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ISSN 1517-526X

Novembro, 2006
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria
Embrapa Florestas
Ministrio da Agricultura e do Abastecimento

Documentos 130

Produo de Mudas
de Espcies Lenhosas

Ivar Wendling
Leonardo Ferreira Dutra
Fernando Grossi

Colombo, PR
2006
Exemplares desta publicao podem ser adquiridos na:

Embrapa Florestas
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Presidente: Luiz Roberto Graa
Secretria-Executiva: Elisabete Marques Oaida
Membros: lvaro Figueredo dos Santos, Edilson Batista de Oliveira,
Honorino Roque Rodigheri, Ivar Wendling, Maria Augusta Doetzer
Rosot, Patrcia Pvoa de Mattos, Sandra Bos Mikich, Srgio Ahrens
Supervisor editorial: Luiz Roberto Graa
Revisor de texto: Mauro Marcelo Bert
Normalizao bibliogrfica: Elizabeth Cmara Trevisan
Lidia Woronkoff
Fotos: Arquivo Embrapa Florestas
Editorao eletrnica: Mauro Marcelo Bert
1a edio - 1a impresso (2006): 1000 exemplares

Todos os direitos reservados.


A reproduo no-autorizada desta publicao, no todo ou em
parte, constitui violao dos direitos autorais (Lei no 9.610).

Dados Internacionais de Catalogao na Publicao - CIP


Embrapa Florestas
Wendling, Ivar.
Produo de mudas de espcies lenhosas [recurso eletrnico
/ Ivar Wendling, Leonardo Ferreira Dutra, Fernando Grossi. -
Dados eletrnicos. Colombo: Embrapa Florestas, 2006.
1 CD-ROM. - (Documentos / Embrapa Florestas, ISSN
1517-526X ; 130)

1. Muda - Produo. 2. Espcie florestal. 3. Reproduo


vegetal. 4. Viveiro florestal. I. Dutra, Leonardo Ferreira. II.
Grossi, Fernando. IV. Ttulo. V. Srie.

CDD (21. ed.) 634.9562


Embrapa 2006
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 3

Autores

Ivar Wendling
Engenheiro Florestal, Doutor, Pesquisador da
Embrapa Florestas.
ivar@cnpf.embrapa.br

Leonardo Ferreira Dutra


Engenheiro Agrnomo, Doutor, Pesquisador da
Embrapa Florestas.
leo@cnpf.embrapa.br

Fernando Grossi
Engenheiro Florestal, Doutor, Professor da
Universidade Federal do Paran.
f_grossi@ufpr.br
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 5

Apresentao

O objetivo principal desta publicao servir de material didtico de apoio aos


Cursos de Viveiro e Produo de Mudas realizados pela Embrapa Florestas e
Universidade Federal do Paran.

A presente publicao a segunda verso, atualizada e ampliada com base


nas principais questes e demandas levantadas durante os 20 cursos j
realizados, de 2002 at julho de 2006.

Com esta publicao, os autores objetivam tambm a prestao de uma


homenagem pstuma ao pesquisador e engenheiro florestal Mrcio Pinheiro
Ferrari, o qual teve importante participao no lanamento da semente que
resultou nesta srie de cursos j realizados.

Srgio Gaiad
Chefe de Pesquisa e Desenvolvimento
Embrapa Florestas
6 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 7

Sumrio

1 PLANEJAMENTO DAS INSTALAES PARA PRODUO DE MUDAS ...... 09

1.1 Instalao de um viveiro ............................................................ 10

1.1.1 Tipos de viveiro ............................................................... 10

1.1.2 Escolha do local ............................................................... 10

1.1.3 rea do viveiro ................................................................ 11

1.1.4 Instalaes necessrias ..................................................... 11

1.1.5 Ferramentas, mquinas, equipamentos e outros materiais


necessrios ................................................................. 12
1.1.6 Recipientes ..................................................................... 12

1.1.7 Substratos ...................................................................... 12

1.1.8 Adubao de cobertura das mudas ..................................... 16

1.1.9 Parmetros de qualidade das mudas ................................... 17

1.1.10 Pragas, doenas e ervas daninhas .................................... 17

1.1.11 Transporte das mudas para plantio ou venda ..................... 19

2 TCNICAS DE PRODUO DE MUDAS ................................................. 20

2.1 Propagao sexuada ................................................................. 20

2.1.1 Quebra de dormncia e teste de germinao ........................ 20

2.1.2 Semeadura em canteiros ................................................... 21


8 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

2.1.3 Semeadura direta nos recipientes ....................................... 22

2.1.4 Desbaste, repicagem, irrigao e dana ............................... 22

2.1.5 Rustificao, seleo e podas de formao .......................... 24

2.2 Propagao vegetativa .............................................................. 24

2.2.1 Estaquia .......................................................................... 25

2.2.2 Miniestaquia .................................................................... 26

2.2.3 Mergulhia ........................................................................ 28

2.2.4 Enxertia .......................................................................... 29

2.2.5 Micropropagao ............................................................. 33

3 LITERATURA COMPLEMENTAR ........................................................... 50

4 ANEXO ............................................................................................. 52
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 9

Produo de Mudas de
Espcies Lenhosas
Ivar Wendling
Leonardo Ferreira Dutra
Fernando Grossi

1 PLANEJAMENTO DAS
INSTALAES PARA
PRODUO DE MUDAS
O local destinado produo de mudas uma rea com caractersticas
prprias, destinada produo, ao manejo e proteo das mudas at
que tenham caractersticas adequadas para serem transplantadas no
local definitivo (praas, jardins, pomares, reflorestamentos, etc.), resistir
s condies adversas do local de crescimento e apresentar um bom
desenvolvimento.

O xito de um projeto, quer tenha a finalidade de ornamentao,


produo de frutos, florestas ou arborizao, depende diretamente da
qualidade das mudas produzidas e do sistema de produo a ser adotado,
se sexuado ou assexuado, e esta depende de condies adequadas, quer
sejam de instalaes e manejo. No caso da propagao assexuada, so
necessrias condies mais controladas para a fase inicial do processo,
como casa de vegetao com umidade e temperatura controladas. No
caso da propagao sexuada, as estruturas para proteo das mudas na
fase inicial, em geral, so mais simples.
10 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

1.1 Instalaes de um viveiro


1.1.1 Tipos de viveiro

Quanto sua durao, os viveiros podem ser classificados em temporrios e


permanentes, e quanto a proteo do sistema radicular, em viveiros com mudas
de raiz nua e em recipientes.

Os viveiros temporrios destinam-se produo de mudas em determinado local


durante apenas certo perodo e, cumprindo as finalidades a que se destinaram,
so desativados. Esses viveiros so de instalaes simples, geralmente dentro
da rea de plantio (reflorestamentos, pomares frutferos, grandes projetos
paisagsticos etc.), visando reduo de custos de transporte das mudas e
melhor adaptao das mesmas s condies climticas do local.

Os viveiros permanentes tm por finalidade produzir mudas durante muitos


anos, e por isso, requerem planejamento muito mais cuidadoso, uma vez que
suas instalaes so mais sofisticadas e onerosas, para suportar maior perodo
de produo de mudas. Geralmente, esse tipo de viveiro instalado prximo
aos centros consumidores de mudas, razo pela qual possuem maiores
dimenses que o viveiro temporrio. A rea do viveiro dividida em reas para
benfeitorias, de produo de mudas e de crescimento ou viveiro de espera, que
objetiva conduzir as mudas at atingirem tamanhos adequados para objetivos
especficos (arborizao urbana, praas, jardins, pomares, florestas etc.).

As mudas de razes nuas so aquelas que no possuem proteo para o sistema


radicular no momento do plantio. A semeadura feita diretamente nos
canteiros e as mudas so retiradas para o plantio, tendo-se apenas o cuidado de
evitar danos s razes, insolao direta, vento, evitando-se o ressecamento das
razes e a morte das mudas.

As mudas produzidas em recipientes apresentam o sistema radicular protegido,


ou seja, envolto em um substrato que o recipiente contm. Os recipientes,
quando biodegradveis (palha, papel, embalagens hidrossolveis), podem ser
plantados com as mudas. Porm, para embalagens no biodegradveis, o
procedimento correto para o plantio o de retirar a muda da embalagem para
liberar as razes e facilitar o pegamento.

1.1.2 Escolha do local

Na escolha do local para instalao do viveiro, os principais pontos a serem


considerados so:
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 11

1) disponibilidade de gua em qualidade e quantidades satisfatrias;


2) facilidade de acesso;
3) proximidade da rea de plantio e/ou comercializao;
4) boa disponibilidade de mo-de-obra;
5) local bem arejado e ensolarado;
6) solo com boa drenagem;
7) localizao meia encosta;
8) a rea deve ser plana ou com at 3% de declividade;
9) a rea deve ser livre de ervas daninhas de difcil controle e de
plantas que promovam o sombreamento das mudas.
1.1.3 rea do viveiro

A rea necessria para instalao de um viveiro depende do nmero e tipo de


plantas a serem produzidas, do tamanho das embalagens a serem utilizadas,
do percentual de germinao da semente ou de enraizamento, das perdas
provenientes das selees, da repicagem (quando for o caso) etc.

Num viveiro bem planejado, a rea produtiva, ou seja, a rea dos canteiros ou de
recipientes, dever possuir sempre em torno de 50% a 60% da rea total, sendo
o espao restante destinado a caminhos, ruas, estradas, galpes, construes
em geral e rea para preparo do substrato e enchimento das embalagens.

1.1.4 Instalaes necessrias

O tipo e tamanho da infraestrutura necessria para a instalao de um viveiro


varia de acordo com o objetivo a que se prope. Algumas estruturas, como as
casas de vegetao (estufa) e as casas de sombra (sombreadas) oferecem
condies climticas controladas para o crescimento das mudas, o que
extremamente importante, principalmente para as espcies mais sensveis ao
frio e ao calor. Entre as principais instalaes, pode-se citar:
casa do viveirista;
galpo semi-aberto para trabalho em dias chuvosos;
tanque ou caixa dgua para irrigao;
depsito para insumos;
almoxarifado para ferramentas e equipamentos;
local de produo (sementeiras e/ou embalagens);
casa de vegetao e casa de sombra.
12 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

1.1.5 Ferramentas, mquinas, equipamentos e outros materiais necessrios

Variam de acordo com a tecnologia utilizada, mtodos de propagao, local,


espcies a serem produzidas, tamanho do viveiro etc.

1.1.6 Recipientes

Devido s limitaes inerentes ao sistema de produo por raiz nua, o sistema


de produo de mudas em recipientes , sem dvida, o mais utilizado
atualmente para espcies lenhosas.

Existem diversos tipos de recipientes disponveis no mercado ou que podem


ser confeccionados com certa facilidade, destacando-se: canudos de bambu
ou laminado de madeira, latas e copos descartveis, sacos e tubetes de
plstico. Os tubetes ou potes plsticos rgidos apresentam algumas vantagens
em relao aos demais tipos de recipientes, a saber: menor dimetro
(ocupando menor rea no viveiro), menor peso, reutilizao, maior
possibilidade de mecanizao das operaes de produo de mudas e reduo
considervel no custo de transporte e distribuio das mudas. Contudo, os
sacos plsticos ainda so recipientes muito usados em funo de seu menor
preo, estruturas e tecnologias no adaptadas ao uso de tubetes.

O tamanho do recipiente varia em funo da espcie a ser produzida, do tamanho


final que a muda dever atingir e do tempo de permanncia das mesmas no viveiro.

1.1.7 Substratos

A principal funo do substrato sustentar a muda e fornecer condies adequadas


para o desenvolvimento e funcionamento do sistema radicular, assim como os
nutrientes necessrios ao desenvolvimento da planta. Este substrato deve ser isento
de sementes de plantas invasoras, pragas e fungos patognicos, evitando-se assim
a necessidade de sua desinfestao. Desse modo, devido estrutura e tecnologia
necessrias para a produo de um substrato de qualidade, grande parte dos
viveiros comerciais adquire seus substratos de empresas especializadas. Contudo,
em caso de formulao prpria, deve-se dedicar especial ateno adequada
compostagem do material orgnico e desinfestao do solo, em funo da presena
de patgenos e sementes de plantas invasoras.

Existem diversos tipos de substratos, dentre os quais citam-se: terra de subsolo,


composto orgnico, vermiculita, areia, esterco animal, serragem, casca de rvores
decompostas, moinha de carvo etc. Atualmente, encontram-se no mercado
substratos esterilizados, livres de pragas e doenas, formulados especialmente para
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 13
a produo de mudas, tais como: composto orgnico, hmus, espuma fenlica (para
enraizamento de estacas e cultivo hidropnico) e fibra de coco, entre outros.

Recomenda-se que seja feita a mistura de dois ou mais materiais para a formulao
do substrato, visando a uma boa aerao, drenagem e fornecimento de nutrientes de
forma adequada. O tipo de material e a proporo de cada um na composio do
substrato variam de acordo com a disponibilidade local, custo e tipo de muda a ser
produzida. A seguir, encontram-se relacionados exemplos de formulao de
substratos. Porm, ressalta-se que cada formulao dever ser testada nas condies
de cada local de produo e devidamente ajustada, caso haja necessidade.

Exemplos de substratos para mudas produzidas por semente:


- 33% d e casca de p nus sem i-decom p osta e m oda
- 80% d e co m posto orgnico
- 33% d e hm us
- 20% d e m o inha de carvo (1 a 3 m m )
- 34% d e casca de arroz carbo nizada

Exemplos de substratos para mudas de propagao vegetativa:


- 2 5 % d e casca d e p n us sem i-deco m p osta e m od a
- 2 5 % d e casca d e arro z carbo n izad a
- 6 0 % d e terra de sub solo peneirada
- 2 5 % d e verm icu lita fin a
- 4 0 % d e casca de arroz carbo nizad a
- 2 4 % d e turfa ou h m u s
- 1 % de solo verm elh o
- 6 0 % d e terra
- 4 0 % d e areia m dia

Na Tabela 1, so apresentados grupos de substratos, com suas vantagens e


desvantagens, possibilitando a tomada de deciso sobre qual substrato usar,
de forma isolada ou em misturas. De modo geral, pode-se recomendar que
sejam feitas misturas de materiais de grupos diferentes, o que resulta em
melhoria das caractersticas e/ou propriedades do substrato obtido. O tipo de
mistura, bem como a proporo de componentes dos diferentes grupos,
devem ser feitas objetivando o ajuste das caractersticas e/ ou propriedades
fsicas, uma vez que as qumicas (fertilidade), normalmente, podem ser
facilmente modificadas somente com prticas de adubao.

As caractersticas e/ou propriedades fsicas e qumicas dos substratos so


variveis em funo de sua origem, mtodo de produo/obteno, propores
de seus componentes, entre outras caractersticas. No Tabela 2, apresentada
uma relao das caractersticas e/ou propriedades fsicas e qumicas de alguns
substratos para produo de mudas. Na Tabela 3, apresentada a escala de
valores para interpretao de caractersticas e/ou propriedades fsicas e
qumicas de substratos usados para produo de mudas florestais. Caso haja
possibilidade, todo substrato utilizado no viveiro dever ter suas caractersticas
e/ou propriedades fsicas e qumicas analisadas, o que embasa melhor a
formulao de misturas e adubaes.
14

Tabela 1. Classificao em grupos, vantagens e desvantagens de tipos de substratos comumente utilizado na produo de mudas,
baseadas em suas caractersticas fsicas e qumicas, origem e forma de produo, compatibilidade e funes nas misturas de substratos.

G rupo E xem plo s V antagens D esvantagens

C om posto orgnico de: P roduzido a p artir de processos na turais; B aixa porosidade e aera o, qua ndo puros;
esterco bovino B oa consistncia dentro dos recipientes; N ecessita m de a du baes b alancea das de N e S ,
ca sca de eucalipto M dia a alta porosidade e drena gem ; principalm ente em cobertu ra;
ca sca de pinus M dia a alta cap acida de de reteno de gua e nutrientes; C omp osi o qum ica va riada em funo da origem
A
ba gao de cana E levada fertilidade (m acro e m icronutrientes); do m aterial;
resduos slidos urb anos F cil obten o e processam ento; P odem conter sementes de plantas indesejveis,
outros resduos B aixo custo; nem atides, pequ enos insetos, dependendo da form a
H mus de m inhoca P erm ite boa form ao e a grega o do sistema radicular das m udas. de produ o e exposio.

F orm adas a p artir de processos na turais;


A presenta m caracterstica s fsica s e qumicas m uito
E levada ca pacidade de reteno de gua e nutrientes, quando b em
variveis;
B T urfa s decomp ostas;
P odem sofrer grandes oscilaes de volum e;
M dia s a altas concentraes de N , P e K ;
P roduto no renovvel.
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

Alta C T C efetiva, equivalente ou superior ao grupo A.

B aixa densidade global e a lta porosidade; R edu zem a capa cida de de reten o de gua do
C asca de a rroz carboniza da Ap resenta m boa homogeneida de no ta ma nho das partculas; substrato;
C inza de ca ldeira de F cil obten o e processam ento; P ossuem p H muito eleva do (> 6 ,5), podendo
C
biom assa B aixo custo; provocar deficincia s de micronutrientes;
B a ga o de ca na carb onizado P ra ticam ente isentos de inculos de doenas, planta s indesej veis e B aixas concentraes de N e S ;
insetos. R elao C /N m uito alta.
Q uando predom ina no substra to, prom ove a
B aixa densidade e partculas gra ndes, eleva ndo a aera o e drena gem ; forma o de sistema radicular p ouco aderido;
E levada p orosida de; C ontra i-se no uso, ap s vrios ciclos de
D V erm iculita com ercia l B em padronizada quanto s caracterstica s qu m icas e fsicas; um edecim ento e secagem;
P ra ticam ente isenta de inculos de doena s, plantas indesejveis e B aixas concentraes de N , P , K , C a , S , F e, Z n, B ;
insetos. A presenta m deficincias e relaes inadequa das
entre alguns nutrientes.

M dia a alta cap acida de de reteno de gua e nu trientes, quando no B aixa porosidade e aera o, quando ma is a rgilosa s;
muito arenosa; B aixa ca pacidade de reteno de gua , quando ma is
T erra de subsolo B aixo custo; arenosas;
E (caractersticas m u ito variveis em B aixas concentraes de nu trientes;
fu no da su a textura)
F cil obten o e processam ento;
P ra ticam ente isenta de inculos de doena s, plantas indesejveis e P roduto no renovvel;
insetos. A lta densidade.

Fonte: Wendling et al. (2002).


Tabela 2. Caractersticas e/ou propriedades fsicas e qumicas de alguns substratos usados para produo de mudas. Onde: TS = terra
de subsolo; CAC = casca de arroz carbonizada; CED = casca de eucalipto decomposta; VF = vermiculita fina; HM = hmus de
minhoca; COG = composto orgnico de gado.

60% HM 60% COG


VF HM 80% HM 60% HM 80% COG
Caractersticas Turfa TS CAC CED 20% CAC COG 20% CAC
(1) (2) 20% CAC 40% CAC 20% CAC
20% VF 20%VF
Fsicas
Densidade global (g cm-3) - 1,2 0,25 0,4 0,12 0,45 0,40 0,36 0,34 0,50 0,43 0,36
- 2,5 1,4 1,3 1,2 1,8 1,7 1,6 1,6 1,9 1,8 1,7
Densidade real (g cm-3)
- 52 82 69 90 75 77 79 79 74 76 78
Porosidade total (%)
- 10 44 39 44 7 11 22 16 13 13 14
- macroporosidade (%)
- 42 38 30 46 68 66 57 63 61 63 65
- microporosidade (%)
- 21 19 15 23 34 33 29 32 31 32 32
Reteno mxima de gua (ml 50 cm-3) - 0,4 1,6 0,8 3,9 1,6 1,7 1,6 1,9 1,3 1,5 1,8
Reteno mxima de gua (ml g-1)
773 5 510 552 - 194 257 320 218 205 266 225
Qumicas 31 0,24 6,5 10 - 8,4 8,0 7,6 6,3 11 10,1 7,9
Matria orgnica total (g kg-1) 14 12 44 27 - 13 18 23 19 10 15 16
4 4,2 6,5 6,1 5,9 6,4 6,5 6,6 6,5 6 6,3 6,3
N total (g kg-1)
- 2 135 120 23 1216 1000 784 761 780 651 500
Relao C total / N total
15 0,2 28 22 1,8 38 36 34 29 117 99 71
pH em CaCl2 0,01 M
- 10 28 273 37 188 156 124 126 144 121 101
P resina (mg dm-3) - 2 10 64 69 183 148 114 126 54 45 60
K trocvel (mmolc dm-3) - 3 3 3 1 14 12 10 9 6 5 4
- 15 69 362 109 423 361 291 300 321 234 204
Ca trocvel (mmolc dm-3)
Mg total (mmolc dm-3)
Al trocvel (mmolc dm-3)
C.T.C. efetiva (mmolc dm-3)

Fonte: Gonalves e Poggiani (1996).


(1) Dimetro mdio entre 0,7 e 2 mm;
(2) Produzidos a partir de esterco de bovino de corte. Estudos resultaram em uma escala de valores para interpretao das principais
caractersticas e/ou propriedades fsicas e qumicas de substratos para produo de mudas florestais. De maneira geral, estas
recomendaes tambm podem ser adotadas para a produo de mudas de plantas ornamentais, uma vez que no existem
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

recomendaes especficas para estas, alm do fato de que as caractersticas e/ou propriedades fsicas e qumicas aceitveis so
similares para as diferentes espcies.
15
16 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

Tabela 3. Escala de valores para interpretao de caractersticas e/ou propriedades


fsicas e qumicas de substratos usados para produo de mudas florestais.

Caractersticas Nveis
Baixo Mdio Alto Adequado
Fsicas
Densidade global (g cm-3) < 0,25 0,25 - 0,50 > 0,50 0,45 - 0,55
Porosidade total (%) < 55 55 - 75 > 75 75 - 85
- macroporosidade (%) < 20 20 - 40 > 40 35 - 45
- microporosidade (%) < 25 25 - 50 > 50 45 - 55
Capacidade mx. de reteno de gua (mL 50 cm-3)
< 15 15 - 25 > 25 20 - 30
Qumicas
Relao C total / N total
8 a 12/1 12 a 18/1 > 18/1 8 a 12/1
pH em CaCl2 0,01 M
< 5,0 5,0 - 6,0 > 6,0 5,5 - 6,5
P resina (mg dm-3) < 200 200 - 400 > 400 400 - 800
K trocvel (mmolc dm-3) < 15 15 - 30 > 30 30 - 100
< 100 100 - 150 > 150 100 - 200
Ca trocvel (mmolc dm-3) < 50 50 - 100 > 100 50 - 100
Mg total (mmolc dm-3) < 100 100 -200 > 200 > 200
C.T.C. efetiva (mmolc dm-3)

Fonte: Gonalves e Poggiani (1996).

Recomenda-se a adio de nutrientes no substrato para promover o


suprimento dos elementos necessrios, economizando-se tempo no processo
de produo das mudas. Sua formulao e dose so variveis em funo do
tipo de substrato utilizado e da espcie a ser produzida; recomendada a
realizao de uma anlise qumica do substrato, e caso haja necessidade de
se proceder a correo da acidez do substrato (pH < 5,0) e elevar o nvel de
fertilidade, pode-se consultar as tabelas de recomendao de adubao.

1.1.8 Adubao de cobertura das mudas

Adubaes peridicas em cobertura (aps a germinao das sementes ou


enraizamento das estacas) quase sempre so necessrias para permitir a
produo de mudas de boa qualidade e em tempo menor. So realizadas
quando o substrato utilizado de baixa fertilidade ou apresenta baixa
concentrao de nitrognio (N) e potssio (K), muitas vezes omitidos na
adubao do substrato por apresentarem altos ndices salinos, que podem
provocar grandes perdas das mudas recm-germinadas. Esta adubao pode
ser feita via fertirrigao (gua de irrigao) ou pela aplicao individual na
superfcie do substrato.

Existem diversas formulaes de adubao; a mais adequada depender da


planta, da fertilidade do substrato, do manejo empregado para a produo das
mudas, da fase de produo das mudas etc. Como sugesto, pode-se utilizar
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 17
25 gramas de sulfato de amnio + 60 gramas de cloreto de potssio, diludos em
10 litros de gua, a qual dever ser ajustada em funo do sistema de manejo
adotado. Essa soluo suficiente para adubar 3 m2 de canteiro (em torno de 300
mudas). Esta adubao tambm pode ser utilizada na formulao de p, ou seja,
pela aplicao de 0,05 gramas por planta da mistura acima, sem a gua.

1.1.9 Parmetros de qualidade das mudas

A classificao das mudas em termos de qualidade de fundamental


importncia em virtude da melhor adaptao e crescimento daquelas com
melhor padro de qualidade no plantio definitivo. Os principais parmetros
que indicam a boa qualidade de uma muda so:

- uniformidade de altura entre as mudas do lote;


- dimetro do colo;
- rigidez da haste principal (dimetro de colo);
- aspecto visual vigoroso (sem sintomas de deficincia, tonalidade das
folhas);
- ausncia de estiolamento;
- ausncia de pragas e doenas na folha, no caule e nas razes;
- ausncia de plantas invasoras no substrato;
- sistema radicular e parte area bem desenvolvida (raiz pivotante no
enrolada e fixada no solo, fora do recipiente);
- relao parte area/sistema radicular.

1.1.10 Pragas, doenas e ervas daninhas

interessante realizar tratamentos preventivos como a desinfestao do solo


do canteiro ou substrato a ser utilizado no preenchimento dos recipientes, a
fim de evitar a ocorrncia de pragas, doenas e a competio por ervas
daninhas. Para tanto, utiliza-se mtodos qumicos e/ou, mecnicos. Dentre os
mtodos qumicos, cita-se a aplicao de herbicidas, fungicidas e inseticidas
e, para os mecnicos, tm-se a catao manual, o revolvimento do solo, a
aplicao de gua quente, a exposio ao sol, a inundao, entre outros.

Ressalta-se a grande importncia da escolha do local adequado para a


instalao do viveiro, o que evita ou diminui problemas relacionados com
pragas e doenas. O correto manejo dirio do viveiro tambm de fundamental
importncia na reduo da ocorrncia de problemas, devendo-se evitar
excessos de irrigao, adubao e radiao direta logo aps a germinao.
18 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

Dentre as pragas mais comuns, encontram-se a lagarta-rosca, formiga cortadeira,


grilos, besouros, cochonilhas, paquinhas, pulges e formigas. Contudo, no
manejo adequado do viveiro, normalmente no se verifica muitos danos;
entretanto, se o nvel de infestao for elevado, torna-se necessrio o combate.

As doenas que mais comumente ocorrem nos viveiros so: tombamento,


podrido de razes, ferrugens e manchas foliares. Quando o nvel de danos se
mostrar significativo, torna-se necessrio o controle pela aplicao de
fungicidas, utilizando-se dose de acordo com recomendaes dos fabricantes.

Tanto em termos de pragas quanto de doenas, recomenda-se consultar um


profissional capacitado quando da sua ocorrncia, visando ao adequado
controle, caso haja necessidade.

1.1.10.1 Tombamento ou Damping-off

a doena mais comum em viveiros, causada por fungos que atacam o colo
das mudas originadas de sementes no estgio inicial de germinao. uma
doena que em poucos dias chega a causar a morte de todas as mudas e
pode aparecer em qualquer poca do ano; sua intensidade depende das
caractersticas do substrato e das condies climticas (chuva, insolao).

A infestao e proliferao favorecida pela grande densidade de mudas nos


canteiros, pela utilizao de esterco no curtido no substrato, pelo excesso
de umidade e pela compactao dos solos. O tombamento tambm pode ser
disseminado de um canteiro para outro, por meio de ferramentas ou pela
repicagem das mudas.

A adubao orgnica com esterco deve ser abandonada quando o mesmo


no estiver bem curtido. Quando no houver substituto, curti-lo no mnimo
dois meses antes da semeadura.

O tombamento mais severo em viveiros que so excessivamente regados.


Um lote de mudas saudveis pode apresentar um severo tombamento aps 1
ou 2 dias de chuva. Uma boa medida, quando aparecem os primeiros casos
de tombamento, diminuir a rega.

Como medidas preventivas ao aparecimento do tombamento, pode-se recomendar:

- a escolha adequada do local;


- a desinfestao do solo com fungicidas;
- tratamento da semente com produtos registrados para essa finalidade;
- seleo do substrato e material de cobertura.
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 19
1.1.10.2 Podrido das Razes

um problema comum e, alm de danificar o sistema radicular, tambm


responsvel pelo tombamento das mudas no seu estgio inicial de
crescimento. O ataque ao sistema radicular manifesta-se atravs de clorose,
atrofia e murcha da parte area e, por vezes, morte da muda.

1.1.10.3 Ferrugem Fusiforme

As folhas apresentam-se com aspecto ferruginoso, provocando um baixo


crescimento ou morte das mudas. O combate pode ser feito por meio de
pulverizaes com fungicidas recomendadas para seu controle.

1.1.10.4 Amarelecimento ou Clorose

So termos utilizados para descrever problemas de crescimento, que


resultam no amarelecimento ou embranquecimento das folhagens. Todas as
plantas verdes esto sujeitas a clorose, podendo causar reduo no
crescimento ou mortalidade das mudas. Os agentes mais comuns
causadores de clorose so:

- falta ou excesso de nutrientes para as plantas;

- nveis txicos de produtos qumicos nas folhas ou no solo;

- presena de pragas sugadoras da seiva, deixando a muda clortica;

- fungos, bactrias e nematides que causam danos s razes,


provocando clorose na parte area;
- a falta ou excesso de umidade; a alta ou a baixa temperatura do solo
ou ar podem causar clorose

1.1.11 Transporte das mudas para o plantio ou venda

No transporte, as mudas devem ser protegidas por lonas ou outro tipo


de cobertura, de forma a evitar danos provocados pelo vento, chuva e
pelo sol.

No caso de mudas produzidas em tubetes o seu transporte para o plantio


pode ser feito na forma de rocambole, onde as mudas so acondicionadas
em filme plstico em pacotes de cinqenta ou mais mudas, dependendo do
tamanho do tubete, com a raiz aderida ao substrato. Este processo evita o
transporte do tubete para o campo, reduzindo a incidncia de patgenos na
rea de produo das mudas.
20 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

2 TCNICAS DE PRODUO DE MUDAS


A produo de mudas de espcies lenhosas pode ser realizada pelos mtodos
sexuado e assexuado. O primeiro refere-se produo de mudas por meio de
sementes, e o segundo, por propagao vegetativa (partes da planta), tais
como: estaquia, enxertia, mergulhia, encostia, diviso de rizomas, bulbos e
touceiras. Mais recentemente, devido ao avano das tecnologias e
equipamentos, muitas espcies so propagadas pela tcnica da
micropropagao, que a propagao vegetativa a partir de pequenos
fragmentos da planta (explantes), realizada em condies asspticas.

2.1 Propagao sexuada


O principal insumo para o processo sexuado de produo de mudas a
semente. A boa qualidade das mudas depende da aquisio de sementes de
produtores idneos e credenciados junto aos rgos governamentais
competentes (MAPA, Secretarias de Agricultura etc.), para se obter garantia
da qualidade das sementes. Com a dificuldade de se encontrar sementes de
algumas espcies no mercado, pode-se proceder a coleta dessas em plantas
matrizes previamente selecionadas, observando-se certos critrios de
interesse para o objetivo pretendido (crescimento, formato da copa e tronco,
produo de sementes, flores e frutos etc.).

Aps a obteno das sementes, estas devem ser armazenadas num lugar
adequado, conforme indicao do produtor, o que permitir manter seu poder
germinativo por mais tempo. Sementes que facilmente perdem seu poder
germinativo devem ser semeadas logo aps a coleta.

2.1.1 Quebra de dormncia e testes de germinao

Sementes de algumas espcies apresentam dormncia, ou seja, quando


semeadas no germinam ou ento germinam irregularmente. Nestes casos,
preciso quebrar a dormncia para que as sementes germinem em maior
nmero e em menor tempo, garantindo uma produo de mudas uniformes e
de boa qualidade. Existem vrios mtodos para quebra de dormncia, sendo
que os mais comuns so:

a) Escarificao mecnica: consiste em atritar as sementes contra


uma superfcie spera (lixa). indicado para sementes duras,
como por exemplo o pau-ferro, o guapuruvu, o louro, a nogueira,
o pessegueiro, o coqueiro, a aroeira etc.
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 21

b) Embebio em gua: coloca-se as sementes em gua


temperatura ambiente at que se encharquem e se tornem com
volume maior, o que pode levar de 1 a 4 dias, dependendo da
espcie. Ex.: timbava, candeia, goiabeira, canela, jacarand,
ara etc.

c) Imerso em gua fervente: consiste em colocar as sementes em


gua a 80o C. Ex.: flamboyant, chuva de ouro, accias, angico
vermelho, ips, paineira rosa, palmeiras etc.

d) Estratificao: consiste em dispor as sementes entre camadas de


areia mida por perodos de at 6 meses. Ex.: fedegoso,
pessegueiro, erva-mate etc.

e) Escarificao cida: consiste em imergir as sementes em cido


sulfrico comercial. Ex.: pau-ferro, guapuruvu, chuva de ouro,
barbatimo, carne de vaca, flamboyant, corticeira-do-banhado etc.

Para se ter certeza da viabilidade (poder de germinao) das sementes,


podem-se realizar testes de germinao rpidos. Esses testes podem ser
realizados de diversas maneiras, sendo que a mais comum a semeadura de
um determinado nmero de sementes em um local prprio, a fim de se
determinar o nmero de sementes viveis e, conseqentemente, seu
percentual de germinao.

Dependendo das condies climticas, da disponibilidade de mo-de-obra e


da quantidade e qualidade das sementes disponveis, a produo de mudas
atravs de sementes pode ser feita em canteiros para posterior repicagem,
em canteiros para plantio com raiz nua e em recipientes por meio de
semeadura direta.

2.1.2 Semeadura em canteiros

Existem duas variantes do processo de semeadura em canteiros, ou seja, a


semeadura em canteiros para plantio de mudas com raiz nua e a semeadura
em canteiros para posterior repicagem em embalagens individuais.

A semeadura em canteiros para produo de mudas com raiz nua feita


diretamente na terra e as mudas permanecem nos canteiros at o plantio
definitivo. de fcil mecanizao, pois no so utilizadas embalagens. As
mudas assim produzidas podero ter custo menor, pois sero eliminadas
diversas operaes que demandam mo-de-obra para enchimento de
embalagens, encanteiramento etc.
22 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

Na prtica, recomenda-se que a profundidade de semeadura no ultrapasse


duas vezes o dimetro da semente. Aps o semeio, recomendada a
colocao de uma cobertura morta (serragem, capim, sombrite etc.) sobre o
canteiro, o que proteger as sementes. Para o caso de sementes achatadas
ou muito pequenas, recomenda-se o peneiramento de uma fina camada de
terra sobre as sementes, alm da cobertura. A colocao de um sombrite
recomendada para evitar a exposio das mudas ao excesso de insolao,
chuvas fortes, ventos, pssaros etc.

Recomenda-se a semeadura em canteiros para posterior repicagem em


embalagens individuais quando se desconhece a capacidade de germinao
das sementes da espcie, as sementes apresentam dormncia e no se
conhece o mtodo mais adequado para sua quebra, as sementes forem muito
pequenas (ex.: quaresmeira) ou muito grandes (ex.: abacate) para o caso de
produo em recipientes pequenos e tambm quando as sementes
apresentarem baixo poder germinativo.

2.1.3 Semeadura direta nos recipientes

Este processo usado, principalmente, para sementes de dimenses mdias,


que apresentam germinao rpida e uniforme, ou para espcies que no
toleram a repicagem. As vantagens desse mtodo so: eliminao da
necessidade de confeco dos canteiros para semeadura e posterior
repicagem; dispensa do sombreamento para as mudas recm-repicadas;
reduo do prazo para produo das mudas; formao de mudas mais
vigorosas; diminuio das perdas por doenas e produo de mudas com
sistema radicular de melhor qualidade.

Nesse processo tambm recomendada a proteo das sementes com


cobertura morta (serragem, capim etc.) e, ou sombrite para evitar a
exposio das mudas ao excesso de insolao, aos impactos das gotas de
chuva, principalmente nos primeiros dias aps a germinao.

2.1.4 Desbaste, repicagem, irrigao e dana

Em torno de 30 a 50 dias aps a emergncia (varivel em funo da espcie


e condies de manejo), quando as mudas atingirem em torno de 5 a 10 cm
de altura, realiza-se um desbaste, por meio do arranquio ou corte, deixando-
se somente uma muda por recipiente. No caso de semeadura em canteiros,
um espaamento adequado entre as mudas deve ser mantido, distribuindo-as
de forma uniforme pelo canteiro.
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 23
A repicagem o processo de seleo e transferncia das mudas da
embalagem ou sementeira para os sacos plsticos, tubetes ou canteiros.
Deve ser feita preferencialmente em dias nublados ou chuvosos, evitando-se
realiz-la nas horas mais quentes dos dias ensolarados, devido fragilidade
das mudas a temperaturas elevadas. Previamente repicagem, deve-se tomar
o cuidado de molhar bem o substrato das mudas a serem transplantadas. As
mudas repicadas devem ser protegidas do excesso de insolao com
sombrite 50% por, pelo menos, sete dias ou at o seu pegamento. Caso seja
necessrio, a rea foliar e o sistema radicular devem ser reduzidos,
considerando-se sempre as caractersticas de cada espcie.

A irrigao um dos fatores de maior importncia do viveiro. O excesso e a


falta dgua podem comprometer qualquer uma das fases de formao das
mudas. A irrigao em excesso pode lixiviar os nutrientes solveis
(especialmente o N e K), reduzir a aerao, favorecer a ocorrncia de doenas,
dificultar o desenvolvimento das razes, tornar as mudas suculentas e pouco
resistentes seca e, finalmente, resulta no gasto desnecessrio de gua.

A escolha do equipamento adequado associa-se ao manejo do sistema como


um todo, onde devem ser considerados, dentre outros fatores, o tipo de
substrato e recipientes utilizados pelo produtor, a espcie escolhida para a
produo de mudas, a fase em que a muda se encontra (germinao,
incluindo repicagem, crescimento ou rustificao), a poca do ano em que se
est produzindo e a regio onde est instalado o viveiro (temperatura e
regime de chuvas). Assim, em regies de calor intenso, normalmente, a
exigncia das mudas por gua em qualquer fase de desenvolvimento maior
que em regies de clima mais frio. Por outro lado, alguns tipos de substratos,
por terem menor capacidade de reteno de gua, exigem que se aplique
mais gua a cada irrigao, ou que se aumente a freqncia da mesma.

importante ressaltar que para cada etapa de formao das mudas, e para
diferentes tipos de recipientes, existem diferentes sistemas de irrigao, com
bicos de diferentes vazes, presso de trabalho e rea de recobrimento.
Existem no mercado empresas especializadas que prestam assessoria e ajudam
o produtor a determinar o melhor equipamento para o seu sistema de
produo.

A dana das mudas consiste na mudana de lugar para evitar que as razes
penetrem no solo, no caso de mudas produzidas em recipientes em contato
com o solo e para a padronizao das mudas por tamanho.
24 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

2.1.5 Rustificao, seleo e podas de formao

Antes de serem plantadas no local definitivo, as mudas devem sofrer um


processo de rustificao que consiste em induzir uma maior resistncia das
mudas aos fatores ambientais adversos do campo, tais como: secas, elevada
insolao, baixa fertilidade do solo etc. Pode ser realizado de diversas
maneiras, entre as quais a mais recomendada a diminuio na irrigao, a
colocao das mudas em pleno sol e a reduo ou mesmo suspenso da
adubao.

Antes de serem encaminhadas para o plantio definitivo, deve haver um


processo de seleo das mudas. Os principais critrios adotados para esta
seleo no viveiro ou mesmo na compra de mudas de terceiros, variam de
acordo com a espcie utilizada e a finalidade a que se destina a muda
(arborizao urbana, plantio de pomar, jardim, floresta etc.). Caractersticas
como um sistema radicular bem desenvolvido e agregado ao substrato, rigidez
da haste, nmero de pares de folhas, aspecto nutricional (sem sintomas de
deficincia) e boa sanidade (ausncia de pragas e doenas) so essenciais
para todas as espcies.

As podas de formao so necessrias para mudas destinadas a formao de


pomares frutferos, arborizao, reflorestamentos etc. Nas mudas frutferas, a
poda deve seguir os padres de cada espcie, definidos em normas tcnicas
para conduo da cultura; para o caso de mudas destinadas arborizao
urbana, necessita-se realizar podas de conduo que visem a formao de
uma muda retilnea com a copa de, pelo menos 1,8 m acima do solo.

2.2 Propagao vegetativa


A propagao vegetativa, tambm conhecida como propagao assexuada ou
clonagem, consiste na produo de mudas ou novas plantas a partir de partes
ou rgos da planta (ramos, gemas, estacas, folhas, razes e outros), sendo
denominada de reproduo assexuada. uma antiga tcnica, capaz de
reproduzir as plantas selecionadas em grande quantidade, usada na
floricultura, horticultura, fruticultura e na silvicultura. A razo principal para se
empregar essa tcnica que se obtm indivduos com as mesmas
caractersticas da planta-me (florescimento, crescimento, forma, produo
etc.). Outras vantagens da propagao vegetativa em relao sexuada
que, nesta ltima, nem sempre se consegue obter sementes e, muitas vezes,
as sementes so atacadas por pragas e doenas, apresentam baixo poder
germinativo, aliada produo de flores e frutos mais tardiamente e um maior
porte das plantas, etc.
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 25
Existem vrios mtodos para a propagao vegetativa de plantas, dentre os
quais cita-se a estaquia (microestaquia e miniestaquia), a enxertia, a
separao por bulbos, a diviso de touceiras, rizomas e a propagao por
meio de cultura de tecidos, cada qual com sua finalidade especfica. A
definio do mtodo varia de acordo com os objetivos da tcnica, da espcie
envolvida, da poca do ano, da habilidade do executor, do tipo e quantidade
de material disponvel e das condies ambientais, entre outros fatores.

2.2.1 Estaquia

A estaquia o processo de propagao no qual pores das hastes (caules,


ramos), folhas ou razes so colocadas sob condies propcias ao
enraizamento (leitos de enraizamento), dando origem a uma nova planta.

O tipo de estaca a ser usado varia de espcie para espcie e, s vezes, em


funo da poca do ano. Diversas espcies apresentam folhas com
capacidade de originarem plantas completas, tais como: begnia, gloxnia,
lngua-de-sogra, violeta africana, pepermia, sedum, camlia, ficus, etc.

As estacas de razes so um tipo pouco comum, sendo as razes seccionadas


aps a coleta, em pedaos de 5 a 15 cm de comprimento e enterradas no
substrato a uma profundidade de 2,5 a 5 cm. A dificuldade do processo est
na coleta das razes e nos danos causados planta-me. A propagao
vegetativa por estaca radicular pode ser feita em cerejeira, pessegueiro,
goiabeira, caquizeiro, ip, manac, quiri, etc.

As estacas caulinares podem ser herbceas, lenhosas ou semilenhosas, o que


varia em funo do local de coleta e do tipo de planta. Dentre os tipos de caule,
o que possui maior capacidade de enraizamento o herbceo, e quanto mais
herbcea e nova for a estaca, maior ser sua capacidade de enraizamento.

Em alguns casos, a poca do ano em que se procede a coleta das estacas


de grande importncia para o enraizamento. Para as espcies de difcil
enraizamento, a poca indicada para a coleta das estacas aquela que
coincide com o repouso vegetativo ou com a estao de crescimento,
enquanto que para as espcies de fcil enraizamento, as estacas podem ser
colhidas em qualquer poca do ano.

As estacas lenhosas so normalmente coletadas aps a queda das folhas, ou


no incio da nova brotao, que compreende o perodo de menor atividade
metablica da planta. Porm, existem plantas lenhosas que so facilmente
propagadas por estaquia em qualquer poca do ano, como por exemplo, o
crton, o hibisco e o ficus.
26 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

Para realizar a estaquia, corta-se um ramo novo, de 7 a 15 cm de


comprimento, retirando-se as folhas da metade inferior e cortando-se o
restante das folhas pela metade. O corte da base dever ser feito em forma
de bisel (cunha), para facilitar o enraizamento. Aps a preparao da estaca,
promove-se a estaquia em recipiente ou sementeira em local adequado.

2.2.2 Miniestaquia

A tcnica de miniestaquia uma variao da estaquia convencional. Consiste


na utilizao de brotaes de plantas propagadas pelo mtodo de estaquia
convencional como fontes de propgulos vegetativos. Numa seqncia
esquemtica desta tcnica, inicialmente, faz-se a poda do pice da brotao
da estaca enraizada, e em intervalos variveis em funo da poca do ano, do
clone/espcie, das condies nutricionais, entre outras, h emisso de novas
brotaes, que so coletadas e colocadas para enraizar.

A coleta de miniestacas nas mudas podadas realizada de forma seletiva, em


perodos a serem definidos conforme o vigor das brotaes, colhendo-se
todas aquelas que se enquadram nos padres de miniestaca, ou seja, de 3 a 6
cm de comprimento, contendo de um a trs pares de folhas, recortadas pela
metade. Aps serem coletadas, as miniestacas so acondicionadas em
recipientes com gua, para que possam chegar ao local de enraizamento em
perfeitas condies de turgor.

As miniestacas so colocadas para enraizamento em casa de vegetao com


umidade relativa acima de 80%, seguindo posteriormente para a casa de
sombra, para uma pr-adaptao s condies de menor umidade relativa e,
finalmente transferidas para pleno sol para rustificao e posterior plantio. Os
perodos de permanncia das miniestacas em casa de vegetao dependem da
poca do ano, do clone/espcie envolvido e do seu estado nutricional.

2.2.2.1 Medidas para aumentar o enraizamento em plantas

Existem muitas variaes quanto capacidade de enraizamento e posterior


formao de mudas entre as espcies de plantas. No geral, as plantas
herbceas e arbustivas so mais fceis de enraizar do que as lenhosas
(rvores frutferas, florestais e algumas ornamentais), embora existam
excees.

Para plantas de difcil enraizamento, de forma geral, pode-se lanar mo de


alguns tratamentos para aumentar os ndices de enraizamento, ou seja:
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 27
- escolha da poca adequada: geralmente as plantas lenhosas
apresentam maiores ndices de enraizamento na sada do inverno, ou
seja, antes de lanarem brotaes novas;

- tratamentos na planta-me que vai fornecer as estacas a serem


enraizadas. Ex.: adubaes e irrigaes adequadas, sombreamento,
anelamento, toro etc.;

- coleta de estacas mais prximas base e ao tronco da planta quanto


possvel;

- melhoria das condies de enraizamento: usar substrato poroso,


manter a umidade acima de 80%, promover sombreamento, manter
a temperatura entre 20 e 30 0C;

- aplicao de hormnios para enraizamento;

- deixar de 1 a 3 pares de folhas recortadas ao meio nas estacas;

- diminuir ao mximo o tempo entre a coleta das estacas e sua


colocao no substrato, bem como realizar seu transporte em caixas
de isopor, panos ou embalagens umedecidas;

- enterrar, pelo menos, um entren (espao entre dois ns


consecutivos) no substrato;

- no usar estacas muito velhas e duras;

- fazer subcultivos (estaquia e enxertia consecutiva).

Se aps estes tratamentos e cuidados os resultados forem insatisfatrios,


deve-se utilizar outros mtodos de propagao, tais como: enxertia, mergulhia
e cultura de tecidos.

2.2.2.2 Tratamentos com fitorreguladores de enraizamento (hormnios)

O tratamento com hormnios um mtodo eficiente para obteno de razes


em estacas, principalmente em plantas de difcil enraizamento, aumentando a
velocidade de formao de razes, o nmero e a qualidade das razes formadas,
bem como a uniformidade de enraizamento.

Dentre os hormnios mais comumente usados no processo de enraizamento


de estacas, est o cido indolbutrico (AIB). A concentrao utilizada varia
de acordo com a espcie, com variaes de 20 a 10.000 mg L-1
(miligramas por litro, antigo ppm - partes por milho) ou mg kg-1, sendo as
maiores concentraes utilizadas para estacas de enraizamento mais difcil.
28 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

A aplicao do hormnio pode ser feita na forma de p, misturado com talco


ou na forma lquida, dissolvido em lcool etlico a 95%, acrescentando-se
ainda gua para completar a concentrao desejada.

Para a aplicao da soluo de hormnio, deve-se mergulhar cerca de 2,5 cm


da base das estacas na soluo, por um perodo que varia de alguns segundos
(estacas herbceas) a alguns minutos (estacas lenhosas), possibilitando a
penetrao do hormnio.

Existem no mercado hormnios enraizadores prontos para o uso, em


concentraes pr-definidas, na forma de cidos ou sais em p, como:
Hormex, Rootone, Hormodin, Seradix etc.

Assim que as estacas estiverem preparadas, devem ser tratadas com


hormnios e, logo em seguida, colocadas nos recipientes ou canteiros de
enraizamento.

2.2.3 Mergulhia

A mergulhia um processo de multiplicao vegetativa no qual um ramo


posto a enraizar quando ainda faz parte da planta-me, sendo destacado
desta somente aps o enraizamento. Por ser um processo rpido de
propagao e por fornecer mudas enfolhadas, utilizado com bons resultados
na obteno de plantas ornamentais. Por ser um processo de baixo
rendimento e necessitar de muita mo-de-obra, recomendado para a
propagao de plantas de difcil enraizamento por meio da estaquia.

Como regra geral, recomenda-se a utilizao de ramos com menos de um ano


para fazer a mergulhia. A poca indicada para a sua realizao o princpio da
primavera.

Na mergulhia area, com o objetivo de facilitar o enraizamento, fazem-se


incises, anelamentos ou tores no ramo a ser propagado. O ponto
lesionado coberto com um substrato umedecido, que pode ser musgo,
substrato orgnico ou qualquer outro formado pela mistura de materiais que
proporcionem uma boa aerao, umidade e temperatura moderada, envolto
por tecidos ou plsticos.

recomendada a realizao da mergulhia area em ramos de at um ano, no


qual eliminam-se as brotaes laterais em cerca de 15-30 cm antes da gema
terminal. A mergulhia deve ser feita na poca em que as plantas estejam em
plena atividade de crescimento.
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 29
No ponto lesionado pode-se aplicar hormnio de enraizamento (AIB, na
concentrao de 1.000 mg L-1). Cuidado especial deve ser tomado para manter
uma boa umidade do substrato envolto no galho, por meio de irrigaes.

O tempo necessrio para realizar a separao da planta-me do ramo que


sofreu a mergulhia depende da espcie, sendo de aproximadamente dois a trs
meses. A melhor forma de determinar a poca de remoo do ramo que sofreu
mergulhia observar a formao de razes atravs do plstico transparente
utilizado para envolver o substrato.

2.2.4 Enxertia

A enxertia obtida por meio da unio entre duas plantas (enxerto ou cavaleiro
e porta-enxerto ou cavalo). O enxerto sempre representado por uma parte da
planta que se pretende multiplicar, ao passo que o porta-enxerto que recebe
o enxerto e geralmente uma planta jovem, com boa taxa de crescimento,
proveniente de sementes ou de estacas, bastante rstica e resistente a pragas
e doenas.

A enxertia um mtodo muito empregado na propagao de plantas; no


entanto, para se ter xito, torna-se necessrio respeitar alguns princpios
bsicos, tais como: utilizao de plantas da mesma famlia ou gnero;
observar a poca ideal de enxertia, que varivel em funo da espcie e tipo
de enxerto empregado; promover um contato ntimo entre as cascas vivas;
utilizar fitilho para promover o contato entre enxerto e porta-enxerto; o tipo de
enxertia (varivel em funo da planta envolvida), a experincia e cuidados do
operador.

Para fazer a ligadura da parte enxertada recomendvel usar uma fita de


polietileno de 1,2 cm de largura, que de fcil aquisio e praticidade de uso,
alm de possuir as caractersticas de elasticidade e evitar o ressecamento da
parte enxertada.

Durante a enxertia, deve-se cuidar para que os enxertos no ressequem,


deixando-os em gua limpa ou panos midos. As operaes devem ser
efetuadas rapidamente, realizando-se um nico corte, evitando o acmulo de
resduos na lmina. A amarrao deve ser realizada ao longo de todo o
comprimento de unio, certificando-se de que no haja deslocamento das
partes envolvidas. Em torno de 20 a 40 dias aps a enxertia, dependendo das
condies locais e da espcie, retira-se o fitilho. Dever-se efetuar a poda dos
ramos do porta-enxerto para promover a dominncia apical no enxerto,
deixando-se somente o broto crescer.
30 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

Vrios so os processos de enxertia, os quais podem ser agrupados em trs


grupos ou categorias distintas: borbulhia, garfagem e encostia.

2.2.4.1 Borbulhia ou enxerto de gema

o processo que consiste na justaposio de uma nica gema sobre um


porta-enxerto enraizado. As borbulhas podem ser destacadas com um pouco
de lenho, tornando-as mais resistentes e a extrao mais simples.

A enxertia por borbulhia normalmente realizada a uma altura de 5 a 20 cm


do nvel do solo, de acordo com a espcie, podendo ser realizada tambm em
qualquer ponto da planta. Uma condio essencial para se efetuar a borbulhia
que o porta-enxerto esteja soltando a casca.

Normalmente, a borbulhia realizada em plantas jovens ou em ramos mais


finos de plantas maiores (de 0,5 a 2,5 cm de dimetro, geralmente o dimetro
de um lpis). Existem diversas modalidades de enxertia por borbulhia, sendo a
borbulhia em T normal e em T invertido as principais.

Na borbulhia em T normal corta-se o cavalo com o canivete bem afiado e


esterilizado (lcool) no sentido transversal; depois no sentido perpendicular de
modo a formar um T. O escudo ou gema retirado segurando-se o ramo em
posio invertida. Segura-se o escudo pelo pecolo, levanta-se a casca com o
dorso da lmina e introduz-se a borbulha, cortando-se o excesso e,
posteriormente, procede-se a amarrao.

No T invertido procede-se de modo semelhante ao anterior, diferindo-se,


principalmente, apenas na forma de colocao da borbulha, que invertida
(Figura 1).

2.2.4.2 Garfagem

o processo que consiste em se soldar um pedao de ramo destacado


(enxerto ou garfo) sobre outro vegetal (porta-enxerto) de maneira a permitir o
seu desenvolvimento. O garfo difere da borbulha por possuir normalmente
mais de uma gema.

A poca normal da garfagem para as plantas de folhas caducas se d no


perodo de repouso vegetativo (inverno) e nas folhas persistentes,
dependendo da espcie, na primavera, vero e outono.

Principalmente para espcies com maior dificuldade de pegamento, recomendada


a colocao de um saco plstico amarrado com barbante na base do porta-
enxerto, o que promove melhores condies ambientais e maior proteo.
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 31

Como na borbulhia, tambm existem diversos tipos de garfagem, sendo a


garfagem em fenda cheia a mais comumente empregada. Essa consiste em
decepar o porta-enxerto a uma altura determinada do solo (em torno de 10 a
20 cm) e, com um canivete, faz-se uma fenda de 2 a 4 cm, perpendicular ao
sentido do dimetro, justapondo o enxerto (com forma de cunha) com o
cavalo, de forma que haja coincidncia dos dimetros ou que pelo menos um
dos lados seja coincidente. Por fim, amarra-se com fitilho (Figura 2).

Retira-se a gema
da espcie que se
Faz-se um quer propagar
corte no cavalo (enxerto)
em forma de
"T"

Acomoda-se a ... e amarram-se


gema, com bem os dois com
cuidado, no a ajuda de um
corte em "T" fitilho de
do cavalo ... plstico,
apertando bem a
gema...

15 - 30 dias aps,
entorta-se a ponta do
cavalo ou corta-se
acima do local
enxertado, para que
...ficando assim a o enxerto cresa
amarrao. reto. Mantm-se
apenas o
enxerto
no cavalo

Figura 1. Enxertia por borbulhia.


32 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

Abre-se uma
Corta-se o fenda de 2 a 4 cm
no cavalo
ramo do cavalo
em 10 a 20 cm
de altura

Com uma Encaixa-se


lmina bem afiada, o enxerto no
corta-se cavalo, de modo
o ramo a ser a coincidir as
enxertado em bisel, cascas
resultando no
enxerto

Com um fitilho .... fixa-se


de plstico ... as 2 partes, de
modo que fiquem
bem unidas

Envolve-se o Quando as folhas


enxerto e o cavalo j estiverem
com um saco de crescidas,
plstico transplante
transparente.

Figura 2. Enxertia por garfagem.


Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 33

2.2.5 Micropropagao

A micropropagao, ou propagao vegetativa in vitro, uma das aplicaes


da cultura de tecidos de mais larga utilizao. Destina-se principalmente
quelas espcies que so de difcil propagao pelos mtodos convencionais,
permitindo a obteno de grande nmero de plantas sadias e geneticamente
uniformes em curto perodo de tempo. De modo geral, a micropropagao de
espcies lenhosas mais difcil que a de espcies herbceas, devido perda
da capacidade morfogentica dos tecidos.

Sua aplicabilidade est baseada na teoria da totipotncia, a qual estabelece


que qualquer parte do vegetal, por menor que seja, tem capacidade de
originar uma nova planta, desde que sejam fornecidas as condies
adequadas. Com base nesta teoria, pode-se inferir que qualquer espcie
vegetal tem a capacidade de ser micropropagada, a partir de qualquer parte da
planta. Contudo, na prtica, muitas espcies so difceis de serem
micropropagadas e so chamadas de recalcitrantes.

As respostas das plantas s tcnicas de micropropagao so variveis em


funo da espcie, variedade e/ou cultivar, poca de coleta, tipo de explante
utilizado e condies de cultivo. Portanto, cabe ao tcnico descobrir qual a
poca mais adequada para coleta dos explantes e as condies que devem ser
oferecidas a estes, para que expressem seu potencial para a micropropagao.

A tarefa exige experimentao intensa, at que se obtenham resultados


satisfatrios. Porm, uma vez estabelecida, permite o desenvolvimento de
protocolos que tem por objetivo tornar a operao prtica e rotineira para uma
dada espcie. Portanto, um protocolo nada mais do que uma seqncia de
procedimentos a serem aplicados para que de uma determinada espcie e/ou
cultivar obtenha-se um mximo aproveitamento do material vegetal disponvel.

Dentre as diferentes tcnicas de cultivo in vitro, a micropropagao a partir de


parte de segmentos de rgos ou tecidos meristemticos, com induo de
organognese direta , at hoje, a mais indicada comercialmente, pelo fato de
permitir menor ocorrncia de variaes genticas em relao ao explante original.

A induo da multiplicao de explantes cultivados in vitro d-se atravs da


interao entre o potencial inerente do explante utilizado e os
fitorreguladores. Quando nesta multiplicao ocorre a formao direta de uma
ou mais gemas, esta chamada de organognese direta. E quando antes da
formao de uma nova gema ocorre a formao de calos, esta chamada de
organognese indireta.
34 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

Num sistema comercial de micropropagao, o objetivo a multiplicao o


mais fiel possvel do material original (clonagem), para que sejam mantidas as
caractersticas comerciais deste material. Assim, para a manuteno desta
fidelidade, importante que se evite a organognese indireta, pois a formao
de calo pode dar origem a instabilidades genticas indesejveis que viro a se
multiplicar durante o processo de micropropagao, vindo a produzir
indivduos com caractersticas diferentes do original (off types). Este fato
comum, principalmente, em indivduos com nvel de ploidia elevado, como no
caso de cultivares de bananeira.

Comercialmente, a micropropagao empregada em diversos pases. A


grande maioria dos laboratrios comerciais surgiu agregado aos viveiros de
companhias produtoras de mudas, com o objetivo de fornecer material
propagativo livre de doenas, de acordo com as necessidades internas, ou de
acelerar os mtodos convencionais de propagao vegetativa. Poucas
empresas utilizam a produo de mudas in vitro para abastecer viveiros de
terceiros.

No Brasil, a aplicao comercial da micropropagao recente. A maioria dos


trabalhos realizada por grupos em instituies pblicas de pesquisa e
universidades. Entretanto, poucas so as empresas que atual na rea, como so
os casos de algumas empresas que produzem orqudeas e outras reflorestadoras,
que tm empregado a micropropagao de rvores selecionadas.

2.2.5.1 Aplicaes da micropropagao

Uma das utilizaes da micropropagao a obteno de plantas livres de


vrus, por meio da cultura de pices caulinares e meristemas, superando
problemas de contaminao patognica. Uma variao da cultura de pice
caulinar para limpeza clonal a microenxertia. Outra indicao desta tcnica
para a recuperao de rvores adultas selecionadas.

Como tcnica de propagao rpida e em grande escala, a micropropagao


tem sido empregada em programas de melhoramento gentico vegetal. A
micropropagao uma tcnica que mantm a identidade gentica do
gentipo. Entretanto, dependendo da espcie, pode ser mais prtico e
econmico utilizar outros mtodos de propagao vegetativa.

A principal aplicao prtica das tcnicas de micropropagao tem sido na


produo comercial de plantas, possibilitando sua multiplicao rpida e em
perodos de tempo e espaos reduzidos.
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 35
Para justificar a utilizao da propagao in vitro, deve-se levar em
considerao que o clone a ser propagado deva ser resultado de algum tipo de
seleo. Alm disso, a variabilidade gentica entre espcies e diferentes clones
da mesma espcie pressupem o ajuste da metodologia para cada clone.
Finalmente, devem-se buscar alternativas que tornem a micropropagao um
processo barato, acessvel e economicamente vivel. A utilizao de
bioreatores, embriognese somtica, entre outras tcnicas, aliadas a reduo
de carboidratos no meio de cultura, aumento da intensidade luminosa com luz
natural e promoo de trocas gasosas entre o ambiente in vitro e ex vitro,
certamente tornaro a micropropagao uma tcnica amplamente empregada.

Outras aplicaes da cultura de tecidos

- Preservao e intercmbio de germoplasma

- Hibridao interespecfica e intergenrica (cultura de embries e fuso de


protoplastos)

- Obteno de plantas haplides

- Variao somaclonal e induo de mutaes

- Florescimento e fertilizao in vitro

- Transformao de plantas

- Seleo in vitro

2.2.5.2 Fases da micropropagao

Fase 0 - Tratamento e preparo das plantas-matrizes para coletas dos explantes

Nesta etapa, o preparo adequado das matrizes determinar, em grande parte,


o sucesso da aplicao da tcnica.

As matrizes fornecedoras de explantes devem ser mantidas nas melhores


condies de limpeza e fertilidade possvel. Para tal, recomenda-se que sejam
cultivadas em condies controladas, onde possam receber tratamento
fitossanitrio e nutrio mineral adequada. A parte area deve tambm,
dentro do possvel, ser mantida seca.

Os tratamentos fitossanitrios tm por objetivo manter os agentes


microbianos externos, fitopatognicos ou no, nos nveis mais baixos
possveis, enquanto os internos (endofticos) devem ser totalmente
eliminados. Para tal, so utilizados agentes antimicrobianos de contato e
sistmicos, respectivamente.
36 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

Uma vez reduzida a carga exgena, e eliminada a carga endgena de agentes


microbianos, aumentam as chances de estabelecimento dos explantes
introduzidos no meio de cultivo in vitro.

No caso de plantas de grande porte, onde seu cultivo direto sob condies
controladas difcil, podem ser adotados mtodos intermedirios de
propagao vegetativa antes da introduo do material in vitro. Estas
tcnicas tm por objetivo reduzir o porte do material a ser micropropagado
para que este possa vir a receber o devido tratamento nutricional e
fitossanitrio.

Para as espcies arbreas, a prtica normalmente adotada consiste em induzir


a produo de brotos rejuvenescidos atravs de podas drsticas da copa ou
atravs do resgate e rejuvenescimento pela enxertia seriada. A primeira pode
ser aplicada para espcies que apresentam boa capacidade de brotao, e a
segunda para aquelas que no apresentam esta caracterstica. Em ambos os
casos, o porte do material a ser utilizado ser reduzido, permitindo assim seu
cultivo sob condies controladas.

Quanto nutrio das matrizes, devem-se procurar formulaes que venham


a favorecer o crescimento e vigor vegetativo, mantendo-se adequadas as
relaes NPK de acordo com as caractersticas de cultivo de cada espcie e/
ou cultivar. Uma planta adequadamente nutrida apresentar um melhor
desempenho durante as etapas da micropropagao, em funo de um melhor
balano hormonal endgeno.

Fase 1 - Seleo de explantes, desinfestao e estabelecimento in vitro

Seleo de explantes

Diversos tipos de explantes (desde uma clula at um rgo, como uma folha,
uma flor ou um fruto) podem ser utilizados para iniciar a propagao in vitro.
Na seleo dos explantes, devem ser considerados aspectos como o nvel de
diferenciao do tecido utilizado e a finalidade da micropropagao.

Gemas apicais tendem a apresentar maior capacidade de crescimento do que


gemas axilares que esto sob efeito da dominncia apical, fato comum em
plantas herbceas ornamentais e olercolas. Em contrapartida, geralmente
ocorre o contrrio em espcies arbreas. Normalmente, devido ao pequeno
nmero de gemas apicais disponveis ou a sua maior sensibilidade a
desinfestao, necessria a utilizao de gemas axilares ou de outros tipos
de meristemas, como os florais.
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 37
O maior nvel de assepsia possvel deve ser mantido durante a coleta,
utilizando-se instrumentos limpos ou at esterilizados. O material vegetal
coletado deve ser colocado em sacos plsticos, para evitar o dessecamento,
devidamente identificados e imediatamente levados ao laboratrio. Caso a
coleta seja feita em locais distantes do laboratrio, importante que a
integridade dos tecidos seja garantida, mantendo-os midos e baixa
temperatura. Podem-se manter os explantes em frascos tampados contendo
gua autoclavada ou solues diludas (0,05%) de hipoclorito de sdio.

O tamanho do explante depende do objetivo da micropropagao. Para


eliminar microorganismos sistmicos como vrus, bactrias ou micoplasmas,
quanto menor o explante isolado, ou quanto mais isolado das regies
subjacentes vascularizadas, maior a chance de sucesso. Mesmo
considerando microorganismos contaminantes superficiais, o fato de levar
menos tecido para condies asspticas reduz a quantidade destes.

Por outro lado, o tamanho do explante tambm determina suas possibilidades


de sobrevivncia e capacidade de crescimento. Se o objetivo for
simplesmente propagao, mais adequado iniciar as culturas com pices ou
segmentos caulinares que contm gemas axilares, pois, em geral, explantes
muito pequenos no crescem ou demoram muito a faz-lo.

Caso o objetivo seja obter plantas livres de doenas, deve-se procurar o


tamanho do explante ideal que esteja livre do microorganismo e, ao mesmo
tempo, consiga se estabelecer e crescer, depois de isolado.

pices e gemas laterais isolados de plntulas germinadas in vitro, embries ou


tecidos da semente so tambm utilizados como explantes iniciais de
micropropagao. Entretanto, como um embrio ou plntula resultado de
recombinao gnica, constitui-se de um novo gentipo. Esse fato limita o
emprego desta tcnica em funo da variabilidade dos gentipos e as
diferenas entre os tecidos de uma plntula e de um meristema isolado de
tecido menos juvenil. Contudo, a utilizao deste tipo de explante apresenta
vantagens do ponto de vista experimental, na determinao de um protocolo
de micropropagao. A grande disponibilidade de explantes sem contaminao
e a pronta capacidade de crescimento e resposta aplicao de
fitorreguladores dos tecidos juvenis permitem a conduo de inmeros testes.

Desinfestao

A cultura de tecidos compreende um conjunto de tcnicas que so realizadas


sob rigorosa assepsia. Qualquer microorganismo que entrar em contato com
38 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

o meio de cultura ter condies de se desenvolver e, como conseqncia,


inviabilizar a cultura. So determinantes os pr-tratamentos aplicados na
planta-matriz para o sucesso desta etapa, principalmente no que se refere a
microorganismos endgenos.

A contaminao em laboratrios de cultura de tecidos dependente da


espcie de planta a ser trabalhada, das condies ambientais locais, do
treinamento dos tcnicos e das medidas de assepsia seguidas na rotina
laboratorial.

Os microorganismos esto presentes tanto nos propgulos, que sero


utilizados para a retirada de explantes, como no ambiente onde a cultura ser
conduzida.

Vrias substncias com ao germicida so utilizadas para fazer a


desinfestao dos explantes. Os mais comuns so o etanol e os compostos a
base de cloro, como o hipoclorito de sdio e de clcio. Outros agentes
desinfestantes utilizados so cloreto de mercrio, cido clordrico, o cloreto
de benzalcnio, perxido de hidrognio (gua oxigenada), nitrato de prata,
formaldedo e xido de etileno.

As concentraes das solues desinfestantes, assim como as combinaes


dos princpios ativos desinfestantes e os tempos de exposio variam
bastante. O etanol geralmente utilizado a 70%, com tempo de exposio
dos tecidos, em geral, variando de dezenas de segundos a alguns minutos. As
concentraes mais comuns de cloro ativo vo de 0,5% a 2% com tempo de
exposio de 10 a 20 minutos. O processo de desinfestao realizado em
cmara de fluxo laminar, utilizando vidraria previamente esterilizada.

Aps a desinfestao, procede-se lavagens sucessivas com gua destilada


autoclavada, geralmente trs, para remoo dos resduos de cloro.

Tambm podem ser utilizados fungicidas e bactericidas durante a


desinfestao ou incorpor-los ao meio de cultura de isolamento. Um dos
fungicidas de mais ampla utilizao foi o Benomyl, visto possuir amplo
espectro de ao e ser pouco txico s culturas nas concentraes
necessrias para controlar fungos. Entretanto, o fungicida Benlate 500 teve
seu ingrediente ativo (Benomyl) proibido no Brasil pelo Ministrio da Sade
em 2003. Em funo disso, produtos do grupo dos benzimidazis, o mesmo
do Benomyl, como Carbendazim, Thiabendazol, Thiofanato metlico podem
ser empregados como substituto deste.
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 39
Os antibiticos so utilizados para controlar contaminaes bacterianas
endgenas. Depois de eliminados os microorganismos superficiais, os
explantes podem ser transferidos para meio de cultura contendo antibitico.
Vrios antibiticos so utilizados em cultura de tecidos, a exemplo de:
cefatoxima, ampicilina, estreptomicina, rifampicina, kasugamicina,
carbenicilina, cefalosporinas, neomicina, canamicina, cloranfenicol,
tetraciclinas, dentre outros. Dentre estes, alguns so mais e outros menos
txicos aos tecidos vegetais.

Alternativa recente o emprego do PPM (Plant Preservative Mixture). um


biocida de amplo espectro de ao em concentraes de 0,5 a 2 mL L-1
combinado ou no com antibiticos com a metade de sua concentrao. Pode
ser usado para reduzir a contaminao de bactrias e fungos em cultura de
tecidos de plantas, e em altas concentraes para reduzir contaminaes
endgenas.

Estabelecimento in vitro

Nesta etapa, a manipulao do explante determina sua sobrevivncia. O


isolamento dos explantes deve ser realizado em cmara de fluxo laminar e
com destreza para evitar, principalmente, a desidratao dos tecidos. Os
instrumentos devem ser flambados aps imerso em etanol absoluto e devem
ser utilizados somente quando estiverem frios. Para evitar seu uso ainda
quente, recomenda-se trabalhar um conjunto de instrumentos.

Um problema comum durante o isolamento de explantes a oxidao de


compostos fenlicos que so liberados pelas clulas danificadas com o corte.
Este particularmente mais intenso e srio no isolamento de explantes de
espcies lenhosas.

A utilizao de substncias antioxidantes (cido ascrbico, cido ctrico, PVP)


pode ser feita aps a desinfestao, num ltimo enxge demorado; fazendo
o trabalho de isolamento de explantes em recipiente contendo a soluo ou;
adicionando-as ao meio de cultura, por esterilizao a frio. O carvo ativado
adicionado ao meio tambm eficiente no controle da oxidao, pois
escurece o meio e absorve compostos fenlicos presentes no gar ou
formados durante a oxidao dos compostos fenlicos. A transferncia
freqente dos explantes outra medida eficaz e fcil de ser adotada para
reduzir os efeitos da oxidao.

Diversas formulaes de meios de cultura tm sido utilizadas no incio do


cultivo. No h formulao padro, mas o meio de Murashige e Skoog (MS),
40 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

suas modificaes e diluies tm apresentado resultados satisfatrios para


diversas espcies. Entretanto, formulaes especialmente desenvolvidas para
espcies lenhosas tm sido empregadas. Pode ser interessante fazer um pr-
condicionamento dos explantes, inoculando-os em meio nutritivo sem
fitorreguladores.

Em caso de adio de fitorreguladores, as citocininas podem ser adicionadas em


concentraes de 0,05 a 1 mg L-1. Auxinas e giberelinas so empregadas com
menor freqncia nesta etapa da micropropagao e em baixas concentraes.
As auxinas podem ser empregadas em concentraes de 0,01 a 0,1 mg L-1.

Fase 2 - Multiplicao dos explantes mediante sucessivos subcultivos

Nesta fase, o principal objetivo produzir o maior nmero de plantas possvel,


no menor tempo. No basta conseguir somente altas taxas de multiplicao
em alguns explantes, e sim uma taxa mdia satisfatria com o mnimo de
variao. A qualidade e homogeneidade das partes areas produzidas tambm
so importantes, pois vai determinar o sucesso na fase de enraizamento.

Diversos meios so utilizados na fase de multiplicao. muito comum a utilizao


da mesma composio bsica no isolamento e na multiplicao. As variaes mais
freqentes dizem respeito composio de macronutrientes, principalmente a fonte
de nitrognio utilizada e o balano entre os ons nitrato e amnio.

As concentraes de citocininas para multiplicao esto entre 0,1 a 5,0 mg


L-1. A definio do tipo e da concentrao tima de citocinina para a
multiplicao constitui-se em passo importante. O excesso de citocinina no
meio de cultura txico, causando entufamento e falta de alongamento das
culturas, encurtamento dos entrens e vitrificao, levando a srios
problemas na fase de enraizamento.

Embora nem sempre sejam necessrias no meio de multiplicao, as auxinas


so utilizadas para estimular o crescimento das partes areas. As
concentraes de auxina so baixas se comparadas com as das citocininas
para manter um balano auxina/citocinina menor que 1. Normalmente so
adicionadas concentraes menores do que 0,5 mg L-1.

O perodo de incubao mais comum entre repicagens de quatro semanas,


entretanto, este muito varivel entre espcies.

A taxa de proliferao das brotaes nem sempre permanece constante por


perodos longos. Uma variao nesta taxa comum em culturas de brotaes
de plantas lenhosas, onde a taxa de multiplicao tipicamente baixa durante
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 41
as primeiras passagens, porm aumenta medida que o material cultivado
torna-se rejuvenescido. s vezes, a taxa de multiplicao sobe at um
mximo e ento diminui em subculturas sucessivas.

Em algumas espcies, o decrscimo na taxa de propagao aps vrios


subcultivos pode exigir a eliminao da citocinina do meio por uma ou duas
passagens, a reduo na concentrao usada ou ainda a substituio do BAP
por outro composto, tal como a cinetina.

Na cultura de tecidos de algumas espcies, foi constatado que as mesmas


tornam-se habituadas citocinina. Isto resulta em multiplicao excessiva de
brotos em meios livres desse hormnio, porm os brotos produzidos so
pequenos e do origem a poucas razes adventcias de modo que as plantas
so difceis de se estabelecerem ex vitro.

As giberelinas, especialmente o GA3 so usadas eventualmente na fase de


multiplicao. O efeito mais conhecido deste fitorregulador, o alongamento de
partes areas, explorado in vitro quando estas no esto em condies de
serem individualizadas para o enraizamento, devido ao seu tamanho.
Entretanto, nesta fase, geralmente no se consegue estimular uma resposta
uniforme de alongamento em todas as partes areas.

Alm do aspecto de eficincia, a fase de alongamento antieconmica por


demandar mo-de-obra adicional que no resulta em multiplicao, e sim,
num simples ajuste das culturas. Neste sentido, deve-se buscar a otimizao
do balano entre auxinas e citocininas para a induo de partes areas
alongadas e adequadas para o processo de enraizamento. Em geral, em
espcies herbceas, concomitante com a multiplicao, ocorre o
alongamento. Contudo, em espcies lenhosas, normalmente o cultivo de
explantes em meio de cultura para alongamento pode ser necessrio.

As condies de cultura utilizadas nesta fase so, de maneira geral,


semelhantes s fornecidas na fase inicial da cultura in vitro.

Esta etapa caracteriza-se pela formao de razes adventcias nas partes


areas provenientes da multiplicao. O enraizamento de espcies herbceas
geralmente mais fcil do que lenhosas e quanto mais juvenil for o material
vegetal. Partes areas pequenas no enrazam bem e necessitam de uma fase
intermediria de alongamento.

O enraizamento pode ser realizado tanto in vitro quanto ex vitro. No caso de


enraizamento in vitro, as razes so induzidas em meio de cultura, sob
condies de laboratrio, e as plantas transplantadas para substrato em casa-
42 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

de-vegetao. Quando o enraizamento ocorre ex vitro, as partes areas so


manipuladas como microestacas e todo o processo se d em substrato. A
opo por um dos sistemas depende da qualidade das partes areas obtidas
na multiplicao, da espcie, do gentipo e da infra-estrutura adequada. De
maneira geral, o enraizamento ex vitro mais eficiente, proporcionando a
formao de sistema radicular melhor formado, e mais prtico e econmico do
que o enraizamento in vitro.

As auxinas (ANA, AIB e AIA) so utilizadas geralmente em concentraes da


ordem de 0,1 a 1 mg L-1 para enraizamento in vitro, enquanto que para a
induo do enraizamento ex vitro so utilizadas concentraes de 1.000 a
6.000 mg L-1 de AIB. Dependendo do grau de juvenilidade do material, no
h necessidade de tratamento com fitorregulador.

Fase 3 - Aclimatizao

A aclimatizao ou aclimatao um dos processos indispensveis para a


obteno de uma planta micropropagada. Consiste num conjunto de tcnicas
que visa adaptar as plantas a um meio ambiente muito diferente daquele onde
ela foi formada, no interior de um recipiente, onde so criadas condies
ambientais peculiares no que se refere ao substrato composto do ar e gua,
luminosidade, entre outros. uma fase intermediria de adaptao qual a
planta submetida para, posteriormente, passar s fases de desenvolvimento
no campo.

A regra para se aumentar a taxa de crescimento e/ou evitar danos ou morte


s plntulas durante a aclimatizao aquela em que as condies de
propagao devem ser lentamente aproximadas das condies onde as
plantas sero aclimatadas (casa de vegetao). Pr-tratamentos de reduo
de umidade relativa nos recipientes de cultura, como a retirada das tampas
ainda na sala de incubao, podem ser aplicados para aumentar a
sobrevivncia durante a aclimatizao. Outras tcnicas de pr-adaptao
so a reduo ou eliminao da fonte de acar do meio de enraizamento e
aumentar a concentrao de CO2 e a intensidade luminosa no ambiente de
incubao.

Na aclimatizao, o principal meio de controle ambiental nos estgios de


aclimatizao conseguido com elevao da umidade relativa do ar (UR),
em particular, no incio do processo. A elevada UR geralmente conseguida
pela cobertura com filme plstico sob sombrite, juntamente com
nebulizao freqente.
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 43
2.2.5.3 Meios de cultura

Preparo

O meio da cultura deve suprir tecidos e rgos cultivados in vitro com nutrientes
necessrios ao crescimento. Basicamente, o meio da cultura fornece macro e
micronutrientes e um carboidrato (normalmente a sacarose) para substituir o
carbono que a planta normalmente fixa da atmosfera pela fotossntese. Para
proporcionar um crescimento maior, normalmente incluem-se certos
componentes orgnicos como vitaminas, aminocidos e reguladores de
crescimento. Diversos outros produtos, a exemplo de sucos de frutas, leite de
coco, extratos de leveduras e protenas hidrolisadas, tambm podem ser usados.

Os meios de cultura so ento preparados a partir de um ou todos os


seguintes componentes:

- gua

o componente utilizado em maior quantidade na preparao de meios de


cultura. Por ser uma fonte potencial de impurezas que podem afetar o
crescimento dos explantes, convm que sejam tomados cuidados quanto
origem da gua a ser utilizada. praticamente obrigatrio o uso de gua
destilada ou bidestilada e deionizada ou filtrada.

- Macronutrientes

Os macronutrientes so fornecidos ao meio de cultura na forma de sais. Os


macronutrientes utilizados nos meios de cultura so: nitrognio, fsforo,
potssio, magnsio, enxofre e clcio.

- Micronutrientes

Os micronutrientes utilizados nos meios de cultura so: mangans, zinco,


boro, cobre, molibdnio, cobalto, iodo, ferro, cloro e sdio.

- Suplementos orgnicos

O crescimento e morfognese na cultura de tecidos podem ser aumentados por


pequenas quantidades de alguns nutrientes orgnicos, entre os quais vitaminas
(tiamina, cido nicotnico, piridoxina, cido pantotnico, cido ascrbico, e mio-
inositol), aminocidos (glicina, casena hidrolisada) e certos suplementos
indefinidos (extrato de malte e de levedura; sucos, polpas e extratos de vrios
frutos, a exemplo de banana e tomate; leite ou gua de coco).
44 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

- Reguladores de crescimento

Os reguladores de crescimento so componentes muito importantes dos


meios de cultura. Sua utilizao e os teores de cada regulador variaro
conforme a espcie a ser cultivada in vitro, o tipo de explante e os objetivos
de cada etapa da cultura.

Os principais grupos de hormnios vegetais (e reguladores de crescimento) so:

a) Auxinas

- AIA (cido 3-indol actico)

- 2,4-D (cido 2,4-diclorofenoxi actico)

- AIB (cido indolbutrico)

- ANA (cido naftaleno-actico)

- Picloram (cido-4-amino-3,5,6-tricloropicolnico)

b) Citocininas

- BAP (6-Benzilaminopurina = 6 Benzilamina)

- cinetina

- zeatina

- 2iP (2- isopenteniladenina)

- Thidiazuron (TDZ) (uma feniluria)

- Dihidrozeatina (6-(4-hidroxi-3-metil-trans-2-butenil) aminopurina)

c) Giberelinas

- O cido giberlico (GA3) e uma mistura de GA4 e GA7 so as giberelinas


comercialmente disponveis.

d) Etileno

e) cido abscsico

- Acares

Praticamente todas as clulas, tecidos e rgos cultivados in vitro so


heterotrficas e dependem de uma fonte externa de energia. Portanto,
torna-se necessrio incorporar ao meio de cultura uma fonte de carbono.
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 45
A fonte mais comumente utilizada a sacarose. Outras fontes tambm tm
sido utilizadas, tais como a maltose, rafinose, frutose, manose, galactose e
lactose.

- Agentes geleificantes e suportes

Explantes muito pequenos, tais como meristemas, s sobrevivem em meio


lquido se colocados sobre suportes de papel-filtro, tambm chamados
suportes ou pontes de Heller. Alm do papel-filtro, outros materiais porosos
podem ser usados com a mesma finalidade.

O agente solidificante mais comumente utilizado o gar, um polissacardeo


extrado de algas marinhas. Gomas produzidas por bactrias, como Gelrite e
o Gel-Gro tm dado bons resultados.

- Antibiticos e fungicidas

O uso de antibiticos e fungicidas justifica-se quanto h contaminao


microbiana, proveniente de infeces sistmicas das plantas matrizes. No
entanto, o uso destas substncias no deve substituir totalmente as tcnicas
de assepsia do explante no momento do estabelecimento in vitro. Vrios so
os antibiticos e fungicidas adicionados aos meios de cultura.

- Antioxidantes

H espcies cujo estabelecimento e crescimento in vitro dificultado ou


limitado pela liberao de exsudatos derivados da oxidao de compostos
fenlicos. O uso de antioxidantes uma das alternativas para contornar este
problema. Os principais antioxidantes acrescidos ao meio de cultura so o
cido ctrico, cido ascrbico, PVP (polivinilpirrolidona), glutationa, cistena,
ditiotreitol e rosmanol.

- Carvo ativado

O carvo ativado finamente modo freqentemente adicionado no meio em


diferentes estgios da cultura de tecidos. Sua adio aos meios de cultura
proporciona as seguintes vantagens: adsorve compostos exsudados dos
tecidos cultivados ou presentes no gar; evita o excesso de crescimento de
calos; promove a morfognese, particularmente a embriognese e; promove a
formao de razes, provavelmente devido sua capacidade em excluir a luz
do meio de cultura.
46 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

2.2.5.4 Laboratrio de cultura de tecidos vegetais

ESTRUTURA FSICA

A montagem e organizao de um laboratrio de cultura de tecidos dependem


dos objetivos a que se prope. Um laboratrio com fins comerciais,
destinados exclusivamente a micropropagao com base em protocolos
estabelecidos, tende a ser maior, porm, mais simples em instalaes e
equipamentos, que um laboratrio destinado pesquisa.

Apesar da rea total necessria ser relativamente pequena, o laboratrio


necessita um considervel investimento em equipamentos e materiais.
Inicialmente, deve-se ter idia do movimento de pessoas e de material vegetal
entre as diferentes reas, para que as portas sejam corretamente posicionadas.
As dependncias do laboratrio devem estar num mesmo nvel, de fcil acesso,
e bem distribudas, facilitando o deslocamento de pessoas e materiais.

Normalmente, um laboratrio de cultura de tecidos possui uma estrutura


padro, com algumas variaes:

Sala de preparo de meio de cultura e dos explantes

Esta sala denominada de rea suja do laboratrio. Nela, so dispostos


equipamentos como freezer, geladeira, chapa aquecedora, destilador ou
deionizador, balana analtica de preciso, potencimetro ou pHmetro,
agitador magntico, forno de microondas e dispensador de meio, alm dos
reagentes. A vidraria usada no preparo dos meios de cultura deve estar
disponvel, assim como tubos e frascos com respectivas tampas, para receber
o meio quando pronto. Deve conter bancadas para o preparo dos meios e para
manter os equipamentos, estantes, armrios para guardar produtos qumicos,
vidraria, instrumentos, etc.

Sala de lavagem e esterilizao

Destinada esterilizao do meio de cultura e outros materiais e lavagem de


vidraria. Nela so alocados equipamentos como autoclave e estufas para
esterilizao a seco. Pias grandes devem ser colocadas para facilitar a
lavagem de vidraria, preferencialmente com gua quente.

Sala de isolamento e transferncia

Nesta rea, realizam-se os trabalhos de exciso, inoculao e transferncia


dos explantes para os meios de cultura. Estas atividades necessitam ser
efetuadas em superfcie estril e dentro de um ambiente sem risco dos
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 47
explantes serem reinfectados e dos contaminantes entrarem no frasco de
cultura. Portanto, nesta sala, a assepsia total imprescindvel. Piso e paredes
devem facilitar a limpeza. Alguns laboratrios mantm luzes germicidas
(ultravioletas) ligadas quando a cmara no est em uso.

O mtodo mais efetivo para evitar contaminaes o uso de cmaras de


fluxo laminar, que promovem, com auxlio de um motor, a passagem de ar
atravs de pr-filtros de alta eficincia. O ar, que chega superfcie de
trabalho da cmara , portanto, estril.

Sala de crescimento

Neste ambiente, com condies controladas, desenvolvem-se as culturas in


vitro. Uma luminncia de 1.000 a 5.000 lux usualmente adequada. Uma
irradincia de 12 mmol m-2.s-2 (equivalente a aproximadamente 1.000 lux)
desejvel para o estabelecimento e crescimento inicial de culturas de gemas e
meristemas de muitas plantas. Porm, brotaes e plntulas geralmente
necessitam de 3.000 lux antes da transferncia para a casa de vegetao. O
fotoperodo regulado por timers e normalmente de 16 horas por dia.

A temperatura controlada por aparelhos de ar condicionado ligados a


termostatos, que mantm a temperatura constante, com variao de 1 a
2oC. Normalmente, utilizam-se temperaturas ao redor de 25oC.

rea de aclimatizao

As plntulas, aps serem removidas dos frascos e ou tubos de ensaio, so


lavadas para remover os restos de meio de cultura, sofrem uma toalete no
sistema radicular e so transferidas para bandejas de isopor, contendo um
substrato, as quais so levadas para a casa de vegetao com sistemas de
nebulizao, controle de temperatura e luminosidade.

EQUIPAMENTOS ESSENCIAIS

Os equipamentos normalmente utilizados em um laboratrio e suas


respectivas finalidades so:

- Autoclave - esterilizao de meio de cultura, vidraria e outros materiais.

- Geladeira e Freezer - preservao de produtos qumicos, solues-estoque,


material vegetal, etc.

- Estufa incubadora tipo B.O.D - trabalhos com variao de temperatura e/ou


fotoperodo.
48 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

- Cmara de fluxo laminar - inoculao de explantes sob condio plenamente


assptica.
- Destilador e deionizador de gua - gua para o meio de cultura.
- Potencimetro ou pHmetro - medir pH de meios de cultura.
- Chapa aquecedora ou forno de microondas - derreter o gar.
- Mesa agitadora - agitao de meios lquidos.
- Balana de preciso - pesar reagentes.
- Balana analtica - pesar reagentes.
- Banho maria - manter os meios lquidos para incorporao de produtos
esterilizados a frio.
- Lavador de pipetas.
- Agitadores magnticos - preparo de solues.
- Microscpio estereoscpico - retirada de meristemas.
- Aparelhos de ar condicionado - manter a temperatura.
- Timers - controle de fotoperodo.
- Carrinho - transportar material de laboratrio, culturas e meios.
- Estabilizador de voltagem - evitar danos aos equipamentos.
- Equipamento para filtragem a frio - esterilizao de produtos termolbeis.
- Bomba de vcuo - aumentar a eficincia da assepsia.
- Dispensador de meio - verter meios para tubos ou frascos.
- Estufa - esterilizao e secagem de vidrarias e materiais
INSTRUMENTOS

Os instrumentos a serem adquiridos para um laboratrio de cultura de tecidos,


bem como a sua quantidade, dependem da finalidade e do tamanho do
laboratrio. Porm, de modo geral, os instrumentos de maior importncia so:

- Pinas

- Bisturis

- Estiletes

- Lminas para bisturi


Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 49
- Tesouras

- Bandejas

- Suportes para tubos de ensaio

- Suportes para placas de Petri

- Esptulas

- Lamparinas

VIDRARIA

A vidraria e sua quantidade tambm variam conforme o laboratrio, sendo as


principais:

- Bales volumtricos 1.000, 100, 200 e 500 ml

- Erlenmeyers 100, 200 e 500 ml

- Placas de petri

- Tubos de ensaio

- Frascos de 200 ml

- Provetas 1.000, 500, 250 e 100 ml

- Pipetas 1, 2, 5, 10 e 20 ml

- Funis

OUTROS MATERIAIS

So ainda necessrios ao laboratrio outros materiais, tais como: tampas


plsticas para tubos de ensaio e frascos, algodo hidrfilo, gaze, fita crepe,
detergentes, desinfetantes, escovas para lavagem da vidraria, mscaras, luvas,
plsticos para vedao dos tubos (vitafilm, parafilme), papel de filtro, lmpadas
incandescentes, fluorescentes e ultravioleta, recipientes para gua destilada,
papel toalha, papel alumnio, etiquetas adesivas, canetas, entre outros.
50 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

3 LITERATURA COMPLEMENTAR
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52 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

ANEXO
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 53
54 Produo de Mudas de Espcies Lenhosas

GLOSSRIO DE TERMOS TCNICOS

ABA (cido abscsico) hormnio vegetal envolvido na inibio do


crescimento da parte area, dentre outros efeitos.

gar - polissacardeo extrado de algas marinhas. utilizado como agente


geleificante em cultura de tecidos de plantas.

gua deionizada gua purificada de baixa condutividade, cujos ctions e


nions foram removidos, por meio de sua passagem por uma resina de troca
inica.

gua destilada gua purificada pelo processo de destilao, onde


aquecida e seu vapor condensado em uma coluna de destilao.

Auxinas indutores de raiz (AIA - cido indolil-actico, AIB - cido Indol


butrico, ANA - cido naftaleno actico, 2,4-D (diclorofenoxiactico);
Picloram, Dicamba, etc.

Biorreator Recipiente onde ocorre uma reao biolgica, em geral,


fermentao ou biotransformao.

Calo grupo ou massa de clulas com crescimento desordenado, as quais


podem apresentar certo grau de diferenciao.

Citocininas indutores de gemas (BAP-Benzil amino purina ou BA- Benzil


adenina, Cinetina, Zeatina, 2IP 2 isopentil adenina, TDZ Thiadzuron)

Desinfestao eliminao de microorganismos superficiais em um explante,


utilizando-se solues desinfestantes.

Etileno Hormnio envolvido na senescncia e absciso foliar e na maturao


e amadurecimento de frutos.

Ex vitro fora do vidro. Termo utilizado para contrastar com processos


efetuados in vitro.
Produo de Mudas de Espcies Lenhosas 55
Explante segmento vegetal utilizado para incio da micropropagao

Fitohormnio ou hormnio vegetal substncia orgnica produzida pela


planta, de baixa massa molecular que, em pequenas concentraes, promove,
inibe ou modifica processos fisiolgicos, geralmente em locais diferentes
daquele onde foi produzida.

Fitorreguladores ou reguladores de crescimento substncias sintticas, no


produzidas naturalmente que, quando aplicadas planta em quantidades
diminutas, estimulam, inibem ou modificam o crescimento ou o
desenvolvimento (efeitos semelhantes aos dos fitohormnios).

Giberelinas - promovem o alongamento das gemas (GA3 cido giberlico)

In vitro dentro do vidro

Organognese gerao de rgos

Ploidia tamanho do genoma

Recalcitrantes 1) Gentipo de difcil regenerao ou transformao in vitro;


2) Semente intolerante dessecao e ao armazenamento a baixas
temperaturas, geralmente, com baixa longevidade e; 3) Refere-se a materiais
no biodegradveis no solo.

Regenerao em cultura de tecidos de plantas, significa uma resposta


morfogentica de um explante a um estmulo, que resulta na formao de
parte area, embrio, propgulo ou planta.

Repicagem transferncia de material vegetal em cultivo, sem subdividi-lo,


para um novo meio nutritivo.

Subcultivo cultura de tecido constitudo na subdiviso de material j


estabelecido in vitro, sua transferncia para novo meio nutritivo.

Variao somaclonal variao espontnea de plantas regeneradas de cultura


de clulas ou tecidos in vitro.

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