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Enzimas regulatrias no controle do metabolismo 1

1. Introduo

A regulao do metabolismo fundamental para que um organismo possa responder de


modo rpido e eficiente a variaes das condies ambientais, alimentares ou ainda a
condies adversas como traumas e patologias.
As enzimas so em sua maioria protenas. Possuem alta especificidade, podendo ter
atividade intra ou extracelular. As enzimas so catalisadores das reaes bioqumicas, isto ,
atuam tornando possvel uma nova reao com energia de ativao menor. Geralmente elas
aumentam a velocidade da reao por um fator de 105 a 1017. Isso significa que simplesmente
com a sua presena, e sem serem consumidas durante o processo, conseguem acelerar reaes
bioqumicas. As enzimas so sintetizadas por clulas vivas e atuam em quase todas as reaes
qumicas do metabolismo dos organismos vivos e tambm esto presentes em vrios
alimentos.
A regulao metablica feita pela modulao de enzimas regulatrias em processos
metablicos chaves, de tal modo que se possa ativar ou inibir reaes qumicas especficas
para cada situao resultando em respostas biolgicas adequadas. Para garantir a eficincia
necessria, o organismo lana mo de vrios tipos de regulao enzimtica que podem ocorrer
simultaneamente. A atividade enzimtica pode depender da presena de determinadas
molculas, os cofatores, que podem participar diretamente ou no da reao. Diversos outros
fatores tambm podem afetar a atividade enzimtica, dentre eles a temperatura, o pH, a
concentrao da enzima, do substrato e os inibidores.

2. Cintica enzimtica

A cintica de uma enzima estudada avaliando-se a quantidade de produto


formado ou a quantidade de substrato consumido por unidade de tempo. Uma reao
enzimtica pode ser expressa pela seguinte equao:
E + S [ES] E+P

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Gomes, C.W.C. Enzimas regulatrias no controle do metabolismo. Seminrio apresentado na disciplina
Bioqumica do Tecido Animal, Programa de Ps-Graduao em Cincias Veterinrias, Universidade Federal do
Rio Grande do Sul, 2014. 10 p.

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Onde:
E = enzima
S = substrato
P = produto
ES = complexo enzima/substrato
A velocidade de uma reao enzimtica depende das concentraes de enzima e
de substrato. A velocidade inicial aumenta com o incremento na concentrao do
substrato, quando mantida constante a concentrao da enzima. Esse aumento
continua at o ponto em que se obtm a velocidade mxima, onde se tem a saturao
da enzima. A partir desse ponto a velocidade da reao mantida constante.
Michaelis e Menten, em 1913, propuseram um modelo de reao enzimtica
para apenas um substrato. A partir deste modelo, foi desenvolvida uma equao que
permite demonstrar como a velocidade de uma reao varia com a variao da
concentrao do substrato. Esta equao pode ser expressa graficamente, e representa
o efeito da concentrao de substrato sobre a velocidade de reao enzimtica (Figura
1). Michaelis e Menten deduziram uma constante (KM) que indicadora da
velocidade da reao e consequentemente do grau de afinidade que a enzima tem pelo
substrato. A constante de Michaelis-Menten (KM) definida como a concentrao de
substrato necessria para que metade da velocidade mxima da reao seja atingida. O
KM de um substrato para uma enzima especfica caracterstico, e fornece um
parmetro de especificidade deste substrato em relao enzima. Quanto menor o
KM, maior a especificidade, e quanto maior o KM , menor a especificidade.
Equao de Michaelis e Menten:

Onde: V0 = velocidade inicial


Vmax = velocidade mxima
Km = constante de Michaelis-Menten
[S] = concentrao do substrato (em mol/L)

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Figura 1. Grfico da equao de Michaelis-Menten.

As enzimas alostricas mostram relaes entre velocidade inicial e concentrao


de substrato que diferem do comportamento enzimtico do tipo Michaelis-Menten.
Elas exibem saturao quando a concentrao do substrato suficientemente alta, mas
algumas enzimas alostricas, quando a velocidade inicial colocada em grfico
contra a concentrao do substrato, resultam em uma curva de saturao sigmide e
no uma curva hiperblica. Na curva de saturao sigmide (Figura 2) verifica-se
uma valor da concentrao de substrato no qual a velocidade inicial metade da
velocidade mxima, mas que no designado como KM.

Figura 2. Curva sigmide de uma enzima alostrica.

O comportamento da cintica sigmide em geral reflete interaes cooperativas


entre subunidades proticas. Mudanas na estrutura de uma subunidade so
convertidas em mudanas estruturais nas subunidades adjacentes, um efeito mediado

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por interaes no covalentes. As enzimas alostricas mostram diferentes respostas
em suas curvas de variao da atividade em funo da concentrao do substrato
porque algumas possuem moduladores inibidores, outras moduladores ativadores e
vrias possuem os dois tipos.

3. Enzimas regulatrias

No metabolismo celular, grupos de enzimas trabalham juntos em sequncia para


conduzir um dado processo metablico. Nestes sistemas enzimticos, o produto da
reao de uma enzima torna-se o substrato da prxima enzima. Cada via metablica
possui uma ou mais enzimas com maior efeito no ritmo geral do processo, as enzimas
regulatrias. Estas enzimas exibem atividade cataltica reduzida ou aumentada, em
resposta a certos sinais, controlam a velocidade das reaes e assim o ritmo de todo o
processo metablico, permitindo clula adaptar-se de acordo com as necessidades.

Enzimas alostricas

Enzimas alostricas so enzimas que contem uma regio separada daquela em


que se liga o substrato, na qual pequenas molculas regulatrias podem se ligar e
modificar a atividade cataltica destas enzimas. As modificaes no stio cataltico
podem diminuir ou acelerar a velocidade da reao. Muitas enzimas alostricas esto
localizadas em um ponto de ramificao, ou prximo a ele, em uma via metablica,
influenciando no direcionamento de substratos para uma ou outra via disponvel.
Essas enzimas no seguem a cintica de Michaelis-Menten. Sua curva de saturao
sigmide, assim como a de qualquer protena alostrica. Normalmente estas enzimas
so inibidas pelo produto final da via metablica (inibio por feedback). Muitas
enzimas alostricas respondem a mltiplos efetores que interferem na velocidade
mxima e na constante de Michaelis-Menten.

Modificao covalente e outros

Algumas enzimas tem suas atividades catalticas regulada por modificaes


covalentes em um ou mais dos resduos de aminocidos da molcula da enzima. Essas

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sofrem processos reversveis de fosforilao (adio de um grupo fosfato), adenilao
(adio de um AMP), uridilao (adio de um UMP), ADP-ribosilao (adio de
ADP-ribose), metilao (adio de um grupo metila), entre outros. A modificao de
uma enzima faz com que um novo resduo de aminocido com propriedades
diferentes seja introduzido na enzima. A introduo de uma carga pode alterar as
propriedades locais da enzima e introduzir uma mudana na conformao.
Normalmente essas mudanas so substanciais e podem ser crticas para a funo da
enzima alterada. Um exemplo frequente a transferncia de um grupo fosfato,
proveniente do ATP, para a enzima alvo. Naturalmente a presena dos grupos fosfato
acarreta mudana da conformao espacial da enzima, com duas consequncias
possveis: nova conformao cataliticamente inativa ou formao de um stio ativo
funcional. Assim quando vrias enzimas so fosforiladas simultaneamente, o
metabolismo drasticamente alterado.
Tambm existem regulaes enzimticas atravs de protenas que se unem as
enzimas para inibir ou estimular sua atividade; e clivagem proteoltica de certas
enzimas como induo da sua atividade. A necessidade e presena de cofatores
enzimticos tambm atua na regulao da atividade cataltica.

4. Inibidores enzimticos

Os inibidores de enzimas so molculas que interferem com a catlise,


diminuindo ou interrompendo as reaes enzimticas. Eles se ligam as enzimas,
temporria ou definitivamente, impedindo que elas se liguem ao substrato. Muitos
tipos de molculas inibem as enzimas, incluindo drogas e agentes txicos, e podem
agir de vrias formas. A atividade de inibio enzimtica atua como um mecanismo
de controle dos sistemas biolgicos.

Inibidores reversveis

A inibio reversvel caracterizada por uma rpida dissociao do complexo


enzima-inibidor (Figura 3). Existem dois tipos de inibio reversvel, a competitiva e
a no competitiva.

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O inibidor competitivo assemelha estruturalmente ao substrato e liga-se ao stio
ativo da enzima, impedindo assim o substrato de se ligar ao mesmo local. Muitos
inibidores competitivos tem estrutura similar estrutura do substrato. Entretanto
faltam grupos qumicos no inibidor que possam dar continuidade a reao, fazendo
com que sua presena apenas gere uma competio com as molculas do substrato.
Um inibidor competitivo diminui a taxa de catlise por reduzir a proporo de
molculas de enzima ligadas a um substrato. Em qualquer concentrao do inibidor, a
inibio competitiva pode ser diminuda atravs do aumento da concentrao de
substrato. Sob estas condies, o substrato compete com o inibidor pelo stio ativo.
Na inibio competitiva, uma enzima pode ligar-se ao substrato ou ao inibidor, mas
no ambos. O complexo enzima-inibidor no gera nenhum produto.
Na inibio reversvel no competitiva, o inibidor e o substrato podem
simultaneamente ligar-se a uma molcula de enzima em diferentes locais de ligao.
Um inibidor no-competitivo se liga a um local diferente do stio ativo da enzima,
pois no h semelhana estrutural entre ele e o substrato. Age induzindo uma
mudana conformacional na enzima, diminuindo a taxa de formao do complexo
enzima-substrato ou reduzindo a taxa de degradao desse complexo para formar o
produto. Enquanto a enzima estiver ligada ao inibidor, nenhum produto ser formado.
A inibio no competitiva, em contraste com a inibio competitiva, no pode ser
superada pelo aumento da concentrao de substrato. Na prtica, a inibio no
competitiva observada apenas em enzimas com dois ou mais substratos.

Figura 3. Modelos de inibidores reversveis.

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Inibidores irreversveis

Na inibio enzimtica irreversvel h uma ligao covalente com a enzima,


causando uma modificao definitiva no stio de ligao ou no stio cataltico da
enzima, formando complexos inativos. Tambm pode atuar destruindo um grupo
funcional da enzima que essencial pra sua atividade ou formando uma associao
no covalente estvel.

5. Controle do metabolismo

O crescimento e a sobrevivncia da clula dependem do uso eficiente dos


recursos. Esta eficincia possvel graas s enzimas regulatrias. As clulas
precisam alterar continuamente seu ritmo e atividade metablica de acordo com suas
necessidades e condies. Na maioria dos sistemas multienzimticos, a primeira
enzima da sequncia a regulatria. Isso torna o controle do processo mais efetivo,
pois a catlise das primeiras reaes da sequncia que leva at um produto
desnecessrio desvia a energia e os metablitos para processos mais importantes.
A atividade das enzimas regulatrias ocorre de vrias formas. As enzimas
alostricas funcionam atravs de ligaes no covalentes e reversveis. Outras
enzimas so reguladas por modificao reversvel de sua polaridade. Ambas as
classes de enzimas regulatrias costumam ser subunidades de protenas e, em alguns
casos, o stio regulatrio e o stio ativo encontram-se em subunidades separadas.
Algumas enzimas so estimuladas ou inibidas quando esto ligadas por protenas
regulatrias. Outras so ativadas quando segmentos de peptdeos so removidos por
clivagem proteoltica, que irreversvel. Estes mecanismos ocorrem em processos
fisiolgicos como digesto, coagulao sangunea, atividade hormonal e viso.

Controle fisiolgico

Em alguns sistemas multienzimticos, a enzima regulatria especificamente


inibida pelo produto final da rota metablica. Quando a velocidade da atividade de tal
enzima reduzida, todas as enzimas subsequentes trabalham em ritmo mais lento,

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uma vez que seus substratos esto esgotados. A taxa de produo do produto final
equilibrada com as necessidades da clula. Este tipo de regulao chama-se inibio
feedback. Este um exemplo na converso do aminocido L-treonina em L-
isoleucina, catalisada por uma sequncia de cinco enzimas.
Em outra classe importante de enzimas regulatrias, a atividade regulada por
mudana de polaridade, atravs de grupos reguladores como fosforil, adenilil, uridilil,
metil e grupos de adenosina difosfato ribosil. Fosforilao a adio de um grupo
fosfato (PO4) a uma protena ou outra molcula. A fosforilao um dos principais
participantes nos mecanismos de regulao das protenas, de um tero a metade de
todas as protenas em clulas eucariticas so fosforiladas. Esta forma de controle
regulatrio essencial em um grande nmero de vias regulatrias. Um exemplo
importante deste controle enzimtico por fosforilao ocorre na glicognio-
fosforilase, enzima responsvel por uma das etapas da glicogenlise, nos msculos e
no fgado. A fosforilase como enzima alostrica tem metablitos reguladores que a
fosforilam ou a desfosforilam, que so realizados por duas enzimas, fosforilase-
quinase e fosforilase-fosfatase. Essas enzimas so reguladas pela adrenalina, glucagon
e insulina, e, portanto, esses elementos contribuem no controle da glicogenlise. Um
exemplo de enzima regulada por metilao a protena aceptora de metilas da
quimiotaxia de bactrias. Essa protena parte de um sistema que permite as bactrias
de irem em direo de um atraente ou se afastarem de um repelente qumico. O agente
metilante a S-adenosilmetionina.
Certas enzimas, cujo local de ao extracelular, so sintetizadas na forma de
precursores inativos, chamado zimognios. Para que um zimognio se torne ativo
preciso que ocorra hidrlise de determinadas ligaes peptdicas, com a consequente
remoo de um segmento da cadeia e nova reestruturao espacial, onde aparecer um
stio ativo funcional. Vrias enzimas proteolticas so sintetizadas e armazenadas
como zimognios, transformadas em enzimas somente fora destas clulas e no local
onde exercero atividade digestiva. Muitas enzimas proteolticas so reguladas desta
forma, por clivagem proteoltica. Quimotripsina e tripsina so inicialmente
sintetizadas como quimotripsinognio e tripsinognio.
A glutamina a doadora do grupo amina para a formao de vrios produtos e
tambm funciona como um estoque de amnia nos animais. A glutamina sintetase de
mamferos ativada por -cetoglutarato, o produto da desaminao oxidativa do
glutamato. Este controle previne a acumulao da amnia produzida pela reao. A
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glutamina sintetase bacteriana tem um controle muito mais elaborado. Nove
inibidores alostricos por feedback (histidina, triptofano, carbamil-fosfato,
glicosamino-6-fosfato, AMP e CTP), cada um com seu stio de ligao, controlam a
atividade da enzima. A glutamina sintetase covalentemente modificada por
adenilao de um resduo especfico de tirosina, aumentando sua susceptibilidade
inibio por feedback, ou seja, a enzima fica menos ativa.

Controle farmacolgico

Alguns frmacos atuam como inibidores catalticos. Antimicrobianos beta-


lactmicos, como a penicilina e amoxicilina, atuam atravs de ligao covalente
modificando a enzima transpeptidase, impedindo a sntese da parede celular das
bactrias. O cido acetilsaliclico tem ao parecida. Inibe diretamente a atividade da
enzima cicloxigenase (COX) para diminuir a formao dos precursores das
prostaglandinas e dos tromboxanos a partir do cido araquidnico, reduzindo a
produo de sintomas inflamatrios.
Outros frmacos como captopril, enalapril e lisinopril agem inibindo as enzimas
conversoras de angiotensina (ECA). Essas drogas diminuem a presso sangunea por
bloquear a enzima que cliva a angiotensina I para formar a angiotensina II, um
potente vasoconstritor.

6. Concluso

A regulao do metabolismo fundamental para que um organismo possa se


adaptar as variaes fisiolgicas e patolgicas. As clulas precisam alterar
continuamente seu ritmo e atividade metablica de acordo com suas necessidades e
condies. Essa regulao feita pela modulao de enzimas regulatrias em
processos metablicos chaves, resultando em respostas biolgicas adequadas. Para
garantir a eficincia necessria, o organismo lana mo de vrios tipos de regulao
enzimtica que podem ocorrer simultaneamente. Alm do controle fisiolgico,
diversos frmacos podem atuar de maneira semelhante, na tentativa de controlar e
evitar reaes indesejveis.

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Referncias

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Editora da Universidade Federal do Rio Grande do Sul. 2006.
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