INSTITUTO AGRONMICO

CURSO DE PS-GRADUAO EM AGRICULTURA TROPICAL E

SUBTROPICAL

MANEJO DA MANCHA MARROM DE ALTERNRIA

EM CITROS: PODA DE LIMPEZA E CORRELAO
COM A LAGARTA
MINADORA

IVAN BORTOLATO MARTELLI

Orientador: Fernando Alves de Azevedo

Dissertao submetida como requesito parcial

para obteno do grau de Mestre em
Agricultura Tropical e Subtropical, rea de
Concentrao em Tecnologia de Produo
Agrcola

Campinas, SP
Fevereiro 2011

1
 Ficha elaborada pela bibliotecria do Ncleo de Informao e Documentao do
Instituto Agronmico

M376m Martelli, Ivan Bortolato

Manejo da mancha marrom de alternria em citros: poda de limpeza
e correlao com a lagarta minadora/ Ivan Bortolato Martelli. Campinas,
2011. 41 fls.

Orientador: Fernando Alves de Azevedo

Dissertao (Mestrado) em Agricultura Tropical e Subtropical Instituto
Agronmico

1. Citros mancha marrom 2. Citros praga 3. Poda I. Azevedo, Fernando

Alves de III. Ttulo

CDD 634.3
 DEDICATRIA

Aos meus pais, Amrico e Lucy. A Lucy pelo seu sacrifcio ao deixar uma carreira promissora
e optar em dedicar parte de sua vida na criao e orientao de seus filhos, e exigir deles nada
mais que dessem seu melhor no que resolvessem fazer em vida. Ao Amrico em procurar
sempre estar ciente dos feitos de seus filhos, mesmo quando no podia estar presente, e tentar
mostrar-lhes a importncia do indivduo sempre estar estudar, em nunca se contentar com o
conhecimento adquirido.

Aos meus amigos, presentes ou de tempos idos, por ajudarem a moldar o ser que hoje sou,
com todas minhas qualidades e defeitos, e por compartilhar comigo todos os acontecimentos
pelos quais j passei felizes e tristes.

ii
 AGRADECIMENTOS

Agradeo o Dr. Fernando Alves de Azevedo por todos os anos nos quais pude aprender no
somente sobre citricultura, mas sobre o cotidiano daqueles que se dedicam a pesquisa
cientfica.

Ao Dr. Evandro Henrique Schinor pela colaborao durante a realizao deste projeto.

A mestra Camilla Andrade Pacheco pelo apoio durante o mestrado.

Aos estagirios Denis Augusto Polydoro, Eduardo Kawabata, Eduardo Andrade, Ludmila
Shatkovsky Marcelo Romo, Marco Aurlio, Paulo Cardoso, Renato Primon e Ronald Giorgi
pela amizade nesses anos todos durante minha estadia no Centro APTA Citros Sylvio Moreira
e a todos os demais membros da Estao Experimental com quem tive contato durante esses
anos.

Ao CNPq pela concesso de bolsa de mestrado ao projeto desenvolvido

iii
 SUMRIO

LISTA DE TABELAS.................................................................................................... v
LISTA DE FIGURAS..................................................................................................... vi
RESUMO........................................................................................................................ vii
ABSTRACT.................................................................................................................... viii
1 INTRODUO........................................................................................................... 9
2 REVISO DE LITERATURA.................................................................................... 10
2.1 Tangerinas: Descrio Geral..................................................................................... 10
2.2 Mancha Marrom de Alternria.................................................................................. 11
2.3 Lagarta Minadora dos Citros e sua Correlao com Doenas Ctricas..................... 12
2.4 Mtodos Preventivos para Controle de Doenas....................................................... 13
2.4.1 Podas de limpeza.................................................................................................... 13
2.5 Monitoramento de Doenas....................................................................................... 14
3 MATERIAL E MTODOS.......................................................................................... 15
3.1 Determinao da relao de danos causados pela lagarta minadora dos citros e
severidade de sintomas da Mancha Marrom de Alternria............................................. 15
3.1.1 Desenvolvimento de escala diagramtica para avaliao de mancha marrom de
alternria em folhas......................................................................................................... 15
3.1.1.1 Desenvolvimento da escala diagramtica........................................................... 15
3.1.1.2 Validao da escala ............................................................................................ 16
3.1.2 Correlao da ocorrncia de danos da LMC e severidade de sintomas da MMA
em folhas destacadas de diversas tangerinas................................................................... 16
3.1.2.1 Preparo do inculo de Alternaria alternata........................................................ 17
3.1.2.2 Inoculao em folhas destacadas......................................................................... 18
3.1.2.3
Avaliaes....................................................................................................................... 18
3.1.3 Correlao da ocorrncia de danos da LMC e severidade de sintomas da MMA
em mudas de tangor Murcott........................................................................................... 18
3.1.3.1 Preparo e inoculao de mancha marrom de alternria....................................... 19
3.1.3.2 Avaliaes........................................................................................................... 19
3.2 Determinao do efeito da poda de limpeza............................................................. 19
3.2.1 Avaliaes.............................................................................................................. 20
4 RESULTADOS E DISCUSSO................................................................................. 21
4.1 Determinao da relao de danos causados pela lagarta minadora dos citros e
severidade de sintomas da Mancha Marrom de Alternria............................................. 21
4.1.1 Desenvolvimento de Escala Diagramtica para avaliao de mancha marrom de
alternria em folhas......................................................................................................... 21
4.1.2 Correlao da ocorrncia de danos LMC e severidade de sintomas de MMA em
folhas destacadas de diversas tangerinas......................................................................... 26
4.1.3 Correlao da ocorrncia de danos da LMC e severidade de sintomas da MMA
em mudas de tangor Murcott.......................................................................................... 30
4.2 Poda de Limpeza....................................................................................................... 33
5 CONCLUSES............................................................................................................ 35
6 REFERNCIAS............................................................................................................ 36

iv
 LISTA DE TABELAS

Tabela 1- Variedades de tangerinas mantidas em casa de vegetao utilizadas

para as inoculaes de folhas destacadas......................................... 17

Tabela 2- Valores dos coeficientes de interseco da reta (a), coeficiente

angular (b) e coeficiente de determinao (R) de regresso linear
y= a+bx................................................................................................ 22

Tabela 3- Valores mnimos e mximos da distribuio de resduos da

regressso linear y= a + bx correspondentes aos avaliadores 1 a 5,
antes e aps o uso de escala diagramtica........................................... 23

Tabela 4- Nmero mdio de leses (NML) de mancha marrom de alternria e

porcentagem de rea lesionada (PAL) aps inoculao de folhas
destacadas (intactas e com galerias de LMC) de diferentes gentipos
de tangerinas (Cordeirpolis/SP, 2009)............................................... 27

Tabela 5- Nmero mdio de leses (NML) de mancha marrom de alternria e

porcentagem de rea lesionada (PAL) aps inoculao de folhas
destacadas (intactas e com galerias de LMC) de diferentes gentipos
de tangerinas (Cordeirpolis/SP, 2010)............................................... 28

Tabela 6- Valores mdios de severidade (porcentagem de rea lesionada do

fruto) e incidncia (porcentagem de frutos com sintoma)
determinados em amostras de 30 frutos por planta.tratamento-1 e
rea abaixo da curva de progresso da doena (AUDPC)
correspondentes aos tratamentos poda e testemunha (Araras/SP,
2008/2009)............................................................ 33

Tabela 7- Valores mdios de severidade (porcentagem de rea lesionada do

fruto) e incidncia (porcentagem de frutos com sintoma)
determinados em amostras de 30 frutos por planta.tratamento-1 e
rea abaixo da curva de progresso da doena (AUDPC)
correspondentes aos tratamentos poda e testemunha (Araras/SP,
2009/2010)........................................................................................... 34

v
 LISTA DE FIGURAS

Figura 1- Escala diagramtica para avaliao da mancha marrom de alternaria

dos citros (Alternaria alternata f. sp. citri) em frutos de tangor
Murcott. Com seis nveis de severidade da doena para pequenas
leses circulares................................................................................... 20

Figura 2- Representao de escala diagramtica de dez nveis para determinar

a porcentagem de rea foliar com sintoma da mancha marrom de
alterncausada por Alternaria alternata............................................... 21

Figura 3- Distribuio dos valores correspondentes a resduos resultantes de

cada avaliador, sem escala: (A) 1, (B) 2, (C) 3, (D) 4 e (E)................ 24

Figura 4- Distribuio dos valores correspondentes a resduos resultantes de

cada avaliador, com escala: (A) 1, (B) 2, (C) 3, (D) 4 e (E)................ 25

Figura 5- Prancha com variedades suscetveis e resistentes de Citrus spp. aps

a inoculao de suspenso de Alternaria alternata em folhas
destacadas com e sem leso de lagarta minadora dos citros (2010).
A. Murcott, B. Weshart, C.Fremont, D. Thomas................................. 29

Figura 6- Nmero mdio de leses (A) e porcentagem de rea lesionada (B)

aps inoculao de Alternaria alternata em folhas intactas e com
leses de LMC de mudas de Murcott (Cordeirpolis/SP) 2010.
Mdias seguidas de mesma letra no diferem estatisticamente entre
si (Tukey, P 0,05)............................................................................. 31

Figura 7- Nmero mdio de leses (A) e porcentagem de rea lesionada (B)

aps inoculao de Alternaria alternata em folhas intactas e com
leses de LMC de mudas de Murcott (Cordeirpolis/SP) 2011.
Mdias seguidas de mesma letra no diferem estatisticamente entre
si (Tukey, P 0,05)............................................................................. 31

Figura 8- Aspecto visual de folhas de tangor Murcott, sem e com injrias

causadas pela lagarta minadora dos citros aps 96 e 144 horas da
inoculao com Alternaria alternata................................................... 32

vi
Manejo da mancha marrom de alternria em citros: poda de limpeza e correlao com a
lagarta minadora

RESUMO

Na citricultura a mancha marrom de alternria (MMA) causada por uma doena fngica que
traz grandes problemas na produo de tangerinas, por afetar a produtividade e qualidade da
fruta. No presente estudo foi avaliado o efeito da poda de limpeza no manejo da MMA em
uma rea com histrico da doena e avaliar a correlao entre a ocorrncia de danos causados
pela lagarta minadora dos citros (LMC) e a incidncia de sintomas da MMA em variedades
resistentes e suscetveis pertencentes ao grupo das tangerinas. O ensaio de poda de limpeza foi
realizado em um pomar de tangor Murcott, no municpio de Araras/SP, sendo avaliados dois
tratamentos: plantas com e sem poda de limpeza, realizada no ms de julho, nos anos de 2008
e 2009. Posteriormente, avaliaes de frutos foram realizadas com o auxlio de escala
diagramtica. Para os ensaios de correlao de danos oriundos da LMC e presena de
sintomas MMA, dois experimentos foram conduzidos. O primeiro experimento foi constitudo
de inoculao de condios do patgeno em folhas destacadas de oito variedades de tangerinas,
quatro suscetveis e quatro resistentes MMA. As folhas de cada variedade foram separadas
em dois tratamentos: com e sem danos de LMC. Aps a inoculao as folhas foram avaliadas
quanto ao nmero de leses e severidade dos sintomas. Para determinar a severidade da
doena foi desenvolvida uma escala diagramtica para folhas com auxlio do programa
ImageJ. O segundo experimento foi realizado em casa de vegetao, com mudas de tangor
Murcott, com e sem leses de LMC mudas sem leses receberam tiametoxam via
drenching. Para avaliao consideraram-se os mesmos parmetros e ferramentas do ensaio
com folhas destacadas. Os resultados obtidos nos ensaio de poda de limpeza mostraram que o
uso da poda teve efeito positivo reduzindo a severidade da MMA em frutos. Quanto aos
resultados nos ensaios de correlao de danos da LMC e intensidade da MMA a partir de
folhas destacadas, os dados mostraram a intensidade da MMA maior em variedades
suscetveis com presena de danos causados pela LMC, j as variedades resistentes no
apresentaram sintomas da doena em nenhum dos tratamentos. No experimento com mudas
de tangor Murcott evidenciou-se que o controle da LMC em variedades suscetveis a MMA
importante, uma vez que plntulas sem danos causados pela LMC (tratadas com tiametoxam)
tiveram menor rea foliar afetada em relao a mudas no tratadas. Conclui-se dessa forma
que o uso de poda de limpeza e o controle da LMC so ferramentas importantes no manejo da
mancha marrom de alternria em tangerinas.

Palavras-chave: Phylloctinistis citrella, Alternaria alternata, poda, tangerina

Alternaria brown spot management: dead wooding and correlation with Citrus
Leafminer

vii
 ABSTRACT

In citriculture, the alternaria brown spot (ABS) is caused by a fungic disease which brings
great problems in the tangerine production, affecting the fruit productivity and quality. The
present study was evaluated the cleansing pruning effect in the ABS management in an area
with history of the disease and evaluate the correlation between the occurrence of damage
caused by citrus leafminer (CLM) and the incidence of ABS symptoms in resistant and
susceptible varieties from the tangerine group. The cleansing pruning assay was made in a
Murcott tangor orchard, at Araras municipality (SP), being evaluated two treatments: plant
with and without cleansing pruning, made in July, in the years of 2008 and 2009. After, fruit
evaluations were made with the aid of diagrammatic scale. For the assays of correlation of
damage from CLM and presence of ABS symptoms, two experiments were conducted. The
first one was constituted of conidial inoculation of the pathogen in detached leaves of eight
tangerine varieties, four resistant and four susceptible against ABS. The leaves of each variety
were separated in two treatments: with and without damages from CLM. After the inoculation
the leaves were evaluated by the number of lesions and severity of the symptoms. To
determine the disease severity was developed a diagrammatic scale for leaves with the aid of
ImageJ software. The second experiment was made in greenhouse, with Murcott tangor
seedlings, with and without CLM lesions seedlings without lesions received tiametoxam by
drenching. The evaluation consisted of the same parameters and tools used in the assay with
detached leaves. The results obtained in the cleansing pruning assay showed that the use of
pruning had positive effect reducing the ABS fruit severity. Regarding the results in the
assays of correlation between CLM damages and ABS intensity by detached leaves, the data
showed the ABS intensity is higher in susceptible varieties with presence of damage caused
by CLM, in the other hand the resistant varieties dont show symptoms of the disease in any
of the treatments. In the experiment with Murcott tangor seedlings the highlights was that the
CLM control in susceptible varieties is important once seedlings without CLM damage
(treated with tiametoxam) had lesser foliar area affected in relation with seedlings without
treatment. It was concluded that the use of cleansing pruning and CLM control are important
tools against alternaria brown spot management.

Key-words: Phylloctinistis citrella, Alternaria alternata, pruning, mandarin

viii
 1 INTRODUO

A citricultura brasileira caracterizada, principalmente, pelo cultivo de variedades

para a extrao de suco. O segmento de frutas ctricas in natura tem grande potencial de
crescimento uma vez que esse nicho pode atender tambm a indstria. Variedades
pertencentes ao grupo das tangerinas so boas opes de frutas de mesa. Originadas na
Indochina, seus frutos so caracterizados pela variabilidade quanto forma, cor e poca de
maturao (DONADIO et al., 2005). Dados disponibilizados pela FAOSTAT (2010) apontam o
Brasil como o terceiro maior produtor de tangerinas, ficando atrs somente de China e
Espanha.
Anlise das regies citrcolas do Brasil mostram o estado de So Paulo como maior
produtor do grupo das tangerinas, sendo a Ponkan (Citrus reticulata Blanco) e o tangor
Murcott (Citrus sinensis L Osbeck x Citrus reticulata Blanco) as variedades mais produzidas
(CASER e AMARO, 2006). Contudo, dados disponibilizados pelo IBGE (2010) mostram que a
produo de tangerinas no pas tem perdido espao para outras frutas. Neste contexto, a
mancha marrom de alternria (MMA), principal doena fngica das tangerinas, considerada
o principal motivo da diminuio de produo e de rea plantada, sendo o estado de So Paulo
o maior produtor e concentrador de reas destinadas a este grupo dos citros.
A MMA causada pelo fungo Alternaria alternata (Fr.) Kiesler, que tem como
caracterstica a facilidade em se estabelecer em locais com alta umidade (T IMMER et al.,
2000). Isso exige do produtor em vistas ao controle em espcies suscetveis e elevada fonte de
inculo um alto gasto em detrimento ao elevado nmero de aplicaes, entre 12 e 15 ao ano
(TIMMER et al., 2003; PERES and TIMMER, 2005). Outros pontos que dificultam o controle da
doena resultam da fcil disperso pelo ar e a possibilidade de se estabelecer em material seco
ou morto (TIMMER et al., 1998), facilmente encontrado no interior de copas de pomares
velhos e descuidados. O uso da poda com o intuito de retirar material doente ou morto uma
forma de controle de doenas em diversas culturas perenes. Na citricultura essa prtica serve
como medida complementar no controle de algumas doenas como rubelose, melanose e
clorose variegada dos citros (TERSI et al., 2001).
Dentre os mtodos de controle de doenas, um dos mais recomendados o uso de
variedades resistentes. De acordo com a literatura h variedades de tangerina que mesmo em
reas de elevada presso de inculo no so observados sintomas nas plantas. Entretanto,

9
mesmo essas plantas aparentemente resistentes, quando na presena de ferimentos causados
pela lagarta minadora dos citros (Phyllocnistis citrella Stainton) observa-se a existncia de
sintomas oriundos de infeces causadas por A. alternata. Tal fato poderia comprometer
variedades consideradas resistentes, uma vez que pouco se sabe sobre os mecanismos de
defesa das variedades de tangerina resistentes a mancha marrom de alternria.
Os objetivos deste projeto foram avaliar o efeito da poda de limpeza no controle da
mancha marrom de alternria e avaliar a influncia das leses causadas pela P. citrella sobre a
intensidade de expresso de sintomas da A. alternata em variedades de tangerinas.

2 REVISO DE LITERATURA

2.1 Tangerinas: Descrio Geral

As variedades que compem o grupo das tangerinas tm como centro de origem a
regio sudeste da sia. Segundo documentos dessa regio h forte indcio que as espcies que
deram origem s variedades de tangerina conhecidas hoje vieram da China e a ndia
(DONADIO et al., 2005). A partir do processo de distribuio de variedades ao longo dos
sculos pode-se descrever as tangerinas como um grupo de variedades adaptadas a regies
desrticas, semitropicais e subtropicais. Os frutos apresentam diversidade quanto s
caractersticas de colorao, aderncia da casca, e nmero de sementes por fruto (PIO et al.,
2005). Apesar de um amplo nmero de variedades de tangerinas existentes, poucas so
utilizadas comercialmente, devido exigncia do consumidor.
A produo de tangerinas na maioria dos pases citrcolas tem como destino principal
o abastecimento do mercado interno, com exceo de alguns pases que tm a exportao
como destino principal. A partir de coletnea de dados obtidos pela FAOSTAT (2010), o
Brasil classificado como o terceiro maior produtor, atrs de China e Espanha.
No caso do mercado brasileiro, dados levantados pelo IBGE (2010) mostram que o
estado de So Paulo o maior produtor e o estado com maior rea plantada. Dentre as
variedades encontradas na maioria dos pomares no Brasil, temos a tangerina Ponkan (Citrus
reticulata Blanco) e o tangor Murcott [Citrus sinensis (L.) Osbeck x Citrus reticulata
Blanco]. A tangerina Ponkan apreciada pelo seu sabor facilidade e no descascamento
enquanto o tangor Murcott apresenta aceitao tanto pela indstria de suco como o mercado
de frutas frescas, alm de ter potencial para exportao (PIO et al., 2005; CASER e AMARO,
2006).

10
 Apesar de o Brasil ser o terceiro maior produtor de tangerinas no mundo, os dados do
IBGE (2010) mostram que entre os dois anos de levantamento de dados (2006 e 2008), o
produto teve sua rea plantada reduzida em sete mil hectares e queda de produo no valor de
19 mil toneladas, aproximadamente. Entre os motivos que podem ter levado a essa situao
destaca-se a mancha marrom de alternria.

2.2 Mancha Marrom de Alternria

A mancha marrom de alternria (MMA) uma doena causada pelo fungo Alternaria
alternata, pertencente ao gnero Alternaria. O gnero engloba espcies saprofticas,
causadoras de doenas tanto em plantas quanto em pessoas, mais especificamente em
indivduos com problemas no sistema imunolgico (ROTEM, 1994). Os fungos do gnero
Alternaria so reconhecidos pelo condio, caracterizado pela colorao escura, presena de
septos longitudinais e transversais (BARNETT e HUNTER, 1998)
A MMA teve sua presena no Brasil confirmada no ano de 2001 e foi rapidamente
distribuda em diversos estados em apenas um ano (GOES et al., 2001; PERES et al., 2003;
SPSITO et al., 2003). A presena do patgeno j foi comprovada na maioria dos pases
citrcolas como frica do Sul, Austrlia, Espanha, Israel, Turquia, Estados Unidos da
Amrica e Itlia (STUART et al., 2009).
Alternaria alternata um fungo facultativo, podendo se alojar em restos de folhas e
qualquer outro tipo de tecido morto ou em decomposio. Sua disseminao pode ser a partir
de ao da chuva ou devido ao do vento, que mais frequente, o que explicaria a rpida
disperso entre pomares distantes (TIMMER et al., 1998).
O processo de colonizao de A. alternata em tecidos vivos tem incio com a
penetrao do fungo. Uma vez atingido o interior do tecido o patgeno comea a liberar uma
toxina cuja funo garantir a destruio das clulas ao redor do ponto de penetrao e assim
garantir os nutrientes para sua sobrevivncia. A toxina que produzida pelo agente causal da
MMA apresenta uma caracterstica peculiar que afetar somente variedades de tangerinas,
denominado HST host specific toxine (toxina especfica ao hospedeiro). Estudos sobre a
toxina produzida pela A. alternata (toxina ACT), tem ao rpida e causa extravasamento
celular (STUART et al., 2009).
Sobre a suscetibilidade e resistncia de variedades de tangerina ao fungo, trabalhos
sobre avaliaes de gentipos em diversas localidades apontam que a maioria das tangerinas e
hbridos de tangerinas apresenta algum nvel de suscetibilidade a MMA, cujo fato deve-se ao
gene de suscetibilidade da doena que seria de carter dominante. Merecem destaque pela alta

11
suscetibilidade variedades como as tangerinas Dancy (Citrus reticulata), Ponkan (Citrus
reticulata Blanco), Sunburst (Citrus reticulata Blanco x C. paradasi Macf.) e o tangor
Murcott. Quanto s variedades resistentes constam-se as tangerinas Clementinas (Citrus
reticulata), Satsumas (Citrus unshiu Marcovitch), o hbrido Fremont (Citrus clementina Hort.
ex Tan. x C. reticulata Blanco) e o hibrido Thomas (BASTIANEL et al., 2005; TIMMER and
CHUNG, 2007; SOUZA et al., 2009; STUART et al., 2009, PACHECO, 2010).
Os sintomas consistem em pequenas manchas marrons ou pretas em folhas jovens,
circundadas ou no por halos amarelos que, posteriormente, se estendem, podendo abranger
grande rea da folha. Normalmente ocorrem nas nervuras, com morte de tecido, espalhando-
se a partir delas, provocando deformao caracterstica, ou seja, as folhas curvam-se
lateralmente. As brotaes novas, tanto vegetativas como da florada, apresentam um aspecto
de requeima no caule, com morte dos ponteiros e posterior tendncia ao envassouramento. Em
ramos finos ocorrem pequenas leses corticosas, com ou sem halo clortico (AKIMITSU et al.
2003).
Os sintomas em frutos logo aps a queda das ptalas podem induzir a absciso do
fruto, limitando a produo da planta. Frutos novos podem amarelecer rapidamente e
apresentar colorao marrom na casca, prximo regio estiolar. Em frutos mais
desenvolvidos, as leses so bastante variveis quanto ao tamanho, podendo atingir grandes
reas da casca, com manchas escuras corticosas, que podem ser destacadas, deixando cicatriz
na casca, o que deprecia o fruto (TIMMER et al., 2003; LARANJEIRA et al., 2005a).

2.3 Lagarta Minadora dos Citros e sua Correlao com Doenas Ctricas
A lagarta minadora dos citros (LMC), conhecida tambm pelo nome cientfico de
Phyllocnistis citrella Stainton, uma das pragas mais difundidas no planeta, cujo primeiro
registro no Brasil foi no ano de 1996 na regio citrcola do estado de So Paulo (PARRA et al.,
2005).
A forma adulta da LMC de uma mariposa com envergadura de quatro mm, asas
escamadas de colorao branca a prata e presena de ponto preto, caracterstico da espcie,
nas asas anteriores. A LMC adulta emerge ao amanhecer e apresenta hbitos noturnos de
copulao e oviposio (PARRA et al., 2005).
O ciclo da praga consiste na deposio de ovos, onde a maior parte das oviposies
ocorre na face abaxial das folhas, aps ecloso dos ovos, as lagartas comeam a se alimentar
do tecido vegetal abaixo da epiderme, formando assim galerias. Os danos gerados pela lagarta
minadora so o descolamento da cutcula que reduz a capacidade fotossinttica e a

12
possibilidade de apresentar enrolamento na folha atacada (PARRA et al., 2005, JESUS et al.,
2008). As galerias formadas pelo ataque de P. citrella tm um efeito secundrio, que servir
como porta de entrada a patgenos oportunistas ou ento potencializar os sintomas de outros,
por exemplo, Xanthomonas axonopodis pv. Citri, agente causal do cancro ctrico (JESUS
JUNIOR et al., 2006). Atualmente o cancro ctrico considerado de difcil controle, onde a
erradicao de plantas contaminadas a nica forma de controle (AMARAL, 2003).
A correlao de entre P. citrella e X. citri j foi mencionada por diversos autores no
decorrer dos anos (AMORIM et al., 2001; CHAGAS et al., 2001, JESUS JUNIOR et al., 2006),
onde se atribui a maior taxa de sucesso do patgeno infectar plantas ctricas quando na
presena de material danificado pela LMC.
Entretanto, no h nenhum estudo que comente qualquer relao sobre o aumento de
incidncia de A. alternata em material lesionado pela larva minadora dos citros.

2.4 Mtodos Preventivos para Controle de Doenas

Como forma de reduzir o elevado custo de produo de citros em razo do controle de
doenas - estudos foram dedicados para observar os efeitos de prticas mais sustentveis onde
se preza o uso de roadeiras ecolgicas e a manuteno dos pomares a partir das podas e
retirada de restos vegetais das plantas para evitar a proliferao dos agentes causais ao
desfavorecer a formao de condies para seu desenvolvimento (TERSI, 2001; BEDENDO,
1995).
O uso de podas em tratos culturais datado desde a antiguidade, visando
manuteno do crescimento vegetativo e produo a partir da retirada de material vegetal de
uma cultura (CARVALHO et al., 2005). A prtica pode ser feita manualmente ou com
mquinas, a escolha depende do tipo de fatores como tamanho do pomar e/ou parte da copa
que se deseja podar. Existem diversos tipos de podas sendo as de maior destaque: poda de
limpeza; de reduo de copa, rejuvenescimento, conduo e formao (PETTO NETO, 1991).

2.4.1 Podas de Limpeza

Dentre os diferentes tipos de podas, as de limpeza consistem na retirada de todos os
galhos e ramos secos, doentes e improdutivos; normalmente o corte feito na parte sadia do
galho da planta. Tal prtica pode ser feita em intervalos regulares ou quando diagnosticado
ramos doentes (PETTO NETO, 1991; CARVALHO et al., 2005).
A poda serve como meio de preveno, pois atua de acordo com os princpios da
erradicao, proteo e regulao, prticas essas que reduzem o inculo inicial, alm de

13
alterarem o microclima do pomar. Tais princpios no so limitados a um grupo de doenas,
mas atuam de maneira a diminuir a incidncia geral de doenas no prximo ciclo de produo
(LARANJEIRA et al., 2005b).
Em citros, a poda de limpeza aplicada na retirada de ramos e galhos mortos ou
infectados, reduzindo possveis focos de infeco de doenas da parte area das plantas, como
melanose, rubelose, leprose, clorose variegada dos citros (CVC) e outros. Essa prtica
tambm favorece a penetrao de luz solar no interior da copa das plantas, estabelecendo
condies menos favorveis as infeces de rgos da parte area, como frutos e ramos
principais. Junto s atividades de poda so tambm adotadas outras prticas de sanitizao
como: 1) descalamento de plantas com acmulo de terra e matria orgnica junto base do
tronco; 2) poda de ramos doentes abaixo da margem inferior das leses, assim como ramos
secos e improdutivos; 3) pincelamento com produtos a base de cobre, como caldas bordalesas
ou tintas plsticas (LARANJEIRA et al., 2005b).

2.5 Monitoramento de Doenas

A relevncia na determinao de mtodos para monitoramento e estimao de danos
por doenas foi ressaltada a partir da necessidade de se produzir cada vez mais e o temor da
falta de alimentos para o abastecimento da populao (HORSFALL and COWLING, 1978). O
processo de avaliar uma doena fitopatognica desde ento foi considerado um dos pontos-
chave para determinao de modelos de estimativa de produtividade, como tambm para
criao de ferramentas de monitoramento de doenas e at para avaliao de mtodos de
controle.
Na estimativa dos danos causados por doenas alguns atributos precisam ser seguidos
para garantir seu sucesso. Incidncia e severidade so dois pontos importantes nesse processo,
onde o primeiro est associado presena de sintomas de uma doena, dentro de um grupo de
plantas avaliadas, representado por um valor de porcentagem, enquanto a severidade est
relacionada quantificao do tecido vegetal afetado pelo patgeno (CAMPBELL and MADDEN,
1990).
Se determinar os danos de uma doena escolher um mtodo que seja preciso e tenha
acurcia. Basicamente, esse deve permitir ao avaliador estimar um valor prximo ao valor real
e com baixa variao; independentemente da experincia que este tenha em diagnosticar a
doena. A escala de notas consiste em dividir em classes de notas diversos nveis de
severidade, ou incidncia, de uma doena. Infelizmente a escala de notas prtica somente
para pessoas de grande vivncia prtica. Um ponto negativo no uso da escala de notas que

14
ela no permite com que o avaliador possa associar a severidade representada pela nota com o
dano real. Para resolver este problema foram desenvolvidas escalas de notas onde cada nvel
de severidade acompanhado por uma ilustrao correspondente da surgiu as chamadas
escalas diagramticas (HORSFALL and COWLING, 1978; CAMPBELL and MADDEN, 1990).

3 MATERIAL E MTODOS

3.1 Determinao da relao de danos causados pela lagarta minadora dos citros e
severidade de sintomas da Mancha Marrom de Alternria

3.1.1 Desenvolvimento de escala diagramtica para avaliao de mancha marrom de

alternria em folhas
Nos ensaios onde avaliou a correlao da intensidade da mancha marrom de alternria
(MMA) em material com a presena de danos da lagarta minadora dos citros (LMC), os
parmetros de avaliao foram pontuaes em folhas e rea foliar lesionada devido ao do
fungo A. alternata.
Nesse estudo foi elaborada uma escala diagramtica para determinar os nveis de
severidade em rea foliar lesionadas pela mancha marrom de alternria, dada inexistncia de
publicaes nesse contexto.
O mtodo com escala traz vantagens por consumir menos tempo do avaliador e
permite a padronizao da metodologia e, por conseqncia, interpretao e comparao de
dados.

3.1.1.1 Desenvolvimento da escala diagramtica

O desenvolvimento da escala diagramtica foi feita a partir da coleta de 197 folhas de
tangerina Dancy e tangor Murcott. O material coletado em campo foi fotografado
individualmente com uma cmera Sony Cyber-shot utilizando uma resoluo de 7.0
megapixels com fator de zoom 3. A partir das imagens registradas realizou-se a determinao
da porcentagem de rea lesionada com o auxlio do programa ImageJ (gratuito).
Depois de determinadas as porcentagens de rea lesionada pelo ImageJ foram
determinados os valores de severidade a serem representados pela escala diagramtica. Os
extremos da escala foram a menor e maior porcentagem de rea lesionada dentro das 197
folhas coletadas. Os valores intermedirios foram determinados com a ajuda da tabela de
HORSFALL and BARATT (1945), a partir da qual foram estabelecidas estas de acordo com a

15
frequncia, em termos percentuais, a severidade das 197 folhas coletadas tinha maior
frequncia e atribuiu-se o valor de percentagem a nota da escala.

3.1.1.2 Validao da escala

Para validar a escala um total de cinco avaliadores, dois com experincia na avaliao
da doena e trs sem experincia, determinaram a porcentagem de rea foliar lesionada por A.
alternata de um total de 100 folhas. A anlise das fotos foi feita em duas etapas, a primeira
consistiu na avaliao sem o auxlio de escala e na segunda etapa na reavaliao das folhas
com auxlio da escala diagramtica.
Para determinar a viabilidade da escala foi empregada a metodologia descrita por
CAMPBELL and MADDEN (1990), na qual feita a regresso linear das estimativas de
severidade de cada avaliador. Na primeira e segunda etapa do processo de validao da
escala. Feitas as regresses lineares, calcula-se a distribuio de erros dos avaliadores em cada
etapa. Com a distribuio de erros e as regresses lineares de cada avaliador, em cada etapa,
possvel determinar a acurcia, estimada a partir do coeficiente angular (b) e do valor de
interseco da reta (a), e a preciso, a partir do coeficiente de regresso da reta (R) e da
distribuio de erros.

3.1.2 Correlao da ocorrncia de danos da LMC e severidade de sintomas da MMA em

folhas destacadas de diversas tangerinas
O presente ensaio consistiu em avaliar os efeitos da presena de danos ocasionados
pela lagarta minadora dos citros (Phyllocnistis citrella) com a severidade dos sintomas
causados pelo agente causal da mancha marrom de alternria (Alternaria alternata). Para tal
foram coletadas folhas jovens de oito variedades de tangerinas, sendo quatro variedades
resistentes e quatro suscetveis (AZEVEDO et al. 2010; PACHECO, 2010). O material coletado
foi de plantas de quatro anos de idade mantidas em casa de vegetao, abaixo segue a relao
de resistncia e suscetibilidade das variedades utilizadas (Tabela 1).

16
 Tabela 1- Variedades de tangerinas mantidas em casa de vegetao utilizadas
para as inoculaes de folhas destacadas.

Variedades Comportamento
Variedades
Thomas Resistente
Cravo Resistente
Fremont Resistente
Ortanique Resistente
Ponkan Suscetvel
Green Rind Suscetvel
Murcott Suscetvel
Weshart Suscetvel

Neste ensaio, o objetivo era ter em mos folhas com e sem a presena de danos
causados pela lagarta minadora dos citros para serem inoculadas com suspenso de esporos de
A. alternata. Por isso, optou-se em trabalhar com variedades mantidas em casa de vegetao.
O procedimento garantiu que o material utilizado estivesse isento do patgeno a ser
estudado e de qualquer defensivo qumico que interferisse nos resultados obtidos no ensaio.
Outro ponto no uso de variedades em casa de vegetao foi conduzir a vegetao das plantas
de forma a garantir a ocorrncia de danos da lagarta minadora dos citros nas variedades
estudadas no perodo ideal para anlise da ao do patgeno sobre o tecido vegetal, que no
caso no incio da vegetao da planta, antes que o tecido atinja a maturidade.

3.1.2.1 Preparo do inculo de Alternaria alternata

O inculo inicial foi obtido a partir de leses tpicas da doena em folhas, que uma vez
desinfetadas superficialmente por meio de lavagens (etanol 70%, hipoclorito 3% de cloro
ativo e gua destilada esterilizada), foram inoculadas em meio de cultura BDA (200g batata,
20g dextrose, 15g Agar L-1) acrescido do fungicida carbendazin, para inibir a proliferao de
fungos contaminantes, e incubados a 27 C em fotoperodo de 12 horas. Aps 48 horas de
crescimento, o miclio emergente foi transferido para meio de cultura BDA e incubado nas
mesmas condies do inculo inicial. Aps uma semana, e confirmada a identidade do isolado
atravs de microscopia ptica das estruturas de reproduo assexuada, 50 discos (5 mm) com
colnias do fungo foram transferidos para meio de carbonato de clcio - CaCO3, para induo
de esporulao (30 g de CaCO3, 20 g de sacarose e 20g de Agar L-1), seguido da adio de 2
mL de gua destilada esterilizada na superfcie do meio de cultura. As culturas foram
mantidas em ambiente controlado a 27 C e fotoperodo de 12 horas durante quatro dias.
Aps quatro dias, 10 mL de gua destilada foram adicionadas por superfcie de placa
e, com a ajuda de uma esptula estril, os condios foram raspados, filtrados em dupla camada

17
de gaze esterilizada e quantificados em hemocitmetro, sendo a suspenso de esporos ajustada
para a concentrao final de 105 condios mL-1.

3.1.2.2 Inoculao em folhas destacadas

Para a inoculao, folhas jovens de mesma idade foram coletadas de plantas mantidas
em casa de vegetao. Seis folhas foram de cada variedade foram coletadas, das quais trs
mostravam-se intactas e as demais apresentavam galerias causadas pelo ataque da lagarta
minadora. Essas folhas foram lavadas em gua corrente, secas ao ambiente e acondicionadas
em placas de Petri, contendo uma camada de papel filtro e uma pequena poro de algodo
umedecido. Em cada placa foram acondicionadas 3 folhas, intactas ou injuriadas, de cada
variedade.
A inoculao foi realizada com borrifador contendo uma suspenso conidial com 105
condios. mL-1, cobrindo toda a superfcie das abaxial das folhas acondicionadas. A seguir o
material foi mantido em BOD (27 C, fotoperodo 12 horas, umidade relativa de 56%). Essa
metodologia foi adaptada de PEEVER et al. (1999). Adotou-se o delineamento fatorial
inteiramente casualizado, com trs repeties. Cada unidade amostral foi representado por
uma folha.

3.1.2.3 Avaliaes
O ensaio foi realizado nos anos de 2009 e repetido no ano de 2010. O delineamento do
ensaio consistiu em oito variedades inoculadas com esporos de MMA em suspenso,
divididas em dois tratamentos, material com e sem presena de danos ocasionados pela LMC,
com trs repeties por variedade / tratamento.
As avaliaes foram realizadas em intervalos de 24 horas a partir do momento que foi
realizada a inoculao. No primeiro ensaio (2009), as avaliaes estenderam at as120 horas
aps inoculao, enquanto no segundo (2010) foi estendido at as 72 horas aps a inoculao.
As variveis avaliadas foram o nmero de leses por folha e percentual de rea lesionada pela
doena ao final do ensaio. Este ltimo foi determinado a partir do uso de escala diagramtica
especfica desenvolvida conforme descrito no item 3.2.1.1.
Os valores obtidos foram submetidos a teste de comparao de mdias a 5% de
probabilidade.

18
3.1.3 Correlao da ocorrncia de danos da LMC e severidade de sintomas da MMA em
mudas de tangor Murcott
Em ensaio realizado em casa de vegetao, nos anos de 2010 e 2011, avaliaram-se os
efeitos da mancha marrom de alternria em mudas de tangor Murcott de um dois anos de
idade, enxertadas em limo-cravo, na presena e ausncia de danos causados pela lagarta
minadora dos citros. O delineamento foi inteiramente casualizado com dois tratamentos: a)
mudas com controle de LMC (tiametoxam); b) mudas testemunha (com galerias de LMC). A
aplicao do tiametoxam foi via substrato com a dose de 1,5 g muda-1. Cada tratamento foi
representado por dez repeties, sendo cada uma composta por uma muda.
A seguir, todas as mudas foram mantidas em casa de vegetao, sob a presena de
lagarta minadora dos citros. Uma vez detectada a presena de leses de LMC nas plantas
testemunhas inoculou-se as mudas de tangor Murcott, sendo empregada suspenso de A.
alternata.

3.1.3.1 Preparo e inoculao de mancha marrom de alternria

O preparo do inculo foi o mesmo descrito no item 3.2.1.2. O processo de inoculao
foi feito a partir do uso de borrifador para a aplicao da suspenso em toda parte rea da
muda, em seguida o material foi ensacado, utilizando sacos plsticos previamente umedecidos
na parte interior, para garantir alta umidade relativa. Outro ponto respeitado foi a realizao
do processo de preparo e inoculao da A. alternata de forma a coincidir com a presena de
brotao ainda tenra e leses recentes da LMC.

3.1.3.2 Avaliaes
As avaliaes foram realizadas em intervalos de 24 horas aps a inoculao,
estendendo-se at 120 horas no primeiro ensaio e at 96 horas na repetio do mesmo. Nessas
avaliaes foi determinado o nmero de leses tpicas da mancha marrom de alternria e a
porcentagem de rea lesionada em folhas mediante uso de escala diagramtica conforme item
3.2.1.1. Os valores obtidos foram submetidos a anlise de varincia e as mdias comparadas
mediante teste de Tukey, com 5% de probabilidade.

3.2 Determinao do efeito da poda de limpeza

O ensaio foi realizado em pomar de tangor Murcott [Citrus reticulata Blanco x C.
sinensis (L.) Osbeck] enxertado sobre limo Cravo (Citrus limonia Osbeck) com 13 anos de

19
idade e espaamento de 7 metros entre linhas e 4 metros entre plantas, localizado no
municpio de Araras-SP.
O ensaio foi dividido em dois tratamentos: a) plantas submetidas poda de limpeza -
retirada de galhos e ramos doentes ou morto na copa da planta; e b) plantas sem poda
(testemunha). A poda de limpeza foi realizada na primeira quinzena de julho, dois meses
antes do perodo de florao das tangerineiras, que normalmente ocorre no ms de setembro.
Cada tratamento foi composto por 20 repeties, onde cada parcela foi representada
por uma planta. O ensaio foi repetido por duas safras consecutivas, 2008/2009 e 2009/2010.

3.2.1 Avaliaes
Foram realizadas trs avaliaes, as quais consistiram na determinao dos ndices de
incidncia (em porcentagem) e severidade dos sintomas em dois anos consecutivos, no
perodo de dezembro a fevereiro de 2008/2009, e de novembro a janeiro na safra 2009/2010.
Nessas avaliaes foram empregadas amostras de 30 frutos por planta tratamento-1. As
avaliaes nos dois perodos foram mensais, totalizando trs avaliaes por perodo.
A incidncia foi determinada pelo estabelecimento, em porcentagens, do nmero de
frutos com sintomas tpicos da doena, enquanto a severidade o foi mediante emprego de
escala diagramtica estabelecido por RENAUD et al. (2004), cujas notas variam de zero
(ausncia de sintomas) a 6, com 25% da rea dos frutos coberta por leses (Figura 1).
Posteriormente, a rea abaixo da curva de progresso da doena (AUDPC). Frmula utilizada
foi:

Onde y representa os valores de severidade da doena e t o perodo de avaliao

20
 Figura 1. Escala diagramtica para avaliao da mancha marrom de alternaria dos
citros (Alternaria alternata f. sp. citri) em frutos de tangor Murcott. Com seis nveis
de severidade da doena para pequenas leses circulares.

Os dados obtidos foram submetidos a anlise de varincia e posteriormente

comparao por teste de mdias (Tukey, 5%).

4 RESULTADOS E DISCUSSO

4.1 Determinao da relao de danos causados pela lagarta minadora dos citros e
severidade de sintomas da Mancha Marrom de Alternria

4.1.1 Desenvolvimento de Escala Diagramtica para avaliao de mancha marrom de

alternria em folhas
A partir do material coletado em campo, fotografado e processado em programa
ImageJ elaborou-se uma escala diagramtica representando os nveis de sintoma em dez notas
devidamente ilustradas, onde 0 representa a folha sem sintomas, e as notas de 1 a 9
representam 0,3; 3,5; 8; 15; 34; 61; 80; 90 e 97 por cento de rea foliar tomada de mancha
causada pela Alternaria alternata, conforme ilustrado na figura 2.

21
Figura 2. Representao de escala diagramtica de dez nveis para determinar a porcentagem de rea
foliar com sintoma da mancha marrom de alternria causada por Alternaria alternata.

No processo de validao de escala diagramtica necessrio realizar uma regresso

linear atravs da qual so obtidos os valores de interseco da reta (a), os coeficientes angular
(b) e de determinao (R). Os dados so ento comparados com uma regresso ideal, onde a
igual a zero e b a um, o que significaria que todos os pontos determinados pela escala seriam
iguais aos valores reais (y= bx) (CAMPBELL and MADDEN, 1990).
Na primeira etapa, os valores correspondentes estimativa da porcentagem de rea
foliar lesionada sem o auxlio da escala diagramtica, concernentes ao coeficiente de
interseco da reta (a), coeficiente angular (b), regresso da reta (R) e distribuio de
resduos variaram, respectivamente, entre: 2,32 e 19,56; 0,84 e 0,97; 0,66 e 0,97; e, -10,66 e
77,99 (Tabelas 2 e 3).
Na etapa seguinte, com o auxlio de escala diagramtica, os valores para o coeficiente
de interseco da reta (a), coeficiente angular (b), regresso da reta (R) e distribuio de
resduos variaram, respectivamente, entre: -2,17 e 0,49; 0,94 e 1,04; 0,94 e 0,96; e, -22,34 e
18,60 (Tabelas 2 e 3).
Quando comparados os ndices de acurcia obtidos pela regresso linear nas duas
etapas pelos avaliadores (Tabela 2), nota-se diferenas significativas. Houve melhora neste
quesito para todos os participantes quando utilizada a escala desenvolvida, uma vez que a
diferena entre os valores obtidos para o coeficiente de interseco (a) e o considerado ideal
(zero) diminuiu. Dos membros participantes, os avaliadores 1, 3 e 4 tiveram sua acurcia

22
melhorada a ponto de no haver diferena estatstica entre os coeficientes de interseco
obtidos por eles e o valor ideal em anlise de varincia com teste t em 5% de significncia.

Tabela 2- Valores dos coeficientes de interseco da reta (a), coeficiente angular

(b) e coeficiente de determinao (R) de regresso linear y= a+bx

Sem escala Com escala

1
AVALIADOR a b2 R a b R
NS
1 2,74*** 0,90*** 0,97 -0,60 0,95*** 0,96
2 4,49*** 0,88*** 0,95 -2,17** 1,04*** 0,96
3 2,22*** 0,90*** 0,97 0,49NS 0,96*** 0,95
NS
4 2,32*** 0,84*** 0,96 -0,77 0,94*** 0,94
5 19,56*** 0,97*** 0,66 -2,04* 1,03*** 0,94

Asteriscos indicam que valor de interseco da reta foi significamente diferente de zero (a=0).
***(0,1%), **(1%), NS (5%) em teste t-student
Asteriscos indicam que houve diferena significativamente de um (b=1). ***(0,1%) e **(1%)
em teste t-student

Quanto aos valores do coeficiente angular verifica-se que houve um melhor ajuste do
mesmo para todos os avaliadores. Embora o valor do coeficiente angular no ser
estatisticamente igual a um para nenhum avaliador isso, por outro lado, no invalida o fato de
todos terem sua acurcia melhorada aps uso de escala diagramtica.
Referente preciso dos avaliadores, quando se avalia os dados correspondentes aos
coeficientes de correlao (R) nota-se que o emprego da escala diagramtica se refletiu na
obteno de resultados consistentes (Tabela 2). Provavelmente, tal fato resultou da facilidade
em se distinguir rea lesionada e sadia da folha. Por outro lado, analisar a distribuio dos
erros dos avaliadores (resduos) e o intervalo dos valores mnimo e mximo de resduo foi
possvel verificar que a distribuio dos erros foi menor aps o uso da escala diagramtica,
exceto na faixa de 30 a 60 % de rea foliar lesionada (Figuras 3 e 4 e Tabela 3). Tais
informaes mostram que a escala nesse ponto apresenta um intervalo grande nesta regio e
isso acarreta uma maior distribuio de resduos nesta faixa. Entretanto, de uma maneira
geral, isso no afetou a preciso da escala, pois ela discriminou adequadamente os diversos
tipos de leses, j que boa parte das notas atribudas mediante auxlio da escala se concentrou
na faixa residual de -10 a +10, considerada tecnicamente aceitvel (BELASQUE JR. et al.,
2005). Para melhorar a escala diagramtica pode ser coletada uma amostra maior de material
sintomtico para averiguar a possibilidade de acrescentar uma classe a mais, entre 30 e 60, na
atual escala diagramtica.

23
Tabela 3 - Valores mnimos e mximos da distribuio de resduos da regresso
linear y= a + bx correspondentes aos avaliadores 1 a 5, antes e aps o uso de escala
diagramtica.

Sem escala Com escala

AVALIADOR Mnimo Mximo Mnimo Mximo
1 -10,66 12,23 -17,35 11,16
2 -21,52 14,27 -13,44 16,53
3 -11,98 12,19 -15,65 19,04
4 -18,64 9,41 -22,34 16,63
5 -24,89 77,99 -19,42 18,6

24
Figura 3. Distribuio dos valores correspondentes a resduos resultantes de cada avaliador, sem escala:
(A) 1, (B) 2, (C) 3, (D) 4 e (E) 5.

25
Figura 4. Distribuio dos valores correspondentes a resduos resultantes de cada avaliador, com escala:
(A) 1, (B) 2, (C) 3, (D) 4 e (E)

26
4.1.2 Correlao da ocorrncia de danos LMC e severidade de sintomas de MMA em
folhas destacadas de diversas tangerinas
No ensaio de 2009, das oito variedades avaliadas, quatro delas Thomas, Cravo,
Fremont e Ortanique no apresentaram sintoma de mancha marrom de alternria em folhas,
independente se injuriadas ou no pela lagarta minadora dos citros. As demais variedades,
Weshart, Ponkan, Murcott e Green Rind, apresentaram sintomas da MMA em folhas dos dois
tratamentos avaliados (Tabela 4). A menor e maior porcentagem de rea foliar lesionada pela
MMA em folhas sem leso da LMC foi 1,2 % (Green Rind) e 57,3 % (Murcott). J no
tratamento com leses da LMC a amplitude foi de 17,5 % (Green Rind) e 80,3 % (Weshart).
Na repetio do ensaio em 2010, novamente as variedades Thomas, Cravo, Fremont e
Ortanique no apresentaram sintoma de MMA tanto em folhas intactas, quanto nas contendo
leses causadas pela LMC. Por outro lado, as variedades Weshart, Ponkan, Murcott e Green
Rind apresentaram sintomas de MMA nos dois tratamentos, com exceo da variedade Green
Rind que no apresentou sintomas de MMA em folhas lesionadas pela LMC (Tabela 5). No
tratamento de folhas com leses de LMC, a menor e maior porcentagem de rea foliar com
sintoma de MMA foram 0,0 (Green Rind) e 61,67 (Weshart). J no tratamento de folhas sem
leses de LMC, a menor e maior porcentagem de rea foliar com sintoma de MMA foram
10,33 (Green Rind) e 49,33 (Murcott).
Os dados relativos aos dois ensaios para as oito variedades, realizados em 2009 e
2010, indicam que as variedades resistentes no so afetadas pela mancha marrom de
alternria mesmo em condies que haja ferimento em tecidos, reafirmando a caracterstica de
resistncia das variedades Fremont, Cravo, Ortanique e Thomas, avaliadas em ensaios de
campo por PACHECO (2010).
Quanto aos ensaios conduzidos em 2009 e 2010 verificou-se que os sintomas de
mancha marrom de alternria so mais severos quando ocorrem em presena de leses de
oriundas de ataque pela lagarta minadora dos citros recentes. exceto no caso da Green Rind
que no ensaio de 2010 no apresentou sintomas do patgeno no tratamento com folhas
injuriadas pela lagarta minadora.

27
Tabela 4 - Nmero mdio de leses (NML) de mancha marrom de alternria e porcentagem de rea lesionada (PAL) aps inoculao
de folhas destacadas (intactas e com galerias de LMC) de diferentes gentipos de tangerinas (Cordeirpolis/SP, 2009).

NML (no.) PAL (%)

Variedades 48 hs* 72 hs 96 hs 120 hs
minador sadia minador sadia minador sadia minador sadia
Weshart 9,0 A b1 19,7 B a 21,3 A b 38,0 B a 49,7 AB a 12,0 AB a 80,3 A a 12,7 B b
Ponkan 0,0 A a 1,7 CD a 0,0 B a 2,3 D a 12,5 BC a 5,0 BC a 56,0 A a 5,0 B b
Green Rind 2,0 A b 10,3 BC a 2,3 B b 13,7 C a 2,7 C a 0,0 C a 17,5 B a 1,2 B a
Murcott 5,6 A b 51,3 A a 22,3 A b 68,3 A a 58,3 A a 49,7 A a 77,0 A a 57,3 A b
Thomas 0,0 A a 0,0 D a 0,0 B a 0,0 D a 0,0 C a 0,0 C a 0,0 B a 0,0 B a
Cravo 0,0 A a 0,0 D a 0,0 B a 0,0 D a 0,0 C a 0,0 C a 0,0 B a 0,0 B a
Fremont 0,0 A a 0,0 D a 0,0 B a 0,0 D a 0,0 C a 0,0 C a 0,0 B a 0,0 B a
Ortanique 0,0 A a 0,0 D a 0,0 B a 0,0 D a 0,0 C a 0,0 C a 0,0 B a 0,0 B a
: Mdias seguidas pela mesma letra, maiscula na coluna e minscula na linha, no apresentam diferena significativa entre si (Tukey, 5%); * horas aps
inoculao

28
Tabela 5 - Nmero mdio de leses (NML) de mancha marrom de alternria e porcentagem de rea lesionada (PAL) aps inoculao
de folhas destacadas (intactas e com galerias de LMC) de diferentes gentipos de tangerinas (Cordeirpolis/SP, 2010).

NML (no.) PAL (%)

Nmero mdio de pontuaes Mdia da porcentagem de rea foliar lesionada
Variedades
24 hs* 48 hs 72 hs
Minador sadia minador sadia minador sadia
Weshart 7,67 A b1 36,33 A a 55,00 A b 118,33 A a 61,67 A a 19,00 ABC b
Murcott 0,00 B a 0,00 B a 12,00 B b 63,33 B a 58,33 A a 49,33 A a
Ponkan 0,00 B a 0,00 B a 0,00 C b 22,67 C a 36,67 AB a 32,80 AB a
Green Rind 0,00 B a 0,00 B a 0,00 C b 18,33 C a 0,00 C b 10,33 BC a
Fremont 0,00 B a 0,00 B a 0,00 C a 0,00 D a 0,00 C a 0,00 C a
Cravo 0,00 B a 0,00 B a 0,00 C a 0,00 D a 0,00 C a 0,00 C a
Thomas 0,00 B a 0,00 B a 0,00 C a 0,00 D a 0,00 C a 0,00 C a
Ortanique 0,00 B a 0,00 B a 0,00 C a 0,00 D a 0,00 C a 0,00 C a
: Mdias seguidas pela mesma letra, maiscula na coluna e minscula na linha, no apresentam diferena significativa entre si (Tukey, 5%); *
horas aps inoculao

29
 Um ponto importante sobre os resultados obtidos est nos mecanismos de ataque do
patgeno e de defesa do hospedeiro. Segundo a literatura, h um consenso de que todo
ferimento em tecido vegetal serve como porta de entrada para patgenos, permitindo com que
o risco de estabelecimento de um agente seja superior em comparao com um tecido sem
nenhum dano fsico. Fato que no se confirmou nas variedades resistentes avaliadas neste
caso, e somente foi confirmado nas variedades suscetveis. Isso mostra que os gentipos de
tangerina resistentes no dependem de mecanismos fsicos para impedir o desenvolvimento da
doena e que o mecanismo de resposta deve estar ligado a processos bioqumicos no
momento em que o patgeno tenta colonizar o tecido (IAKIMOVA et al., 2006; STUART et al.
2010).

Figura 5. Prancha com variedades suscetveis e resistentes de Citrus spp. aps a inoculao de
suspenso de Alternaria alternata em folhas destacadas com e sem leso de lagarta minadora
dos citros (2010). A. Murcott, B. Weshart, C. Fremont, D. Thomas.

O conhecimento sobre os mecanismos de defesa de variedades resistentes de tangerina

pouco e no h publicaes abordando o assunto de forma conclusiva. Quanto a variedades
suscetveis a mancha marrom de alternria sabe-se que o processo colonizao ocorre devido
a agentes antioxidantes produzidos pelo patgeno que anulam os efeitos de molculas geradas

301
por peroxidases pela planta, devido resposta de hipersensibilidade. Trabalhos publicados por
LIN e outros pesquisadores em 2009 e 2010 mostram a importncia de um gene homlogo ao
YAP1 (AaAP1) encontrado em Alternaria alternata como responsvel em induzir o patgeno
a produzir molculas que inibem a ao de perxidos poderiam levar o fungo a morte. Alm
disso, a presena de alta quantidade de perxidos em clulas na planta pode induzir ao
processo de morte celular programada (IAKIMOVA et al., 2006; LIN et al., 2009). A presena
deste gene homlogo pode ser considerada crucial para a A. alternata, pois, ensaios de
inoculao em folhas destacadas de tangelo Minneola (variedade suscetvel) com patgeno
mutante desprovido do gene AaAp1 no apresentaram sintomas em mais de 80% do material
inoculado, e os que apresentaram sintoma foram bem abaixo da estirpe selvagem (LIN et al.,
2009; LIN et al., 2010).
Sobre as variedades resistentes no h nenhum trabalho publicado que elucide o
porqu da A. alternata no se estabelecer em seus tecidos. O que se sabe por ora que um dos
possveis pontos cruciais na resistncia de certas variedades est nas vias de produo de
etileno e cido jasmnico, resultados parciais mostram que variedades resistentes apresentam
diferena na regulao dessas vias quando comparadas com variedades suscetveis (STUART et
al., 2010).

4.1.3 Correlao da ocorrncia de danos da LMC e severidade de sintomas da MMA em

mudas de tangor Murcott
Os resultados nos dois anos de ensaio apresentados a seguir mostraram um
comportamento semelhante, exceto no tempo de expresso dos sintomas fato provavelmente
relacionado ao perodo de no qual foram feitos os ensaios.
No ensaio de 2010, as mudas foram inoculadas no ms de maio. Quarenta e oito horas
aps a inoculao surgiram os primeiros sintomas de mancha marrom de alternria. Nas
avaliaes de nmero mdio de pontuaes encontradas nos tratamentos houve diferena
estatstica somente depois de noventa e seis horas aps a inoculao 26,45 leses nas mudas
testemunhas e 12,43 nas mudas tratadas com tiametoxam. Na avaliao de mdia de
porcentagem de rea lesionada (120 horas aps a inoculao), nas mudas testemunhas havia
um valor mdio de 28,28 % de rea foliar lesionada pela doena, enquanto que nas mudas
tratadas com tiametoxam havia valor mdio de 51,20 % de rea foliar lesionada pela doena
(Figura 6). importante salientar que os resultados obtidos foram a partir da avaliao de
ramos novos presentes em mudas de tangor Murcott de mesma idade

31
 Figura 6. Nmero mdio de leses (A) e porcentagem de rea lesionada (B) aps inoculao
de Alternaria alternata em folhas intactas e com leses de LMC de mudas de Murcott
(Cordeirpolis/SP) 2010. Mdias seguidas de mesma letra no diferem estatisticamente entre si
(Tukey, 5%)

No ensaio de 2011, a inoculao ocorreu no ms de Janeiro. Os primeiros sintomas de

mancha marrom de alternria surgiram 24 horas aps a inoculao nos tratamentos. Na
avaliao de nmero mdio de pontuaes causadas pela mancha marrom de alternria, o
tratamento testemunha apresentou valor estatisticamente superior logo nas primeiras vinte
quatro horas aps a inoculao (15,03 pontuaes contra 2,81no tratamento onde foi aplicado
tiametoxam). No final da avaliao do nmero mdio de pontuaes, nas mudas testemunhas
havia a mdia de 18 leses causadas pela A. alternata enquanto nas mudas tratadas com
tiametoxam esse valor foi de 4,83. Quanto ao valor mdio de rea foliar lesionada pela
doena, o tratamento testemunha chegou a 5,65 % de rea foliar com sintoma da MMA contra
39,61 % de rea foliar com sintoma de MMA no tratamento sob efeito do tiametoxam (Figura
7).

Figura 7. Nmero mdio de leses (A) e porcentagem de rea lesionada (B) aps inoculao
de Alternaria alternata em folhas intactas e com leses de LMC de mudas de Murcott
(Cordeirpolis/SP) 2011. Mdias seguidas de mesma letra no diferem estatisticamente entre si
(Tukey, 5%)

32
 O ensaio mostrou que mudas de Murcott sob condies propcias para o
desenvolvimento do fungo apresentam diferena significativa na expresso de sintomas da A.
alternata na presena, ou no, de danos de minador dos citros (Figura 8).

Figura 8. Aspecto visual de folhas de tangor Murcott, sem e com injrias causadas pela lagarta minadora
dos citros aps 96 e 144 horas da inoculao com Alternaria alternata.

Os resultados obtidos nas duas repeties do ensaio mostram que o comportamento de

variedades suscetveis quando presentes danos da LMC e condios de MMA a severidade
superior comparado em situao onde h presena de MMA, mas a LMC controlada.
Nas primeiras horas aps a inoculao de suspenso com esporos do patgeno o
nmero de leses iniciais maior em tecidos intactos, enquanto que tecidos atacados pela
LMC possuem quantidade significativamente menor (Figuras 6A e 7A), comportamento
observado uma vez que no tratamento testemunha as galerias causam um desprendimento
entre a cutcula e o parnquima regio onde o fungo se estabelece. Quando foi feita a ltima
avaliao para determinar a porcentagem de rea lesionada nas folhas das mudas verificou

33
que o tratamento testemunha (presena de danos de minador dos citros) teve uma mdia de
rea foliar lesionada maior em comparao com o tratamento tiamexotam (Figuras 6B e 7B),
isso se deve justamente a presena de galerias nas folhas.
Conforme reviso recente sobre a mancha marrom de alternria (STUART et al., 2009)
as leses de Alternaria alternata tendem a ocorrer a partir de penetrao pelo estmato, isso
significa que a rea de contato dos condios limitado a clulas prximas aos estmatos. No
caso de tecidos que presena de galerias o patgeno provavelmente consegue com que a
toxina produzida tenha um alcance maior de imediato, provavelmente devido ao fato que nas
horas de maior transpirao das folhas existe um acmulo de gua no interior das galerias
(fato observado durante ensaios). Nessa situao, a ao da toxina liberada pelo patgeno
poderia estar ligada o processo de produo de agentes oxidantes pelas clulas em contato
com a toxina resultando numa maior quantidade de clulas mortas.

4.2 Poda de Limpeza

No primeiro ano de avaliao (2008/2009), os valores de incidncia de sintomas
correspondentes aos tratamentos de poda e testemunha, na primeira data de avaliao, foram
respectivamente 39,12 e 42,00 % dos frutos. No final das avaliaes, a incidncia de sintomas
nos frutos, chegou a 81,0 e 97,5 %. Quanto severidade dos sintomas nos tratamentos de
poda e testemunha, os valores foram respectivamente de 0,15 e 0,22 % da superfcie dos
frutos lesionados na primeira avaliao, e 0,56 e 1,55 % na ltima avaliao (Tabela 6).

Tabela 6 - Valores mdios de severidade (porcentagem de rea lesionada do

fruto) e incidncia (porcentagem de frutos com sintoma) determinados em
amostras de 30 frutos por planta tratamento-1 e rea abaixo da curva de progresso
da doena (AUDPC) correspondentes aos tratamentos poda e testemunha
(Araras/SP, 2008/2009)

dez/08 jan/09 fev/09 AUDPC

Severidade Poda 0,15 a1 0,76 b 0,56 b 24,63 b
(%) Testemunha 0,22 a 1,35 a 1,55 a 49,46 a
Incidncia Poda 39,12 a 67,37 b 81,00 b 3048,93 b
(% ) Testemunha 42,00 a 82,25 a 97,50 a 3626,88 a
1
Mdias seguidas por letras iguais nas colunas indicam que no houve diferena estatisticamente
significativa entre os tratamentos (Tukey, 5%).
No segundo ano de avaliao (2009/2010) notou-se um aumento nos valores iniciais,
tanto de incidncia quanto de severidade. Os valores da primeira avaliao de incidncia para

34
os tratamentos poda e testemunha foram 97,50 e 100,0 % de frutos com sintomas,
respectivamente. J a severidade teve valores de 2,88 e 4,44 % de superfcie do fruto
lesionada. Na ltima avaliao, a incidncia foi de 100,0 % de frutos com sintomas para
ambos os tratamentos, enquanto a severidade foi de 4,43 e 5,05 de superfcie de frutos
lesionados, nos tratamentos poda e testemunha respectivamente (Tabela 7).
Tabela 7 - Valores mdios de severidade (porcentagem de rea lesionada do
fruto) e incidncia (porcentagem de frutos com sintoma) determinados em
amostras de 30 frutos por planta tratamento-1 e rea abaixo da curva de progresso
da doena (AUDPC) correspondentes aos tratamentos poda e testemunha
(Araras/SP, 2009/2010)

dez/09 jan/09 fev/10 AUDPC

Severidade Poda 2,88 b1 3,22 b 4,43 a 206,36 b
(%) Testemunha 4,44 a 4,73 a 5,05 a 285,61 a
Incidncia Poda 97,50 a 100,00 a 100,00 a 5997,00 a
(%) Testemunha 100,00 a 100,00 a 100,00 a 6000,00 a
1
Mdias seguidas por letras iguais nas colunas indicam que no houve diferena estatisticamente
significativa entre os tratamentos (Tukey, 5%).

De acordo com os dados obtidos verificou-se que o uso da poda no inverno para
retirada da fonte de inculo da A. alternata teve refletiu positivamente no controle da doena.
Como j foi dito, a A. alternata um fungo facultativo, em outras palavras trata-se de uma
espcie que pode sobreviver em material em decomposio ou morto. Estudos realizados
quanto as formas de distribuio e locais com maior concentrao de esporos do fungo
indicam que materiais sintomticos tm papel fundamental como fontes de inculo nos ciclos
seguintes da doena (TIMMER et al., 1998; CANIHOS et al., 1999, TIMMER et al., 2003), razo
pela qual as medidas de sanitizao como, por exemplo, o emprego da poda resultaram em
melhora nos nveis de controle da doena.
Entretanto, o uso exclusivo da poda mostra-se insuficiente para o controle do
patgeno. A razo disso est no aumento dos valores de incidncia e severidade no tratamento
submetido poda de limpeza (Tabela 5). O aumento da incidncia est relacionado
liberao contnua de esporos de A. alternata associada ao desenvolvimento do patgeno nas
leses necrticas nos tecidos jovens que so produzidos pela planta desde a florao (TIMMER
et al., 1998).
Dessa forma, caso a poda por si fosse suficiente para o controle do patgeno no
haveria o aumento dos valores de incidncia e da severidade dos sintomas em frutos
correspondentes ao tratamento submetido ao manejo com poda. Isso refora a importncia em

35
associar mtodos alternativos com a prtica de pulverizar os pomares com produtos que
controlam o desenvolvimento do fungo, como cobre, triazis, estrobirulinas, ditiocarbamatos
etc., a nica exceo so para produtos do grupo dos benzimidazis, pois estes o fungo A.
alternata consegue degradar o ingrediente ativo (SILVA et al., 1999).

5 CONCLUSES
O uso da poda de limpeza no inverno, com conseqente remoo de todo material
doente presente no interior da copa de tangerineiras, reduz a incidncia e severidade dos
sintomas causados pela mancha marrom de alternria. Entretanto, seu uso exclusivo como
mtodo de controle da doena mostra-se invivel, uma vez que sua ao s incide na fonte de
inculo presente na copa, no influenciando em outras fontes de inculo que podem aparecer
no decorrer de uma safra.
O emprego de escala diagramtica para avaliar os danos da mancha marrom de
alternria em folhas pode ser empregada com sucesso em ensaios in vitro e em casa de
vegetao.
A presena de danos provenientes de ataque da lagarta minadora dos citros pode afetar
a severidade da A. alternata, especialmente quando do emprego de variedades suscetveis ao
patgeno. No caso de variedades resistentes, a presena de danos decorrentes pela lagarta
minadora no resulta na expresso de sintomas de A. alternata.

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