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Journal of Sensor Science and Technology

Vol. 20, No. 4 (2011) pp. 226-229 DOI:
10.5369 / JSST.2011.20.4.226 pISSN
1225-5475 / eISSN 2093-7563

Características do BioFET modificado com Proteína G

Young-Soo Sohn+

Resumo

A detecção sem etiqueta de interações biomoleculares foi realizada usando BioFET (Transistor de efeito de campo biologicamente sensível) e SPR
(ressonância de plasma de superfície). Informações qualitativas sobre a imobilização de uma interação anti-IgG e antígeno-anticorpo foram obtidas
usando o sistema de análise SPR. O BioFET foi usado para explorar o valor pI da proteína e para monitorar as interações biomoleculares que causaram
uma mudança de carga efetiva na superfície da porta, resultando em uma mudança de corrente de dreno. Os resultados mostram que o BioFET pode ser
uma ferramenta de monitoramento útil para interações biomoleculares e é complementar ao sistema SPR.

Palavras-chave : BioFET, Proteína G, SPR

1. INTRODUÇÃO adjacente à superfície metálica do sensor pela imobilização de

A pesquisa na área de biossensores se tornou popular desde que suas aplicações foram
estendidas para diagnóstico médico, meio ambiente, biotecnologia, segurança alimentar,
desenvolvimento de medicamentos, defesa e segurança [1-4]. Vários tipos de biossensores
utilizam mecanismos óticos, eletroquímicos, mecânicos ou de transdução térmica [4]. Entre
eles, biossensores baseados em transistor de efeito de campo (FET) (BioFETs) são um dos
candidatos mais atraentes para a detecção eletroquímica direta e sem rótulo de moléculas
biológicas. Os BioFETs consistem em duas partes básicas: a parte de transdução de sinal FET
sensível a íons (ISFET) e o elemento de biorreconhecimento (“receptor”) no portão como a parte
de detecção. A ligação de um analito carregado ou molécula alvo ao receptor produz uma
mudança na carga efetiva na proximidade da superfície da porta. O campo elétrico do analito
influencia a condutância do canal FET. Esses sensores baseados em Si têm muitas
biomoléculas [5, 6]. Nesta carta, utilizamos um sensor BioFET
como uma ferramenta analítica para explorar o ponto
isoelétrico (pI) de proteínas e observar as interações
biomoleculares medindo a variação da corrente de drenagem.
As informações qualitativas sobre as interações biomoleculares
foram adquiridas usando o sistema de análise SPR. Em ambos
os casos, as superfícies Au dos chips BioFET e SPR foram
modificadas por uma proteína G marcada com cisteína para
imobilização orientada do anticorpo de imunoglobulina G (IgG),
que é o anticorpo circulante mais abundante e é ativo contra
partículas estranhas [7- 9].

características benéficas, como integração no chip do processo de sinal, padronização,

portabilidade resultante de seu tamanho e peso pequenos e produção em massa de baixo 2. EXPERIMENTAL
custo com resposta rápida e alta sensibilidade. Atualmente, as técnicas de ressonância

plasmônica de superfície (SPR) têm recebido atenção crescente como ferramentas poderosas 2.1 Fabricação
para estudar a cinética de interação entre duas biomoléculas em tempo real sem rotulagem.

Sensores SPR detectam pequenas mudanças no índice de refração Atualmente, as técnicas de

ressonância plasmônica de superfície (SPR) têm recebido atenção crescente como ferramentas

poderosas para estudar a cinética de interação entre duas biomoléculas em tempo real sem

rotulagem. Sensores SPR detectam pequenas mudanças no índice de refração Atualmente, as

técnicas de ressonância plasmônica de superfície (SPR) têm recebido atenção crescente como

ferramentas poderosas para estudar a cinética de interação entre duas biomoléculas em

tempo real, sem rotulagem. Sensores SPR detectam pequenas mudanças no índice de refração

Departamento de Engenharia Biomédica, Universidade Católica de Daegu,

5 Geumrak-ro, Hayang-eup, Gyeongsan-si, Gyeongbuk, 712-702, Coreia Fig. 1. BioFET totalmente fabricado e encapsulado.
+Autor para correspondência: sohnys@cu.ac.kr
(Recebido: 16 de junho de 2011, Revisado: 6 de julho de 2011, Aceito: 7 de julho de 2011)

JSST. Vol. 20, No. 4, 2011 - 226-

 Características do BioFET modificado com Proteína G
A estrutura básica do BioFET é um FET semicondutor de
óxido metálico de canal comum (MOSFET) fabricado por
técnicas de processo CMOS padrão. Limpeza inicial de um
wafer de silício tipo p de 4 polegadas (100) com resistividade de
15Ω ·cm ~ 25Ω ·cm foi seguido por 5000 UMA crescimento de
óxido espesso por oxidação úmida. Para formar as regiões
fonte / dreno, a pré-deposição foi realizada com P2O5 após a
remoção do óxido depositado em ambas as regiões. Em
seguida, o vidro de fosfo-silicato (PSG) resultante foi removido
e uma etapa de drive-in foi realizada. Uma janela de portão foi
definida e aberta. Óxido de porta de alta qualidade (400A) foi
depositado por oxidação a seco. As regiões de contato foram
padronizadas para metalização. Au / NiCr (50 nm / 10 nm)
foram depositados por um evaporador térmico e finalmente
definidos. A área do portão era 50㎛ (comprimento)×2.500
㎛ (largura). O FET fabricado foi então ligado a um substrato de
alumina. Adesivos de polímero foram usados para revestir o chip
para encapsulamento, exceto na região do portão. A Fig. 1 mostra o
FET totalmente fabricado usado para as partículas de nossos
experimentos [7-9].
2.2 Medições
Os eventos de ligação da molécula foram
monitorados por um sistema de análise SPR (SPR LAB,
KMAC, Daejeon, Coreia). O sistema foi configurado com
base na configuração Kretschmann, que é a
configuração mais utilizada. A luz polarizada de um
laser semicondutor (635 nm, 2,5 mW) irradiou o filme
de Au de 50 nm de espessura através de um prisma de
bloco (n = 1,56). A intensidade da luz refletida foi
detectada por um Siphotodiode. O ângulo de incidência
variou de 30 ° Δ a 80 ° Δ. As características elétricas do
BioFET foram medidas por um analisador de
semicondutor (HP4156). Para estabelecer o potencial da
solução, foi utilizado um eletrodo de referência Ag /
AgCl. Todas as medições foram realizadas em PBS
(silano tampão de fosfato, pH 7,4) à temperatura
ambiente após a limpeza da superfície modificada por
PBS. Para detecções ópticas e elétricas,
3. RESULTADOS E DISCUSSÕES
Informações qualitativas sobre a formação da proteína G, a
imobilização de anti-IgG e sua afinidade pela ligação de IgG
podem ser monitoradas, uma vez que qualquer alteração na
espessura ou índice de refração dos materiais adsorvidos em
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a superfície Au resultou em uma mudança do ângulo de
ressonância. A proteína G marcada com cisteína tem sido
utilizada para imobilizar anti-IgG, uma vez que a proteína G
projetada aumenta a imobilização de anticorpos melhor
orientada [7]. Inicialmente, a proteína G foi formada no chip Au
SPR. A Fig. 2 mostra os desvios do ângulo de ressonância do
plasmão de superfície após uma injeção de sequência de
soluções de anti-IgG e IgG na superfície de Au formada pela
proteína G. Após a injeção da solução anti-IgG, o ângulo de
ressonância mudou cerca de 0,2 °. Após a imobilização do anti-
IgG, uma solução de IgG foi exposta à superfície de Au
imobilizada com anti-IgG, resultando em um desvio do ângulo
de ressonância de 0,1 °. Aqui, as concentrações da proteína G,
anti-IgG e IgG foram 100㎍ /ml, 10㎛ /ml e 10 ㎍ /ml,
respectivamente. O resultado mostra qualitativamente que o
anti-IgG foi imobilizado na proteína G, e então o IgG se ligou ao
anti-IgG com especificidade e afinidade.
Uma vez que os FETs são muito sensíveis à carga superficial no
ou próximo ao portão, o BioFET pode ser aplicado como uma
ferramenta para a medição de pI em proteínas desconhecidas.
Aqui, o pI da proteína G foi medido. A concentração de proteína G 10
㎍ /ml, neste caso. A voltagem aplicada no eletrodo de referência foi
de 3 V. As respostas da corrente de drenagem da proteína G a
diferentes soluções de pH foram observadas como mostrado na Fig.
3. Em primeiro lugar, temos a corrente de drenagem medida
característica do BioFET em PBS sem imobilização da proteína
G. A corrente era de 0,986 mA a uma tensão de dreno de
5V. Após a adsorção da proteína G na superfície da porta
Au, a corrente de dreno foi medida na mesma tensão de
dreno, mas em diferentes soluções de pH, pH 4, pH 7 e pH
10. As correntes de dreno foram de 1,02 mA, 0,948 mA e
0,845 mA, respectivamente. Se ignorarmos a espessura da
proteína G, o pI da proteína G pode ser inferido a partir desses
resultados como sendo entre 4 e 7. Foi relatado que o pI da
proteína G≈ 4,5 [10].
Fig. 2. O ângulo de ressonância de plasmão de superfície muda após a sequência
injeção de soluções anti-IgG e IgG na proteína G imobilizada
na superfície de Au.
JSST. Vol. 20, No. 4, 2011
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Fig. 3. Drene a resposta atual da proteína G a diferentes soluções de pH.
Adsorção de proteína G, imobilização de anti-IgG,
prevenção de ligação não específica por BSA (albumina de
soro bovino) e interação anti-IgG e IgG foram monitoradas
usando o BioFET. A estrutura do BioFET com interações
biomoleculares na superfície do portão é ilustrada na Fig. 4.
As concentrações de proteína G, anti-IgG, BSA e IgG foram
200㎍ /ml, 100㎍ /ml, 10㎍ /ml e 10 ㎍ /ml, respectivamente.
A resposta de saída do BioFET para cada interação de
proteína é mostrada na Fig. 5. Como esperado dos
resultados anteriores, a adsorção da proteína G e a
medição da corrente de drenagem em PBS foram
equivalentes à aplicação de voltagem negativa ao eletrodo
de porta desde o pI da proteína G é menor que o pH do
PBS. Assim, a corrente de dreno diminuiu após a adsorção
da proteína G. A taxa de variação da corrente de dreno foi
de 2,4%. Após imobilização anti-IgG, injeção de BSA e
interação anticorpo-antígeno, a variação da corrente de
dreno foi de 4,1%, 1,3% e 6,9%, respectivamente.
Assim, o BioFET pode ser utilizado como uma ferramenta analítica
para monitorar as interações biomoleculares e os resultados podem ser
comparados aos fornecidos pelos sistemas de análise SPR. Se o BioFET
for acoplado ao SPR, o sistema híbrido seria uma ferramenta poderosa
para analisar as interações biomoleculares.
Fig. 4. Estrutura do BioFET com interações biomoleculares na superfície do portão.
JSST. Vol. 20, No. 4, 2011
Young-Soo Sohn
Fig. 5. Drene as características da corrente do BioFET durante vários
interações biomoleculares.
4. CONCLUSÕES
A detecção sem etiqueta de interações biomoleculares pode
ser avaliada usando um BioFET fabricado por técnicas
convencionais de fabricação CMOS. Informações qualitativas
sobre interações biomoleculares, como imobilização de anti-
IgG na proteína G e interação entre anti-IgG e IgG, foram
adquiridas por um sistema de análise SPR. O BioFET pode ser
usado para explorar os valores de pI da proteína. As interações
biomoleculares podem ser monitoradas usando o BioFET
medindo a corrente de drenagem. Os resultados mostram que
o BioFET pode ser utilizado como ferramenta de
monitoramento de interações biomoleculares.
RECONHECIMENTO
Este trabalho foi financiado por bolsas de pesquisa da
Universidade Católica de Daegu em 2011.
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microesferas usando introdução de amostra baseada em
capilares: em direção ao desenvolvimento de uma" língua
eletrônica ", Biosens. Bioelétron., vol. 21, pp. 303-312,
2005.
[2] MJ Schoning e A. Poghossian, "avanços recentes em
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[3] K.-Y. Park, S.-B. Choi, M. Lee, B.-K. Sohn e S.-Y. Choi,
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 Características do BioFET modificado com Proteína G |9|

Actuator B-Chem., vol. 83, pp. 90-97, 2002.
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[8] Y.-S. Sohn, J. Kai e JH Ahn, "Protein array patterning
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protein chip",Sens. Lett., vol. 2, pp. 171-
174, 2004.

de plasmon de superfície", Anal. Bioanal. Chem., vol. 377, pp.
528-539, 2003.
[6] S. Choi, Y. Yang e J. Chae, "Surface plasmon
ressonance protein sensor using Vroman effect",
Biosens. Bioelétron., vol. 24, pp. 893-899, 2008.
[7] JM Lee, HK Park, Y. Jung, JK Kim, OS Jung e
BH Chung, "Imobilização direta de variantes da proteína G
com vários números de resíduos de cisteína em uma
superfície de ouro", Anal. Chem., vol. 79, pp. 2680-2687,
2007
[9] CK Mathews e KE van Holde, Bioquímica 3rd
ed., Benjamin / Cummings Pub. Co., Redwood City,
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[10] B.-K. Oh, BS Chun, K.-W. Park, W. Lee, WH Lee e JW
Choi, "Fabricação de filme LB de proteína G para
imobilização de imunoglobulina G",Esteira. Sci. Eng .: C
, vol. 24, pp. 65-69, 2004.

Young-Soo Sohn recebeu Ph.D. licenciado

em Engenharia pelo departamento de
Engenharia Elétrica e de Computação da
Universidade do Texas em Austin em
2001. Atualmente é membro do corpo docente

do departamento de Engenharia Biomédica da

Universidade Católica de Daegu.

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