ABTS

Atividade
DPPH antioxidante ORAC

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outros
Ing. Rafael S. Vela Paredes
 Objetivos

 Conhecer o fundamento físico da espectroscopia de absorção

UV-vis.

 Definir as magnitudes absorbância e transmitância como

fundamento das aplicações qualitativas e quantitativas deste
método analítico.

 Descrever os elementos fundamentais e o funcionamento do

Espectrofotômetro UV-Vis 1800.
Espectro eletromagnético
Cor por Transmissão
Nos permite fazer o estudo qualitativo ou quantitativo da
absorção da radiação UV-Vis para os diferentes cumprimentos
de ondas nessa zona do espectro eletromagnético.
 Esquema de funcionamento do UV-Vis
Fonte Visível
Monocromador (Lâmpada Halogêneo)
(Prisma/Rede de difração)

Espelho 1

Fonte Ultra Violeta

(Lâmpada deutério)

Celda para leitura Lente

Espelho 3 Amplificador

I
Detector

Espelho 2
 Esquema de funcionamento do UV-Vis
Fonte Visível
Monocromador (Lâmpada Halogêneo)
(Prisma/Rede de difração)

Espelho 1

Fonte Ultra Violeta

(Lâmpada deutério)

Celda de Referência Lente

(Branco)
Espelho 3 Amplificador

I0
Detector
Espelho
Semitransparente Lente
Celda amostra
Espelho 2
Amplificador

Espelho 4
I
Detector
 Numa solução

Maior
Concentração
(C)
Maior Absorção
Maior Caminho (Abs)
ótico (l)

Para uma solução, quanto maior seja a concentração e o

caminho ótico, maior será a Absorção.
 Lei de Lambert-Beer

Transmitância

T= I/Io = 10- ε c l
Absorbância

A= log(1/T)

Onde: A= log (Io/I) = ε c l

Io = Intensidade de luz incidente
I = Intensidade de luz Transmitida Lambert-beer
ε = Coeficiente de extinção molar
c = Concentração
l = Caminho ótico
A= ε c l
Análise qualitativa por espectrofotometria
UV-Vis

Espectro de Absorção
de uma substância

A = 0 T = 1 100% transmissão
A = 0,9 T = 0,1 10% transmissão
90% absorção
Absorbância Transmitância
Análise qualitativa por espectrofotometria
UV-Vis
Espectro de Absorção
de uma substância

Absorbância

A Zona mínima de absorção é a

correspondente ao verde-Amarelo.
Absorbância Transmitância Nesta zona será a maior transmissão
porém será a cor observada.
Espectro de Absorção do Betacaroteno
Determinadas estruturas (sistemas conjugados
ou grupos funcionais) possuem bandas de
absorção características.
Análise quantitativa por espectrofotometria
UV-Vis
Absorbância

Y = a + bx
r2

Concentração

Pode-se determinar a concentração de uma solução a partir do

valor de sua absorbância e a curva de calibração obtida a partir
da diluição de um padrão com concentração conhecida.
 ABTS

Atividade
DPPH antioxidante ORAC

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Fim da primeira parte...
Programação do
 Barra de ferramentas UV-1800

Abrir Pasta Photometric

Spectrum Method
Opção spectrum

Spectrum
Opção spectrum
Opção spectrum
Opção spectrum
Opção spectrum
Opção spectrum
Opção spectrum
Opção Photometric

Photometric
Opção Photometric
Opção Photometric
Opção Photometric
Opção Photometric
Opção Photometric
Opção Photometric
Opção Photometric
 Sintetizando

 As soluções podem Absorver com distinta intensidade a

radiação UV-Vis segundo o comprimento de onda.

 A forma do espectro (Gráfico Abs vs λ) está relacionada com

a estrutura molecular dos solutos.

 A relação entre a absorbância de um determinado

comprimento de onda (Abs máxima), permite mediante a lei
de Lambert-Beer, determinar a concentração de uma
substância na solução.