Anlise microbiolgica do leite
de vacas com mastite subclnica
no municpio de Bom Jesus-PI
Mastite subclnica, Coliformes
totais e fecais, microrganismo.
Ynez Andr Gomes Santana* 1
Pablo Cristovo de Alencar Fernandes2
Melina da Conceio Macdo da Silva Santana3
Leane Brunelle dos Santos Alves4
Siluana Benvindo Ferreira3
1
Doutor do Programa de Ps-Graduao em Cincia Animal na Universida-
de Federal do Piau UFPI. *E-mail: yanezags@gmail.com.
2
Graduado no curso de Engenharia Agronmica na Universidade Federal
do Piau UFPI.
3
Doutoranda do Programa de Ps-Graduao em Cincia Animal na Univer-
sidade federal do Piau UFPI.
4
Tcnica de laboratrio em Biologia da Universidade Federal do Piau
UFPI.
RESUMO
Objetivou-se com este artigo avaliar a qualidade mi-
crobiolgica do leite de vacas com mastite subclnica
atravs do teste de Contagem de Coliformes Totais
e Fecais. Tambm realizar um levantamento clnico
epidemiolgico por propriedade estudada para iden-
tificar os fatores associados ocorrncia da infeco
da glndula mamria, ao manejo, ao controle e pro-
filaxia para mastite. As amostras foram coletadas de
propriedade do municpio de Bom Jesus PI durante
os meses de agosto e setembro 2013 e levada para
o Laboratrio de Microbiologia de Alimentos da UFPI/
CPCE para anlises. Os resultados para Contagem
Padro de Placa esto dentro da normativa para leite
cru refrigerado, das 16 amostras 100% estava abai-
xo de 6,0 x 105UFC/ml. Para Coliformes totais e E.C
todas as amostras deram acima do que rege a IN 62
para leite pasteurizado. Com base no questionrio
aplicado, constatou-se que em todas as propriedades
havia falhas nos procedimentos de higiene e limpeza
bem como a falta de conhecimento sobre o controle
preveno da mastite.
Keywords: Mastite subclnica, Coliformes totais e fe-
cais, microrganismo.
4594
Revista Eletrnica
Vol. 13, N 02, mar/abr de 2016
ISSN: 1983-9006
www.nutritime.com.br
A Revista Eletrnica Nutritime uma publicao bimestral
da Nutritime Ltda. Com o objetivo de divulgar revises de
literatura, artigos tcnicos e cientficos e tambm resulta-
dos de pesquisa nas reas de Cincia Animal, atravs do
endereo eletrnico: http://www.nutritime.com.br.
Todo o contedo expresso neste artigo de inteira res-
ponsabilidade dos seus autores.
MICROBIOLOGICAL ANALYSIS OF THE MILK OF
COWS WITH SUBCLINICAL MASTITIS IN THE
MUNICIPALITY OF BOM JESUS-PI
ABSTRACT
The objective of this article to evaluate the microbi-
ological quality of cows with subclinical mastitis by
Count Total Coliform test and fecal as well as conduct
a clinical epidemiological survey by property studied
to identify factors associated with the occurrence of
mammary gland infection, the management, control
and prophylaxis of mastitis. Samples were collected
owned by the municipality of Bom Jesus - PI during
the months of August and September 2013 and taken
to the Food Microbiology Laboratory of UFPI / CPCE
for analysis. The results for Plate Count Standard are
within the rules for refrigerated raw milk, 16 samples
of 100% was below 6.0 x 105UFC / ml. For total coli-
forms and EC all samples gave up governing the IN
62 to pasteurized milk. Based on the questionnaire, it
was found that in all the properties had failures in hy-
giene and cleaning procedures and the lack of knowl-
edge about the prevention of mastitis control.
Keyword: Subclinical mastitis, total and fecal colifor-
ms, microorganism.
 Artigo 366 - Anlise microbiolgica do leite de vacas com mastite subclnica no municpio de Bom Jesus-PI
INTRODUO
O leite definido como, sem outra especificao, o
produto oriundo de ordenha completa e ininterrupta,
em condies de higiene, de vacas sadias, bem ali-
mentadas e descansadas (GONZALEZ et al., 2004).
Lquido de cor branca ou ligeiramente amarelado,
opaco, de odor suave e gosto adocicado. Produto n-
tegro obtido de uma ou mais ordenhas higinicas de
uma ou mais fmeas leiteiras em bom estado de sa-
de, no cansadas, bem nutridas, recolhido de forma
ideal e sem colostro (CARDOSO & ARAJO, 2004).
Este produto utilizado como alimento bsico na die-
ta humana em todas as faixas etrias principalmente
por ser um dos produtos mais completos do ponto de
vista nutricional. Possui alta digestibilidade, indiscu-
tvel valor biolgico e excelente fonte de protena e
clcio, contendo teores elevados de tiamina, niacina
e magnsio (DIAS, 2007).
considerado como um meio de cultura natural e
bastante favorvel reproduo ativa das bactrias
(RIBEIRO JNIOR et al., 2011). A presena de coli-
formes nos alimentos de grande importncia para
a indicao de contaminao durante o processo de
fabricao ou mesmo ps-processamento. Os micror-
ganismos indicadores so grupos ou espcies que,
quando presentes em um alimento, podem fornecer
informaes sobre a ocorrncia de contaminao fe-
cal, sobre a provvel presena de patgenos ou so-
bre a deteriorao potencial de um alimento, alm de
poder indicar condies sanitrias inadequadas du-
rante o processamento, produo ou armazenamento
(SOUZA et al., 2009). A Contagem Bacteriana Total
(CBT) um parmetro relacionado diretamente com
a higiene de utenslios utilizados durante a ordenha
bem como a estocagem adequada do leite, aps sua
retirada, a 4C. Portanto, a CBT um parmetro que
pode ser modificado com rapidez e facilidade, devido
ao fato de estar ligado a falhas na limpeza e desinfec-
o incorretas (CERQUEIRA, 2010).
Dentre as patologias relacionadas s glndulas ma-
mrias que contribuem para a contaminao do leite,
a mastite a inflamao da glndula mamria que
se caracteriza por apresentar alteraes patolgicas
no tecido glandular e uma srie de modificaes fsi-
co-qumicas no leite. As mais comumente observadas
so: alterao de colorao, aparecimento de cogu-
Nutritime Revista Eletrnica, on-line, Viosa, v.13, n.2, p.4594-4600, mar/abr, 2016. ISSN: 1983-9006
los e presena de grande nmero de leuccitos (SILVA
et al., 2007). Existem ainda as formas subclnicas que
so diagnosticadas principalmente atravs do exame
de contagem de clulas somticas (CCS) no leite. Na
regio do nordeste brasileiro, desde janeiro de 2013,
a CCS aceitvel, de acordo com a IN 62/2011, de
6,0 x 105 CS/mL de leite, (MAPA, 2012). A causa mais
comum e importante da mastite aquela de natureza
infecciosa, causada por bactrias e/ou fungos. A con-
taminao microbiana do leite interfere na sua quali-
dade e reflete as condies sanitrias de produo e
a sade do rebanho (GUERREIRO et al., 2005).
Objetivou-se com esse trabalho avaliar a qualidade
microbiolgica do leite de vacas com mastite subclni-
ca atravs do teste de Contagem de Coliformes Totais
e Fecais. E tambm realizar um levantamento clnico
epidemiolgicos por propriedade estudada para iden-
tificar os fatores associados ocorrncia da infeco
da glndula mamria, manejo, controle e profilaxia
para mastite.
MATERIAL E MTODOS
Levantamento de dados
Foram analisados 81 animais procedentes de sete
propriedades de explorao leiteira do Municpio de
Bom Jesus - PI no perodo de agosto a setembro de
2013. Nos rebanhos estudados o sistema de criao
era semi-intensivo, sendo os animais alimentados
base de concentrado e volumoso, recebendo gua
procedente de poos e audes, com produo mdia
diria de 5 L de leite por animal. Os animais eram
ordenhados uma ou duas vezes ao dia, pelo sistema
de ordenha manual. As raas predominantes nos re-
banhos leiteiros estudados eram holandesa, Gir, Giro-
lando, porm em algumas propriedades observou-se
a utilizao de animais mestios de outras raas.
As amostras de leite foram retiradas dos quartos ma-
mrios aps o descarte dos dois primeiros jatos de
leite, seguindo-se o teste da caneca telada, e o Ca-
lifornia Mastitis Test (CMT) (SCHALM & NOORLAN-
DER, 1957), em que os animais positivos para mas-
tite subclnica resultaram em um total de 16 animais.
Coletou-se aproximadamente 5 mL de leite, em fras-
cos com tampa rosquevel, estreis e previamente
identificados com o nome ou nmero do animal e do
quarto mamrio. Na ocasio da visita s propriedades
4595
Artigo 366 - Anlise microbiolgica do leite de vacas com mastite subclnica no municpio de Bom Jesus-PI
foram aplicados questionrios de Inqurito Clnico
epidemiolgicos com o objetivo de coletar dados para
a anlise de possveis fatores de risco associados
mastite bovina, sendo enviadas sob refrigerao ao
Laboratrio de Microbiologia de Alimentos da Univer-
sidade Federal Piau, para serem devidamente anali-
sadas.
METODOLOGIA
No laboratrio, as amostras de leite cru foram homo-
geneizadas e diludas, utilizando-se soluo salina
peptonada 0,1%. A partir das diluies foram realiza-
das s seguintes anlises microbiolgicas: contagem
padro em placas (CPP), determinao do Nmero
Mais Provvel (NMP) de coliformes totais (35C) e
termotolerantes (45C).
Contagem Padro em Placas (CPP)
Para contagem padro em placas foi transferido al-
quotas das amostras a partir das diluies decimais de
10-1 a 10-3, para placas de Petri vazias e esterilizadas,
em duplicata, sobre as quais se verteu Agar Padro
para Contagem, e incubaram-se a 35C por 24 horas.
Selecionaram-se as placas contendo entre 25 a 250
colnias, multiplicando-se o valor encontrado pelo fator
de diluio correspondente, e expressando o resultado
em Unidade Formadora de Colnia (UFC) /ml.
Quantificao de coliformes totais (CT) pela tcnica
de tubos mltiplos Nmero mais provvel (NMP)
Seguiu-se a metodologia da APHA, usando-se a tc-
nica dos tubos mltiplos, com 3 tubos por diluio,
para determinao do NMP de coliformes totais por
mL (CT/mL) de amostra, utilizando-se o meio Caldo
Lactosado Verde Brilhante e Bile 2% (VBB) com incu-
bao a 35C durante 24 48 horas.
Foram considerados positivos os tubos com produo
de gs e a partir deles, transferiram-se, com ala de
semeadura, alquotas dos incuos para trs sries de
tubos contendo o meio de cultura caldo Escherichia
coli (EC), com incubao em banho-maria a 44,5C
por 24 horas, considerando-se positivos os tubos com
produo de gs.
Questionrios tipo clnico epidemiolgico
O questionrio foi elaborado com questes de sim-
ples escolha, focadas em temas relacionados s boas
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prticas de fabricao, com maior nfase na higiene
do local de ordenha, repouso dos animais, processo
de ordenha manual ou mecnica, como tambm so-
bre o conhecimento da mastite no rebanho bovino de
Bom Jesus PI. Os questionrios foram preenchidos
durante as visitas nas propriedades.
RESULTADOS E DISCUSSO
Algumas informaes bsicas sobre a mastite e o ma-
nejo do gado leite das fazendas de Bom Jesus PI
esto contidas em um Inqurito Clnico Epidemiolgi-
co mostrado no Quadro 1 e 2.
Com base no inqurito Clnico Epidemiolgico a res-
peito do manejo sanitrio da mastite, apenas duas
fazendas (B e C) tinha conhecimento a respeito des-
sa doena. Sabiam como a mastite transmitida no
rebanho e j fizeram uso do teste de CMT, porm, ne-
nhuma das fazendas tinha feito preveno da doena
ou algum manejo correto para o controle da mesma.
Durante o estudo foram observados que das sete fa-
zendas estudadas, cinco delas apresentaram mastite
subclnica ao teste CMT em pelo menos um animal.
Foi verificado o desconhecimento por parte dos pro-
dutores acerca da utilizao de linhas de ordenha.
Em relao ao convvio dos animais, no havia a se-
parao de animais com ou sem mastite.
Comprovou-se que a no adoo de linha de ordenha
um fator de risco no aumento das CCS (SOUZA et
al., 2009).No que tange as prticas adotadas no ma-
nejo das vacas, constatou-se a ausncia de secagem
das vacas no final da lactao, prtica esta que pode
contribuir para o aparecimento de mastite no rebanho,
devido presena de leite residual servir como meio
de cultivo para microrganismo. O tratamento seca-
gem de todos os animais influencia, de modo favor-
vel, na frequncia e no controle de mastite do reba-
nho (OLIVER et al., 1993). Sabe - se que o tratamento
secagem de somente parte do rebanho favorece o
aparecimento de novas infeces intramamrias du-
rante o perodo seco e no momento do parto (BERRY
& HILLERTON, 2002).
O primeiro passo do programa de controle de mastite
verificar o "status" da doena do rebanho antes de
qualquer alterao do manejo e que um dos pontos
 Artigo 366 - Anlise microbiolgica do leite de vacas com mastite subclnica no municpio de Bom Jesus-PI

QUADRO 1. Manejo sanitrio da Mastite

MANEJO SA- FAZENDAS
NITARIO DA A B C D E F G
MASTITE NO SIM NO SIM NO SIM NO SIM NO SIM NO SIM NO SIM
Tem conhe-
cimento da X X X X X X X
doena?
Sabe como
a mastite
transmitida X X X X X X X
dentro do
rebanho?
Sabe o que
linha de
X X X X X X X
ordenha e a
importncia?
Usa CMT
ou caneca
X X X X X X X
do Fundo
escuto?
TOTAL 4 0 1 3 1 3 4 0 4 0 4 0 4 0

QUADRO 2. Produo do Leite

Faz a higiene dos
Faz limpeza da sala de Como feito a secagem dos tetos Usa algum produto
tetos antes da orde-
FAZEN- ordenha? aps a lavagem? aps a ordenha
nha?
DAS
SIM, que SIM, qual Papel
NO No Pano Nada NO SIM
frequncia produto? toalha
1 X X X X
X,semanal-
2 X X X
mente
3 X X X X
4 X X X X
5 X X X X
6 X X X X
7 X X X X
TOTAL 6 1 7 0 0 0 7 7 0

mais importantes no controle da mastite a cons- de ordenha, higienizao e manuteno do equipa-

cientizao dos produtores das perdas econmicas
e educao sanitria dos tratadores e ordenadores
(RUPP et al., 2012).
Os seguintes pontos que devem ser considerados em
um bom programa de preveno e controle da mastite
so: mo de obra especializada, monitoramento dos
ndices de mastite, higiene ambiental, tratamento de
mastite clnica, tratamento de vaca seca, eliminaes
de vacas com infestaes crnicas, manejo e controle
mento de ordenha e vacinao (MULLER, 2002).
Com base no questionrio aplicado, constatou-se que
em todas as propriedades havia falhas nos proce-
dimentos de higiene e limpeza. Em todas as fazen-
das a ordenha era feita em curral com cho batido
de forma manual, no havia sala de ordenha. Todas
as vacas eram ordenhadas com o bezerro ao p, as
vacas passavam a noite em um curral separado dos
bezerros muitas vezes deitadas, depois da ordenha

Nutritime Revista Eletrnica, on-line, Viosa, v.13, n.2, p.4594-4600, mar/abr, 2016. ISSN: 1983-9006 4597
Artigo 366 - Anlise microbiolgica do leite de vacas com mastite subclnica no municpio de Bom Jesus-PI
eram soltas a pasto juntos com os bezerros. O or-
denhador no utilizava nenhum material de limpeza,
no realizava a higiene dos tetos das vacas antes e
depois das ordenhas.
Um ponto crucial na profilaxia a higiene do ordenha-
dor. Suas mos so o grande agente transmissor de
bactrias para o bere, o leite e todo o material utiliza-
do (DIAS, 2007). A ordenha o momento mais impor-
tante da atividade leiteira por constituir-se na medida
mais importante de controle da mastite e possibilitar
a melhoria da qualidade do leite (RUPP et al., 2012).
A rotina diria de atividades e o correto manejo de
ordenha so as principais medidas preventivas de
controle de mastite. A execuo de uma sequncia l-
gica de tarefas durante a ordenha proporciona vrios
outros benefcios.
A IN 62 determina que as tetas do animal a ser or-
denhado devam sofrer prvia lavagem com gua
corrente, seguindo-se secagem com toalhas descar-
tveis de papel no reciclado e incio imediato da or-
denha Aps a ordenha, desinfetar imediatamente as
tetas com produtos apropriados. Os animais devem
ser mantidos em p pelo tempo necessrio para que
o esfncter da teta volte a se fechar.
A dependncia de ordenha deve ser mantida limpa
antes, durante e aps a permanncia dos animais. Ao
trmino de seu uso deve ser realizada completa sani-
tizao do piso e paredes para total remoo de res-
duos. Todo o pessoal que trabalha nas dependncias
voltadas produo deve apresentar hbitos higini-
TABELA 1. Contagem Padro em Placas em Leite Cru refri-
gerado
FAZEN- AMOSTRA (UFC/ML)
DAS 1 2 3 4
1 3,2x103 4,8X103
2 8,5X103 2,1X104 6,9X104
3 1,5X103 1,3X103 1,7X104
4 7,6X102 1,4X104 1,9x104 1,4x105
5 1,5x103 1,3x104 1,2x104 1,7x104
O Padro de Acordo com a Instruo Normativa n. 62,
de 29 de Dezembro de 2011 do Ministrio da Agricultura
Pecuria e Abastecimento so de 6,0 x 105 UFC/ml.
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cos. O ordenhador deve, no seu manuseio, conservar
as mos sempre limpas.
As contagens padro em placas de bactrias no leite
cru variaram de 1,3 X 103 a 1,4 x 105 UFC/ml (Tabela
1).
Das 16 amostras de leite cru, 16 (100%) apresenta-
ram-se dentro do padro para contagem de bactrias
exigido pela legislao para leite cru refrigerado. Tais
achados no eram esperados, pois alm de no so-
frer qualquer tipo de tratamento trmico, este produ-
to era mantido temperatura ambiente, desde a sua
obteno at a chegada ao domiclio do consumidor.
Esse resultado diferente do apresentado por SILVA
(2006), que encontrou uma grande variao entre os
valores mnimo, mediano e mximo de mesfilos, res-
pectivamente de 1,9 x 104 UFC/mL; 3,2 x 106 UFC/
mL; e 1,6 x 108 UFC/mL, em amostras de leite cru
refrigerado.
Contagens superiores a 5X106 UFC.mL-1 so su-
ficientes para promover alteraes organolpticas
sensveis no leite e que a partir de 106 UFC.mL-1 j
permitem modificaes no sabor, odor e consistncia
de leite e derivados. Neste estudo, os valores encon-
trados atingiram contagens mximas de 1,9x104 e
1,4x105 (SANTANA et al., 2011).
No existe legislao determinando as quantidades
de coliformes totais e termotolerantes para leite cru.
Por isso os resultados foram comparados ao limite
mximo exigido para leite pasteurizado. Imediata-
mente aps a pasteurizao, o leite pasteurizado
deve apresentar enumerao de coliformes a 30/35
C (trinta/trinta e cinco graus Celsius) menor do que
0,3 NMP/ml (zero vrgula trs Nmero Mais Provvel/
mililitro) da amostra.
Todas as propriedades evidenciaram a presena de
coliformes totais (TABELA 2), o trabalho comprovou
que as amostras continha resultado muito acima do
que prever a legislao. Altas contagens CT em 45
amostras de leite cru foram encontrados na regio de
Campina Grande-PB (CATO & CEBALLOS, 2001).
Foram encontrados 100% das amostras fora dos
padres microbiolgicos para coliformes em um tra-
 Artigo 366 - Anlise microbiolgica do leite de vacas com mastite subclnica no municpio de Bom Jesus-PI
TABELA 2. Coliformes totais e termotolerantes em Leite Cru em Bom Jesus-PI
AMOSTRAS (NMP/ML)
FAZENDA
Coliformes totais
A B C D
1 >1100 23
2 240 >1100 23
3 <3,0 43 >1100
4 23 >1100 23
5 >1100 240 240
balho realizado na cidade de Queimadas PB. A
presena desses microrganismos nas amostras ana-
lisadas ressalta a ausncia de cuidados com relao
higienizao aplicada nas propriedades (SILVA et
al., 2010).
Comparando com a legislao para leite pasteurizado
todas as amostras esto fora do padro para E.C, sua
presena tem significado importante, por ser um indi-
cador de contaminao fecal e eventual presena de
outros enteropatgenos, alm disso, existem linha-
gens patognicas para homens e animais.
Foram analisadas 24 amostras de leite cru coletadas
em um laticnio em Gois e encontraram a presena
de E. coli em 19 (79,2%). Na maioria das amostras
analisadas foi evidenciada a presena de coliformes
totais e coliformes termotolerantes, porm esses lti-
mos em menor nmero (CAMPOS et al., 2006).
Esses resultados foram comparados com os par-
metros microbiolgicos exigidos para o leite pasteu-
rizado (BRASIL, 2011), pois devido proibio de co-
mercializao de leite no pasteurizado, no existem
parmetros microbiolgicos para leite vendido a balde
e em fazendas.
CONSIDERAES FINAIS
De acordo com os resultados obtidos neste trabalho,
concluiu-se que: O leite cru vendido a balde informal-
mente no municpio de Bom Jesus-PI podem oferecer
riscos sade da populao. O leite comercializado
cru na cidade de Bom Jesus no atende aos requi-
sitos microbiolgicos determinados pela legislao
vigente no Brasil. Falta conhecimento por parte dos
produtores a respeito do manejo e das prticas de hi-
giene e limpeza sobre a qualidade microbiolgica do
Nutritime Revista Eletrnica, on-line, Viosa, v.13, n.2, p.4594-4600, mar/abr, 2016. ISSN: 1983-9006
Termotolerantes
A B C D
>1100 7,4
<3,0 <3,0 <3,0
<3,0 <3,0 23
23 >1100 23
23 >1100 23 <3,0 <3,0
leite. necessria a implantao de polticas pblicas
no municpio, com a sensibilizao dos profissionais
envolvidos na cadeia produtiva, para que haja melho-
ria das condies de higiene na obteno, transporte
e acondicionamento do leite, adequando-o a Legisla-
o Federal em vigncia.
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