A levedura P.

pastoris apresenta duas caractersticas que a tornam uma

atraente hospedeira para a produo de protenas heterlogas. A primeira,
o forte promotor usado para transcrever genes heterlogos, o qual
derivado do gene da lcool oxidase (AOX1) de P. pastoris. Esse promotor
regulado transcricionalmente por metanol, um indutor relativamente barato
Em clulas expostas a metanol como nica fonte de carbono, o incio da
transcrio no promotor AOX1 altamente eficiente

o promotor AOX1 firmemente regulado e reprimido sob condies de

crescimento sem metano

Para ser ativado, o promotor AOX1 requer a presena de metanol e, na

ausncia desse indutor, ele se torna reprimido. Alm de metanol, o sistema
AOX1 necessita da ausncia de glicose para ser plenamente ativado.

A segunda caracterstica importante de P. pastoris que esta levedura no

considerada uma forte fermentadora, como S. cerevisiae. A fermentao
realizada por leveduras gera etanol, o qual, em culturas de alta densidade,
pode rapidamente atingir nveis txicos

Os vetores de expresso em P. pastoris so geralmente do tipo integrativo.

Esses vetores possuem um cassete de expresso formado pelo promotor e
pela regio terminadora de transcrio do gene AOX1 alm de uma marca
de seleo, sendo a mais utilizada o gene histidinol desidrogenase (HIS4) de
P. pastoris.

Um dos vetores mais utilizados o plasmdio pPIC9 (Figura 1) desenvolvido

e patenteado pela empresa Invitrogen. O gene de interesse clonado na
regio do cassete de expresso em um dos stios de clonagem que se
localizam logo aps o sinal de secreo, nesse caso, o peptdeo sinal do
fator de S. cerevisiae. O cassete de expresso liberado pela digesto do
plasmdio com a enzima de restrio BglII, e uma cepa his4 de P. pastoris
transformada por eletroporao

aconselhvel que a seleo de clones prototrficos que expressam a

protena de interesse deva ser iniciada pela deteco imunolgica do
mesmo. Essa etapa permite selecionar clones expressando a prote- na
heterloga

A levedura P. pastoris ganhou grande aceitao com organismo hospedeiro

para a produo de protenas heterlogas de interesse farmacolgico. Entre
essas prote- nas, destacam-se: a albumina srica humana - que j esta em
testes clnicos para seu uso como produto de substituio de plasma -, e o
antgeno de superfcie da hepatite B - que foi aprovado para se fazer uma
vacina contra esse vrus