fazer
melhor
Polietileno para Embalagem de
Leite: Adesão Bacteriana e
Controle pela Radiação Ultravioleta
1
Cleuber Antônio de Sá Silva
2
Baroncio Paulo de Oliveira Cabral
2
Erny Marcelo Simm
3
Nélio José de Andrade *
1. Uso de polietileno de
baixa densidade na
indústria de laticínios
A procura por materiais e sistemas
mais eficientes para o empacotamento
de leite promoveu a intensificação de
pesquisas sobre materiais plásticos ade-
quados ao envase de produtos alimen-
tícios. Podem ser incluídos dentre es-
tes materiais o polipropileno, o
policarbonato, o poli (cloreto de
vinila), o poliestireno e o polietileno
de alta e baixa densidade, sendo este
último empregado na indústria de la-
ticínios para o envase de leite fluido,
desde a década de 70.
O polietileno é um polímero
termoplástico formado pela aglome-
ração de unidades monoméricas de-
rivadas do petróleo, denominadas
etileno (Figura 1).
O polietileno de baixa densidade
(PEBD) apresenta ponto de fusão em
1. Doutorando em Ciência e Tecnologia de Alimentos – UFV
2. Graduando em Engenharia de Alimentos – UFV
3. Professor Titular DTA – UFV
* Correspondência nandrade@mail.ufv.br
54 - INDÚSTRIA DE LATICÍNIOS - MAR/ABR 2002
Figura 1 – Estrutura química e espacial do
polietileno de baixa densidade.
(Fonte: UFSC/Departamento de Química)
torno de 115ºC, densidade na faixa de
0,91 a 0,94, índice de refração de 1,51
a 1,52, com alta resistência a substân-
cias ácidas e alcalinas, sendo um sóli-
do com 50 a 60% de cristalinidade
(Billmeyer, 1984; Mano, 1991).
O impedimento espacial provocado
pelas ramificações dificulta o
“empilhamento” das cadeias poliméricas.
Por esta razão, as forças intermoleculares
que mantêm as cadeias poliméricas uni-
das tendem a ser mais fracas, tornando
o PEBD bastante flexível.
Devido a não-resistência dessas
embalagens à esterilização pelo calor,
novos métodos têm sido desenvolvi-
dos para o controle da microbiota des-
ses materiais sensíveis ao calor (Toledo,
1975; Flückiger, 1995).
Como aplicações típicas, pode-se
citar o uso do PEBD na fabricação de
filmes plásticos e laminados para em-
balagens de produtos alimentícios lí-
quidos e sólidos, filmes
termoencolhíveis, filmes laminados e
plastificados para produtos farmacêu-
ticos e hospitalares, filmes para emba-
lagens industriais e agrícolas, utensíli-
os domésticos, brinquedos, sacos para
lixo, revestimento de fios e cabos, tu-
bos e mangueiras (Mano, 1991).
2. Adesão bacteriana e
for mação de biofilme
formação
A adesão microbiana e a formação
de biofilme ocorrem em virtude da
Caderno Fazer Melhor - Mai/Jun 2002
deposição de microrganismos em uma
superfície de contato, onde eles se fi-
xam e iniciam o crescimento (Zottola,
1994, 1997; Zottola e Sasahara, 1994;
Snyder, 1992; Flint et al., 1997).
Uma vez aderidos, os microrganis-
mos podem absorver e metabolizar
nutrientes, liberando resíduos de seu
metabolismo, produtos com função
estrutural ou materiais que auxiliam
na adesão e replicação celular, forman-
do assim o biofilme (Bower et al.,
1996). No biofilme, as bactérias estão
fortemente aderidas a uma superfície
por meio de filamentos de natureza
protéica ou polissacarídica, denomina-
da glicocálix (Mosteller e Bishop,
1993; Criado et al., 1994; Elasri e
Miller, 1999). No biofilme, os micror-
ganismos estão mais resistentes à ação
de agentes químicos e físicos, como
aqueles usados no procedimento de
higienização, sendo uma importante
fonte de contaminação na indústria de
alimentos (Mosteler e Bishop, 1993).
Diversas superfícies para proces-
samento são passíveis de apresentar ade-
são e/ou formação de biofilme de ori-
gem bacteriana. Dentre elas, inclui-se
aço inoxidável, vidro, borracha, fórmica,
polipropileno, polietileno, policarbonato
e ferro forjado (Zottola, 1997). As su-
perfícies que entram em contato com
os alimentos durante o processo de in-
dustrialização não devem contaminá-los
ou aumentar a incidência de microrga-
nismos, sejam estes alteradores ou
patogênicos. Na indústria de laticínios,
a linha de processamento apresenta
comumente superfícies que permitem a
adesão de bactérias patogênicas e
esporulantes (Mosteler e Bishop, 1993).
Uma função importante da emba-
lagem é a preservação dos alimentos
(Sonneveld, 2000). No entanto, os
materiais das embalagens são possíveis
fontes de contaminação na indústria
de laticínios, onde foram isolados in-
clusive esporos de Bacillus cereus (Van
Caderno Fazer Melhor - Mai/Jun 2002
Heddeghem e Vlaemynck, 1985), que
apresentam grande hidrofobicidade,
podendo aderir às superfícies
(Andersson et al., 1995).
3. Micr or
Micror ganismos
organismos
envolvidos na adesão
Estudos têm mostrado que micror-
ganismos alteradores e patogênicos po-
dem aderir a superfícies que entram em
contato com alimentos, causando séri-
os problemas de ordem econômica e de
saúde pública (Criado et al., 1994). No
grupo de microrganismos alteradores
encontram-se: Pseudomonas fragi
(Schwach e Zottola, 1982; Zottola,
1994; Blakistone et al., 1996),
Pseudomonas aeruginosa (Cowell et
al.,1999; Elasri e Miller, 1999; Gibson
et al., 1999), Pseudomonas fluorencens
(Mosteller e Bishop, 1993; Zottola,
1997), Micrococcus sp. (Criado et
al.,1994) e Enterococcus faecium
(Andrade et al., 1998). Entre os micror-
ganismos patogênicos têm-se: E coli
O157:H7, Salmonela thypimurium,
Bacillus cereus (Bower et al., 1996;
Smith e Fratamico, 1995), Listeria
monocitogenes (Bower et al., 1996;
Zottola, 1997; Mosteller e Bishop,
1993), Yersinia enterocolitica (Mosteller
e Bishop, 1993; Zottola, 1994),
Staphylococcus aureus (Cunlife et al.,
1999; Gibson, 1999), Clostridium
perfringens (Andersson et al., 1995),
Aeromonas hydrophila (Assanta et al.,
1998; Bal’A et al., 1998).
A capacidade desses microrganis-
mos aderidos se desprenderem e con-
taminarem os alimentos que entram em
contato com a superfície é denomina-
da “ potencial de biotransferência”
(HOOD e ZOTTOLA, 1995).
4. Radiação ultravioleta
As radiações ionizantes, como a
radiação gama, e não-ionizantes são
55 - INDÚSTRIA DE LATICÍNIOS - MAR/ABR 2002
55
 empregadas no controle de microrga-
nismos aderidos a superfícies (Andrade
e Macêdo, 1996). Como exemplo de
radiação não-ionizante tem-se a radi-
ação ultravioleta (RUV), que é ampla-
mente empregada na indústria de ali-
mentos para descontaminação de
embalagens e de algumas superfícies
de equipamentos, ambientes e água.
A RUV se refere a toda radiação
eletromagnética com comprimento de
onda na faixa de 100 a 400 nm (Figu-
ra 2). Comprimentos de onda em tor-
no de 254 nm são considerados dano-
sos às células microbianas, sendo por
isso empregados na redução da
microbiota de superfície, de líquidos
e do ar (Tramplim e Capers, 1992).
Figura 2 - Localização da radiação ultravioleta
no espectro
Fonte: International Ultraviolet Association –
IUVA (2000)
A inativação dos microrganismos
é resultado da exposição à radiação
ultravioleta, sendo expressa como um
produto da intensidade da energia
germicida e do tempo (Shechmeister,
1991; Flückiger, 1995; Bachmann,
1975). Em condições práticas, o tem-
po de exposição é diferente para cada
situação (SHECHMEISTER, 1991).
Por exemplo, o tempo usado para re-
dução da microbiota em PEBD, para
embalagem de leite tipo C, é de apro-
ximadamente dois segundos.
Nas lâmpadas germicidas conven-
cionais, de baixa pressão de vapores de
mercúrio, a intensidade da RUV está
-2
na faixa de 10 mWcm a 1.000
-2
mWcm . Já em lâmpadas de alta pres-
56 - INDÚSTRIA DE LATICÍNIOS - MAR/ABR 2002
são a intensidade de emissão da RUV 1999; Yousef e Marth, 1988). Esta
está na faixa de 100.000 a 1.000.000 ação é influenciada grandemente pela
-2
mWcm (Bachmann, 1975). geometria e pelo tipo de superfície
A eficiência operacional das lâm- (YOUSEF e MARTH, 1988), bem
padas germicidas depende da tempe- como pela presença de partículas de
ratura do meio e da movimentação do alimentos ou substâncias que impeçam
ar. As lâmpadas germicidas comerci- o acesso da RUV, o que resulta em
ais são desenvolvidas, geralmente, para proteção aos microrganismos
trabalhar a 27ºC. (BANWART, 1989).
A distância da fonte geradora de 5. Mecanismo de ação da
RUV à superfície de atuação é um radiação ultravioleta
outro fator a ser considerado, uma vez
que a intensidade luminosa apresenta A ação da RUV sobre os microrga-
correlação inversa com o quadrado nismos está relacionada ao compri-
da distância (SHECHMEISTER, mento de onda e à absorção desta pe-
1991). los ácidos nucléicos ou constituintes
Na indústria de alimentos, a utili- dos mesmos. A redução microbiana
zação de RUV apresenta várias vanta- resultante do uso de RUV é explicada
gens, quando comparada aos desinfe- por meio da formação de ligações en-
tre pirimidinas sucessivas na fita de
tantes químicos: i) não deixa resíduos
nas superfícies (BACHMANN, 1975; DNA, formando dímeros.
Wong et al., 1998), ii) é um processo
Figura 3 - a) Formação de dímero entre duas
a seco, que não necessita de aqueci- timinas adjacentes e b) formação de dímero
entre timina e citosina.
mento, iii) de simples emprego e iv)
de pequeno custo efetivo para a redu-
ção da microbiota de pequenas áreas,
não apresentando restrição legal, como
é o caso de alguns agentes químicos e
de radiação de alta energia
(BACHMANN, 1975).
A ação da RUV pode ser usada no
controle microbiológico de ambientes
de processamento de indústrias de la-
ticínios (HUANG e TOLEDO,
Assim, os danos ao DNA e RNA
1992). Essa importante aplicação re-
celular, em decorrência da absorção da
fere-se à destruição de microrganismos
RUV, são considerados os principais
presentes no ar, diminuindo a
mecanismos de inativação microbiana,
microbiota ambiental e protegendo os
uma vez que bloqueiam a replicação
alimentos que estão sendo processados
celular (HO et al., 1998; Sizer e
(SHECHMEISTER, 1991; Banwart,
Balasubramanian, 1999; Maharaj et
1989; Stermer et al., 1987), ou que
al.,1999).
estão já processados em áreas de
estocagem (Stermer et al., 1987).
6. Lâmpadas ger micidas
germicidas
A utilização da RUV em equipa-
mentos empregados no processamento O método mais prático de se gerar
de alimentos se restringe à desinfec-
RUV é por meio da passagem de des-
ção de superfícies externas (Wong et
carga elétrica por vapores de mercúrio
al., 1998; Sizer e Balasubramanian, em baixa pressão acomodados dentro
Caderno Fazer Melhor - Mai/Jun 2002
Figura 4 – Exemplos de lâmpadas germicidas.
Fonte: Primarc UV Technology (2000).
de um tubo de vidro especial
(Shechmeistes, 1991; Flückiger, 1995;
Stermer et al., 1987), que é conheci-
do comercialmente por lâmpada
germicida (Figura 4). O princípio de
toda lâmpada germicida é o mesmo
das lâmpadas fluorescentes: um fluxo
de elétrons entre os eletrodos que
ionizam os vapores de mercúrio. A di-
ferença entre os dois tipos de lâmpa-
das é que o bulbo de lâmpadas fluo-
rescentes é revestido com compostos
fosforados, que convertem a RUV em
luz visível. O vidro empregado na con-
fecção do bulbo das lâmpadas fluores-
centes filtra a saída de toda a RUV. Já
nas lâmpadas germicidas não se tem a
presença de compostos fosforados no
bulbo, e este é constituído de um vi-
dro especial que permite a transmis-
são da RUV gerada pelo mercúrio mais
a energia visível (SHECHMEISTER,
1991).
7. Contr ole de pr
Controle ocessos
processos
de adesão em PEBD
pela RUV
Experimentos conduzidos no La-
boratório de Microbiologia de Alimen-
tos e Higiene industrial do Departa-
mento de Tecnologia de Alimentos da
UFV têm avaliado processos de ade-
são bacteriana e ação da RUV em
PEBD. Foi utilizado um modelo que
simula condições de empacotamento
de leite (Figura 5) . Este modelo foi
construído em chapa galvanizada apre-
sentando as seguintes dimensões:
10X25X50 cm. Em seu interior, tem-
Caderno Fazer Melhor - Mai/Jun 2002
Figura 5 – Modelo para a exposição das
embalagens à RUV.
se uma lâmpada UV com comprimen-
to de onda de 254 nm, 15 W de po-
tência, ligada à rede elétrica (127 V)
por meio de um reator de 20 W e um
starter. A lâmpada está situada a 2cm
acima da canaleta por onde corre o su-
porte, contendo a embalagem a ser ir-
radiada (Figura 6).
Figura 6 – Modelo aberto para exposição das
embalagens à RUV, onde se visualiza a canaleta
por onde corre o suporte com a embalagem
Alguns resultados desses experi-
mentos são mencionados, a seguir.
1. Avaliando-se a contaminação
microbiológica de embalagens de
PEBD, constatou-se que o número de
mesófilos aeróbios foi de 0,16NMP/
2
cm . Após a exposição da superfície a
2
137 mW/cm , durante 2 segundos, a
contaminação reduziu para
2
0,014NMP/ cm , o que representa
cerca 1 Redução Decimal (RD), que
corresponde a 90% de redução. Estes
valores são inferiores aos recomenda-
2
dos, de 0,1NMP/cm , para que não
haja problemas com a vida de prate-
leira do leite, em relação à contamina-
ção de embalagens.
57 - INDÚSTRIA DE LATICÍNIOS - MAR/ABR 2002
57
 2. Constatou-se a capacidade do
PEBD em suportar a adesão de célu-
las de Escherichia coli, Staphyloccus
aureus, suspensas em meio BHI, con-
5 6 7
tendo cerca de 10 , 10 e 10 UFC/mL.
Em linhas gerais, observou-se que a
4 2
adesão atingiu cerca de 10 UFC/cm
de PEBD; foi maior à temperatura de
o o
18 C do que a 8 C e aumentou com o
número inicial. Houve uma tendên-
cia de maior adesão do S. aureus quan-
do comparado à E. coli.
3. A exposição das células
vegetativas intencionalmente aderidos
58
vamente. Os valores D
para esporos aderidos ao
PEBD, a partir de suspen-
4 5
sões, contendo 10 e 10
UFC/mL, e tempo de ex-
posição da embalagem à
RUV de 25 segundos, fo-
ram de 14,82 e 11,45 se-
gundos, respectivamente.
Figura 7 - Microtopografia da superfície de PEBD representativa 5. Constatou-se a re-
das regiões relativamente lisas, obtida pela microscopia de força dução da intensidade da
atômica.
RUV de 288 para 78
2
mW/cm após 1500 ho-
ras de uso, sendo o
declínio mais acentuado
nas 100 horas iniciais, em
que se observou a queda
de 39,5% na intensidade.
A eficiência da RUV so-
bre E. coli decresceu de
0,94 RD, após 70 horas
de uso, para 0,36 RD,
após 1500 horas.
Figura 8 - Microtopografia da superfície de PEBD, contendo fendas 6. Por microscopia de
e elevações, obtida pela microscopia de força atômica.
força atômica, verifica- se
ao PEBD à intensidade entre 216 e que a superfície do PEBD apresenta
2
175 mW/cm de RUV por dois se- regiões relativamente lisas (Figura 7) e
gundos reduziu o número de micror- outras, que abrangem cerca de 50% da
ganismos viáveis. Os valores D para área, contendo imperfeições, como fen-
células aderidas ao PEBD a partir de das com dimensões de 0,2 mm de pro-
7
suspensões, contendo cerca de 10 fundidade e 5mm de diâmetro e eleva-
UFC/mL, foram de 1,84 e 1,14 segun- ções de 1mm (Figura 8). A eficiência
dos para E. coli e S. aureus, respectiva- da RUV pode ser reduzida devido à
mente. Portanto, a E. coli mostrou-se presença dessas irregularidades, uma vez
mais resistente à RUV. que estas podem alojar bactérias, facili-
4. Constatou-se a capacidade do tando o processo de adesão, ou ainda
PEBD em suportar a adesão de esporos pela ocorrência de regiões que prote-
de Bacilus sporothermodurans, suspensos gem as células do contato direto com a
4 5
em água destilada, contendo 10 e 10 RUV.
UFC/mL. Observou-se que a adesão 7. Os dados acima mencionados
3 2
atingiu cerca de 10 UFC/cm de mostram que a RUV pode ser um tra-
PEBD e aumentou com o aumento do tamento auxiliar útil no controle da con-
número inicial. A exposição dos esporos taminação microbiológica em PEBD.
B. sporothermodurans intencionalmente
aderidos ao PEBD à intensidade de 102
2
mW/cm de RUV por 2, 10, 15, 20 e 8. Referências bibliográficas
25 segundos reduziu o número de mi-
crorganismos viáveis em níveis de 0,32, No original do autor estão conti-
1,26, 1,38, 1,80 e 2,18 RD, respecti- das 40 referências bibliográficas.
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