PROCEDIMENTO

Preparação e fixação da amostra

1. Espalhar em camada fina a amostra a examinar numa lâmina apropriada;

2. Secar;
3. Fixar ao calor.

Coloração

1. Cobrir o esfregaço com cristal violeta;

2. Deixar em contacto 1 minuto;
3. Passar com cuidado por água;
4. Cobrir com lugol;
5. Deixar em contacto 1 minuto;
6. Passar com cuidado por água;
7. Descorar com álcool acetona;
8. Passar com cuidado por água;
9. Cobrir com safranina;
10. Deixar em contacto 1 minuto;
11. Passar com cuidado por água;
12. Secar.

file:///C:/Users/natf0/Downloads/Color-Gram-2.pdf

Recommended Procedures:

Apply the whole procedure in a biosafety level II cabinet. Take all precautions to prevent
contamination. If you are using the kit the first time, unscrew the caps,remove the protective
sheet and screw back the caps.

1. Apply the sample on the slide and let it dry

2. Fix the smear by passing a few times through the flame
3. Place the slide on a suitable stand for staining
4. Pour carbol fuchsin on the slide to cover the whole surface
5. Stain for 5 to 10 minutes. (During this step if the stain leaks from the sides or tends to
dry,add some more stain)
6. Pour the stain and wash the smear with distilled water
7. Pour acid-alcohol mixture on the slide and decolorize with solution for 3 minutes. Pour
the mixture,hold the slide tilted and continue decolorization by pouring a few more
drops of acid-alcohol until all te visible red color is washed off
8. Wash the smear with distilled water
9. Pour methylene blue stain to cover the slide and stain for 1 minute.
10. Wash the smmear with distilled water and dry
11. Examine the smear under the microscope using immersion oil (100x) objective lens
Procedimentos Recomendados:

Aplicar todo o procedimento num gabinete de nível II de biossegurança. Tome todas as

precauções para evitar contaminação. Se estiver a ser usado o kit pela primeira vez,
desparafuse as tampas, remova a folha protetora e parafuse novamente as tampas.

1. Aplique a amostra na lâmina e deixe secar;

2. Corrija a mancha passando algumas vezes pela chama;

3. Coloque a lâmina num suporte adequado para coloração;

4. Despeje Carbolfucsina  na lâmina para cobrir toda a superfície;

5. Core por 5 a 10 minutos (Durante esta etapa, se a mancha derramar pelas laterais ou tiver
tendência a secar, adicione mais manchas);

6. Despeje a mancha e lave o esfregaço com água destilada;

7. Despeje a mistura de ácido-álcool na lâmina e descolorir com a solução por 3 minutos.

Despeje a mistura, segure a lâmina inclinada e continue a descoloração despejando mais
algumas gotas de álcool-ácido até que toda a cor vermelha visível seja removida;

8. Lave o esfregaço com água destilada;

9. Despeje a mancha de azul de metileno para cobrir a lâmina e corar por 1 minuto;

10. Lave o esfregaço com água destilada e seque;

11. Examine o esfregaço em óleo de imersão no microscópio usando lentes objetivas de óleo
de imersão (100x).