Bio Cimentao de Solos Arenosos para

Melhoramento das suas Caractersticas

Hidro - Mecnicas

Rita Romeu Pedreira

Dissertao para a obteno do Grau de Mestre em

Engenharia Civil
Orientadores: Professora Maria Rafaela Pinheiro Cardoso
Professor Gabriel Antnio Amaro Monteiro

Jri
Presidente: Professor Doutor Jaime Alberto dos Santos
Orientadora: Professora Maria Rafaela Pinheiro Cardoso
Vogal: Professora Laura Maria Mello Saraiva Caldeira

Outubro de 2014
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AGRADECIMENTOS

Aos meus orientadores, Professora Maria Rafaela Pinheiro Cardoso e Professor Gabriel
Antnio Amaro Monteiro por todo o apoio que me deram ao longo deste projecto, pelo
conhecimento que me transmitiram e pela pacincia e disponibilidade.
Sofia Duarte, por toda a ajuda e dedicao que me forneceu na parte Biolgica. Agradeo
igualmente aos seus colegas de laboratrio que sempre se mostraram disponveis a ajudar.
Ao Sr. Leonel, Sr. Pedro e a sua equipe do laboratrio de Materiais de Construo por me
terem ajudado na elaborao do equipamento usado neste estudo.
s minhas amigas que sempre me apoiaram e em particular minha amiga e colega Ana
Tavares pelo companheirismo ao longo de todo o curso.
Aos meus pais, pelo incentivo que sempre me prestaram.

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iv

RESUMO

Hoje em dia cerca de uma tonelada de dixido de carbono (CO 2) emitida para cada tonelada
de cimento produzido. O dixido de carbono o principal responsvel pelo efeito estufa que
est na origem de um dos maiores problemas da actualidade, o aquecimento global. por esta
razo que surge casa vez mais a necessidade de encontrar formas sustentveis de conseguir
os mesmos objectivos. A estabilizao de solos arenosos com bio-cimento em vez de recorrer
s tcnicas tradicionais de injeco uma delas.
A tcnica MICP (Microbioligically Induced Calcite Precipitation) uma tcnica natural e
ecolgica que melhora as caractersticas Hidro-mecnicas do solo atravs da precipitao de
calcite produzida por bactrias. A calcite serve de ligante para as partculas de solo e aps o
tratamento o solo torna-se menos permevel, mais rgido e mais resistente.
Este o primeiro estudo sobre a tcnica MICP realizado no IST que se conhece. Numa
primeira fase, o objectivo deste estudo de pr em prtica esta nova tcnica e identificar quais
as melhores condies para que se consiga produzir a mxima quantidade de calcite possvel.
Numa segunda fase, pretende-se comparar a resistncia obtida atravs deste novo tratamento
com a resistncia conseguida atravs de um tratamento tradicional de solos com introduo de
calda de cimento (Jet grouting).
Palavras-chave: Bio-cimentao, Precipitao de Calcite, Bacillus pasteurii, Tratamento de
Solo, Aumento de Resistncia

vi

ABSTRACT

Nowadays, about one ton of carbon dioxide (CO 2) is emitted for every ton of cement produced.
Carbon dioxide is the main greenhouse gas so is the principal cause of one of the biggest
problems in the world today, the global warming. It is for this reason that it became necessary to
find alternative sustainable ways to reach the same purpose. Soil stabilization with bio-cement
is one of these alternatives and may replace cement injection.
Microbial-induced calcite precipitation (MICP) is a green and sustainable technique that
improves the geotechnical properties of soil through the precipitation of calcite at soil particles
contacts. After this treatment the soil becomes less pervious, stiffer and more resistant.
This is the first study on the MICP technique that has been performed at IST as far as it known.
This study will put into practice this new technique and will identify the best conditions to take a
maximum production of calcite. The objective is to compare the resistance obtained through the
MICP treatment and the resistance obtained by a traditional solution of soil improvement like
jetgrouting.
Keywords: Bacillus pasteurii, Bio-cementation, calcite precipitation, soil improvement

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viii

NDICE
Captulo 1 Introduo.................................................................................................................... 1
Motivao.................................................................................................................................. 1
Objectivo e Estrutura do Trabalho ............................................................................................ 2
Captulo 2 Fundamentos Tericos ............................................................................................... 5
2.1 Bio-Cimentao ................................................................................................................... 5
Processo Qumico .................................................................................................................. 5
Factores que influenciam o comportamento das Bactrias ................................................. 7
2.2

Estudos Sobre a Bio-Cimentao como Tcnica de Melhoramento de Terrenos......... 9

2.2.1

Ensaios Laboratoriais............................................................................................. 9

2.2.2

Tratamento in situ ............................................................................................... 13

2.2.3 Principais Aspectos e Dificuldades na Aplicao da Bio-cimentao em Obra .......... 16

2.3

Solues Tradicionais para Melhoramentos de Terrenos ........................................... 17

2.4 Bio-Cimentao VS Solues Tradicionais......................................................................... 19

2.4.1 Vantagens ................................................................................................................... 19
2.4.2 Desvantagens ............................................................................................................. 20
2.5 Possveis Aplicaes Geotcnicas da Bio-Cimentao ...................................................... 21
Capitulo 3 Procedimento Experimental - Biologia .................................................................... 25
3.1 Introduo ......................................................................................................................... 25
3.2 Crescimento ...................................................................................................................... 25
3.2.1 Procedimento ............................................................................................................. 27
3.3 Soluo de alimento .............................................................................................................. 29
Capitulo 4 Procedimento Experimental-Geotecnia................................................................... 31
4.1 Introduo ......................................................................................................................... 31
4.2 Caracterizao do Solo ...................................................................................................... 31
4.3 Montagem dos Provetes ................................................................................................... 33
4.3.1 Quantidades e Procedimento de Montagem............................................................. 33
4.3.1.3 Montagem dos Provetes ......................................................................................... 35
4.3.2 Sistema de Drenagem e de Injeco dos Nutrientes ................................................. 36
............................................................................................................................................. 37
4.3.3 Injeco de Nutrientes ............................................................................................... 38
4.3.4 Descofragem .............................................................................................................. 38
4.3 Provetes de Solo com Cimento ......................................................................................... 39

ix

4.4 Provetes de Solo com gua ............................................................................................... 40

Capitulo 5 Ensaios e Resultados ................................................................................................. 41
5.1 Resumo dos Ensaios .......................................................................................................... 41
5.2 Ensaios Realizados............................................................................................................. 43
5.2.1 Introduo .................................................................................................................. 43
5.2.2 Quantificao da Resistncia ..................................................................................... 43
5.2.3 Estudo da Durabilidade .............................................................................................. 45
5.2.4 Controlo da Bio-Cimentao ...................................................................................... 45
5.3 Fase I.................................................................................................................................. 48
5.3.1 Resultados .................................................................................................................. 49
5.3.2 Microscopia Electrnica de Varrimento, SEM............................................................ 51
5.4 Fase II................................................................................................................................. 54
5.4.1 Resultados .................................................................................................................. 55
5.4.2 Ensaio de Submerso em gua .................................................................................. 57
5.5 Fase III................................................................................................................................ 58
5.5.1 Resultados .................................................................................................................. 59
5.5.2 Quantificao do Carbonato de Clcio (CaCO3) ........................................................ 63
5.5.3 Verificao da Presena das Bactrias no Solo .......................................................... 65
5.5.4 Ensaio de Submerso em gua .................................................................................. 67
5.5.5 Microscpio ................................................................................................................ 67
5.6 Fase IV ............................................................................................................................... 73
5.6.1 Resultados .................................................................................................................. 74
5.6.2 Quantificao do Carbonato de Clcio (CaCO3) ......................................................... 79
5.6.3 Medio da Quantidade de Amnia no Solo ............................................................. 81
5.6.4 Porosimetria por Intruso de Mercrio no Solo ........................................................ 83
Capitulo 6 Comparao entre Bio-cimento e Cimento ............................................................... 85
6.1 Resultados ......................................................................................................................... 85
6.2 Porosimetria por Intruso de Mercrio no Solo ............................................................... 89
Captulo 7 Consideraes Finais e Estudos Futuros ................................................................... 91
7.1 Consideraes Finais ......................................................................................................... 91
7.2 Estudos Futuros ................................................................................................................. 94
Condies Favorveis Actividade Bacteriana ................................................................... 94
Controlo............................................................................................................................... 94
Sistema de Injeco ............................................................................................................. 94
x

Estudos mais Fundamentados ............................................................................................ 95

xi

xii

NDICE DE FIGURAS
FIGURA 2 1 ESQUEMA ILUSTRANDO O PROCESSO QUMICO DE BIO-CIMENTO (YASUHARA, 2010).................................. 6
FIGURA 2 2 ESQUEMA ILUSTRANDO: A) SOLO SEM TRATAMENTO; B) SOLO TRATADO POR MICP (DEJONG ET AL, 2010) ....... 6
FIGURA 2 3 ESQUEMA DO ENSAIO A GRANDE ESCALA REALIZADO POR VAN PASSEN ET AL.,2010 .................................... 13
FIGURA 2 4 ATERRO APS 16 DIAS DE ENSAIO, (LEON A. VAN PASSE NET AL., 2010) .................................................. 14
FIGURA 2 5 LOTES SUBMETIDOS AO TRATAMENTO MICP, DIMENSO DE UM LOTE 2,4M X 4,9M X 30M (GOMEZ ET.AL. ,
2013) .................................................................................................................................................. 15
FIGURA 2 6 CROSTA SUPERFICIAL CIMENTADA E COM UMA ELEVADA RESISTNCIA OBSERVADA EM LOTES SUBMETIDOS
DURANTE 20DIAS AO TRATAMENTO MICP (GOMEZ ET.AL., 2013) .................................................................. 15
FIGURA 2 7 PRINCIPAIS TCNICAS DE TRATAMENTO DE SOLO: A) JET GROUTING ( PINTO, FEVEREIRO 2014); B) DEEP SOIL
MIXING (WARUNA , 2012) ...................................................................................................................... 18
FIGURA 2 8 BARRAGEM HOMOGNEA (ROCHA ET.AL., 2014. FSP) .......................................................................... 22
FIGURA 2 9 DIFERENTES TIPOS DE DIQUES (CASTILHA, 2009) .................................................................................. 23
FIGURA 2 11 ESQUEMA REPRESENTANDO O PROCESSO DE LIQUEFACO (GOMES, 2013) ............................................ 24
FIGURA 3 1 CURVA DE CRESCIMENTO BACILLUS PASTEURII....................................................................................... 25
FIGURA 3 2 A) ESPECTROFOTMETRO PARA MEDIR A DO (DENSIDADE PTICA) ; B) AUTOCLAVE PARA ESTERILIZAR MEBIOS E
UTENSLIOS; C) INCUBADORA COM AGITAO ORBITAL UTILIZADA NO CRESCIMENTO DAS BACTRIAS ....................... 27
FIGURA 3 3 A) CONSTITUINTES DO MEIO DE CULTURA AUTOCLAVADOS SEPARADAMENTE ; B) FALCON COM VOLUME DE 15ML
........................................................................................................................................................... 28
FIGURA 3 4 A) CMARA DE FLUXO LAMINAR ; B) MANIPULAO NA CMARA DE FLUXO LAMINAR COM UMA PIPETA........... 29
FIGURA 4 1 EQUIPAMENTO DE LABORATRIO (BARBEDO, 2011) ............................................................................. 31
FIGURA 4 2 CURVAS GRANULOMTRICAS DOS SOLOS TRATADOS ............................................................................... 32
FIGURA 4 3 CORTE VERTICAL ESQUEMTICO DOS PROVETES MONTADOS COM ILUSTRAO DO SISTEMA DE DRENAGEM ....... 33
FIGURA 4 4 ILUSTRAO DAS DIFERENTES ETAPAS DO PROCESSO DE MONTAGEM DOS PROVETES .................................... 35
FIGURA 4 5 ILUSTRAO DAS DIFERENTES CAMADAS DO SISTEMA DE DRENAGEM A) PLANTA B) CORTE ............................. 37
FIGURA 4 6 A) REDE METLICA ; B) PLANTA DO SISTEMA DE DRENAGEM .................................................................... 37
FIGURA 4 7 ESQUEMA DE PINA DE MOHR........................................................................................................... 38
FIGURA 4 8 SISTEMA DE DESCOFRAGEM FINAL CORTE VERTICAL NOS PROVETES PARA SE OBTER DUAS METADES
INDEPENDENTES ..................................................................................................................................... 39

FIGURA 5 1 EQUIPAMENTO PARA ENSAIO DE COMPRESSO A) FOTOGRAFIA GERAL, B) DETALHE DA CLULA DE CARGA E DO
LVDT ................................................................................................................................................... 44
FIGURA 5 2 A) EQUIPAMENTO PARA O ENSAIO AO ESMAGAMENTO (NRI, 2013) ; B) AMOSTRA ANTES DE SER ENSAIADA ... 44
FIGURA 5 3 AMOSTRA SUBMERSA DURANTE O ENSAIO DE DURABILIDADE ................................................................... 45
FIGURA 5 4 FITAS DE MEDIO DE PH ................................................................................................................. 45
FIGURA 5 5 A) AMOSTRAS COM BANHO DE OURO ANTES DE SEREM OBSERVADAS NO MICROSCPIO ELECTRNICO; B)
MICROSCPIO ELECTRNICO (SEM) DO INSTITUTO DE CINCIA E ENGENHARIA DE MATERIAIS E SUPERFCIE (IST) .... 46
FIGURA 5 6 PLACAS DE PETRI PARA CONTROLO DA PRESENA DAS BACTRIAS NO SOLO A) G1- BACTRIAS, B) G2-CONTROLO
........................................................................................................................................................... 47
FIGURA 5 7 ESCALA DE CORES E FITAS INDICADORAS DA QUANTIDADE DE AMNIA NA PURGA DIRIA ............................... 48
FIGURA 5 8 A) PROVETES DENTRO DO AUTOCLAVE PARA ESTERILIZAO ; B) ENSAIO DA FASE I A DECORRER NO LABORATRIO;
C) FRAGMENTOS DE UMA DAS AMOSTRAS APS DESCOFRAGEM ....................................................................... 49
FIGURA 5 9 FRAGMENTOS DO PROVETE DE CONTROLO ANTES DE SEREM ENSAIADOS ..................................................... 49
FIGURA 5 10 RESULTADOS DO ENSAIO AO ESMAGAMENTO DOS PROVETES DE CONTROLO (FASE I) .................................. 50
FIGURA 5 11 RESULTADOS DO ENSAIO AO ESMAGAMENTO DOS PROVETES COM BACTRIAS (FASE I) ................................ 50
FIGURA 5 12 COMPARAO DOS CASOS COM E SEM BACTRIAS (FASE I) .................................................................... 50

xiii

FIGURA 5 13 IMAGENS OBTIDAS ATRAVS DO MICROSCPIO SEM CORRESPONDENTES A UMA AMOSTRA DE GRANULOMETRIA
G1 COM BACTRIAS, A) DETALHE DO BIOFILME FORMADO PELAS BACTRIAS B) FOTOGRAFIA GERAL (1000X), C)
DETALHE DAS ESFERAS DE CALCITE .............................................................................................................. 52
FIGURA 5 14 IMAGENS ILUSTRADAS POR SEAGREN ET AL (2009) A) ASPECTO DAS BACTRIAS B. PASTEURII (6050X) B)
CALCITE FORMADA AO LONGO DO PROCESSO MICP (87.5X) ........................................................................... 52
FIGURA 5 15 AMOSTRAS DE GRANULOMETRIA G1 OBSERVADAS NO MICROSCPIO SEM A) AMOSTRA DE CONTROLO
(1000X), B) AMOSTRA SEM QUALQUER TRATAMENTO, APENAS SOLO E GUA (1000X) ....................................... 53
FIGURA 5 16 CRISTAIS DE ACETATO DE CLCIO OBSERVADOS NO MICROSCPIO SEM, A) NESTE ESTUDO, B) NUM ESTUDO
REALIZADO POR OUTRO AUTOR .................................................................................................................. 54
FIGURA 5 17 A) AMOSTRAS PARTIDAS NA DESCOFRAGEM, APENAS SUBSISTIRAM OS TOPOS DOS PROVETES; B) AMOSTRA APS
SECAGEM NA ESTUFA ............................................................................................................................... 54
FIGURA 5 18 PROVETES MANTIDOS: A) A TEMPERATURA DE LABORATRIO (20C), B) NA ESTUFA (30C) ........................ 55
FIGURA 5 19 A) AMOSTRA DE SOLO G1 TRATADA COM BACTRIAS A 20C; B) AMOSTRA DE SOLO G2 DE CONTROLO A 30C;
C) AMOSTRA DE SOLO G1 TRATADA COM BACTRIAS A 30C ........................................................................... 55
FIGURA 5 20 A) ENSAIO DE SUBMERSO A DECORRER; TOPO DO PROVETE UM MS APS O ENSAIO B) CORTE C) PLANTA ..... 57
FIGURA 5 21 PROVETES NA ESTUFA A 30 C, A) FOTOGRAFIA GERAL, B) ZOOM .......................................................... 58
FIGURA 5 22 AMOSTRAS APS 40DIAS DE ENSAIO: A) ANTES DE IREM A ESTUFA, B) DEPOIS DE IREM ESTUFA .................. 59
FIGURA 5 23 EXEMPLO DE ROTURAS OBSERVADAS TANTO EM PROVETES COM BACTRIAS COMO NOS DE CONTROLO (FASE III)
........................................................................................................................................................... 59
FIGURA 5 24 RESULTADOS DO ENSAIO COMPRESSO GRANULOMETRIA G1 (FASE III) ............................................ 60
FIGURA 5 25 RESULTADOS DO ENSAIO COMPRESSO GRANULOMETRIA G2 (FASE III) ............................................ 60
FIGURA 5 26 COMPARAO COM AS QUANTIDADES DE CARBONATO DE CLCIO APRESENTADAS NO ESTUDO REALIZADO POR AL
QUABANY ET AL (2012) (FASE III) ............................................................................................................. 64
FIGURA 5 27 VERIFICAO DA PRESENA DE BACTRIAS VIVAS NO SOLO (FASE III) ....................................................... 65
FIGURA 5 28 DETALHE DAS PLACAS DE PETRI USADAS PARA O ENSAIO DE VERIFICAO DA PRESENA DAS BACTRIAS NO SOLO
(FASE III) .............................................................................................................................................. 66
FIGURA 5 29 ENSAIO DE SUBMERSO EM GUA FASE III A) ENSAIO A DECORRER, B) AMOSTRA APS O ENSAIO .................. 67
FIGURA 5 30 IDENTIFICAO DE IMPRINTS NO SOLO INDICADORES DA PRESENA DE BACTRIAS, AMOSTRA G2 40 DIAS (FASE
III) ....................................................................................................................................................... 67
FIGURA 5 31 MINERAL ARGILOSO, ESMACTITA, OBSERVADO NO MICROSCPIO ELECTRNICO, A) NESTE ESTUDO (FASE III), B)
POR MOCOROA ET AL (2014) ................................................................................................................... 68
FIGURA 5 32 MINERAIS COM CLCIO NA SUA COMPOSIO A) CLORETO DE CLCIO, B) ACETATO DE CLCIO, C) LACTATO DE
CLCIO, D) GLUCONATO DE CLCIO ............................................................................................................ 68
FIGURA 5 33 DIFERENTES ASPECTOS DE CALCITE OBSERVADOS NAS AMOSTRAS DA FASE III NO MICROSCPIO ELECTRNICO
(SEM) ................................................................................................................................................. 69
FIGURA 5 34 FOTOGRAFIAS OBTIDAS NO MICROSCPIO SEM EVOLUO DE CALCITE AO LONGO DO TEMPO NAS AMOSTRAS
G2 TRATADAS COM BACTRIAS (FASE III) .................................................................................................... 70
FIGURA 5 35 AMOSTRAS DE SOLO ARENOSO COM PARTCULAS ENTRE 90 E 300 M OBSERVADAS NO MISCROSCPIO
ELECTRNICO POR AL QABANY ET AL (2012) APS SEREM SUBMETIDAS AO PROCESSO MICP ............................... 71
FIGURA 5 36 FOTOGRAFIAS DE AMOSTRAS SEM TRATAMENTO, COMPOSTAS APENAS POR SOLO E GUA, OBTIDAS NO
MICROSCPIO SEM (FASE III) ................................................................................................................... 71
FIGURA 5 37 ESPECTROSCOPIA DE ENERGIA DISPERSIVA DE RAIOS X (EDS), A) E B) FOTOGRAFIAS ILUSTRANDO EM QUE SITIO
FOI REALIZADO O ENSAIO, C) E D) RESULTADOS DO ENSAIO .............................................................................. 72
FIGURA 5 38 PROVETES MONTADOS NA FASE IV A) PROVETES FINAIS ANTES DO ENSAIO B) AMOSTRAS APS DESCOFRAGEM E
ANTES DE IREM A ESTUFA .......................................................................................................................... 74
FIGURA 5 39 AMOSTRAS DEPOIS DE IREM ESTUFA A 100C A) GRANULOMETRIA G1 B) GRANULOMETRIA G2................ 74
FIGURA 5 40 ROTURAS TIPO OBSERVADAS NO ENSAIO COMPRESSO PARA AS GRANULOMETRIAS G1 E G2 (FASE IV) ...... 75
FIGURA 5 41 ANLISE COMPARATIVA ENTRE PROVETES DE CONTROLO (C) E SOLO COM GUA (S) (FASE IV) ..................... 77
FIGURA 5 42 COMPARAO COM AS QUANTIDADES DE CARBONETO DE CLCIO APRESENTADAS NO ESTUDO REALIZADO POR AL
QUABANY ET AL (2012) PARA A GRANULOMETRIA G1 E G2 (FASE IV) .............................................................. 80

xiv

FIGURA 5 43 FITAS INDICADORAS DA QUANTIDADE DE AMNIA NO LQUIDO DE PURGA E CORRESPONDENTE ESCALA DE CORES
........................................................................................................................................................... 82
FIGURA 5 44 RESULTADOS OBTIDOS NO ENSAIO DE POROSIMETRIA POR INTRUSO DE MERCRIO (FASE IV) ...................... 83

xv

xvi

NDICE DE QUADROS
QUADRO 2 1 QUADRO RESUMO DA INFORMAO RETIRADA DE ESTUDOS ANTERIORES SOBRE O PROCESSO MICP.............. 12

QUADRO 4 1VALORES OBTIDOS NO ENSAIO DE PERMEABILIDADE.............................................................................. 32

QUADRO 4 2 QUANTIDADES NECESSRIAS PARA A MONTAGEM DO PROVETE COM CIMENTO .......................................... 39

QUADRO 5 1QUADRO RESUMO DOS DIFERENTES ENSAIOS REALIZADOS NESTE ESTUDO ................................................. 42
QUADRO 5 2 COMPARAO DO GANHO DE RESISTNCIA COM OS DIFERENTES TRATAMENTOS ........................................ 61
QUADRO 5 3 QUANTIDADE DE CACO3 EM AMOSTRAS COM 20G ............................................................................. 63
QUADRO 5 4 RESULTADOS DA ANLISE QUMICA ................................................................................................... 64
QUADRO 5 5 QUANTIFICAO E COMPARAO DO GANHO DE RESISTNCIA DOS DIFERENTES TRATAMENTOS .................... 77
QUADRO 5 6 RESULTADOS DA ANLISE QUMICA (FASE IV) .................................................................................... 79
QUADRO 5 7 RESULTADOS DO ENSAIO PARA QUANTIFICAO DA AMNIA NO LQUIDO DE PURGA ................................... 82

QUADRO 6 1 QUANTIFICAO E COMPARAO DO GANHO DE RESISTNCIA DOS DIFERENTES TRATAMENTOS EM RELAO AO

CIMENTO............................................................................................................................................... 86

xvii

xviii

SIGLAS E ABREVIATURAS
ASTM

American Society for Testing and Materials

ATCC

American Type Culture Collection

DCP

Dynamic Cone Penetration

EDS X

Espectroscopia de Energia Dispersiva de Raios X

IST

Instituto Superior Tcnico

LAIST

Laboratrio de Anlises do IST

LVDT

Linear Voltage Displacement Transducer

MDD

Maximum Dry Densitity

MICP

Microbiologically Induced Calcite Precipitation

SEM

Scanning Electron Microscope

SIMBOLOGIA
A

rea

Provetes com Bactrias

Provetes de Controlo

Ca

Clcio

Ca2+

Ies de clcio

CaCl2

Cloreto de Clcio

CaCO3

Carbonato de Clcio

CO2

Dixido de Carbono

2-

CO3

Ies Carbonato

CO(NH2)2

Ureia

Dimetro

Dr

Densidade relativa

DO

Densidade ptica

DO600nm

Densidade ptica lida a 600 nm

DOi

Densidade ptica Inicial

xix

DOf

Densidade ptica Final

ndice de Vazios

Fora

Fe

Ferro

Gs

Densidade das Partculas Slidas

Altura do Permemetro

Provetes de Cimento

Hi

Altura Inicial da Amostra

HR

Humidade relativa

H2O

gua

Deslocamento Vertical

Gradiente Hidrulico

IP

ndice de plasticidade

Coeficiente de Permeabilidade

Potssio

Moles

Mg

Magnsio

mG1

Massa de solo com partculas do tipo G1

mG2

Massa de solo com partculas do tipo G2

Porosidade do Solo

Azoto

NaHCO3

Bicarbonato de Sdio

NH4Cl

Cloreto de Amnio

(NH4)2SO4

Sulfato de Amnio

Fsforo

Caudal

Suco

Provetes de Solo e gua

Sr

Grau de saturao

Presso Intersticial

Velocidade

xx

Volume

Vi

Volume Inicial

Vf

Volume Final

Teor em gua

Peso Volmico Aparente Seco

Peso Volmico da gua

Tenso de Compresso Axial

Deformao Axial
+

2NH4

Amnio

xxi

xxii

Captulo 1 Introduo
Motivao
Hoje em dia, cerca de uma tonelada de dixido de carbono (CO2) emitida por cada tonelada de
cimento produzido. O dixido de carbono o principal responsvel pelo efeito estufa que est na
origem de um dos maiores problemas da actualidade, o aquecimento global.
por esta razo que surgiu a necessidade de encontrar uma forma sustentvel de estabilizar os solos
arenosos para fazer face s tcnicas tradicionais que so, a maior parte delas nocivas para o ambiente.
A bio-cimentao, tambm conhecida por tcnica MICP (Microbiologically Induced Calcite Precipitation)
uma tcnica natural e ecolgica que consiste em utilizar bactrias Bacillus pasteurii para melhorar as
caractersticas de meios porosos tais como o solo, o beto, pedra natural, etc. Estes microorganismos
devem ser estimulados atravs da adio de compostos que lhes servem de alimento. Sob condies
favorveis para a sua sobrevivncia, estas bactrias so capazes de precipitar carbonato de clcio
(CaCO3) que visa a unir as partculas do solo e colmatar os poros do meio poroso. Aps o processo
concludo o meio torna-se menos permevel, mais rgido e mais resistente.
A bio-cimentao tem vrias aplicaes na engenharia civil nomeadamente na rea da Geotecnia. A
calcite precipitada pelas bactrias no interior dos solos torna o solo menos permevel e mais resistente.
Assim, esta tcnica pode ser utilizada para reforo de fundaes e para evitar a eroso interna em
barragens de terra (piping) e a destruio de diques na ocorrncia de catstrofes naturais como
enchentes e tempestades no mar (Van Paassen,2011).
Por outro lado, o acrscimo de resistncia do solo devido formao de bio-cimento (calcite) que liga as
partculas tornando o todo mais resistente, leva a que haja uma diminuio do potencial de liquefaco
(Ignaki et al.,2011).
Existem igualmente outras aplicaes, como por exemplo a substituio do asfalto nas estradas (Brian
Wang, 2010), a possibilidade de se escavar tneis em areia e solidificar o leito do oceano para facilitar os
trabalhos de extraco de petrleo e de gs natural (Latil et al., 2008).

Objectivo e Estrutura do Trabalho

Este trabalho tem por objectivo, estudar o processo MICP em solos arenosos e comparar as vantagens e
desvantagens desta tcnica em relao tcnica mais tradicional para tratamento de solos arenosos por
injeco ou mistura de cimento do tipo Portland.
Trata-se de um trabalho experimental concebido com o intuito de avaliar e medir a resistncia obtida
atravs do tratamento por bio-cimentao. Foram montados provetes compostos por solo e cultura
bacteriana e provetes apenas compostos por solo e meio de cultura sem bactrias de modo a avaliar,
por comparao, os ganhos de resistncia.
O solo utilizado um solo arenoso com duas granulometrias diferentes, uma quase uniforme, a outra
bem graduada. O objectivo estudar o efeito de duas granulometrias diferentes no processo MICP pois
podem afectar a actividade bacteriana.
O estudo divide-se em quatro fases e cada fase tem como objectivo complementar a fase anterior,
estudar o procedimento de formao de calcite e perceber quais os factores que influenciam o processo
MICP. A primeira fase serviu para aprendizagem de todo o processo biolgico nomeadamente para a
manipulao de clulas e de produo de alimento. A segunda fase teve por objectivo avaliar o efeito da
temperatura na produo de calcite ao longo de todo o processo MICP. A terceira fase, por sua vez, visa
avaliar os ganhos em aumentar a durao do tratamento necessrio actividade bacteriana.
Por fim, a quarta fase serviu para confirmar os resultados obtidos nas fases anteriores e perceber os
motivos de os provetes de controlo tambm terem resistncia e em alguns casos superior resistncia
medida nos provetes tratados por introduo de bactrias. Este resultado no seria de esperar uma vez
que as bactrias introduzidas deveriam acelerar o processo de produo de calcite e por consequente
atingir uma resistncia mais elevada.
No mbito de comparar a resistncia obtida atravs do processo de bio-cimentao e a resistncia de
solo tratado com introduo de cimento, foram montados provetes em tudo iguais aos provetes
montados para estudo da tcnica MICP, mas desta vez com uma mistura de solo e cimento do tipo
Portland.
Este trabalho divide-se em sete captulos incluindo esta introduo que o primeiro captulo.
No segundo captulo ser dada toda a informao sobre o tipo de microrganismos usado e ser descrito
detalhadamente todo o processo de formao do carbonato de clcio. Sero apresentados todos os
factores que influenciam o comportamento das bactrias assim como as principais dificuldades
encontradas na aplicao desta tcnica em obra. Por fim, ser feita uma comparao entre a tcnica
MICP e as tcnicas tradicionais usadas para melhoramento de solos arenosos.

No terceiro captulo ser feita uma anlise mais detalhada sobre as bactrias Bacillus pasteurii e o seu
crescimento. Ser igualmente descrito todo o procedimento relativo preparao das bactrias e da
soluo de alimento.
No quarto captulo, faz-se a caracterizao do solo utilizado nos ensaios e apresentam-se as
correspondentes curvas granulomtricas. Mostra-se tambm como se procedeu montagem dos
provetes utilizados para o estudo da tcnica MICP e apresenta-se o sistema de drenagem (ou de purga),
de descofragem e de alimentao.
No quinto captulo, apresenta-se as diferentes fases realizadas ao longo deste estudo e descreve-se
cuidadosamente todos os ensaios efectuados em provetes de solo com o tratamento biolgico,
referindo-se os seus objectivos. Apresentam-se tambm todos os resultados obtidos nas diferentes
fases e nos diferentes ensaios e feita uma anlise dos resultados experimentais de modo a
compreender quais as melhores condies para que se d a mxima produo de calcite e
consequentemente se atinja a melhor resistncia possvel com a bio-cimentao.
No sexto captulo, apresenta-se os resultados experimentais obtidos nos ensaios realizados com
provetes de cimento para 3 e 28 dias de cura e faz-se uma comparao dos valores com os valores
obtidos para solo tratado pelo processo MICP.
Finalmente, no stimo e ltimo captulo apresentam-se as principais concluses do estudo efectuado e
uma listagem de estudos a realizar no futuro.

Captulo 2 Fundamentos Tericos

2.1 Bio-Cimentao
Processo Qumico
O processo de bio-cimentao, tambm conhecido por MICP (Microbiologically Induced Calcite
Precipitation), um processo onde se d a formao de calcite, responsvel pela ligao das partculas
do solo que consequentemente leva a um aumento da sua rigidez e resistncia. As bactrias
responsveis pela produo de calcite so conhecidas pelo nome de Sporosarcina pasteurii ou por
Bacillus pasteurii. Estas bactrias catalisam a reaco da hidrlise da ureia pela sua capacidade em
produzir a enzima urease e graas a esta reaco que se d a formao de calcite como ser
apresentado de seguida. As bactrias Bacillus pasteurii no so patognicas e apenas produzem
eficientemente calcite se o ambiente onde vivem lhes garantir determinadas condies. Os factores que
influenciam o comportamento destes microrganismos sero apresentados mais a frente neste captulo.
O processo de bio-cimentao consiste em introduzir bactrias no solo. Ao adicionar ao conjunto (solo
mais bactrias) uma soluo composta por ureia e cloreto de clcio, d-se uma reaco qumica capaz
de produzir calcite (CaCO3). A calcite corresponde ao que se chama de bio-cimento.
Mais precisamente, temos numa primeira fase a hidrlise da ureia mediada pela urease:
+

2-

CO(NH2)2 +2H2O

2NH4 + CO3

(2.1)

(Ureia + gua)

(Amnio + ies carbonato)

(2.2)

A equao 2.1 encontra-se escrita com as frmulas qumicas e a equao 2.2 a correspondente
traduo.
Depois deste processo concludo, os ies carbonato formados vo reagir com os ies de clcio
provenientes do cloreto de clcio. Esta ltima reaco d origem calcite que tem a capacidade de
agrupar as partculas do solo tornando-o mais coeso, logo mais resistente e tambm menos permevel.
2+

Ca + CO3

2-

(2.3)

CaCO3
+

de referir que o Amnio (NH4 ) libertado pela hidrlise da ureia faz aumentar o pH do solo. Assim, a
passagem de um pH neutro para um pH alcalino contribui para o estabelecimento de condies mais
favorveis actividade das bactrias.

Em sntese apresenta-se na Figura 2.1 o esquema resumo concebido por Hideaki Yasuhara, (Yasuhara,
2010):

Figura 2 1 Esquema ilustrando o processo qumico de

bio-cimento (Yasuhara, 2010)

A Figura 2.2 a) ilustra o aspecto do solo sem tratamento e a Figura 2.2 b) apresenta um solo submetido
ao processo MICP e onde se observa o bio-cimento responsvel pela ligao entre partculas de solo.

a)

b)

Figura 2 2 Esquema ilustrando: a) solo sem tratamento; b) solo tratado por MICP
(Dejong et al, 2010)

Factores que influenciam o comportamento das Bactrias

Descrevem-se de seguida os principais factores que influenciam o comportamento das bactrias e por
consequente a produo de bio-cimento.

pH

Segundo Stocks-Fischer (2009), o pH ptimo para se atingir a mxima actividade da enzima urease
situa-se entre os 7.5 e os 8. No entanto com um pH de 9 a enzima consegue ainda executar o seu
trabalho embora com nveis de rendimento inferiores.
Outros autores como Alvarado (2010), consideram que o melhor intervalo para se ter condies
perfeitas para a produo de calcite entre 8,5 e 9,3. Sendo o pH ptimo de 9 ou 9,25.
Embora o facto de o Amnio contribuir para o aumento do pH, o dixido de carbono libertado pela
hidrlise da ureia e pela respirao dos microrganismos tende a baixar esse valor. por isso necessrio
encontrar um equilibro que mantenha o pH ptimo. Tarefa que nem sempre fcil.
Por fim, importante mencionar que a maior parte dos solos nacionais tem pH cido e por este motivo
importante juntar no meio nutriente algo que consiga elevar o pH do solo, e fornecer condies
satisfatrias para as clulas viverem. Por exemplo adicionar Acetato de Clcio pode ser uma boa
soluo.

Temperatura

Este tipo de Bactrias capaz de viver a temperatura ambiente, no entanto quando a temperatura
chega aos 30C que estes microrganismos atingem o pico da sua actividade.
Quando se trata da enzima urease, esta alcana a sua actividade mxima quando a temperatura se
encontra perto dos 60C. evidente que este tipo de temperatura no atingvel in situ, o que atrasa o
processo de precipitao de calcite.
A injeco do meio nutriente a temperaturas elevadas pode constituir uma soluo para o aumento da
temperatura do solo (Jacobson, 2009).

Quantidade de ureia e cloreto de clcio introduzidos por injeco

Vrios autores estudaram o efeito do aumento da concentrao dos reagentes (ureia + cloreto de clcio)
na produo de calcite.
Wei-Soon Ng et al. (2012), entre muitos outros, concluram que para iguais intervalos entre injeces, as
solues de alimento com nveis menos elevados de ureia (0,25M) e de cloreto de clcio contribuam
para uma melhor e mais homognea produo de calcite.

A razo pela qual isto acontece, consiste no facto dos sais de clcio causarem um aumento da salinidade
da soluo. Foi provado que elevados nveis de salinidade tm um efeito inibidor na actividade
bacteriana e por consequente na produo de calcite.
No entanto, para elevados nveis de salinidade a enzima urease consegue ainda realizar a sua funo
mas produz quantidades de calcite que no so satisfatrias.
Em concluso, o aumento da concentrao dos reagentes no solo (a partir de 1M) no aumenta a
produo de calcite. Foi demonstrado que para uma menor concentrao de reagentes existe uma
distribuio mais homogenia de calcite nos contactos entre partculas de solo. Assim possvel obter um
ganho de resistncia.

Nutrientes

Os nutrientes que existem no solo no so suficientes para que as bactrias tenham boas condies de
vida e executem a sua funo.
por isso fundamental a injeco no solo de nutrientes suplementares como o dixido de carbono
(CO2), o azoto (N), o fsforo (P), o potssio (K), o magnsio (Mg), o clcio (Ca), o ferro (Fe), etc.

Granulometria

Existe a necessidade de se encontrar compatibilidade entre o tamanho dos microrganismos e dos vazios
entre partculas de solo. O objectivo assegurar que as bactrias se consigam deslocar facilmente e
garantir uma produo de calcite homognea.
por esta razo que que o tratamento de solos siltosos e argilosos por bio-cimentao no vivel. (Al
Qabany et al., 2012)

Competio com organismos nativos

H diversos organismos a viver no solo, assim como pequenas quantidades de bactrias Bacillus
pasteurii. No entanto, importante garantir que as clulas Bacilius pasteurii so injectadas em
quantidades suficientes para ocuparem o solo e fazerem face aos organismos nativos. Caso contrrio, o
solo permanece dominado por esses organismos e as bactrias capazes de hidrolisar a ureia no
conseguem exercer a sua funo.

2.2 Estudos Sobre a Bio-Cimentao como Tcnica de Melhoramento

de Terrenos
Existe cada vez mais a preocupao de se encontrar tcnicas mais amigveis para o ambiente, para fazer
face as usuais tcnicas de estabilizao de solos.
A bio-cimentao uma tcnica natural e apresentada como no tendo qualquer impacto negativo
para o ambiente. por esta razo que diversos autores tm vindo a estudar este processo com o
objectivo de optimizar o mtodo e posteriormente poder aplic-lo a grande escala.

2.2.1 Ensaios Laboratoriais

Esta tese foi baseada em inmeros artigos que descrevem os seus trabalhos experimentais. A
constituio do meio e do lquido nutriente, assim como todos os factores que influenciam o bom
funcionamento das clulas no processo MICP, foram retirados principalmente de quatro artigos
apresentados no Quadro resumo 2.1. Estes artigos so referentes a ensaios laboratoriais tambm
realizados em areias.
As letras que se encontram no Quadro resumo 2.1 correspondem cada uma a um artigo. O nome dos
artigos e os seus autores so os seguintes:

Artigo A: An overview of the factors affecting microbial-induced calcite precipitation and its
potential application in soil improvement (Ng. et al., 2012)

Artigo B: Factors affecting efficiency of microbially induced calcite precipitation( Al Qabany et

al.,2012)

Artigo C: Effect of chemical treatment used in MICP on engineering properties of cemented

soils. (Al Qabany et al. 2013)

Artigo D: : Dynamic response of liquefiable sand improved by microbial-induced calcite

precipitation (Dejong et al., 2012)

Em todos os estudos realizados sobre a tcnica MICP, o princpio sempre o mesmo e consiste em
introduzir as bactrias no solo e depois injectar nutrientes para permitir que as bactrias se mantenham
vivas e que consigam produzir bio-cimento. O solo a tratar sempre de natureza arenosa mas o
tamanho das partculas, volume de solo, a concentrao em ureia e CaCl 2 da soluo de alimento e o
intervalo entre injeces podem ser alguns dos factores que variam de caso para caso.
No artigo A, foram testadas amostras do mesmo solo arenoso mas compactado de forma a obter trs
densidades diferentes (densidades utilizadas: 85% MDD (Maximum Dry Densitity), 90% MDD, 95% MDD,
3

MDD=1563 Kg/m ). Os provetes realizados neste ensaio tinham um dimetro de 50mm e 150mm de
altura, o solo arenoso foi devidamente misturado com o meio bacteriano e colocado nos moldes antes

do ensaio comear. Como se apresenta no Quadro resumo 2.1 foi injectado lquido nutriente todas as
6h e a durao total do ensaio foi de 48h. Aps o ensaio as amostras foram submetidas a um ensaio de
compresso para quantificar o ganho de resistncia obtido atravs do tratamento MICP. A fim de avaliar
a real capacidade das bactrias em aumentar a resistncia dos solos arenosos, foram igualmente
realizados ensaios semelhantes em provetes sem bactrias. Nestes, o solo foi apenas misturado com a
soluo de alimento e os provetes foram submetidos s mesmas condies e alimentados durante o
mesmo intervalo de tempo que os provetes que continham bactrias.
Aps o ensaio verificou-se que o aumento da resistncia devido ao processo MICP proporcional ao
aumento da densidade das amostras, ou seja quanto mais densa a amostra melhor ser o efeito do
tratamento de bio-cimentao e por consequente consegue-se atingir resistncias mais elevadas.
Por outro lado, constatou-se que nas amostras onde no foram introduzidas bactrias existe igualmente
um aumento da resistncia quando comparadas com amostras submetidas a nenhum tipo de
tratamento, apenas solo e gua. No entanto, a resistncia das amostras apenas tratadas com lquido
nutriente significativamente inferior resistncia das amostras tratadas com bactrias.
No artigo B, foram realizadas amostras com partculas de solo com dimenses diferentes que
correspondem aos solos das classes D e E da classificao inglesa (British standard grades D e E). A classe
D corresponde a uma areia siltosa com granulometria extensa bem graduada (d50=165m, d90=250m,
porosidade n= 0.37) e a classe E corresponde a uma argila siltosa tambm com granulometria extensa
bem graduada (d50=140m, d90=150m, porosidade n=0,44). O solo previamente misturado com
bactrias foi introduzido em moldes cilndricos com um volume de 100ml. Neste estudo foram
efectuados ensaios com duas variveis: o tempo entre injeces de lquido de alimento e a quantidade
de Ureia e de CaCl2 (0,1M; 0,25M e 0,5M) presentes da soluo de alimento. O objectivo era encontrar a
combinao ptima entre a concentrao qumica do lquido de alimento e o tempo entre injeces.
Aps vrios ensaios conclui-se que no existe nenhuma diferena muito significativa entre os resultados
obtidos com a granulometria D e a granulometria E e que a relao ptima entre o tempo entre
injeces e a concentrao de ureia e de CaCl2 na soluo de alimento de 0,042mol/L/h.
O artigo C a continuao do estudo iniciado por Al Qabany et.al. em 2012 (artigo B) e por isso decorre
nas mesmas condies. Neste estudo foram realizados ensaios de permeabilidade e de compresso com
o objectivo de avaliar o efeito da concentrao qumica (0,1M a 1M de Ureia e CaCl2) do lquido de
alimento na permeabilidade e na resistncia dos provetes. Verificou-se que existe uma rpida
diminuio da permeabilidade quando se utiliza uma soluo com uma forte concentrao de Ureia e
CaCl2 ao contrrio do que acontece quando se utiliza uma soluo com menores concentraes desses
elementos. No entanto, se as injeces forem feitas com um lquido de alimento com nveis mais baixos
de Ureia e CaCl2 consegue-se uma distribuio mais uniforme de bio-cimento e por consequente uma
reduo mais uniforme da permeabilidade. Por outro lado, observou-se que ao se realizar injeces

10

mais frequentes e com uma soluo de alimento menos concentrada em Ureia e CaCl 2 consegue-se
atingir resistncias mais elevadas e provetes mais homogneos.
No artigo D, as amostras compostas por solo (d50=0,22mm) e bio-cimento, foram submetidas a um
ensaio em centrifugadora com o objectivo de se avaliar o potencial de liquefaco do solo arenoso.
Assim como nos outros artigos foram retiradas deste estudo informaes importantes sobre o
procedimento biolgico, a constituio do meio e do lquido de alimento bem como os principais
cuidados a ter com as bactrias (Quadro resumo 2.1 e seco Factores que influenciam o
comportamento das bactrias deste captulo).
Como foi referido, nos artigos B e C foram testadas vrias concentraes de ureia e de cloreto de clcio
presentes na soluo de alimento para vrios tempos entre injeces. As setas ilustradas no Quadro
resumo 2.1 indicam para cada concentrao qual o correspondente tempo entre injeces.

11

Quadro 2 1 Quadro resumo da informao retirada de estudos anteriores sobre o processo MICP

MEIO BACTERIANO
Componentes

Concentraes/
Densidades

SOLUO DE ALIMENTO (Liquido com Nutrientes)

pH

T(C)

Durao do
crescimento

Nutrientes

Concentrao
Ureia e Cloreto de
Clcio

Tempo entre
Injeces

Durao

Modo de Injeco

48h

Percolao: Colocar o
fluido no topo do
provete e deixar que
este se infiltre.
(Amostra Saturada)

3g/L :
A

---

20g extracto de
levedura
10g (NH4)2SO4
20g agar in 0.13M
Tris buffer

5x10 cells/ml

---

37

---

-10g NH4CL
-2.12g
NaHCO3

0.25M
(Ureia + CaCl2)

6h

10 injeces.
3g/L :
600nm (OD600)
9

0.8-1.2 x10
clulas/ml

30

24h-28h

-10g NH4CL
-2.12g
NaHCO3

0.25M
(Ureia + CaCl2)

6h, 12h, 24h e 2dias

6h, 24h

10 injeces

3h

10 injeces

Percolao

0.5M
(Ureia + CaCl2)
0.1M
(Ureia + CaCl2)

20g extracto de
levedura
10g (NH4)2SO4
20g agar in 0.13M
Tris buffer

600nm (OD600)

3g/L :

0.8-1.2 x10
clulas/ml

---

24h-36h

-10g NH4CL
-2.12g
NaHCO3

0.25M
(Ureia + CaCl2)
0.5M
(Ureia + CaCl2)
1M
(Ureia + CaCl2)
0.1M
(Ureia + CaCl2)

6h
12h

---

---

24h
3h

600nm (OD600)
D

---

---

0.8-1.2 x10
clulas/ml

12

---

40h

---

0.5M CaCl2
+ 1M ureia

4-6h

---

Percolao

2.2.2 Tratamento in situ

At hoje apenas se tem conhecimento de dois casos prticos onde foi possvel transpor o que foi feito
em laboratrio para uma escala muito maior.
Apresenta-se de seguida os dois casos prticos realizados a grande escala

2.2.2.1 Caso de Estudo 1

O primeiro caso descrito por Van Passen et.al (2010) e foi realizado na Holanda.
3

O ensaio consistiu em tratar 100m (8m x 5.6m x 2.5m) de solo arenoso (d50=0,166mm, d60/d10=1.64mm)
com recurso a esta nova tcnica. O processo teve durao total de 16 dias, as bactrias e o lquido de
alimento, que fornece os nutrientes necessrios para a sobrevivncia das bactrias (seco 3.3 do
captulo 3), foram introduzidos no solo a baixa presso atravs de trs poos de injeco representados
esquerda como se pode observar na Figura 2.3. O lquido de purga foi extrado durante o ensaio por
bombas localizadas no interior de trs poos de extraco localizados direita e ilustrados na Figura 2.3.
Os poos de injeco e de extraco so de PVC com 5mm de espessura e com 30cm de dimetro. As
setas desenhadas na Figura 2.3 indicam o sentido do escoamento do lquido de alimento. Os trs poos
de injeco, assim como os de extraco, encontram-se afastados entre si de 1m e do limite do aterro
de 1,5m. A distncia percorrida pelo fluido de 5m (Van Paassen et al.,2010). No se encontra
especificado no artigo nem a quantidade nem a frequncia com que o lquido de alimento introduzido
no solo.

Poos de Injeco:
para em primeiro
lugar introduo das
bactrias no solo e
depois injeco do
lquido de alimento

5m

Poos de
Extraco de
purga

Figura 2 3 Esquema do ensaio a grande escala realizado por Van Passen et al.,2010

Depois do tempo previsto para o tratamento procedeu-se escavao do solo. O aspecto do aterro
apresenta-se na Figura 2.4 onde se observa que houve uma real solidificao do solo e que solo passou a
ter um aspecto rochoso. Durante o tratamento MICP foi realizado um ensaio de reflexo ssmica para
avaliar o ganho de resistncia durante o tempo, aps o tratamento efectuou-se um ensaio de
compresso simples para quantificar a resistncia obtida. Os resultados obtidos por estes autores foram

13

bastante positivos visto que 40m ficaram visivelmente mais resistentes devido unio das partculas de
solo atravs de calcite formada pelas bactrias.

Figura 2 4 Aterro aps 16 dias de ensaio, (Leon A. Van Passe net al., 2010)

No entanto, a distribuio de bactrias e, por consequente, a localizao do carbonato de clcio (CaCO3)

responsvel pelo aumento de resistncia do solo pouco previsvel. Um dos principais obstculos a ser
ultrapassado no processo MICP referido por vrios autores e verificado ao longo desta dissertao o
problema da heterogeneidade em termos de resistncia (Van Paassen et al.,2010).

2.2.2.2 Caso de Estudo 2

O segundo caso descrito por Gomez et.al. (2013) e foi realizado na provncia de Saskatchewan no
Canad.

O ensaio consistiu em tratar quatro lotes, cada um com dimenses de 2,4m x 4,9 m e 30m de
profundidade, como se observa na Figura 2.5. Como no estudo realizado por Al Qabany (2012)
apresentado na seco 2.2.1 deste captulo, em cada lote foram testadas diferentes concentraes de
Ureia e de CaCl2 presentes na soluo de alimento introduzida no solo todos os dias para fornecer os
nutrientes s bactrias. Dos quatro lotes utilizados para o ensaio, um deles serviu de controlo, ou seja
durante o ensaio apenas foi introduzida gua no solo.

14

4 Lotes

Figura 2 5 Lotes submetidos ao tratamento MICP, dimenso de um

lote 2,4m x 4,9m x 30m (Gomez et.al. , 2013)

Com o objectivo de optimizar a tcnica, o tratamento foi efectuado em cinco sries idnticas de quatro
dias em que no primeiro dia de cada srie foi introduzido no solo bactrias e nos outros trs dias foi
apenas introduzido o liquido com os nutrientes (uma srie: 1dia=introduo de bactrias, 2,3 e 4
dia= introduo de nutrientes) O ensaio teve portanto uma durao total de 20 dias.
Em cada dia, foi injectado de maneira uniforme em cada lote, com recurso a uma mangueira, um
volume de 378,5l de meio bacteriano ou de nutrientes conforme o dia de tratamento.
Aps o tratamento MICP, foram retiradas 20 amostras correspondentes a 20 localizaes diferentes de
cada lote, com recurso a tubos de ao com 3,2cm de dimetro e 24,5cm de cumprimento.
Nas amostras dos trs lotes que foram tratados com a tcnica MICP, observou-se a presena de uma
crosta superficial cimentada e com uma elevada resistncia, como se mostra na Figura 2.6. A mxima
espessura observada para essa crosta foi de 2,54cm.
No entanto, os resultados do DCP teste (Dynamic Cone Penetration) e do ensaio para quantificar a
quantidade de calcite presente nas amostras, mostram que existe uma melhoria no solo em termos de
resistncia at uma profundidade de 28m.

Figura 2 6 Crosta superficial cimentada e com

uma elevada resistncia observada em lotes
submetidos durante 20dias ao tratamento
MICP (Gomez et.al., 2013)

Verificou-se igualmente que para concentraes mais baixas de ureia e de CaCl2 presentes no lquido de
alimento obtm-se amostras com uma resistncia mais elevada.

15

2.2.3 Principais Aspectos e Dificuldades na Aplicao da Bio-cimentao em

Obra
Como se apresentou na seco 2.2.2, os casos de estudo apresentados comprovam que possvel
utilizar a tcnica MICP a grande escala.
No entanto existem algumas dificuldades a serem ultrapassadas para se poder aplicar a tcnica em obra.
Como se observa na Figura 2.4 da seco 2.2.2, a principal dificuldade consiste em conseguir obter uma
distribuio uniforme de bio-cimento (calcite) no solo e por consequente a homogeneidade da
resistncia em toda a rea tratada.
De facto, fundamental garantir que as bactrias se encontrem bem distribudas em toda a zona a
tratar e que todas consigam ter acesso ao lquido nutriente que as alimenta. Para isso, necessrio por
em prtica um sistema para esse efeito. Um sistema de injeco disfuncional pode fazer com que as
bactrias fiquem localizadas apenas em algumas zonas, causando problemas de heterogeneidade de
resistncia.
Como as bactrias tm que ser alimentadas pelo menos uma vez por dia, para que o tratamento MICP
seja o mais eficiente possvel necessrio injectar lquido nutriente no solo com frequncia. Esta tarefa
faz com que o tratamento por bio-cimentao seja um processo bastante penoso a grande escala. Existe
por isso a necessidade de se criar um sistema de injeco automtico para esse efeito. A elaborao de
um sistema de injeco automtico adaptvel aos diferentes tipos de obra pode encarecer
significativamente a soluo.
Outros problemas surgem quando se passa de um ensaio em laboratrio para a aplicao em obra.
Como referido anteriormente, a temperatura dever rondar os 30C para as clulas terem um nvel de
eficincia mximo. Garantir que a temperatura do solo permanea a 30 tambm no tarefa fcil.
Constatou-se que o cloreto de amnio tem impactos negativos a nvel ecolgico. H por isso a
necessidade de incluir um mecanismo capaz de retirar essa substncia do solo a grande escala. O
transporte das clulas at ao local da obra tambm pode constituir um problema.
No entanto, embora se possa pensar o contrrio no necessrio garantir que haja condies estreis
na obra para a sobrevivncia das bactrias. Deste modo, reduz-se significativamente o custo desta
soluo.
Em obra, igualmente fundamental que se estabelea um sistema de monitorizao para se conseguir
quantificar o ganho de resistncia no solo. Tal como quando se executam colunas de jet grouting,
importante a realizao de ensaios em troos experimentais para aferir a geometria e o ganho de
resistncia e de rigidez.

16

Um dos mtodos utilizados para monitorizao do processo MICP, e aplicado no caso de estudo
apresentado na seco 2.2.2.1, o mtodo da reflexo ssmica. Os geofones ao serem colocados em
zonas estratgicas podem ajudar a compreender a geometria da zona tratada atravs do contraste da
velocidade de propagao de cada onda ssmica.

2.3 Solues Tradicionais para Melhoramentos de Terrenos

O tratamento de solos uma das usuais tcnicas utilizadas para melhorar as caractersticas resistentes
dos terrenos sem ser preciso recorrer a fundaes profundas. O seu objectivo alterar as caractersticas
do solo, aumentando a sua resistncia e reduzindo a sua deformabilidade (Cristovo, 2014).
Hoje em dia existem diversas tcnicas de tratamento, algumas delas txicas e poluentes como o caso
da injeco de cimento no terreno. A bio-cimentao um tratamento alternativo s usuais tcnicas
utilizadas e a sua principal vantagem ser totalmente natural e no constituir nenhum risco de poluio
para o ambiente.
De seguida, relembra-se algumas das principais tcnicas de tratamento de solos utilizadas nos dias de
hoje. Estas dividem-se em quatro grupos: compactao, consolidao, mistura com ligantes hidrulicos
e reforo. Neste trabalho s se refere a mistura com ligantes hidrulicos pois a que se relaciona
directamente com o tratamento por bio-cimentao. importante referir que existem mais tcnicas de
tratamento de solo que as que se descrevem em seguida, no entanto optou-se por apenas descrever as
principais e que so mais correntes em Portugal (Mitchell e Sardine, A Guide to Ground Treatment,
2012). Assim, s se apresentaro solues em que h introduo de ligantes hidrulicos tal como o
cimento, por exemplo atravs da injeco ou mistura mecnica (jet grouting, deep soil mixing,etc)
A tcnica de injeco ou de mistura de solo com cimento ilustrada na Figura 2.7a), aplicvel a todo o
tipo de solos granulares, no entanto tambm pode ser utilizada em solos coesivos constitudos por
argilas. Neste caso, a resistncia ao corte do solo tem de ser compatvel com a fora do jacto se se
adoptar um sistema de injeco. No caso do jet grouting, o procedimento consiste em introduzir um
jacto de calda de cimento com ou sem gua e ar no terreno com elevada presso. O objectivo
desagregar a estrutura do terreno e misturar as partculas do solo com a calda de cimento.
semelhana do jet grouting, o deep soil mixing (Figura 2.7 b) uma tcnica de melhoramento de solos
atravs da qual o solo misturado com ligantes como por exemplo a cal, o cimento, cinzas volantes etc.
A tcnica consiste em introduzir um eixo rotativo oco capaz de desagregar o solo em profundidade e
formar colunas de um novo material mais resistente composto por solo e ligante. de mencionar que os
ligantes podem ser introduzidos no terreno de forma seca (dry mixing) ou em forma de caldas (wet
mixing) como o caso do jet grouting (Bruce, 2000).

17

A tcnica de jet grouting, ao contrrio da tcnica de deep soil mixing, no necessita de escavao e
muito utilizado quando se trata de tratamento de zonas de difcil acesso pois os equipamentos so
relativamente pequenos e possuem ferramentas especiais de perfurao. Por outro lado, pode reduzir
permeabilidade do solo de forma muito significativa e, dependendo das condies geolgicas e dos
objectivos de cada soluo, pode ser uma tcnica adequada para zonas de sismicidade elevada (Pinto,
2013).
As fases das diferentes tcnicas utilizadas para melhoramento de solos encontram-se ilustradas na
Figura 2.7.

a)

b)

Figura 2 7 Principais tcnicas de tratamento de solo: a) Jet grouting ( Pinto, Fevereiro 2014);
b) Deep soil mixing (Waruna , 2012)

Considerando agora a bio-cimentao, possvel associar esta nova tcnica s solues tradicionais
apresentadas, aumentando-se o leque de solues possveis e procurando reduzir o impacto ambiental
e econmico.
Por exemplo, o tratamento do solo recorrendo bio-cimentao poder evitar a construo de
fundaes profundas, ou poder-se- reduzir a sua quantidade. Acredita-se que em alguns casos o

18

conjunto fundaes superficiais e solo tratado por bio cimentao pode substituir a concepo de
fundaes profundas. Esta passar a ser assim uma soluo mais econmica e menos trabalhosa.
O tratamento do solo com bio-cimentao pode ser adoptado para evitar deslizamento de terras. Pode
ser um modo de estabilizao muito mais vantajoso do que a projeco de beto ou a construo de
muros de suporte de beto ou muros de gabies.
semelhana do que j foi referido, a bio-cimentao tambm pode aplicar-se estabilizao de
taludes. Assim possvel reduzir a necessidade de se utilizar tcnicas estabilizadoras como a colocao
de pregagens e de ancoragens, que como se sabe tm um custo muito oneroso.
Assim, graas a este tratamento inovador para rochas que se desagregam, ou para solos arenosos, em
fundaes, possvel optar por solues mais econmicas para fazer face aos usuais desafios da
Geotecnia.
No entanto, de referir que para situaes difceis em que o solo tem muito pouca resistncia, esta
dever apenas ser uma soluo complementar s outras tcnicas executadas na Geotecnia. Deste modo,
apenas visa reduzir o custo e a dificuldade das solues. Em casos em que o nvel fretico se encontra
elevado poder-se- mesmo ter de recorrer s solues mais rgidas, e por consequente mais caras, para
suportar o elevado impulso hidrosttico.

2.4 Bio-Cimentao VS Solues Tradicionais

Existem diversas vantagens e desvantagens da utilizao da bio-cimentao em relao s tcnicas
usuais aplicadas para melhoramento de solo. Descrevem-se em seguida as principais vantagens e
desvantagens.

2.4.1 Vantagens

Ambiente

A principal vantagem que esta uma tcnica natural que permite aumentar a resistncia e rigidez do
solo sem se necessitar de recorrer escavao ou a substituio, e sem ter impactos negativos no
ambiente.

Permeabilidade

Uma outra vantagem importante tem a ver com a alterao da permeabilidade do solo. Mtodos como
a execuo de cortinas de jet grouting criam barreiras impermeveis que alteram o normal escoamento
da gua. A bio cimentao no reduz totalmente a permeabilidade do solo, o que permite que no haja
alteraes considerveis no ciclo natural da gua e se possa continuar a usufruir de aquferos naturais.

19

Outra vantagem deste processo no alterar significativamente a permeabilidade do terreno consiste em

permitir que a gua circule livremente evitando impulsos hidrostticos elevados.

Custo

Existe igualmente uma enorme discrepncia no custo destas solues. A bio cimentao uma tcnica
mais econmica comparativamente com as tcnicas de substituio. Estudos foram realizados e
concluram que o tratamento por adio de micro organismos custa aproximadamente entre $0.5-$9/
m3 de solo (0,4-7,15), e que as outras tcnicas custam entre $2-$72/ m3 de solo (1,89-57,24)
dependendo do material qumico utilizado e do dimetro e profundidade das colunas executadas. (Ng et
al, 2012)
As bactrias Bacillus pasteurii so conhecidas pela sua resistncia contra agentes qumicos e fsicos.
por este motivo que no existe a preocupao de manter um ambiente estril. Tal necessidade iria
encarecer significativamente a soluo.
Por outro lado, e como j foi referido na seco 2.2.3, existem, todavia, alguns problemas que tem de
ser superados quando se aplica este processo in situ. o caso de haver a necessidade de se realizar um
sistema optimizado de injeco automtica de alimento e de renovao do amnio libertado pela
reaco qumica. Este sistema pode vir a encarecer o projecto.
Manter condies ideais para uma eficincia mxima da actividade bacteriana (temperatura, pH, etc.)
pode igualmente constituir um custo adicional.

2.4.2 Desvantagens
Alguns autores apontam as seguintes desvantagens para esta soluo:

Durao

Problema crucial consiste no facto de esta ser uma tcnica lenta (Al-Thawadi, 2013). Este obstculo tem
muita importncia em obras onde os prazos so sempre reduzidos e onde o factor tempo uma das
principais condicionantes.

Homogeneidade

O tratamento por bio-cimentao torna-se difcil a grande escala e principalmente para grandes
profundidades. complicado injectar lquido nas camadas mais profundas sem se ter de recorrer a
jactos de elevada presso. A utilizao desses jactos pode no ser benfico para as clulas, e ser com
certeza difcil, ou mesmo impossvel, conseguir uma distribuio homognea destes microrganismos no

20

solo e garantir que todos tenham acesso ao lquido nutriente. O problema da profundidade e da falta de
homogeneidade constitui um dos principais desafios a vencer na aplicao da bio-cimentao in situ.
(De Muyncka et al. , 2009)

Resduos

Constatou-se que aps o tratamento permanece uma pelicula superficial com restos biolgicos o que
pode trazer consequncias negativas a nvel ambiental. No melhor dos casos pode apenas constituir
uma poluio a nvel visual e a sua limpeza resultar num custo adicional.

Dificuldade de controlo

Embora se possam utilizar meios geofsicos para aferir a geometria da zona tratada e eventualmente
medir o ganho de resistncia do solo, alguns autores consideram que a impossibilidade de se controlar o
crescimento das bactrias e a formao de calcite in situ um problema crucial.

Falta de dados relativos ao comportamento a longo prazo

Esta ainda uma tcnica muito recente e ainda no existe nenhum exemplo de aplicao prtica com
idade suficiente para estudar a durabilidade do tratamento. fundamental que se estude a resistncia
deste tratamento a longo prazo e que se elaborem possveis estratgias de manuteno para impedir
que ocorram acidentes.

2.5 Possveis Aplicaes Geotcnicas da Bio-Cimentao

Apresenta-se de seguida alguns exemplos em que espectvel ser vivel o uso de bactrias em
aplicaes geotcnicas.

Tratamento de barragens de terra e de diques

Uma barragem de aterro uma barragem em que a estrutura essencialmente constituda por solo. O
solo utilizado neste tipo de obra usualmente extrado da rea de implantao da construo. E por
este motivo que, de um ponto de vista ambiental, estas barragens so menos agressivas do que as
barragens em beto.
Numa barragem de aterro homognea, ou seja apenas constituda com um tipo de solo, um dos
principais objectivos conseguir controlar a percolao que ocorre no seu interior.
A percolao pode pr a barragem em perigo provocando eroso na rea de jusante ou afectar a sua
estabilidade devido ao aparecimento de foras de percolao ou formao de zonas ocas.

21

Um dos principais problemas neste tipo de barragens o fenmeno conhecido por piping. O piping
consiste no arrastamento sucessivo de finos para fora do aterro causando um processo de eroso
tubular de maior ou menor dimetro. Este fenmeno pode por em causa a estabilidade deste tipo de
barragens.
A bio-cimentao pode ser uma soluo vivel para este tipo de problemas pois as bactrias
introduzidas no solo podem produzir bio-cimento que colmata os vazios gerados pela eroso. O
carbonato de clcio produzido pelas bactrias tem caractersticas de ligante, e vai unir as partculas do
solo tornando o todo mais resistente e menos permevel. Assim possvel diminuir o processo de
arrastamento de finos e impedir que ocorra o piping que pe em causa a segurana da barragem e de
tudo que a rodeia. Alm disso, a tcnica MICP tambm pode ser usado para selar zonas onde o piping
comece a ocorrer.
O esquema de uma barragem homognea apresentado na Figure 2.8.

Figura 2 8 Barragem Homognea (Rocha et.al., 2014. FSP)

A bio-cimentao tambm pode ser uma tcnica possvel para a reparao de diques. Devido ao
acrscimo de resistncia pode-se eventualmente minimizar os impactos negativos devido a enchentes e
tempestades no mar. Uma das vantagens que graas tcnica MICP pode se utilizar solo granular para
a concepo de diques sem ter de recorrer a beto.
O esquema de um dique apresentado na Figura 2.9.

22

Figura 2 9 Diferentes tipos de Diques (Castilha, 2009)

Reduo do potencial de liquefaco

A liquefaco mais um dos problemas frequentes que ocorre na Geotecnia. Pode provocar o
assentamento e, por consequente, o colapso de diversas estruturas.
Este um fenmeno complexo que leva perda repentina de resistncia e rigidez por parte dos
materiais granulares saturados.
O mecanismo causado pela presena de vibraes devido a sismos ou a detonaes.
H muitos anos que este fenmeno tem vindo a fazer numerosos estragos na superfcie terrestre. Como
por exemplo, o sismo de magnitude entre 8,3 e 8,5 na cidade de Anchorage no Alasca (1964) provocou
um nmero muito elevado de danos. Este sismo hoje um dos mais estudados nos Estados Unidos da
Amrica por ser um dos mais representativos dos danos provocados pela liquefaco (Andrade Abreu,
2012). Este um problema que diz respeito no s a muitos outros pases como tambm a Portugal
devido a sua forte sismicidade. Existe portanto a preocupao de se encontrar solues eficientes que
visam a diminuir os estragos provocados pelos sismos devido a liquefaco.
Novamente, a bio-cimentao pode constituir uma dessas solues aumentando a resistncia do solo
atravs de coeso e, porque h colmatao dos vazios com o bio-cimento, as probabilidades de se
gerarem presses intersticiais elevadas so muito reduzidas.
A Figura 2.10 mostra o aspecto de um solo depois de ocorrer o processo de liquefaco e a Figura 2.11
esquematiza o fenmeno.

23

Figura 2 10 Liquefaco (Gomes, 2013)

Figura 2 10 Esquema representando o processo de Liquefaco

(Gomes, 2013)

24

Capitulo 3 Procedimento Experimental - Biologia

3.1 Introduo
As bactrias utilizadas neste estudo tm o nome de Sporosarcina pasteurii mas so mais conhecidas por
Bacillus pasteurii. Estes micro-organismos so ubquos na natureza, ou seja, podem ser encontrados em
qualquer parte e so totalmente inofensivos para a sade humana. A sua principal caracterstica terem
a capacidade de hidrolisar a ureia. por este motivo que so fundamentais no processo da biocimentao, pois so o motor da reaco qumica que produz calcite. a calcite que serve de ligante
para as partculas do solo e o torna mais resistente.
Como j foi referido no captulo 2, as B. pasteurii so bastante resistentes a agentes qumicos e fsicos.
Sendo assim, podem ser aplicadas em ambientes abertos sem haver a preocupao de as manter
isoladas e numa envolvente estril.

3.2 Crescimento
As bactrias B. pasteurii vm liofilizadas, ou seja desidratadas, de uma entidade chamada ATCC
(American Type Culture Collection) e necessrio que sejam cultivadas vrias vezes at se encontrarem
nas condies desejadas. Nessa altura, realizam-se bancos de clulas que so posteriormente
congelados numa cmara a -80C para que as clulas no percam as suas propriedades.
O processo de crescimento destes microrganismos moroso e imprevisvel.
Um mtodo para quantificar o crescimento de populaes de microrganismos a medio da DO600nm
(densidade ptica lida a 600 nm) da cultura celular. Existe uma proporcionalidade entre a densidade
ptica e o nmero de clulas presentes na cultura que constante para uma determinada espcie de
bactria crescida em condies definidas.
A curva de crescimento de B. pasteurii em 20 mL de meio NH4-YE em balo Erlenmeyer de 100 mL, a
37C e com uma agitao orbital de 100 rpm (rotaes por minuto) apresentada na Figura 3.1.
Para a elaborao desta curva, procedeu-se ao normal crescimento das clulas que passa por trs fases
mais ou menos definidas: fase de latncia (neste caso ausente), fase exponencial e fase estacionria
medindo-se a DO de hora em hora com o objectivo de se identificar as diferentes fases do crescimento
populacional e assim identificar o tempo necessrio para produzir as bactrias na fase pretendida para
serem adicionadas ao solo.

25

Curva de crescimento

DO 600nm

10

0.1
0

Tempo (h)

Figura 3 1 Curva de crescimento de Bacillus pasteurii

A curva traduz que s aps quatro horas que se consegue chegar a uma DO de 1 que corresponde ao
final da fase exponencial. Este valor corresponde a um valor de referncia para as bactrias estudadas,
que foi identificado em vrios artigos que se encontram indicados no Quadro 2.1. Indica que as
bactrias encontram-se na quantidade desejada e mais importante em condies fisiolgicas para
poderem exercer a actividade pretendida. Depois dessas quatro horas, as clulas entram na fase
estacionria onde comeam a perder as suas caractersticas e podem deixar de ser funcionais.
Como para o tipo de ensaios de bio-cimentao a realizar neste trabalho so necessrias quantidades de
clulas elevadas, o processo de crescimento destes microrganismos leva aproximadamente trs dias
pois necessrio um aumento sequencial de volumes e ser descrito detalhadamente na prxima
seco.
Alguns aspectos tem de ser tidos em conta no crescimento das clulas e a utilizao de equipamentos
como o espectrofotmetro (Figura 3.2a), o autoclave (Figura 3.2b), e uma incubadora com agitao
orbital (Figura 3.2c) fundamental para o desenvolvimento dos microrganismos.
O espectrofotmetro apresentado na figura 3.2a o equipamento utilizado para se medir a DO ao longo
de todo o processo de crescimento celular. Este instrumento capaz de medir a radiao transmitida ou
absorvida por uma soluo e desta forma quantificar as clulas presentes num determinado meio.
importante mencionar que para efectuar o crescimento de B. pasteurii todos os meios de cultura
devem ser esterilizados e que a manipulao desses meios e dos utenslios necessrios deve ser feita em
condies de assepsia para evitar contaminao por outro tipo de microrganismos. A esterilizao
realizada num autoclave (Figura 3.2b) e conseguida atravs de calor hmido (121C) sob presso
durante 20min.

26

A incubadora com agitao orbital (Figura 3.2c) o equipamento onde o crescimento bacteriano
efectuado pois permite manter a temperatura e a agitao necessria para o bom desenvolvimento das
clulas.

b)

a)

c)

Figura 3 2 a) Espectrofotmetro para medir a DO (Densidade ptica) ; b) Autoclave para esterilizar meios e utenslios; c)
Incubadora com agitao orbital utilizada no crescimento das bactrias

3.2.1 Procedimento
Apresenta-se de seguida o processo detalhado do crescimento das bactrias B. pasteurii para um
elevado volume.
Dia 1:
As bactrias encontram-se congeladas numa cmara a -80C e o primeiro passo consiste em passar 50l
de clulas para um tubo de 15 ml de plstico tipo falcon (ver figura 3.3b) com 5 ml de meio de cultura
(pr-inculo). O pr-inculo foi preparado em quintuplicados para providenciar clulas suficientes para
o inculo, uma vez que se desconhecia a quantidade exacta de clulas a utilizar no inculo.
1L de meio composto por:

20g extracto de levedura

10g (NH4)2SO4 (Sulfato de Amnio)

0,13M Tris (pH=9)

importante referir que os diferentes constituintes do meio tm de ser autoclavados separadamente,

caso contrrio precipitam alterando significativamente a concentrao dos nutrientes em soluo.
(Figura 3.3a)
Os clculos efectuados para se se produzir 100ml de meio encontram-se em anexo.

27

b)
a)
Figura 3 3 a) Constituintes do meio de cultura autoclavados separadamente ; b) Falcon com volume de 15ml

Os falcons inoculados com clulas (pr-inculos) so colocados numa incubadora com agitao orbital a
uma temperatura de 37C e uma agitao de 100rpm. Os pr-inculos so deixados durante a noite
(overnight) para que no dia seguinte se consiga uma quantidade de bactrias suficiente para iniciar o
crescimento num volume de meio de cultura maior.
Dia 2:
no segundo dia que se realiza o passo intermdio (inculo) que consiste em inocular um balo com
20ml de meio.
Em primeiro lugar necessrio medir a DO (quantidade de clulas) presentes nos 5 pr-inculos que
ficaram overnight na incubadora. Para tal, junta-se o contedo dos 5 falcons e mede-se a DO. De
seguida faz-se as contas para se determinar o volume de clulas do pr-inculo a introduzir no balo de
20ml (inculo) para que o inculo se inicie com uma DO de 0,1.
DOi x Vi = DOf x Vf

Ci x Vi = 0,1 x 20ml

Nota : DOi corresponde DO medida no incio do segundo dia. V i corresponde ao volume de clulas que
necessrio introduzir num balo com 20ml de meio para que o crescimento das bactrias comece com
uma DO de 0,1.
Exemplo:

Para DOi=1,5

Vi = 1,33ml

Assim, inocula-se um balo de 20ml e pe-se novamente as clulas a crescer na orbital.

Sem este passo intermdio o tempo para as bactrias crescerem num balo de 200ml de meio seria
muito elevado e mais susceptvel a contaminaes.
Dia 3:
No terceiro dia executa-se exactamente o mesmo procedimento que no segundo dia mas desta vez os
clculos so realizados para se inocular um balo com 200ml de meio (cultura celular ou crescimento).

28

DOi x Vi = DOf x Vf

DOi x Vi = 0,1 x 200ml

Deixa-se crescer as bactrias at atingirem uma DO de 1. Aps a DO ter atingido esse valor considera-se
que as clulas tm as propriedades necessrias para exercer a sua funo e esto prontas a utilizar.
Nesta altura j no existe a preocupao de manter as bactrias num ambiente estril pois j esto em
quantidade suficiente para que outros microrganismos que possam contaminar a cultura sejam capazes
de competir com as bactrias de interesse (B. pasteurii). No entanto, necessrio mencionar que todos
os procedimentos anteriores tm de ser realizados numa cmara de fluxo laminar, ou seja uma cmara
onde o ar filtrado esterilmente. (Figura 3.4a) As quantidades so medidas de forma precisa usando
uma pipeta, tal como mostra a Figura 3.4b.

b)
a)
Figura 3 4 a) Cmara de fluxo laminar ; b) Manipulao na cmara de fluxo laminar com uma pipeta

3.3 Soluo de alimento

Para conseguir-se manter as bactrias vivas e fisiologicamente activas (capazes de produzir urease)
necessrio fornecer-lhes nutrientes. Neste caso os nutrientes so a Ureia e o Cloreto de clcio que so
os necessrios para a formao do carbonato de clcio (reaco qumica no capitulo 2 seo 2.1).
Segundo vrios autores indicados no Quadro resumo 2.1, a soluo de alimento, ou de injeco,
composta pelas seguintes quantidades de nutrientes:

0,5M de Ureia

0,5M de Cloreto de Clcio ( CaCl2)

Meio de cultura diludo (1:10 ) :

2g/l de extracto de levedura

1g/l (NH4)2SO4 (Sulfato de Amnio)

10g de NH4Cl (Cloreto de Amnio)

2,12g de NaHCO3 (Bicarbonato de Sdio)

29

Exemplo: Para se produzir 1L de soluo as quantidades necessrias so:

-

30,03g de Ureia

55,4g de Cloreto de Clcio

2g de extracto de levedura

1g de Sulfato de Amnio

10g de Cloreto de Amnio

2,12g de Bicarbonato de Sdio

Perfazer at 1L com gua destilada

Os clculos realizados para se chegar a estas quantidades encontram-se em anexo.

30

Capitulo 4 Procedimento Experimental-Geotecnia

4.1 Introduo
A montagem dos provetes passou por um processo de tentativa e erro composto por quatro etapas. Em
cada fase tentou-se optimizar o sistema de drenagem e de descofragem .
Ao longo de todo o estudo foram montados provetes de solo com meio de cultura com bactrias e solo
com meio de cultura sem bactrias (provetes de controlo). Posteriormente montaram-se provetes com
solo e uma fraca dosagem de cimento, assim como provetes apenas com solo e gua. O objectivo destes
ltimos era comparar resultados e avaliar a resistncia obtida atravs do processo MICP
comparativamente com a obtida em solos tratados com cimento ou devido apenas a suco.

4.2 Caracterizao do Solo

O solo estudado uma areia recolhida a uma profundidade entre 0.5 e 14m, e que foi usado noutros
trabalhos a decorrer no IST. primeira vista parece ter granulometria quase uniforme e estar
praticamente seco (teor em agua, w=0,53%). Este solo caracteriza-se por ter pH neutro (pH=7),
densidade de partculas Gs= 2,64 e por ser no plstico.
Efectuou-se um ensaio de permeabilidade com o permemetro descrito por Barbedo (2013) e cuja
fotografia apresentada na figura 4.1. Os resultados obtidos apresentam-se no Quadro 4.1. O valor
-5

mdio do coeficiente de permeabilidade saturado Kmed= 5.1x10 m/s. Este valor coerente com os
valores medidos para areias siltosas. de referir que os valores do Quadro 4.1 foram corrigidos para ter
-7

em conta a permeabilidade das pedras porosas (kpedras=10 m/s, com 0,48cm de espessura).

Aplicador de presso

Interface
Permemetro

Figura 4 1 Equipamento de Laboratrio (Barbedo, 2011)

31

Quadro 4 1Valores obtidos no ensaio de Permeabilidade

Q(cm/s)

0,506

0,493

0,506

v(cm/s)

0,025

0,025

0,025

v(m/s)

0,00025

0,00025

0,00030

u(KPa)

100

100

100

500

505
-7

keq(m/s)

5,16x10

ksolo(m/s)

8,9x10

-5

510
-7

4,98x10
1,1x10

-5

-7

5,10x10

-5

3,6x10

O tratamento por MICP apenas vivel em areias pela simples razo de que este solo muito
permevel e possvel obter vazios com dimenses maiores. Por consequente, os nutrientes podem
circular livremente e h mais espao para as bactrias crescerem e eventualmente se deslocarem.
Por exemplo, bactrias com um tamanho compreendido entre 0,3 e 2m podem circular livremente em
solos com partculas com tamanho entre 0,05 e 2mm. Segundo alguns autores, uma elevada
percentagem de finos no solo ter um efeito inibidor da distribuio quase uniforme de bactrias e de
nutrientes no terreno podendo pr em causa o processo de bio-cimentao (Ng, 2012).
Para se determinar em que tipo de granulometria o processo de bio-cimentao mais eficaz,
decidiu-se efectuar o ensaio com dois tipos de granulometria diferentes. Primeira, designada por G1,
caracteriza-se por ter granulometria quase uniforme e partculas com dimetros entre os 0,075mm e
0,425mm (#200<D<#40). A segunda granulometria, designada por G2, caracteriza-se por ser bem
graduada com partculas de dimetro inferior a 4,75mm (D<#4) e com cerca de 12% de finos. As
correspondentes curvas granulomtricas so apresentadas na Figura 4.2.

% acumulada de material passado

100
90
80
70
60
50

G1

G2

40
30
20
10
0
0.01

0.1

1
Dimetro (mm)

10

Figura 4 2 Curvas granulomtricas dos solos tratados

32

100

4.3 Montagem dos Provetes

4.3.1 Quantidades e Procedimento de Montagem

4.3.1.1 Clculos Iniciais
3

Admite-se que o solo possui um peso volmico seco correspondente a d=17.89 kN/m por ser prximo
dos valores encontrados in situ para este tipo de solos. (Neri, 2013)
Para os diferentes ensaios, foram montados provetes em moldes com dimetro de 3,24cm e altura de
9,72cm. Estes so de PVC e tm uma espessura de aproximadamente 2mm. de mencionar que os
moldes encontram-se colados a uma base de azulejo e tm um furo a 3cm da base, onde foi introduzido
um tubo dreno de silicone com 6mm de dimetro. Utilizaram-se umas pinas metlicas para regular a
saida dos fluidos de purga. O esquema resumo dos provetes montados encontra-se ilustrado na Figura
4.3, o sistema de drenagem ilustrado nesta figura ser detalhadamente descrito mais a frente neste
captulo (seco 4.3.2).

LEGENDA:
1- Pastilha de l de vidro (Figura 4.5)
2- Rede de PVC (Figura 4.5)
3- Pastilha de l de vidro perfurada ou
rede metlica (Figura 4.5 ou 4.6)
4- Tubo de silicone para purga
5- Solo
6- Lquido de alimento
7- Molde em PVC
8- Azulejo
9- Papel de filtro

Figura 4 3 Corte vertical esquemtico dos provetes montados com ilustrao do sistema de drenagem

Numa primeira fase, necessrio efectuar-se alguns clculos a fim de se determinar o ndice de vazios e
por consequente o volume de meio bacteriano e alimento a introduzir em cada provete.
Sendo:
d =

w
1+

1+

33

(4.1)

(4.2)

d - peso volmico seco

Com:

w - teor em gua
e - ndice de vazios
n - porosidade do solo
Gs densidade das partculas slidas

Temos que:

d ( kN/m3)

17,89

Dimetro (cm)

3,24

Altura (cm)

6,48

8,24

Area (cm )
3

Vt (cm )

Gs

2,64

w ( kN/m3) 10,00
0,48
0,32
3

53,43

Vv ( cm )

17,22

4.3.1.2 Quantidades Necessrias

O nmero de provetes a preparar dependeu de cada uma das fases de ensaio. Independentemente da
fase, optou-se por realizar um nmero par de provetes. Dos quais, metade contm solo de
granulometria 1 (G1) e desses, metade tem meio bacteriano e a outra metade tem apenas soluo de
controlo, a outra metade idntica, mas o solo tem granulometria 2 (G2).
O objectivo dos provetes de controlo consiste em provar que realmente as bactrias tm um efeito
preponderante na criao de calcite visto que a soluo de alimento contm os ingredientes necessrios
reaco qumica que produz calcite. A vantagem de se usar bactrias que estas catalisam esta
reaco, ou seja, a formao de calcite d-se muito mais depressa com bactrias do que daria somente
com a mistura dos reagentes. Os provetes de controlo so em tudo iguais aos provetes com bactrias, as
injeces de nutrientes so feitas exactamente com a mesma frequncia e as mesmas quantidades. A
nica diferena consiste no facto de no haver a introduo de bactrias.
Sabendo que M = d x Vt, a massa de solo seco a colocar em cada provete de 95,87g.
As quantidades de solo e meio necessrias para o ensaio so as seguintes:
-

Solo: 16 x 95,87g = 1533,92g = 1,5 kg

Meio com bacterias: 17,22ml

Meio sem bacterias: 8 x 20ml = 160ml

mG1 = mG2=

20ml ; 8 x 20ml= 160ml

34

1533,92g
2

= 0,766kg

4.3.1.3 Montagem dos Provetes

Descreve-se em seguida o procedimento experimental definido na montagem dos provetes com
bactrias e de controlo ilustrado sequencialmente nas seguintes figuras.

1
2/ 3*

7a

7b

7c

Figura 4 4 Ilustrao das diferentes etapas do processo de Montagem dos provetes

*As etapas 2 e 3 correspondem mesma fase do processo. No entanto realiza-se o procedimento 2

quando se monta provetes com bactrias e o procedimento 3 quando se monta provetes de controlo.

35

Cada nmero corresponde a uma etapa diferente do processo de montagem e cada etapa encontra-se
cuidadosamente descrita e ilustrada.
1.

Peneirar e pesar as quantidades necessrias de cada tipo de granulometria (Passo 1 da Figura

4.4).

2.

Pesar 0,383kg de cada granulometria e adicionar 80ml de meio com bactrias (Passo 2 da
Figura 4.4).

*
3.

Pesar 0,383kg de cada granulometria e adicionar 80ml de meio sem bactrias (Passo 3 da
Figura 4.4).

4.

Misturar com uma esptula at obter-se um contedo homogneo. Esta etapa muito
importante principalmente no caso da mistura do solo com bactrias. O objectivo que as
clulas fiquem bem espalhadas e se d uma formao quase uniforme de calcite no provete
(Passo 4 da Figura 4.4).

5.

Pesar 115,87g (95,87g de solo + 20g de meio com ou sem bactrias) e colocar em cada provete
(Passo 5 da Figura 4.4).

6.

O processo de compactao feito em quatro partes para que o solo fique bem compacto e se
consiga obter uma altura final de 6,48cm. (2/3 da altura total do molde) (Passo 6 da Figura 4.4).

7.

Aps os provetes finalizados, estes so colocados numa estufa com temperatura constante a
rondar os 30C (Passo 7, a, b e c da Figura 4.4).

4.3.2 Sistema de Drenagem e de Injeco dos Nutrientes

A realizao de um sistema de drenagem eficiente fundamental para o ensaio porque permite que o
lquido de alimento circule nos provetes sem que ocorra arrastamento de finos e que se recolha a purga
no final de cada dia.
Houve vrias tentativas no sentido de o optimizar. O sistema de drenagem escolhido para cada provete
composto por quatro camadas ilustradas na Figura 4.5, descritas da base para o topo:
1.

A primeira camada constituda por uma pastilha de l de vidro com dimetro igual ao
dimetro interior do tubo. A pastilha forrada com papel de alumnio para impermeabilizao
e posteriormente colada base. Como o tubo de drenagem se encontra a aproximadamente
3cm da base, esta primeira camada tem por nico objectivo preencher o vazio e servir de apoio
para o dreno.

2.

A segunda camada composta por uma rede de PVC com malha larga colocada imediatamente
por cima da pastilha. O objectivo criar uma zona de vazio e impedir que a entrada do tubo
dreno fique tapada e por consequente deixe de permitir que haja sada de gua. Esta camada
confere igualmente resistncia e impede que o sistema de drenagem seja esmagado quando se
realiza o processo de compactao do solo. de referir que o tubo fica encaixado na rede.

36

3.

A terceira camada que variou nas vrias etapas. Inicialmente comeou-se por colocar uma
pastilha em quase tudo idntica pastilha de l de vidro da primeira camada. A nica diferena
que foram realizados alguns furos para a tornar ainda mais permevel. O objectivo desta
camada deixar passar a gua mas impedir que haja arrastamento de finos. Permite tambm
que a base do provete fique horizontal e no com alguns desnveis caso contrrio o provete
assentaria na a rede que se encontra por baixo. Posteriormente, substitui-se este material por
uma rede metlica ilustrada na figura 4.6.

4.

Por fim, a ltima camada constituda por papel de filtro com a forma de uma circunferncia
com dimetro igual ao dimetro interior do provete. Um dos objectivos desta camada
complementar a funo da camada de baixo no que diz respeito a impedir que haja
arrastamento de finos. Nos ensaios anteriores constatou-se que fica nos extremos do provete
um depsito branco superficial. Colocou-se por isso papel de filtro no topo e na base com o
objectivo de absorver esses restos provenientes da reaco qumica.

Cada nmero presente na figura 4.5 (a e b) corresponde a uma diferente camada do sistema de
drenagem. Cada camada foi detalhadamente descrita no texto anterior.

1
a)

b)

2
1

Figura 4 5 Ilustrao das diferentes camadas do sistema de drenagem a) Planta b) fotografia

a)
A

b)
A
Figura 4 6 a) rede metlica ; b) Planta do sistema de
drenagem

37

O esquema resumo do sistema de drenagem foi apresentado na Figura 4.3 da seco 4.3.1.1. de
mencionar que se colocou um falcon com 50ml de volume colado ao tubo de silicone (nmero 4 da
figura 4.3). Este serve para a recolha do fluido da purga no final de cada dia. Uma pina metlica
ilustrada na Figura 4.7 foi igualmente colocada no tubo dreno em cada provete com o intuito de se
regular a sada de lquido pois no se pretende que as amostras sequem devido percolao excessiva
do alimento.

Figura 4 7 Esquema de pina

de Mohr

4.3.3 Injeco de Nutrientes

A injeco da soluo que contm os nutrientes necessrios para a sobrevivncia das clulas feita
todas as 24h, conforme os dados retirados de estudos semelhantes e que se descreveram no quadro
resumo do captulo 2.
Os provetes tm uma altura de aproximadamente 10cm e o solo compactado no seu interior de 6,5cm.
A folga que foi deixada serve para que se possa introduzir o lquido de alimento e deixar que este se
infiltre ao longo do tempo. Optou-se por esta soluo, por ser a referida na bibliografia como prefervel
para que haja uma repartio mais homognea dos nutrientes e, por consequente, que todas as
bactrias possam ter acesso ao alimento. Esta igualmente a forma de alimentao que se utiliza in situ.

4.3.4 Descofragem
A descofragem mais uma fase preponderante do ensaio. necessrio que seja eficiente para que os
provetes fiquem intactos para o ensaio de compresso. Caso contrrio, as amostras podem ficar
destrudas neste processo ou ficar fissuradas e no traduzem a verdadeira resistncia quando realizado
o ensaio.
Foram tentados trs procedimentos diferentes. Numa primeira fase tentou-se descofrar as amostras do
molde inteiro, mas este foi um processo pouco eficaz que acabou por destruir a maior parte dos
provetes.
Numa segunda fase decidiu-se fazer um corte lateral no molde com o intuito de facilitar a descofragem.
No entanto o corte lateral ainda no foi suficiente para uma descofragem das amostras eficaz e muitas
delas acabaram igualmente por partir.

38

Finalmente, optou-se por cortar os moldes na vertical ficando com duas metades independentes.
Durante o ensaio as duas metades ficam coladas com fita adesiva e na altura da desmontagem bastou
cortar a fita e separar as metades (Figura 4.8). Desta forma o provete fica praticamente inalterado.
Para facilitar a desmontagem colocou-se leo descofrante nas paredes do molde antes de se iniciar o
processo de montagem dos provetes. Com a experincia compreendeu-se que este leo no afectou a
actividade das bactrias.

Figura 4 8 Sistema de descofragem final corte vertical nos

provetes para se obter duas metades independentes

4.3 Provetes de Solo com Cimento

Sendo um dos principais objectivos desta dissertao comparar a resistncia de solo tratado por biocimentao com o solo tratado com injeco de cimento (por exemplo atravs de jet grouting) tambm
se preparam provetes misturados com uma dosagem conhecida de cimento.
3

Optou-se por escolher uma dosagem de cimento de 150kg/m por esta ser uma dosagem baixa mas
realista. A relao agua/cimento (A/C) de 2,0. bastante elevada para permitir que se consiga uma
mistura homognea do solo e da calda.
Foram concebidas trs amostras idnticas para cada tempo de cura: 3 dias e 28 dias.
Os moldes so idnticos aos utilizados nos ensaios anteriores e a compactao em tudo igual, excepto
que o solo introduzido misturado com cimento e no com bactrias, e no h a necessidade de se
introduzir um sistema de drenagem na base.
Os resultados apresentados no Quadro 4.2 tm em conta 8% de desperdcio e correspondem
montagem de um provete de solo com cimento. Foi usada gua da torneira.

Quadro 4 2 Quantidades necessrias para a montagem do provete com cimento

Dosagem
150kg/m

Massa de solo (g)

Massa de cimento (g)

Massa de Agua (g)

Massa total (g)

86,8

8,7

17,4

112,9

39

Aps a montagem dos provetes, estes foram submersos em gua para a cura. Foram descofrados ao fim
de trs dias e mantidos submersos caso os ensaios fossem realizados para tempos de cura superiores a
trs dias.

4.4 Provetes de Solo com gua

Com o objectivo de quantificar a resistncia devido ao fenmeno de suco e comparar esses valores
com a resistncia obtida atravs do processo MICP, procedeu-se montagem de provetes apenas com
solo e gua. A compactao foi feita de forma idntica apresentada na seco 4.3.1.3 excepo que
os provetes so constitudos apenas por solo e gua.

40

Capitulo 5 Ensaios e Resultados

5.1 Resumo dos Ensaios
O trabalho desenvolvido no mbito desta tese decorreu em quatro fases, realizadas com o propsito de
compreender e optimizar o processo de montagem e de ensaio dos provetes. Foi necessrio este
processo visto tratar-se da primeira vez no IST que se tenta aplicar a tcnica de bio-cimentao para
melhoramento de terrenos.
Cada etapa teve por objectivo melhorar a etapa anterior e determinar as melhores condies para haver
uma mxima produo de calcite e consequentemente atingir a melhor resistncia possvel.
O quadro resumo apresentado de seguida mostra a evoluo dos ensaios, assim como os problemas e
dificuldades encontrados ao longo de todo o trabalho experimental desenvolvido (Quadro 5.1).
Em resumo, nas vrias fases estudou-se a preparao das amostras, alimentao e desmontagem.
Houve problemas na desmontagem devido destruio das amostras. Nos ensaios realizados
(essencialmente no ensaio ao esmagamento dos fragmentos) foi possvel compreender que os moldes
teriam que ser modificados para facilitar a descofragem e que as amostras tinham que ser secas em
estufa antes de ensaiadas porque se encontravam saturadas. Em relao drenagem e alimentao,
encontraram-se problemas no material de filtro colocado na base das amostras, que tinha de ser rgido
para permitir a compactao, e permevel para permitir a percolao do alimento e da purga dos
produtos do metabolismo das bactrias.
Todos os provetes antes de serem ensaiados compresso foram colocados durante 24h numa estufa a
100C com calor seco, excepto na Fase I. Aps esta primeira fase, verificou-se que, para obter melhores
resultados, era necessrio que as amostras perdessem a sua humidade e que o lquido de alimento
ainda presente no seu anterior evaporasse por completo. Ao secar as amostras, introduziu-se suco
que levou a um aumento da resistncia, pelo que se preparou amostras de solo s com gua que
tambm foram secas e ensaiadas. O objectivo era quantificar apenas a resistncia devido ao fenmeno
de suco para comparao dos resultados medidos nestas amostras e nas amostras tratadas. Assim, foi
possvel quantificar o ganho de resistncia devido ao processo de bio-cimentao.

41

Quadro 5 1Quadro Resumo dos diferentes ensaios realizados neste estudo

Fases

II

Durao
(dias)

10

10

N de
Provetes

Tipo de
Provete

Com
bactrias

Solo original

21

Deficiente

Deficiente

Bactrias

G1

21

Eficiente

Deficiente

Controlo

G1

30

Eficiente

Deficiente

Bactrias

G2

21

Eficiente

Deficiente

G2

30

Eficiente

Deficiente

4
10

20

III

30

40

IV

10

Controlo

Granulometria

Temperatura
(C)

Sistema de
Drenagem

Sistema de
Desmontagem

Bactrias

G1

30

Eficiente*

Eficiente

Controlo

G1

30

Eficiente*

Eficiente

Bactrias

G2

30

Eficiente*

Eficiente

Controlo

G2

30

Eficiente*

Eficiente

Bactrias

G1

30

Eficiente*

Eficiente

Controlo

G1

30

Eficiente*

Eficiente

Bactrias

G2

30

Eficiente*

Eficiente

Controlo

G2

30

Eficiente*

Eficiente

Bactrias

G1

30

Eficiente

Eficiente

Controlo

G1

30

Eficiente

Eficiente

Bactrias

G2

30

Eficiente

Eficiente

G2

30

Eficiente

Eficiente

Controlo
3

*Dvida porque o filtro da base era diferente do da fase II e a purga deixou de percolar no final do quarto dia.

42

Comentrios

Na desmontagem distinguia-se claramente duas

partes, o topo e a base, sendo o topo muito mais
resistente que o resto da amostra. Os provetes
desfizeram-se parcialmente na desmontagem.

Tal como na fase anterior, no final do ensaio as

amostras apresentavam heterogeneidade, sendo
o topo mais resistente que o resto. Devido ao
deficiente sistema de descofragem muitas das
amostras acabaram por se partir antes de serem
ensaiadas compresso.
Trs dias aps o incio do ensaio o lquido de
alimento deixou de percolar. Isso levou a que no
se conseguisse introduzir os 20ml de lquido
nutriente todas as 24h. A partir do quarto dia
apenas se introduziu menos de 10ml por dia.
Como essa dificuldade de percolao deu-se em
praticamente todas as amostras, supe-se que
tenha havido um problema com uma das camadas
do sistema de drenagem.
No houve qualquer problema na percolao do
lquido nutriente excepto nos provetes com
granulometria quase uniforme (G1). Nestes, no
final do quinto dia o lquido comeou a ter
dificuldade em percolar e nos ltimos dias deixou
de percolar por completo. Desta vez no houve
qualquer erro com o sistema de drenagem porque
foi reformulado para esta fase.

5.2 Ensaios Realizados

5.2.1 Introduo
Foram realizados ensaios para medio da resistncia (compresso simples e esmagamento), estudo de
durabilidade e controlo do processo de cimentao. A sua descrio apresenta-se em seguida.

5.2.2 Quantificao da Resistncia

5.2.2.1 Ensaio de Compresso Simples
O ensaio de compresso simples permite obter a resistncia compresso em condies no
confinadas, ou seja, mede o valor da tenso axial que leva o material rotura.

Os ensaios foram realizados por deformao controlada, ou seja, controlou-se a velocidade de

deformao do material e mediu-se a correspondente carga aplicada. O procedimento seguiu as normas
ASTM D2166-06.

de mencionar que devido ao facto das amostras no terem as dimenses standard, teve de se adaptar
a prensa para se conseguir efectuar os ensaios (Figura 5.1). A clula de carga adoptada tinha a
capacidade mxima de 5KN.

O raio e a altura H0 de todas as amostras foram medidos com um paqumetro antes de qualquer ensaio.
Nas primeiras trs fases o ensaio foi efectuado de forma rpida com a velocidade de 6mm/min. Na
quarta fase optou-se por se realizar um ensaio lento, com velocidade de 1mm/min. Apesar de ainda ser
uma velocidade relativamente alta em comparao com os valores adoptados nos ensaios triaxiais, foi
considerada aceitvel porque se trata de ensaios em areias cimentadas secas.

Desta forma, foi possvel quantificar a tenso de compresso axial, a e a deformao axial, a atravs
das expresses 5.1 e 5.2 respectivamente.

Sendo que:

a =
a =

43

(5.1)
(5.2)

O valor da fora F fornecido pelo equipamento durante o ensaio, e o deslocamento vertical H

fornecido pelo LVDT (Figura 5.1). A rea utilizada no clculo da tenso de compresso axial, foi obtida
com o raio medido no incio de cada ensaio.

Clula de Carga
LVDT

b)

a)

Figura 5 1 Equipamento para Ensaio de compresso a) fotografia geral, b) detalhe da clula de carga e do LVDT

5.2.2.2 Ensaio ao Esmagamento

Realizaram-se ensaios de esmagamento nas amostras obtidas na fase II porque estas se partiram na
desmontagem e procurou-se, por isso, ainda ter alguma informao (Figura 5.2).

Este ensaio adequado para amostras com pequenas dimenses, ao contrrio do ensaio de compresso
simples. Todo o processo foi realizado de acordo com as normas ASTM D3967-08.

b)
a)
Figura 5 2 a) Equipamento para o ensaio ao esmagamento (Nri, 2013) ;
b) Amostra antes de ser ensaiada

44

5.2.3 Ensaio de submerso em gua

Com o intuito de se avaliar a durabilidade das amostras, efectuou-se um teste simples que consiste em
colocar as amostras cimentadas dentro de gua (Figura 5.3). O objectivo foi verificar se o cimento
formado no processo no se desfazia ao fim de algum tempo de submerso.
Observou-se que, ao fim de cerca de um ms de submerso, a maior parte das amostras no perdeu a
forma, pelo que o bio-cimento no se desfez com a gua. No entanto, verificou-se este efeito apenas na
zona do topo de cada provete ou seja nos primeiros dois cm, que coincide com a zona onde a presena
de bio-cimento era evidente. Os resultados sero apresentados mais a frente nesta dissertao.

Figura 5 3 Amostra submersa

durante o ensaio de durabilidade

5.2.4 Controlo da Bio-Cimentao

Foram realizados alguns estudos de forma a acompanhar a evoluo da bio-cimentao no tempo. Para
tal procurou-se detectar a presena das bactrias no solo assim como medir a produo de calcite
resultante da sua actividade.

5.2.4.1 Medio do pH do Solo

Um dos requisitos para que as bactrias tenham boas condies para produzirem calcite encontraremse num ambiente com pH 9. Para se efectuar esse controlo recorreu-se a fitas indicadoras de pH e
rapidamente verificou-se que todas as amostras se encontravam com o pH desejado (Figura 5.4).

Este teste foi feito tambm aps se introduzir os provetes em gua para se efectuar o ensaio da
quantificao da durabilidade apresentado anteriormente.

Figura 5 4 Fitas de medio de pH

45

5.2.4.2 Microscpio Electrnico, SEM

No final de cada ensaio compresso, algumas amostras foram observadas no microscpio electrnico
do Instituto de Cincia e Engenharia de Materiais e Superfcie cuja fotografia se apresenta na Figura
5.5b.
Antes de serem observadas necessrio que as amostras levem um banho de ouro para aumentar a
condutividade elctrica da superfcie e assim melhorar o contraste entre as superfcies (Figura 5.5a).

O esquipamento utilizado foi um microscpio electrnico de varredura por emisso de campo (field
emission SEM).

O objectivo era observar se havia bactrias e formao de calcite (quantidade e forma dos cristais) para
se poder comparar com os resultados apresentados em estudos anteriores e se perceber se realmente a
tcnica utilizada estava no bom caminho.

b)

a)

Figura 5 5 a) Amostras com banho de ouro antes de serem observadas no microscpio electrnico;
b) Microscpio electrnico (SEM) do Instituto de Cincia e Engenharia de Materiais e Superfcie (IST)

5.2.4.3 Quantificao de Carbonato de Clcio nas Amostras

Para se quantificar o aumento de carbonato de clcio (CaCO3), no final de cada ensaio enviou-se 20g de
cada provete para o Laboratrio de Anlises do IST ( LAIST), onde foi efectuada uma anlise qumica do
solo por lixiviao, na proporo 1:10, em meio cido clordrico a 5% durante 24horas em agitador. A
amostra enviada foi retirada da parte de cima dos provetes pois era nessa zona onde se via claramente a
presena do bio-cimento.

O objectivo verificar e quantificar a calcite existente no solo que resulta da actividade das bactrias ao
longo do tempo, ou eventualmente da reaco qumica dos reagentes do alimento no caso dos provetes
de controlo.

46

5.2.4.4 Verificao da Presena das Bactrias no Solo

fundamental garantir que as bactrias se encontram vivas no solo durante todo o processo. Para isso,
fez-se uma recolha do fluido do interior das amostras no final do ensaio para perceber se havia
actividade bacteriana. O lquido recolhido foi depois colocado em cultura, de modo a permitir o
crescimento de eventuais bactrias que a existissem. Na ausncia desse crescimento seria possvel
concluir que as bactrias tinham morrido. A recolha do fluido foi realizada com uma seringa com a qual
se retirou 100 l de lquido de dentro de cada provete no final do ensaio e antes de se colocar a amostra
na estufa, e foi colocado a crescer em placas de Petri. O lquido extrado uma mistura de finos do solo,
nutrientes e obviamente bactrias. As placas de Petri so recipientes utilizados para o cultivo de clulas
(Figuras 5.6). Em cada placa encontra-se meio de cultura assim como uma pequena quantidade de agar
responsvel pela solidificao do meio de cultura.

Com este ensaio possvel verificar-se pelo presena de colnias se existem bactrias. Pela morfologia e
tamanho das colnias pressupe-se que so formadas pelas bactrias B. pasteurii, responsveis pela
produo de calcite.

a)

b)
Figura 5 6 Placas de petri para controlo da presena das bactrias no solo
a) G1- Bactrias, b) G2-Controlo

5.2.4.5 Medio de Quantidade de Amnio

Ao longo dos ensaios, foram recolhidas amostras da purga que saa cada dia dos provetes. O objectivo
era efectuar um teste capaz de medir a quantidade de amnia libertado com a hidrlise da ureia
durante o processo MICP. Este teste foi realizado com dois propsitos, primeiro esperava-se medir
quantidades de amnia crescente com o tempo de tratamento para confirmar que houve um aumento
de produo de bio-cimento por parte das bactrias. Segundo, como foi referido na seco 2.2.3 o
cloreto de amnio tem impactos negativos a nvel ecolgico e tambm por esta razo que se pretende
quantificar a sua presena no lquido de purga. O teste para medio da quantidade de amnia consiste
em colocar uma gota de reagente em 0,50ml de fluido de purga, agitar durante cerca de trs minutos
para que se d a reaco entre os reagentes e o lquido de purga, e de seguida introduzir uma fita
indicadora da quantidade de amnia presente na soluo. Aps alguns segundos, basta comparar a cor

47

que apareceu na fita com a escala de cores fornecida e onde esto indicadas as concentraes de
amnia correspondentes a cada cor.

A Figura 5.7 ilustra as fitas indicadoras da quantidade de amnia assim como a escala de cores onde
essas quantidades so lidas.

Figura 5 7 Escala de cores e fitas indicadoras da

quantidade de amnia na purga diria

5.2.4.6 Porosimetria por Introduo de Mercrio

A porosimetria por introduo de mercrio um ensaio que permite obter a distribuio de tamanhos
dos poros presentes numa amostra de solo seco por introduo de mercrio a presses controladas. O
objectivo deste ensaio foi perceber se existia uma real diminuio do tamanho dos poros do solo ao
longo do tempo. Esta diminuio de tamanho seria indicadora do preenchimento dos vazios com biocimento proveniente da actividade bacteriana. Por outro lado, poderia explicar o facto de ter havido
alguns problemas com a percolao do lquido nutriente ao longo do tempo nas diferentes fases
realizadas devido colmatao dos poros.

Este ensaio foi realizado no laboratrio de anlises do Departamento de Qumica da Faculdade de

Cincias e Tecnologia FCT.

5.3 Fase I
Este foi o primeiro ensaio montado com a tcnica MICP no IST. Serviu essencialmente para
aprendizagem do processo biolgico do tratamento de bio-cimentao, nomeadamente todo o processo
de manipulao de clulas e de produo de alimento.

Na preparao dos provetes teve-se o cuidado de esterilizar todo o equipamento utilizado, assim como
os moldes e o solo, para evitar a contaminao com outras bactrias. A Figura 5.8a ilustra os moldes
dentro do autoclave para serem esterilizados. O solo foi esterilizado parte e a montagem final deu-se

48

numa cmara de fluxo laminar para garantir que o todo permanecesse estril (Figura 3.4a).
Posteriormente, concluiu-se que a esterilizao dos moldes e do solo seria desnecessria e pouco
realista visto que em obra no seria vivel ter-se esse cuidado.
Houve vrios problemas no decorrer deste ensaio associados essencialmente descofragem e
compresso. De facto, as amostras estavam demasiado hmidas e no suportaram o peso da clula de
carga (montada inicialmente numa cmara de ensaio triaxial), por isso partiram-se antes do ensaio
comear.

Deste modo, os resultados obtidos no ensaio compresso no so fiveis. Foi por isso realizado um
ensaio ao esmagamento com os fragmentos recuperados (ver Figura 5.8c).
Em seguida mostra-se os diferentes resultados obtidos nesta fase.

c)
b)
a)
Figura 5 8 a) Provetes dentro do Autoclave para esterilizao ; b) Ensaio da Fase I a decorrer no laboratrio;
c) Fragmentos de uma das amostras aps descofragem

5.3.1 Resultados
Como j foi dito, devido a um deficiente sistema de descofragem e presso da clula de carga antes do
ensaio, nesta fase as amostras ficaram partidas. Por esta razo foram realizados ensaios ao
esmagamento dos fragmentos com dimenses bastante diferentes, alguns ilustrados na Figura 5.8c e
5.9. Tentou-se tornar os fragmentos o mais esfricos possvel. O ensaio foi realizado no Laboratrio de
Construo do Departamento de Engenharia Civil do IST.

Figura 5 9 Fragmentos do provete de

controlo antes de serem ensaiados

49

Ensaio ao Esmagamento

Fora (KN)

0.20
0.15
0.10

Controlo

y = 0.004x - 0.0234
R = 0.8061

0.05

Regresso Linear

0.00
0

10

15

20

25

30

35

Altura (mm)

Figura 5 10 Resultados do ensaio ao esmagamento dos provetes de controlo (Fase I)

Ensaio ao Esmagamento

Fora (KN)

0.20
0.15

y = 0.0059x - 0.0293
R = 0.9632

0.10

Bactrias

0.05

Regresso Linear

0.00
0

10

15

20

25

30

35

Altura (mm)

Figura 5 11 Resultados do ensaio ao esmagamento dos provetes com bactrias (Fase I)

Ensaio ao Esmagamento
0.20

Fora ( KN)

0.15
Controlo
0.10

Bactrias
Regresso Linear-Controlo

0.05

Regresso Linear-Bactrias
0.00
0

10

15

20

25

30

35

Altura ( mm)

Figura 5 12 Comparao dos casos com e sem bactrias (Fase I)

50

Constatou-se que a resistncia proporcional altura do provete independentemente de se tratar de

bactrias ou de controlo. Esta proporcionalidade mais visvel nas amostras tratadas com bactrias do
que nas de controlo (Figura 5.10 e 5.11), tal como se v atravs dos coeficientes de correlao includos
nas Figuras 5.10 e 5.11.

Ao observar as Figuras 5.10 e 5.11 verifica-se igualmente que o ponto com maior resistncia
corresponde ao ponto com maior altura. Esse fragmento de maior dimenso tanto nos provetes com
bactrias como nos de controlo corresponde parte superior de cada provete (topo) que como j se
tinha referido era visivelmente mais resistente do que o resto da amostra.

Pelo declive das rectas traadas para ajuste dos dados experimentais por regresso linear possvel
verificar que a resistncia dos provetes tratados com bactrias (m=0.0059) ligeiramente superior
medida para o controlo (m=0.004). No entanto, de mencionar que os resultados apresentados tm
alguns erros importantes associados, nomeadamente:

A medio do dimetro de contacto foi feita de forma aproximada uma vez que os fragmentos
ensaiados no tinham superfcies planas no contacto com a prensa.

Os fragmentos no apresentavam uma forma perfeitamente esfrica.

A prensa foi adaptada com placas de madeira que no estavam fixas e no foi possvel
assegurar que se encontravam paralelas durante todo o ensaio.

Poder haver pouca sensibilidade da prensa para fragmentos de pequena dimenso.

Mesmo sendo os valores afectados de erro, deste primeiro ensaio pode-se concluir que existe um ganho
de resistncia associado introduo de bactrias no solo uma vez que se observa na Figura 5.12 que os
valores das resistncias correspondentes a provetes com bactrias so superiores aos de controlo. No
entanto difcil quantificar esse ganho devido ao facto dos fragmentos terem dimenses diferentes e
serem heterogneos pois foram retirados de partes diferentes dos provetes e estes tambm so
heterogneos.

5.3.2 Microscopia Electrnica de Varrimento, SEM

Aps o ensaio ao esmagamento, alguns fragmentos foram observados no microscpio electrnico de
varrimento (SEM). O objectivo era comparar as imagens obtidas com a presena de bactrias com as
imagens correspondentes a amostras apenas de solo com gua e, tambm verificar se o aspecto
observado correspondia ao aspecto ilustrado em fotografias de estudos anteriores sobre a tcnica MICP.
Com este ensaio tambm se esperava encontrar diferenas entre as amostras tratadas com introduo
de bactrias e as de controlo, e esperava-se observar algumas bactrias para se conhecer o seu aspecto.

51

Nesta fase, as amostras observadas no foram secas na estufa, e por no terem sido submetidas a
elevadas temperaturas que se esperava ver restos biolgicos.

Biofilme
c)

b)
a)

Figura 5 13 Imagens obtidas atravs do microscpio SEM correspondentes a uma amostra de granulometria G1 com bactrias, a)
detalhe do biofilme formado pelas bactrias b) fotografia geral (1000x), c) detalhe das esferas de calcite

A figura 5.13 ilustra a imagem correspondente ao solo de granulometria G1 e tratado com bactrias
aps observao no microscpio SEM. Na Figura 5.13 b) e c) observa-se a presena de minerais com
geometria esfrica, e devido a essa forma arredondada que tudo indica que estes elementos sejam de
origem orgnica e que correspondem calcite formada ao longo do processo uma vez que outros
autores tais como Al Qabany et al (2012) e Ng et al (2012) tambm observaram estas esferas nas
amostras sujeitas ao mesmo tipo de ensaio.

Na Figura 5.13 a) e b) observa-se a presena dum biofilme que indica a existncia de bactrias. O
biofilme funciona como uma barreira hidratada protectora entre as clulas bacterianas e seu ambiente.
Ele facilita a sobrevivncia sob condies adversas e agresses ambientais tais como radiao
ultravioleta, stress fsico-qumicos, dessecao e suprimento insuficiente de recursos nutritivos. Por
estas razes, na natureza a maioria dos micrbios vive como comunidades em biofilmes (Pacheco,
2009). A existncia deste biofilme portanto indicadora da presena de bactrias no solo e como se
observa igualmente cristais de calcite, tudo leva a crer que as bactrias presentes no biofilme observado
so as Bacilus pasteurii responsveis pela produo de bio-cimento. No entanto, no foi possvel
observar essa zona com mais ampliao e por esta razo o aspecto das bactrias no foi identificado
neste estudo. Ainda assim, apresenta-se na Figura 5.14 a aparncia das bactrias Bacillus pasteurii assim
como a da calcite com funo de ligar as partculas de solo ilustradas por Seagren et al ( 2009).

52

b)

a)

Figura 5.14 Imagens ilustradas por Seagren et al (2009) a) Aspecto das bactrias B. pasteurii (6050x) b) calcite
formada ao longo do processo MICP (87.5x) (http://throughthesandglass.typepad.com)

Comparando a fotografia da Figura 5.13 b) com as da Figura 5.15, tiradas em amostras de controlo e de
solo com gua, verifica-se que existe uma maior quantidade de esferas de calcite no caso das amostras
tratadas com bactrias quando comparadas com as do controlo. Na amostra onde no foi efectuado
qualquer tipo de tratamento, solo com gua, tambm se observa pequenas esferas mas estas podem
corresponder apenas a partculas de finos presentes no solo. Ao contrrio da imagem apresentada na
Figura 5.13 b) e que corresponde a uma amostra de solo tratado com bactrias, nas fotografias
apresentadas na Figura 5.15 a) e b) no se identifica qualquer tipo de biofilme, o que indica que no
existe actividade bacteriana nessas amostras.

a)

b)
Figura 5 15 Amostras de granulometria G1 observadas no microscpio SEM a) Amostra de
Controlo (1000x), b) Amostra sem qualquer tratamento, apenas solo e gua (1000x)

Outro elemento interessante foi observado nesta fase, trata-se de uma forma especfica de cristais de
CaCO3, designados por acetato de clcio, que corresponde igualmente ao bio-cimento formado ao longo
do processo MICP. Na Figura 5.20 faz-se a comparao entres os cristais de acetato de clcio observados
neste estudo e os cristais observados por um outro autor.

53

b)

a)

Figura 5 16 Cristais de acetato de clcio observados no microscpio SEM, a) neste estudo, b) num estudo
realizado por outro autor

5.4 Fase II
Esta fase foi executada com um sistema de drenagem semelhante ao usado na Fase I, no entanto, o
sistema de descofragem ainda no estava totalmente optimizado.
O objectivo desta etapa foi comparar resultados em amostras com granulometrias diferentes e onde se
promoveu a bio-cimentao a temperaturas diferentes, ou seja 20C (no laboratrio) e 30C (em estufa),
de facto como se descreveu antes, as bactrias preferem temperaturas mais elevadas. A temperatura a
20C mais semelhante s temperaturas in situ e por isso que tambm foi analisada nesta fase. Tal foi
igualmente descrito no quadro resumo apresentado no incio deste captulo (Quadro 5.1).

O sistema de descofragem revelou-se no ser o mais adequado porque ocorreu o mesmo problema que
no ensaio anterior, ou seja, algumas amostras acabaram por ficar fracturadas como est ilustrado na
Figura 5.17a.

Para tentar ter amostras intactas, aps a descofragem, os provetes foram colocados na estufa a 100 C
durante algumas horas para perderem a humidade e o resto de lquido que se encontrava ainda no seu
interior. As amostras resultantes deste processo j tinham um aspecto mais aceitvel tal como se v na
Figura 5.17b.

b)

a)

Figura 5 17 a) Amostras partidas na descofragem, apenas subsistiram os topos dos

provetes; b) Amostra aps secagem na estufa

Na Figura 5.18 apresenta-se os provetes montados e submetidos a (a) 20C, e (b) 30C.

54

a)

b)
Figura 5 18 Provetes mantidos: a) a temperatura de laboratrio (20C), b) na estufa (30C)

5.4.1 Resultados
Na Fase II a maior parte das amostras com bactrias e de controlo exibiu rotura pela base sendo o topo
visivelmente mais resistente, tal como se observa no provete cuja fotografia se apresenta na Figura
5.19a aps o ensaio. No entanto outras formas de rotura foram observadas nomeadamente ao corte
com superfcie inclinada (Figura 5.19b) e com superfcies verticais (Figura 5.19c). As roturas observadas
nas Figuras 5.19 a) e b) foram identificadas tanto em provetes com bactrias como nos de controlo para
ambas as granulometrias, no entanto a rotura ilustrada na Figura 5.19c apenas foi identificada em
amostras com bactrias.

As amostras que exibiram esmagamento pela base foram recuperadas e os topos, claramente mais
resistentes, foram ensaiados novamente. Os resultados obtidos nestes novos ensaios tambm se
apresentam nas Figuras 5.20 e 5.21 e correspondem s amostras com menor altura.
Alguns provetes no apresentavam uma verticalidade perfeita tal como se observa na Figura 5.19b o
que pode influenciar os resultados obtidos.

Figura 5 19 a) Amostra de solo G1 tratada com bactrias a 20C; b) Amostra de solo G2 de controlo a 30C; c) Amostra
de solo G1 tratada com bactrias a 30C

55

Fora (kN)

Ensaio Compresso - G1
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0

Laboratrio (21C)
Estufa ( 30C)

Altura (cm)

Figura 5 20 Ensaio a Compresso de amostras com bactrias Granulometria G1 (Fase II)

Fora (kN)

Ensaio Compresso - G2
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0

Laboratrio (21C)
Estufa ( 30C)

Altura (cm)

Figura 5 21 Ensaio a Compresso de amostras com bactrias Granulometria G2 (Fase II)

Como se pode observar nas Figuras 5.20 e 5.21 existe uma grande discrepncia entre as alturas das
amostras que foram ensaiadas e os respectivos valores medidos para a resistncia. Verifica-se na Figura
5.20 que para alturas inferiores a 4,5 cm os valores de resistncia so bastante elevados uma vez que
estes valores correspondem parte do topo dos provetes que, como j foi dito, visivelmente mais
resistente do que o resto. Para alturas superiores a 4,5cm a amostra foi ensaiada por inteiro e na maior
parte das vezes a rotura deu-se pela base. por esta razo que a resistncia medida para amostras
inteiras claramente inferior resistncia medida para amostras apenas do topo dos provetes.
As amostras de granulometria G2 sofreram menos problemas na descofragem e por esta razo que na
Figura 5.21 quatro dos seis provetes ensaiados apresentam uma altura superior a 5,5cm. Identifica-se
duas amostras com altura inferior a 4,5cm, no entanto observando as resistncias correspondentes a
essas duas amostras no possvel tirar nenhuma concluso pois os valores so muito diferentes.
Contudo, assim como nas amostras correspondentes ao topo dos provetes de granulometria G1, estas
duas amostras correspondentes ao topo dos provetes de granulometria G2 eram visivelmente mais
resistentes do que a parte inferior dos provetes. Mesmo assim seria necessrio realizar-se novos ensaios

56

para confirmar a teoria de que os topos dos provetes so bastante mais resistentes do que as bases
tambm para provetes de granulometria G2.
Analisando os resultados obtidos para as duas amostras maiores, que se encontram assinaladas nas
Figuras 5.20 e 5.21, possvel concluir que a temperatura a 30C prefervel do que a temperatura a
20C para o processo de bio-cimentao uma vez que, comparando duas amostras com dimenses
semelhantes, para a temperatura mais elevada a resistncia maior.
Nesta fase ainda no houve a preocupao de se medir o ganho de resistncia das amostras tratadas
(com introduo de bactrias e de controlo) comparativamente com as amostras compostas por apenas
solo e gua. Esse ganho apenas ser medido nas prximas fases.
Em resumo, esta fase serviu para perceber qual o problema do sistema de descofragem com o objectivo
de o optimizar para as prximas fases. Visualmente os resultados desta fase vieram confirmar os
resultados da fase anterior porque a parte do topo dos provetes, que tinha uma cor esbranquiada
devido a presena de bio-cimento, era bastante mais resistente do que o resto. Na prxima fase
espera-se perceber quais as consequncias de se deixar decorrer o processo MICP durante mais tempo.
Pensa-se que com mais tempo de tratamento as amostras ficaro mais homogneas porque continuar
a haver mais infiltrao do alimento e as bactrias das camadas inferiores podero continuar a produzir
bio-cimento, e por consequente o topo deixar de ter uma resistncia significativamente superior.
Pela anlise dos resultados, mesmo apesar das incertezas devido ao nmero insuficiente de provetes
ensaiados, decidiu-se que, para as fases seguintes, apenas se vai submeter os provetes a uma
temperatura de 30C. Para alm disso, esta temperatura a mais indicada para as clulas terem uma
produo de calcite mais eficiente e ser possvel prever uma maior quantidade de bio-cimento.

5.4.2 Ensaio de Submerso em gua

Nesta fase realizou-se um ensaio para avaliar a durabilidade das amostras com tamanhos iniciais
compreendidos entre os 4 e 5cm. As amostras foram mergulhadas em gua e deixadas submersas
durante vrios dias at a gua evaporar naturalmente (Figura 5.22 a).

O processo levou sensivelmente um ms. Este apenas um ensaio qualitativo, pois no foram medidos
quaisquer valores de resistncia, no entanto com a mo tentou-se esmagar as amostras e verificou-se
que a resistncia se mantinha elevada (Figura 5.22 b e c) e muito superior do solo sem tratamento.

a)

b)

c)

Figura 5 22 a) Ensaio de submerso a decorrer; Topo do provete um ms aps o ensaio b) corte c) planta

57

Apesar de se ter seleccionado o topo dos provetes com aspecto mais cimentado, em praticamente todas
as amostras, a base foi-se desfazendo ao longo do tempo e no final do ensaio apenas subsistiu o topo
com aproximadamente 1,5cm de altura como se pode ver na Figura 5.22 b e c. Esta parte do provete
encontra-se visivelmente muito resistente e tem permanecido intacta desde ento.

O resultado deste ensaio veio confirmar os resultados dos ensaios anteriores, ou seja que existe um
dgrad (gradiente) de bio-cimento ao longo da altura dos provetes e por consequente existe uma
diferena significativa de resistncia. Tal indica que este tipo de tratamento poder ser mais eficiente
em zonas superficiais e tem que ser melhorado para se obter mais homogeneidade em profundidade.
Tal pode conseguir-se melhorando o sistema de injeco e, eventualmente, aumentando o tempo do
tratamento (tempo de alimentao).

5.5 Fase III

Os provetes montados nesta fase esto apresentados na Figura 5.23.
O ensaio da fase III constitudo por quatro etapas, em que se alimentaram as amostras durante
perodos de tempo crescentes: 10 dias, 20 dias, 30 dias e 40 dias. As diferentes duraes permitiram
estudar se o tempo de ensaio era favorvel para a eficincia das bactrias na produo de calcite.
O sistema de descofragem foi finalmente o adequado e as amostras ficaram praticamente intactas
(Figura 5.24).
Em relao ao sistema de drenagem, manteve-se idntico ao adoptado nas fases anteriores mas
observaram-se problemas na drenagem ao fim de alguns dias. Este foi tambm o motivo que ajudou
deciso de se prolongar o tempo de ensaio.
Em cada etapa ensaiou-se um provete com bactrias e um de controlo para cada granulometria. Por se
ter decidido estudar diferentes tempos de alimentao s se teve um exemplar de cada tipo para cada
tempo de alimentao e ainda no foi possvel obter representatividade dos resultados.

a)

b)

Figura 5 23 Provetes na estufa a 30 C, a) Fotografia Geral, b) Zoom

58

G2- B
a)

G2- C

G2- B

G1- B
G1- C

b)

G2- C

G1- B
G1- C

Figura 5 24 Amostras aps 40dias de ensaio: a) antes de irem a estufa, b) depois de irem estufa

Observa-se na Figura 5.24 que aps as amostras terem ido estufa existe uma clara diferena de cores.
Supe-se que a parte branca identificada na Figura 5.24b) corresponde ao bio-cimento formado durante
o processo MICP. Esta figura vem ilustrar o efeito dgrad de bio-cimento identificado na fase anterior.

5.5.1 Resultados
Como no houve problemas com a descofragem e as amostras foram secas numa estufa a 100C, foi
possvel realizar-se ensaios compresso nas amostras praticamente inteiras, ou seja com tamanhos
compreendidos entre os 6 e 7cm. No entanto como foi especificado no Quadro 5.1 surgiu um problema
de percolao durante o ensaio. Como as bactrias no foram devidamente alimentadas ao longo do
tempo possvel que o tratamento por MICP no tenha decorrido como previsto e eventualmente no
se tenha conseguido gerar bio-cimento em alguns casos. Assim, para alm da heterogeneidade devido
concentrao do bio-cimento no topo surgiu a dvida se em algum caso possa nem sequer ter havido a
sua formao apesar da cor branca observada pudesse indicar a sua presena. Com o aumento do
tempo de alimentao pensou-se estar a promover a formao de bio-cimento ou de maior quantidade.
Mesmo assim decidiu-se prolongar o ensaio e os valores da resistncia obtidos foram analisados.
Apresenta-se de seguida na Figura 5.25 as roturas observadas para provetes tratados por introduo de
bactrias ao longo do tempo e para as duas diferentes granulometrias.
de referir que embora o sistema de descofragem tenha sido adequado, em algumas amostras no se
conseguiu obter uma verticalidade perfeita, o que pode igualmente influenciar os resultados.
20 DIAS

30 DIAS

40 DIAS

G1

N3 - Bactrias

N6 - Bactrias

N 4 -Controlo

G2
N 1 -Bactrias
N1 -Controlo

N4 -Bactrias

Figura 5 25 Exemplo de roturas observadas tanto em provetes com bactrias como nos de controlo (Fase III)

59

Verificou-se que a rotura deu-se pela base em praticamente todas as amostras que a parte menos
resistente do provete mesmo se primeira vista parea mais homogneo do que os provetes nas fases
anteriores.

Os resultados obtidos no ensaio compresso so apresentados nas Figuras 5.26 e 5.27.

Fora (KN)

G1
0.45
0.40
0.35
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00

G1 - Bactrias
G1- Controlo
Solo + Agua

10

20

30

40

50

Tempo ( dias)

Figura 5 26 Resultados do Ensaio Compresso Granulometria G1 (Fase III)

Fora (KN)

G2
0.45
0.40
0.35
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00

G2- Bactrias
G2- Controlo
Solo + Agua

10

20

30

40

50

Tempo ( dias)

Figura 5 27 Resultados do Ensaio Compresso Granulometria G2 (Fase III)

A quantificao do ganho de resistncia do tratamento com bactrias em relao ao controlo (B/C) e ao

solo no tratado (solo com gua) (B/S), assim como o ganho de resistncia dos provetes de controlo
tambm em relao ao solo com gua (C/S) apresenta-se no Quadro 5.2. Os grficos correspondentes ao
valores apresentados no Quadro 5.2 para comparar as melhorias obtidas entre tratamentos
encontram-se ilustrados nas Figuras 5.28 e 5.29.

60

Quadro 5 2 Comparao do ganho de resistncia com os diferentes tratamentos

G1

Tenso
(kPa)

Melhoria
do
tratamento

Dias
Bactrias
(B)
Controlo
( C)
Solo + Agua
(S)
B/C

G2

10

20

30

40

10

20

30

40

230,44

303,21

181,93

230,44

46,09

115,22

181,93

101,88

169,80

212,25

291,09

269,25

77,62

483,93

103,09

306,85

90,96

90,96

90,96

90,96

42,45

42,45

42,45

42,45

1,36

1,43

0,63

0,86

0,59

0,24

1,76

0,33

B/S

2,53

3,33

2,00

2,53

1,09

2,71

4,29

2,40

C/S

1,87

2,33

3,20

2,96

1,83

11,40

2,43

7,23

Diferena entre tratamentos

Comparao entre tratamentos (B/C e B/S)

12
10
8

B/C - G1

B/S - G1

B/C - G2

B/S - G2

0
0

10

15

20

25

30

35

40

45

Tempo (Dias)
Figura 5 28 Anlise comparativa entre tratamentos com introduo de bactrias (B), controlo (C) e solo com gua (S) - Fase III

Comparao entre tratamentos (C/S)

Diferena entre tratamentos

12
10
8
6

C/S - G1

C/S - G2

1
0

10

15

20

25

30

35

40

45

Tempo (Dias)
Figura 5 29 Anlise comparativa entre provetes de controlo ( C) e solo com gua (S) - Fase III

61

Devido disperso dos resultados obtidos explicada pela heterogeneidade do tratamento e por s se ter
feito o ensaio de uma amostra para cada durao de tratamento, no possvel concluir que os
provetes tratados com bactrias apresentam uma maior resistncia do que os provetes de controlo
(Figura 5.26 e 5.27).
Quando se compara amostras com bactrias e amostras de controlo (Figura 5.28), os valores das
resistncias correspondentes aos controlos so por vezes quatro vezes superiores aos valores das
resistncias das amostras com bactrias. No entanto existe uma grande discrepncia entre os
resultados, sendo para a granulometria G1 o valor mais baixo de B/C =0,63 e o valor mais alto B/C=1.43,
para a granulometria G2 o valor mais baixo de B/C=0,24 e o valor mais alto de B/C =1,76 (Quadro 5.2).
Devido disparidade dos resultados no portanto possvel tirar nenhuma concluso nesta Fase.
Todavia, uma coisa clara, quando h tratamento a resistncia obtida muito superior resistncia da
amostra composta apenas por solo e gua e cujo valor para cada granulometria tambm se apresenta
nas Figuras 5.26 e 5.27. A melhoria do tratamento com bactrias comparativamente com o solo apenas
misturado com gua encontra-se quantificada no Quadro 5.2 e ilustrada na Figura 5.28. Verifica-se que
existe um ganho com a introduo de bactrias no solo uma vez que os valores da resistncia, embora
sejam bastante diferentes, so sempre superiores ao valor da resistncia do solo misturado apenas com
gua. O mesmo acontece quando se compara provetes de controlo e solo com gua (C/S) (Quadro 5.2 e
Figura 5.29), sendo os valores da resistncia dos controlos sempres superiores aos valores da resistncia
do solo com gua e num dos casos chega mesmo a ser onze vezes superior (C/S=11,40). No entanto este
resultado no era esperado uma vez que se previa obter uma resistncia dos controlos praticamente
igual resistncia do solo com gua, pois como em ambos no houve introduo de bactrias a ligao
entre partculas com calcite deveria ser baixa ou inexistente por se admitir que no podia haver uma
elevada produo de calcite s com a soluo de controlo.
Resta perceber por que razo os resultados correspondentes aos provetes de controlo tem por vezes
uma resistncia superior dos provetes com bactrias. Seria espectvel observar-se o contrrio, uma
vez que uma maior quantidade de bactrias leva a uma maior produo de calcite e por consequente a
uma maior resistncia. Este assunto ser discutido mais a frente na seco 5.6 (Fase IV).
De um modo geral verifica-se que as resistncias obtidas so mais elevadas no solo com granulometria
G1, ou seja, no solo com granulometria quase uniforme (Figura 5.26 e 5.27). Este resultado era esperado
pois haver mais espao para as bactrias se desenvolverem entre os gros de solo.
Com base nos grficos acima, parece que o factor tempo no relevante para o aumento de resistncia
das amostras, pelo menos para os provetes de controlo da granulometria G1. No entanto, a disperso
dos resultados para as outras amostras no permite melhores concluses. Estes resultados deveriam ter
sido confirmados com um novo ensaio mas tal s ser feito em estudos futuros.

62

Pode admitir-se que a dosagem de bio-cimento ao fim de 40dias pode ser considerada igual dos 10, 20
e 30 dias se se comparar as resistncias apresentadas nas Figuras 5.26 e 5.27, e por esta razo que os
seguintes ensaios, quantificao do carbonato de clcio e verificao da presena de bactrias no solo,
apenas foram realizados para essa durao de tratamento.

5.5.2 Quantificao do Carbonato de Clcio (CaCO3)

Este teste foi realizado no Laboratrio de anlise do IST (LAIST), para os provetes que foram submetidos
ao processo MICP durante quarenta dias.
3

Cada amostra enviada para laboratrio tinha uma massa de 20g, um volume de cerca de 11.17m , e
correspondia parte do topo do provete.

Com o objectivo de se comparar os resultados obtidos neste estudo com resultados de estudos
realizados por outros autores a fim de perceber se a bio-cimentao estava a decorrer como previsto,
efectuaram-se clculos para converter a dosagem de bio-cimento medida em g/kg para valores medidos
3

em kg/m .
Sabendo que em 20g as quantidades de CaCO3 so as seguintes:

Quadro 5 3 Quantidade de CaCO3 em amostras com 20g

E que d= 17,9 kN/ m

Bactrias

Controlo

G1

g de
CaCO3/20g de
solo

0,76

1,9

G2

g de
CaCO3/20g de
solo

2,62

2,54

1790kg
20g

1m
-5 3
1,12x10 m

Os resultados obtidos encontram-se no Quadro 5.4.

63

Quadro 5 4 Resultados da anlise qumica

G1

G2

Bactrias

Controlo

g/kg

38,00

95,00

kg/m3

68,02

170,05

g/kg

131,00

127,00

kg/m3

234,49

227,33

De um modo geral, verifica-se que a quantidade de CaCO3 mais elevada nas amostras da
granulometria G2. Aparentemente, estes resultados no so coerentes com os obtidos no ensaio
compresso (Figura 5.26 e 5.27), porque nos ltimos constatou-se que a granulometria G1 apresentava
maior resistncia. de referir que como os provetes apresentavam uma grande heterogeneidade, o que
afectou os resultados dos ensaios de compresso, para a anlise qumica s se analisou o topo dos
provetes. Eventualmente, daqui pode perceber-se que a granulometria G1 poder ser mais propcia
formao de bio-cimento, que colmata rapidamente os vazios do solo e portanto deixa de haver
alimento disponvel para as bactrias a maior profundidade, o que justifica o maior contraste de
resistncia em altura e reduz portanto o valor de resistncia compresso medida no provete.
Na Figura 5.30 encontram-se indicados os resultados obtidos por Al Quabany et al (2012) e os pontos
que correspondem aos valores obtidos para as amostras G1 com 40 dias de ensaio (Fase III).

G1- B
G1- C

Figura 5 30 Comparao com as quantidades de carbonato de clcio apresentadas

no estudo realizado por Al Quabany et al (2012) (Fase III)

Considera-se que as dosagens de bio-cimento so realistas e pode-se admitir que as resistncias

medidas em cada caso so os valores mnimos possveis para essa dosagem. Os valores obtidos para
esta dosagem foram comparados com os resultados apresentados no estudo realizado por Al Quabany
et al (2012) sobre o tratamento MICP e verificou-se que para a granulometria G1, estes encontram-se

64

dentro do mesmo intervalo. Significa que mesmo se nesta fase surgiram alguns problemas, houve ainda
assim uma normal produo de carbonato de clcio ao longo do tempo. Todavia os valores
correspondentes a granulometria G2 so bastante superiores aos valores compreendidos dentro desse
intervalo e por esta razo que no se incluram na Figura 5.30.

5.5.3 Verificao da Presena das Bactrias no Solo

De forma a perceber se as bactrias permaneciam vivas dentro dos provetes no final dos 40dias apesar
da falta de alimento devido colmatao do sistema de purga, j referido, foi realizado um teste simples
e rpido como foi descrito na seco 5.2.4.4 deste captulo. Apresenta-se na Figura 5.31 as placas de
Petri onde foi feito o ensaio e na Figura 5.32 as respectivas ampliaes. Devido qualidade das
fotografias as diferenas so pouco evidentes mas ao vivo as diferenas eram muito claras.

Colnias de
bactrias

a) Placa de Petri G1- Bactrias

b) Placa de Petri G1- Controlo

d) Placa de Petri G2 - Controlo

c) Placa de Petri G2 -Bactrias

Figura 5 31 Verificao da presena de bactrias vivas no solo (Fase III)

65

a) G1 - B

b) G1 - C

c) G2 - B

d) G2 - C

Figura 5 32 Detalhe das placas de petri usadas para o ensaio de verificao da presena das bactrias no solo
(Fase III)

Os resultados comprovam a presena de bactrias, tanto nas amostras tratadas com injeco de
bactrias como nos controlos, porque se observam colnias de microrganismos. No entanto,
importante referir que no se pode garantir que as bactrias observadas correspondem a bactrias
B.pasteurii, uma vez que o lquido recolhido no foi imediatamente plaqueado aps ter sido retirado do
provete, e pode ter sido contaminado nesse perodo. No caso dos controlos no se deveria observar
colnias, pelo menos no em quantidades muito elevadas. A contaminao observada poder at ter
sido de bactrias B pasteurii que existiam nos solos mas o mais provvel ser de um outro qualquer
contaminante do ar. Nas Figuras 5.31 a) e 5.32 a) as colnias encontram-se bem definidas e tm o
aspecto de pequenos pontos. Nas Figuras 5.31 b) e 5.3 b) em vez de pequenos pontos observam-se
linhas, isso indica que existe uma maior quantidade de bactrias. Na Figura 5.32d) no se distingue nem
pontos nem linhas, mas a placa tem um aspecto bao o que indica que a quantidade de bactrias de
tal forma elevada que estas ocupam toda a placa e no se consegue distinguir colnias.

Porm, a placa de Petri com granulometria G2 e com bactrias apresentada nas Figuras 5.31 c) e 5.32 c)
parece no conter qualquer tipo de clulas pois a placa encontra-se transparente. Este pode ser um erro
experimental, uma vez que a quantidade de lquido extrado destes provetes pequena (100l) e h
baixa probabilidade de haver bactrias presentes. Por outro lado, este resultado pode tambm
confirmar a hiptese feita anteriormente, ou seja que as colnias observadas so de contaminantes e
no de B. pasteurii, uma vez que no expectvel ver bactrias no lquido de purga. As bactrias vivem
em biofilmes e encontram-se presas a ele e s quando o seu nmero muito elevado que comeam a
ser eludas e s assim existe a possibilidade de sarem do solo atravs do lquido de purga.

Estes resultados vm mais uma vez pr a questo da razo de se verificar a presena de microrganismos
tanto nos provetes tratados com bactrias como no controlo. Esta questo ser discutida mais a frente
na seco 5.6 (FaseIV).

66

5.5.4 Ensaio de Submerso em gua

O ensaio foi realizado de forma idntica ao da fase II como se ilustra na Figura 5.33 a). Os resultados
obtidos foram muito semelhantes, ou seja, a nica parte que permaneceu intacta e com uma resistncia
visivelmente elevada foi a parte do topo de cada provete. Inclusive nos provetes de controlo (Figura
5.33 b).

a)

b)

G1 - B

G1 - B

Figura 5 33 Ensaio de submerso em gua Fase III a) ensaio a decorrer, b) amostra

aps o ensaio

5.5.5 Microscpio
Foram observadas amostras correspondentes a todas as etapas no microscpio electrnico, SEM.
Ao contrrio das amostras da Fase I observadas no microscpio electrnico (seco 5.3.2) as amostras
que foram observadas nesta Fase III permaneceram numa estufa a 100C durante dois dias antes de
serem observadas, ou seja, quando foram observadas estavam completamente secas.
Ainda assim, observa-se na Figura 5.34 a presena de pequenos buracos nas partculas de solo,
indicadores da presena das bactrias. Estes pequenos buracos chamados de imprints serviam de molde
para as antigas bactrias.

Imprints

G2 - B
Figura 5 34 Identificao de imprints no solo indicadores da presena de bactrias, amostra G2 40 dias (Fase III)

Outro pormenor interessante, detectado desta vez nas amostras com 30dias, foi o aspecto rendilhado
que no tpico de um material granular mas que tpico de minerais argilosos, neste caso esmectita. A
Figura 5.35 a) ilustra a esmectita observada neste estudo e a Figura 5.35 b) ilustra a esmectita observada
por Mocoroa et al (2014). possvel encontrar este mineral no solo G2 porque este solo tem finos.

67

a)

G2 B (4000x)

b)

Figura 5 35 Mineral Argiloso, esmactita, observado no microscpio electrnico, a) neste estudo (Fase III), b)
por Mocoroa et al (2014)

Existem na natureza diferentes minerais que contm clcio na sua composio. A Figura 5.36 ilustra as
geometrias de alguns desses minerais. Ao observar as amostras obtidas neste estudo esperava-se
encontrar alguma dessas geometrias, potenciadas pelo facto das amostras terem sido secas em estufa e
poder ter havido recristalizaes.

Figura 5 36 Minerais com clcio na sua composio A) Cloreto de clcio, B)

Acetato de clcio, C) Lactato de clcio, D) Gluconato de clcio

Como se apresentou na Figura 5.16, nas amostras da Fase I, que no foram estufa, observou-se a
geometria correspondente ao mineral acetato de clcio. No entanto nenhuma das outras geometrias foi
observada neste estudo.
Ainda assim, na Figura 5.37 tambm foram identificados alguns elementos correspondentes ao mineral
calcite mas com geometrias diferentes, sendo que, na Figura 5.37 b) este tem um aspecto rendilhado
devido ao facto do CaCO3 ter precipitado na secagem.

68

CALCITE

a)

G1 B (30x)

b)

G2 B (1000x)

Figura 5 37 Diferentes aspectos de calcite observados nas amostras da Fase III no microscpio electrnico (SEM)

Apresenta-se na Figura 5.38 e 5.39 as fotografias correspondentes s amostras de granulometria G1 e

G2 tratadas com bactrias para os diferentes tempos de ensaio: 10dias, 20dias, 30dias e 40dias.

CALCITE

CALCITE

b) 20 Dias B G1

a) 10 Dias Bactrias G1

CALCITE

c) 30 Dias B G1

d) 40 Dias B G1

Figura 5.38 Evoluo de calcite ao longo do tempo nas amostras G1 tratadas com bactrias (Fase III)

69

Para a granulometria G1 (Figura 5.38) parece que existe um aumento de esferas de calcite ao longo do
tempo. Para fotografias com esta ampliao a calcite corresponde s pequenas esferas presentes sobre
a superfcie e indicadas na Figura 5.38. Infelizmente a amostra da Figura 5.38 c) fracturou-se e no foi
possvel identificar claramente presena de esferas de calcite.

Para a granulometria G2 (Figura 5.39) difcil dizer se existe um aumento de calcite ao longo do tempo
pois as esferas de calcite no se identificam facilmente nesta granulometria devido presena de finos.
Os finos acabam por se misturar com o bio-cimento e por este motivo que na granulometria G2 no se
consegue distinguir a calcite como nas fotografias apresentadas na Figura 5.38 e correspondentes
granulometria G1. Assim, torna-se difcil comparar a quantidade de calcite presente na granulometria
G1 com a da granulometria G2.

CALCITE

CALCITE

a) 10 Dias Bactrias G2 (30x)

b) 20 Dias B G2 (30x)

CALCITE
CALCITE

c) 30 Dias B G2 (30x)

d) 40 Dias B G2 (30x)

Figura 5 39 Fotografias obtidas no microscpio SEM evoluo de calcite ao longo do tempo nas amostras G2 tratadas com
bactrias (Fase III)

70

Um dos principais objectivos para se ter tirado as fotografias das Figuras 5.38 e 5.39 era poder
compara-las com fotografias tiradas por outros autores em estudos sobre o processo MICP e perceber
se estas tinham o mesmo aspecto. Assim, a Figura 5.40 ilustra as fotografias obtidas por Al Qabany et al
(2012) no microscpio electrnico para um solo arenoso com partculas entre os 90 e os 300m sujeito
ao processo de bio-cimentao com um ratio de injeco de alimento de 0.25M ( Ureia e CaCl2) cada 6h.

CALCITE

CALCITE

Figura 5 40 Amostras de solo arenoso com partculas entre 90 e 300 m observadas no miscroscpio
electrnico por Al Qabany et al (2012) aps serem submetidas ao processo MICP

Embora os solos estudados sejam diferentes e por isso no se identifica o mesmo aspecto para as
partculas de solo, observando as fotografias da Figura 5.40 e das Figuras 5.38 e 5.39 identifica-se os
mesmos cristais de calcite sob a forma de pequenas esferas. Sendo assim, confirma-se que ocorreu uma
real produo de calcite por parte das bactrias nesta fase e que, embora tenham surgido alguns
problemas, o estudo da tcnica MICP est a desenvolver-se com sucesso.
Na Figura 5.41 mostra-se o aspecto das amostras constitudas apenas por solo e gua para cada
granulometria.
Comparando as fotografias das Figuras 5.38 e 5.39 com as da Figura 5.41 difcil perceber se existe uma
diferena quanto quantidade de esferas presentes na superfcie dos gros de solo. No entanto
relembra-se que nas amostras sem tratamento, ou seja apenas compostas por solo e gua, as esferas
podem apenas corresponder a partculas de tamanhos diferentes mesmo nos solos com granulometria
quase uniforme e no a calcite.

a) Amostra G1- (30x)

b) Amostra G2 - (30x)

Figura 5 41 Fotografias de amostras sem tratamento, compostas apenas por solo e gua, obtidas no
microscpio SEM (Fase III)

71

Por fim, foi feito uma espectroscopia de energia dispersiva de raios X (EDS) que consiste em emitir um
feixe de electres sobre um mineral para se determinar a composio qumica de uma determinada
zona. Mais precisamente, os electres mais externos dos tomos e os ies constituintes de um mineral
so excitados pelo feixe emitido e quando isso acontece mudam de nveis energticos. Ao retomarem a
sua posio inicial, libertam a energia adquirida a qual corresponde a um comprimento de onda no
espectro de raios-X. Um detector instalado na cmara de vcuo do equipamento mede a energia
associada a esses electres. Como os electres de um determinado tomo possuem energias distintas,
possvel, no ponto de incidncia do feixe, determinar quais os elementos qumicos que esto presentes
naquele local (Endo et al, 2012).
Os resultados esto ilustrados na Figura 5.42, os picos presentes na Figura 5.42 c) e d) correspondem
aos diferentes elementos qumicos presentes na amostra e os crculos brancos presentes na Figura 5.42
a) e b) indicam em que zona da amostra que foi realizado o EDS.

a) Bactrias G2- 40 dias

c)

b) Controlo G2- 40dias

d) Controlo G2- 40 dias

Bactrias G2- 40 dias

Figura 5 42 Espectroscopia de energia dispersiva de raios X (EDS), a) e b) fotografias ilustrando em que sitio foi realizado o ensaio,
c) e d) resultados do ensaio

72

Como se observa na Figura 5.42 c) e d) existe a presena de cloreto de clcio (CaCO3) tanto nas amostras
com bactrias como nas de controlo. No entanto, nas amostras com bactrias a quantidade de clcio
presente na amostra aparentemente muito superior quantidade presente na amostra de controlo.
Este um bom resultado mas mesmo assim tem de se considerar o facto do ensaio poder ter sido
efectuado em zonas pouco representativas do resto da amostra.

Este resultado vem confirmar a presena de uma geometria diferente de minerais de clcio que at
agora no tinha sido observada nas amostras deste estudo. O mineral tem uma geometria cbica e o
seu aspecto encontra-se apresentado na Figura 5.36 A) e observado na Figura 5.42 a) no local onde se
encontra uma circunferncia branca e onde foi efectuado o EDS.
Quanto zona onde foi realizado o EDS para a amostra de controlo (Figura 5.42 b ) pode-se concluir que
esta tambm poder ser calcite mas em baixa quantidade. No entanto, como j tinha sido referido, no
solo com granulometria G2 as esferas podem tambm corresponder a partculas de finos presentes no
solo.

5.6 Fase IV
Esta ltima fase tem por objectivo consolidar o conhecimento apreendido nas fases anteriores e
procurar obter dados representativos da resistncia conseguida com o tratamento MICP. Deste modo,
prepararam-se trs amostras de cada caso. Procurou-se tambm compreender por que que os
provetes de controlo, em alguns casos, tm uma resistncia semelhante aos provetes tratados por
MICP. Procurou-se tambm perceber se a formao da camada superior de bio-cimento, com
diminuio de permeabilidade e que a causa da heterogeneidade de resistncia, natural ou se
causada pela drenagem deficiente, em particular, quando h colmatao do sistema de purga.

Comparativamente com os resultados obtidos para as amostras apenas compostas por solo e gua,
verificou-se em todas as fases que as amostras de controlo tm uma resistncia superior.

Resta saber se esse ganho de resistncia devido a bactrias naturalmente presentes no solo e
igualmente capazes de produzir calcite quando lhes fornecido os devidos nutrientes. Se esta hiptese
no for verificada, este fenmeno poder explicar-se apenas pelo facto de haver reaco qumica dos
reagentes introduzidos nos provetes todos os dias, formando tambm calcite e por consequente,
aumentando a capacidade resistente do terreno.

Para investigar o primeiro caso, nesta fase o solo utilizado na montagem dos provetes foi esterilizado
numa estufa de calor seco a 100C durante dois dias para assim eliminar todos os microrganismos
existentes naturalmente no solo.

73

Para o segundo caso, para alm de se alterar o sistema de drenagem da base, efectuou-se novamente o
estudo da quantidade de clcio e a porosimetria das zonas com bio-cimento.

Os provetes montados nesta fase so ilustrados na Figura 5.43. O sistema de descofragem foi mais uma
vez eficiente e as amostras ficaram praticamente intactas como se pode ver na Figura 5.43 b).

a)

b)
Figura 5 43 Provetes montados na Fase IV a) Provetes Finais antes do ensaio b) Amostras aps
descofragem e antes de irem a estufa

A Figura 5.44 mostra os provetes das diferentes granulometrias depois de permanecerem numa estufa a
100C durante 24horas.

G2

G1
Cor de solo

Cor de solo

Branco

Cor de solo

Controlo

Bactrias

Bactrias

Controlo

b)

a)

Figura 5 44 Amostras depois de irem estufa a 100C a) Granulometria G1 b) Granulometria G2

de referir que nesta fase j no se observa o efeito degrad de cores identificado nas fases anteriores.
Constata-se nas amostras de granulometria G2 uma ntida diferena de cores entre os provetes de
controlo e os provetes tratados com introduo de bactrias. Quanto granulometria G1, essa diferena
pouco visvel ou inexistente (Figura 5.43 a). Aparentemente, a alterao do sistema de drenagem
poder ter contribudo para uma distribuio mais homognea do alimento.

5.6.1 Resultados
No decorrer dos ensaios compresso observou-se dois diferentes tipos de rotura ilustrados na Figura
5.45. Na granulometria G2 (no quase uniforme) a rotura deu-se pela base e na granulometria G1
(quase uniforme) foram-se formando fendas verticais ao longo de toda a amostra.
A heterogeneidade observada na granulometria G2 j tinha sido verificada nas fases anteriores. As
amostras da granulometria G1 so visivelmente mais homogneas, o que pode explicar a forma como se
deu a rotura (Figura 5.45).

74

Esta homogeneidade nas amostras G1 pode ter a ver com a falta de actividade das bactrias na
produo de calcite devido ao problema de alimentao dos provetes. De facto, no final do quinto dia o
lquido de alimento deixou de percolar e pensa-se que as bactrias das camadas inferiores ficaram
praticamente sem nutrientes.
No entanto dentro de cada granulometria no se verificou nenhuma diferena em termos de rotura nos
provetes tratados por MICP e nos provetes de controlo (Figura 5.45).
Os grficos das Figuras 5.46 e 5.47 mostram as curvas tenso-deformao para os vrios casos. As
amostras seleccionadas so aquelas cujos valores obtidos para a resistncia so prximos dos valores
mdios para cada tipo de amostra.
Verifica-se na Figura 5.46 e 5.47 que os grficos de tenso/deformao correspondentes a amostras
com bactrias e de controlo, para ambas as granulometrias, apresentam um pico mas este encontra-se
melhor definido para as amostras com bactrias. Este resultado era esperado uma vez que se trata de
amostras cimentadas artificialmente com coeso verdadeira. No entanto, por causa de problemas de
instabilidade devido montagem da clula de carga, geometria das amostras pelo facto da superfcie
de contacto no ser perfeitamente horizontal e ainda porque se trata de amostras muito heterogneas,
as curvas obtidas apresentam andamentos pouco comuns e por isso no foi possvel obter dados sobre
a rigidez. Espera-se melhorar todos esses aspectos, assim como quantificar e comparar os valores das
rigidezes obtidas atravs dos diferentes tratamentos, em estudos futuros.
De qualquer forma possvel compreender que a rigidez inicial (deformaes inferiores a 0.005) dos
provetes maior com as bactrias e que os provetes preparados com gua so sempre menos rgidos e
menos resistentes do que os provetes com tratamento.
Os valores medidos em termos de resistncia neste ensaio encontram-se no Quadro 5.5. Como no
houve problemas com a descofragem as alturas das amostras esto compreendidas entre os 6 e os
7.5cm. Nesta fase no foram ensaiados os topos dos provetes.

G1

N2 - Bactrias

G2

N1 - Controlo

N3 -Bactrias

N3 - Controlo

Figura 5 45 Roturas Tipo observadas no ensaio compresso para as granulometrias G1 e G2 (Fase IV)

75

Ensaio Compresso - G1
250.0

(KPa)

200.0
150.0

G1-Bactrias
100.0

G1-Controlo
G1- gua

50.0
0.0
0.00

0.01

0.01

0.02

0.02

0.03

0.03

(%)
Figura 5 46 Resultados do ensaio compresso, Granulometria G1 (Fase IV)

Ensaio Compresso - G2
250.0

(KPa)

200.0
150.0

G2-Bactrias
100.0

G2-Controlo
G2-gua

50.0
0.0
0.00

0.01

0.01

0.02

0.02

0.03

0.03

(%)

Figura 5 47 Resultados do ensaio compresso, Granulometria G2 (Fase IV)

A quantificao do ganho de resistncia do tratamento com bactrias em relao ao controlo (B/C) e ao

solo no tratado (B/S), assim como o ganho de resistncia dos provetes de controlo tambm em relao
ao solo com gua (C/S) apresenta-se tambm no Quadro 5.5. Os grficos correspondentes ao valores
apresentados no Quadro 5.5 para comparar as melhorias obtidas entre tratamentos encontram-se nas
Figuras 5.48 e 5.49.

76

Quadro 5 5 Quantificao e Comparao do ganho de resistncia dos diferentes tratamentos

G1

Tenso (kPa)

Melhoria do
tratamento

G2

N da Amostra

Bactrias (B)

58.22

167.37

115.22

24.26

84.90

101.88

Controlo ( C)

231.66

255.91

172.23

50.94

48.51

40.02

15.77

15.77

Solo + Agua (S)

53.37

53.37

53.37

15.77

B/C

0.25

0.65

0.67

0.48

1.75

2.55

B/S

1.09

3.14

2.16

1.54

5.38

6.46

C/S

4.34

4.80

3.23

3.23

3.08

2.54

Comparao entre tratamentos (B/C e B/S)

Diferena entre tratamentos

7
6
5

B/C - G1

B/S - G1

B/C - G2

B/S - G2

11
0

Figura 5 48 Anlise comparativa entre tratamentos: com introduo de bactrias (B), controlo (C) e solo com gua (S)
(Fase IV)

Comparao entre tratamentos (C/S)

Diferena entre tratamentos

6
5
4

C/S - G1

C/S - G2

2
11
0

Figura 5 49 Anlise comparativa entre provetes de controlo (C) e solo com gua (S) (Fase IV)

Ao analisar os resultados obtidos no ensaio compresso quantificados no Quadro 5.5 e apresentados

nas Figuras 5.48 e 5.49, verifica-se que para solo de granulometria G1 os valores da resistncia
correspondentes aos provetes de controlo so superiores aos dos provetes tratados por bio-cimentao.

77

Olhando para o Quadro 5.5 e para a Figura 5.48 constata-se que a relao B/C, que corresponde
melhoria do tratamento com bactrias em relao ao controlo, para todos os provetes inferior a 1,0.
Mais uma vez, a menor resistncia observada nos provetes com bactrias pode ser explicada pelo facto
de ter havido uma certa dificuldade de percolao do lquido nutriente nas amostras de granulometria
G1. Ou pelo facto de se formaram minerais diferentes nos provetes com bactrias devido actividade
bacteriana e nos provetes de controlo devido reaco qumica entre os reagentes. possvel que os
minerais formados quimicamente sejam mais resistentes que os induzidos biologicamente.
Quanto s amostras de solo de granulometria G2, os resultados obtidos foram bastante satisfatrios
visto que a resistncia compresso das amostras com bactrias , em duas amostras, praticamente o
dobro da resistncia das amostras de controlo (Quadro 5.5). de referir que o mesmo no acontece
para o valor assinalado com um crculo no Quadro 5.5 uma vez que este provete foi ensaiado de forma
rpida com velocidade de 6mm/min ao contrrio dos outros que foram ensaiados de forma lenta com
velocidade de 1mm/min. por esta razo que se considera que esse valor pode ser desprezado.
Comparando as Figuras 5.46 e 5.47 tambm se verifica que os valores de resistncia, tanto para
amostras com bactrias como as controlo, para a granulometria G1 so superiores aos da granulometria
G2. Este fenmeno j tinha sido verificado na fase III, e pode-se supor que os problemas de percolao
encontrados ao longo do ensaio para as amostras da granulometria G1 so devido ao facto dos vazios
ficarem rapidamente colmatados com calcite, uma vez que, nesta granulometria os vazios so maiores e
as bactrias parecem ter mais facilidade em produzir bio-cimento. E talvez por o tamanho dos vazios
nesta granulometria ser maior que, tanto para provetes com bactrias como de controlo, poder ser
mais fcil haver grupos de bactrias ou, no controlo, haver precipitao porque h o contacto de maior
quantidade de reagentes. No entanto, como j foi dito, ainda no se consegue explicar por que razo os
provetes de controlo para a granulometria G1 tm uma resistncia superior aos provetes com bactrias,
uma vez que as bactrias deveriam acelerar o processo de bio-cimentao e por consequente dever-seia atingir uma maior resistncia para o mesmo tempo de tratamento (Figura 5.46 e Quadro 5.5).
Os resultados demonstram que as amostras tratadas com bactrias e as de controlo tm uma
resistncia claramente superior das amostras compostas apenas por solo e gua. Todavia os valores
obtidos so bastante diferentes para as duas granulometrias. Para a G1, o valor mnimo para quantificar
a melhoria do tratamento com bactrias em relao ao solo com gua de B/S=1,09 e mximo valor
para essa diferena de B/S=2,16 (Quadro 5.5). Para a granulometria G2 tambm existe uma forte
discrepncia entre os valores sendo o mnimo B/S=1,54 e o mximo B/S=6,46 (Quadro 5.5). Quando se
compara a resistncia dos controlos com a do solo com gua (C/S) os valores de resistncia continuam a
ser superiores a 1,0, mas desta vez, tanto para a granulometria G1 como para a G2, existe uma menor
diferena entre eles, sendo para a granulometria G1, o mnimo C/S=3,23 e o mximo C/S=4.80, e para a
granulometria G2 o mnimo C/S=2,54 e o mximo C/S=3,23. Isto leva a crer que as bactrias so
responsveis pelas discrepncias de resultados observadas nos provetes. Pode-se admitir que quando as

78

condies so favorveis para a sobrevivncia das bactrias no solo estas produzem calcite de forma
natural, mas assim que uma das condies afectada, por qualquer razo, estas deixam de efectuar o
seu trabalho. No seria de esperar diferentes actividades bacterianas para cada provete, uma vez que
todos eles encontram-se submetidos s mesmas condies. Os factores que influenciam o
comportamento das bactrias foram apresentados na seco 2.1 e mostram que elas so bastante
sensveis apesar de sobreviverem em ambientes relativamente hostis.
Se se retomar a hiptese feita na seco 5.6, em que a resistncia dos provetes de controlo era
unicamente devido ao facto dos reagentes do lquido nutriente introduzidos nos provetes todos os dias
tambm formarem calcite que serve de ligante para as partculas de solo, pode-se talvez explicar a razo
para os resultados obtidos para provetes de controlo serem menos diferentes uns dos outros. Ou seja,
se no se introduziu bactrias no solo h uma menor probabilidade destas serem afectadas por algum
factor e deixarem de produzir calcite. Assim, supe-se que a resistncia dos provetes de controlo seja
unicamente devido a uma reaco qumica, que ocorre quando se introduz o lquido de alimento no
solo, e que acaba por ligar as partculas do solo tornando o todo mais resistente

5.6.2 Quantificao do Carbonato de Clcio (CaCO3)

Nas amostras tratadas com introduo de bactrias foram analisadas quimicamente duas partes
diferentes, o topo e a base. O objectivo perceber se existe realmente uma maior concentrao de
bactrias e por consequente uma maior produo de bio-cimento no topo dos provetes uma vez que,
como j foi referido, esta parte visivelmente mais resistente do que o resto.
Relembra-se que este ensaio efectuado em amostras com uma massa de 20g e que os clculos para
3

passar de uma quantidade em g/kg para kg/m foram apresentados na seco 5.5.2. Desta vez para cada
provete tratado com a tcnica MICP foi analisada uma amostra com 20g de solo correspondente parte
do topo e uma amostra com 20g de solo correspondente base do provete. Nos provetes de controlo
optou-se por apenas enviar para anlise 20g de solo correspondentes parte do topo.
Apresenta-se no Quadro 5.6 os resultados deste ensaio:
Quadro 5 6 Resultados da Anlise Qumica (Fase IV)

Bactrias

G1
G2

g/kg
kg/m

g/kg
kg/m

Controlo

Topo

Base

Mdia

Topo

35,0

8,4

21,7

11,0

62,7

15,0

38,9

19,7

46,0

24,0

35,0

13,0

82,3

43,0

62,65

23,3

79

Como se efectuou na Fase III, comparou-se os resultados obtidos com os valores identificados em
estudos anteriores sobre o processo MICP, esta comparao encontra-se apresentada na Figura 5.50 e
de referir que para as amostras com bactrias o valor apresentado o valor mdio entre a resistncia
do topo e da base do provete e no caso do controlo apenas o valor correspondente resistncia do
topo do provete.

G1- Bactrias
G1- Controlo
G2- Bactrias
G2- Controlo

Figura 5 50 Comparao com as quantidades de carboneto de clcio apresentadas

no estudo realizado por Al Quabany et al (2012) para a granulometria G1 e G2
(Fase IV)

Os resultados quantificados no Quadro 5.6 confirmam que, para ambas as granulometrias, existe uma
maior produo de CaCO3 na parte superior dos provetes tratados com introduo de bactrias. Este
efeito j tinha sido identificado em todas as fases, no entanto ainda no tinha sido quantificado.
Contudo, para a granulometria G1, a quantidade de calcite no topo do provete aproximadamente
quatro vezes superior da base, enquanto que, para a granulometria G2 essa diferena apenas do
dobro. Tanto para a granulometria G1 como para a G2, pode-se concluir que a maior parte das bactrias
activas, por alguma razo, se concentra no topo do provete. Podemos supor que, como na
granulometria G1 os tamanhos dos vazios so maiores e a maior parte das bactrias fica concentrada no
topo, a calcite produzida nos primeiros dias colmata os vazios e o lquido de alimento deixa de percolar
ao fim de alguns dias de ensaio, e portanto, por falta de nutrientes que os nveis de calcite so menos
elevados. Como na granulometria G2 os vazios so mais bem distribudos, por isso que se consegue
atingir quantidades de calcite mais elevadas e uma distribuio mais uniforme de CaCO3. No entanto
esta teoria no concordante com os resultados obtido na Figura 5.46 e 5.47 uma vez que os grficos
mostram que os provetes com granulometria G1 tm uma resistncia superior aos da granulometria G2
o que indicaria maior quantidade de calcite na G1 e v-se que no pelo Quadro 5.6. Contudo,
fundamental relembrar que no ensaio compresso o provete rompe sempre pela parte mais fraca e os
contrastes de resistncia podem estar a penalizar muito a resistncia. Como os provetes no so de
todo homogneos os valores obtidos podem no ser totalmente representativos da realidade.

80

Na granulometria G1, verifica-se que o provete de controlo tem uma maior quantidade de calcite do que
a parte inferior (base) do provete tratado por MICP. Este efeito no se comprova na granulometria G2,
pois o provete de controlo apresenta menor quantidade de bio-cimento do que ambas as partes do
provete com bactrias. Este resultados so muito interessantes uma vez que vm confirmar os
resultados obtidos nas Figuras 5.46 e 5.47. Mais precisamente, sabe-se que quando uma amostra
submetida ao ensaio compresso esta rompe sempre pela parte mais fraca, para a granulometria G1
verifica-se no Quadro 5.6 que a zona mais fraca, ou seja com menos quantidade de bio-cimento (CaCO3
), a zona da base do provete. Sendo a quantidade de calcite no topo do provete de controlo superior
da base do provete com bactrias natural que no ensaio compresso se tenha obtido resultados
mais elevados para a resistncia dos controlos.
Para a granulometria G2, verifica-se no Quadro 5.6 que o topo do provete de controlo tem menor
quantidade de calcite que a base do provete com bactrias, ou seja natural que no ensaio
compresso os valores de resistncia obtidos para os provetes com bactrias sejam mais elevados do
que os de controlo, uma vez que os provetes de controlo tm menos calcite e por consequente menos
resistncia.
Comparando com os valores apresentados por Al Quabany et al (2012) no seu estudo (Figura 5.50), os
valores de quantidade de calcite correspondentes s amostras de controlo da granulometria G1
encontram-se abaixo do intervalo de valores apresentado pelo autor. Este resultado estranho uma vez
que na Figura 5.46 se verifica que a resistncia dos controlos para esta granulometria superior
resistncia de todas as outras amostras. No entanto, os resultados correspondentes s outras amostras,
G1-B-Topo, G2-B-Base e Topo, G2-C, encontram-se no intervalo de valores apresentado pelo autor
embora correspondam s quantidades mais baixas apresentadas. Isto indica que o processo de biocimentao funcionou como previsto. No entanto, os valores obtidos nesta tese so bastante baixos
comparando com os valores apresentados por Al Quabany et al (2012), este efeito pode ser devido a
diversos factores, nomeadamente, durao do processo, temperatura, tipo de solo, ph do solo, tempo
entre injeces de nutrientes e velocidade de carga aplicada durante o ensaio de compresso. Desta
anlise conclui-se que ainda no se conseguiu reunir todas as condies necessrias para se obter uma
mxima produo de bio-cimento e medir os seus efeitos nas caractersticas resistentes do solo.

5.6.3 Medio da Quantidade de Amnia no Solo

Relembra-se que a descrio deste ensaio foi feita na seco 5.2.4.5 deste captulo e que o objectivo
quantificar a quantidade de amnia no solo, pois este pode ser um indicador da real actividade
bacteriana durante o processo MICP. Por outro lado, a amnio tem impactos negativos no ambiente e
por esta razo que a sua produo tem de ser controlada.
Os resultados obtidos neste ensaio encontram-se quantificados no Quadro 5.7 e ilustrados na Figura
5.51 e de referir que, embora o lquido de purga tenha sido recolhido no final de cada dia de

81

tratamento, o teste para medio da quantidade de amnia apenas foi realizados para a purga do final
do quarto, stimo e dcimo dia de tratamento MICP.

Quadro 5 7 Resultados do ensaio para quantificao da amnia no lquido de purga

Durao do processo MICP (dias)
4
G1
G2

10

Bactrias (mg/l)

100 200

Controlo (mg/l)

0 10

30 60

400

Bactrias (mg/l)

Controlo (mg/l)

0 10

10 30

Figura 5 51 Fitas indicadoras da quantidade de amnia no

lquido de purga e correspondente escala de cores

Neste ensaio esperava-se medir um aumento da quantidade de amnia, ou que essa quantidade se
mantivesse constante, no solo ao longo do tempo, pois essa seria uma prova da real actividade das
bactrias Bacillus pasteurii no solo. No entanto, observando o Quadro 5.7, isto apenas se verifica para a
amostra G2 de controlo. Tal no seria de esperar pois partida os controlos no tm bactrias, por isso,
a amnia presente neste tipo de amostras deveria ser apenas devido ao lquido de alimento e ao meio
introduzido na montagem pois estes contm pequenas quantidade de amnia na sua composio como
foi referido na seco 3.2.1 e 3.3. Os valores obtidos para as restantes amostras tambm so pouco
claros, uma vez que se verifica uma diminuio da quantidade de amnia ao longo do tempo. H
produo de amnia na reaco qumica do controlo e h outras substncias presentes no alimento que
afectam os resultados do teste de amnia e pode ser isso o que se est a detectar no controlo. Por todas
estas razes que com este ensaio no se consegue tirar nenhuma concluso sobre a actividade
bacteriana no solo.

82

5.6.4 Porosimetria por Intruso de Mercrio no Solo

Relembra-se que a maneira como este ensaio realizado encontra-se apresentada na seco 5.2.4.6 e
que o objectivo era comprovar que existe, com a formao de calcite por parte das bactrias, uma real
diminuio dos vazios na granulometria G1 responsvel pela dificuldade de percolao do lquido de
alimento no final do quarto dia (Quadro 5.1).
Os resultados obtidos neste ensaio so apresentados na Figura 5.52 e de referir que cada pico
presente no grfico indica qual o dimetro de poros presente com maior abundancia no solo.
Na Figura 5.52 so apresentadas quatro curvas, duas delas correspondem a amostras com solo de
granulometria G1, uma com bactrias a outra de controlo e as duas outras correspondem a amostras de
solo com gua para igualmente uma granulometria G1. de referir que as curvas de solo com gua
foram obtidas atravs da curva granulomtrica do solo, sabendo que o dimetro dos poros encontra-se
no intervalo entre D/5 e D/10 em que D corresponde ao dimetro do gro.

Pore Size Distribution Curve

0.70
0.60

G1-Bactrias

0.50

G1-Controlo

0.40

G1-SOLO D/5

0.30

G1 -SOLO D/10

0.20
0.10
0.00
1

10

100

1000

10000

100000

Pore size (nm)

Figura 5 52 Resultados obtidos no ensaio de porosimetria por intruso de mercrio (Fase IV)

Observando a Figura 5.52 verifica-se que, para amostras com bactrias, a maior percentagem de poros
presente no provete tem dimetro predominante de 14.5m. Para as amostras de controlo, a maior
parte dos poros tm dimetro de 19m e, para o solo com gua, o dimetro encontra-se compreendido
no intervalo 37m e 73m. Este resultado mostra que existe uma real diminuio do tamanho dos
vazios nas amostras tratadas sendo maior para o caso com bactrias, e essa diminuio pode ser
explicada pelo facto de haver uma real produo de calcite que acaba por colmatar os poros presentes
no solo ao longo do tempo. Este fenmeno explica por isso porqu que ocorreram problemas de
percolao nas amostras de granulometria G1 no final do quarto dia, mais precisamente, a calcite
formada pelas bactrias ao longo do tempo acabou por formar uma barreira percolao do lquido
nutriente para esta granulometria.

83

84

Capitulo 6 Comparao entre Bio-cimento e Cimento

Como foi referido na seco 4.4, este ensaio tem por objectivo comparar a resistncia obtida atravs do
3

processo MICP e a resistncia de um cimento com dosagem de 150kg/m e com relao gua/cimento
(A/C) de 2.0. A baixa dosagem e a forte relao A/C permite que se consiga uma mistura homognea do
solo e da calda e por consequente faz com que os provetes sejam praticamente homogneos.
Relembra-se que o ensaio compresso foi realizado para provetes submetidos a 3 e 28 dias de cura.

6.1 Resultados
A Figura 6.1 ilustra as diferentes formas de rotura obtidas no ensaio compresso realizado com
provetes de cimento e a Figura 6.2 apresenta os resultados obtidos em termos de resistncia durante o
ensaio.

G1
N1 3 dias de
cura

N1 28 dias
de cura

N2 3 dias de
cura

N5 3 dias de
cura

N6 3 dias de
cura

N2 28 dias
de cura

G2
N5 28 dias
de cura

Figura 6 1 Exemplo de roturas observadas em provetes de cimento com 3 e 28 dias de cura (Fase IV)

85

Ensaio compresso - Cimento

3
2.5
y = 0.0512x + 0.7164

Fora (KN)

G1 - 3 dias de cura
G1 - 28 dias de cura

1.5

G2 - 3 dias de cura
y = 0.0199x + 0.4419

G2 - 28 dias de cura
Linear (G2)

0.5

Linear (G1)

0
0

10

15

20

25

30

Tempo (dias)

Figura 6 2 Resultados do Ensaio Compresso realizado em provetes de cimento com dosagem de 150 Kg/m3 e
relao A/C de 2,0. (Fase IV)

A quantificao do ganho de resistncia do tratamento com cimento em relao ao tratamento MICP

(H/B), ao controlo (H/C) e ao solo no tratado (H/S) apresenta-se no Quadro 6.1. Os grficos
correspondentes ao valores apresentados no Quadro 6.1 efectuados para comparar as melhorias
obtidas entre tratamentos encontram-se na Figura 6.3. de referir que os valores apresentados
correspondem ao valor mdio obtido entre trs amostras submetidas a 3 dias de cura e que os valores
de resistncia para amostras com bactrias (B) e de controlo (C) foram os obtidos na Fase IV deste
estudo. Visto que os valores de resistncia para provetes com 3 dias de cura j so bastante elevados
comparativamente com os valores de resistncia obtidos atravs do processo MICP optou-se por no se
fazer a comparao com os valores obtidos para provetes submetidos a 28 dias de cura.

Quadro 6 1 Quantificao e Comparao do ganho de resistncia dos diferentes tratamentos em relao ao

cimento

Tenso (kPa)

Melhoria do tratamento

G1

G2

Cimento com 3 dias de cura (H)

606,43

1055,18

Bactrias (B)

113,60

70,34

Controlo ( C)

219,93

46,49

Solo + Agua (S)

53,37

15,77

H/B

5,34

15,00

H/C

2,76

22,70

H/S

11,36

66,91

86

Comparao entre tratamentos (H/B , H/C e H/S)

Diferena entre tratamentos

80.0
70.0
H/B - G1

60.0

H/C - G1

50.0

H/S - G1

40.0

H/B - G2

30.0

H/C - G2

20.0

H/S - G2

10.0
0.0

Figura 6 3 Anlise comparativa entre tratamentos com introduo de cimento (H), de bactrias (B), controlo (C) e
solo com gua (S)

Como seria de esperar, verifica-se na Figura 6.2 que a resistncia para provetes submetidos a 28 dias de
cura superior resistncia obtida para provetes submetidos a apenas 3 dias de cura. Para a
granulometria G1 o ganho de resistncia com o tempo de cura (28dias/3dias) de 2 e para a
granulometria G2 de 2,5, ou seja os provetes ganharam mais do dobro da resistncia com o tempo de
cura.
Verifica-se igualmente que os valores da resistncia para provetes com granulometria G2 so superiores
aos da granulometria G1, ao contrrio do que aconteceu na Fase IV para provetes tratados por MICP. No
entanto este resultado era esperado uma vez que, como se viu em estudos realizados sobre argamassas,
a granulometria G2 contem partculas de diferentes tamanhos e por consequente consegue-se um
melhor rearranjo das partculas de solo e um menor ndice de vazios que levam a um aumento de
resistncia. importante relembrar que para ambas as granulometrias a quantidade de cimento
introduzida a mesma e por esta razo a resistncia apenas est associada distribuio do cimento
nos vazios. Para as amostras tratadas por MICP a resistncia encontra-se associada percentagem de
CaCO3 produzida pelas bactrias ao longo do processo.
Analisando os resultados obtidos no Quadro 6.1 constata-se que o valor da resistncia do tratamento
com introduo de cimento (H) cinco vezes superior ao valor obtido para provetes de granulometria
G1 tratados com bactrias, e quinze vezes superior para provetes de granulometria G2 tambm
tratados com bactrias. De maneira geral, observa-se que existe uma maior diferena entre os valores
de resistncia obtidos com provetes de cimento comparativamente com os valores de resistncia de
provetes de granulometria G2 submetidos aos diferentes tratamentos. Tal natural uma vez que os
valores obtidos na Fase IV para provetes com esta granulometria foram bastante mais baixos.
No entanto, importante referir que, ao contrrio dos provetes submetidos ao processo MICP, os
provetes com cimento eram totalmente homogneos devido forte relao gua-cimento (A/C=2,0), e

87

eram quase verticais. Considera-se que estes foram alguns dos factores que influenciaram o ensaio de
compresso das amostras tratadas por bio-cimentao e foi tambm por as amostras no serem
homogneas que no foi possvel atingir valores de resistncia mais elevados.
3

Ao fazer-se a relao entre a dosagem de cimento (150kg/m ) e a mxima quantidade de CaCO3 medida
3

nos provetes com bactrias na Fase IV (84 kg/m ), apresentado na seco 5.6.2, obtm-se uma diferena
de 150/84= 1,8. Contudo o valor mais baixo para a diferena entre as resistncias obtidas nos dois tipos
de tratamentos H/C (Quadro 6.1) de 5,34 o que nos leva a concluir que, embora o tratamento com
introduo de cimento seja prejudicial para o ambiente, em termos de resistncia sem dvida mais
eficaz porque o ganho em termos de resistncia maior que o ganho em termos de CaCO 3.
De seguida, na Figura 6.4, apresenta-se desta vez a comparao entre os resultados, em termos de
quantidade de clcio e de resistncia, obtidos para as amostras de solo com cimento realizadas neste
estudo e as amostras submetidas ao processo MICP e apresentadas no estudo realizado por Al Quabany
et al. (2012).
As amostras de cimento presentes na Figura 6.4 foram apenas submetidas a 3 dias de cura e como
vimos anteriormente as amostras com 28 dias de cura tm o dobro da resistncia. Mesmo assim, e para
esta fraca dosagem, verifica-se que as amostras de cimento, para ambas as granulometrias, encontramse com um nvel mais elevado de CaCO3 comparativamente com as amostras tratadas com bactrias. No
entanto, de referir que dos 150kg/m

(dosagem de cimento) 85% a 95% calcrio constitudo

basicamente de CaCO3 mas pode conter varias impurezas, nomeadamente magnsio, silcio, alumnio e
ferro.
Em termos de resistncia, para a granulometria G1 as amostras de cimento encontram-se na mdia das
amostras com bactrias, mas para a granulometria G2 a amostra de cimento chega ao mesmo nvel que
os valores mais elevados obtidos para amostras tratadas por MICP e existem trs amostras com
dosagens de carbonato de clcio inferiores mas com resistncia superior. Mesmo assim, no se pode
esquecer que a dosagem de cimento, assim como o tempo de cura escolhido para a realizao das
amostras, corresponde a um cimento pobre ou seja de fraca resistncia.

G1- Cimento
G2- Cimento

Figura 6 4 Anlise comparativa entre tratamentos com introduo de cimento (H),

de bactrias (B), controlo (C) e solo com gua (S)

88

6.2 Porosimetria por Intruso de Mercrio no Solo

semelhana do ensaio realizado para as amostras da Fase IV e apresentado na seco 5.6.2, foi desta
vez realizado um ensaio de porosimetria por introduo de mercrio em amostras de solo com uma
3

dosagem de 150kg/m de cimento e uma relao A/C=2,0.

O objectivo era comprar o tamanho dos vazios em amostras tratadas com introduo de cimento e
amostras submetidas ao processo MICP.
Os resultados obtidos encontram-se na Figura 6.5.

Pore Size Distribution Curve

0.70
0.60

G1-Bactrias

0.50

G1-Controlo
G1-Cimento

0.40
0.30
0.20
0.10
0.00
1

10

100

1000

10000

100000

Pore size (nm)

Figura 6 5 Ensaio de porosimetria por introduo de mercrio no solo realizado para amostras com granulometria G1 (
com bactrias e de controlo) e amostras de cimento com dosagem de 150kg/m3 e relao A/C de 2.0.

Verifica-se na Figura 6.5 que existe uma ntida diferena quanto aos tamanhos dos poros das amostras
correspondentes aos diferentes tratamentos, sendo este de aproximadamente 14,5m para amostras
de granulometria G1 tratadas com bactrias, 19m para amostras de controlo e de 0,028m para
amostras tratadas com introduo de cimento. Visto que a estrutura das amostras com bactrias
muito mais aberta do que a das amostras com cimento, em que o tamanho dos poros se reduz
drasticamente, conclui-se que com a introduo de cimento no solo consegue-se uma maior colmatao
dos vazios e por consequente explica ser possvel atingir resistncias mais elevadas devido maior
coeso conseguida.

89

90

Captulo 7 Consideraes Finais e Estudos Futuros

7.1 Consideraes Finais
Neste trabalho foi estudado o tratamento de solos arenosos atravs da tcnica MICP. O trabalho
desenvolveu-se em quatro fases, cada uma com o objectivo de complementar a fase anterior, sendo o
objectivo final encontrar as melhores condies para obter a mxima resistncia possvel atravs deste
tratamento. Como foi a primeira vez no IST que se abordou o tema da bio-cimentao, este foi um
estudo de tentativa e erro com a inteno de se optimizar o sistema e determinar quais os factores que
influenciam a produo de bio-cimento. Ao longo deste estudo foram realizados diversos ensaios a fim
de quantificar a resistncia obtida pelo processo de bio-cimentao (ensaio de compresso simples e
ensaio ao esmagamento), estimar a durabilidade das amostras tratadas (ensaio de submerso
prolongada) e para controlar a presena das bactrias no solo e se se encontravam em actividade no
final do perodo de tratamento (microscpio electrnico SEM, quantificao da quantidade de calcite
nas amostras, medio da quantidade de amnio, porosimetria por intruso de mercrio, etc). Foram
montados provetes de controlo, provetes com mistura solo-cimento e provetes apenas com solo e gua,
que foram sujeitos aos mesmos tipo de ensaios para obteno da resistncia. A comparao entre os
resultados obtidos para os provetes com tratamento MICP e os provetes de controlo e gua permitiu
compreender a importncia da actividade bacteriana. A comparao entre os resultados nos provetes
com tratamento MICP e os provetes de solo-cimento, que um tratamento tradicional, permitiu
compreender se vivel substituir uma tcnica pela outra.
A primeira fase (Fase I), teve uma enorme importncia no estudo pois serviu para aprendizagem do
processo biolgico do tratamento de bio-cimentao, nomeadamente todo o processo de manipulao
de clulas e de produo de alimento.
No entanto houve vrios problemas no decorrer deste ensaio devido descofragem e compresso. De
facto, o sistema de descofragem revelou ser inadequado e por isso foi difcil retirar as amostras intactas
dos moldes. Por outro lado, como as amostras ainda se encontravam hmidas no suportaram o peso
da clula de carga (montada inicialmente numa cmara triaxial) e por isso partiram-se antes do incio do
ensaio compresso. Deste modo, no foi possvel realizar ensaios compresso e recorreu-se a
ensaios ao esmagamento dos fragmentos recuperados. No entanto estes resultados tm tambm alguns
erros importantes associados, nomeadamente a medio do dimetro dos fragmentos ensaiados, que
foi feita de forma aproximada e os fragmentos no apresentavam uma forma perfeitamente esfrica.
Para alm disso, a prensa foi adaptada com placas de madeira que no estavam fixas e no foi possvel
assegurar que se encontravam paralelas durante todo o ensaio e por fim poder tambm ter havido
pouca sensibilidade da prensa para fragmentos de pequena dimenso.

91

Mesmo assim, sendo os valores afectados de erro, deste primeiro ensaio pode-se concluir que existe um
ganho de resistncia associado introduo de bactrias no solo, uma vez que a resistncia obtida para
amostras tratadas com bactrias mais elevada do que a dos controlos.
As amostras realizadas nesta fase foram observadas no microscpio electrnico SEM e, como ainda se
encontravam hmidas, foi identificado a presena de biofilme e de cristais de calcite indicadores da real
presena das bactrias no solo, certamente bactrias do tipo B. pasteurrii.
O ensaio da segunda fase (Fase II) teve por objectivo comparar resultados em amostras com
granulometrias diferentes e onde se promoveu a bio-cimentao a temperaturas diferentes, ou seja
20C (no laboratrio) e 30C (em estufa). O sistema de descofragem escolhido para esta fase ainda no
foi o adequado porque algumas amostras acabaram por ficar fracturadas na desmontagem. Devido ao
facto das amostras no terem todas as mesmas dimenses, ao nmero insuficiente de provetes
intactos, e por estas no se encontrarem perfeitamente verticais, os resultados obtidos nesta fase
tambm so pouco representativos. Mesmo assim, pela anlise dos resultados e de estudos realizados
por outros autores conclui-se que a temperatura de 30C favorece a produo de calcite. O ensaio de
submerso em gua veio confirmar o que j tinha sido identificado na fase anterior e no final do ensaio
desta segunda fase, nomeadamente o facto de haver um dgrad de bio-cimento ao longo da altura das
amostras. Este resultado traduz-se numa heterogeneidade de resistncia em altura.

O ensaio da terceira fase (Fase III) foi constitudo por quatro etapas, em que se alimentaram as amostras
durante perodos de tempo crescentes: 10 dias, 20 dias, 30 dias e 40 dias. As diferentes duraes
permitiram estudar se o tempo de ensaio era favorvel para a eficincia das bactrias na produo de
calcite.
Nesta fase o sistema de descofragem foi finalmente adequado, mas observaram-se problemas na
drenagem ao fim de alguns dias. Como o lquido de alimento teve dificuldade em percolar pensa-se que
as bactrias no foram devidamente alimentadas e que o tratamento no decorreu como previsto.
Mesmo assim, foram analisados os resultados e pode admitir-se, se se comparar as resistncias obtidas
para as diferentes duraes, que a dosagem de bio-cimento produzido ao fim de 40dias pode ser
considerada semelhante dos 10, 20 e 30 dias por ter havido dificuldade em percolar o alimento devido
colmatao dos vazios nas camadas superiores do provete.
As amostras desta fase tambm foram observadas no microscpio, mas desta vez encontravam-se
completamente secas e portanto no foi possvel observar restos de bactrias e os cristais observados
podem ter resultado da precipitao de sais. Foram identificados imprints (pegada bacteriana), o que
indica a presena de bactrias no solo antes de este ter sido colocado na estufa. Foram tambm
detectadas novas formas de cristais com clcio na sua constituio.

92

A ltima fase (Fase IV) teve por objectivo consolidar o conhecimento apreendido nas fases anteriores e
procurar obter dados representativos na resistncia conseguida com o tratamento MICP. Nas fases
anteriores constatou-se que os provetes de controlo tinham, em alguns dos casos, uma resistncia
superior s amostras tratadas com bactrias. Por se pensar que essa resistncia devido a bactrias do
tipo B.pasteurrii naturalmente presentes no solo e capazes de produzir calcite quando lhes fornecido
os devidos nutrientes, o solo utilizado na montagem dos provetes foi esterilizado numa estufa de calor
seco a 100C durante dois dias, para assim eliminar todos os microrganismos existentes naturalmente
no solo. Nesta fase voltou a ser identificado o dgrad de bio-cimento nas amostras e, por consequente,
a diferena de resistncia em altura. Este efeito foi comprovado pelo ensaio de quantificao de
carboneto de clcio que demonstrou que existe realmente uma maior quantidade de calcite no topo das
amostras.

Atravs da anlise dos resultados obtidos no ensaio compresso constatou-se que, para as amostras
de granulometria G1, os valores de resistncia dos provetes de controlo so superiores aos obtidos para
amostras tratadas com bactrias. O mesmo no acontece para a granulometria G2, pois as amostras
tratadas com bactrias revelam ter uma resistncia mais elevada do que os controlos. Por outro lado,
verificou-se que com a granulometria G1 obtm-se valores de resistncia mais elevados do que para a
granulometria G2. No entanto, constatou-se que para ambas as granulometrias, as amostras tratadas
com introduo de bactrias assim como as amostras de controlo, tm uma resistncia muito mais
elevada do que as amostras que no foram submetidas a qualquer tipo de tratamento (solo + gua).

O ensaio de porosimetria por intruso de mercrio veio reforar esses resultados uma vez que mostrou
que existe uma diminuio dos vazios de maiores dimenses presentes no solo. Esse efeito devido
colmatao dos vazios com a calcite produzida pelas bactrias. Assim sendo, conclui-se que o
tratamento MICP induz um real aumento de resistncia e reduz a permeabilidade do solo.

Contudo, a resistncia das amostras tratadas por bio-cimentao comparativamente com a das
amostras tratadas com injeco de uma fraca dosagem de cimento e submetidas a trs dias de cura,
continua a ser bastante mais baixa.
Em concluso, a bio-cimentao uma tcnica que funciona e que tem um enorme potencial, no
entanto necessrio optimiz-la para obter distribuies homogneas em profundidade que como se
sabe condicionam os valores de resistncia, rigidez e permeabilidade. Apenas depois de se conseguir
homogeneidade do tratamento que ser possvel obter provetes com geometrias compatveis com os
equipamentos de ensaio usados tradicionalmente em Geotecnia, e assim obter valores fiveis para estas
caractersticas do solo tratado. S apenas depois de se obterem estes valores de resistncia, rigidez e
coeficiente de permeabilidade que esta tcnica pode ser comparada, e posteriormente prefervel, com
as tcnicas tradicionais de tratamento de solo, que so extremamente poluentes e constituem um
problema ambiental.

93

7.2 Estudos Futuros

Condies Favorveis Actividade Bacteriana
necessrio encontrar as melhores condies para que as bactrias consigam produzir a maior
quantidade de calcite possvel no solo. Como foi visto neste estudo, h inmeros factores que podem
afectar a sobrevivncia das bactrias no solo e por consequente a produo de calcite. fundamental
realizar novos ensaios, confirmar e complementar os resultados obtidos neste estudo com o objectivo
de perceber qual a influncia do tamanho das partculas, da temperatura, da durao do tratamento,
etc, na produo de calcite.

Controlo
Seria interessante perceber o que realmente d resistncia aos provetes de controlo. Neste estudo,
foram estabelecidas duas hipteses e seria importante valid-las ou encontrar uma nova explicao para
esse ganho de resistncia. A primeira hiptese estabelecida foi que existem bactrias do tipo
B.pasteurrii naturalmente presentes no solo e estas so igualmente capazes de produzir calcite quando
lhes fornecido os devidos nutrientes. A segunda hiptese consiste em dizer que existe uma reaco
qumica entre os reagentes e precipitao da calcite, e por consequente a capacidade resistente do
terreno aumenta. Infelizmente neste estudo no foi possvel validar nenhuma destas hipteses.

Sistema de Injeco
Como foi visto em estudos sobre este mesmo tema realizados por outros autores, consegue-se uma
maior e mais uniforme produo de calcite se se conseguir injectar em profundidade ou fornecer
quantidades menos elevadas de lquido de alimento mas com mais frequncia. Seria necessrio pr em
prtica um sistema de alimentao automtico capaz de alimentar os provetes vrias vezes ao dia e com
acesso a toda a altura do molde. Neste estudo o sistema de injeco foi feito de forma manual e por isso
apenas foi possvel introduzir o lquido de alimento nos provetes uma vez por dia.
Um dos principais problemas encontrados ao longo deste estudo foi a falta de homogeneidade de
resistncia em altura nas amostras. De facto, verificou-se que existe uma maior produo de calcite no
topo das amostras o que o torna bem mais resistente do que o resto do provete. necessrio perceber
se realmente possvel obter amostras homogneas ou se o tratamento MICP apenas adequado para
zonas superficiais.
Pondo em prtica um sistema de injeco em profundidade e a nveis diferentes poder ser possvel
conseguir uma melhor repartio do lquido de alimento, das bactrias e por consequente do biocimento e obter amostras mais homogneas em termos de resistncia.

94

Estudos mais Fundamentados

Seria interessante perceber se alguns dos cristais observados esto exclusivamente associados
presena de bactrias no solo. Para isso, necessrio observar com mais rigor as amostras tratadas por
MICP e as amostras de controlo e perceber se existem nesses dois tipos de provetes minerais diferentes
com geometrias diferentes que poderiam eventualmente influenciar a resistncia e a permeabilidade do
solo. Essa anlise no foi feita neste estudo uma vez que no era o objectivo definido.

95

96

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Nri, R (2013) Consideration of bonding in the behaviour of a sand-cement mixture simulating jet grouting,
Tese de Mestrado, Instituto Superior Tcnico, Universidade de Lisboa
Ng, W.S.; Lee, M.N. and Hii, S.L. (2012), An overview of the factors affecting microbial-induced calcite
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98

ANEXOS
ANEXO 1
Clculos e quantidades necessrias para produzir 100ml de meio bacteriano.

Extracto de levedura:

Ci = 50g/l, Cf = 20g/l, Vf = 100ml

50 x Vi = 20 x 100
Vi = 40ml

50g/l

1000ml

40ml

m = 2g + 40ml de H2O

(NH4)2SO4 (Sulfato de Amnio): Ci = 50g/l, Cf = 10g/l, Vf = 100ml

50 x Vi = 10 x 100
Vi = 20ml

50g/l

1000ml

20ml

Tris:

m = 1g + 20ml de H2O

Ci = 1M, Cf = 0,13, Vf = 100ml

1 x Vi = 0,13 x 100
Vi = 13ml

C=
n=

n
V
m
M

1M =

n
0,013

0,013 =

121,4

n = 0,013mol
m=1,58g + 13ml de H2O

Total:
-

40ml de soluo de extracto de levedura

20ml de soluo de Sulfato de Amnio

13ml de soluo de Tris

27ml de H2O

99

ANEXO 2
Clculos e quantidades necessrias para produzir 1L de soluo de alimento.

C=
n=

n
V
m
M

C=
n=

n
V
m
M

Ureia
0,5 =

0,5 =

n =0,5mol

1
m

60,06

m =30,03g

Cloreto de Clcio
n

0,5 =

n =0,5mol

0,5 =

110,98

m =55,49g

Meio de Cultura

Extracto de Levedura: m=2g

Sulfato de Amnio: m=1g

Cloreto de Amnio: m=10g

Bicarbonato de Sdio: m= 2,12g

100

ANEXO 3
Curva de crescimento das Bactrias B. pasteurii

Medies

Time (h)

DO (A)

10h10

0.15

11h10

0.37

12h28

2.3

0.4

13h15

3.08

0.8

14h22

4.18

1.01

15h27

5.27

0.94

16h10

5.98

0.92

17h10

6.98

0.94

Curva de crescimento

DO 600nm

10

0.1
0

4
Tempo (h)

101

102