Avaliao rpida da contaminao por metais em sucos de

frutas comerciais por indutivamente acoplado a

espectrometria de massa aps uma diluio simples
Um mtodo simples e rpido para a determinao de Ca, Cd, Co, Cu, Fe, Mn, Mo,
Na, Ni, Pb, Rb, Sr, V e Zn em amostras de sumos de fruta, por indutivamente
acoplado espectrometria de massa com plasma (ICP- MS) apenas aps uma diluio
da amostra, proposto. Para comparao, as amostras foram tambm digeridos
com cido ntrico e do perxido de hidrognio em um forno de microondas. As
mesmas condies pode ser usado para a soluo padro e amostra aquosa diluda
e a sensibilidade foi semelhante em ambos os meios, assim calibrao externa com
padres aquosos pode ser utilizada para a quantificao. Os resultados esto de
acordo com aqueles obtidos aps a digesto, de acordo com o t -teste a um nvel de
confiana de 95%. A boa preciso tambm foi confirmado pelo teste de
recuperao. A preciso expressa pelo desvio padro relativo (RSD) situou-se entre
1 e 3%. Os limites de deteco foram de 0,1 (Pb) e 2000 mg L

-1

(Ca). Valores

semelhantes para os limites de deteco e RSD foram obtidos aps a digesto da

amostra, ou quando o padro interno no foi utilizada. As composies de 20
amostras foram avaliadas por meio de tcnicas de anlise multivariada: anlise de
componentes principais (PCA) e anlise de agrupamento hierrquico (HCA),
mostrando que as amostras so agrupadas pela marca e no pelo fruto, o que pode
ser devido a caractersticas do solo onde a planta foi cultivado e as diferentes
condies de transformao e de armazenamento usados pelas diferentes marcas,
incluindo gua e aditivos.

Introduo
muito importante avaliar sucos de frutas industriais para a segurana do
consumidor, uma vez que so amplamente consumidos em todo o mundo ( Franke
et al., 2006 ). Sucos de frutas so altamente apreciados, comida saborosa, e
geralmente tm qualidades nutricionais excepcionais. No entanto, eles podem ser
uma fonte potencial de elementos txicos, alguns deles tendo um efeito
acumulativo, ou levando a problemas nutricionais devido s baixas concentraes
de elementos essenciais, justificando o controle da composio mineral em suco
( Hague et al., 2008 ). Apesar dos dados e relatrios de propriedades benficas
derivados do consumo de suco (antimutagnicas ou anticancergeno), alguns dos
compostos presentes em sucos tm sido identificados como sendo eles prprios
mutagnicos ou carcinognicos (Ames, 1989 , Patrineli et ai. de 1996 e Franke et
al. , 2004 ). Os efeitos carcinognicos ou genotxicos podem ser mediados pela
interaco das componentes de suco com metais de transio ou de sub-produtos
de sumo de auto-oxidao ( Franke et al. de 2005 ).

A Agncia de Proteo Ambiental dos EUA (EPA) realizou avaliaes de risco

relacionados com a toxicidade, estabelecendo referncias Doses (RFDS) para um
grande nmero de produtos qumicos, incluindo alguns oligoelementos
essenciais. A Organizao
Mundial
de
Sade
(OMS) estabeleceu
valores
semelhantes para a toxicidade, denominado Ingesta Diria Admissvel (DDA) e da
Medida Provisria consumos mximos tolerveis (PMTDIs), e os EUA Food and
Nutrition Board do Instituto de Medicina e os EUA Food and Drug Administration
( FDA) tambm examinados os nveis nutricionais essenciais para um nmero de
elementos ( Goldhaber, 2003 ). Um rigoroso controle de produtos qumicos em
alimentos, especialmente por parte das indstrias nos pases exportadores para
satisfazer os rgos reguladores de pases importadores, necessrio.
Vrios mtodos tm sido utilizados para avaliar os nveis de trao e os principais
elementos em sucos, cada um com suas vantagens e desvantagens. McHard et
al. (1979) em um trabalho avaliou quatro mtodos de espectrometria de anlise de
suco de laranja: Espectrometria atmica com chama (F AAS), atual espectrometria
de emisso atmica de plasma direto (DCP-AES), espectrometria de emisso
atmica de plasma (ICP-AES) e espectrometria de fluorescncia atmica (AFS). A
importncia da digesto da amostra para eliminao de matriz foi enfatizado, mas
mesmo assim as elevadas de slidos dissolvidos inorgnicos contribuiu para as
interferncias espectrais e no espectrais, que explica a necessidade de se
combinar com as normas. Alm disso, o F AAS e AFS so tcnicas monoelementares com menor faixa linear e limites de deteco geralmente mais
elevadas. Resultados precisos, sem efeitos de matriz e baixo nvel de detalhe foi
obtido por Sepe et al. (2001) , utilizando-se espectrometria de absoro atmica (ET
AAS). No entanto, esta tcnica mono-elementar e demorado. Um mtodo
alternativo proposto por Fung e Lau (2006),utilizou a electroforese capilar de zona
(CZE) uma tcnica muito sensvel e barata para a anlise de multi-elemento que
capaz de identificar diferentes espcies (nmero de oxidao) da substncia a
analisar. No entanto, esta tcnica mostraram influncia alta matriz que pode
interferir na separao do analito, exigindo tambm a preparao da amostra
adequada e a utilizao de diversos reagentes, como solues tampo e outros.
Indutivamente acoplado a espectrometria de massa com plasma (ICP-MS) tem sido
muito atraente devido a sua alta sensibilidade, capacidade multielementar e
possibilidade de medir razes isotpicas e determinar quase todos os elementos
estveis, em nveis de pg g -1 para gg -1 ( Nelms de 2005 ). Foram propostos alguns
mtodos usando ICP-MS para anlise de sucos ( Simpkins et al., 2000 , Hague et al.,
2008 , Ji-Luan et al., 2009 e Kosanovic et al., 2009 ), mas eles exigiram digesto da
amostra para evitar a introduo da matriz orgnica, em que o plasma pode causar
vrios interferncias. As digestes foram muito eficazes para remover a matriz, mas
a quantidade maior necessria de cidos e outros agentes oxidantes que podem ser
fontes de contaminao, sendo alm procedimentos caro e demorado ( Krug,
2008 ).

Tcnicas de reconhecimento de padres aplicados sobre as concentraes obtidas

de uma srie de elementos tm sido utilizados para investigar a qualidade e origem
dos alimentos e bebidas ( Taylor et al. de 2003 , Fernndez-Torres et ai. de
2005 , Souza et ai. de 2006 e Araujo et al., 2008 ). Neste contexto, o nosso
objectivo foi desenvolver um mtodo analtico para a determinao de metais em
sumos por ICP-MS, aps uma diluio simples, sem tratamento elaborada amostra
anterior. Ns queramos comparar os nossos resultados com aqueles obtidos a partir
de amostras digeridas, utilizando calibrao externa com padres aquosos. Foi
avaliada a utilizao de rdio como um padro interno. Foram analisados diversos
tipos comerciais de sumos de fruta. Tcnicas de reconhecimento de padres, tais
como a anlise de componentes principais (PCA) e anlise de agrupamento
hierrquico (HCA), foram aplicadas aos dados de concentraes de elementos e
marcas de sucos.

2. Materiais e mtodos
2.1. Instrumentos e reagentes
Um espectrmetro de massa acoplado indutivamente de plasma (ICP-MS), SCIEX
Perkin-Elmer , modelo 6000 ELAN (Thornhill, Canad), foi utilizado. Gs argnio com
pureza mnima de 99,996% foi obtido a partirWhite Martins (So Paulo, Brasil). Foi
utilizado o sistema de introduo da amostra convencional equipado com um
nebulizador de fluxo cruzado e uma cmara de spray de Scott. As condies de
instrumentos utilizados foram: o modo autolens em, pico pulando modo de
medio, tempo de permanncia de 15 ms, 50 varreduras por leitura, uma leitura
por rplica, trs repeties. Foram utilizados cone Platinum e skimmer e um injetor
de alumina de 1,5 mm de dimetro. As amostras foram digeridas em microondas
digestor modelo MLS 1200 MEGA da Milestone (Sorisole, Itlia), utilizando um
programa de seis passos (3 min a 250 W, 2 minutos a 0 W, 5 min a 250 W, 5 min a
500 W, 2 min a 0 W e 5 minutos a 500 W).
Todos os reagentes foram pelo menos de grau de pureza analtico. gua destilada e
desionizada com resistividade de 18,2 cm mohms obtidos pelo sistema Milli-Qplus
de Millipore foi usada (Bedford, EUA).cido ntrico concentrado a 65% (v / v) a
partir da Merck (Darmstadt, Alemanha) foi purificado por destilao de sub-destila a
partir de um quartzo, Krner Analysentechnik (Rosenheim, Alemanha) e perxido de
hidrognio a 30% (v / v) da Merck (Darmstadt, Alemanha) sem purificao prvia
foram usadas. A soluo padro multielementar padro ICP IV a partir
de Merck (Darmstadt, Alemanha) e uma soluo padro de mono-elemento de Rh a
partir de Perkin-Elmer (Norwalk, EUA) para o padro interno foram empregados.

2.2. Amostras
As amostras de suco foram adquiridas em supermercados, todos embalados em
caixas Tetra Pak. Uma alquota de 5 ml da amostra foi transferido para um balo de
Teflon e depois da adio de 3 mL de HNO 3 , 1,5 mL de H 2 O 2 e 4 mL de gua, o

frasco foi submetido ao programa de micro-ondas. Depois da digesto, a soluo

resultante foi transferida para tubos de polipropileno e o volume foi completado at
15 ml. Depois disso, uma parte alquota de 1,5 mL foi diluda para 10 mL e
adicionou-se Rh a uma concentrao final de 2,5 mg L -1 para a sua avaliao como
padro interno. A mesma amostra original foi diludo apenas para introduo do
plasma. Uma alquota de 0,5 ml do caldo foi diludo at 10 mL com 1% (v / v) de
cido ntrico e Rh a uma concentrao final de 2,5 mg L -1 foi adicionado, como um
padro interno.

Anlise de componentes principais

Anlise de Componentes Principais (PCA) e anlise de agrupamento hierrquico
(HCA) foram as tcnicas de reconhecimento de padres aplicados aos conjuntos de
dados, utilizando Statistica software de Statsoft(Tulsa, EUA). Um matriz de dados foi
construda atravs do deslocamento das amostras em linhas e as concentraes
mdias ( n = 3) dos diferentes elementos nas colunas (variveis). Os dados foram
pr-processados usando auto-escala. Tal como mostrado na Tabela 3 , os trs
primeiros componentes principais (PCs) representam 73,01% do total da
variabilidade dos dados. O restante variao provavelmente representa o rudo uma
vez que seus componentes principais correspondentes no tm cargas variveis
significativas.
As variveis dominantes para PC1 so Co, Fe, Ni, Mn, Mo e Zn, o que representa
35,59% da varincia total.Em PC1, a distribuio da amostra mais uniforme, com
uma distribuio mais contnuo das concentraes entre as diferentes marcas. No
PC2, explica 22,82% da varincia total, as cargas positivas mais significativas,
foram relacionados para o Ca e as concentraes de Sr, especialmente na marca
3. Em PC3, Rb e Na, com carga positiva e negativa, respectivamente, so
distinguidos com 15,01% da varincia total.

3.6. Grupos de sucos de frutas de acordo com a marca e no fruto

Na fig. 3 um, a projeo da pontuao grfico PC2 contra PC1 representa 58,41% da
varincia acumulada. A separao das amostras por grupos de acordo com a marca
e no o fruto clara. Sumos de marca 3 tm uma elevada concentrao de Rb. O
grupo de marca 7, que mais dispersa e localizada no lado esquerdo do grfico,
devido s concentraes de Co, Ni, Mo e Mn. fig. 3 b, que mostra o grfico de
pontuao PC3 contra PC1, o agrupamento por marca ainda melhor visualizados,
especialmente por causa das concentraes de Rb e Na. Estes so inversamente
proporcionais, com cargas de sinais opostos, como j mencionado.
FIG. 4 mostra o dendrograma de HCA aplicada aos dados sobre os sucos de
observar o recurso de agrupamento. Os dados foi auto-dimensionadas com a
distncia Euclidiana utilizado para calcular a distncia entre interpoints e usando o
mtodo de ligao Ward. Um procedimento de aglomerao hierrquica foi utilizado

para estabelecer os clusters. O agrupamento pela marca, de forma clara mostrado

nas projeces bidimensionais em fig. 3 ainda mais separado. em quatorze
espao real dimensional desde dendrogramas so baseados em distncias reais
entre

amostras

enquanto

principais

separaes

dos

componentes

so

projees. Quatro grupos podem ser distinguidos no dendograma: o primeiro grupo

de amostras contendo marcas 1, 2 e 4, o segundo grupo de amostras contendo
marcas 5 e 6, o terceiro grupo de amostras de marca 3 e o quarto grupo de 7
amostras de marca . Em concluso, o agrupamento pela marca clara, mas no
pelo fruto.