Em primeiro lugar, a vacina deve ser protetora contra cada um dos quatro

sorotipos de DENV. Isto pode ser conseguido quer com uma vacina que
inclui uma nica protena E representante de cada um dos quatro sorotipos
ou com uma vacina que consiste de um nico antgeno comum
compartilhado, que induz uma imunidade protetora contra cada um dos
quatro sorotipos. Em segundo lugar, a vacina DENV deve proporcionar uma
proteo ao longo da vida; o seu objetivo especfico a induo de nveis de
anticorpos comparveis aos observados aps a infeco com o tipo
selvagem DENV.

Uma vez que a imunizao com vacinas virais vivas, atenuadas ou no vivas
geralmente induz menos anticorpo do que a infeco com o vrus de tipo
selvagem, altamente provvel que, pelo menos, duas doses de vacina
sero necessrias para induzir os nveis elevados de anticorpos que se
desenvolvem aps a infeco com selvagem -tipo DENV e que esto
associadas com a proteo ao longo da vida.

Respostas imunes fracas que diminuem abaixo dos nveis de proteo ao

longo do tempo, especialmente com uma vacina que contm a protena E,
no so aceitveis numa vacina DENV porque os nveis no protetores de
anticorpos contra a E ou protena prM pode aumentar a replicao DENV de
tipo selvagem, que conduz a doena grave tal como o observado durante as
infeces secundrias DENV. Em terceiro lugar, a imunizao deve ser
segura e bem tolerada e s deve causar um nvel aceitvel de sintomas
locais ou sistmicos. Em quarto lugar, a cobertura universal deve ser uma
meta em regies endmicas.

A populao alvo para a vacina em uma regio endmica inclui toda a

populao durante a fase inicial aps a introduo da vacina. Nos anos
seguintes, a imunizao pode ser limitada a crianas aps anticorpos
maternos diminuir para um nvel que permita a vacinao eficaz. Vacina de
viajantes teria como alvo pessoas de todas as idades.

Em quinto lugar, o custo da vacina deve ser acessvel para a populao que
recebe a vacina. Porque muitas regies com DENV endmica so pases com
recursos financeiros limitados para cuidados de sade em desenvolvimento,
a vacina no deve ser apenas econmica para fabricar e administrar, mas
tambm deve ter disponibilidade sustentada ao longo de muitas dcadas.
As perspectivas de uma vacina DENV parece muito promissora, pois deve
ser possvel atingir os cinco objetivos acima. Este assunto foi recentemente
revista, e o leitor remetido a esse artigo para obter detalhes adicionais.

Dois aspectos importantes imunobiolgicos da DENV entram em jogo para

fazer a vacinao dengue vivel. Em primeiro lugar, a proteo
largamente mediada por anticorpos que podem ser eficientemente induzida
tanto por vacinas vivas ou no vivas neutralizantes.
Uma vacina de vrus vivo uma vacina que sofre replicao multiciclo no
hospedeiro, enquanto que uma vacina no-vivo pode ser um vrus inativado
tradicional, uma vacina de subunidade, ou um vrus / vetor com apenas um
nico ciclo de replicao no hospedeiro. Em segundo lugar, a vacina viva
pode infectar DENV na presena de imunidade preexistente homlogo,
mesmo quando a vacina administrada parentericamente, uma
propriedade que o torna possvel gerar respostas de anticorpo secundrias
usando, uma vacina de vrus vivo atenuado.
Nonliving (no-vivo) DENV vacinas
Duas vacinas de sucesso com nonliving flavivrus so seguros, eficazes e
licenciadas para uso afim de evitar a encefalite japonesa transmitida por
carrapatos-encefalite. Com base neste precedente , estratgias para
desenvolver vacinas no vivas para DENV ter includo (a) vacinas de vrus
inativados, (b) as vacinas que contm ou expressam virus-like partculas, e
(c) as vacinas de subunidades que contm subunidades E purificadas. Cada
uma destas estratgias discutida abaixo.

Whole inactivated virus vacines.

Preparaes de DENV inativadas facilmente induzem anticorpos
neutralizantes protena E e tm a promessa de uso como vacinas DENV.
Eles tm duas vantagens sobre as vacinas de vrus vivos atenuados: ( a)
eles so seguros porque vacinas inativadas no podem reverter para um
fentipo mais patognico e (b) podem induzir uma resposta de anticorpo
equilibrada para cada um dos quatro sorotipos porque cada sorotipo numa
multivalente , vacina de vrus inativado deve ser semelhante imunognica.
A utilizao de vacinas de vrus inteiros inativados, no entanto, apresenta
seus prprios desafios: (a) A vacina contm apenas as protenas estruturais
do DENV e, portanto, no consegue induzir imunidade para as protenas no
estruturais; (b) os adjuvantes podem ser necessrias para a
imunogenicidade ptima em indivduos soronegativos, e estes podem
adicionar custos e complexidade ao desenvolvimento, podem aumentar a
reatogenicidade no perodo ps-vacinao aguda, e pode levantar
problemas de segurana em longo prazo; (C) vrias doses de reforo so
necessrias para fornecer a imunidade de longo prazo; e (d) que pode ser
caro de fabricar, porque DENV no cresce a ttulo elevado em clulas de
cultura de tecido e porque quatro componentes tero de ser fabricado
individualmente e combinados. Por razes econmicas, estes desafios
fazem uma vacina inativada um candidato potencialmente menos atraente
para uso em reas endmicas que um candidato a vacina viva atenuada,

embora uma vacina inativada possa ser til para os militares ou para os
viajantes.
Um purificada, a vacina inativada contra DENV- 2 tem sido fabricado por
Walter Reed Army Institute of Research e testada em macacos, e uma DENV1 equivalente em breve entrar em ensaios clnicos. Para a preparao das
vacinas inativadas, os vrus foram propagadas em clulas Vero certificadas,
concentrado por ultrafiltrao, e purificou-se em gradientes de sacarose. A
ttulo elevado de vrus purificado ( cerca de 109 pfu / ml) foi ento inativada
com formalina. A vacina DENV - 2 administrado com almen ou outros
adjuvantes induziram nveis elevados de anticorpos neutralizantes e
protegeu primatas no humanos contra viremia.
No existem consequncias adversas conhecidas de vacinas inativadas
DENV como a potenciao da doena observada em receptores de vacina
respiratria vrus sincicial ou vacina vrus do sarampo e subsequentemente
infectadas com o vrus do tipo selvagem. Esta possibilidade, no entanto,
deve ser monitorado ao longo do tempo em ensaios clnicos com vacinas de
vrus inativados em regies endmicas, e os estudos tero de abordar a
preocupao de que DHF/DSS pode desenvolver naqueles vacinados cujos
ttulos de anticorpos protetores protena E declinem para nveis no
protetores. Esta ltima preocupao tambm se aplica a todas as vacinas
DENV vivos e no vivos utilizados em regies endmicas. Esta ltima
preocupao tambm se aplica a todas as vacinas DENV vivos e no vivos
utilizados em regies endmicas.
Partculas sub-virais

Vacinas de vrus inativados contm E, prM e C protenas e RNA viral.

Partculas subvirais consistem em protenas prM e E co-expressas sem RNA
ou protena C e tem uma estrutura menos complexa do que a de vacinas de
vrus inativados. Estas partculas sub-virais so liberadas a partir de clulas
hospedeiras para os fluidos extracelulares. Rendimentos elevados podem
ser obtidos por optimizao de cdons de genes especficos de dengue para
aumentar a traduo nas clulas dos mamferos infectados. Partculas
subvirais so tambm semelhantes aos viries em alguns outros aspectos:
Elas contm prM / M, E , e lpidos; a protena E glicosilada; as partculas
so antigenicamente semelhantes a viries de dengue sendo reconhecido
por anticorpos monoclonais especficos para os diferentes domnios da
protena E; eles induzem anticorpos neutralizantes para o vrus em roedores
ou primatas ; e eles podem proteger estes animais contra o desafio DENV.
H trs maneiras estas partculas sub-virais podem ser entregues para o
hospedeiro. Em primeiro lugar, as linhas de clulas continuas ou de levedura
que expressam prM e E so gerados, e as partculas sub-virais segregadas
so purificadas a partir dos fluidos extracelulares. Em segundo lugar, os
vetores virais, tais como adenovrus, de vaccinia, ou de alfavrus so
manipuladas para expressar o prM e E de cada sorotipo, e as partculas

subvirais so liberadas a partir de clulas infectadas no indivduo vacinado.

Finalmente, os plasmdeos que expressam prM e E so administrados ao
hospedeiro. Partculas subvirais constitudos de prM e E parece ser mais
imunognico do que as vacinas de subunidade E que carecem de prM ,
provavelmente porque so partculas e segregado para o espao
extracelular , enquanto que E fulllength permanece associada s clulas e
fracamente imunognica. To date, respostas imunes relativamente fracas a
moderadas tm sido observados com partculas subvirais, e mais do que
uma dose muitas vezes necessria para atingir esta resposta. Uma vez
que estas vacinas tm demonstrado ser imunognica e parcialmente eficaz,
o seu futuro como produtos licenciados encontra-se em grande parte na
soluo bem sucedida dos vrios problemas prticos, tais como facilidade
de produo , custo e complexidade do esquema de imunizao, e a
magnitude e a durao da imunidade que induzida. Para superar esta
imunogenicidade fraca, adjuvantes e combinao de induo e reforo so
estratgias adicionadas ao regime de imunizao de partculas sub-virais.
Um ensaio clnico com trs doses de uma construo de DNA DENV - 1 que
expressam as protenas prM e E foi recentemente completada.
Subunit vaccinesE protein
Antgenos da dengue, principalmente protenas E , foram produzidos em
vrios sistemas de expresso para gerar candidatos a vacinas de
subunidade. Alguns sistemas de expresso que so concebidos para a
administrao direta ao hospedeiro incluem DNA de plasmdeo e vetores
virais, tais como adenovrus, de alfavrus e a estirpe de vrus da vacina
MVA . Alm disso, de levedura e clulas de inseto que expressam E tm
sido utilizados como uma fonte de antgeno para gerar uma preparao
purificada de E que usado com ou sem adjuvante para imunizar o
hospedeiro. Na maioria dos casos, uma protena E sem a sua sequncia
ncora de membrana C - terminal utilizado porque, em contraste com a de
comprimento completo de E, que segregada a partir das clulas que
facilitam a purificao a partir de fluidos extracelulares. Protena de
comprimento total tambm tem sido utilizado extensivamente e purificado
a partir de clulas, tais como clulas de inseto. Ambos os fulllength e formas
truncadas de E reter estrutura suficientes para ser reconhecido por
anticorpos monoclonais, e cada um pode induzir anticorpos neutralizantes.
As doses mltiplas, com ou sem um adjuvante, so geralmente necessrias
para induzir anticorpos neutralizantes e a proteo em ratinhos ou primatas
no humanos muitas vezes incompleta. Apesar do desenvolvimento de
anticorpos neutralizantes para o DENV desafio, o desafio viral pode ser
detectada no sangue dos macacos por razes pouco claras. Embora essas
vacinas so esperados para atingir um elevado nvel de segurana , eles
provavelmente tero que superar os desafios acima descritos para as
vacinas de vrus DENV inativadas. Eles no fornecem uma vantagem
imunolgica identificvel sobre qualquer vacinas de vrus inteiros ou vacinas
de partculas sub-virais.

Hawaii Biotech, Inc., est atualmente fabricando protena E purificado por

afinidade para cada um dos quatro sorotipos de DENV, e a primeira fase I a
avaliao da subunidade DENV - 1 est em curso. Esta a primeira
subunidade DENV a ser testado em humanos. No entanto, dois estudos em
macacos rhesus foram recentemente concludas usando monovalente DENV2 ou DENV- 4 protenas E truncadas. Guzman et al. imunizou macacos com
quatro doses de 100 ug de protena E ( DENV - 4 ) , utilizando almen como
adjuvante e conseguiu apenas proteo parcial contra o desafio de tipo
selvagem DENV - 2. Em colaborao com Hawaii Biotech, Putnak et al.
imunizados com duas doses macacos de DENV - 2 protena E produzido em
clulas de Drosophila e formulado com cada um dos cinco combinaes de
adjuvantes diferentes. Embora DENV ttulos de anticorpos neutralizantes
antes da provocao variar amplamente, um grupo de macacos que
recebeu a dose mais elevada de antgeno juntamente com os dois
adjuvantes foi completamente protegida.

Subunit vaccinesNS1 protein.

Protena NS1 do DENV um componente do complexo de replicao viral e
segregado a partir de clulas infectadas para nveis que so detectveis
no soro durante a infeco de seres humanos DENV. Nos seres humanos os
anticorpos contra NS1 so geralmente detectados pela primeira vez aps a
segunda infeco, indicando que NS1 tem imunogenicidade um pouco
diminuda neste hospedeiro, pelo menos em comparao com a resposta a
NS3 ou E . H um grande interesse no desenvolvimento de uma vacina
baseada em NS1 em seres humanos, dado que a imunidade para NS1 est
associado com resistncia a desafiar infeco em modelos animais de
infeco de flavivirus e que os anticorpos administrados passivamente NS1
pode proteger os animais do desafio virulento flavivrus. Por NS1 no uma
protena associada ao virio, no possvel ter anticorpos NS1 aumentando
a infecciosidade do DENV por ADE, o que uma vantagem significativa de
segurana.
Como descrito acima para partculas sub-virais e vacinas de subunidade E,
NS1 pode ser entregue ao hospedeiro por um vetor ou um plasmdeo ou
como uma protena purificada correspondente, e respostas imunitrias
protetoras para DENV pode ser induzida em animais experimentais. Embora
anticorpo com reatividade cruzada contra DENV - 1-4 visto a seguir
imunizao com monovalente DENV - 2 NS1 administrada em doses
mltiplas, a proteo induzida foi sorotipo especfico, o que sugere que, tal
como a protena E , uma vacina contra NS1 teria de ser multivalente.
Vacinas multivalentes baseadas em NS1 tero de ser comparado com o novivo e ao vivo, vacinas de vrus vivos atenuados contendo antgeno E para
determinar se a eficcia comparvel.