Preparo de Meios

 Ágar Baird-Parker;
Composição:
Digestão pancreática de caseína 10,0 g

Extrato de levedura 1,0 g
Extrato de carne 5,0 g
Piruvato se sódio 10,0 g
L-glicina 12,0 g
Cloreto de lítio 5,0 g
Ágar 12 a 22 g
Água deionizada 1000 mL
Preparação:
 A D I C I O N AR OS I N G R E D I E NT E S OU O M E I O C OM P L E T AM E NT E DE S I DR AT AD O
EM Á GU A E D I S S O LV E R S OB AQ UE CI M E NT O (seguir as instruções do
fabricante);
 A J U S T AR O P H S E N E CE S S ÁR I O P AR A QUE , AP ÓS A E S T E RI L I Z AÇ Ã O ,
E S T E J A 7,2.±.0,2 a 25°C;
 Distribuir volumes de 400 mL ou 200 mL em frascos;
 Utilizar frascos com capacidade superior a 500 ml. Esterilizar em autoclave a 121
°C ± 3°C por 15 minutos;
 Caso o meio não seja utilizado imediatamente após a sua confecção, o mesmo
deve ser armazenado, sob refrigeração, a 5 ± 3 °C;
 Para usar o meio, deve-se fundi-lo para se tornar líquido novamente e manter a
45°C ± 1 °C usando estufa;
Preparaçãoplaca deÁgar Baird-Parker:
 Deve-se adicionar assepticamente 50mL da emulsão de ovo e 10 mL da solução

de telurito de potássio 1,0 %para cada litro de meio;
 Verter aproximadamente 15 mL do ágar em placas de petri estéreis e deixar
solidificar, caso não sejam usadas imediatamente, as placas devem ser
armazenadas a 5 ºC ± 2 ºC, protegidas da luz, por até 1 mês;
 Caldo cérebro-coração (BHI);
Composição:
Digestão enzimática de tecido animal 10,0 g

Infusão de cérebro de bezerro desidratada 12,5 g
Infusão de coração de bovino 5,0 g
Glicose 2,0 g
Cloreto sódio 5,0 g
Fosfato de hidrogênio dissódico anidro (Na2HPO4) 2,5 g 1/19
Folha
Rua Doutor Lourival Sotto Maior, nº 100 – Quintas daAvenida
CEP 36046-578 - Juiz de Fora – MG
Site:www.gtaalimentos.com.br
Contato:atendimentos@gtaalimentos.com.br
Tel: (32) 3223 -0705
Preparação:
 A D I C I O N AR OS I N G R E D I E NT E S OU O M E I O C OM P LE T AM E NT E DE S I DR AT AD O
EM ÁGUA E D I S S O LV E R S OB AQ UE CI M E NT O (seguindo as instruções do
fabricante);
 A J U S T E O P H S E F O R N E CE S S ÁR I O P AR A Q UE AP Ó S A E S T E R I LI Z AÇ Ã O 7,24
± 0,2 em 25ºC;
 Transferir o meio de cultura de 5mL a 10mL para tubos de ensaio e então levar a
autoclave a 121ºC por 15 minutos.
 Plasma de coelho com EDTA;

 Utilizar plasma desidratado de coelho disponível comercialmente seguindo as
instruções do fabricante.
 Solução salina peptonada 0,1%;

Composição:
Cloreto de sódio 8,5 g

Peptona 1,0 g
Preparação:
 Dissolver os componentes em água, sob aquecimento;
 Transferir 225 mL para recipiente adequado;
 Se necessário, ajustar o pH para que atinja 7,2 ± 0,2 em 25ºC;
 Autoclavar a 121ºC por 15 minutos.
OBS: Todos os reagentes preparados devem ser registrados no formulário FORM-LAB-MB-

4.A.01 (Controle de Preparo de Reagentes).
 Ágar Coliforme Cromogênico (CCA):
Composição:
Enzymaticdigestofcasein 1,0 g
Yeastextract 2,0 g
Sodiumchloride 5,0 g
Sodiumdihydrogenphosphate, 2H2O 2,2 g 2/19
Folha
Tel: (32) 3223 -0705
Disodiumhydrogenphosphate 2,7 g
Sodiumpyruvate 1,0 g
Sorbitol 1,0 g
Tryptophane 1,0 g
Tergitol-7 0,15 g
6-chloro-3-indoxyl β-D-galactopyranoside 0,2 g
5-bromo-4-chloro-3-indoxyl- β-D-glucuronicacid 0,1 g
cyclohexamineammoniumsalt, monohydrate
IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) 0,1 g
Agar 9- 18 g
Preparação:
 A D I C I O N AR OS I N G R E D I E NT E S OU O M E I O C OM P L E T AM E NT E DE S I DR AT AD O
EM Á GU A E D I S S O LV E R S OB AQ UE CI M E NT O (seguir as instruções do
fabricante);
 Se necessário ajustar o pH para que atinja 6,8 ±0,2 em 25ºC e ferver o meio com
agitação;
 Não autoclavar, não superaquecer;
 Verter o ágar em placas de petri estéreis e deixar solidificar, caso não sejam
usadas imediatamente, as placas devem ser armazenadas a 5ºC ±2 ºC,
protegidas da luz, por até 1 mês;
 Antes do uso, as placas devem estar secas.
 Reagente Oxidase ou Bactident®-oxidase:
Composição:
N,N-dimethyl-p-phenyldiamine-2-HCL 0,1 g
Água 10 mL
OBS: Este reagente não é estável. Deve ser preparado em pequenas porções cada vez que
for necessário e mantido ao abrigo de luz.
 Agar TSA (Tryptone Soy Agar):
Composição:
Tryptone 15,0 g
Soyapeptone 5,0 g
Sodiumchloride 5,0 g
Agar 15 – 25,0 g
Folha 3/19
Tel: (32) 3223 -0705
Preparação:
 Dissolver a base desidratada em água (seguindo as instruções do fabricante);
 Se necessário ajustar o pH para que atinja 7,2 ±0,2 em 25ºC;
 Verter o ágar em placas de petri estéreis e deixar solidificar, caso não sejam
usadas imediatamente, as placas devem ser armazenadas a 5ºC ± 2 ºC,
protegidas da luz, por até 1 mês;
 Antes do uso, as placas devem estar secas.
OBS:Todos os reagentes preparados devem ser registrados no formulário FORM-LAB-MB-

4.A.01 (Controle de Preparo de Reagentes).
3.3 – REAGENTES E SOLUÇÕES NECESSÁRIOS:

 Água peptonada tamponada;
Composição:
Digestão enzimática de caseína 10,0g
Cloreto de sódio 5,0g
Hidrogenofosfatodissódicododecahidratado(Na2HPO412H2O) 9,0g
Fosfato monopotássico(KH2PO4) 1,5g
Preparação:
 Autoclavar a 121ºC por 15 minutos.
Meio Rappaport-Vassiliadis com soja (caldo RVS).
Composição:
Digestão enzimática de soja 5,0g
Cloreto de sódio 8,0g
Fosfato monopotássico(KH2PO4) 1,4g
Fosfato dipotássico(K2HPO4) 0,2g
Água deionizada 1.000mL
Preparação:
 Adicionar os ingredientes ou o meio completamente desidratado em
água e dissolver sob aquecimento (seguindo as instruções do fabricante);
 Ajuste o pH se for necessário para que após a esterilização 7,24 ± 0,2
em 25ºC;
Folha 4/19
Tel: (32) 3223 -0705
 Transferir o meio de cultura de 10mL para tubos de ensaio e então levar a
autoclave a 121ºCpor 15 minutos.
 Caldo Muller-Kauffmann tetrationato/novobiocina (MKTTn);
Composição:
Extrato de carne 4,3g
Digestão enzimática de caseína 8,6g
Cloreto de sódio (NaCl) 2,6g
Carbonato de cálcio (CaCO3) 38,7g
Tiossulfato de sódio penta-hidratado (Na2S2O3.5H2O) 47,8g
Bile bovina para uso bacteriológico 4,78g
Verde brilhante 9,6mg
Água deionizada 1000mL
Preparação:
água e dissolver sob aquecimento (seguindo as instruções do fabricante);
 Ajuste o pH se for necessário para que após a esterilização 8,2 ± 0,2
em 25ºC;
 Solução de iodo-iodeto;
Composição:
Iodo 20g
Iodeto de potássio (KI) 25g
Preparação:
 Dissolver completamente o iodeto de potássio em 10 mL de água, e então
adicionar o iodo e diluir até completar100 mL com água estéril;
 Não aquecer;
 Armazenar a solução em frasco âmbar em temperatura ambiente num recipiente
fechado, por até 1 ano.
 Solução de Novobiocina;
Composição
Folha 5/19
Tel: (32) 3223 -0705
Sal de novobiocina de sódio 0,04g
Água 5mL
Preparação:
 Dissolver o sal de novobiocina de sódio em água e esterilizar por filtração;
 Armazenar em pequenas porções (5mL) por até 1 ano a 20°C;
Preparação do meio completo:
Composição:
Meio Base 1.000mL
Solução Iodo-Iodeto 20mL
Solução Novobiocina 5mL
Preparação:
 Adicionar assepticamente 5 mL da solução de novobiocina (B.3.3) para 1.000mL

de meio base. Misturar, em seguida adicione 20 mL da solução de iodeto- iodo
(B.3.2). Misturar bem;
 Transferir o meio de cultura de 10 mL para tubos de ensaio e então levar a
 Ágar Xilose Lisina Desoxicolato (Ágar XLD);
Composição:
Extrato de levedura em pó 3,0g
Xilose 3,75g
Lactose 7,5g
Sacarose 7,5g
Hidrocloreto de L-Lisina 5,0g
Tiossulfato de sódio 6,8g
Citrato amônio de Ferro III 0,8g
Vermelho de fenol 0,08g
Desoxicolato de sódio 1,0g
Ágar 9 a 18g
Preparação:
um frasco com água e dissolver sob aquecimento (seguir as 6/19
Folha instruções
do fabricante);
Tel: (32) 3223 -0705
 Evitar o superaquecimento;
 Ajustar o pH, se necessário a 7,4 ± 0,2 a 25°C;
 Não sobre aquecer.
Preparação das placas de Agar XLD:
 Verter aproximadamente 15 mLdo ágar em placas de petri estéreis com uma

divisão e deixar solidificar, caso não sejam usadas imediatamente, as placas
devem ser armazenadas a 3ºC ± 2ºC, protegidas da luz, por até 1 mês;
 Ágar verde brilhante/ vermelho fenol ágar (BPLS):
Composição:
Meat extract powder 5,0 g
Peptone 10,0 g
Yeast extract 3,0 g
Disodium hydrogen phosphaté 1,0 g
Sodium dihydrogen phosphaté 0,6 g
Lactose 1,0 g
Sucrose 10,0 g
Phenol red 10,0 g
Brilliant green 0,8 g
Ágar 0,0125
13,0 g
Preparação:
um frasco com água e dissolver sob aquecimento (seguir as instruções
do fabricante);
 Evitar o superaquecimento;
 Ajustar o pH, se necessário a 7,4 ± 0,2 a 25°C;
 Não sobreaquecer.
Preparação das placas de Agar BPLS:
 Verter aproximadamente 15 mLdo ágar em placas de petri estéreis com uma

divisão e deixar solidificar, caso não sejam usadas imediatamente, as placas
devem ser armazenadas a 3ºC ± 2 ºC, protegidas da luz, por até 1 mês;
 Ágar nutriente;
Composição:
Extrato de carne 3,0g
Peptona 5,0g 7/19
Folha
Tel: (32) 3223 -0705
Ágar 9 -18 g
Preparação:
água e dissolver sob aquecimento (seguir as instruções do fabricante);
 Ajustar o pH, se necessário, de modo que após a esterilização, esteja 7,0 ± 0,2 a
25°C;
 Distribuir volumes 200 mL em frascos, esterilizar em autoclave a 121 °C ± 3°C
por 15 minutos;
deve ser armazenado, sob refrigeração, a 5 ± 3 °C;
45°C ± 1°C usando estufa;
Preparação de placas de ágar nutriente;
 Verter aproximadamente 15 mLdo ágar em placas de petri estéreis e deixar

solidificar, caso não sejam usadas imediatamente, as placas devem ser
armazenadas a 5ºC ± 2ºC, por até 1 mês;
 Agar açúcar/ferro triplo (Agar TSI):
Composição:
Extrato de carne 3g
Extrato de levedura 3g
Peptona 20g
Cloreto de sódio (NaCl) 5g
Lactose 10g
Sacarose 10g
Glicose 1g
Citrato de Ferro III 0,3g
Tiossulfato de sódio 0,3g
Vermelho de fenol 0,024g
Ágar 9 -18g
Água 1.000mL
Preparação:
 Ajustar o pH, se necessário, de modo que após a esterilização, esteja 7,4 ± 0,2 a
25°C;
 Transferir 10 mL para tubos de ensaio e então levar a autoclave a 121ºC por 15
minutos. Folha 8/19
Tel: (32) 3223 -0705
 Deixar solidificar em posição inclinada;
 Armazenara 5ºC ± 2ºC, por até um mês.
 Ágar Uréia (Christensen);

Composição:
Peptona 1g
Glicose 1g
Fosfato dihidrogenado de potássio (KH2PO4) 2g
Vermelho de fenol 0, 012 g
Ágar 9 – 18 g
Preparação:
 Ajustar o pH se necessário para que, após a esterilização, esteja
6,8.±.0,2 a 25°C;
 Esterilizar em autoclave a 121°C ± 3°C por 15 minutos;
deve ser armazenado, sob refrigeração, a 5 ± 3°C, por até 3 meses;
45°C ± 1°C usando estufa;
 Solução de uréia:
Composição:
Uréia 400g
Preparação:
 Dissolver a uréia em água e esterilizar por filtração
Preparação completa do ágar uréia (Christensen):

Composição:
Base 950 mL
Solução de uréia 50 L
 Adicionar assepticamente a solução de uréia ao meio base previamente fundido;

 Distribuir 10 mL em tubos previamente esterilizados
 Deixar solidificar em posição inclinada;
 Armazenar a 5ºC ± 2ºC, por até um mês. Folha 9/19
Tel: (32) 3223 -0705
 Meiodescarboxilação L-Lisina:
Composição:
Monohidrocloreto de L-Lisina 5g
Glicose 1g
Vermelho de bromocresol 0,015g
Preparação:
 Ajustar o pH se necessário para que, após a esterilização, esteja
6,8.±.0,2 a 25°C;
 Transferir de 2mL a 5mL para tubos e então esterilizar por 15 min. em autoclave
a 121°C.
 Tolueno;
Disponível comercialmente
 Reagente de β-galactosidase;
É necessário:
Solução tampão:
Composição:
Fosfato monossódico (NaH2PO4) 6,9g
Hidróxido de sódio, solução 10mol/L Aproximadamente 3 mL
Água para um volume final de 50mL
Preparação:
 Dissolver o Fosfato monossódico emaproximadamente 45 mL de em um balão
volumétrico.
 Ajustar o pH para 7,0±0,2 a 25 ºC, com a solução de hidróxido de sódio.
 A soluçãodeve ser armazenada a 5ºC por até 6 meses.
Solução ONPG:
Composição:
o-Nitrofenil β-D-galactopiranosídeo (ONPG) 0,08g
Preparação:
 Dissolver o ONPG em água a aproximadamente 50°C; Folha 10/19
Tel: (32) 3223 -0705
 Resfriar a solução.
Preparação completa do Reagente de β-galactosidase:
Composição:
Solução tampão 5mL
Solução ONPG 15mL
Preparação:
 Adicionar a solução tampão à solução ONPG.
 Armazenar a solução a 5 °C por até 3 meses. Descartar caso ocorrer a mudança
de cor para amarelo.
 Reagentes para reação Indol;

Meio triptona/triptofano
Composição:
Triptona 10g
DL-triptofano 1g
Preparo:
 Dissolver os componentes em água em ebulição;
 Ajustar o pH, se necessário, de modo que, após a esterilização, esteja 7,5 ± 0,2 a
25°C;
 Dispensar 5mL do meio em tubos e então esterilizar por 15 min em autoclave a
121°C.
 Armazenar os tubos a 5 °C por até 5 meses.
 Reagente de Kovacs;
Utilizar reagente disponível comercialmente.
Composição:
4-Dimetilaminobenzaldeído 5g
Ácido clorídrico, D=1,18g/mL a 1,19 g/mL 25mL
2-Metil-2-butanol 75mL
 Solução salina;
Composição:
Água 1.000mL
Folha 11/19
Tel: (32) 3223 -0705
Preparação:
 Dissolver o Cloreto de sódio em água;
 Ajustar o pH, se necessário, de modo que, após a esterilização, esteja 7,0 ± 0,2 a
25°C;
 Dispensar 100 mLda solução em frascos;
 Esterilizar por 15 min. em autoclave a em 121°C;
 Devem-seesterilizar tubos vazios, para ser dispensada a porção de solução salina
necessária para o teste;Antissoro
 Antissoro;
Disponíveis comercialmente
 Antissoro “O”
 Antissoro1 “Vi”
 Antissoro “H”
3.3.1 – MEIO DE ENRIQUECIMENTO PRIMÁRIO SELETIVO: CALDO FRASER
50%:
3.3.1.1 – Base:
Composição:
Peptona de Carne (Digestão peptídica de tecido animal) 5g

Triptona (Digestão peptídica de caseína) 5g
Extrato de carne 5g
Cloreto de sódio 20 g
Hidrogenofosfato dissódico dihidratado 12 g
Dihidrogeno fosfato de potássio 1,35 g
Aesculin 1g
Água 1000
ml
Preparação: dissolver os componentes da base ou o meio desidratado em água

sobre aquecimento, se necessário. Ajustar o pH para 7,2 ± 0,2.
Dispor 225 mL da base em frascos de capacidade adequada e esterilizar por 15
minutos em autoclave a 121 °C.
NOTA: O cloreto de lítio e a solução de ácido nalidíxico podem ser adicionados à

base antes de ser autoclavada.
3.3.1.2 –SOLUÇÃO DE CLORETO DE LÍTIO:

Composição:
Cloreto de Lítio 3g
Água 10 ml
Folha 12/19
Preparo: adicionar o cloreto de lítio à água. Esterilizar por filtração.
Tel: (32) 3223 -0705
3.3.1.3 – SOLUÇÃO DE ÁCIDO NALIDÍXICO:
Composição:
Sal de Sódio Ácido Nalidíxico 0,1 g

Hidróxido de Sódio 0,05 mol/l 10 ml
Preparo: dissolver o sal de ácido nalidíxico em hidróxido de sódio. Esterilizar por

filtração.
3.3.1.4 – SOLUÇÃO DE HIDROCLORETO DEACRIFLAVINA:
Composição:
Hidrocloreto de Acriflavina 0,25 g
Água 100 ml
Preparo: dissolver o hidrocloreto de acriflavina em água. Esterilizar por filtração.
3.3.1.4 – SOLUÇÃO DE CITRATO DE AMÔNIO FERRO III:

Composição:
Citrato de Amônio Ferro III 5g
Água 100 ml
Preparo: dissolver o citrato de amônio ferro III em água. Esterilizar por filtração.
3.3.1.5 – MEIO COMPLETO:

Composição:
Base 100 ml
Cloreto de Lítio 1ml
Solução de Ácido Nalidíxico 0,1 ml
Hidrocloreto de Acriflavina 0,5 ml
Citrato de Amônio Ferro III 1ml
Preparo: imediatamente antes do uso, adicionar o hidrocloreto de acriflavina e o

citrato de amônio ferro III a 100 ml da base.
3.3.2 – MEIO DE ENRIQUECIMENTO SECUNDÁRIO SELETIVO: CALDO

FRASER:
3.3.2.1 –BASE:
Composição:
Peptona de Carne (Digestão peptídica de tecido animal) 5g

Folha 13/19
Triptona (Digestão peptídica de caseína) 5g
Tel: (32) 3223 -0705
Extrato de carne 5g
Folha 14/19
Tel: (32) 3223 -0705
Cloreto de sódio 20 g
Hidrogenofosfato dissódico dihidratado 12 g
Dihidrogeno fosfato de potássio 1,35 g
Aesculin 1g
Cloreto de Lítio 3g
Água 1000 ml
Preparo: dissolver os componentes da base ou o meio desidratado em água sob

aquecimento, se necessário. Ajustar o pH para 7,2 ± 0,2.
Dispor a base em tubos de capacidade adequada e esterilizar por 15 minutos em
autoclave a 121°C.
NOTA: O cloreto de lítio e a solução de ácido nalidíxico podem ser adicionados a

base antes de ser autoclavada.
3.3.2.2 – SOLUÇÃO DE HIDROCLORETO DE ACRIFLAVINA:

Composição:

Água 100 ml
Preparo: dissolver o hidrocloreto de acriflavina em água. Esterilizar por filtração.
3.3.2.3 – SOLUÇÃO DE CITRATO DE AMÔNIO FERRO III:

3.3.2.4 Composição:
Citrato de Amônio Ferro III 5g

Água 100 ml
Preparo: dissolver o Citrato de Amônio Ferro III em água. Esterilizar por filtração.

Preparo: imediatamente antes do uso, para cada tubo 10 mL de base, adicionar as
0,1 ml da solução de acriflavina e 0,1 mL da solução de citrato de Amônio Ferro III.
Misturar vagarosamente.
3.3.2.5 – NOTA:
Meios de Cultura vendido prontos como o da Acumedia e o da Merck que possuem
Folha 15/19
a mesma formulação, precisam somente do suplemento para caldo fraser contendo:
Tel: (32) 3223 -0705
20mg/L de Ácido nalidíxico,25mg/L de Acriflavina HCL e 0,5g/L de Citrato férrico
amoniacal.
3.3.3 – PRIMEIRO MEIO DE PLAQUEAMENTO SELETIVO: ALOA:

3.3.3.1 – ÁGAR BASE:
Composição:
Digestão Enzimática de Tecidos Animais 18 g

Digestão Enzimática de Caseína 6g
Extrato de Levedura 10 g
Piruvato de Sódio 2g
Glicose 2g
Glicerol fosfato de Magnésio 1g
Sulfato de Magnésio Anidro 0,5 g
Cloreto de Sódio 5g
Cloreto de Lítio 10 g
Hidrogenofosfato de Sódio (anidro) 2,5 g
5-Bromo-4-cloro-3-indol-β-D- 0,05 g
glicopiranosídio
Ágar 12 ou
18 g
Água 930a
ml
925 ml se a solução de Anfotericina B for usada.
Preparo: dissolver os componentes o meio desidratado em água em ebulição.

Esterilizar por 15 minutos em autoclave a 121°C. Ajustar o ph para 7,2 ± 0,2.
3.3.3.2 – SOLUÇÃO DE ÁCIDO NALIDÍXICO:

3.3.3.3 Composição:
Hidróxido de Sódio (0,05 mols/l) 5 ml
Preparo: dissolver o ácido nalidíxico em 5 ml da solução de hidróxido de sódio.

Esterilizar por filtração.
3.3.3.4 – SOLUÇÃO DECEFTAZIDIME:
Composição:
Ceftazidime 0,2 g
Água 5 ml
Preparo: dissolver a ceftazidime de sódio penta - hidratada. Esterilizar por filtração.

Folha 16/19
Tel: (32) 3223 -0705
3.3.3.5 – SOLUÇÃO DE SULFATO DE POLIMIXINAB:
Composição:
Sulfato de Polimixina B 76 700 IU
Água 5 ml
Preparo: dissolver o sulfato de polimixina em água. Esterilizar por filtração em

membrana de 0,45 µm.
3.3.3.6 – SUPLEMENTO ANTIBIÓTICO:
3.3.3.6.1 – SOLUÇÃO DE CICLOHEXIMIDA:

3.3.3.6.2 Composição:
Cicloheximida 0,05 g
Etanol 2,5 ml
Água 2,5 ml
Preparo: dissolver a Cicloheximida em etanol e depois adicionar a água. Filtrar em

3.3.3.6.3 – SOLUÇÃO ANFOTERICINA B (alternativo a solução de

cicloheximida):
Composição:
Anfotericina B 0,01 g
HCl (1 mol/L) 2,5 ml
Dimetil formaldeído (DMF) 7,5 ml
Preparo: dissolver a Anfotericina B na solução DMF/HCl. Esterilizar por filtração em

3.3.3.6.4 – SUPLEMENTO:
Dissolver 2g de L-α-fosfatildilinositol (Sigma P 6636) em 50 ml de água gelada.
Mexer por 30 minutos até obter uma suspensão homogênea. Autoclavar a 121 °C
por 15 minutos e esfriar para 48°C a50°C.
3.3.3.6.5 – MEIOCOMPLETO:
Composição:
Meio Base 930 ml a

Solução de Ácido Nalidíxico 5 ml
Solução de Ceftazidime Folha 17/19
5 ml
Tel: (32) 3223 -0705
Solução de Polimixina B 5 ml
Solução de Ciclohexamida ou Solução Anfotericina 10 ml
Suplemento 50ml
925 ml se for usada a Solução de Anfotericina B.
Preparo: adicionar as soluções à base fundida a aproximadamente 50 °C, misturar

entre a adição de cada componente.
Dispensar em um dos lados de uma placa de petri com uma divisão.
3.3.4 – SEGUNDO MEIO DE PLAQUEAMENTO SELETIVO:
3.3.4.1 ÁGAR OXFORD:
3.3.4.1.1 – ÁGAR BASE:

Composição:
Ágar Columbia * 39 g
Aesculin 1g
Citrato de Amônio Ferro III 0,5 g
Água 1000 ml
*Peptona Proteose 23 g
Amido 1g
Agar 9 a 18*g
* dependendo da força de gelificação do ágar
Preparo: dissolver os componentes da base ou o meio desidratado em água em

ebulição. Ajustar o pH para 7,2 ± 0,2.
Dispor a base em frascos de capacidade adequada (3.4.1) e esterilizar por 15
minutos em autoclave a 121 °C.
3.3.4.1.2 – SUPLEMENTO PARA 1000 ML DE MEIO:

Composição:
Cicloheximida 400 mg
Sulfato de Colistina 20 mg
Hidrocloreto de Acriflavina 5 mg
Cefotetano 2 mg
Fosfomicina 10 mg
Etanol 5 ml
Água 5 ml
Preparo: dissolver os componentes ou o meio desidratado em mistura de água e

Folha 18/19
etanol. Esterilizar por filtração.
Tel: (32) 3223 -0705
3.3.4.1.3 – MEIO COMPLETO:
Esfriar a base (saiu da autoclave) para 47°C e adicionar assepticamente o
suplemento. Verter cerca de 15 ml do meio em placa de petri estéril, esperar que
solidifique. Estocar as placas ao abrigo de luz.
3.3.4.2 – ÁGARPALCAM:
3.3.4.2.1 – ÁGARBASE:
Composição:
Peptona 23 g
Amido 1g
Extrato de Levedura 3g
Ágar 9 a 18 g
D-glicose 0,5 g
D-manitol 10 g
Aesculin 0,8 g
Citrato de Amônio Ferro III 0,5 g
Vermelho de Fenol 0,08 g
Água 960 ml
* Dependendo da força de gelificação do ágar
Preparo: dissolver os componentes da base ou o ágar desidratado em água sobre
fervura. Ajustar o pH para 7,2 ± 0,2 a 25°C. Esterilizar em autoclave a 121 °C por 15
minutos.
3.3.4.2.2 – SOLUÇÃO DE SULFATO DE POLIMIXINA B:
Composição:
Sulfato de Polimixina B (100000 IU) 0,1 g

Água 100 ml
Preparo: dissolver o sulfato de polimixina em água. Esterilizar por filtração.
3.3.4.2.3 – SOLUÇÃO DE HIDROCLORETO DE ACRIFLAVINA:
Composição:

Água 100 ml
Preparo: dissolver o hidrocloreto de acriflavina. Esterilizar por filtração.
Folha 19/19
3.3.4.2.4 – SOLUÇÃO DE CEFTAZIDIME DE SÓDIO PENTAHIDRATADA:
Tel: (32) 3223 -0705
Composição:
Ceftazidime de Sódio Penta- 0, 116

hidratada g
Água 100 ml
Preparo: dissolver a ceftazidime de sódio penta-hidratada. Esterilizar por filtração.
3.3.4.2.5 – MEIO COMPLETO:
Composição:
Base 960 ml
Solução de Sulfato de Polimixina B 10 ml
Solução de Hidrocloreto de Acriflavina 10 ml
Solução de Ceftazidime de 20 ml
Sódio Penta-hidratada
Preparo: adicionar à base fundida (a 47°C) as soluções preparadas, misturando

gentilmente entre cada adição.
3.3.4.2.6 – PREPARO DAS PLACAS DE ÁGAR:

Colocar aproximadamente 15 ml do meio recentemente preparado. Permitir que
solidifiquem. Estocar as placas em local com ausência de luz.
3.3.5 – MEIO DE CULTURA SÓLIDO: ÁGAR TRIPTONA DE SOJA EXTRATO DE

LEVEDURA (TSYEA):
Composição:
Caldo Triptona de Soja 1 30 g

Ágar 9 a 18* g
Água 1000 ml
1Tryptona 17 g
Peptona de Soja 3g
Fosfato Dipotássico 2,5 g
Glicose 2,5 g
Folha 20/19
Tel: (32) 3223 -0705
Preparo: dissolver os componentes ou o meio desidratado em água em ebulição.
Ajustar o pH para 7,3 ± 0,2 a 25°C. Dispersar o meio em tubos (porção teste).
Esterilizar em autoclave a 121°C por 15 minutos. Armazenar os tubos inclinados.
Para o preparo de placas, verter 15 mL do meio. Esperar solidificar.
3.3.6 – MEIO DE CULTURA LÍQUIDO: ÁGAR TRIPTONA DE SOJA EXTRATO

DE LEVEDURA (TSYEB):
Composição:
Caldo Triptona de Soja 1 30 g
Água 1000 ml
1Tryptona 17 g
Peptona de Soja 3g
Fosfato Dipotássico 2,5 g
Glicose 2,5 g
Preparo: dissolver os componentes ou o meio desidratado em água aquecida.

Ajustar o pH para 7,3 ± 0,2 a 25°C. Dispersar o meio em tubos (porção teste).
Esterilizar em autoclave a 121 °C por 15 minutos.
Folha 21/19
Tel: (32) 3223 -0705
3.3.7 – ÁGAR SANGUE DE OVELHA:
3.3.7.1 –BASE:
Composição:
Peptona de Carne 15 g
Fígado digerido 2,5 g
Ágar 9 a 18* g
Água 1000 ml
*Dependendo da força de gelificação do ágar
Preparo: dissolver os componentes ou o meio desidratado em água

aquecida. Ajustar o pH para 7,2 ± 0,2 a 25°C. Dispersar o meio em
tubos (porção teste). Esterilizar em autoclave a 121 °C por
15minutos.
3.3.7.2 – SANGUE DE OVELHA DESFIBRILADO:
3.3.8.3 – BASE COMPLETA:
Composição:
Base 100 ml
Sangue de Ovelha Desfibrinado 5 a 7 ml
Preparo: adicionar o sangue à base previamente resfriada a 47°C

(após autoclavagem). Misturar bem. Verter o meio em placas de petri
estéreis. Esperar solidificar.
3.3.8 – CALDO DE UTILIZAÇÃO DE CARBOIDRATO (RAMNOSE

EXILOSE):
3.3.8.1 –BASE:
Composição:
Peptona Proteose 10 g
Extrato de Carne 1g
Cloreto de Sódio 5Folha
g 22/19
Púrpura de Bromocresol 0,02 g
Tel: (32) 3223 -0705
Água 1000 ml

aquecida. Ajustar o pH para 6,8 ± 0,2 a 25°C. Dispersar o meio em
tubos (porção teste). Esterilizar em autoclave a 121 °C por
15minutos.
3.3.8.2 – SOLUÇÃO
DECARBOIDRATO:
Composição:
Carboidrato* 5g
Água 100 ml
* L-Ramnose e D-Xilose
Preparo: dissolver separadamente cada carboidrato em 100 ml de

água. Esterilizar por filtração.

Para cada carboidrato, adicionar assepticamente 1 mL da solução
de carboidrato (3.3.8.2) para cada 9 mL da base.
3.3.9 – AGAR
DE
MOTILIDADE:
Composição:
Peptona de Caseína 20 g
Peptona de Carne 6,1 g
Ágar 3,5 g
Água 1000 ml

em ebulição. Ajustar o pH para 7,3 ± 0,2 a 25°C. Dispersar o meio
em tubos (porção teste). Esterilizar em autoclave a 121 °C porFolha
15 23/19
minutos.
Tel: (32) 3223 -0705
3.3 – REAGENTES E SOLUÇÕES NECESSÁRIOS:
 Ágar padrão para contagem (PCA);

Composição:
Digestão enzimática de caseína 5,0 g

Extrato de levedura 2,5 g
Glicose 1,0 g
Agar 15,0 g
Preparação:
 A D I C I O N AR OS I N GR E DI E NT E S O U O M E I O C OM P L E T AM E NT E
D E S I D R AT AD O E M Á GU A E DI S S O LV E R S O B AQ UE CI M E NT O
(seguir as instruções do fabricante);
 A J U S T AR O P H S E N E CE S S ÁR I O P AR A Q UE , AP ÓS A
E S T E R I LI Z AÇ Ã O , E S T E J A 7,2.±.0,2 a 25°C;
 Utilizar frascos com capacidade superior a 500 ml. Esterilizar em
autoclave a 121 °C ± 3°C por 15 minutos;
 Caso o meio não seja utilizado imediatamente após a sua
confecção, o mesmo deve ser armazenado, sob refrigeração, a 5
± 3 °C;
 Para usar o meio, deve-se fundi-lo para se tornar líquido
novamente e manter a 45°C ± 1 °C usando estufa.
 Solução salina peptonada 0,1%;
Composição:
Cloreto de sódio 8,5 g

Peptona 1,0 g
Preparação:
Autoclavar a 121ºC por 15 minutos.
Folha 24/19
Tel: (32) 3223 -0705

Preparo de Meios

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 Ágar Baird-Parker;

Digestão pancreática de caseína 10,0 g

Preparaçãoplaca deÁgar Baird-Parker:

 Deve-se adicionar assepticamente 50mL da emulsão de ovo e 10 mL da solução

Digestão enzimática de tecido animal 10,0 g

 Plasma de coelho com EDTA;

 Solução salina peptonada 0,1%;

Cloreto de sódio 8,5 g

OBS: Todos os reagentes preparados devem ser registrados no formulário FORM-LAB-MB-

 Ágar Coliforme Cromogênico (CCA):

 Reagente Oxidase ou Bactident®-oxidase:

 Agar TSA (Tryptone Soy Agar):

OBS:Todos os reagentes preparados devem ser registrados no formulário FORM-LAB-MB-

3.3 – REAGENTES E SOLUÇÕES NECESSÁRIOS:

 Caldo Muller-Kauffmann tetrationato/novobiocina (MKTTn);

Preparação do meio completo:

 Adicionar assepticamente 5 mL da solução de novobiocina (B.3.3) para 1.000mL

 Ágar Xilose Lisina Desoxicolato (Ágar XLD);

Preparação das placas de Agar XLD:

 Verter aproximadamente 15 mLdo ágar em placas de petri estéreis com uma

Preparação das placas de Agar BPLS:

 Verter aproximadamente 15 mLdo ágar em placas de petri estéreis com uma

Preparação de placas de ágar nutriente;

 Verter aproximadamente 15 mLdo ágar em placas de petri estéreis e deixar

 Agar açúcar/ferro triplo (Agar TSI):

 Ágar Uréia (Christensen);

Preparação completa do ágar uréia (Christensen):

 Adicionar assepticamente a solução de uréia ao meio base previamente fundido;

Preparação completa do Reagente de β-galactosidase:

 Reagentes para reação Indol;

Peptona de Carne (Digestão peptídica de tecido animal) 5g

Preparação: dissolver os componentes da base ou o meio desidratado em água

NOTA: O cloreto de lítio e a solução de ácido nalidíxico podem ser adicionados à

3.3.1.2 –SOLUÇÃO DE CLORETO DE LÍTIO:

Sal de Sódio Ácido Nalidíxico 0,1 g

Preparo: dissolver o sal de ácido nalidíxico em hidróxido de sódio. Esterilizar por

3.3.1.4 – SOLUÇÃO DE HIDROCLORETO DEACRIFLAVINA:

Preparo: dissolver o hidrocloreto de acriflavina em água. Esterilizar por filtração.

3.3.1.4 – SOLUÇÃO DE CITRATO DE AMÔNIO FERRO III:

3.3.1.5 – MEIO COMPLETO:

Preparo: imediatamente antes do uso, adicionar o hidrocloreto de acriflavina e o

3.3.2 – MEIO DE ENRIQUECIMENTO SECUNDÁRIO SELETIVO: CALDO

Peptona de Carne (Digestão peptídica de tecido animal) 5g

Preparo: dissolver os componentes da base ou o meio desidratado em água sob

NOTA: O cloreto de lítio e a solução de ácido nalidíxico podem ser adicionados a

3.3.2.2 – SOLUÇÃO DE HIDROCLORETO DE ACRIFLAVINA:

Hidrocloreto de Acriflavina 0,25 g

Preparo: dissolver o hidrocloreto de acriflavina em água. Esterilizar por filtração.

3.3.2.3 – SOLUÇÃO DE CITRATO DE AMÔNIO FERRO III:

Citrato de Amônio Ferro III 5g

3.3.2.5 – MEIO COMPLETO:

3.3.3 – PRIMEIRO MEIO DE PLAQUEAMENTO SELETIVO: ALOA:

Digestão Enzimática de Tecidos Animais 18 g

Preparo: dissolver os componentes o meio desidratado em água em ebulição.

3.3.3.2 – SOLUÇÃO DE ÁCIDO NALIDÍXICO:

Preparo: dissolver o ácido nalidíxico em 5 ml da solução de hidróxido de sódio.

Preparo: dissolver a ceftazidime de sódio penta - hidratada. Esterilizar por filtração.

Preparo: dissolver o sulfato de polimixina em água. Esterilizar por filtração em

3.3.3.6 – SUPLEMENTO ANTIBIÓTICO:

3.3.3.6.1 – SOLUÇÃO DE CICLOHEXIMIDA:

Preparo: dissolver a Cicloheximida em etanol e depois adicionar a água. Filtrar em

3.3.3.6.3 – SOLUÇÃO ANFOTERICINA B (alternativo a solução de

Preparo: dissolver a Anfotericina B na solução DMF/HCl. Esterilizar por filtração em