Cintica e clculo de biorreatores

Engenharia de Bioprocessos / CAP / UFSJ

Prof. Flvia Donria Reis
flaviadonaria@ufsj.edu.br
Sala 201 / Bloco 2
10. CINTICA MICROBIANA

2
 10.1. Formas de operao dos
biorreatores

Descontnua Contnua Semicontnua

Com reciclo
de clula
Batelada
Batelada
alimentada
Sem reciclo
de clula

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Estudo Cintico de Bioprocesso
Medir taxas de transformao que ocorrem durante a
fermentao;
Estudar a influncia de fatores (pH, T, cultivo continuo,
cultivo em batelada simples, batelada alimentada)
nessas taxas;
Correlacionar por meio de equaes empricas de
modelos matemticos as taxas de transformao com os
fatores que nelas influenciam;
Aplicar as equaes obtidas na otimizao no controle
do processo.

4
 10.2. Cultivos em batelada
Forma mais simples e utilizada
Processo sem entrada e sem sada (exceto gases)
Trmino do processo esgotamento de substrato /
acmulo de produto
Inoculao no tempo t = 0

V0: volume inicial do tanque (L) constante

Cx0: concentrao inicial de clulas (g/L)

Cs0: concentrao inicial de substrato (g/L)

5
 10.2. Cultivos em batelada
Analisa a evoluo dos valores de concentrao de um ou
mais componentes do sistema de cultivo em funo do
tempo de fermentao.

Componentes do sistema
Micro-organismo (biomassa)
Produto(s) do metabolismo
Nutrientes ou substrato que compem o meio de cultivo.

9,0 12,00
c
8,0 X
10,00
7,0
P
Biomassa (g/L)

S (g/L); P (g/L)

6,0 8,00

Produto de anlise INTERESSE ECONMICO

5,0
6,00
4,0
3,0 4,00 Substrato de anlise SUBSTRATO LIMITANTE
2,0
2,00
1,0
0,0 0,00
0 20 40 60 80 100
Tempo (h)
6
10.2.1. Perfis de concentrao de
clula, substrato e produto

dCx
rX
dt
dCs
- rS
dt
dCp
rP
dt

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 Definio da viabilidade tcnica e
econmica de Bioprocessos
Fatores de Rendimento YP/S; YX/S; YP/X

Variveis de respostas
P
Produtividade: QP ( g / L.h)
t

1 dX
-de crescimento ()
X dt

Taxas especficas -de formao de produto ( p) p

1 dP
X dt

- de consumo de substrato ( s) s
1 dS
X dt
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 Fatores de Rendimento

X
Biomassa/Substrato YX / S
S

Produto/Substrato P
YP / S
S

P
Produto/Biomassa YP / X
X

Ainda podemos dizer que:

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 Coeficiente global x verdadeiro
Na prtica, difcil determinar a quantidade
exata de substrato consumida exclusivamente
para o crescimento celular (YG) ou para a
formao de produto (YP). Logo, nos balanos
de massa, costuma-se expressar o consumo
de todo o substrato por um coeficiente global
(YX/S ou YP/S), muito mais fcil de ser
determinado experimentalmente, ao invs de
se utilizar os coeficientes de rendimento
verdadeiros (YG e YP).
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 Coeficiente global x verdadeiro
Utilizando o conceito de coeficiente de rendimento global (YX/S),
pode-se chegar seguinte equao:

.Cx
rS
YX / S

Utilizando as definies das velocidades de consumo de substrato

para o crescimento celular (rSX) e para a manuteno celular (rSm),
tem-se que:
.Cx
rSX
YG

Logo, substituindo, tem-se que:

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 Coeficiente global x verdadeiro

.Cx .Cx
ms .Cx
YX / S YG

1 1 ms

YX / S YG

Sendo ms=Cs.V

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 10.3. Modelos Cinticos do
crescimento celular
No caso do crescimento celular, considerando
que os outros nutrientes estejam em excesso no
caldo fermentativo, pode-se considerar que as
espcies envolvidas so as clulas (X) e o
substrato limitante (S). Logo, rX ser funo de Cx
e Cs, alm da temperatura. Como definido
anteriormente, a velocidade de crescimento (rX)
dada pela seguinte equao:

rX = Cx
13
 10.3.1. Curva de crescimento em
batelada
Num cultivo tpico em batelada, a variao do logaritmo
neperiano da concentrao celular (lnCx), em funo do
tempo de cultivo, apresenta as seguintes fases:
I: Fase lag
Cx=Cx0
II: Fase exponencial
mximo e constante
III: Fase de desacelerao
VI: Fase Estacionria
Cx constante
IV: fase de declnio
Cx diminui

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 Considerando-se a fase exponencial ( = max):
dCx
max Cx
dt
Integrando de xo a x t de t=0 a t ln Cx t
max
Cx0
Nesta fase, pode-se calcular o tempo de gerao
(tg) ou o tempo no qual o microrganismo duplica a
sua massa (concentrao). Substituindo Cx/Cx0 = 2
ln 2 0,693
tg
max max 15
 Modelos cinticos sem inibio
Modelo de Monod (1942) max

max
Cs
max 2
K S Cs
Ks Cs
max a velocidade especfica mxima de crescimento
celular (h-1) e KS constante de saturao (g.L-1)
Para Cs>>KS, tem-se que tende a max (max).
Para Cs < < KS, varia linearmente com Cs
Para =max/2, KS=Cs.

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 Modelos cinticos sem inibio
Modelo de Moser (1958)
Cs u
max
Ks Cs u uma cte cintica do
u

modelo.

Modelo de Contois (1959)

Cs
max KSX uma cte do modelo.
K SX .Cx Cs
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 Modelos com inibio pelo substrato
Modelo de Andrews (1968)
Cs
max
Cs 2
K S Cs
K IS

KIS: constante de inibio pelo substrato (g.L-1)

para valores elevados de Cs, o perfil da curva de em
funo de Cs para o modelo de Andrews (1968) se afasta do
perfil esperado para o modelo de Monod (1942).

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 Modelos com inibio pelo substrato
Modelo de Wu et al. (1988)

Cs
max v
Cs
K S Cs Cs

K IS

v uma constante do modelo.

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 Modelos com inibio pelo produto
Modelo de Aiba et al. (1968)

Cs K IP .Cp
max e
K S Cs

KIP a constante de inibio pelo produto (g.L-1)

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 Modelos com inibio pelo produto
Modelo de Levenspiel (1980)

n
Cs Cp
mx 1
K S Cs Cp *

Cp* valor de concentrao de produto a partir

do qual o crescimento cessa; n uma constante
cintica do modelo

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 Modelos com inibio por clulas
Modelo de Lee et al. (1983)

m
Cs Cx
mx 1
K S Cs Cx *

Cx*=Concentrao de clulas partir da qual o

crescimento inibido

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 Modelos com inibio mista
Em alguns bioprocessos pode haver a inibio
mista envolvendo substrato/produto,
substrato/clulas, produto/clulas ou at
substrato/produto/clulas.

Um exemplo tpico a fermentao alcolica em

batelada, com altas concentraes iniciais de
substrato (acares redutores), em que ocorrem
inibies pelo substrato no incio do processo e
pelo acmulo de etanol (produto) na fase final
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 Modelos com inibio mista
Modelo de Andrews (1968)/Levenspiel (1980)
n
Cs Cp
mx 1
2

Cs Cp *
K S Cs
K IS

Modelo de Andrews (1968)/Hoppe e

Hansford (1982)
Cs K IP
mx
Cs K IP Cp
2
K S Cs
K IS
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 Modelos cinticos de formao de
produtos
Assim como so propostos modelos cinticos
para descrever o crescimento celular, a
gerao de produto tambm pode ser descrita
por modelos cinticos que descrevem a
velocidade de produo (rP), adequados para
cada tipo de produto.

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 Modelos cinticos de formao de
produtos
As diferentes formas de ocorrncia de
produtos durante as fermentaes esto
ilustradas na Figura.

(a) produto associado ao crescimento, (b) produto no associado

ao crescimento e (c) produto parcialmente associado ao
crescimento.

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 Modelos cinticos de formao de
produtos
No caso de produtos associados ao crescimento,
em que a produo simultnea ao
crescimento celular, como enzimas
constitutivas, etanol, aminocidos e vitaminas,
tem-se que:
P =
e
rP = Cx

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 Modelos cinticos de formao de
produtos
No caso de produtos no associados ao
crescimento, em que a produo ocorre na fase
estacionria de crescimento celular, quando
dCx/dt = 0, como a produo de metablitos
secundrios como os antibiticos, tem-se que:

P =
e
rP = Cx

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 Modelos cinticos de formao de
produtos
H tambm os produtos parcialmente associados
ao crescimento, em que a formao de produto
ocorre quando o crescimento menor e na fase
estacionria, como as produes de cido ltico,
goma xantana e alguns metablitos secundrios.
Nesse caso, a velocidade de produo expressa
por:

P = +
e
rP = Cx + Cx
29
 10.2.2. Estequiometria dos processos
fermentativos

rx: velocidade de crescimento celular (g.L-1.h-1)

rP: velocidade de formao de produto (g.L-1.h-1)
rS: velocidade de consumo de substrato (g.L-1.h-1)

O substrato pode ser consumido para crescimento celular,

para formao de produto e para a manuteno celular

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 10.2.2. Estequiometria dos processos
fermentativos
o consumo total de substrato pode ser distribudo em trs parcelas:
rS = rSX + rSP + rSm
rSX: velocidade de consumo de substrato para a produo de
biomassa ou para o crescimento celular
rSX = rX / (YX/S)

rSP: velocidade de consumo de substrato para a formao de

produto
rSP = rP / (YP/S)

rSm: velocidade de consumo de substrato para produo de energia

de manuteno
rSm = msCx
ms: coeficiente de manuteno

31
10.2.3. Equaes de projeto

k d Cx
dCx
dt

32
10.2.3. Equaes de projeto

dCs Cx rP
mS Cx
dt YG YP

33
10.2.3. Equaes de projeto

dCp
rp k dp Cp
dt

34
 10.2.3. Equaes de projeto
O tempo de um cultivo em batelada (tb)
Cx Cx
dCx dCx
tb
Cx0

rX rd Cx0 ( k d ) Cx

Desprezando-se a morte celular, kd = 0

Cx
dCx Cx dCx
tb
Cx0 rX

Cx0 Cx

Considerando o modelo de Monod:

Cx
K S Cs
tb
Cx0 max Cs Cx
dCx
35
 10.2.3. Equaes de projeto
Tempo de cultivo em batelada, com cintica de Monod:

1 KS Cx KS Cs0
tb 1 ln ln
max Cs0 Cx0 / YX / S Cx0 Cs0 Cx0 / YX / S Cs

No processo batelada industrial, deve-se prever o tempo

inoperante do processo (ti), que inclui os tempos de
enchimento e esvaziamento da reator, bem como o tempo
de limpeza e assepsia.
O tempo total de um processo em batelada (tbt) dado por:

36
10.3. Cultivo contnuo sem reciclo de
clulas

Desvantagens

dificuldade de se manter a esterilidade por longos

perodos
maior probabilidade de ocorrncia de mutaes
genticas, podendo levar a diminuio da produo

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 10.3. Cultivo contnuo sem reciclo de
clulas
uma corrente de entrada contendo substrato
(Cs0) isenta de clulas (Cx0 = 0) e de produto
(Cp0 = 0) alimentada ao tanque que contm
um dado volume de caldo (V) e uma corrente
contendo clulas (Cx), produto gerado (Cp) e
substrato no consumido (Cs) retirada do
biorreator com vazo volumtrica de sada
igual de entrada

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10.3. Cultivo contnuo sem reciclo de
clulas

: vazo volumtrica de entrada (L/h)

V
Cs0: concentrao de substrato na entrada
(g/L)
V : vazo volumtrica de sada (L/h)
0
V: volume do biorreator (L)
Cs: concentrao de substrato na corrente
de sada (g/L)
Cx: concentrao celular na corrente de
sada (g/L)
Cp: concentrao de produto na corrente
de sada (g/L)

39
 10.3.1. Equaes de projeto
Para as clulas
k d Cx D Cx
dCx
dt

A constante D definida como taxa de

diluio ou vazo especfica de diluio
(Tempo-1): V
D
V
40
 10.3.1. Equaes de projeto
Desconsiderando a morte celular (regime
transiente)

D Cx
dCx
dt

D > , dCx/dt < 0: teremos uma diminuio da

concentrao celular com o tempo, at o total arraste
de clulas do biorreator. A partir desse instante, como
no h mais clulas, no h mais cultivo.

41
 10.3.1. Equaes de projeto
Para o substrato
dCs Cx rP

D (Cs0 Cs) mS Cx
dt YG YP

Quando se conhece apenas o coeficiente de

rendimento de substrato em clulas (YX/S),
dCs Cx
D (Cs0 Cs)
dt YX / S

42
 10.3.1. Equaes de projeto
Para o produto
dCp
rp k dp Cp D Cp
dt

Considerando estado estacionrio:

dCs/dt = dCx/dt = dCp/dt = 0

D kd

43
 10.3.1. Equaes de projeto
Considerando estado estacionrio:
dCs/dt = dCx/dt = dCp/dt = 0

D kd
Cx
D (Cs0 Cs)
YX / S

D Cp rp kdp Cp

44
 10.3.1. Equaes de projeto
Considerere o cultivo contnuo sem morte
celular k d =0, operado no estado estacionrio

A velocidade especfica de crescimento

controlada pelas condies de alimentao

45
 10.3.1. Equaes de projeto
O tempo de residncia relacionado ao cultivo
contnuo sem reciclo (tC) dado pelo inverso da
vazo especfica de diluio (D)
1 1 V
tc
D V

D pequeno tc elevado Cs ~ 0 ~ 0
D alta tc baixo Cs ~ Cs condio de
0

mximo crescimento celular ( (Cs ) )

0
 10.3.1. Equaes de projeto
Considerando-se a cintica de Monod
Cs0
D max max
K S Cs0
KS D
Cs
max D
KS D
Cp YP / S Cs0
max D
Expressar a produtividade em clulas (PX = rX)
KS D

PX D Cx D YX / S Cs0
max D
 10.3.1. Equaes de projeto
Considerando a equao de balano, no
estado estacionrio, com D = , e
obedecendo a cintica de Monod:

Cx YX / S (Cs0 Cs)
ou

KS D
Cx YX / S Cs0
max D

48
 10.3.1. Equaes de projeto
Considerando um produto associado ao
crescimento, em que rP=Cx e
desprezando-se sua degradao

Cp Cx

Cp YX / S (Cs0 Cs)

49
 10.3.1. Equaes de projeto
Nesse caso YX / S YP / S e , logo: YP / X
Cp YP / S (Cs0 Cs)
Ou
KS D
Cp YP / S Cs0
max D

A produtividade em clulas ser:

KS D
PX D Cx D YX / S Cs0
max D
50
 10.3.1. Equaes de projeto

A partir deste ponto ocorre o arraste de clulas

(wash out). Pequenas mudanas em D geram
grandes mudanas em Cx e Cs
 10.3.1. Equaes de projeto
A produtividade em clulas mxima
(PXmax=rXmax) pode ser calculada como sendo o
ponto de mximo da funo Px = f(D)
d( Px ) d( D.Cx )
= =0
quando D = D(rXmax )
dD dD

KS D
Como PX D Cx D YX / S Cs0

e
max D

KS
D(rXmax ) max 1

KS Cs0
 10.4. Converses
Converso do substrato limitante (XS) em
biorreatores em batelada ou de mistura, num
dado instante do cultivo

Cs0 Cs (t )
X S (t )
Cs0

53
EXERCCIOS!

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