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ABSTRACT: This work describes the antioxidant evaluation of flavonoids isolated from plants of
Brazilian semi-arid region. The compounds were submitted to autooxidation of -carotene in the
system containing linollenic acid and the also the DPPH assays. These experiments were monitored
by spectrophotometry employing as positive control pirogalol, gallic acid and quercetin. The results
show that the antioxidant activities of the flavonoids is dependent of the presence of hydroxyl
groups and the coplanarity of the structure.
1 Introduo
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Dilogos & Cincia - Revista da Rede de Ensino FTC. Ano V, n. 12, dez. 2007. ISSN 1678-0493
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__________________________________________________________________Avaliao da Atividade Antioxidante de Flavonides 2
HO O HO O HO O
OH
OH
OH
OH O
OH O OH O
1
2 3
OH OH OH
OH OH OH
HO O HO O HO O
OH
OH
O OH O
OH O
4 5
6
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2 Parte Experimental
Os flavonides testados (Figura 2) foram isolados das folhas de Cenostigma gardenerianum (Ref.
Clayton), Cratylia mollis (Ref. Luciano) e Moldenhawera nutans (VALE et al, 2005) a partir de seus
extratos metanlicos atravs de mtodos cromatogrficos usuais e foram caracterizados por mtodos
espectromtricos (IV, UV, EM e RMN). DPPH, -caroteno, cido linolnico foram obtidos da
Aldrich; o pirogalol da Merck e o cido glico isolado de fontes naturais (VALE et al., 2005). As
reaes foram monitoradas em espectrofotmetro Cary I da Varian.
7 8 9
OH OH OH
OH
MeO OH
O
HO O
HO
HO O
O
OH O OH O OR1
HO O OH
OR2 O
O
OH O
OH
10 11 12 R1=R2=H
13 R1=Glu, R2=H
14 R1=Gal, R2=H
15 R1=Xil, R2=galoil
provocada pela adio de cido linolico. Este mtodo foi desenvolvido por Marco (1968) e
modificado por Miller (1971). Resumidamente, a mistura de 1,0mL de soluo de -caroteno
(0,2mg/mL em CHCl3); 20mg cido linolico e 200mg de Tween 60 foi submetida completa
evaporao do clorofrmio. Em seguida, ento adicionados 90mL de gua destilada, agitando-se
vigorosamente para promover a aerao. Substncias puras (50, 100 e 200 g) foram adicionadas s
cubetas contendo 2,5mL da emulso do sistema -caroteno/cido linolico, sendo a reao
acompanhada no espectrofotmetro em = 470nm, com leitura imediata e em intervalos de 15min,
durante 1h, incubando as cubetas a 50C. As anlises foram realizadas em triplicatas, empregando-se
quercetina (1) como padro positivo, acompanhadas por controle sem adio de substncia-teste. A
capacidade antioxidante foi expressa em percentual de inibio da oxidao atravs do decaimento da
absorbncia, medido em relao ao controle (quercetina ou cido glico).
Frmula para clculo de Atividade Antioxidante:
Seqestro do radical livre DPPH: Esse teste avalia a habilidade que uma substncia tem de
seqestrar o radical livre estvel DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazil) e est baseado no descoramento
de uma soluo composta pelo radical estvel, de cor violeta, quando da adio de substncias que
podem ceder um tomo de hidrognio (BRAND-WILLIAMS et al., 1995). Para esse procedimento,
foi preparada soluo etanlica de DPPH (45g/mL) e solues com as substncias-testes e padro
em trs concentraes diferentes (100, 50 e 25 g/mL) em EtOH. Nesse ensaio, tambm foram
utilizados quercetina (1), cido glico ou pirogalol como substncias-referncias considerando o
poder de seqestrar 100% dos radicais. As determinaes foram realizadas no sistema contendo
3,0mL da soluo de DPPH e 50L de etanol para o controle, ou o mesmo volume para as solues
de padro e amostras. As leituras das absorbncias, a =517nm, foram realizadas imediatamente e
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1 7 8 9 10
100
90
80
70
% de inibio
60
50
40
30
20
10
0
50 100 200
Concentrao
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1 7 9 10 11
120
100
% de seqestro
80
60
40
20
0
25 50 100
Concentrao
Figura 4: Grfico do teste do seqestro de radicais livres (DPPH) dos flavonides 7-10
Ac. Glico 12
100
% de sequestro
80
60
40
20
0
30 60 120
Concentrao
Substncia AA*
% AA Intervalo de confiana 95%
Laricetrina (13) 15.5 13.7 17.3
Substncia AA*
Laricetrina 3--glicosdeo (14) 17.8 16.0 19.6
Laricetrina 3--galactosdeo (15) 25.9 23.1 28.7
Laricetrina 5-galoil-3--D-
55.3 54.2 56.4
xilopiranosdeo (16)
* 1mg/mL. % em relao ao cido glico (100%)
Referncias
BARREIROS, A. L. B. S.; DAVID, J. P.; DAVID, J. M.. Estresse Oxidativo: Relao entre gerao
de espcies reativas e a defesa do organismo. Qumica nova v. 29, p. 113-123, 2006.
CAO, G. H.; SOFIC, E.; PRIOR, R. L. Antioxidant and Prooxidant Behavior of Flavonoids:
Structure-Activity Relationships. Free Radical Biology & Medicine v. 22, p. 749-760, 1997.
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YANG, B.; KOIANI, A.; ARAI, K.; KUSU, F.. Relationship of electrochemical oxidation of
catechins on their antioxidant activity in microsomal lipid peroxidation. Chemical Pharmaceutical
Bulletin v. 49, p. 747-751, 2001.
VALE, A. E. Do; DAVID, J. M. ; BRANDO, H. N. ; DAVID, J. P.. A New Flavonol Glycoside
Derivative from Leaves of Moldenhawera nutans. Zeitschrift Fr Naturforschung C-A Journal Of
Biosciences v. 60c, p. 45-49, 2005.
MARCO, G.J. A rapid method for evaluation of antioxidants. Journal of the American Oil
Chemists Society v.45, p.594-598, 1968.
MILLER, H.E. A simplified method for the evaluation of antioxidants. Journal of the American
Oil Chemists Society v. 48, p.91, 1971.
BRAND-WILLIAMS, W.; CUVELIER, M.E.; BERSET, C. Use of free radical method to evaluate
antioxidant activity. Lebensmittel-Wissenschaft Und-Technologie v. 28, p. 25-30, 1995.
DUARTE-ALMEIDA, J. M.; SANTOS, R. J. Dos; GENOVESE, M. I.; LAJOLO, F. M. Avaliao
da atividade antioxidante, Cincia e Tecnologia de Alimentos v. 26, p. 446-452, 2006.
Agradecimentos
Os autores agradecem a FAPESB, CNPq e CAPES pelos auxlios financeiros e bolsas de estudos
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