UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA

DEPARTAMENTO DE SADE
CURSO DE CINCIAS FARMACUTICAS

EANE CAROLINA MOURA DOS SANTOS

JOELMA DE SOUZA SANTOS
RITA DE CSSIA SOUSA CARNEIRO

RELATRIO:
DETERMINAO DE ATIVIDADE DA COLINESTERASE SRICA

Feira de Santana BA
2014
EANE CAROLINA MOURA DOS SANTOS
JOELMA DE SOUZA SANTOS
RITA DE CSSIA SOUZA CARNEIRO
 RELATRIO:
DETERMINAO DE ATIVIDADE DE INVERTASE EM LEVEDO

Relatrio de aula prtica, apresentado a

Universidade Estadual de Feira de
Santana UEFS, como critrio de
avaliao da disciplina Toxicologia.
Sobre orientao da Prof. Dr. Mariana
Borges Bontura.

Feira de Santana BA
2014

INTRODUO
 A acetilcolinesterase tambm chamada de colinesterase. H dois tipos distintos de
colinesterase, a acetilcolinesterase (AChE) e a butirilcolinesterase (BuChE), que possuem
estruturas moleculares muito semelhantes, mas que diferem com relao distribuio,
especificidade por substrato e s funes (CHATONNET; LOCKRIDGE, 1989 apud RANG;
DALE, 2011).
Segundo Rang e Dale (2011, p. 168) ambas so formadas por subunidades globulares
catalticas, que constituem as formas solveis encontradas no plasma (BuChE) e no lquido
cefalorraquidiano (AChE). Em outros locais, as unidades catalticas encontram-se ligadas a
protenas acessrias, que se ligam, como um grupo de bales, membrana basal ou
membrana neuronal nas sinapses neuronais colinrgicas.
Certas substncias tm a propriedade de inibir estas enzimas como os inseticidas
organofosforados, que tanto inibem a colinesterase plasmtica como a eritrocitria. Devido ao
vasto emprego destes compostos, grande nmero de pessoas esto ocupacionalmente
expostas, tanto na sua fase de produo como na de aplicao. O controle laboratorial da
exposio comumente realizado pela determinao da atividade colinestersica no sangue,
uma vez que a anlise simples e sensvel, sendo empregada como um ndice biolgico
satisfatrio, pois sua variao proporcional intensidade e durao da exposio aos agentes
anticolinestersicos. (SIQUEIRA; FERNCOLA; BORGES, 1978, p. 340).
Este relatrio tem como objetivo a determinao da atividade de colinesterase no
sangue com intuito de monitoramento de exposio ocupacional (se h ou no intoxicao).

METODOLOGIA
 Para a realizao desta prtica, utilizou-se o mtodo de Ellman et al. (1961)
modificado por Dietz et al. (1973).
A colinesterase srica hidrolisa propionilticolina, com a liberao do grupo sulfidrlico
livre a nvel de tiocolina. O grupo SH livre reage com DTNB levando a formao de um
composto amarelo, de absoro mxima em torno de 410 nm.
Propioniltiocolina + H2O cido Propinico + Tiocolina
Colinesterase
srica
Tiocolina + DTNB (5,5-ditiobis-2-nitrobenzico) cido 5-tio-2-Nitrobenzico
Cor amarela

MATERIAIS
- Espectrofotmetro;
- Tubos de ensaio;
- Micropipetas;
- Banho-maria;
- Cronmetro;
- gua destilada;
- Reagentes:
Iodeto de propioniltiocolina (67 mol, forma liofilizada);
Soluo de DTNB (0,423 M) em tampo de fosfato (pH 7,6);
Soluo de sulfato de quinidina (0,5%);
20 L da soluo padro correspondente a 7 U.I/ mL.
- Amostra:
Soro ou plasma (heparina), estvel por 7 dias (armazenada entre 2-8C).

PROCEDIMENTO
Preparo do substrato: adio de 6,5 mL de gua destilada ao frasco que contm o
liofilizado.
Preparo do padro: reconstituir a soluo com a adio de 3 mL de gua destilada.

Determinao do Padro
Reagente Branco Padro 1 Padro 2 Padro 3
 gua destilada 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL
Soluo Padro - 10 L 10 L 10 L
Reagente de Cor 1,5 mL 1,5 mL 1,5 mL 1,5 mL

Em seguida foi feito a leitura de absorbncias dos padres em um espectrofotmetro, qual os

valores correspondem a tabela abaixo:

Absorbncias Branco Padro 1 Padro 2 Padro 3

0,1180 0,1738 0,0782 0,0989

Clculo do fator de correo:

7
F= Absorbncia P(mdia)

*Obs: Houve um erro no fator de correo e por isso considerou-se o valor deste de 10,7.