Identificação do gene responsável pela expressão da

mácula de Cistus ladanifer var. maculatus

Duarte, L.*; Livreiro, D.**; Rodrigo, I.***

Introdução:
Reino: Plantae
A espécie Cistus ladanifer (esteva), planta espontânea da vegetação Divisão: Magnoliophyta (Angiospermae)
mediterrânica, inclui duas variedades: a variedade maculatus (fig. 1), que Classe: Magnoliopsida (Dicotyledones)
apresenta uma mancha púrpurea na base da pétala e a variedade Sub-classe: Dilleniidae
albiflorus(fig. 2), que não a apresenta. A presença de mácula deve-se às Ordem: Violales
Família: Cistaceae
condições xerofílicas do meio e constitui uma estratégia de atracção de
Género: Cistus
insectos polinizadores. Espécie: Cistus ladanifer L.
Com este projecto pretende-se investigar a que nível se dá essa
diferença: se a nível genotípico ou se a nível de expressão diferencial de Fig. 1: Aspecto da flor de Fig. 3: Enquadramento taxonómico da esteva
Cistus ladanifer var.
genes (fenótipo). albiflorus
Mediante os resultados obtidos pode-se esclarecer qual o grau de
parentesco taxonómico entre as variedades referidas, criar um banco
genómico e patentear o(s) gene(s) responsáveis pela mácula. Fica assim Fig. 2: Aspecto da flor de
Cistus ladanifer var.
criada, também, uma referência para futuros trabalhos de aplicação, maculatus
nomeadamente, a produção de tintas e diversas utilizações em
floricultura, como por exemplo a produção de outras espécies florais com
mácula, quer para embelezamento estético, quer para incrementar a Metodologia:
polinização entomófila.

Objectivos: Amostra A: parte da pétala sem mácula

Amostra B: parte da pétala com mácula
•Criar bancos genómicosdas duas variedades;
•Identificar, sequenciar e patentear o(s) gene(s) responsáveis pela
expressão da mácula; Amostra A Amostra B

•Verificar se a expressão da mácula é ao nível genotípico ou fenotípico.

Extracção de mRNA

Preparação dos bancos genómicas

Amplificação de cDNA por PCR

Microarrays (fig. 4)

Identificação do(s) gene(s)

Sonda molecular específica do gene

Hibridação da sonda por Northern Blotting

in vivo em C. ladanifer var. maculatus

Negativo Positivo

Hibridação da sonda Hibridação da sonda

com o banco genómico com o banco genómico
de C. ladanifer var. de C. ladanifer var.
maculatus albiflorus
Fig. 4: Técnica de microarrays
Identificação do gene

Sequenciação

Cronograma:
Financiamento:
1º mês 2º mês 3º mês 4º mês Com este projecto pensa-se gastar cerca de
(Março) (Abril) (Maio) (Junho) 17000€. Este investimento poderá ser
Recolha e preparação das amostras recompensado mais tarde com as possíveis
Identificação dos genes expressos aplicações deste gene patenteado, nomeadamente
em tinturarias e produção de plantas ornamentais.
Hibridação da sonda por Northern Blotting in vivo
Identificação dos genes nas duas variedades
Sequenciação
Preparação dos bancos genómicos

Resultados:
Espera-se que a expressão na amostra A seja diferente da amostra B, permitindo
assim isolar o gene da mácula e sequenciá-lo. É possivel que a variedade albiflorus
também apresente este gene, mas por algum motivo não o expresse.

Referências bibliográficas:
- Lima, N., Mota, M. (2003). BIOTECNOLOGIA:FUNDAMENTOS E APLICAÇÕES. Lidel, Lisboa.
Agradecimentos: ao Prof. Carlos Sinogas e à bióloga Raquel Barata
- Póvoa, V. C. D. R. (2000). CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE ISOLAMENTOS DE Botryosphaeria dothidea. UALG, Faro.
-Páginas web consultadas:
http://www.retamatour.com/web/02web/flora/fichas/arbolesyarbustos/Cistus%20ladanifer.htm
http://www.unex.es/botanica/plantaex/cislad.htm
•nº17754, ** nº17389, *** nº 17683.
http://www.calflora.net/bloomingplants/crimsonspotrockrose.html
Disciplina de Biotecnologia. Departamento de Biologia. Universidade de Évora.
http://www.csdl.tamu.edu/FLORA/newgate/cron1ang.htm
http://bscd.bsd.uchicago.edu/ WebQuest302.html