram superiores s mdias registradas como esperadas para esta regio.
Quanto aos meses nos quais foram efetuadas as medies, novembro e
maro, os trs pontos de cultivo analisados diferiram, estatisticamente, entre si; no ms
de dezembro e janeiro, o ponto de cultivo da Almada, diferiu dos demais pontos
estudados, e no ms de fevereiro, o cultivo do Costo diferiu estatisticamente dos
demais.
Quanto aos pontos de cultivo estudados, na Almada, os meses de
novembro, fevereiro e maro no diferiram, significativamente, entre si ao nvel de 5%;
os meses de janeiro, fevereiro e maro tambm no, como mostra a Tabela 4.
Praia da
Praia da
Costo do
Almada
B. Seca
Cedro
Novembro
32,19 A b
26,95 B d
25,34 C c
Dezembro
34 A a
30 B c
30 B b
Janeiro
31 B c
32,09 A a
31,6 AB a
Fevereiro
31,5 B bc
31,2 B b
32,19 A a
Maro
31,5 A bc
26,7 B d
24 C d
Meses
58
A temperatura ambiente est diretamente ligada temperatura da gua, e
esta influencia a fisiologia dos bivalves, constituindo-se no principal fator ambiental de
influncia na taxa de filtrao dos mesmos (Solic et al., 1999).
Os valores para a temperatura da gua encontrados nesta pesquisa
apresentaram amplitude de variao mais reduzida, de 250C a 300C, durante o perodo de
coleta, sendo a menor temperatura, a de dezembro na Almada e Barra Seca e, a maior, a
do ms de fevereiro na Barra Seca, como mostra a Tabela 5.
Praias
Meses
Almada
B. Seca
C. Cedro
Novembro
27,2 A c
26,4 B c
25,79 C c
Dezembro
25 B d
25 B d
28 A b
Janeiro
29,6 A a
30 A a
30 A a
Fevereiro
28,5 B b
29,79 A a
29,5 A a
Maro
26,79 B c
27,79 A b
25,9 C c
59
isso que os animais aquticos, ao contrrio dos terrestres, no tm problemas de
drsticas adaptaes a amplas flutuaes de temperatura (Tommasi, 1979), concordando
com valores encontrados nesta pesquisa.
Cerca de 86,7% das amostras de gua do mar apresentaram temperatura
inferior temperatura ambiente.
A temperatura tima de filtrao para mexilhes do Mar Mediterrneo est
entre 150e 250C. Para mexilhes do Mar Bltico a temperatura tima de filtrao est em
torno de 170C; temperaturas acima de 200C para mexilhes do mar Bltico e 250C para
mexilhes do Mediterrneo, resultam em praticamente paralizao total da filtrao
(Solic et al., 1999).
Quanto a temperatura da gua nos meses analisados, levando em
considerao os meses, em novembro e maro todos os pontos de cultivo diferiram
estatisticamente entre si; j em janeiro ocorreu o contrrio, pois os pontos de cultivo no
diferiram entre si; em dezembro, o nico ponto que se diferenciou, estatisticamente, dos
demais foi o do Costo do Cedro e, em fevereiro, o da Almada.
4.1.3
Anlises microbiolgicas
60
Quanto ao ndice de coliformes totais, estes ficaram entre os valores mdios
de 3,4 a 3,6x102 NMP/100mL, como mostra a Tabela 6, sendo que a maior contagem foi
encontrada no cultivo da Barra Seca, no ms de maro. Tambm, neste mesmo cultivo,
no referido ms, encontrou-se o maior valor mdio de coliformes fecais deste estudo,
cerca de 5,7x101 NMP/100mL, correspondendo a 6,7% das amostras analisadas como
mostra a Tabela 7. Segundo o Relatrio da CETESB (2002), esta mesma praia
apresentou contagem (mdia de 2 amostras) igual a 1,7x104 NMP de coliformes
fecais/100 mL de gua. Assim, possvel concluir que a contagem diminuiu cerca de 3
casas logartimicas.
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
3,4
<3,0
<3,0
Dezembro
< 3,0
< 3,0
< 3,0
Janeiro
5,4
3,4
5,0
Fevereiro
< 3,0
3,4
7,3
Maro
9,8
3,6x102
6,6
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
<3,0
<3,0
<3,0
Dezembro
<3,0
<3,0
<3,0
Janeiro
<3,0
3,1
<3,0
Fevereiro
<3,0
3,1
3,4
Maro
3,4
5,7x101
3,1
61
Nesta pesquisa, correlacionou-se a incidncia de Coliformes Totais com
alguns dos microrganismos estudados, como mostra a Tabela 8.
Microrganismos
Correlao (%)
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
-15
69
30
99
87
62
destes maior no vero, o que tambm eleva a carga de efluentes despejados nas guas
nesta poca, acarretando problemas com contaminao.
Correlacionou-se a contagem microbiana com o ndice pluviomtrico,
conforme apresentado na Tabela 9. Verificou-se alta correlao para coliformes totais
para as praias da Almada e Barra Seca e alta para coliformes fecais na Barra Seca,
concordando com Cetesb... (2003); Salati Filho (2001) e Lizrraga-partida & Crdenas
(1996). Estes autores afirmaram que as chuvas interferem no ndice de qualidade
microbiolgica da gua, pois estas tm a capacidade de arrastar esgotos e resduos
slidos para os cursos dgua que, por sua vez, afluem para o mar. Ainda para
coliformes totais, obteve-se correlao positiva baixa no cultivo do Costo, enquanto
que para coliformes fecais houve correlao negativa baixa para os cultivos da Almada e
Costo do Cedro.
Microrganismos
Correlao (%)
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Heterotrficas UFC/mL
72
84
-41
51
95
53
76
82
17
-8
82
-8
63
barrar cursos dgua eventualmente contaminados; j nas mars vazantes, ocorre
fenmeno inverso, havendo uma drenagem nas guas desses crregos para o mar,
causando a presena, na praia, de maior quantidade de esgotos.
Microrganismos
Correlao (%)
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Heterotrficas UFC/mL
-0,2
-0,5
0,8
-0,04
-0,6
0,43
-0,18
-0,52
0,81
0,5
-0,52
0,83
Microrganismos
Correlao (%)
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Heterotrficas UFC/mL
-71
-80
14
-46
-87
-72
-72
-77
-46
-18
-77
-18
64
65
4.1.3.2 Enterococcus sp
Meses
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
<3,0
<3,0
<3,0
Dezembro
<3,0
<3,0
<3,0
Janeiro
<3,0
<3,0
<3,0
Fevereiro
<3,0
<3,0
<3,0
Maro
<3,0
4,4
<3,0
66
intestinal (Silva et al., 2000). Os os maiores valores de contagem para Enterococcus sp,
coincidiram com as maiores contagens para coliformes fecais, demonstrando que estes
microrganismos esto ligados a maior poluio.
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
<3,0
<3,0
<3,0
Dezembro
26,3
13
4,9
Janeiro
3,2
3,4
4,4
Fevereiro
4,4
<3,0
<3,0
Maro
9,2
1,5x101
3,2
67
Os resultados referentes s anlises de coliformes, somados s de
Clostrdios Sulfito-Redutores, indicam contaminao contnua da gua do mar,
resultando em um problema permanente, portanto, medidas preventivas devem ser
tomadas quanto a busca permanente pela melhora da qualidade da gua, pois a tendncia
o aumento da quantidade de efluentes lanados ao mar.
4.1.3.4 Salmonella sp
Meses
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
Ausncia
Ausncia
Ausncia
Dezembro
Ausncia
Ausncia
Ausncia
Janeiro
Ausncia
Ausncia
Ausncia
Fevereiro
Ausncia
Ausncia
Ausncia
Maro
Ausncia
Ausncia
Ausncia
68
Andrews et al. (1975) e Martinez-Manzares, (1992) no obtiveram relao
consistente entre os nveis de coliformes totais na gua e a presena de Salmonella,
concordando com os valores encontrados neste estudo, enquanto Martins (1983a), obtive
boa correlao.
Geldreick (1967) e Geldreick & Van Donsel (1970), devido semelhante
sobrevivncia de coliformes fecais e outros patgenos em guas estuarinas poludas,
correlacionaram a densidade de coliformes fecais com a ocorrncia de Salmonella,
sendo demonstrado que na presena de <2,0x102 CF/100 mL, a ocorrncia de
Salmonella seria de 6,5 a 31%. A densidade de <1,0x103 CF/100 mL determinaria uma
freqncia duplicada daqueles patgenos. Neste estudo, o valor mdio mximo
encontrado para coliformes fecais foi de 5,7x10 NMP/100 mL, no sendo encontrada
presena de Salmonella em nenhuma das amostras analisadas, no havendo portanto
condies de estabelecimento de nenhum tipo de correlao.
Em trabalho realizado em Dauphin Island, no Alabama, Andrews et al.
(1975), afirmaram que em reas de cultivo de moluscos que estavam de acordo com a
legislao vigente local (<70 CT/100 mL e <14 CF/100 mL), no ocorreu nenhum
isolamento de salmonela. Comparando esses dados aos obtidos nesta pesquisa, somente
no ms de maro, no cultivo da Barra Seca que os valores foram excedidos para
coliformes fecais, mas ao contrrio da afirmao acima no foi efetuado isolamento de
nenhuma espcie de Salmonela.
Sayler et al. (1976) afirmam que havendo uma maior incidncia de
coliformes fecais, haver maior isolamento de Salmonella spp, diferentemente do que
ocorreu na presente pesquisa.
Devido metodologia empregada para esta anlise, na qual utiliza-se uma
alquota de apenas 25 mL de gua, a probabilidade de se detectar um resultado positivo
menor (Nbrega, 1982); a presena de salmonelas em gua no pode, muitas vezes, ser
comprovada devido inadequao da metodologia empregada e, usualmente, pelo fato
das salmonelas encontrarem-se em pequeno nmero.
Outro fato importante constatado por alguns autores que a salmonela
pode ser isolada com mais sucesso em guas com certa profundidade quando
69
comparadas s guas de superfcie, cuja proporo pode ser 100 a 1000 vezes maior
(Nbrega, 1982; Sayler et al., 1976). Este fato explicado pelo curto tempo de sobrevida
das salmonelas em gua do mar, e relacionado a vrios fatores como, diluio, falta de
nutrientes, correntes marinhas, sedimentao, temperatura, luz e competio com outros
microorganismos (Germano et al., 1993; Sayler & Nelson, 1976; Nbrega, 1982).
Coetzee (1963), verificou a viabilidade de sobrevivncia da S. thyphi e S.
paratyphy em guas marinhas, constatando mortalidade de 94% da primeira espcie
estudada em 24 horas, sendo a segunda espcie mais resistente (120 h), concordando
com os demais autores j discutidos acima, quanto curta sobrevida da Salmonella em
gua do mar.
Outros autores concluram que organismos patognicos entricos podem
ser isolados das guas, nem sempre refletidos pelas densidades dos organismos
indicadores, sugerindo que se suplemente a contagem de coliformes com a densidade de
Salmonella (Dutka, 1973; Dutka & Bell,1973).
70
Tabela 15. Staphylococcus aureus UFC/mL na gua de cultivo (mdias de triplicatas).
Meses
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
Dezembro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
Janeiro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
Fevereiro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
Maro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101+
Meses
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
Dezembro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
Janeiro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
Fevereiro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
Maro
1,3x101
<1,0x101
<1,0x101
71
O B. cereus uma bactria largamente distribuda na natureza e em
alimentos, estando comumente associada a alimentos ricos em carboidrato e raramente
associada a produtos marinhos. No entanto, quando se trata de mexilho este apresenta
carboidrato em sua constituio e, conseqentemente devido ao seu hbito filtrador e
bioacumulador, a presena destes no ambiente pode ser um problema em potencial,
embora a incidncia na gua do mar do B. cereus nesta pesquisa tenha sido muito
reduzida.
Meses
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
1,3x101
<1,0x101
<1,0x101
Dezembro
<1,0x101
2,9x101
<1,0x101
Janeiro
1,3x101
<1,0x101
<1,0x101
Fevereiro
1,6x101
1,6x101
1,7x102
Maro
4,3x101
3,0x102
1,6x101
72
Lizzrraga-Partida & Crdenas (1996), constataram que alguns fatores
ambientais como chuvas
73
Tabela 18. Bolores e leveduras UFC/mL na gua de cultivo (mdias de triplicatas).
Meses
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
Dezembro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
Janeiro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
Fevereiro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
Maro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
74
4.2 Mexilhes
4.2.1.1 pH
75
Tabela 19. pH de mexilhes referentes aos pontos de cultivo.
Pontos de Cultivo
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
6,24 a
6,22 a
6,30 a
Pontos de Cultivo
Novembro
Dezembro
Janeiro
Fevereiro
Maro
5,66 c
6,46 b
6,60 b
6,81 a
5,71 c
76
vantajoso para o produtor esperar os animais atingirem comprimentos maiores para
comercializ-los, j que o crescimento, praticamente, se estabiliza aps os 6 cm,
diferentemente do que ocorre em outros estados como Rio de Janeiro e Santa Catarina.
Meses
Praia da
Praia da
Costo do
Almada
B. Seca
Cedro
Novembro
7,17 A d
5,73 C b
6,42 B a
Dezembro
7,44 A c
5,84 B b
5,88 B bc
Janeiro
7,63 A ab
6,29 B a
5,86 C c
Fevereiro
7,81 A a
5,16 C c
6,06 B b
Maro
7,50 A bc
4,78 C d
6,48 B a
77
Nos meses de novembro, janeiro, fevereiro e maro todos os pontos
variaram, significativamente, ao nvel de 5% quanto ao tamanho, sendo que na praia da
Barra Seca, esto os menores valores, e na praia da Almada, os maiores (Tabela 21).
O crescimento e a produtividade dos mexilhes, seja de cultivo ou de
bancos naturais, dependem de diversos fatores como a temperatura, a salinidade, a
circulao da gua, a densidade dos indivduos, a quantidade e a qualidade de alimento
disponvel e a baixa incidncia de parasitas, competidores e predadores. Neste trabalho,
nos organismos com grandes quantidades de cracas, notou-se a incidncia de menor
crescimento, concordando com afirmaes de Henriques (2001).
Segundo Quayle & Newkirk (1989), o crescimento da concha altamente
dependente da temperatura; quando a temperatura da gua elevada o ano todo, o
crescimento da concha ocorre de forma contnua. Os mesmos autores afirmam que em
regies tropicais no h tanta variao de temperatura, concordando com dados deste
trabalho que, embora a variao em alguns pontos e meses tenha ocorrido de forma
significativa, o intervalo de diferenas entre elas foi pequeno.
78
microrganismos gram-negativos, da famlia das Enterobacteriaceae, encontrados em
uma amostra.
Tabela 22. Coliformes totais NMP/g em mexilhes coletados nos diferentes pontos de
cultivo (mdias de duplicatas).
Meses
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
9,6x102
2,6x102
1,6x103
Dezembro
4,3x101
4,3x102
4,3x101
Janeiro
1,6x103
2,3x103
6,8x102
Fevereiro
6,8x101
1,4x103
3,3x101
Maro
3,3x102
1,4x103
2,5x101
79
Tabela 23. Coliformes fecais NMP/g em mexilhes coletados nos diferentes pontos de
cultivo (mdias de duplicatas).
Microrganismos
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
<3,0
3,3x101
9,1
Dezembro
2,3x101
9,1
9,1
Janeiro
1,6x101
1,6x101
3,2
Fevereiro
3,3
9,3x101
1,6x101
Maro
1,6x101
3,3x102
8,2
80
Cedro; j para os coliformes fecais, os pontos da Barra Seca e do Costo do Cedro
apresentaram correlao positiva alta, enquanto na Almada ocorreu correlao positiva
baixa, como mostra a Tabela 24.
Microrganismos
Correlao (%)
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
10
16
-56
24
97
81
81
4.2.2.2 Clostrdios Sultito Redutores e Clostridium perfringens
A contagem de esporos de Clostrdios Sulfito Redutores variou de 1,0x101
UFC/g no ms de fevereiro, no Costo de Cedro, a 2,2x102 UFC/g no ms de maro na
Barra Seca, conforme mostra a Tabela 25, sendo que o principal representante deste
grupo de bactrias, o Clostridium perfringens.
Tabela 25. Clostrdios Sulfito Redutores NMP/g em mexilhes coletados nos diferentes
pontos de cultivo (mdias de duplicatas).
Microrganismos
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
1,9x101
2,0x101
3,0x101
Dezembro
2,0x102
2,0x102
1,0x102
Janeiro
1,0x102
1,1x102
5,5x101
Fevereiro
4,0x101
1,3x102
1,0x101
Maro
9,0x101
2,2x102
4,0x101
82
Tabela 26. Clostridium perfringens NMP/g em mexilhes coletados nos diferentes
pontos de cultivo (mdias de duplicatas).
Microrganismos
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
<1,0x101
1,5x101
1,5x101
Dezembro
<1,0x101
<1,0x101
2,3x101
Janeiro
<1,0x101
<1,0x101
1,6x101
Fevereiro
<1,0x101
<1,0x101
<1,0x101
Maro
7,6x101
1,7x102
1,6x101
4.2.2.3 Enterococcus sp
Microrganismos
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
3,6
3,6
6,3
Dezembro
9,1
2,3x101
1,5x101
Janeiro
1,3x101
6,8x101
9,1
Fevereiro
3,6
2,6x101
6,3
Maro
1,6x101
2,6x101
<3,0
83
Cerca de 40% da contagem de Enterococos, em tecido de mexilho, foi
superior contagem de coliformes fecais no mesmo material, cerca de 0,6 a 4,2 vezes,
concordando parcialmente com os dados citados por Sayler et al. (1976), que afirma em
seu estudo que 100% das contagens de Enterococos foi superior a de coliformes fecais ,
cerca de 3 a 10 vezes.
Podemos sugerir ento maior eficincia de Enterococos como indicadores
de contaminao fecal para mexilhes do que os coliformes fecais.
Os mexilhes coletados na praia da Barra Seca foram os que apresentaram
maior contagem destes microorganismos, sugerindo a necessidade de uma manipulao
mais cuidadosa, ou, uma infra-estrutura mais adequada para as operaes de pscaptura.
4.2.2.4 Salmonella sp
84
Tabela 28. Salmonella em 25/g em mexilhes coletados nos diferentes pontos de cultivo
(mdias de duplicatas).
Microrganismos
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
Ausncia
Ausncia
Ausncia
Dezembro
Ausncia
Ausncia
Ausncia
Janeiro
Ausncia
Ausncia
Ausncia
Fevereiro
Ausncia
Ausncia
Ausncia
Maro
Ausncia
Presena
Ausncia
85
com dados encontrados nesta pesquisa, pois no ms de maro, nos mexilhes cultivados
na Barra Seca, foi detectada presena de Salmonella; o ndice de coliformes fecais foi o
mais alto dentre as amostras analisadas, coincidindo tambm com o ndice mais alto de
coliformes fecais nas guas de cultivo (5,7x101 NMP/100 mL), valores estes, em
desacordo com a legislao vigente (Brasil, 1986).
Em conseqncia deste resultado positivo, medidas preventivas devem ser
tomadas, pois esta constatao, indica um risco em potencial para os consumidores.
Em alguns pases a deteco de Salmonella em bivalves, mesmo quando a
gua do local estiver dentro dos padres requeridos, poder ocasionar a interdioo
fechamento deste at que seja providenciada a correo do problema (Martins, 1983b).
A Salmonella est entre as mais importantes causadoras de doenas
gastrointestinais, ento, o cozimento adequado deste produto, anteriormente ao seu
consumo, altamente recomendado. A Salmonella typhi a espcie mais comum
associada a doenas veiculadas por moluscos, no entanto, segundo autoridades ligadas
ao servio de sade pblica da Europa e da Amrica do Norte, a salmonelose humana
associada ao consumo de pescado rara, se comparada quelas associadas a outros
alimentos, como por exemplo, os produtos avcolas.
86
Tabela 29. Sthapylococcus aureus UFC/g em mexilhes coletados nos diferentes pontos
de cultivo (mdias de duplicatas).
Microrganismos
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
<1,0x102
<1,0x102
1,5x102
Dezembro
2,3x102
<1,0x102
<1,0x102
Janeiro
<1,0x102
<1,0x102
<1,0x102
Fevereiro
<1,0x102
<1,0x102
<1,0x102
Maro
<1,0x102
<1,0x102
<1,0x102
87
quando se apresenta em concentraes acima de 106 UFC/g de amostra. Nas amostras
estudadas neste trabalho, as contagens ficaram em torno de 102. Um armazenamento e
manipulao inadequados podem propiciar aumento na populao microbiana,
acarretando srios riscos.
Tabela 30. Bacillus cereus UFC/g em mexilhes coletados nos diferentes pontos de
cultivo (mdia de duplicatas).
Microrganismos
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
1,0x102
<1,0x102
<1,0x102
Dezembro
5,0x102
2,0x102
3,0x102
Janeiro
5,5x102
2,0x102
<1,0x102
Fevereiro
<1,0x102
2,0x102
1,5x102
Maro
5,0x102
5,0x102
1,5x102
88
alta, e o produto pode deteriorar-se com grande facilidade. Esses microrganismos esto
ligados a manipulao e ao armazenamento em temperaturas inadequadas, e quanto
maior o nmero de indivduos encontrados, mais rpida ser a sua deteriorao.
Microrganismos
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
3,9x103
1,1x104
1,1x105
Dezembro
3,6x104
1,8x105
5,1x105
Janeiro
1,0x104
4,3x104
2,3x104
Fevereiro
1,5x103
1,7x105
1,5x104
Maro
1,4x104
3,2x104
3,4x103
89
maro de 2003 quando as praias do Engenho e da Barra Seca apresentaram 9,5x102
UFC/ g de amostra, superando o primeiro ponto citado (2x102 UFC/ g), conforme mostra
a Tabela 32, sendo que a presena de bolores nem sempre visvel, e estes normalmente
produzem enzimas que degradam carboidrato, gordura e protena, causando
amolecimento do alimento, alm de alterar o flavor e o aroma.
Tabela 32. Bolores e Leveduras UFC/g em mexilhes coletados nos diferentes pontos de
cultivo (mdias de duplicatas).
Microrganismos
Almada
Barra Seca
Costo do Cedro
Novembro
1,0x102
1,5x102
4,5x102
Dezembro
1,0x102
1,0x102
5,0x102
Janeiro
1,0x102
1,5x102
4,5x102
Fevereiro
3,5x102
2,0x102
5,0x102
Maro
9,5x102
9,5x102
2,0x102
5 CONCLUSES
Todas as amostras de gua de cultivo de mexilhes quanto a seus valores de
pH , estiveram de acordo com a legislao vigente para guas salinas destinadas a cultivo;
O Grupo dos coliformes totais obteve boa correlao com outros indicadores
como os Enterococos e os Heterotrficos e mostrou-se bom indicador para patgenos como
B. cereus;
Todas as amostras de gua tiveram um resultado negativo para Salmonella,
o que no ocorreu com os mexilhes, havendo uma amostra positiva no ms de maro na
praia da Barra Seca, caracterizando um problema de sade pblica;
O ndice pluviomtrico interferiu no aumento da contagem microbiana da
gua de cultivo;
Tanto os valores de tbua de mars quanto os de insolao dirias, na sua
maioria, apresentaram correlao negativa baixa, quando relacionados s contagens
microbianas.
Tanto o S. aureus como B. cereus foram encontrados no mexilho em
contagens baixas, no impedindo, no entanto, que esse alimento possa vir a representar um
perigo em potencial, se forem manipulados e/ou armazenados de forma inadequada;
Todas as amostras de mexilhes apresentaram contagens microbianas
superiores aos encontrados na gua, fato este que concorda com a afirmao de que os
bivalves so citados como amostradores biolgicos e bioacumuladores da matria e/ou
substncias pr existentes na gua;
Observou-se oscilaes nos valores das contagens microbianas, no decorrer
dos meses de coleta, indicando interferncias sazonais na microbiota da gua, e
91
possivelmente na capacidade de filtrao do mexilho, enfatizando a importncia do
contnuo monitoramento das guas e fiscalizao adequada do produto;
O mexilho cultivado no municpio de Ubatuba pode ser considerado um
alimento de qualidade, pois as contagens so satisfatrias na grande maioria das coletas,
porm consideradas de risco, particularmente no cultivo da Barra Seca;
possvel recomendar a expanso da atividade de cultivo de mexilhes
Perna perna nas regies analisadas, desde que haja um monitoramento da qualidade da
gua e dos mexilhes.
5.1 Recomendaes
Alertar as autoridades da importncia do tratamento de efluentes domsticos
(esgotos) antes de serem lanados ao mar, ressaltando-se a importncia de medidas
preventivas quanto poluio;
Faz-se necessrio capacitar os produtores quanto sua importncia como
produtores e comerciantes no quesito qualidade e sanidade de seus produtos, visando a
sade e bem estar dos consumidores;
preciso legalizar a atividade, quanto certificao do produto (SIF
Servio de Inspeo Federal e Vigilncia Sanitria), para que garanta ao consumidor
rastreabilidade, qualidade e segurana do alimento comercializado, criando alternativas
para o escoamento da produo;
Dar subsdios atividade, contribuindo para o seu desenvolvimento
equnime socialmente, eficiente economicamente e prudente ecologicamente, garantindo,
no futuro uma melhor qualidade de vida para a populao local.
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