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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO

ALINE MIRANDA
BRUNA LEMOS
DANIELLE RIBEIRO
MRCIA MICHELE
MARIA GABRIELA SOUZA
MATHEUS RHAUNY

RELATRIO DE BIOQUMICA
Protenas e Enzimas

Disciplina: Bioqumica IV
Docente: Maria Taciana Soares
Turma: SV1

RECIFE
2015

INTRODUO
Protenas e Enzimas so muitos importantes para o organismo. A primeira tem
como papeis principais: estrutural e expresso gnica. A segunda tem como funo
fazer com que haja o melhor desempenho celular, quebrando ou juntando
molculas.

Protenas so macromolculas formada da unio de vrios aminocidos.


Podem ser:

- Enzimtica;
- Estrutural;
- Contrtil ;
- Reguladora;
- Transporte ;
- Reserva .
Um exemplo muito comum em nosso dia-a-dia o ovo, sua clara
considerada uma das formas mais puras de protena encontrada na nossa
alimentao (ovoalbumina).
A desnaturao da protena ocorre em meio a alterao no ph e temperatura,
podendo ser observado diferentes reaes da protena quando ligada a diferentes
reagentes, pois aps a desnaturao ela tem seu pl alterado. A solubilidade das
protenas em solventes orgnicos menor do que em gua. Isso acontece porque a
capacidade de interao com as partculas de soluto diferente para cada solvente.
A grandeza que mede a capacidade de interao do solvente com o soluto
denominada constante dieltrica.

Enzimas so substncias do grupo das protenas que atuam como


catalizadores, acelerando a velocidade de uma reao. Algumas enzimas
possuem alm de protena, umas partes com aminocidos, no proticas.
Como exemplo de enzimas, a urease.
OBJETIVO

- Caracterizar a presena de protena em material biolgico;


- Verificar a precipitao de protenas com e sem desnaturao;
-Demonstrar a natureza protica da enzima;
- Mostrar a desnaturao protica;
- Determinar qualitativamente a atividade enzimtica;
- Relacionar a parte terica e pratica de protenas e enzimas.
MATERIAL
Para a prtica de enzimas foi utilizado:
1) 4 tubos de ensaio
2) 2 pipetas
3) Pina para tubo de ensaio aquecido
4) Banho Maria laboratorial
1

Para a prtica de Protenas:


1) Bquer
2) 12 tubos de ensaio
3) 2 pipetas
REAES DE COLORAO E PRECIPITAO DE PROTENA

a) REAOES DE COLORAAO DE PROTENAS COM O RELATIVO DE


BIURETO
O biureto uma substancia azul ,formada por sulfato de cobre , que em meio
alcalino usado na identificao da presena de protenas em determinada
amostra . Caso o resultado seja positivo ele assume a colorao violeta,
indicando que as molculas de cobre formaram ligao com os tomos de
nitrognio presentes nos aminocidos

No experimento feito no laboratrio de bioqumica foram usados tais matrias


e substncias :

2 tubos de ensaio
1 ml da soluo de protena
10 gotas de NaOH 2,5n
6 gotas de sulfato cobre a 1%
1 ml de gua destilada

1 TUBO
1 ml de clara de ovo(soluo proteica ) + 5 gotas de NaOH(meio alcalino) a
2,5N + 3 gotas de sulfato de cobre a 1%.
A concluso foi positiva para presena de protenas ,visto que o liquido no
tubo mudou de colorao.

TUBO 2
1 ml de gua(destilada) + 5gotas de NaOH (meio alcalino)a 2,5N + 3 gotas
de sulfato de cobre a 1%
2

O liquido no mudou de colorao , continuou azul como esperado , pois a


gua no apresenta aminocidos na sua composio .

b) REAOES DE PRECIPITAO DE PROTENAS COM CIDO


TRICLOROACTICO(TCA)
As protenas podem ser desnaturada por muitos fatores, um deles a alterao
do Ph a fatores extremos. O TCA, sendo um acido forte, tem essa capacidade. Essa
desnaturao torna a amostra insolvel em gua causando a precipitao, que
tornando fcil identificao da origem dessa substncia. Foi usado no experimento
basicamente:

2 tubos de ensaio

1ml de agua destilada


1 ml de soluo de protena
2ml de cido tricloroactico a 10%
TUBO 1
1 ml de ovoalbumina(s. proteica) + 1ml de cido tricloroactico Positivo.

Houve a mudana de colorao e de textura caracterizando a desnaturao


TUBO 2
1 ml de agua(destilada) + 1ml de cido tricloroactico. Negativo.
Nada ocorreu pois no continha aminocidos .

c) REAO DE PRECIPITAO DE PROTENAS COM SAIS PESADOS


Em um tubo de ensaio foi colocado 1mL de soluo de protenas e posteriormente
foi adicionado 1mL de soluo de acetato de chumbo a 5%. Em outro tubo de ensaio
foi colocado 1mL de gua e adicionou-se 1mL de acetato de chumbo a 5%.
Observou-se que no primeiro tubo houve formao de precipitado e mudana na
colorao para branco. Isso ocorreu devido a desnaturao da protena em meio
aquoso com a adio de cidos orgnicos. Enquanto o segundo tubo manteve sua
textura e colorao.

D) REAO DE PRECIPITAO DE PROTENAS POR SOLVENTES


ORGNICOS
Materiais: 1ml da soluo de protenas;
De um a trs vezes o valor de lcool etlico.

Observaes: No experimento foi utilizado um tubo de


ensaio, onde foi colocado 1 ml de uma soluo a base de
protena, onde logo depois foi colocado uma substancia
chamada lcool etlico, na qual foi utilizada o triplo da
soluo proteica, e de acordo com o que foi observado,
houve mudana de colorao, passou a ser uma
substancia mais esbranquiada e com formao de
precipitado. Com isso, notou-se que a solubilidade no foi
completa, pois a solubilidade das protenas em solventes
orgnicos menor, ou seja, no caso de misturarmos a
protena com o lcool(orgnico) no h uma solubilidade total.

e)REAO DE PRECIPITAO SEM DESNATURAO


1) Solubilizao atravs do fenmeno "Salting in"
Em um tubo de ensaio foi colocado 3mL clara de ovo e em um becker diluiuse com gua destilada. Aps a agitao com o basto de vidro, observou-se a
formao de precipitado devido insolubilidade em gua da protena Globulina.
Posteriormente o precipitado sofreu redissoluo por meio da adio gota a gota da
soluo de cloreto de sdio.

2) Precipitao atravs do fenmeno salting out


Materiais: 2ml da soluo anterior;
2ml de soluo saturada de annimo;
4ml de gua.
Nesse experimento foi utilizado 2 ml em um tubo de
ensaio da soluo anterior, e logo em seguida foi
adicionado 2 ml de soluo saturada de amnio.
Observou-se que na soluo foram criados
precipitados em forma de cogulos, onde o liquido
ficou mais denso e o precipitado s foi notado aps a
agitao da substancia.
Quando so adicionados sais neutros a uma soluo,
ocorre o aumento da forca inica do sistema, assim
quando adicionarmos pequenas quantidades de sal a
uma soluo contendo protenas, no vai haver uma
fcil interao.
ATIVIDADE DA UREASE EXTRADA DE SOJA

B) TESTE DE ATIVIDADE DE ENZIMAS


5

Materiais:
4ml de H2O destilada
4 gotas de soluo de urase
3ml (tubo 1) Soluo tampo com ureia
3ml (tubo 2) soluo tampo sem ureia
2 gotas de vermelho de fenol
Quando foi adicionada no tubo de ensaio, onde havia a
soluo de urase, na qual a soluo a ser administrada
era a soluo tampo COM urase, a colorao mudou
para o rosa, sem formao de cogulos e com a mesma
textura liquida. Com isso o produto final dessa reao a
amnia constatada pela mudana na colorao, pois ao
ocorrer a reao CO(NH2)2 + H2O 2 NH3 + CO2 h um
aumento do pH e o indicador vermelho de fenol presente
na soluo muda para uma tonalidade rsea.
J no tubo 2, foi adicionada a soluo tampo sem urase
na soluo de ureia, e tambm mudou de colorao, por
conta do indicador vermelho que foi colocado nas duas
solues, onde a mesma ficou com uma tonalidade
amarelada, onde se no tivesse o indicador ela no
mudaria de cor, o qual o mais comum.

C) DESNATURAO DA ENZIMA PELO CALOR


Em dois tubos de ensaio, foram colocados 2mL de gua e duas gotas de
soluo de urase em cada. O tubo nmero 1 foi colocado para aquecer durante 10
minutos. Depois disso, foram adicionados 3mL de soluo tampo com ureia e uma
gota de vermelho de fenol em cada.
Observou-se que os dois tubos apresentaram colorao rosa, mas no tubo 1
o tom foi bem mais claro que o do tubo 2. A diferena na colorao se deu porque o
a enzima do tubo 1 foi
desnaturada
pelo
calor,
enquanto que a do tubo
2 manteve sua estrutura.

CONCLUSO
Foi observada nessa
experimentos,
a
e sem desnaturao,

prtica,
atravs
de
precipitao de protenas com
com diferentes reagentes.

A observao na pratica, juntamente com a parte terica, ajudou aos alunos a


entender da melhor maneira o funcionamento de enzimas e protenas no ser vivo,
vindo a ser importante futuramente em sua vida acadmica e profissional.
PERGUNTAS ORIENTADORAS
PROTENAS
1) Qual a importncia da reao do biureto?
A reao do Biureto importante para demonstrar a presena de protenas em
materiais biolgicos e tambm para quantific-las.
2) O que salting-in?
A solubilidade de determinada protena vai depender da
quantidade de gua disponvel ao redor de seus grupos inicos. A
solubilidade ser menor se o nmero de molculas de gua tambm for.
No entanto, baixas concentraes de sais podem aumentar a
solubilidade de muitas protenas, porque diminui a interao protenaprotena. Esse fenmeno o Salting-in (solubilizao por sais).

3) O que salting-out?
Salting-out, por sua vez, quando altas concentraes de sais precipitam
protenas de suas solues, ocorrendo uma predominncia da interao protenaprotena. Os sais desidratam as protenas, atraindo as molculas de gua do meio,
de modo a ficar menos gua disponvel para as molculas proticas.
4) Em que se fundamenta a reao do biureto?
baseado na reao do sulfato de cobre em meio alcalino, com protenas e
peptdeos. O nome do mtodo provm do fato de que a uria aquecida dar reao
positiva, com desprendimento de amnia. A reao do biureto positiva para
protenas e peptdeos com trs ou mais resduos de aminocidos. Portanto,
aminocidos e dipeptdeos no do reao do Biureto positiva. A reao tambm
positiva para substncias que contm duas carbonilas (-CONH 2) ligadas diretamente
ou atravs de um nico tomo de carbono ou nitrognio.

5) Como pode ser feita a caracterizao das protenas?

A caracterizao pode ser feita a partir da utilizao de reaes de colorao,


como no caso da reao com o biureto, ou reaes de precipitao, como as
reaes do Salting-In e Salting-out.
6) O que o ponto isoeltrico de uma protena?
Ponto Isoeltrico (pI) o pH em que a protena tem uma carga lquida igual a
zero (0).
ENZIMAS
1) Que so enzimas?
So protenas especializadas em catalisar reaes biolgicas, ou seja
aumentam a velocidade de uma reao qumica sem interferir no processo. Elas
esto associadas a biomolculas, devido as suas extraordinrias especificidade e
poder cataltico.
2) Qual reao catalisada pela urease?
Catalisa a reao de hidrolise da uria.
3) Como pode ser evidenciada a natureza proteica da enzima?
O biureto detecta a presena de ligaes peptdicas caractersticas de protenas,
o que pode ser visualizado no experimento A com a mudana de colorao.

4) Qual a fonte de urase utilizada nos experimentos?


Urease extrada da soja.