Manual de Bancada PDF Unificado Elisa Set2010

Anti HBc
Ref. 414
Sistema para a determinao qualitativa de anticorpos totais contra o antgeno core do vrus da hepatite B
(anti-HBc) em soro ou plasma.
ELISA - Competio
PREPARO DA SOLUO DE LAVAGEM
A Soluo de Lavagem deve ser diluda 1:10 com gua deionizada. Adicionar 50 mL da Soluo de Lavagem
concentrada (no 3) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas
10
11
Soluo Lavagem Concentrada (mL)
12
16
20
24
28
32
36
40
44
gua purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)

O reagente Cromgeno (no 5) congela a temperatura 18 C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 5) diretamente no frasco de Tampo Substrato (no 4) que contm 14 mL e
homogeneizar bem. A soluo para uso incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz.
Descartar caso se torne azul. No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo
necessria, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas
10
11
Tampo Substrato (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromgeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
VALIDAO DO ENSAIO
As absorbncias devem ser consideradas aps subtrao do branco de substrato.
O no cumprimento de qualquer destes critrios INVALIDA o ensaio analtico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo
Absorbncia 0,100
Cada replicata no deve variar mais que 20% da mdia das quatro replicatas.
A mdia das absorbncias deve ser 0,600.
A mdia das absorbncias deve ser 0,100
RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Negativo e do Controle Positivo. Somar as duas mdias e
multiplicar o resultado por 0,4. O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = ( x CN + x CP) X 0,4
2-Dividir a absorbncia de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
No Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Relao Absorbncia / Cut-off

< 0,90
1,10
0,90 e < 1,10
Anti HBc
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.
Transferir 0,05 mL do Controle Positivo (2 replicatas), Controle Negativo (4 replicatas) e amostras aos poos
correspondentes.
Adicionar 0,05 mL de Conjugado (no 2) em todos os poos, exceto ao poo reservado para o Branco de
Substrato.
Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 C por 60 minutos.
Retirar e descartar a folha adesiva.

Aspirar o contedo dos poos e ench-los completamente ( 0,350 mL) com a Soluo de Lavagem diluda.
Repetir o processo de aspirao e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a soluo de lavagem nos poos por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspirao.
Aps a ltima lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
lquido
Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno diluda em todos os poos, inclusive no poo

reservado ao Branco de Substrato.
Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 - 25 C) e ao abrigo da luz.
Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 8) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e os
mesmos intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno.
Ajustar o zero da leitora com o poo reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbncia
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromtica utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.
ORIENTAES
D Ler as instrues de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente (20 - 25 C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes lquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo mximo de 30 minutos aps a adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
D Caso a leitora no permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, necessrio subtrair seu valor das
absorbncias das amostras e controles.
Anti HBc IgM
Ref. 415
Sistema para a determinao qualitativa de anticorpos IgM contra o antgeno core do vrus da hepatite B
(anti-HBc IgM) em soro ou plasma.
ELISA Imunocaptura
A Soluo de Lavagem Concentrada (no 5) deve ser diluda 1:25 com gua deionizada.
Adicionar 40 mL da Soluo de Lavagem Concentrada a 960 mL de gua. Estvel 1 semana entre 2 8 C.
N Tiras requeridas
10
11
10
13
16
19
22
25
28
31
34
37
168
240
312
384
456
528
600
672
744
816
888
gua purificada (mL)
PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do Uso)

O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diludo 1:50 com o Diluente do Conjugado (no 3).
Adicionar 0,24 mL do Conjugado Concentrado a 11,76 mL do Diluente de Conjugado. No caso de no utilizar uma
placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela abaixo:
1
10
11
Diluente Conjugado (mL)
0,98
1,96
2,94
3,92
4,90
5,88
6,86
7,84
8,82
9,80
10,78
Conjugado Concentrado (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
N Tiras requeridas
DILUIO DAS AMOSTRAS

As amostras devem ser diludas 1/4000 antes de iniciar o ensaio.
Colocar 0,99 mL de Diluente de Amostras (no 4) em um tubo. Adicionar 0,01 mL de amostra e homogeneizar bem.
Em outro tubo adicionar 0,39 mL de Diluente de Amostras (no 4). Adicionar 0,01 mL da diluio do 1 tubo.
Homogeneizar bem. O fator de diluio no 2 tubo ser 1/4000.
NO DILUIR O CALIBRADOR E OS CONTROLES. ELES ESTO PRONTOS PARA USO.
VALIDAO DO ENSAIO
Branco do substrato
Calibrador
Controle Negativo
Controle Positivo
C. Positivo C. Negativo
Absorbncia 0,150
A absorbncia de cada replicata deve ser < 0,120.
Se uma replicata se encontrar fora deste intervalo, deve-se descart-la e calcular
a mdia com os outros 2 valores.
Se 2 replicatas se encontrarem fora deste intervalo, o teste deve ser repetido.
A mdia das absorbncias deve ser < 0,120.
Absorbncia < 0,120
Absorbncia entre 0,500 e 2,500
> 0,450
RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador e somar 0,200. O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Calibrador + 0,200
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Inconclusiva

1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10
Anti HBc IgM

1
PROCEDIMENTO
Adicionar 0,1 mL do Controle Positivo e Controle Negativo (1 replicata de cada), Calibrador (3 replicatas) e
as amostras diludas aos poos correspondentes.
O Calibrador e os Controles esto prontos para uso.

lquido.
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo a cada poo, exceto ao poo reservado ao Branco de Substrato.
Evitar a formao de bolhas.
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar 60 minutos 37 C.
Ao final da incubao, retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 4.
Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno (no 6) em todos os poos, inclusive no poo

reservado para o Branco de Substrato.
Incubar por 30 minutos temperatura ambiente ( 20 a 25 C) e ao abrigo da luz.
10
Parar a reao adicionando 0,1 mL da Soluo de Parada (no 10) em cada poo, respeitando a mesma
sequencia e intervalos de tempo observados na adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
11
ORIENTAES
Anti HBe
Ref. 417
Sistema para a determinao qualitativa de anticorpos especficos contra o antgeno e do vrus da

hepatite B (anti-HBe) em soro ou plasma.
ELISA - Competio
Adicionar 40 mL da Soluo de Lavagem Concentrada a 960 mL de gua. Estvel 1 semana entre 2 - 8 C.
N Tiras requeridas
10
11
12
15
18
21
24
27
30
33
gua purificada (mL)
72
144
216
288
360
432
504
576
648
720
792
PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do Uso)

O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diludo 1:50 com o Diluente do Conjugado (no 3).
Adicionar 0,24 mL do Conjugado Concentrado a 11,76 mL do Diluente de Conjugado. No caso de no utilizar uma
placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas
10
11
Diluente Conjugado (mL)
0,98
1,96
2,94
3,92
4,90
5,88
6,86
7,84
8,82
9,80
10,78
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
VALIDAO DO ENSAIO
Branco do substrato
Calibrador
Controle Negativo
Controle Positivo
C. Negativo C. Positivo
Absorbncia 0,150
A absorbncia de cada replicata deve estar entre 0,500 e 2,500.
Se uma replicata se encontrar fora deste intervalo, deve-se descart-la e calcular
a mdia com os outros 2 valores.
Se 2 replicatas se encontrarem fora deste intervalo, o teste deve ser repetido.
Absorbncia entre 0,500 e 2,500.
Absorbncia entre 0,050 e 0,300.
> 0,250
RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador e multiplicar por 0,5. O valor que se obtm o Cut-off do
ensaio.
Cut-off = x Calibrador x 0,5
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Inconclusiva

< 0,90
1,10
0,90 e < 1,10
Anti HBe
1
PROCEDIMENTO
Transferir 0,05 mL do de Tampo de Incubao (no 4) a todos os poos, exceto ao poo reservado ao
Branco de Substrato.
Adicionar 0,05 mL do Controle Positivo e Controle Negativo (1 replicata de cada), Calibrador (3 replicatas) e
amostras aos poos correspondentes.
Adicionar 0,05 mL de Soluo Neutralizante (no 5) a todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco
do Substrato.

lquido.
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo a cada poo, exceto ao poo reservado ao Branco do Substrato.
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar 60 minutos 37 C.
Ao final da incubao, retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 6.
10
Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno (no 7) em todos os poos, inclusive no poo

reservado para o Branco de Substrato.
11
Incubar por 30 minutos temperatura ambiente ( 20 a 25 C) e ao abrigo da luz.
12
Parar a reao adicionando 0,1 mL da Soluo de Parada (no 11) em cada poo, respeitando a mesma
sequencia e intervalos de tempo observados na adio da Soluo Substrato-Cromgeno.
13
ORIENTAES
Anti HBs
Ref. 413
Sistema para a determinao qualitativa e quantitativa de anticorpos especficos contra o antgeno de

superfcie do vrus da hepatite B (anti-HBs) em soro ou plasma.
ELISA Sanduche (Ag-Ac-Ag)
Adicionar 50 mL da Soluo de Lavagem Concentrada a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
N Tiras requeridas
10
11
12
16
20
24
28
32
36
40
44
gua purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)

para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 5)
diretamente ao frasco de Tampo Substrato (no 4) que contm 14 mL e homogeneizar bem. A soluo para uso
rsea e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se torne azul. No caso de no
utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela abaixo:
1
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromgeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
N Tiras requeridas
VALIDAO DO ENSAIO (O ensaio ser considerado vlido apenas se cumprir os critrios abaixo):
Branco do Substrato
Controle Negativo
Calibrador Positivo Baixo
Calibrador Positivo Alto
Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,100
Absorbncia > 0,070
Deve tambm ser maior que o dobro da mdia do Controle Negativo.
RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo. O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = mdia Calibrador Positivo Baixo
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
1,10
< 0,90
Inconclusiva
0,90 e < 1,10
RESULTADOS QUANTITATIVOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Negativo. A concentrao de anti-HBs Zero.
2- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo. A concentrao de anti-HBs de 10 mUI/mL.
3- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Alto. A concentrao de anti-HBs de 100 mUI/mL.
4- Representar em uma folha de papel milimetrado, as mdias das absorbncias dos calibradores e controle na
ordenada (eixo y) contra suas respectivas concentraes em mUI/mL na abscissa (eixo x).
5- Traar uma linha passando pelos 3 pontos.
6- Utilizando o grfico possvel encontrar as concentraes das amostras a partir de suas absorbncias.
Para facilitar os clculos, utilizar a planilha: anti-HBs RESULTADOS QUANTITATIVOS, disponvel em
www.labtest.com.br.
Anti HBs
1
PROCEDIMENTO
Transferir 0,1 mL do Controle Negativo, Calibrador Positivo Baixo, Calibrador Positivo Alto (2 replicatas de
cada) e amostras aos poos correspondentes.

lquido.
Adicionar 0,1 mL do Conjugado (no 2) em todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato.
Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 C por 30 minutos.

10
ORIENTAES
Ref. 421
CHAGAS
Sistema para a determinao qualitativa de anticorpos totais especficos anti-Trypanosoma cruzi em soro
ou plasma.
ELISA Indireto (Ag-Ac-Ac)
A Soluo de Lavagem Concentrada deve ser diluda 1:10 com gua deionizada. Adicionar 50 mL da Soluo de
Lavagem concentrada (no 5) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
N Tiras requeridas
10
11
12
16
20
24
28
32
36
40
44
gua purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)

O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diludo 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 3,0 mL de
Conjugado Concentrado ao frasco que contm 15 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente.
Preparar no momento do uso. No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo
N Tiras requeridas
10
11
Diluente de Conjugado (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22

Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 7) diretamente no frasco de Tampo Substrato (no 4) que contem 14 mL e
N Tiras requeridas
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromgeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
VALIDAO DO ENSAIO
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo
Absorbncia 0,100
A absorbncia de cada replicata deve ser 0,200. Se uma replicata se encontrar fora
dessa margem, deve-se descart-la e calcular a mdia com os outros 2 valores.
Se 2 replicatas se encontrarem fora dessa margem, o teste dever ser repetido.
RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Negativo e somar 0,300.
O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x CN + 0,300
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Inconclusiva

1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10
CHAGAS
1
PROCEDIMENTO
Transferir 0,2 mL do Controle Positivo (2 replicatas) e Controle Negativo (3 replicatas) aos poos
correspondentes.
No diluir os controles, pois esto prontos para uso.
Adicionar 0,2 mL de Diluente de Amostras (no 4) aos poos correspondentes.
Adicionar 0,01 mL de amostra em cada poo de amostra.

lquido
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo em todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formao de bolhas.
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 C por 30 minutos.
Ao final da incubao retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 5.
Adicionar 0,1 mL da Soluo substrato-Cromgeno diludo em todos os poos, inclusive no poo

10
Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 a 25 C) e ao abrigo da luz.
11
Adicionar 0,1 mL da Soluo de Parada (no 10) a todos os poos, respeitando a mesma sequncia e
intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno.
12
ORIENTAES
Ref. 406
CMV IgG
Sistema para a determinao qualitativa e quantitativa de anticorpos IgG especficos anti-CMV em soro
ou plasma.
N Tiras requeridas
gua purificada (mL)
1
4
36
2
8
72
3
12
108
4
16
144
5
20
180
6
24
216
7
28
252
8
32
288
9
36
324
10
40
360
11
44
396
DILUIO DO CONJUGADO CONCENTRADO (Preparar no momento do Uso)

Diluir o Conjugado Concentrado (no 2) 1/51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,3 mL de Conjugado
Concentrado ao frasco que contm 15 mL de Diluente do Conjugado. Homogeneizar suavemente. No caso de no
utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela abaixo:
2
N Tiras requeridas
Diluente do Conjugado (mL)
1
1,0
0,02
2
2,0
0,04
3
3,0
0,06
4
4,0
0,08
5
5,0
0,10
6
6,0
0,12
7
7,0
0,14
8
8,0
0,16
9
9,0
0,18
10
10,0
0,20
11
11,0
0,22

para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 7)
diretamente no frasco de Tampo Substrato (no 6) que contm 14 mL e homogeneizar bem. Preparar 10 minutos
antes do Uso. A soluo para uso incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz.
N Tiras requeridas
Cromgeno (mL)
1
1,0
0,02
2
2,0
0,04
3
3,0
0,06
4
4,0
0,08
5
5,0
0,10
6
6,0
0,12
7
7,0
0,14
8
8,0
0,16
9
9,0
0,18
10
10,0
0,20
11
11,0
0,22
DILUIO DAS AMOSTRAS

Preparar diluies 1/101 dos Calibradores (no 8 e 9), Controle Negativo (no 10) e amostras.
Exemplo: Pipetar 1,0 mL do Diluente de Amostras (no 4) em um tubo e adicionar 0,01 mL de soro. Homogeneizar
suavemente.
ORIENTAES
CMV IgG
VALIDAO DO ENSAIO
Branco do substrato
Controle Negativo
Relao Calibrador Positivo Alto / Calibrador Positivo Baixo
Relao Controle Negativo / Calibrador Positivo baixo
Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,100
Absorbncia 0,150
Absorbncia 0,600
2,0
0,5
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo. O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Calibrador Positivo Baixo
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Inconclusiva

1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo.
A concentrao de IgG anti-CMV de 0,25 UI/mL.
2- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Alto.
A concentrao de IgG anti-CMV de 2,5 UI/mL.
3- Representar em folha de papel semi-logaritmico, as mdias das absorbncias dos calibradores na ordenada
(eixo y, linear), contra suas respectivas concentraes em UI/mL na abscissa (eixo x, log).
4- traar uma linha passando pelos 2 pontos.
5- Utilizando o grfico possvel encontrar as concentraes das amostras a partir de sua absorbncia.
Para facilitar os clculos dos resultados quantitativos, utilizar planilha: CMV IgG RESULTADOS
QUANTITATIVOS, disponvel em www.labtest.com.br.
CMV IgG
1
PROCEDIMENTO
Transferir 0,1 mL do Calibrador Positivo Baixo, Calibrador Positivo Alto e Controle Negativo (2 replicatas de
cada) e amostras aos poos correspondentes.
Diluir Calibradores, Controle e amostras conforme orientao.

lquido.
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo em todos os poos, exceto no poo reservado ao Branco de
Ao final da incubao retirar a folha adesiva.
Aspirar e lavar a placa como no passo 4.

10
11
Ref. 407
CMV IgM
Sistema para a determinao qualitativa e semi-quantitativa de anticorpos IgM especficos anti-CMV em

soro ou plasma.
ELISA Sanduche-Imunocaptura (Ac-Ac-Ag)
N Tiras requeridas
gua purificada (mL)
1
4
36
2
8
72
3
12
108
4
16
144
5
20
180
6
24
216
7
28
252
8
32
288
9
36
324
10
40
360
11
44
396
DILUIO DO CONJUGADO CONCENTRADO E CONTROLE DE ANTGENO (Preparar no momento do Uso)

Diluir o Conjugado Concentrado (no 2) e o Controle de Antgeno (no 3) 1/101 com o Tampo Diluente (no 4).
Adicionar 0,12 mL de Conjugado Concentrado mais 0,12 mL do Controle de Antgeno e 12 mL do Tampo
Diluente. Homogeneizar suavemente.
No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela
abaixo:
N Tiras requeridas
Tampo Diluente (mL)
Controle de Antgeno (mL)
1
1,0
0,01
0,01
2
2,0
0,02
0,02
3
3,0
0,03
0,03
4
4,0
0,04
0,04
5
5,0
0,05
0,05
6
6,0
0,06
0,06
7
7,0
0,07
0,07
8
8,0
0,08
0,08
9
9,0
0,09
0,09
10
10,0
0,10
0,10
11
11,0
0,12
0,12

para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Adicionar 1,2 mL do Cromgeno (no 7) a
10,8 mL do Tampo Substrato (no 6). Homogeneizar bem. A soluo para uso incolor e deve ser mantida em
recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se torne azul.
abaixo:
N Tiras requeridas
Cromgeno (mL)
1
0,9
0,1
2
1,8
0,2
3
2,7
0,3
4
3,6
0,4
5
4,5
0,5
6
5,4
0,6
7
6,3
0,7
8
7,2
0,8
9
8,1
0,9
10
9,0
1,0
11
9,9
1,1
DILUIO DAS AMOSTRAS

Preparar diluies 1/101 das amostras. Exemplo: Em um tubo pipetar 1,0 mL do Tampo Diluente (no 4) e
adicionar 0,01 mL da amostra. Homogeneizar suavemente.
No diluir os Controles (no 8, 9 e 10) pois esto prontos para uso.
ORIENTAES
CMV IgM
VALIDAO DO ENSAIO
Branco do substrato
Controle Positivo Baixo
Relao Controle Positivo Alto/Controle Positivo Baixo
Relao Controle Negativo/Controle Positivo Baixo
Absorbncia 0,100
A absorbncia de cada replicata no deve variar
mais do que 25% em relao mdia das 4
absorbncias.
A mdia deve ser entre 0,200 e 0,600.
> 3,0
< 0,7
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Positivo Baixo. O valor que se obtm o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Controle Positivo Baixo
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
1,10
< 0,90
Inconclusiva
0,90 e < 1,10
RESULTADOS SEMI-QUANTITATIVOS
1- Calcular o valor do Cut-off como descrito anteriormente.
2- Calcular a concentrao das IgM em Unidades Arbitrrias (UA/mL) dividindo a absorbncia da amostra pelo
valor do Cut-off e multiplicando o resultado por 10.
UA/mL = absorbncia da amostra / Cut-off x 10
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Inconclusiva

11
<9
9 e < 11
CMV IgM
1
PROCEDIMENTO
Transferir 0,1 mL do Controle Positivo Alto, Controle Negativo (2 replicatas de cada), Controle Positivo
Baixo (4 replicatas) e amostras diludas aos poos correspondentes.

lquido.
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diludo em todos os poos, exceto no poo reservado ao Branco de
Substrato.
Ao final da incubao, retirar a folha adesiva.

10
11
Ref. 416
HBeAg
Sistema para a determinao qualitativa do antgeno e do vrus da hepatite B (HBeAg) em soro ou

plasma.
ELISA Sanduiche (Ac-Ag-Ac)
Lavagem concentrada (no 5) a 960 mL de gua. Estvel 1 semana entre 2 8 C.
N Tiras requeridas
10
11
12
15
18
21
24
27
30
33
gua purificada (mL)
72
144
216
288
360
432
504
576
648
720
792

Conjugado Concentrado a 11,76 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente.
abaixo:
1
10
11
0,98
1,96
2,94
3,92
4,90
5,88
6,86
7,84
8,82
9,80
10,78
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
N Tiras requeridas
VALIDAO DO ENSAIO
Branco do Substrato
Caibrador
Controle Negativo
Controle Positivo
Controle Positivo - Controle Negativo
Absorbncia 0,150
A absorbncia de cada replicata deve ser < 0,120. Se uma
replicata se encontrar fora dessa margem, deve-se
descart-la e calcular a mdia com os outros 2 valores. Se
2 replicatas se encontrarem fora dessa margem, o teste
dever ser repetido.
Absorbncia < 0,120
> 0,450
RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador e somar 0,060.
Cut-off = x Calibrador + 0,060
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Inconclusiva

1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10
HBeAg
1
PROCEDIMENTO
Transferir 0,05 mL do Tampo de Incubao (no 4) a todos os poos, exceto ao poo reservado para o
Branco de Substrato.
Adicionar 0,1 mL do Controle Positivo Alto, Controle Positivo Baixo (1 replicata de cada), Calibrador (3
replicatas) e amostras aos poos correspondentes.

lquido
Adicionar 0,1 mL da Soluo substrato-Cromgeno (no 6) em todos os poos, inclusive no poo

10
11
intervalos de tempo da adio da soluo Substrato-Cromgeno
12
ORIENTAES
Ref. 412
HBsAg
Sistema para a determinao qualitativa do antgeno de superfcie do vrus da hepatite B (HBsAg) em

soro ou plasma.
ELISA Sanduiche (Ac-Ag-Ac)
Lavagem Concentrada (no 4) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C.
N Tiras requeridas
10
11
12
16
20
24
28
32
36
40
44
gua purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DO CONJUGADO (preparar no momento do uso)

Conjugado Concentrado a 12 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente. Preparar no momento
do uso. No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a
tabela abaixo:
N Tiras requeridas
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (preparar 10 minutos antes do uso)

homogeneizar bem. A soluo para uso rsea e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz.
N Tiras requeridas
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromgeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
VALIDAO DO ENSAIO
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo
Absorbncia 0,100
A mdia das absorbncias deve ser < 0,120
A absorbncia de cada replicata deve ser maior do que a mdia das absorbncias
vezes 0,5. ( x CN x 0,5).
Se uma replicata se encontrar fora dessa margem, deve-se descart-la e calcular a
mdia com os outros 2 valores.
Se duas replicatas se encontrarem fora dessa margem, o teste dever ser repetido.
Absorbncia 0,700
RESULTADOS
Cut-off = x Controle negativo + 0,040
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
1,10
< 0,90
Inconclusiva
0,90 e < 1,10
HBsAg
1
PROCEDIMENTO
Transferir 0,1 mL do Controle Positivo (1 replicata), Controle Negativo (3 replicatas) e amostras aos poos
correspondentes.

lquido

10
11
ORIENTAES
Ref. 418
HCV
Sistema para a determinao qualitativa de anticorpos totais especficos contra o vrus da hepatite C
(HCV) em soro ou plasma.
N Tiras requeridas
10
11
12
16
20
24
28
32
36
40
44
gua purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DO CONJUGADO
(Preparar no momento do uso)
O Conjugado Concentrado (n 2) deve ser diludo 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,3 mL de
Conjugado Concentrado ao frasco que contm 15 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente.
Preparar no momento do uso. No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo
1
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
N Tiras requeridas

N Tiras requeridas
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromgeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
VALIDAO DO ENSAIO (O ensaio ser considerado vlido apenas se cumprir os critrios abaixo):
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo Alto
Relao Controle Positivo Alto / Controle Positivo Baixo
Relao Controle Negativo / Controle Positivo Baixo
Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,100
Cada absorbncia no deve variar mais do que
30% em relao mdia das absorbncias.
Absorbncia 0,800
> 2,5
< 0,5
RESULTADOS
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Positivo Baixo e multiplicar por 0,9.
Cut-off = x Controle Positivo Baixo x 0,90
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Inconclusiva

1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10
HCV
1
PROCEDIMENTO
Transferir 0,2 mL do Controle Positivo Alto, Controle Positivo Baixo e Controle Negativo (2 replicatas de
cada) aos poos correspondentes.
No diluir os controles, pois esto prontos para uso.
Adicionar 0,2 mL de Diluente de Amostras (no 4) aos poos correspondentes para as amostras.
Adicionar 0,01 mL de amostra em cada poo de amostra.

lquido
Adicionar 0,1 mL da Soluo substrato-Cromgeno diludo em todos os poos, inclusive no poo

10
11
12
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos
ORIENTAES
HIV-1+2
Ref. 419
Sistema para a determinao qualitativa de anticorpos contra HIV-1, HIV-2 e subtipo O em soro ou
plasma.
ELISA Sanduiche (Ag-Ac-Ag)
Lavagem Concentrada (no 5) a 950 mL de gua. Estvel 1 semana entre 2 8 C.
N Tiras requeridas
10
11
12
16
20
24
28
32
36
40
44
gua purificada (mL)
76
152
228
304
380
456
532
608
684
760
836

Conjugado Concentrado a 12 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente. No caso de no utilizar
uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22

Adicionar 0,12 mL do Cromgeno (no 7) a 12 mL de Tampo Substrato (no 6) e homogeneizar bem. A soluo
para uso incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se torne azul.
No caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume necessrio, de acordo com a tabela abaixo:
N Tiras requeridas
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromgeno (mL)
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
0,07
0,08
0,09
0,10
0,11
VALIDAO DO ENSAIO
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo HIV-1

Controle Positivo HIV-2
Absorbncia 0,100
A mdia das absorbncias deve ser < 0,150
A absorbncia de cada replicata deve ser maior do que a mdia das absorbncias x 0,5
>( x CN x 0,5) e menor ou igual mdia das absorbncias vezes 1,5 ( x CN x 1,5).
Se uma replicata se encontrar fora dessa margem, deve-se descart-la e calcular a
mdia com os outros 2 valores. Se 2 replicatas se encontrarem fora dessa margem, o
teste dever ser repetido.
Absorbncia maior ou igual mdia do Controle Negativo + 0,700
( x CP1 x CN + 0,700)
Absorbncia maior que o Cut-off.
RESULTADOS
Cut-off = x Controle Negativo + 0,250
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Inconclusiva

1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10
HIV-1+2
1
PROCEDIMENTO
Transferir 0,1 mL de Diluente de Amostras para todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de
Substrato.
Adicionar 0,05 mL do Controle Positivo HIV-1 (2 replicatas), Controle Positivo HIV-2 (1 replicata), Controle
Negativo (3 replicatas) e amostras aos poos correspondentes.

lquido

10
11
12
em cada um dos poos no prazo mximo de 30 minutos. Recomenda-se realizar leitura bicromtica
utilizando filtro secundrio de 620 - 630 nm.
ORIENTAES
Rubola IgG
Ref. 401
Sistema para a determinao qualitativa e quantitativa de anticorpos IgG especficos anti-rubola em soro
ou plasma.
N Tiras requeridas
10
11
12
16
20
24
28
32
36
40
44
gua purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396

Conjugado Concentrado ao frasco que contm 15 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente. No
caso de no utilizar uma placa completa, preparar o volume de soluo necessria, de acordo com a tabela
abaixo:
N Tiras requeridas
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22

Adicionar 0,28 mL do Cromgeno (no 7) ao frasco que contm 14 mL de Tampo Substrato (no 6) e homogeneizar
bem. A soluo para uso incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se
torne azul.
N Tiras requeridas
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromgeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
DILUIO DAS AMOSTRAS

Preparar diluies 1:101 do Calibrador Positivo Baixo, Calibrador Positivo Alto, Controle Negativo e Amostras com
o Diluente de Amostras (no 4).
Exemplo: Em um tubo colocar 1 mL de Diluente de Amostras e adicionar 0,01 mL de soro. Homogeneizar
suavemente.
Rubola IgG - Ref. 401

VALIDAO DO ENSAIO
Branco do Substrato
Controle Negativo
Relao Controle Negativo / Calibrador Positivo Baixo
Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,100
Absorbncia 0,600
Absorbncia 0,150
2,0
0,5
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
1,10
< 0,90
Inconclusiva
0,90 e < 1,10
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo. A concentrao de IgG anti-rubola do
Calibrador Positivo Baixo de 10 UI/mL.
2- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Alto. A concentrao de IgG anti-rubola do
Calibrador Positivo Alto de 200 UI/mL.
3- Representar em coordenadas linear-log, em folha de papel semi-logartmico, as mdias das absorbncias dos
calibradores na ordenada (eixo y, linear) contra suas respectivas concentraes em UI/mL na abscissa (eixo x,
log).
5- Utilizando o grfico com a reta obtida, encontra-se a concentrao das amostras a partir de suas absorbncias.
6- Para facilitar os clculos dos resultados quantitativos, utilizar planilha: RUBOLA IgG RESULTADOS
ORIENTAES
Rubola IgG
1
PROCEDIMENTO
Transferir 0,1 mL do Controle Negativo, Calibrador Positivo Baixo e Calibrador Positivo alto (2 replicatas de
cada) e amostra aos poos correspondentes. Ver item Diluio de Amostras.

lquido

10
11
Rubola IgM
Ref. 402
Sistema para a determinao qualitativa e semi-quantitativa de anticorpos IgM especficos anti-rubola

em soro ou plasma.
Lavagem Concentrada (no 4) a 450 mL de gua. Estvel 2 semanas entre 2 8 C. Para preparar volumes
menores seguir a tabela abaixo:
N Tiras requeridas
10
11
12
16
20
24
28
32
36
40
44
gua purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396

torne azul.
N Tiras requeridas
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromgeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
DILUIO DAS AMOSTRAS

Preparar diluies 1:101 das Amostras com o Diluente de Amostras (no 4). Exemplo: Em um tubo colocar 1 mL de
Diluente de Amostras e adicionar 0,01 mL de soro. Homogeneizar suavemente.
NO DILUIR OS CONTROLES (no 7,8 e 9), POIS ESTO PRONTOS PARA USO.
Rubola IgM - Ref. 402

VALIDAO DO ENSAIO
Branco do Substrato
Controle Negativo
Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,100
Cada absorbncia no deve variar mais que
30%em relao mdia das 3 replicatas.
Absorbncia 0,600
2,5
0,5
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Positivo Baixo e multiplicar por 0,8.
Cut-off = x Controle Positivo Baixo x 0,8
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
1,10
< 0,90
Inconclusiva
0,90 e < 1,10
1- Calcular o Cut-off como descrito anteriormente.
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Inconclusiva
Resultado em UA/mL
11
<9
9 e < 11
ORIENTAES
Rubola IgM
1
PROCEDIMENTO
Transferir 0,1 mL do Controle Negativo e Controle Positivo Alto (2 replicatas), Controle Positivo Baixo (3
replicatas) e amostras diludas aos poos correspondentes.

lquido
Adicionar 0,1 mL do Conjugado (no 2) em todos os poos, exceto ao poo reservado ao Branco de

10
11
TOXO-IgG
Ref. 408
Sistema para a determinao qualitativa e quantitativa de anticorpos IgG especficos anti-toxoplasma em

soro ou plasma.
N Tiras requeridas
10
11
12
16
20
24
28
32
36
40
44
gua purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396

O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diludo 1:51 com o Diluente de Conjugado (no 3). Adicionar 0,3 mL de
abaixo:
N Tiras requeridas
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22

torne azul.
N Tiras requeridas
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromgeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
DILUIO DAS AMOSTRAS

Preparar diluies 1:101 do Calibrador Positivo Baixo, Calibrador Positivo Alto, Controle Negativo e Amostras com
o Diluente de Amostras (no 4).
suavemente.
TOXO-IgG
Ref. 408
VALIDAO DO ENSAIO
Branco do Substrato
Controle Negativo
Relao Controle Negativo / Calibrador Positivo Baixo
Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,100
Absorbncia 0,600
Absorbncia 0,150
2,5
0,5
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Inconclusiva

1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10
1- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Baixo. A concentrao de IgG anti-toxoplasma do
Calibrador Positivo Baixo de 10 UI/mL.
2- Calcular a mdia das absorbncias do Calibrador Positivo Alto. A concentrao de IgG anti-toxoplasma do
Calibrador Positivo Alto de 200 UI/mL.
3- Representar em coordenadas linear-log, em folha de papel semi-logartmico, as mdias das absorbncias dos
calibradores na ordenada (eixo y, linear) contra suas respectivas concentraes em UI/mL na abscissa (eixo x,
log).
5- Utilizando o grfico com a reta obtida, encontra-se as concentraes das amostras a partir de suas
absorbncias.
Para facilitar os clculos dos resultados quantitativos, utilizar planilha: TOXO IgG RESULTADOS
ORIENTAES
TOXO-IgG
1
PROCEDIMENTO
Transferir 0,1 mL do Controle Negativo, Calibrador Positivo Baixo e Calibrador Positivo alto (2 replicatas de
cada) e amostra aos poos correspondentes.
Ver item Diluio de Amostras.

lquido

10
11
TOXO-IgM
Ref. 409
Sistema para determinao qualitativa e semi-quantitativa de anticorpos IgM especficos anti-toxoplasma

em soro ou plasma.
N Tiras requeridas
10
11
12
16
20
24
28
32
36
40
44
gua deionizada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396

abaixo:
N Tiras requeridas
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22

torne azul.
1
10
11
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromgeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
N Tiras requeridas
DILUIO DAS AMOSTRAS

Preparar diluies 1:101 das Amostras com o Diluente de Amostras (no 4).
suavemente.
NO DILUIR OS CONTROLES (no 7,8 e 9), POIS ESTO PRONTOS PARA USO.
TOXO-IgM
Ref. 409
VALIDAO DO ENSAIO
Branco do Substrato
Controle Negativo
Absorbncia 0,100
Absorbncia < 0,120
Cada absorbncia no deve variar mais que
30%em relao mdia das 3 replicatas.
Absorbncia 0,600
1,5
0,5
1- Calcular a mdia das absorbncias do Controle Positivo Baixo.
Cut-off = x Controle Positivo Baixo
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Inconclusiva

1,10
< 0,90
0,90 e < 1,10
1- Calcular o Cut-off como descrito anteriormente.
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Inconclusiva
Resultado em UA/mL
11
<9
9 e < 11
ORIENTAES
TOXO-IgM
1
PROCEDIMENTO
Transferir 0,1 mL do Controle Negativo e Controle Positivo Alto (2 replicatas), Controle Positivo Baixo (3
replicatas) e amostras diludas aos poos correspondentes.

lquido

10
11

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Anti HBc

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

gua purificada (mL)

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)

Tampo Substrato (mL)

Relao Absorbncia / Cut-off

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Retirar e descartar a folha adesiva.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno diluda em todos os poos, inclusive no poo

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 - 25 C) e ao abrigo da luz.

Anti HBc IgM

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

gua purificada (mL)

PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do Uso)

Diluente Conjugado (mL)

Conjugado Concentrado (mL)

DILUIO DAS AMOSTRAS

Relao Absorbncia / Cut-off

Anti HBc IgM

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Retirar e descartar a folha adesiva.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar 60 minutos 37 C.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno (no 6) em todos os poos, inclusive no poo

Incubar por 30 minutos temperatura ambiente ( 20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

Sistema para a determinao qualitativa de anticorpos especficos contra o antgeno e do vrus da

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

gua purificada (mL)

PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do Uso)

Diluente Conjugado (mL)

Conjugado Concentrado (mL)

Relao Absorbncia / Cut-off

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Retirar e descartar a folha adesiva.

Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar 60 minutos 37 C.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno (no 7) em todos os poos, inclusive no poo

Incubar por 30 minutos temperatura ambiente ( 20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

Sistema para a determinao qualitativa e quantitativa de anticorpos especficos contra o antgeno de

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

gua purificada (mL)

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)

Tampo Substrato (mL)

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Retirar e descartar a folha adesiva.

Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 C por 30 minutos.

Adicionar 0,1 mL da Soluo Substrato-Cromgeno diluda em todos os poos, inclusive no poo

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 - 25 C) e ao abrigo da luz.

Soluo Lavagem Concentrada (mL)

gua purificada (mL)

PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)

Diluente de Conjugado (mL)

Conjugado Concentrado (mL)

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)

Tampo Substrato (mL)

Relao Absorbncia / Cut-off

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.

Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 C por 60 minutos.

Retirar e descartar a folha adesiva.

Adicionar 0,1 mL da Soluo substrato-Cromgeno diludo em todos os poos, inclusive no poo

Incubar 30 minutos temperatura ambiente (20 a 25 C) e ao abrigo da luz.

DILUIO DO CONJUGADO CONCENTRADO (Preparar no momento do Uso)

PREPARO DA SOLUO SUBSTRATO-CROMGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)

DILUIO DAS AMOSTRAS

Relao Absorbncia / Cut-off

Deixar um poo vazio para o Branco do Substrato.