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  • 2852-Texto Do Artigo-10899-11685-10-20071213

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    PRODUGAO IN VITRO DE MUDAS DE Cattleya walkeriana e Cyrtopodium palmifrons A PARTIR DE SEMENTES! Leila Garcés de Araijo, Iraides Femandes Cameiro? ¢ Anne Sitarama Prablu* IN VITRO PRODUCTION OF SEEDLINGS OF Cattleya ‘walkeriana AND Cyrtopodium palmifrons FROM SEEDS Seeds of Cattleya walkeriana and Cyrtopodium ‘palmifrons (Orchidaceae) were ascepically transfered to culture ‘medium Knudson, MS (Murashige & Skoog) nd MS suplemented ‘with IAA (1,15 and30 mg Land knetine (.25, and 10 mg *)for germination. They were Kept rom temperature (2342°C) under fluorescent light for 30 to 45 days. The seedlings were transfered to pots containing eviture medium Knudson and incubated forfour months at room temperature and transfered to fieah clture medium until the seedlings attained approximately 1101020 em size for climatization. The in vir cultivation of bth plant species was considered viable. However the performance ofthe fwo orchids differed in relation to protocorms oxidation levels and in vitro growth. The results showed that less concentrated culture medium suchas Knudson can be uized without the adtion of growth regulators forthe production of Catlya walkeiana 18 Well es Cyrtopodiam palmifrons. Sementes de Cattleya walkeriana ¢ de Cyrtopodium palmifrons(Orehidaceae) foram transferidassssepicamente para melos de cultura Knudson, MS (Murashige & Skoog) e MS. suplementado com IAA (1, 15 ¢30 mg") ¢ cinetina (0.25, 5e 10mg L*), para germinagto, Ela Foram incubadas a tempera rade 2322°C, sob hz uorescente por um periodo de 30 45 das, ‘As plintuls bid foram repiadas para meio Knudson, perma- rnecendo em incubagko por quatro meses e, em seguids, Itansferidas para meio fresco, até atingicem tamanho part aclimatagl0. © culivo in vitro de ambas as espécies Soi conside- rado vidvel, vendo comportamenta diferente entre as especies, cm relago & produsto de protocormdides,niveis de oxidagio © crescimento in vitro, Ox resultados mestraram quem mio me- ‘os concenttado como Knudson pode se uilizado ser adigho de reguladores de crescimento para produsio de mudas tanto para Cattleya walkeriana quanto para Cyriopodium palmfrons. KEY WORDS: Orchidaceae, tissue culture, orchid INTRODUCAO. As Orchidaceae constituem uma das maiores familias de plantas com flores ¢ uma das mais alta- ‘mente evoluidas (Berg 1998). De acordo com esti- mativas, existem 700 géneros e 25.000 especies, cextremamente diversificadas, sendo encontradas em todo o mundo, desde 0 Artico até 0 Antartico PALAVRAS.CHAVE: Orchidaceae, cullurn de tecidos, orquides (Kerbauy 1995). Das mithares de espécies existentes, a maioria ¢ originaria de regides tropicais ¢ subtropicais, predominando as formas epifiticas rupicolas, enquanto, fora dos trépicos, predomina a forma terrestre (Kerbauy 1995). Catleya walkeriana e Cyrtopodium palm fo espécies nativas do Brasil, muito omamentais se adaptam bem 20 cultivo em vasos (Jim & McQueen 2. Trabalho etre para publiasto em juno de 1999 2. Boluista de Doutorado do CNPq do Programa de Pos Grasuagto da Escola de Agronemia de Universidade Federal de Gite. CP, 131 — (CEP 4001-970. Gio 3. BacoladeAggonomia da Universidade Federal de Gai, CF. 131 - CEP 74001970, Goitia-GO, ‘4 Enbrape Artz e Feito, CP 179~CEP.75575.000, Seto Ania de Goits-GO., 68 ~ Arajo, LG. al Produyo i vir de mada de Cateya walkeriana ¢ 1993). Como as demais espécies, elas siio propaga- das naturalmente, através de sementes muito peque~ nas, sem endosperma, as quais requerem associago ‘com micorrizas para germinagao natural. Isto faz com que, apesar das milhares de sementes produzidas por cépsula, apenas algumas cheguem a germinar e que as densidades em populagdes naturais sejam relativa- mente baixas (Berg 1998). Contudo, em 1922, 0 pes- quisador Lewis Knudson obteve a germinagéo assimbidtica das sementes de orquideas in vitro (Fa- ria & Stancato 1998), o que vem possibilitar a expan- sio da propagagio comercial. ‘A somente de orquidea contém um embrido de, aproximadamente, 0,1 mm, que, durante a germi- nagdo, difata-se para formar uma pequena estrutura denominada protocormo ou protocorméide (Hoffmann et al, 1998), Para a obtengio dos protocorméides in vitro, 0 meio de cultura é dependente da espécie, cul- tivar ow hibrido, pois, sob a denominacao genérica de orquidea, insere-se uma imensa diversidade taxonémica, estrutural, bioquimica, fisiologica ¢ ge~ rética (Kerbauy 1995), Os meios de cultura inialmente ‘empregados foram o de Knudson ede Vacin & Went; atualmente se utiliza também omeio de Murashige & Skoog (1962). Thompson (1977) recomenda a utili- zagdo dos meios de Knudson ou o meio MS, ambos suplementados com 1 a 30 mg L * de acido indolacético (IAA) c 0,04 a 10 mg L * de cinetina. As informagdes quanto ao cultivo in vitro de Cattleya walkertana e Cyrtopodium palmifrons $80 ‘escassas, sendo necessério 0 desenvolvimento de um protocolo apropriado para germinagdo e crescimento MATERIAL EMETODOS Foram utilizadas neste trabalho sementes de duas espécies de orquidea, Cattleya walkeriana e Cyrtopodium palmifrons. As capsulas contendo as sementes foram coletadas no inicio da maturagdo. Inicialmente, as capsulas foram lavadas em agua correntee, em seguida, submetidas ao tratamento dedescontaminagio, em cémara de fluxo laminar, uti lizando-se NaOCl 1,5%, durante 30 minutos. Apés lavagem em agua esterilizada por trés vezes, as cip- sulas foram cortadas, longitudinalmente, com auxilio, de bisturi, para, em seguida, retirar as sementes © colocé-las sobre 0 meio de cultura Foram utilizados dois meios de cultura basi- cos, ou seja, 0 Knudson ¢ 0 MS e nove modifica- es do meio MS, em que se variaram as concentra- ‘g8es de dcido indolacitico - IAA (1, 15 ¢ 30 mg L*) € cinetina (0,25; 5 e 10 mg L *). © delineamento experimental foi o inteiramente casualizado com qua- tro repeticdes. A incubagdo foi realizada em uma sala de crescimento com temperatura ambiente (232°C) sob luz florescente por um periodo de 30 a 45 dias (Tabela 1), Avaliaram-se tanto a contaminagdo quanto ‘oxidag2o aos 17 dias apés a semeadura, sem, no en- tanto, descartar as placas que se apresentavam parci- almente oxidadas; as contaminadas e totalmente oxi- dadas foram desprezadas. A germinacao foi avaliada aos 30 dias da se- ‘meadura para C. walkeriana ¢ aos 45 dias para C. palmifrons, época em que ocorreu 0 inicio da forma ¢40 dos protocorméides. Para a germinagio, consi~ deraram-se fraca (+) ¢ boa (+), quando menos que 50% entre 50 a 100% da superficie do meio de cultura estavam cobertas por sementes germinadas, respectivamente, As plantulas obtidas de C. walkeriana foram transferidas para meio Knudson ¢ subcultivadas por duas vezes, permanecendo em incubago por cito meses, O crescimento, apés quatro meses de cultivo, foi considerado: a) fraco (+) para uma ocupagao me- nor que 50% da superficie do meio de cultura por protocomméides e plintulas e nos casos ems que a ‘maioria das plntulas apresentava altura em tomo de 0,3 cm; b) moderado (++) para uma ocupagdo entre 50 a 80% da superficie do meio de cultura por protocormdides e plantulas, sendo que a maioria des- tas apresentava altura em tomo de 0,5 em; ¢) bom (+4) para uma ocupagao maior que 80% da superfi- Cie do meio de cultura por protocorméides ¢ plantulas, sendo que a maioria das plantulas apresemtava altura em tomo de 0,8 cm. Aas oito meses de cultivo in vitro, as plantulas que apresentavam raizes foram selecionadas c transplantadas para vasos de barro con- tendo pedagos de telha (tergo inferior) ¢ pé de xaxim (dois tergos superiors). Em seguida, foram conduzidas e mantidas em casa-de-vegetagiio com sombreamento de 60% e temperatura ambiente, A umidade relativa do ar foi aumentada através de umidificadores. Os vasos, contendo as plintulas, fo- ram colocados em bandejas de plastico, em cujo inte- rior se mantinha constantemente uma camada de 5 om de agua, A comparagao de germinagao e crescimento foi feita apenas entre os tratamentos, ou seja, no foram atribuidas notas comparativas entre as duas espécies trabalhadas Tabela 1. Composigéo dos meios MS & Knudson modifieados ¢ uilizados nas fascs de ger- minagdo de sementes e crescimento de plintulas de Cattleya walkeriana e Cyrtopodium palmifrons (em mg L”) MeioMS__ Meio Knudson 250 250 vé. 23 105 6 025 0925 92s os 7 05 zi 58 Pesquisa Agpopecuria Tropical, 29(2):67-71, 1999 — 69 RESULTADOS EDISCUSSAO Em relago contaminago observou-se um indice de 2,2%, ou seja, apenas uma placa se apre~ sentou contaminada, 0 que pode ser considerado bai- xo. Contudo, maiores cuidades com a assepsia na fase de semeadura em camara de fluxo laminar po= dem reduzir esse indice para zero, resultado esse ob- tido em trabalhos anteriores. As placas semeadas com a espécie C. ‘palmifrons apresentaram elevados indices de oxida- 0 quando 0 meio de cultura continha niveis mais baixos de auxina (1 e 15 mg L “). Nos meios MS Knudson e quando a concentragao de auxina adicio- nada ao meio MS foi de 30 mg L.*, nd houve oxida- ao, A germinago ocorreu aos 45 dias apés a seme- adura, sendo considerada boa nos meios MS Knudson (Tabela 2), Placas contendo C. walkeriana no apresen- taram oxidago ¢ a germinagao foi boa em todos os meios de cultura Apés quatro meses de cultivo in vitro, as plantulas de C. palmifrons apresentaram-se mais desenvolvidas em meio Knudson, enquanto as plintulas de C. walkeriana, em meio MS acreseido de 5 mg L!de cinetina ¢ 30 mg L “de IAA (Figura 1), Plantulas de C. walkeriana ndo se desenvolveram ‘bem em meio MS, sem o acréscimo de fitorreguladores ‘ou em baixos niveis de citocinina (0,25 mg L~! de cinetina) (Tabela 2), ‘Tabela 2. Oxidagto, germinagtioe crescimento in vitro de Cattleya walkeriana e Cyrtopodium palmifons em diferentes meios de cultura. Meio de Cinetna! ‘Oxidagto Germinagi ‘Cressimento® ccltura TAA — = 7 (ng) CC. walke-C. poli. C. walke-C. palmi-—C, wallke=—C. pal rina frons rana frome riana frome Ms 00. ° o 4 + + ” 03s ° 50 a + “ “ 02/15 ° 30 ” + + + 035/30 ° 0 + + + “ a ° 100 + + ’ “ sis ° 50 + + * “ 5130 0 0 * + - 4 101 o 100 + + +H rons ° 100 + + + 1030 ° ° ' + “ * Knulon 0) ° ° + * + He Germinao fines, “+ ~ Gerinasiobon Cresent iso; + ~ Crescimento modern; ++ ~Cresimento bom, 70 ~ Aabjo, LG. et a. Produsto m vitro de mudas de Cateye waltriana€ Os meios de cultura sem a adigao de fitorreguladores poderiam ser recomendados, na fase inicial, para as duas espécies estudadas, j que a pro- dugdo de protocorméides ¢ elevada, proporcionando, assim, um bom rendimento na produgdo de mudas (Figura 1). Além do mais, a ndo-adigéo de fitorreguladores ao meio de cultura reduz 0 custo de produgio da muda in vitro. De acordo com os resultados obtidos consta- tou-se uma diferenga de comportamento em relago & oxidagdo, a formagao de protocorméides ¢ a0 cres- cimento in vitro das duas espécies estudadas, 0 que ‘vem de encontro as observagdes de Kerbauy (1995). ‘A melhor resposta a adigdo de fitorreguladores ao meio de cultura.foi obtida pela espécie C. walkeriana, en- quanto C. palmifrons apresentou melhor germinago ‘ecrescimento em meios contendo sais minerais e subs- ‘ncias orgfinicas, sem a adigdo de fitorreguladores. (O tempo de repicagem para meio fresco foi de quatro meses, o que pode ter levado ao menor cresci- mento das plntulas in vitro, Em relago 4 metodologia utilizada para a aclimatizagao das mudas, a resposta foi excelente, ja que houve 100% de pegamento. En- tretanto, observou-se que as mudas apresentam vari- abilidade em relago ao crescimento, Sugere-se, para futuros trabalhos, que o perio- do para subcultivo seja de dois ou trés meses, 0 que poderia levar as pléntulas a um crescimento mais ace~ lerado. Ren r . Figura 1. Produgio in vitro de mudas de orquideas. a) Semeadura de Cyrtopodium palmifrons; b) Produgéo de protocorméides de Cyrtopodium palmifrons, 30 dias apés a semeadura; c) Plintulas de Cyrtopodium palmifrons obtidas a partir da semeadura em meio Knudson ¢ MS; d) Plantulas de Cattleya walkeriana obtidas a partir da semeadura em meio Knudson e MS CONCLUSOES Com base nos resultados obtidos pode-se con-

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