Universidade Federal da Bahia Faculdade de Medicina

Departamento de Anatomia Patolgica e Medicina Legal Disciplina de Imunologia MED 194

IV - IMUNOGLOBULINAS
Monitor: Bruno Bezerril Sumrio 1. Definio. ..................................................................................................................... 1 2. Funes gerais das imunoglobulinas ............................................................................ 2 2.1 Ligao a antgenos: ............................................................................................... 2 2.2 Funes efetoras: .................................................................................................... 2 3. Estrutura bsica: ........................................................................................................... 3 3.1 Estrutura ................................................................................................................. 3 3.2 Pontes dissulfeto:.................................................................................................... 3 3.3 Regies variveis (V) e constantes (C)................................................................... 3 3.4 Regio da dobradia ............................................................................................... 4 3.5 Domnios ................................................................................................................ 4 3.6 Oligossacardeos..................................................................................................... 4 4. Estrutura da regio varivel.......................................................................................... 4 4.1 Regies Hipervariveis (HVR) ou regies determinantes de complementariedade (CDR) ........................................................................................................................... 4 4.2 Regies framework (FR): ....................................................................................... 4 5.Variantes de Anticorpos: ............................................................................................... 5 6. Fragmentos das imunoglobulinas: estrutura, funo e relaes ................................... 5 6.1 Fab ........................................................................................................................ 6 6.2 F(ab)2 ..................................................................................................................... 6 7. Classes, subclasses, tipos e subtipos das imunoglobulinas humanas ........................... 6 7.1 Classes das imunoglobulinas .................................................................................. 6 7.2 Tipos de imunoglobulinas ...................................................................................... 7 8. Questes para estudo .................................................................................................... 9 9. Bibliografia:................................................................................................................ 10

1. Definio.
So molculas de glicoprotenas que so produzidas por plasmcitos ( linfcitos B ativados) na resposta contra um imungeno na qual funcionam como anticorpos. O nome imunoglobulina surgiu do achado de que quando o soro contendo anticorpos colocado num campo eltrico, os anticorpos, que agentes da imunidade humoral, migram com as protenas globulares (Figura 1)

Separao por eletroforese de protenas do soro Figura 1

2. Funes gerais das imunoglobulinas

2.1 Ligao a antgenos: As imunoglobulinas so especficas para um antgeno (ou para um pequeno grupo de antgenos com semelhana estrutural considervel). Cada imunoglobulina geralmente liga-se a um determinante antignico espeffico (ver determinantes antignicos em Antgenos). A ligao a antgenos a funo primria dos anticorpos e pode resultar em relativa imunidade do hospedeiro. 1. Valncia A valncia de um anticorpo refere-se ao nmero de determinantes antignicos que uma nica molcula de Imunoglobulina pode se ligar. A valncia de todos os anticorpos pelo menos 2 e em alguns casos maior. 2.2 Funes efetoras: s vezes a ligao de um anticorpo com um antgeno no tem efeito biolgico direto. Em sua maioria, os efeitos biolgicos so uma conseqncia das funes efetoras (ou secundrias) dos anticorpos. As imunoglobulinas so mediadores de uma variedade dessas funes efetoras.Na maioria das vezes, a habilidade de carregar uma funo efetora particular requisita da prvia ligao do anticorpo com o seu antgeno especfico.Nem toda imunoglobulina ir mediar todas as funes efetoras existentes listadas abaixo. 1. Fixao e ativao de complemento - Induz a lise de clulas pelo complemento (ver lise celular em Complemento). 2. Poder de ligao a vrios tipos celulares Clulas fagocticas, linfcitos, mastcitos, basfilos, eosinfilos e outros tipos celulares possuem receptores de ligao para e tal ligao pode ativar essas clulas para desenvolverem alguma funo.Algumas imunoglobulinas tm o poder de se ligar a receptores no trofoblasto na placenta. Esta ligao resulta na transferncia de imunoglobulinas maternas para o feto atravs da placenta, promovendo imunidade humoral ao recm nascido.

3. Estrutura bsica:
3.1 Estrutura A estrutura bsica das imunoglobulinas est ilustrada na figura 2. Apesar de diferentes imunoglobulinas possam ter diferenas estruturais, todas so derivadas da mesma unidade bsica.

A estrutura Clique na figura bsica das imunoglobulinas para ver a estrutura molecular das imunoglobulinas
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Desenho do primeiro anticorpo intacto (IgG2A) cristalizado.

Harris, L. J., Larson, S. B., Hasel, K. W., Day, J., Greenwood, A., McPherson, A. Nature 1992, 360, 369-372. Antibody Resource Gallery

Anticorpo 3D.
Jose Saldanha, Humanization by Design

Figure 2 A. Cadeias pesadas e leves Todas as imunoglobulinas possuem uma estrutura de quatro cadeias como estrutura bsica. Elas so compostas de duas cadeias leves idnticas (23Kd) e duas cadeias pesadas tambm idnticas (5070Kd). 3.2 Pontes dissulfeto: 1. Intercadeia As cadeias pesadas e leves, assim como as duas cadeias pesadas so mantidas unidas atravs de pontes dissulfeto intercadeia e interaes no covalentes. O nmero de pontes dissulfeto intercadeia varia em diferentes moleculas de imunoglobulinas. 2. Intracadeia Estas pontes do origem aos domnios globulares polipeptdicos existentes na molcula de imunoglobulina (ver adiante). 3.3 Regies variveis (V) e constantes (C) Depois de comparadas as seqncias de aminocidos de diferentes cadeias pesadas e leves, Ficou claro que ambas as cadeias poderiam ser divididas em 2 regies baseadas na variabilidade das seqncias de aminocidos.

1. Cadeia leve (Light Chain) - VL (regio varivel, com 110 aa) e CL (regio constante, invarivel, com 110 aa) 2. Cadeia pesada (Heavy Chain)- VH (regio varivel, com 110 aa) e CH (regio varivel, com 330-440 aa) 3.4 Regio da dobradia Regio na qual os braos da molcula de anticorpo forma um Y. Esta regio tem considervel flexibilidade. 3.5 Domnios As imagens 3D das molculas de imunoglobulinas mostra que estas so formadas regies globulares (domnios), cada regio desta possuindo uma ponte dissulfeto intra-cadeia. 1. Domnios da cadeia leve - VL e CL 2. Domnios da cadeia pesada - VH, CH1 - CH3 (ou CH4 ) 3.6 Oligossacardeos Pode-se encontrar carboidratos no domnio CH2 na maioria das imunoglobulinas. Contudo, em alguns casos, podem ser encontrados em outras localidades.

4. Estrutura da regio varivel

4.1 Regies Hipervariveis (HVR) ou regies determinantes de complementariedade (CDR) Constituem 3 regies das regies variveis das molculas de imunoglobulinas que possuem a maior parte da variabilidade das seqncias de aminocidos(figura 3). Anticorpos com diferentes especificidades (i.e. diferentes stios de ligao de antgenos) possuem diferentes CDRs enquanto que anticorpos com especificidade idntica possuem CDRs iguais. Essas regies so encontradas em ambas as cadeias pesadas (H) e leves (L) 4.2 Regies framework (FR): Regies situadas entre as CDRs na regio varivel (Figure 3). Baseando-se nas similaridades e diferenas

dessas regies, possvel dividir as cadeias leves e pesadas em grupos e subgrupos. Tais grupos representam os produtos dos diferentes genes da regio varivel.

Estrutura da regio framework das regies variveis Figura 3

5.Variantes de Anticorpos:
ISOTPICA: Refere-se s diferentes classes e subclasses de cadeias leves e pesadas ALOTPICA: Ocorre principalmente na regio constante IDIOTPICA: Ocorre apenas na regio varivel (os iditipos so especficos para cada molcula de anticorpo).

6. Fragmentos das imunoglobulinas: estrutura, funo e relaes

Clique na imagem para ver a estrutura molecular de um fragmento Fab ligado uma hemaglutinina de influenza.
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Clique na imagem para ver detalhes da interao de um anticorpo monoclonal de rato interagindo com uma lisozima de ovo de galinha.
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Figura 3a

Fragmentos de imunoglobulinas produzidos por digesto proteoltica provaram ser teis para a elucidao da correlao da estrutura e funo dos anticorpos. 6.1 Fab A digesto de uma imunoglobulina com papana cliva a regio da dobradia no lado N-termunal antes da ligao dissulfeto intercadeias pesadas desdobrando a imunoglobulina em trs fragmentos ( 2 segmentos Fab, fragmentos de ligao do antgeno, idnticos e um fragmento Fc). OBS: Fragmento Fc: propriedades secundrias das Ig (ex. ativao de complemento) reconhecido por receptores Fc presentes em muitos tipos de clulas.

Fragmentos das imunoglobulinas I Figura 4

Fragmentos das imunoglobulinas II Figura 5 6.2 F(ab)2 A pepsina cliva o lado carboxi-terminal aps a ligao dissulfeto intercadeias pesadas. Tal clivagem produz um nico fragmento grande denominado F(ab)2, que corresponde aproximadamente a dois fragmentos Fab unidos por ligao dissulfeto e com funo divalente de ligao de antgenos. A poro FC extensamente degradada pela pepsina (Figure 6). O fragmento F(ab')2 capaz de se ligar ao antgeno mas no faz mediao das funes efetoras dos anticorpos.

Fragmentos das imunoglobulinas III Figura 6

7. Classes, subclasses, tipos e subtipos das imunoglobulinas humanas

7.1 Classes das imunoglobulinas Divide-se as imunoglobulinas em 5 classes diferentes baseando-se nas diferenas das seqncias de aminocidos na regio constante da cadeia pesada. Todas

as imunoglobulinas de uma mesma classe tero regio constante da cadeia pesada quase idnticas.Essas diferenas na regio constante podem ser detectados atravs de estudos sorolgicos. IgG IgM IgA IgE IgD Cadeia Pesada(No.Domnios) (5) (4) (5) (4) (4) IgG1,IgG2, IgA1,IgA2 Sub-classes ### ###### ##### IgG3 e IgG4 e SIgA Subdivises dos tipos de cadeia pesada Imunoglobulinas Ig IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgA1 IgA2 slgA IgD IgE Cadeia 1 1 2 1/2 2 3 4 pesada 7.2 Tipos de imunoglobulinas As Imunoglobulinas podem tambm ser classificadas pelo tipo de cadeia leve. Esta classificao baseada nas diferenas nas seqncias peptdicas na regio constante das cadeias leves. Estas diferenas tambm so detectadas por testes sorolgicos. 1. cadeias leves kappa () 2. cadeias leves Lambda (). Este tipo de cadeia possui 4 subtipos (1, 2, 3, 4). VIII. Estrutura e algumas propriedades e funes das classes e subclasses: Ver tabela 1 IgM - Perfaz aproximadamente 10% do conjunto de imunoglobulinas. Sua estrutura pentamrica, sendo que as cadeias pesadas individuais tm um peso molecular de aprox. 65.000 daltons e a molcula completa tem peso de 970.000!.As 5 cadeias so ligadas entre si por pontes dissulfeto e por uma cadeia polipeptdica inferior chamada de cadeia J. A IgM encontrada principalmente no meio intravascular, sendo uma classe de anticorpos produzida agudamente nas fases agudas iniciais das doenas que desencadeiam resposta humoral. encontrada tambm na superfcie dos linfcitos B de forma monomrica, realizando a funo de receptor de antgenos. Figuras 7, 8 e 9. IgA - Representa 15-20% das imunoglobulinas do soro humano. No homem, mais de 80% da IgA ocorre sob a forma monomrica e est presente sangue nesta forma. a imunoglobulina predominante em secrees: saliva, lgrima, leite, mucosas do trato gastrintestinal, trato respiratrio e geniturinrio. Nestas secrees ela encontra-se ligada a um componente secretor (70.000 daltons), e forma a IgA secretora, composta por 2 unidades ligadas a uma cadeia J. Figuras
10 e 11.

IgG - uma imunoglobulina monomrica simples de 150.000 daltons, perfaz 80% das imunoglobulinas do organismo. Apresenta-se igualmente distribuda nos compartimentos extracelulares. o anticorpo principal nas respostas imunes secundrias. Figura 12 e 13 e tabela 2. IgE - Est presente no soro em baixas concentraes. encontrada na membrana de superfcie de basfilos e mastcitos. Tem um papel importante na imunidade ativa contra parasitas helmintos, atraindo os eosinfilos. Figura 14. IgD - IgD est presente no soro em concentraes muito baixas. encontrada na superfcie de muitos linfcitos assim como IgM, onde provavelmente serve

como receptor de antgeno. A funo dela no est muito bem definida.

Figura 15. Tabela 1:PROPRIEDADES FUNCIONAIS DAS CLASSES DE Ig HUMANA.

Propriedade
Concentrao srica (mg/dl) Vida mdia srica (dias) Fixao de complemento (via Clssica) Passagem pela placenta Degranulao de basfilos e mastcitos Lise de bactrias Atividade antiviral

IgG
1000 23 + + ? + +

IgA
200 6 + +++

IgM
120 5 ++++ +++ +

IgD
3 3 ? ?

IgE
0.05 2 ++++ ? ?

Figuras:

Estrutura da IgM I Figura 7

Estrutura da IgM II Figura 8 clula B (BcR) Figura 9

Receptor

de

Estrutura da IgA nas secrees Figura 10

Figura 13 Estrutura das diferentes IgG humanas IgG1 IgG2

Origem IgA solvel Figura 11

da

Estrutura da IgG Figura 12

IgG3 IgG4

Estrutura da IgE Figura 14

Estrutura da IgD Figura 15

Tabela 2:

PROPRIEDADES FUNCIONAIS DAS SUB-CLASSES DE IgG HUMANA.

Atividade Conc. srica (% da IgG total) Vida mdia srica (dias) Ativao C (via Clssica) Ativao C (via Alternativa) Ligao com FcR em Neutrfilos Ligao com FcR em Macrfagos Passagem pela Placenta Susceptibilidade digesto proteoltica IgG1 70 23 +++ + + +++ +++ + IgG2 20 23 ++ + + + + + IgG3 6 7 ++++ + + +++ +++ ++++ IgG4 4 23 +++ + +++ +

Cadeia J: As formas secretadas de IgM e IgA geralmente na forma de polmeros da unidade bsica de quatro cadeias, que incluem um peptdeo adicional denominado cadeia J. Tal cadeia uma pequena protena que do ponto de vista estrutural no est relacionada com as cadeias pesadas e leves, mas que sintetizada por todos os plasmcitos que secretam imunoglobulinas polimricas. Sua funo facilitar a polimerizao correta. Componente secretor: Glicopeptdeo que se associa exclusivamente ao IgA ( na maioria das vezes atravs de foras no covalentes) nas secrees do organismo. No exibe nenhuma semelhana aprecivel com a cadeia J ou com qualquer polipeptdeo das Imunoglobulinas. No sintetizado por linfcitos, mas sim pelas clulas epiteliais da mucosa situadas sobre as placas de Peyer e em outros tecidos linfides submucosos. Estas clulas epiteliais captam a IgA secretada pelas clulas linfides, ligam-na ao componente secretor e transportam o complexo atravs da barreira epitelial.
A figura ao lado mostra a IgA atravessando a mucosa e recebendo a pea secretora.

8. Questes para estudo

Explique a especificidade das imunoglobulinas. 1. Explique a heterogeneidade dos anticorpos.

2. Faa um esquema do que seria a produo de imunoglobulinas. 3. Como a produo de anticorpos poderia causar a infertilidade de uma mulher? A partir do conhecimento adquirido responda: Qual o papel das imunoglobulinas na resposta imune primria e secundria?

9. Bibliografia:
Bsica : www.roitt.com MEDICAL IMMUNOLOGY, 9a Edio Daniel P. Stites, Abba I, Terr, Tristram G. Parslow

Avanada : http://www.med.sc.edu:85/mayer/IgStruct2000.htm