FACULDADE SERRA DA MESA/FASEM

CURSO DE GRADUAO EM FARMCIA

JULLY ANNY DOS SANTOS

YASMIN BATISTA SILVA

MTODOS ALTERNATIVOS PARA AVALIAO DA IRRITAO OCULAR NA

EXPERIMENTAAO ANIMAL

URUAU-GO
NOVEMBRO - 2015

JULLY ANNY DOS SANTOS

YASMIN BATISTA SILVA

MTODOS ALTERNATIVOS PARA AVALIAO DA IRRITAO OCULAR NA

EXPERIMENTAAO ANIMAL

Trabalho de pr-projeto apresentado a Faculdade

Serra da Mesa/FASEM do Curso de Farmcia
como requisito parcial para aprovao na
disciplina Trabalho de Concluso de curso I.

Orientador: Rafael do Nascimento Ducas

URUAU-GO
NOVEMBRO 2015

AGRADECIMENTOS
Primeiramente agradecemos a Deus por ter nos dado foras para superar os obstculos
e dificuldades.
Ao nosso orientador e professores, que desempenharam grande incentivo e apoio para
elaborao deste trabalho, transmitindo e repassando seus conhecimentos.
E a todos que direta ou indiretamente contriburam para a nosso aprendizado, seremos
eternamente gratas.

LISTA DE ILUSTRAES

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

3 R - Reduction Refinament e Replacement Reduo, Refinamento e Substituio

ANVISA - Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
BCOP - Bovine Corneal Opacity and Permeability Opacidade e Permeabilidade da
Crnea Bovina
COLIPA - Associao Europia de Cosmticos
CONCEA Conselho Nacional de Controle de Experimentao Animal
DL - Dose Letal
ECVAM (European Centre for Validation of Alternative Methods - Centro Europeu para
Avaliao de Mtodos Alternativos de Teste
FDA - Food and Drug Administration Administrao de Alimentos e Drogas
HET-CAM - Hens Egg Test Chorioallantoic Membrane Teste do Ovo de Galinha Membrana Corioalantide
OECD - Organization for Economic Cooperation and Development - Organizao para a
Cooperao e Desenvolvimento Econmico
PEA Projeto de Experimentao Animal
QSAR - Quantitative Structure-activity Relationship Relaes Quantitativas entre
Estrutura e Atividade
RENAMA Rede Nacional de Mtodos Alternativos

SUMRIO

1 INTRODUO
Desde a dcada de 1940 existe a grande necessidade de avaliar o perigo de produtos
qumicos em geral atravs de experimentos em animais, visando promover a eficcia e
segurana dos mesmos (OLIVEIRA et al., 2012). Essa prtica tornou-se alvo de muitas
crticas em relao tica social e humana, pois, os principais mtodos utilizados ainda so
em animais, e causam bastante sofrimento e dor aos animais estudados, principalmente na
avaliao dos efeitos toxicocinticos, toxicodinmicos e toxicolgicos da irritao ocular
(CAZARIN et al., 2004).
No ano de 1954 vrios pesquisadores estudaram e desenvolveram mtodos alternativos
que substituam parcialmente o teste de Draize para avaliao da irritabilidade ocular (ALVES
et al., 2008). Desde ento, Russell e Burch proporam o desenvolvimento do princpio dos 3R
(Reduction, Refinement e Replacement) sigla inglesa, cujo significado reduo, refinamento
e substituio, ou seja, reduo de animais utilizados,
o refinamento cujo objetivo propor metodologias para minimizao da dor e
sofrimento causado aos animais, e a substituio dos testes in vivo por metodologias
alternativas ao mesmo (CAZARIN et al., 2004).
Diante deste cenrio de irritao ocular, vrios fatores estudados chegaram a seguinte
questo: Os testes in vivo nem sempre ofereciam respostas totalmente satisfatrias e eficazes
no que diz respeito comprovao de qualquer produto qumico a ser testado, devido
estrutura e morfologia ocular de certos animais, principalmente coelho, por serem diferentes
de olhos humanos. Alm de provocar sofrimento ao animal e desrespeito aos valores ticos
predominantes (FREIRE et al., 2015).
Ao decorrer do sculo XX, foram registrados vrios acontecimentos histricos
relacionados a produtos que foram para o mercado sem antes passarem por testes
toxicolgicos. Em consequncia disso, houve a lastimvel ocorrncia de danos graves e
irreversveis a vtimas que fizeram o uso da talidomida (BOTTING et al., 2002). Assim como
a tragdia do elixir de sulfanilamida, que era solubilizada em etilenoglicol, causando impacto
no mundo todo, como por exemplo, o bito de diversas pessoas, e em outros casos
insuficincia renal (NBREGA et al., 2008).
Com base nesse contexto, a ANVISA (Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria),
juntamente com o CONCEA (Conselho Nacional de Controle a Experimentao Animal) tem

trabalhado para aprovao de estudos por mtodos alternativos, em especial no contexto da

irritao ocular, que um teste mandatrio para a rea regulatria na ANVISA. Que
provavelmente, poder ser um avano cientfico com resultados positivos para o ramo da
experimentao animal (ANVISA, 2015).
Contudo, o presente trabalho visa comparao entre mtodos in vivo tradicionais e in
vitro para avaliao da irritao ocular, buscando tambm o esclarecimento sobre as
vantagens e desvantagens em relao a cada teste (PRESGRAVE et al., 2010).

2 JUSTIFICATIVA

O estudo em questo torna-se relevante, pois se trata de uma vertente em prol dos
animais, afinal, eles so seres vivos que tambm esto envolvidos nas questes ticas. Alm
de ser um exemplo de desenvolvimento cientifico inovador que busca aprimorar novas
tecnologias e impulsionar resultados mais precisos, seguros e eficientes em benefcio do ser
humano, da cincia e dos animais.

10

3 OBJETIVOS
3.1. OBJETIVO GERAL
Demonstrar a importncia de se avaliar o risco de produtos qumicos diante a irritao ocular
e comparar os mtodos in vivo e in vitro segundo a literatura.
3.2. OBJETIVOS ESPECFICOS

Levantar as falhas na avaliao do risco de produtos qumicos segundo a literatura.

Apresentar a importncia de se usar os 3R na experimentao animal para avaliar o

risco da irritao ocular causada por substncias qumicas.

Descrever a importncia de se utilizar mtodos alternativos ao uso de animais na
pesquisa cientfica.

11

4 REFERENCIAL TERICO

4.1 HISTRICO DAS FALHAS NA AVALIAO DO RISCO DE PRODUTOS

QUMICOS
Diante da importncia baseada no estudo e pesquisa de reaes e efeitos de produtos
qumicos no organismo, existem alguns acontecimentos marcantes que geraram grande
impacto no mundo inteiro devido utilizao indevida e inadequada de substncias qumicas
em geral que foram para o mercado sem antes passar por testes e ensaios toxicolgicos,
garantindo sua segurana e expondo os efeitos propostos ao organismo do indivduo,
simulando possveis reaes adversas (ALVES et al., 2006; NBREGA et al., 2008).
Primeiramente, podemos citar um marco que ficou registrado em especfico na dcada
de 1937, decorrente a uma tragdia relacionada administrao de um medicamento, sem o
devido conhecimento dos seus efeitos adversos. Esse fato ficou bastante conhecido como a
tragdia do elixir de sulfanilamida, esse medicamento foi desenvolvido para uso peditrico,
com a funo de combater a agentes que causam infeces de garganta. Considerando esse
episdio, foi possvel observar que aps o uso do elixir houve o aparecimento de problemas
renais, ou seja, falncia e mau funcionamento dos rins, portanto se evidenciou que esse efeito
se deu devido solubilizao da soluo de sulfonilamida com a substncia dietilenoglicol,
causando sintomas de vertigens, anorexia, nuseas, etc. Ainda nessa mesma dcada, se
destacou a morte do farmacutico responsvel por essa formulao, que promoveu suicdio
aps perceber a gravidade da tragdia que havia impulsionado (BALLENTINE, 1981;
NBREGA et al., 2008; DUCAS, 2015)
Figura 1 Elixir de Sulfonilamida.

Fonte:
25/09/2015.

http://www.chm.bris.ac.uk/motm/sulfanilamide2/sulfanilamideh.htm

Acesso:

12

Dentre os principais acontecimentos, pode-se destacar tambm a tragdia da

talidomida, que foi desenvolvida na dcada de 1953, por uma indstria de pesquisadores
denominada Chemie Grunenthal, sendo um medicamento utilizado para fins sedativos e
hipnticos em mulheres gestantes. No era possvel demonstrar os efeitos predominantes da
talidomida naquela poca, pois os estudos em nvel de experimentao animal no eram
eficazes em relao a ela, ou seja, os testes no conseguiam detectar seus nveis de toxicidade.
Mesmo utilizando doses mais elevadas, os ensaios propostos droga no indicaram taxas de
letalidade ou de ndice de dose letal (DL50). Os mdicos tinham um conhecimento muito
limitado e parcial em relao a sua alta potncia de ao teratognica, aumentado induo
de risco do ocorrido (SILVEIRA et al., 2001).
A talidomida, ento, era um sedativo popular na Europa e Japo, onde era prescrita
para mulheres grvidas, como antiemtico, no alvio de enjoos matinais. Foi
utilizada por milhes de pessoas, em 46 pases, convertendo-se em um dos frmacos
mais populares da dcada de 50. No princpio dos anos 60, os pesquisadores
demonstraram ser ela, a responsvel direta pelo nascimento de bebs com
malformaes congnitas (SILVEIRA et al., 2001).

A talidomida foi responsvel pela incidncia do nascimento de bebs com visveis

sinais de ms-formaes graves das gestantes que fizeram seu uso no primeiro trimestre de
gravidez, pois a droga causa deformao de braos e pernas dos mesmos. Essa droga
considerada de alto risco e bastante perigosa devido aos seus efeitos colaterais, portanto,
estima-se um nmero de cerca de 10.000 vtimas da talidomida no mundo todo (TRUETA,
1962; NBREGA et al., 2008).
Figura 2 - Bebs vtimas de malformaes atravs do uso da Talidomida.

Fonte: http://biologiacobachlamesa.blogspot.com.br/ Acesso: 28/09/2015.

13

A despeito disso, temos tambm o episdio referente aos cosmticos da linha Lash
Lure que eram bastante utilizados no ramo da esttica e beleza por mulheres, com finalidade
de promover a colorao de clios e sobrancelhas. Na formulao continha uma substncia
que causava bastante sensibilidade cutnea e conjuntiva ocular, sendo o parafenileno de
amina. Alguns dias aps sua aplicao foram observados modificaes na crnea dessas
mulheres que fizeram o seu uso, portanto, estimou-se uma quantidade significativa atravs de
levantamento de dados, que o episdio ocasionou a perda da viso de 12 mulheres, alm de
ter provocado o bito de uma das vtimas nos EUA durante o a dcada de 1930
(WILHELMUS, 2001).
O FDA Food And Drug Administration foi o rgo responsvel pela divulgao de
cartazes alertando a populao sobre o risco em relao ao uso de determinados produtos
qumicos. Ainda nesta mesma linha de consideraes, importante citar o nome de alguns
componentes txicos de risco, presentes em produtos de beleza, estticos ou de higiene
pessoal, sendo: Berrys Freck, Anti-Mole, Dewsberry e Dr. Dennis. Podendo-se expressar que
todos estes possuem princpios ativos que podem gerar algum dano tecidual, principalmente a
nvel ocular e cutneo (RIORDAN, 2004; COSTA, 2006).
Figura

Ilustrao

divulgada

pelo

FDA

no

ano

de

1933.

14

Fonte: http://www.nap.edu/read/10733/chapter/10 Acesso: 01/10/15.

Contudo, por ventura desse levantamento do FDA, o teste de Draize surgiu naquela
poca como alternativa para se avaliar os riscos ocular e drmicos de substncias irritantes
(KURIAN, 1998).
4.2 TESTE DE DRAIZE

Na dcada de 1900, o cientista John H. Draize, pesquisador na Diviso de

Farmacologia do FDA, deu incio aos estudos com objetivo de buscar o desenvolvimento de
mtodos que promovam avaliao da segurana de produtos qumicos e cosmticos. Porm,
foi em 1940, que John Draize se tornou o chefe do Laboratrio de Toxicidade Drmica e
Ocular, no qual realizava testes em coelhos para avaliar o grau de irritabilidade da pele e
mucosas, para isso, ele utilizava rgos como olhos e pnis para promoo desse
procedimento. Contudo, Draize descreveu o ensaio de avaliao da irritao ocular pela
primeira vez durante esse perodo, que era induzida atravs do seu uso tpico em coelhos por
substncias qumicas expostas ao mesmo, ficando conhecido como Teste de Irritao ocular
(WILHELMUS, 2001).
O teste de Draize um teste in vivo, realizado em coelhos, cujo objetivo destina-se
avaliar o grau de irritao ocular de produtos qumicos. Este mtodo apresenta uma srie de
crticas por alguns autores que defendem o uso de metodologias alternativas referente aos
animais de laboratrio, por ser considerado um ato de crueldade e desrespeito dos valores
ticos ao modelo animal. Por isso que ainda se procuram alternativas in vitro que
substituam, mesmo que parcialmente a utilizao do teste de Draize (NBREGA et al., 2008).
Um dos animais mais utilizado para a realizao dos testes de Draize so os coelhos,
preferencialmente coelhos albinos, pois possuem algumas vantagens em relao a outras
espcies, por serem de baixo custo e de fcil manuseio. Alm de possuir a morfologia
anatmica ocular que promove uma melhor observao dos resultados, devido seus olhos
serem maiores, no qual facilita sua visualizao. Isso causa bastante sofrimento, pois o animal
deve ficar preso e imobilizado para evitar que ocorra a auto-mutilao, ou seja, que o mesmo
arranque seus prprios olhos. Esse fato explica a controversa em relao ao mtodo e

15

demonstra como tremendo a dor e o sofrimento causado ao animal envolvido

(JALOWITZKI et al., 2014).
Contudo, visada a importncia de que no so consideradas apenas as questes
ticas, e sim a urgncia e necessidade de um avano cientfico capaz de solucionar essa
problemtica ou at mesmo aprimorar a busca por mtodos alternativos ao teste de Draize,
devido o fato dos modelos animais no trazerem resultados suficientemente eficazes e
seguros, juntamente com respostas de qualidade (FREIRE et al., 2015).
Figura 4 Teste de irritao ocular de Draize em coelho albino.

.
Fonte: https://oholocaustoanimal.wordpress.com/2014/03/27/10-fatos-sobreexperimentacaoanimal/ Acesso: 04/10/2015.
O teste de irritao ocular de Draize em questo visa avaliar o nvel de irritabilidade e
o grau corroso da regio ocular que, determinada substncia qumica aplicada diretamente no
olho do animal pode causar, sendo que, a maioria dos resultados baseada em alteraes
relacionadas a processos inflamatrios da ris e conjuntiva, secreo e tambm opacidade da
crnea ocular, entre outras consequncias, no qual iro depender da intensidade do dano da
leso causada (DRAIZE et al.,1944; SINA et al.,1995; MOLDENHAUER, 2003; DUCAS,
2015).
Aps a finalizao do teste o animal sacrificado com intuito de promover os efeitos
produzidos internamente pelas substncias utilizadas. Os olhos de coelhos so
consideravelmente um modelo inadequado, ou seja, pobre em comparao aos olhos do
homem. Sendo assim, alguns fatores podem ser destacados para explicar esse fato: Os coelhos

16

produzem uma quantidade bem menor de lgrimas em relao aos humanos, pois seus ductos
lacrimais so menores e tambm podemos destacar que a espessura, dimetro e morfologia
tecidual so bastante diferentes (JALOWITZKI et al., 2014).
Com base em tantas crticas e controversas referentes ao assunto, que o mundo da
cincia em si tem gerado tanta polmica, levantando vrios questionamentos em torno disso,
pois se trata de uma vertente em prol dos animais usados no ramo da experimentao,
apoiando o desenvolvimento do uso de mtodos alternativos ao teste in vivo de Draize para
avaliar o grau de corroso ocular (SPIELMANN, 1997; WILHELMUS, 2001;
FRAUNFELDER et al., 2008).

4.3 EXPERIMENTAO ANIMAL

4.3.1 Histrico do uso de animais em estudos toxicolgicos
A experimentao animal a prtica cruenta de utilizao de animais vivos ou recm-mortos com
propsitos experimentais ou didticos (GREIF , 2008).

A utilizao de animais em pesquisas cientficas e toxicolgicas um fato bastante

antigo, que no se sabe ao certo a data correta que marca o registro desse acontecimento,
porm de acordo com Ekaterina Rivera afirma que antes de (130 200 d.C) o animal utilizado
em pesquisas era o homem, que certamente no se trata de um padro aceitvel conforme a
cincia biolgica (RIVERA, 2006). A outra postura sustenta que, o uso de animais para
experimentao surgiu no sculo V (a.C), porm foi a partir do sculo XX que houve a
atribuio do mesmo considerando a prtica de sua aplicao (MIZIARA et al., 2012).
Aponta as questes morais envolvidas na postura em que os animais ocupam em
relao aos humanos, sempre tendo diversas controvrsias desde antigamente, at os dias
atuais. Com isso, houve o sancionamento da (Lei Arouca) lei n 11.794/08, cujo fim
estabelecer metodologias e procedimentos para animais no uso da cincia (MIZIARA et al.,
2012).
O Brasil sempre foi o pas que mais abordou essa temtica em relao adoo de
padres em prol da defesa dos animais, podendo levar em considerao as excees, quando a
realizao dos experimentos for a favor do homem, ou seja, do ser humano em si. Com base
nesse sistema, que o princpio 3R entra em vigor fazendo com que as tcnicas sejam todas
feitas dentro dos limites e normas predominantemente aceitas, tornando lcitas quaisquer

17

atividade estabelecida ao uso animal, para se obter um propsito de reduzir, refinar e

substituir os mtodos in vivo, sempre que possvel (SANTOS et al., 2011).
Cabe ainda, ressaltar que os animais mesmo sendo utilizados para meios de pesquisa
cientfica, cobaias ou experimentos laboratoriais de anlises acadmicas, tambm possuem
sentidos com capacidade emocional para sentimentos como: medo, estresse, dor, alegria, entre
outras caractersticas, afinal eles possuem memria assim como os seres humanos
(HOLANDA, 1988; SANTOS et al., 2011).
Ao referir-se a este assunto, importante lembrar que existe um englobamento
especfico de tipos de animais utilizados para cada laboratrio, e que participem da
investigao de cada funo fisiolgica a que se pretende estudar, por exemplo, os coelhos
(albinos) so mais utilizados para testes oculares (olhos) e cutneos (pele), os ratos so
submetidos a estudos investigativos da funo do sistema imune, as rs so mais voltadas para
a rea observacional de ensino didtico, tendo a funo de realizar testes de reao muscular,
os macacos so responsveis pelo desempenho de anlise de questes comportamentais e os
peixes so essenciais na descoberta e estudos toxicolgicos (LEVAI, 2011).
Com o objetivo de esclarecimento, necessrio que alguns temas sejam descritos, a
fim de promover o melhor entendimento e compreenso do seguinte assunto, que diz respeito
vivisseco e dissecao, sendo: (GREIF, 2008).
A vivisseco o ato de cortar um corpo vivo, mas tambm utilizado como sinnimo de
experimentao animal. J a dissecao a separao com instrumentos cirrgicos, de partes do corpo ou rgos
de animais mortos para estudo de sua anatomia (HOLANDA, 1988).

Os mtodos alternativos so preferveis para reforo desse aspecto acima, pois se trata
de um ato extremamente cruel, maldoso e desnecessrio com os animais que participam da
prtica experimental. Ainda que, mesmo que atualmente um mtodo bastante utilizado nas
universidades em busca de pesquisas e estudos a nvel didtico, principalmente nos cursos de
veterinria e medicina. Os animais envolvidos nesses ensaios prticos se encontram vivos,
totalmente aptos ao sofrimento desnecessrio e doloroso, com finalidade de promover
demonstraes do funcionamento morfolgico de vrios sistemas do nosso corpo (PEA,
2013).
Considera-se que o Brasil um pas que necessita de alguns avanos tecnolgicos e
cientficos, pois nos Estados Unidos, por exemplo, uma porcentagem de 70% das
universidades do curso de medicina aboliu o uso de animais vivos para vivisseco durante as

18

aulas prticas realizadas, reforando que, a faculdade de Harvard, diz totalmente fora dos
padres ticos e julga a desnecessidade do uso de animais vivos nos laboratrios em que se
fazem o treinamento dos estudantes de medicina (MAGALHES et al., 2006).
4.3.2 Princpios ticos referentes experimentao animal

Em termos discursivos, existe um enorme problema envolvido a experimentao

animal, decorrente dos valores ticos que muitos filsofos pesquisadores ainda defendem.
Sendo que, no s eles, mas tambm alguns mdicos criticam esse ato do uso de animais em
testes toxicolgicos (RECH, 2013).
De acordo com a lei 9.605, de fevereiro de 1998, a experimentao animal um alto
de crueldade implcita aos animais, a mesma responsvel pela proibio dos mtodos
originais em animais de laboratrio em experimentos de anlise toxicolgica, quando houver
metodologias alternativas que a substituam, essa regra tambm vlida para ensaios
experimentais a nveis de pesquisa didtica (LEVAI et al., 2004). Sendo a seguinte:
Art. 32. Praticar ato de abuso, maus-tratos, ferir ou mutilar animais silvestres,
domsticos ou domesticados, nativos ou exticos. 1 Incorre nas mesmas penas
quem realiza experincia dolorosa ou cruel em animal vivo, ainda que para fins
didticos ou cientficos, quando existirem recursos alternativos. 2 A pena
aumentada de um sexto a um tero, se ocorre morte do animal (ARTIGO 32 DA LEI
9.605/98).

Em 1776, o telogo ingls Humphy Primatt, relatou que o ser humano em si, deve ter
o inteiro dever de piedade e compaixo, levando em conta o fator do sofrimento que gerado
(LOURENO, 2008). Por outro lado, o filsofo Jeremy Bentham considerou em 1789 que, a
presena de racionalidade que se levam em considerao os princpios morais de um ser
vivo (FELIPE, 2008). Isso vem ao encontro de Jos Ricardo Figueiredo, mdico veterinrio
que defende o bem-estar animal e ressalta que esse princpio est diretamente ligado com a
biotica (FIGUEIREDO, 2005).
A aplicao a atividades de proteo e preservao dos direitos ao bem-estar animal
um dever que necessita da compresso e colaborao de todos, promovendo cada vez mais a
busca por fatores que conscientizem a sociedade em geral que os animais tambm so seres
vivos que possuem capacidades sensoriais. Sem contar que, os animais usados como cobaias

19

sofrem do incio ao fim da prtica suposta e ainda no trazem respostas totalmente seguras e
eficazes para o desenvolvimento de produtos qumicos usados em seres humanos, por isso
dever principalmente da cincia a elaborao e implementao de novas pesquisas
tecnolgicas que visem melhoria e posterior mudana desse quadro (STEFANELLI, 2011).
4.4 MTODOS ALTERNATIVOS AO USO DE ANIMAIS

Mtodos alternativos so procedimentos validados e internacionalmente aceitos que

garantam resultados semelhantes e com reprodutibilidade para atingir, sempre que
possvel, a mesma meta dos procedimentos substitudos por metodologias que no
utilizem animais; usem espcies de ordens inferiores; empreguem menor nmero de
animais; utilizem sistemas orgnicos ex-vivos; diminuam ou eliminem o desconforto
(BRASIL, 2009).

Existe uma reflexo extremamente importante em relao a essa temtica, visando

promover o melhor entendimento dessa abordagem, foi levantada por Jeremy Bentham e
Marchall Hall, durante o sculo XIX, sendo: a questo no se os animais raciocinam ou se
eles podem falar, mas se eles sofrem. Isso impulsionou a real reflexo do nmero de ensaios
desnecessrios existentes ao uso de animais na experimentao cientfica (HENDRIKSEN,
1994; PRESGRAVE, 2002).
A partir da dcada de 60, os estudos relacionados a metodologias in vitro comearam a
apresentar grande significncia na rea de anlise de riscos quanto ao uso na experimentao
animal, esses mtodos se baseiam na utilizao de clulas e tecidos vivos de espcies de
mamferos. De acordo com o rgo ingls (QSAR) Quantitation Structure Activity
Relationship, deve existir a interao entre a estrutura-atividade de um componente com
relao a sua toxicidade. Esses estudos devem atender a finalidades benficas quanto aos
ensaios realizados, como por exemplo, oferecer metodologias de fcil manuseio, baixo custo,
geis, com alto nvel de segurana nos resultados, e o mais importante, que todos esses
parmetros sejam validados (CRUZ et al., 2004).
Os testes in vitro so denominados como mtodos alternativos que possuem o
propsito de diminuir ou substituir quando possvel o uso de animais de laboratrio para
realizao de experimentos. usado principalmente para avaliao do desempenho de
deteco dos nveis de toxicidade presentes numa substncia especfica, no qual ser usada

20

posteriormente pelo ser humano, ou seja, nenhum produto qumico pode e nem deve ser
utilizado pelo humano antes de ser testada nos animais (LIMA, 2006; MOURA et al., 2012).
A respeito disso, podemos reforar que, os testes in vitro so anlises em que se
utilizam organismos vivos como: fungos, bactrias, crustceos e algas para dar origem ao
teste em questo. Tambm se podem utilizar fraes celulares, cultivo de tecidos, sendo todos
esses presentes em pores que fazem parte do sistema biolgico (FRAZIER, 1992).
Assim, como outras metodologias existentes, os testes in vitro tambm possuem
diversas vantagens, por isso de extrema importncia a apresentao das consideradas como
principais: Possui um baixo custo em comparao ao teste in vivo de Draize, no necessita de
maiores gastos com infra-estrutura, j que as metodologias in vitro no precisam de biotrios
para criao dos animais, que por sua vez necessita de todo um investimento econmico, pois
deve ter manuteno peridica. Vale ressaltar tambm, que os testes in vitro requerem um
espao bem menor, devido ausncia do biotrio que ocupa espao muito grande
(PRESGRAVE et al., 2010; VALRIO et al., 2014).
A outra postura sustenta que, os testes in vitro tambm apresentam suas desvantagens,
como exemplo disso, pode citar o fato da estrutura do corpo bem mais complexa quando
comparada as pores celulares simples, pois o organismo do processo in vivo consegue
metabolizar apenas uma extenso parcial e no total. Ainda nesta mesma linha de
consideraes merece destaque a relatividade entre a dose quantitativa utilizada no teste e os
sistemas de cultura utilizados, que podem no ser semelhantes, ocasionando ento
interferncias fsicas ou qumicas no teste realizado (CHORILLI et al., 2007).
Outro aspecto levantado por Loprieno, dentre outros autores que, todas as
metodologias alternativas utilizadas possui a completa necessidade de serem mtodos
validados e registrados por rgos registrados antes mesmo de serem executadas em prtica,
pois a validao visa confirmao e/ou a certeza de que o teste em questo apresenta
segurana e efetividade necessria para atender as normas de padronizao para cada ensaio
experimental, alm de objetivar que os testes tenham a reprodutibilidade de se fazer vrios
testes diferentes, em locais e com profissionais diferentes, com intuito de obteno do mesmo
resultado em todas as operaes (CHORILLI et al., 2007).
Por seu lado, Spielmann e Liebsch comentam a respeito do estudo de validao dos
testes, dizem que possui elevado custo, alm de ser um estudo demorado com durabilidade de
mais de 10 anos. Comentam ainda sobre os protocolos elaborados pela OECD e ECVAM,

21

serem ideais para realizao dos mtodos alternativos. Os protocolos referentes dizem
respeito relao de ambos os testes in vitro e in vivo, onde so observados os critrios de
desempenho dos testes (SPIELMANN et al., 2001; CRUZ et al., 2004).
O uso excessivo de animais para realizao da experimentao em produtos qumicos
um fato que gera uma srie de controversas e discusses, no que diz respeito aos valores de
carter tico, por isso que houve a implementao de mtodos alternativos in vitro, a fim de
aprimorar e concretizar o desenvolvimento legal do uso destes testes para avaliao
toxicolgica (CAZARIN et al., 2004).
Em decorrncia disso que em 1954 surgiu o programa 3R, porm foi em 1959 que
Russel e Burch deram origem a publicao do livro ingls (The Principles of Humane
Experimental Technique) que significa Princpios das Tcnicas Experimentais Humanizadas.
Nesse livro os autores em questo citaram a importncia de uma pesquisa adequada em
animais de laboratrio, cujo principal objetivo fazer com que o princpio 3R seja respeitado
(VICTAL et al., 2014).
Sendo assim, o princpio 3R assim denominado devido as iniciais das suas siglas em
ingls que so: Reduction (Reduo), Refinement (Refinamento) e por fim Replacement, cujo
significado Substituio. A reduo e refinamento visam obteno de resultados em curto
prazo, ou seja, os objetivos em questo vo sendo alcanados aos poucos atravs das tcnicas
referentes a cada sigla. Enquanto a substituio considerada um objetivo em longo prazo, ou
seja, a meta final a ser alcanada (CAZARIN et al., 2004).
Com base nesse contexto, de importante relevncia a completa especificao de cada
inicial que do origem ao princpio em geral, ressaltando as finalidades que so essenciais
para contribuio do cumprimento das metas necessrias para oferecer melhores condies
voltadas para os mtodos realizados em animais. A reduo visa diminuir o nmero de
animais utilizados na experimentao, alm de aprimorar as tcnicas j utilizadas (MOURA et
al., 2012). O refinamento busca o bem-estar animal, contribuindo com a incluso do uso de
compostos analgsicos e anestsicos (apenas quando no houver interferncia nos testes) com
intuito de minimizar o sofrimento causado ao mesmo. E por fim a substituio, que tem como
principal finalidade propor metodologias alternativas ao teste in vivo de Draize (VICTAL et
al., 2014).
Entretanto, podemos salientar que a busca por mtodos alternativos (in vitro)
consideravelmente validados pelas agncias regulatrias referentes experimentao animal

22

um aspecto amplo de extrema necessidade, que visa obteno de resultados qualitativos para o
ramo da cincia, alm de benefcios econmicos que abrangem mera importncia para toda a
humanidade (CAZARIN et al., 2004).

4.5 MTODOS ALTERNATIVOS NA AVALIAO DA IRRITAO OCULAR

A avaliao da irritao ocular prevista com base no teste em produtos cosmticos,

no qual se pode haver exposio acidental com a regio dos olhos. Conforme foi descrito por
John Draize em 1944, o teste tem a funo de avaliar os nveis do potencial corrosivo de
determinada substncia qumica nas seguintes estruturas oculares: ris de olhos de coelhos,
mais especificamente (coelhos albinos), conjuntiva e na superfcie da crnea (CHORILLI et
al., 2007).
Com relao aos efeitos adversos j vistos, pode-se destacar edema (inchao) da ris
com dobras marcantes e profundas, lacrimejamento, opacidade completa da crnea, eritema
nas plpebras, alm de vermelhido das mucosas e conjuntivas. Portanto, esse um dos
mtodos de ensaios mais controversos e consequentemente mais criticados, quando se refere
avaliao do potencial irritante ocular (YAN et al., 2007). Geralmente, o uso de animais na
experimentao animal utilizado no somente para avaliar os nveis do potencial irritante
das substncias qumicas j mencionadas, mas tambm para uma srie de outros fatores
envolvidos, como por exemplo, na rea da educao, principalmente em universidades
durante as prticas laboratoriais voltadas ao ensino de acadmicos e futuros profissionais da
sade e novos cientistas e desenvolvimento de ensaios biolgicos, alm da obteno de
diagnsticos especficos atravs do estudo em modelos animais (CAZARIN et al., 2004).
importante ressaltar que, o uso de animais em testes de experimentao aceitvel
desde que no existam mtodos alternativos oficiais que possam substitu-lo. O que no
permitido de maneira alguma a utilizao de humanos como cobaia, em caso de hipteses
ou dvidas para realizao de testes de avaliao do potencial irritante (BRASIL, 2015).
Durante essa mesma dcada de 1940, que o cientista John Draize desenvolveu o teste
em modelos animais, utilizando coelhos como cobaias aos experimentos, no qual foi
denominado Teste de Draize, cuja finalidade era determinao do potencial da irritao ocular

23

em relao a produtos qumicos generalizados. No existe um determinado tipo de modelo

animal para realizao dos experimentos realizados, porm, o que levado em considerao
a compatibilidade ou semelhana anatmica e morfolgica, a sensibilidade e utilizao de
modelos especficos que promovam maior flexibilidade em relao ao seu manuseio
(BRASIL, 2015).
Entretanto, diante da necessidade do uso de animais para a realizao de experimentos
em produtos qumicos, que em meados do sculo 1940, surgiu o teste de avaliao da
irritao ocular (Teste de Draize), que foi um mtodo de promovido atravs da
conscientizao por parte das agncias regulatrias (NBREGA et al., 2008), juntamente com
o cientista John Draize, representante do rgo oficial americano FDA (Food and
Administration), nos EUA (BRASIL, 2015).

4.5.1 Comparao de mtodos in vitro x in vivo

A significativa procura pelos mtodos alternativos ao teste in vivo de Draize indica

grande relevncia e visa um crescimento cada vez maior, sendo que j existem
regulamentaes em pases do mundo todo que aprovaram esses mtodos em questo. Em
virtude disso, cabe ressaltar a Normativa da Portaria n 18, de 24 de setembro de 2014, que
aprovou a aceitao de substituio de mtodos originais j existentes (in vivo),

pelos

mtodos alternativos (in vitro), porm apenas quando o mtodo for validado e quando for
possvel a sua substituio. Todos os institutos que realizam experimentos e pesquisas em
modelo animal tem um prazo de at cinco anos para se enquadrar dentro das novas normas
padronizadas (BRASIL, 2014; AZEVEDO et al., 2015).
O (CONCEA) Conselho Nacional de Experimentao Animal, rgo referente e
responsvel pela aprovao dos mtodos alternativos, sendo que, j existem 17 mtodos que
receberam aprovao atravs do rgo citado, dentre eles vale destacar os testes para
avaliao da irritao ocular, teste de avaliao do potencial de irritao e corroso da pele e
teste de toxicidade aguda, entre muitos outros (ANVISA, 2015).
Diante do contexto apresentado, mencionam-se alguns fatores que diferem ambas as
metodologias in vivo e in vitro, visando reforar o melhor entendimento em relao ao

24

presente estudo dos ensaios. O teste in vivo um ensaio realizado diretamente em modelos
animais vivos, ou seja, como exemplo disso, temos o ensaio de toxicidade ocular, cuja
substncia teste era aplicada diretamente nos olhos do coelho vivo, gerando bastante
sofrimento e desconforto ao mesmo (CRUZ et al., 2004). Enquanto o ensaio in vitro um
teste com as mesmas possibilidades de deteco de substncias de nveis txicos, porm,
podem ser realizados por meio de fraes celulares, em meio biolgico, ou seja, alm de
tecidos, enzimas e clulas de animais, podem se utilizar tambm, seu estudo em fungos e
bactrias, ocasionando a diminuio do uso direto de animais de laboratrios e diminuindo o
sofrimento dos mesmos (FRAZIER, 1992; LIMA, 2006; MOURA et al., 2012).
Figura 5 Cultura Celular Animal.

Fonte: http://www.genengnews.com/gen-articles/advertorial-corning-life-sciences/5013/
Acesso: 19/10/2015.
Conforme a anlise da seguinte abordagem de informaes sobre ambos os mtodos,
sustenta que o ensaio in vivo, por ser um mtodo direto, causa um nmero bastante elevado
diante da mortalidade de animais de laboratrio, sendo bastante criticado pelos filsofos e
cientistas ao decorrer de todos esses anos, em funo do transtorno causado a espcie animal.
J os ensaios in vitro so mais aceitos em empregados mundialmente, pois mantm a
complexibilidade e integrao intrnseca e extrnseca do modelo animal (MOURA et al.,
2012).

25

Ao referir-se ao assunto, aponta algumas das principais vantagem e desvantagens dos

mtodos in vitro, sendo as vantagens: Rapidez na liberao de resultados tcnicos, avaliao
final atravs de dados quantitativos, facilitando a leitura dos laudos (Exceo do HETCAM), Condies boas e simplificadas quanto exposio em nvel experimental, baixo
custo em relao ao ensaio in vivo. Quanto s desvantagens que merecem destaque, temos:
No possvel avaliao morfolgica e fisiolgica do organismo por inteiro, so testes de
curta durao, apresentando limitaes aos estudos txicos em longo prazo e necessidade de
dados numricos e metodolgicos com alto grau de reprodutibilidade e preciso (COSTA,
2006).

4.5.2 Opacidade e permeabilidade da crnea bovina - BCOP

O mtodo de ensaio Bovine Corneal Opacity and Permeability, cujo significado teste
de opacidade e permeabilidade da crnea bovina, se refere a um mtodo recente, que foi
validado e aprovado em 2013. De acordo com a OECD 437, o mtodo foi desenvolvido com
propsito de substituir o teste in vivo de Draize na avaliao da irritao ocular, sendo que o
teste citado inibe parcialmente o nvel de corroso ocular, que quando em contato com a
sustncia-teste especfica ocasiona a opacidade na crnea bovina e consequentemente pode
acarretar no aumento da permeabilidade da mesma quando isolada (VALRIO et al., 2014).
Para realizao desse teste necessrio o uso de um aparelho denominado
opacitmetro, que visa medir a transmisso do grau de fluxo luminoso que passa pela crnea
do bezerro, resultando em dados e valores numricos do grau de opacidade sujeito ao teste.
Enquanto a permeabilidade do teste dada de acordo com o tempo de exposio do produtoteste, no caso, o (corante fluoroscena) que, em contato com o olho do animal utilizado,
permitindo melhor penetrao nessa estrutura, facilitando na observao dos resultados
(ANVISA, 2003).
importante ressaltar que se trata de um mtodo quantitativo, pois atravs dele se
obtm resultados em nmeros, no qual aumenta o grau de preciso e reprodutibilidade do teste
(CRUZ et al., 2012). O teste BCOP (Teste de Opacidade e Permeabilidade da Crnea Bovina)
bastante aceitvel e eficaz para substituir o teste de Draize, pois demonstrou vrias

26

vantagens em relao ao mtodo in vivo, alm de propor o benefcio de ser um teste rpido e
confivel, promovendo resultados que atendem perfeitamente as normas previstas para um
teste ser considerado validado por rgos e agncias de renome (PRICE & ANDREWS,
1985).
A avaliao do grau de irritabilidade de produtos qumicos em geral, como
medicamentos, cosmticos, praguicidas, entre outros, uma prtica realizada desde a
antiguidade, mais especificamente na dcada de 1940 atravs da experimentao animal. O
grau de irritao ocular um ensaio descrito por John H. Draize, sendo que, so ensaios
usados atualmente por serem aprovados por rgos oficiais de renome, que garantem a total
segurana e eficcia do resultado obtido no experimento em questo (OLIVEIRA et al.,
2012).

27

5 METODOLOGIA

5.1 TIPOS DE PESQUISA

O presente estudo trata-se de uma pesquisa de natureza bsica, qualitativa, classificada
como exploratria quanto aos objetivos, obtida por meio de pesquisa bibliogrfica no contexto
da produo e aprimorao do conhecimento.
A pesquisa bibliogrfica denominada com um conjunto de procedimentos que
implica na busca ordenada de solues e estratgias, desenvolvida a partir de um objeto de
estudo ou material j elaborado e existente, constitudo de artigos cientficos e livros,
tornando-se atento a esse parmetro, portanto, no pode ser aleatrio (GIL et al., 2008).
5.2 POPULAO
A populao referente ao trabalho exposto composta por animais, ou seja,
especficos para o uso no ramo de experimentao animal em laboratrio.
5.3 AMOSTRA
A amostra foi indexada por meio de artigos cientficos referentes aos mtodos
alternativos na avaliao da irritao ocular e a experimentao animal, sendo tambm
participante do mtodo a visualizao e leitura de livros que representem o tema em questo
como um todo, ou seja, a amostragem por variedade de tipos atravs do critrio de
homogeneidade fundamental, sendo que, os sujeitos inclusos dentro do universo da pesquisa
possuem no mnimo uma caracterstica a todos os outros, dando origem fundamentao do
tema como um todo.
5.4 ELABORAO DO PROJETO

28

Nessa perspectiva, temos as seguintes fontes que foram descritas com objetivo de
promover informaes e respostas adequadas e suficientes ao problema proposto:
Primeiramente, realizou-se uma busca por meio de consulta eletrnica nos bancos de dados
dos sites da ANVISA, (SCIELO) Scientific Eletronic Library Online, LILACS, (BVS)
Biblioteca virtual em Sade, MEDLINE e google acadmico.
A pesquisa bibliogrfica foi realizada de setembro a novembro. Sendo que, foram
localizados 52 artigos, destes apenas 39 atenderam ao objetivo da pesquisa em questo,
devido maioria dos artigos em relao temtica estarem disponveis somente na lngua
inglesa.
Foram utilizados 4 livros, dentre eles, biotica de viso panormica e toxicologia
aplicada, sendo que, ambos foram

usados apenas em virtude da aprimorao dos

conhecimentos e melhor entendimento sobre o tema, os mesmos foram disponibilizados

atravs da biblioteca interna da FASEM, e os outros dois especficos a experimentao
animal.
Devido abordagem cientfica ser bastante complexa em relao ao tema, alm de
possuir um amplo histrico de desenvolvimento de mudanas quanto s tcnicas, alm de
necessidades de melhorias, inovaes e padronizaes no decorrer dos sculos, foram
utilizadas referncias, mais especificamente, artigos cientficos que foram publicados a mais
de 10 anos, por isso, temos referncias de 1944 a 2015.
5.5 RISCOS E BENEFCIOS
O presente estudo no apresenta riscos pelo fato de ser uma pesquisa de levantamento
bibliogrfico, alm de apresentar apenas formulaes de hipteses que visam busca de
solues para as problemticas expostas. Por outro lado, a seguinte pesquisa explora uma
srie de benefcios diante do desenvolvimento cientifico e tecnolgico referente as
metodologias alternativas em prol dos animais.
5.6 CRITRIOS DE INCLUSO E EXCLUSO
Diante a leitura baseada no material destinado, foi feita a delimitao referente ao
referencial terico, ou seja, dos os critrios de incluso foram os seguintes: artigos cientficos
que retratam o tema de mtodos alternativos na avaliao da irritao ocular, revistas referente
rea da sade que diz respeito a novas aprovaes e perspectivas sobre o problema e livros

29

que promovem o real entendimento da pesquisa, buscando uma viso mais clara sobre o tema.
Dentre as mesmas, foram inclusas: 39 artigos cientficos, 4 teses de dissertao de mestrado, 4
revistas e 3 livros. Quanto ao nvel de critrio de excluso entram 13 artigos que foram
excludos do material de pesquisa, pois no atendiam as necessidades e perspectivas em
relao ao tema.
5.7 PROCESSAMENTO DE DADOS
Contudo, o processamento de dados foi elaborado seguindo alguns critrios, como:
Leitura complementar e explorativa de todo material selecionado, ou seja, uma breve leitura
geral referente ao tema, a fim de saber se aquilo realmente era de interesse do trabalho.
Buscando ainda, promover a seleo dos principais tpicos, de maneira mais profunda,
buscando detalhes e caractersticas principais, alm da visualizao da interao dos objetivos
com o tema. E por fim, uma lista contendo instrumentos essenciais da pesquisa (autores, ano)
facilitando a anlise e juno das informaes e fontes extradas.
5.8 ANLISE DE DADOS
Durante essa etapa foi realizada uma leitura explorativa, de carter qualitativo,
buscando visar uma melhor ordenao de informaes contidas nas fontes e material proposto
e selecionado, de modo que, promovam obteno de resultados eficazes e esclarecedores as
respostas relacionadas ao problema exposto.
5.9 QUESTO NORTEADORA

30

REFERNCIAS

ABREU, C.L. C. Avaliao da Toxicidade induzida por produtos cosmticos pelo mtodo
de quantificao de protenas totais em clulas 3T3. Tese (Dissertao de MestradoFundao Oswaldo Cruz Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade). Rio de
Janeiro. P.122. 2008.
ANVISA. Guia para Avaliao de Segurana de produtos Cosmticos. Braslia, 2003.
AZEVEDO, A. P. G. B.; OLIVEIRA, L. G.; RODRIGUES, R. C.; LOUREIRO, I. M. A. L.;
Uso da informao de patentes para estudo dos mtodos de avaliao de citotoxicidade
in vitro como alternativa ao uso de animais. Cadernos de Prospeco, 2015. P. 220.
ALVES, M.J.M.; COLLI, W. Experimentao com animais: Uma polmica sobre o trabalho
cientfico. Cincia Hoje, v.39, n. 231, 2006.
ANDRADE, A., PINTO, SC., and. OLIVEIRA, RS., org. Animais de Laboratrio: criao e
experimentao [online]. Rio de Janeiro: Editora FIOCRUZ, 2002. 388 p. ISBN: 85-7541015-6. Available from SciELO Books http://books.scielo.org
BALLENTINE, C. Taste of Raspberry, taste of death. The 1937 Elixir of Sulfonamide
incident. FDA Consumer Magazine. U.S Food and Drug Administration. 1981. Disponvel
em: http://www.fda.gov/oc/history/elixir.html

BARLOW, B.D., L. Marshall & J. McPherson (2001) Cosmet. Toiletries 116: 51-5.
BRASIL. Ministrio da Cincia e Tecnologia. DECRETO N 6.899. Dispe sobre a
composio do Conselho Nacional de Controle de Experimentao Animal - CONCEA,
estabelece as normas para o seu funcionamento e de sua Secretaria-Executiva, cria o Cadastro
das Instituies de Uso Cientfico de Animais - CIUCA, mediante a regulamentao da Lei no
11.794, de 8 de outubro de 2008, que dispe sobre procedimentos para o uso cientfico de
animais, e d outras providncias. Braslia, 15 de Julho de 2009.
BRASIL. Revista do farmacutico 121 Mtodos alternativos para avaliar
medicamentos de uso tpico. Conselho Regional de Farmcia do Estado de So Paulo, 2015.
BUARQUE DE HOLANDA, Aurlio. Dicionrio Aurlio da Lngua Portuguesa. Rio de
Janeiro: Nova Fronteira, 1998.

31

CAZARIN, K. C .C.; CORRA, C. L.; ZAMBRONE, F. A. D. Reduo, refinamento e

substituio do uso de animais em estudos toxicolgicos: uma abordagem atual. Revista
Brasileira de Cincias Farmacuticas, So Paulo, v. 40, n.3, Junho-Setembro. 2004.
CHIARI BG, Martini PC, Moraes JDD, Andr R, Correa MA, Cicarelli RMB, Isaac VLB.
Use of HEPG2 cells to assay the safety of cosmetic active substances. Int J Res Cosmet Sci.
2012; 2 (2):8-14.
CHORILLI M, Scarpa MV, Leonardi GR, Franco YO. Toxicologia dos cosmticos. Acta Farm
Bonaerense 2007 a; 26(1): 144-54.
CHORILLI M, Scarpa MV, Corra MA. Reaes adversas a cosmticos. Infarma 2007b; 19 :
17-22.
COSTA, R. N.; Estudo da aplicabilidade do ensaio de quantificao de protenas totais
presentes em clulas SIRC na avaliao do potencial de irritao ocular de xampus e
tensoaativos. Mestrado em Sade Pblica. Escola Nacional de Sade Pblica Srgio Arouca,
2006. P. 42-44.
CRUZ, A. S. Teste de Citotoxicidade in vitro como alternativas ao teste in vivo de draize
na avaliao de produtos cosmticos. Tese (Doutorado Produo e Controles
Farmacuticos). Universidade de So Paulo, So Paulo, 2004.
DIAS, Edna Cardozo. Tutela jurdica dos animais, Belo Horizonte Mandamentos: 2000.
DRAIZE, J.H.; WOODARD, G.; CALVERY, O. H. Methods for the study of irritation and
toxicity of substances applied topically to the skin and mucous membranes. Journal of
Pharmacology and Experimental Therapeutics, v.83, p.377-390, 1944.
DUCAS R N. ANLISE DE MTODOS ALTERNATIVOS AO USO DE ANIMAIS
PARA A CLASSIFICAO DA IRRITAO OCULAR INDUZIDA POR CORANTES
TEXTEIS. Tese (Mestrado em cincias farmacuticas). Universidade Federal de Gois. p. 1618, 2015.
FELIPE, Sonia T. Defesa tica dos animais. Humphry Primatt e seus herdeiros: Peter Singer,
Tom Regan e Richard D. Rvder. Conferencia de abertura do I Seminrio EoBicho! de Direito
dos Animais. Florianpolis: oBicho!; SVB; OAB/SC, 4-5 nov. 2008.
FRAZIER, J. M. In vitro Toxicity testing. Applications to safety evaluation. New York,
Marcel Dekker, Inc., 1992. P.300. 1992.
FREIRE D. Testes em animais so reduzidos com novos ensaios in vitro e simulaes.
Agncia FAPESP, 2015.
FRIEDENWALD, J. S., HUGHES, W. F. & HERRMANN, H. Acid-base tolerance of the
cornea. Arch. Ophthalmol. v.31, p.279-283, 1944.
GIL, A C. Como elaborar projetos de pesquisa. So Paulo: Atlas, 2008.

32

GREIF, Sergio. A Experimentao Animal e as Leis. ANDA, Agencia de Notcias de Direitos

Animais. 11 dez. 2008. Disponvel em: http://www.anda.jor.br/11/12/2008/a-experimentaaoanimal-e-as-leis
HENDRIKSEN, C. F. M. A short history of use of animals in vaccine development and
quality control. Developments in Biological Standartization, v.86, p.3-10, 1994.
KURIAN G. The Historical Guide to American Government. New York: Oxford
University Press; 1998.
JACKSON, E.M (1990) Cosmet. Toiletries 105(9):135-47.
LACHAPELLE, J.M (1994) Toxicidade orgnica e geral. In: Pruniras, M. Manual de
cosmetologia Dermatolgica, 2. Ed., Ed. Andrei, So Paulo, pgs. 325-56.
LEVAI. Laerte Fernando. Direito dos Animais. So Paulo. Mantiqueira, 2011.
LOPRIENO, N., L.H. Bruner, G.J. Carr, M. Charm-berlain, M. Cottin, O. de Silva & S.S.
Kato(1995) Toxicol. In Vitro 9: 827-38.
LOURENO, DANIEL Braga. Direito dos animais fundamentao e novas perspectivas.
Sergio Antnio Fabris. Porto Alegre: 2008.
MIZIARA, I. V.; MAGALHES, A. T. M.; SANTOS, M. A.; Research ethics in animal
models. Brazilian Journal of Otorhinolaryngology, 2012. P. 129-130.
MOLDENHAUER, F. Using in vitro prediction models instead of the rabbit eye irritation
test to classify and label new chemicals: a post hoc data analilysis of the International
EC/HO Validation Study. Alternatives to Laboratory Animals, v.31, p.31-46, 2003.
MOURA, N. S.; VASCONCELOS, A. C. M.; BERNAB, B. M.; TEIXEIRA, L. J. Q.;
Ensaios Toxicolgicos: Um estudo sobre a utilizao de testes in vivo e in vitro.
ENCICLOPDIA BIOSFERA. Centro Cientfico Conheer. Goinia, 2012.
NBREGA, A. M.; ALVES, E. N.; PRESGRAVE, R. D. F.; DELGADO, I. F. Avaliao da
Irritabilidade Ocular induzida por ingredientes de cosmticos atravs do teste de Draize e dos
mtodos HET-CAM e RBC. Universitas: Cincia da Sade, v. 6, n. 2, p. 103-120, 2008.
OECD, 2013. OECD GUIDELINE FOR THE TESTING OF CHEMICALS. Test No.
437: Bovine Corneal Opacity and Permeability Test Method for Identifying i) Chemicals
Inducing Serious Eye Damage and ii) Chemicals Not Requiring Classification for Eye
Irritation or Serious Eye Damage.
PEA, 2013. Projeto Esperana Animal.
http://www.pea.org.br/crueldade/testes

Testes

em

Animais.

Disponvel

em:

PRESGRAVE, O. A. Alternativas para animais de laboratrio: do animal ao computador. In:

ANDRADE A.; PINTO, S. C.; DE OLIVEIRA, R. S. Animais de laboratrio criao e
experimentao. Rio de Janeiro: Editora FIOCRUZ, 2002.
RECH, M. P.; Experimentao animal: Uma abordagem acerca do sofrimento e

33

crueldade. Universidade Catlica do Rio Grande do Sul, 2013

RIORDAN T. Inventing beauty: A history of the innovations that have made us beautiful.
Broadway Books; 2004.
RUSSEL, W. M. S.; Burch, R. C. The principles of humane experimental technique.
London: Methun, 1959.
SANTOS, Cleopas Isaias. Experimentao Animal e Direito Penal: Bases para a
compreenso do bem jurdico-penal dignidade animal no crime de crueldade experimental
(Art. 31 da lei n 9.605/98). Porto Alegre: 2011.
SILVEIRA, A.R.J.S.; PARDINHO E.C.P. & GOMES, M.A.R. TALIDOMIDA: Um Fantasma
do Passado Esperana do Futuro, Revista Virtual de Inscrio Acadmica da
UFPAVol.1,No2,Julho2001.Disponvelem:http://www2.ufpa.br/rcientifica/ed_anteriores/pdf/e
d_2_arjs.pdf
SINA, J. F. et al. A collaborative evaluation of seven alternatives to Draize Eye Irritation Test
using pharmaceutical intermediates. Fundamental and Toxicology, v.26, p.20-31, 1995.
SPIELMANN, H. Ocular Irritation. In Vitro Methods in Pharmaceutical Research.
Academic Press Ltd, p.265-285, Califrnia, 1997.

STEFANELLI, L. C. J.; Experimentao animal: Consideraes ticas, cientficas e

jurdicas. Mestrado em cincias jurdicas (Direito). Universidade Metodista de Piracicaba
(Unimesp), 2011. P. 189-206.
VICTAL, Julia Costa; VALRIO, Laura Brisighelo; OSHIRO, Mariana Cardoso; BAPTISTA,
Stephanie Costa; PINHEIRO, Fabriciano. Mtodos alternativos in vitro e in silco: mtodos
auxiliares e substitutivos a experimentao animal. RevInter Revista Intertox de
Toxicologia, Risco Ambiental e Sociedade, v. 7, n.2, p. 36-57. jun.2014.
WILHELMUS, K. R. Therapeutic reviews: the Draize Eye Test. Survey of Ophthalmology,
v.6, n.45, p.493-515, 2001.
WORTH, A. & M. Balls (2002) ATLA 30 (Sup. 1):13-9.
YAN X, Piterski C, Nitka S. Evaluation of the hens egg test-chorioallantonic membrane
(CAM) method in prediction of the eye irritation potential formulated personal wash products.
Cutan Ocul Toxicol. 2007; 26(1):25-36.

34

35