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ESTADO DE SANTA CATARINA SECRETARIA DE ESTADO DA SADE

SISTEMA NICO DE SADE

SUS

LABORATRIO CENTRAL DE SADE PBLICA DE SANTA CATARINA

MANUAL DE ORIENTAES PARA COLETA, PREPARO E TRANSPORTE DE MATERIAL BIOLGICO

Atualizado em outubro/2005

MANUAL DE ORIENTAES PARA COLETA, PREPARO E TRANSPORTE DE MATERIAL BIOLGICO LACEN/SC

ELABORADO NO LABORATRIO CENTRAL DE SADE PBLICA DO ESTADO DE SANTA CATARINA LACEN/SC

ELABORAO Semramis Maria Duarte Dutra Bioqumica Mara Regina Bithencourt Rubin Bioqumica ORGANIZAO E EDITORAO Mara Regina Bithencourt Rubin Bioqumica Semramis Maria Duarte Dutra Bioqumica Brbara Duarte Dutra Estudante de Design Grfico

permitida a reproduo parcial ou total desta obra, desde que citada a fonte.

LABORATRIO CENTRAL DE SADE PBLICA LACEN Avenida Rio Branco, n 152 Fundos Centro Fone: PABX: (48) 3251-7800 FAX: (48) 3251-7900 CEP: 88015-201 Florianpolis Santa Catarina

e-mail: lacen@saude.sc.gov.br 2

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Acontece a todo o momento: as pessoas decidem mudar seu futuro.

Richard Bach

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SUMRIO

I. APRESENTAO......................................................................................................8 II. CAPTULO I: LABORATRIOS DA REDE............................................................. 10 1. CONDIES GERAIS ......................................................................................... 10 1.1 CUIDADOS PRELIMINARES ...................................................................................... 10 1.2 PROCEDIMENTOS DE BIOSSEGURANA .................................................................... 10 1.2.1 Equipamentos de Proteo Individual EPIs............................................... 10 1.2.2 Equipamentos de Proteo Coletiva EPCs ............................................... 11 1.2.3 Lavagem das Mos ..................................................................................... 11 1.2.4 Limpeza da Bancada de Trabalho ............................................................... 11 1.2.5 Descarte de Materiais Contaminados e Prfuro-cortantes ........................... 12 1.3 REQUISIES, FICHAS DE NOTIFICAO E FORMULRIOS PARA AUTORIZAO DE PROCEDIMENTOS DE ALTO CUSTO (APAC)................................................................... 13 1.3.1 Requisies e Fichas de Notificao............................................................ 13 1.3.2. APAC.......................................................................................................... 14 1.4 COLETA DE AMOSTRAS .......................................................................................... 14 1.4.1 Coleta de Sangue ........................................................................................ 14 1.4.1.1 Requisio ............................................................................................ 14 1.4.1.2 Condies do paciente .......................................................................... 14 1.4.1.3 Coleta (Puno Venosa) ....................................................................... 15 1.5 PREPARO DA AMOSTRA.......................................................................................... 15 1.5.1 Preparo dos tubos que vo receber a amostra ............................................ 15 1.5.2 Centrifugao / separao do soro ou plasma ............................................. 16 1.6 IDENTIFICAO DA AMOSTRA .................................................................................. 16 1.7 ACONDICIONAMENTO PARA TRANSPORTE................................................................. 17 1.7.1 Para transporte de curta distncia ............................................................... 17 1.7.2. Para transporte de longa distncia.............................................................. 17 1.8 CONDIES DE TRANSPORTE NAS VIATURAS ........................................................... 18 III. CAPTULO II .......................................................................................................... 19 1. RELAO DE EXAMES REALIZADOS NAS SEES DO LACEN ...................... 19 1.1 SEO DE BACTERIOLOGIA .................................................................................... 19 1.2 SEO DE HANSENASE ......................................................................................... 20 1.3 SEO DE LEPTOSPIROSE ..................................................................................... 21 1.4 SEO DE MALRIA E MICROSCOPIA DE CHAGAS (DCA) .......................................... 21 1.5 SEO DE MICOLOGIA ........................................................................................... 21 1.6 SEO DE TUBERCULOSE ...................................................................................... 22 1.7 SEO DE IMUNOLOGIA ......................................................................................... 22 1.8 SEO DE VIROLOGIA ........................................................................................... 23 1.9 SEO DE BIOLOGIA MOLECULAR ........................................................................... 23 1.10 SETOR DE ANLISES NEONATAIS .......................................................................... 23 2. RELAO DE EXAMES ENCAMINHADOS PELO LACEN PARA LABORATRIOS DE REFERNCIA.......................................................................... 24 2.1 LABORATRIOS DE REFERNCIA............................................................................. 24 2.2 ORIENTAES ESPECFICAS PARA A COLETA E TRANSPORTE DAS AMOSTRAS ............... 24 4

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2.2.1 Para Febre Maculosa................................................................................... 24 2.2.2 Para Filariose .............................................................................................. 24 IV. CAPTULO III......................................................................................................... 25 1. ORIENTAES DE COLETA E TRANSPORTE..................................................... 25 2. SEO DE BACTERIOLOGIA ............................................................................... 26 2.1 ORIENTAES GERAIS DE COLETA E TRANSPORTE DAS AMOSTRAS EM RELAO AO EXAME SOLICITADO ..................................................................................................... 26 2.2 ORIENTAES ESPECFICAS DE COLETA .................................................................. 33 2.2.1 Urina............................................................................................................ 33 2.2.1.1 Amostra de urina de jato mdio ............................................................. 33 2.2.1.2 Amostra de urina de 1 jato ................................................................... 33 2.2.2 Fezes para Doenas Transmitidas por Alimentos ........................................ 34 2.2.2.1 Fezes para pesquisa de Enterobactrias Patognicas .......................... 34 2.2.2.2 Fezes para pesquisa de Vbrio cholerae................................................ 34 2.2.2.3 Amostras para pesquisa de Salmonella Typhi (febre tifide) ................. 35 2.2.3 Secrees Genitais...................................................................................... 37 2.2.3.1 Coleta da secreo uretral masculina para exame a fresco................... 37 2.2.3.2 Coleta da secreo uretral masculina para diagnstico de Neisseria gonorrhoeae ..................................................................................................... 37 2.2.3.3 Coleta da secreo uretral masculina para diagnstico de clamdia ...... 37 2.2.3.4 Coleta da secreo uretral masculina para diagnstico de Micoplasma e Ureaplasma urogenitais .................................................................................... 37 2.2.3.5 Coleta da secreo uretral feminina para diagnstico da clamdia......... 38 2.2.3.6 Coleta da secreo vaginal para o exame a fresco ............................... 38 2.2.3.7 Coleta da secreo endocervical para diagnstico da Neisseria gonorrhoeae ..................................................................................................... 38 2.2.3.8 Coleta de secreo anal para diagnstico de Neisseria gonorrhoeae.... 38 2.2.3.9 Coleta de secreo endocervical para diagnstico da clamdia. ............ 38 2.2.3.10 Coleta da secreo endocervical para diagnstico de Micoplasma e Ureaplasma urogenitais .................................................................................... 39 2.2.3.11 Coleta da secreo vaginal para cultura de germes comuns ............... 39 2.2.3.12 Coleta de material de leso (cancro duro- Treponema pallidum) ......... 39 2.2.3.13 Coleta de material de leso (cancro mole/cancride Haemophilus ducreyi)............................................................................................................. 39 2.2.4 Lquor .......................................................................................................... 40 2.2.5 Sangue (Hemocultura)................................................................................. 42 2.2.6 Escarro ........................................................................................................ 43 2.2.7 Secreo de orofaringe e nasofaringe para Pesquisa de Corynebacterium diphtheriae ........................................................................................................... 43 2.2.8 Secreo de nasofaringe para Pesquisa de Bordetella pertussis ................. 46 2.2.9 Ponta de cateter .......................................................................................... 48 2.2.10 Secreo de Ouvido .................................................................................. 49 2.2.10.1 Secreo de Ouvido mdio ................................................................. 49 2.2.10.2 Secreo de Ouvido externo ............................................................... 49 2.2.11 Pele (abscessos e exsudatos) e Bipsias .................................................. 49 2.2.11.1 Leso aberta ....................................................................................... 49 2.2.11.2 Abscesso fechado ............................................................................... 49 2.2.11.3 Ferida de queimadura ......................................................................... 49 2.2.11.4 Pstula e vescula ............................................................................... 50 5

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2.2.11.5 Bipsia ................................................................................................ 50 2.3. MODELOS DE KITS E FICHAS UTILIZADOS NA SEO DE BACTERIOLOGIA ..................... 50 2.3.1 Kit para Coqueluche .................................................................................... 50 2.3.2 Kit para Difteria............................................................................................ 50 2.3.3 Kit para Coprocultura .................................................................................. 50 2.3.4 Kit para a RENAGONO................................................................................ 50 2.3.5 Ficha de encaminhamento de Amostras Clnicas......................................... 50 3. SEO DE HANSENASE...................................................................................... 56 3.1 ORIENTAES GERAIS DE COLETA E TRANSPORTE DAS AMOSTRAS EM RELAO AO EXAME SOLICITADO ..................................................................................................... 56 3.2 ORIENTAES ESPECFICAS DE COLETA .................................................................. 56 3.3 TRANSPORTE ....................................................................................................... 57 3.3.1 Transporte de lminas para Superviso Indireta .......................................... 57 4. SEO DE LEPTOSPIROSE ................................................................................. 59 4.1 ORIENTAES GERAIS DE COLETA E TRANSPORTE DAS AMOSTRAS EM RELAO AO EXAME SOLICITADO ..................................................................................................... 59 4.2 ORIENTAES ESPECFICAS DE COLETA .................................................................. 59 5. SEO DE MALRIA E MICROSCOPIA DE CHAGAS (DCA) .............................. 60 5.1 ORIENTAES GERAIS DE COLETA E TRANSPORTE DAS AMOSTRAS EM RELAO AO EXAME SOLICITADO ..................................................................................................... 60 5.2 ORIENTAES ESPECFICAS DE COLETA, PREPARO DA AMOSTRA E TRANSPORTE DAS LMINAS. ................................................................................................................... 60 5.2.1 Tcnica de Coleta e Preparao da Gota Espessa...................................... 60 5.2.2 Tcnica de Preparao de Esfregao (Distendido) ...................................... 62 5.3 TRANSPORTE DE LMINAS PARA SUPERVISO INDIRETA ............................................ 62 6. SEO DE TUBERCULOSE .................................................................................. 63 6.1 ORIENTAES GERAIS DE COLETA E TRANSPORTE DAS AMOSTRAS EM RELAO AO EXAME SOLICITADO ..................................................................................................... 63 6.2 ORIENTAES ESPECFICAS DE COLETA E TRANSPORTE ............................................ 63 6.3 ENVIO DE CULTURAS DO MICOBACTERIUM TUBERCULOSIS PARA O LACEN ................. 64 6.4 TRANSPORTE DE LMINAS PARA SUPERVISO INDIRETA ............................................ 66 7. SEO DE MICOLOGIA ........................................................................................ 67 7.1 ORIENTAES GERAIS DE COLETA E TRANSPORTE DAS AMOSTRAS EM RELAO AO EXAME SOLICITADO ..................................................................................................... 67 7.2 ORIENTAES ESPECFICAS DE COLETA .................................................................. 68 7.2.1 Micoses Superficiais .................................................................................... 68 7.2.1.1 Pele....................................................................................................... 68 7.2.1.2 Couro Cabeludo .................................................................................... 68 7.2.1.3 Cabelos e Pelos .................................................................................... 68 7.2.1.4 Unhas.................................................................................................... 69 7.2.1.5 Membranas Mucosas ............................................................................ 69 7.2.1.6 Ouvido................................................................................................... 69 7.2.1.7 Olho ...................................................................................................... 69 7.2.2 Micoses Subcutneas.................................................................................. 70 7.2.3 Micoses Profundas (Sistmicas).................................................................. 70 7.2.3.1 Escarro.................................................................................................. 70 7.2.3.2 Lquor (LCR Lquido Cfalo Raquidiano) ............................................ 71 6

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7.2.3.3 Sangue (Hemocultura).............................................................................. 71 7.2.3.4 Medula ssea ....................................................................................... 72 7.2.3.5 Fluidos .................................................................................................. 72 7.2.3.6 Bipsias ................................................................................................ 72 7.2.3.7 Sorologias ............................................................................................. 72 7.3 TRANSPORTE ....................................................................................................... 72 8. SEO DE IMUNOLOGIA...................................................................................... 73 8.1 ORIENTAES GERAIS DE COLETA E TRANSPORTE DAS AMOSTRAS EM RELAO AO EXAME SOLICITADO ..................................................................................................... 73 8.2 ORIENTAES ESPECFICAS DE COLETA .................................................................. 74 9. SEO DE VIROLOGIA......................................................................................... 75 9.1 ORIENTAES GERAIS DE COLETA E TRANSPORTE DAS AMOSTRAS EM RELAO AO EXAME SOLICITADO ..................................................................................................... 75 9.2 ORIENTAES ESPECFICAS DE COLETA .................................................................. 75 9.2.1 Hepatite ....................................................................................................... 75 9.2.2 HIV .............................................................................................................. 76 9.2.3 Vrus Respiratrio ........................................................................................ 76 10. BIOLOGIA MOLECULAR ..................................................................................... 77 10.1 ORIENTAES GERAIS DE COLETA E TRANSPORTE DAS AMOSTRAS EM RELAO AO EXAME SOLICITADO ..................................................................................................... 77 10.2 ORIENTAES ESPECFICAS DE COLETA, PROCESSAMENTO E TRANSPORTE ............... 77 10.2.1 HIV Quantitativo (Carga Viral).................................................................... 77 10.2.1.1 Coleta da amostra ............................................................................... 77 10.2.1.2 Preparo da amostra no Tampo de Lise.............................................. 78 10.2.1.3 Conservao da Amostra e transporte ................................................ 78 10.2.2 HIV Genotipagem ..................................................................................... 78 10.2.2.1 Coleta da amostra ............................................................................... 78 10.2.2.2 Preparo da amostra, conservao e transporte ................................... 79 10.2.3 Testes Qualitativos, Quantitativos (Carga Viral) e Genotipagem do RNA do HCV ..................................................................................................................... 79 10.2.3.1 Coleta da amostra ............................................................................... 79 10.2.3. 2 Armazenamento da Amostra .............................................................. 79 10.2.3.3 Transporte da amostra ........................................................................ 80 11. ANLISES NEONATAIS (TESTE DO PEZINHO) ................................................. 81 11.1 ORIENTAES GERAIS DE COLETA DAS AMOSTRAS EM RELAO AO EXAME SOLICITADO ................................................................................................................................ 81 11.2 ORIENTAES ESPECFICAS PARA A COLETA .......................................................... 81 12. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS...................................................................... 82

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I. APRESENTAO

Este Manual tem por finalidade se adequar s exigncias do Programa de Qualidade e s Normas de Biossegurana nos Servios de Sade, procurando de forma prtica sistematizar as orientaes para coleta, preparo e transporte de material biolgico, bem como atender ao princpio do SUS de divulgao de informaes quanto ao potencial dos servios de sade e a sua utilizao pelo usurio (Lei 8080/90, cap. 2 inciso VI). Se as orientaes aqui apresentadas forem bem observadas, as circunstncias para as anlises sero mais favorveis, pois, para que o laboratrio possa oferecer resultados confiveis, no basta que as tcnicas sejam executadas de forma correta, necessrio que se receba uma boa amostra. Entende-se como boa amostra aquela obtida em quantidade suficiente, em recipiente adequado, bem identificado e corretamente transportado. Este Manual prope a participao das instituies envolvidas, estimulando-as procura de melhoria contnua em relao Qualidade e as Normas de Biossegurana, criando uma integrao positiva entre as Unidades de Sade. Tal iniciativa dever criar procedimentos bsicos comuns, para que os usurios possam ter confiana, de que recebero atendimento semelhante independentemente do local em que sejam atendidos. Dessa maneira, temos o prazer de encaminhar o presente Manual, para que todos tenham o conhecimento dos procedimentos que utiliza o LACEN, podendo, antecipadamente, ajustar sua instituio aos critrios preconizados por estes.

Direo do LACEN/SC
FLORIANPOLIS, OUTUBRO/2003 (Atualizado em outubro/2005)

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AGRADECIMENTO ESPECIAL

A todos os servidores do LACEN pela colaborao na ocasio de coleta das informaes contidas neste Manual.

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II. CAPTULO I: LABORATRIOS DA REDE

1. CONDIES GERAIS

1.1 Cuidados Preliminares Ao iniciar os trabalhos, o tcnico deve organizar seu material de acordo com a amostra a ser coletada, estar portando seus Equipamentos de Proteo Individual EPI, ter seus Equipamentos de Proteo Coletiva - EPC disposio, conferir todos os dados da requisio e preparar a identificao da amostra. 1.2 Procedimentos de Biossegurana 1.2.1 Equipamentos de Proteo Individual EPIs So roupas ou equipamentos utilizados para proteger o trabalhador, do contato com agentes infecciosos, txicos, corrosivos, calor excessivo e outros perigos, bem como o seu experimento ou produto. Port. 32/4-NR-6-MT 08/06/78. a) Jaleco: uso em todos os tipos de procedimentos, com as seguintes caractersticas: manga longa com elstico no punho, comprimento mnimo na altura dos joelhos, abertura frontal e de tecido preferencialmente de algodo ou tecido no inflamvel; b) Luvas: para coleta, manuseio, acondicionamento de materiais biolgicos; pode ser de procedimento ou cirrgica, em ltex; c) culos de proteo: usar em situaes de risco de formao de aerossis, salpicos de material contaminado ou quebras de vidraria; d) Mscara de Proteo Respiratria e Facial: usar em situaes de risco de formao de aerossis e salpicos de material potencialmente contaminado.

Figura 1: Equipamentos de Proteo Individual

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1.2.2 Equipamentos de Proteo Coletiva EPCs So equipamentos que possibilitam a proteo do trabalhador, do meio ambiente e do produto ou pesquisa desenvolvida. a) Dispositivos de pipetagem Nunca usar a boca para pipetar, porque alm do risco de aspirao, torna mais fcil a inalao de aerossis. Utilizar um dos vrios tipos de bulbos, pra ou pipetadores (Figura 2);

Figura 2: Modelos de Dispositivos de Pipetagem

b) Cabines de Segurana Biolgica CSB So usadas como barreira primria para evitar fuga de aerossis, dando proteo ao manipulador, ao meio ambiente e amostra ou procedimento; c) Kit para limpeza (saco para autoclave, p, escova, balde, etiquetas, protetores de sapatos) - para casos de derramamentos e quebras de materiais contaminados; d) Kit de Primeiros Socorros. 1.2.3 Lavagem das Mos a) Deve haver uma pia exclusivamente para lavagem das mos, colocada em local estratgico; b) Lavar as mos sempre antes e aps o uso de luvas; c) Lavar as mos sempre ao trmino das atividades. 1.2.4 Limpeza da Bancada de Trabalho a) Deve ser feita com lcool a 70% no incio e no trmino das atividades ou sempre que houver necessidade; b) Quando houver derramamento de material biolgico, limpar imediatamente com soluo de hipoclorito a 2% em preparao diria. Notas:

Se no houver lcool 70% pronto, realizar o preparo a partir do lcool 96 (lcool comercial), na proporo de 73 ml do lcool para 27 ml de gua;

No uso de gua sanitria a 2%, observar sempre o prazo de validade e no manter a embalagem aberta ou com furo na tampa, porque o hipoclorito evapora e em diluies menores, perde sua funo desinfetante. 11

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1.2.5 Descarte de Materiais Contaminados e Prfuro-cortantes a) Agulhas, seringas, tubos quebrados, tubos contendo sangue ou soro devem ser desprezados em recipientes de paredes rgidas com tampa (latas de leite em p ou similares podem ser utilizadas) e sinalizadas como INFECTANTE ou em caixas coletoras prprias para material infectante, conforme Figura 3;

Figura 3: Modelo de caixa coletora de material infectante.

b) Papis, luvas, gaze, algodo e outros, devem ser recolhidos em lixeiras com tampa, de preferncia com pedal, contendo saco para lixo especfico para material infectante (cor branca leitosa). Notas:

Se no houver no municpio coleta de lixo especial para este tipo de resduo, este dever ser autoclavado antes do descarte em lixo comum. Todo resduo gerado por materiais altamente contaminantes como as culturas, amostras da tuberculose e outros devem ser autoclavados em sacos prprios para autoclave, antes do descarte (Figura 4). Para a autoclavao, o saco deve ser preenchido somente at dois teros da sua capacidade e recomenda-se abri-lo dentro do autoclave para melhor penetrao do vapor no seu contedo.

Figura 4: Saco de autoclave com material contaminante.

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1.3 Requisies, Fichas de Notificao e Formulrios para Autorizao de Procedimentos de Alto Custo (APAC) 1.3.1 Requisies e Fichas de Notificao Para que o LACEN realize os seus exames, importante que as requisies, fichas de notificao (quando aplicvel) e os formulrios de APAC estejam preenchidos corretamente, sem rasuras, com as condies e dados a seguir: a) Com letra bem legvel: os dados da requisio e/ou ficha de notificao so registrados no computador ou em livros de registros. Se no forem perfeitamente legveis, podem levar a trocas de nomes, exames ou envio para locais trocados; b) Com nome, endereo e cidade da instituio: para que o LACEN possa enviar o resultado para o local de origem necessrio que estes dados estejam na requisio ou na ficha; c) Nome do paciente completo: a quantidade de exames muito grande e o nmero de nomes iguais comum, por isso quanto mais dados mais segurana. O nome completo para todos os exames, facilita na hora de pesquisar o resultado no computador. d) Data de nascimento, idade e sexo: alm de serem mais dados relacionados com o paciente, o que diminui a margem de erros, so dados importantes para a Vigilncia Epidemiolgica; e) Nome e carimbo do solicitante: o resultado enviado para quem solicitou o exame, logo necessrio que seja legvel na requisio; f) Descrio do material coletado - soro, sangue, lquor (Lquido Cfalo Raquidiano LCR), medula ssea, lavado brnquico, fezes, urina, secrees, raspado de pele e outros; g) Exame(s) solicitado(s): a descrio do(s) exame(s) solicitado(s) deve ser bem legvel e compatvel com a quantidade. O material deve ser adequado ao exame a que se destina; h) Datas: Da requisio; Do incio dos sintomas quando aplicvel. Este dado significativamente importante na anlise do resultado do exame (Exs: Dengue, Leptospirose); Da coleta quando necessrio (Exs: CD4/CD8, PCR, Carga Viral, Dengue, Leptospirose); i) Telefone para contato; j) Dados epidemiolgicos quando aplicvel: Nas requisies para HIV, no deixar de citar a forma de transmisso (sexual, sangunea, perinatal, e outras); Nas requisies para CD4/CD8, Carga Viral, HCV Qualitativo, HCV Quantitativo e HCV Genotipagem, preencher completamente os espaos de informaes sobre o paciente; sobre os dados laboratoriais e clnicos (motivo pelo qual o exame est sendo solicitado, n de vezes que fez os referidos exames, resultados anteriores, estgio clnico e se est em tratamento) e dados sobre o mdico solicitante;

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Para os casos suspeitos de dengue e doenas exantemticas (sarampo e rubola), no esquecer de enviar as fichas epidemiolgicas juntamente com as requisies. Nmero da notificao (Vigilncia Epidemiolgica).

Notas Importantes: Os dados que os laboratrios fornecem para as Vigilncias Epidemiolgicas so de suma importncia na tomada de aes de Sade Pblica tanto municipais quanto estaduais e principalmente federais, portanto necessrio que os dados sejam completos, legveis e corretos. As fichas de notificao necessrias para os exames no LACEN esto disponveis na INTERNET, no Sistema de Informao de Notificao de Agravos SINAN (Qualquer site de pesquisa localiza o SINAN). 1.3.2. APAC O Estado s pago pelos exames considerados de alto custo, tais como Contagem de Linfcitos T CD4/CD8, Testes de Quantificao de Carga Viral, HCV Qualitativo, HCV Quantitativo e HCV/HIV Genotipagem, se os laudos mdicos e formulrios de APACs estiverem preenchidos completamente e sem rasuras. Portanto, o exame s pode ser realizado mediante este documento corretamente preenchido. 1.4 Coleta de amostras A coleta de sangue est descrita a seguir e a coleta das demais amostras est descrita no Captulo III, de acordo com as orientaes das sees e peculiaridades de cada tipo de exame. 1.4.1 Coleta de Sangue 1.4.1.1 Requisio a) Antes de iniciar a coleta, verificar se a requisio est preenchida de forma correta e completa; b) Caso no esteja, completar com os dados do paciente (nome completo e legvel, sexo, data de nascimento, idade, procedncia, nome do mdico, endereo, etc.); c) Se no estiver assinada e carimbada pelo mdico, adiar a coleta at que a requisio esteja correta e completa. Nota:

As orientaes sobre a requisio descritas acima servem para todos os tipos de coleta. 1.4.1.2 Condies do paciente a) O jejum necessrio para os exames de dosagens bioqumicas (Exs: glicose, colesterol, triglicerdeos e outros); b) Para os demais exames, suficiente que seja coletado antes das principais refeies e principalmente antes da realizao de exerccios fsicos (se o 14

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paciente veio caminhando ou pedalando de longa distncia, esperar at que ele se sinta descansado para fazer a coleta). 1.4.1.3 Coleta (Puno Venosa) a) Se o paciente estiver em condies de mobilidade normais, sent-lo confortavelmente em cadeira com descanso para o brao, deixando-o acessvel para a coleta. Caso no esteja, colher com o paciente deitado; b) Antes de iniciar a coleta, lavar as mos, colocar luvas, identificar os tubos, encaixar a agulha na seringa com o auxlio de uma pina, inspecionar a ponta da agulha (no deve estar rombuda ou torta) e mover o mbulo da seringa. c) Se a coleta for a vcuo, rosquear a agulha no suporte com o auxlio de uma pina; d) Colocar o torniquete (garrote) para que as veias fiquem mais salientes; e) Inspecionar as veias cuidadosamente e verificar a mais adequada para a puno; f) Fazer a assepsia do local com algodo embebido em lcool 70%; g) Em seguida, puncionar a veia e coletar o sangue; h) Se a coleta for a vcuo, cuidar para no retirar o tubo enquanto tiver vcuo, para que a quantidade de sangue produza a quantidade de soro ou plasma necessrios; i) A presso do torniquete no deve ser mantida mais que 60 segundos, porque produz aumentos na concentrao de clulas sanguneas; j) Se a coleta for com seringa, colocar o sangue, cuidadosamente nos tubos prprios, deixando escorrer suavemente pela parede interna do tubo; k) Se a coleta for a vcuo, colher nos tubos prprios para os exames. 1.5 Preparo da amostra A maioria das amostras (escarros, lavados, aspirados, etc) so coletadas diretamente no frasco que vem para o laboratrio e as orientaes esto apresentadas no Captulo III. Para a separao do soro ou plasma, proceder da seguinte maneira: 1.5.1 Preparo dos tubos que vo receber a amostra a) Para cada tubo de sangue pegar um tubo (12 mm X 75 mm) com tampa, para cada frao de soro ou plasma, de acordo com os exames solicitados (Figura 5);

Figura 5: Modelo de tubo com tampa para armazenar a frao de soro ou plasma.

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b) Escrever na etiqueta os dados do paciente de acordo com o item 1.6; c) Colar horizontalmente ou verticalmente a etiqueta no tubo, de maneira que aparea o nvel da amostra (Figura 6); d) A tampa de borracha deve ser fixada com fita crepe apenas na juno do tubo com a mesma.

Nvel da amostra

Figura 6: Modelo pronto do tubo com a amostra para ser transportada

e) Se o tempo de permanncia da amostra na caixa trmica for superior a 6 ou 8 horas, colar sobre a etiqueta, fita adesiva transparente para que no umedea e desaparea o que est escrito (o uso de lpis evita este transtorno). 1.5.2 Centrifugao / separao do soro ou plasma a) Colocar luvas; b) Abrir a centrfuga e colocar os tubos com o sangue nas caapas, tomando o cuidado de equilibr-los; c) Fechar a tampa da centrfuga, marcar 3000 a 4000 rpm e ligar por 5 minutos; d) No abrir a tampa da centrfuga antes de parar totalmente de rodar e nem tentar parar com a mo ou instrumentos (recomenda-se no abrir a centrfuga imediatamente aps parar, devido a formao de aerossis que podem ser infectantes, por isto, deve-se esperar alguns minutos para que as partculas sedimentem); e) Retirar os tubos das caapas com auxlio de uma pina e colocar em estante prpria; f) Verificar o aspecto da amostra. O soro ou plasma deve estar livre de resduos de hemcias. Se o soro estiver fortemente hemolisado ou lipmico, nova coleta deve ser providenciada. g) Se o aspecto do soro ou plasma estiverem de acordo, passar (de preferncia com pipetador ou pipeta plstica - tambm chamada de pipeta Pasteur descartvel ou pipeta de transferncia Figura 16 na pg. 63) para o tubo correspondente, previamente identificado; h) Vedar bem, mas apenas na borda da tampa, com fita crepe (evitar o uso de esparadrapo). 1.6 Identificao da amostra Qualquer amostra deve vir identificada com etiqueta autocolante, em letra legvel (Figura 7), contendo: 16

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Nome do paciente; Idade; Sexo: Tipo de exame; Procedncia.

Figura 7: Modelo de etiqueta

Nota:

A etiqueta deve ser colocada de maneira que se possa visualizar a amostra. Se for amostra lquida (sangue total, soro, plasma) o nvel da amostra no pode ficar coberto (Figura 6). 1.7 Acondicionamento para transporte 1.7.1 Para transporte de curta distncia Para transporte rpido, de curta distncia, os tubos com amostras (geralmente sangue total, soro ou plasma) podem vir em estantes e transportados em caixas trmicas. Os demais materiais, de acordo com as orientaes para cada tipo de amostra, esto apresentadas no Captulo III. 1.7.2. Para transporte de longa distncia Quando as amostras de sangue total, soro, plasma e outras similares so procedentes de locais mais distantes, o LACEN sugere o seguinte procedimento: a) Colocar o(s) tubos(s) com as amostra(s), devidamente identificada(s) e etiquetado(s), em um saco plstico e fechar; b) Colocar o saco com os tubos em p, protegido com papel, dentro de uma garrafa plstica cortada (pode ser de lcool, gua sanitria, refrigerante, etc); c) Colocar uma fita adesiva por cima para fixar o saco com tubos na embalagem plstica; d) Colocar dentro de uma caixa trmica; e) Colocar o gelo reciclvel dentro da caixa; f) Colocar papel amassado por cima, de maneira que as amostras e o gelo no se batam; g) Colocar as requisies correspondentes, devidamente preenchidas, dentro de um saco plstico; h) Vedar bem o saco e fixa-lo na parte interna da tampa da caixa trmica; i) Fechar e vedar bem a caixa; j) Identificar com destinatrio, remetente; k) Enviar ao laboratrio. 17

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Notas:

Gelo: o gelo deve ser preferencialmente reciclvel, para no haver risco de perda da amostra. Caixa Trmica: a caixa para transporte de amostra que deve ser de polietileno ou similares (tipo geladeira porttil). Deve ser lavvel, resistir a desinfeco e portar a identificao de Infectante ou Risco Biolgico, conforme Figura 8, juntamente com o nome, telefone e endereo da pessoa que deve ser avisada em caso de acidente com a(s) amostra(s).

1.8 Condies de Transporte nas viaturas a) O material para exame deve vir separado dos pacientes quando transportados na mesma viatura; b) As caixas trmicas devem vir bem vedadas e fixadas para no virar durante o transporte e protegidas do sol e de umidade; c) O motorista deve ser orientado de como proceder em caso de acidente com as amostras: Deve possuir na viatura um Kit com: EPIs - guarda-p e luvas e EPCs uma p com escova (caso tenha que recolher material espalhado), pano de limpeza, um pequeno frasco com lcool 70% para limpeza do local e das mos, saco para lixo infectante e fita adesiva; Ao final todos os materiais recolhidos e utilizados na operao devem ser colocados no saco para lixo infectante, bem fechado com a fita adesiva, para que mais tarde sejam esterilizados e descartados adequadamente; Deve avisar para a pessoa responsvel pela remessa, cujo nome, telefone e endereo deve constar na caixa trmica.

INFECTANTE
Figura 8: Modelo de Rtulo para a caixa de transporte de Material Infectante (ou de risco biolgico).

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III. CAPTULO II
1. RELAO DE EXAMES REALIZADOS NAS SEES DO LACEN 1.1 Seo de Bacteriologia

EXAME
Exame a fresco de secreo genital e 1 jato urinrio Pesquisa de leuccitos e/ou sangue nas fezes in natura Bacterioscopia pelo mtodo de Gram do lquor Bacterioscopia pelo mtodo de Gram de lquidos orgnicos estreis (lquido pleural, asctico, biliar, de articulaes e outros) Bacterioscopia pelo mtodo de Gram de secreo de ouvido, ocular, pele (abcessos e exsudatos) bipsia e esperma. Bacterioscopia pelo mtodo de Gram de escarro, lavado brnquico, broncoalveolar, escovado brnquico e aspirado transtraqueal Bacterioscopia pelo mtodo de Gram de secreo genital (secreo vaginal, secreo endocervical, secreo uretral), secreo anal e 1 jato urinrio Bacterioscopia pelo mtodo de Gram de leso genital Bacterioscopia pelo mtodo de Fontana Tribondeau em leso genital Bacterioscopia pelo mtodo de Neisser em secreo de orofaringe e nasofaringe Microscopia em campo escuro de leso genital Cultura de lquor (Lquido Cfalo Raquidiano LCR) Cultura de lquidos orgnicos estreis (lquido pleural, asctico, biliar, de articulaes e outros) Cultura de sangue (Hemocultura)

OBJETIVO
Pesquisa de protozorios flagelados, leveduras, leuccitos e hemcias Complementa o diagnstico de diarrias infecciosas Pesquisa de estruturas microbianas para auxlio de diagnstico das meningites Pesquisa de estruturas microbianas para auxlio no diagnstico Pesquisa de estruturas microbianas para auxlio no diagnstico Pesquisa de estruturas microbianas para auxlio no diagnstico Pesquisa de estruturas microbianas para auxlio no diagnstico das DST

Pesquisa de Haemophylus ducreyi para diagnstico de cancro mole Pesquisa do Treponema pallidum, para diagnstico da sfilis primria (cancro duro) Pesquisa de bacilos com granulaes metacromticas Pesquisa do Treponema pallidum, para diagnstico da sfilis primria (cancro duro) Diagnstico de meningites bacterianas Isolamento e identificao de bactrias nos lquidos orgnicos estreis

Diagnstico de infeces bacterianas sistmicas Cultura de fezes ou Coprocultura (para clera) Pesquisa do Vibrio cholerae Pesquisa de Salmonella spp, Shigella spp e Cultura de fezes ou Coprocultura para Escherichia coli patognicas (EPEC, EIEC e enterobactrias patognicas) EHEC) Pesquisa de Salmonella typhi Cultura de fezes ou Coprocultura (para febre tifide) Cultura de urina jato mdio (Urocultura) Pesquisa de microrganismos de infeces do trato urinrio Cultura de esperma Isolamento e identificao de bactrias no lquido seminal

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EXAME
Cultura de secreo genital (secreo vaginal, secreo endocervical, secreo uretral), secreo anal e 1 jato urinrio) Cultura para Mycoplasma hominis e Ureaplasma urealyticum Imunofluorescncia Direta IFD, em raspado uretral e endocervical Imunofluorescncia Direta - IFD em secreo ocular Cultura de secreo ocular Cultura de secreo de ouvido Cultura de secreo de orofaringe p/ pesquisa de Estreptococo beta-hemoltico Cultura de secreo de nasofaringe p/ pesquisa de Bordetella pertussis Cultura de secreo de orofaringe e nasofaringe p/ pesquisa de Corynebacterium diphtheriae Cultura semi-quantitativa de escarro Cultura de pele (abcessos e exsudatos) e bipsias Cultura de ponta de cateter Prova de aglutinao em ltex no LCR (para H. influenzae b, S. pneumoniae e N. meningitidis A, B, C) Prova de aglutinao em ltex no soro (para H. influenzae b, S. pneumoniae e N. meningitidis A, B, C, Y, W135, S. agalactiae)

OBJETIVO
Diagnstico de Doenas Sexualmente Transmissveis DST e outras infeces Diagnstico de uretrite e cervicite - DST Pesquisa de Chlamydia trachomatis p/ diagnstico de DST Pesquisa de Chlamydia trachomatis para diagnstico do tracoma ocular. Isolamento e identificao de bactrias na secreo ocular Isolamento e identificao de bactrias no ouvido externo e mdio Diagnstico de faringite Diagnstico de coqueluche Diagnstico da difteria

Pesquisa de microorganismos de infeces do trato respiratrio inferior (pneumonias) Isolamento e identificao de bactrias na pele Diagnstico de infeco de cateter intravenoso (cultura semiquantitativa) Pesquisa de antgenos polissacardios diretamente no lquor para auxlio no diagnstico de meningites bacterianas Pesquisa de antgenos polissacardios diretamente no lquor para auxlio no diagnstico de infeces sistmicas

1.2 Seo de Hansenase

EXAMES
Baciloscopia

OBJETIVO
Pesquisa do Bacilo lcool cido Resistente BAAR, causador da Hansenase, tanto para diagnstico como para controle. Reviso de todas as lminas positivas e negativas provenientes dos laboratrios da rede para controle de qualidade.

Superviso Indireta

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1.3 Seo de Leptospirose

EXAMES
Teste de Elisa IgM (Humano) Teste sorolgico de Micro-aglutinao

OBJETIVO
Diagnstico da Leptospirose Identificar o sorovar (cepa da leptospira) e titulao da amostra

1.4 Seo de Malria e Microscopia de Chagas (DCA)

EXAMES
Pesquisa de Plasmodium Superviso indireta das lminas de Malria

OBJETIVO
Diagnstico da Malria Reviso de todas as lminas positivas e negativas provenientes dos laboratrios da rede para controle de qualidade. Diagnstico da Doena de Chagas Agudo (DCA)

Pesquisa do Tripanossoma cruzy

1.5 Seo de Micologia

EXAMES

OBJETIVO

Pesquisa de fungos (exame direto ou exame Diagnstico de micoses superficiais: micolgico direto) na pele e/ou unhas, pelos e dermatofitoses, tinhas, pitirase, candidases e cabelo. outras. Pesquisa de fungos no escarro, lquidos Detectar a presena de estruturas de fungos biolgicos (lavado ou aspirado brnquico, para diagnstico de micoses sistmicas. lavado gstrico, lquido pleural), lquor, sangue de medula ssea, hemocultura e outros. Pesquisa de Paracoccidiides brasiliensis no Diagnstico da paracoccidiodomicose escarro, lquidos biolgicos ou raspado de (Blastomicose Sulamericana - BSA) leses. Pesquisa de Cryptococcus com Tinta da China Diagnstico da criptococose no lquor ou secrees. Cultura para fungos em diferentes materiais Identificar fungos causadores de micoses biolgicos. (superficiais ou sistmicas) Imunodifuso Dupla (IDD) para Sorologia para diagnstico da Paracoccidioides barasiliensis. paracoccidioidomicose IDD para Aspergilus fumigatus Sorologia para diagnstico da aspergilose IDD para Candida albicans Sorologia para diagnstico da candidase Prova do Ltex para deteco do antgeno Diagnstico da criptococose polissacardeo Cryptococcus neoformans no lquor ou soro. Prova do Ltex para deteco do antgeno Diagnstico da aspergilose invasiva polissacardeo do Aspergillus fumigatus no soro *. * Em implantao informaes pelo tel. (48) 3251 7839.

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1.6 Seo de Tuberculose

EXAMES
Baciloscopia Cultura Teste de Resistncia

OBJETIVO
Diagnstico ou controle da Tuberculose. Diagnstico ou controle da Tuberculose. Identificar a resistncia do Micobacterium tuberculosis aos antimicrobianos utilizados no tratamento. Revisar todas as lminas positivas e negativas provenientes dos laboratrios da rede para controle de qualidade.

Superviso Indireta

1.7 Seo de Imunologia

EXAMES
Sorologia para Lues ou VDRL FTA-ABS Reao de Widal Reao de Brucelose Teste de Elisa para Toxoplasmose IgM Teste de Elisa para Toxoplasmose IgG Teste de Elisa para Rubeola IgM Teste de Elisa para Rubola IgG Teste de Elisa para Citomegalovirus IgM Teste de Elisa para Citomegalovirus IgG Teste de Elisa para Sarampo IgM Teste de Elisa para Dengue IgM Teste de Elisa para Parvovrus Teste de Elisa para Chagas IgG Imunofluorescncia Indireta (IFI) para Chagas confirmatrio para Doenas Chagas Contagem de Linfcitos T - CD4 / CD8

OBJETIVO
Diagnstico da Sfilis Exame confirmatrio de diagnostico da Sfilis Diagnostico da febre tifide e paratifide Pesquisa de Brucella sp. Diagnstico de Toxoplasmose na fase aguda Pesquisa de imunidade Diagnstico da Rubola na fase aguda Pesquisa de imunidade Diagnstico da Citomegalovirose na fase aguda Pesquisa de imunidade Diagnstico do Sarampo na fase aguda Diagnstico da Dengue na fase aguda Diagnstico da parvovirose Diagnstico da Doena de Chagas Pesquisa de anticorpo anti Tripanossoma cruzi Monitoramento de pacientes HIV positivos

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1.8 Seo de Virologia

EXAMES
Testes de Elisa: HbsAg Anti Hbs Anti Hbc Anti Hbc IgM Hbe Ag Anti Hbe Teste de Elisa Anti HAV IgM Teste de Elisa Anti HCV Teste de Elisa 1 e 2 para HIV Imunofluorescncia Indireta IFI para o HIV Western Blot Pesquisa do antgeno dos Vrus Influenza A e B; Para influenza 1, 2, 3; Adenovrus e Vrus Sincicial Respiratrio.

OBJETIVO
Marcadores para diagnstico da Hepatite B Marcador para diagnstico da Hepatite A Marcador para diagnstico da Hepatite C Detectar a presena de anticorpos antivrus HIV 1 e 2 por dois mtodos diferentes. Teste confirmatrio da presena de anticorpos antivrus HIV 1 Teste confirmatrio da presena de anticorpos antivrus HIV 1 Diagnstico de infeces respiratrias, incluindo a gripe.

1.9 Seo de Biologia Molecular

EXAMES
Pesquisa qualitativa do RNA do HCV (Vrus da Hepatite C) Teste de Quantificao de Carga Viral para HIV 1 Teste de Quantificao de Carga Viral para HCV Genotipagem para HIV * Genotipagem para HCV *

OBJETIVO
Diagnstico da Hepatite C Monitoramento de pacientes HIV positivos Monitoramento de pacientes HCV positivos Resistncia s drogas antirretrovirais Indicao para tratamento

* Exames agendados no LACEN

1.10 Setor de Anlises Neonatais

EXAMES
Dosagem da Fenilalanina Dosagem do Hormnio Estimulante da Tireide TSH Dosagem do hormnio 17-OH Progesterona Dosagem da Tripsina Imuno Reativa - IRT Identificao de Hemoglobinas

OBJETIVO
Diagnstico da Fenilcetonria Diagnstico do Hipotireoidismo Congnito Diagnstico da Hiperplasia Adrenal Congnita Diagnstico da Fibrose Cstica Diagnstico da Anemia Falciforme, Trao Falciforme e outras Hemoglobinopatias

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2. RELAO DE EXAMES ENCAMINHADOS PELO LACEN PARA LABORATRIOS DE REFERNCIA

EXAMES
Teste de Elisa e IFI Pesquisa de IgM Cultura de clula Pesquisa de Hantavirus Cultura e Pesquisa Qualitativa do RNA do Vrus Pesquisa de Rotavirus do grupo A

MATERIAL BIOLGICO

OBJETIVO
Diagnstico da Cisticercose Diagnstico da Febre Amarela Pesquisa do subtipo da Dengue Diagnstico do Hantavrus Diagnstico da Paralisia Flcida Aguda Diagnstico de diarrias por Rotavirus Diagnstico da Febre Maculosa Diagnstico da Filariose

Soro Soro Soro Soro Fezes in natura congelada Fezes in natura congelada Pesquisa de Rickettsia grupo febre Soro maculosa Pesquisa da microfilria no sangue Sangue total perifrico

2.1 Laboratrios de Referncia Instituto Adolfo Lutz (IAL) Fundao Osvaldo Cruz (Fiocruz) Instituto Evandro Chagas (IEC) LACEN/PR

2.2 Orientaes especficas para a coleta e transporte das amostras 2.2.1 Para Febre Maculosa So duas amostras. A primeira coleta deve ser realizada logo aps os primeiros sintomas. A segunda coleta, 14 a 21 dias aps a 1 coleta; O sangue deve ser coletado em tubo seco e separado o soro para o transporte. O soro no pode estar hemolisado.

2.2.2 Para Filariose A coleta do sangue deve ser realizada no perodo noturno, preferencialmente das 23:00 a 1:00h; Coletar o sangue e conservar em formol a 2% (que a formalina) na proporo 1/10 (9ml de sangue e 1ml de formalina); Manter e transportar em temperatura ambiente (sem gelo). O transporte deve ser realizado em estantes para que os tubos permaneam em p. Programar a coleta para que no chegue no IAL nas sextas-feiras.

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IV. CAPTULO III

1. ORIENTAES DE COLETA E TRANSPORTE

Neste captulo apresentamos os exames com relao ao material biolgico que deve ser colhido, onde colher, com que colher e a forma correta de enviar ao LACEN observando o tempo, condies de refrigerao, bem como, a quantidade necessria. O LACEN, por ser um laboratrio de sade pblica, trabalha dividido em setores ou sees de acordo com os tipos de microorganismos ou programas, geralmente ministeriais. Portanto, as amostras que chegam no LACEN, para no serem novamente manuseadas, devem vir com requisio e alquotas individualizadas para cada seo a que se destina o exame. Isto significa mais segurana no caso de trocas e menor risco de contaminao da amostra. Exs: Paciente 1 - Solicitao de Sorologia (Toxoplasmose, Rubola, Hepatite e Enviar uma requisio com um tubo de soro para Toxo-Rub, uma HIV) requisio com um tubo com soro para HIV e uma requisio com um tubo com soro para Hepatite. Paciente 2 Solicitao de Pesquisa e cultura para germes comuns, fungos e BAAR em lquor ou escarro Enviar uma requisio e uma alquota da amostra para cada seo envolvida (Seo de Bacteriologia, Seo de Micologia e Seo de Tuberculose - total de trs frascos com amostra e trs requisies). Nota Importante:

do conhecimento de todos que amostras de todos os tipos so transportadas por ambulncias, por empresas de nibus, carros das Regionais e outros, que com certeza no sabem o que fazer com as mesmas, em caso de acidente. Por isto, muito importante que no deixem de orientar os motoristas (Captulo I, item 1.6) e colocar o nome, telefone e endereo do responsvel pela remessa da amostra na parte externa da caixa trmica, para que esta pessoa possa fornecer informaes sobre o material contido nas caixas.

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2. SEO DE BACTERIOLOGIA 2.1 Orientaes gerais de coleta e transporte das amostras em relao ao exame solicitado

EXAMES

MATERIAL BIOLGICO

TEMPO CRTICO P/ CHEGADA NO LACEN Imediatamente

ONDE / COM QUE COLHER / TRANSPORTE

1 jato urinrio

Imediatamente

Urina (jato mdio)

At 2 horas aps a coleta em temperatura ambiente Imediatamente temperatura ambiente


Lquidos orgnicos estreis Escarro

At 2 horas aps a coleta, temperatura ambiente; p/ perodos maiores, refrigerar a amostra

BACTERIOSCOPIA pelo mtodo de Fontana Tribondeau

Leso genital

imediatamente

Leso genital

At 2 horas aps a coleta

BACTERIOSCOPIA pelo mtodo de Gram

Secreo genital (uretral, vaginal, endocervical, anal)

At 2 horas aps a coleta

EXAME A FRESCO

Secreo genital (uretral e vaginal)

com swab estril; transportar em tubo com 1,0 ml de salina estril. ver item 2.2.3.1 e 2.2.3.6. em frasco estril de boca larga, transparente, com tampa de rosca ver item 2.2.1.2.

com swab estril; confeccionar esfregao em 2 lminas, no momento da coleta;

com swab estril; confeccionar esfregao em 2 lminas, no momento da coleta (feminina); com swab estril ou ala bacteriolgica, no LACEN (masculino). em frasco estril de boca larga, transparente, com tampa de rosca

em frasco estril ou confeccionar 1 lmina no momento da coleta.

em frasco estril de boca larga.

com swab estril ou ala bacteriolgica, no LACEN; confeccionar esfregao em 2 lminas no momento da coleta; ver item 2.2.3.12

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EXAMES

MATERIAL BIOLGICO

TEMPO CRTICO P/ CHEGADA NO LACEN imediatamente

ONDE / COM QUE COLHER / TRANSPORTE

Cultura de URINA

Urina 1 jato

imediatamente

secreo endocervical e uretral p/ pesquisa de Mycoplasma hominis e Ureaplasma urealyticum

At 5 horas, se em caldo nutritivo em temperatura ambiente

At 8 horas, se em meio de transporte de Amies temperatura ambiente

secreo endocervical, uretral, anal p/ pesquisa de Neisseria gonorrhoeae

Cultura de SECREO VAGINAL, ENDOCERVICAL, URETRAL e ANAL FEMININA,

secreo vaginal

At 1 hora aps a coleta

at 5 horas, se em caldo nutritivo em temperatura ambiente

secreo uretral p/ pesquisa de Mycoplasma hominis e Ureaplasma urealyticum

at 8 horas, se em meio de transporte de Amies com carvo, em temperatura ambiente

Cultura de SECREO URETRAL e ANAL MASCULINA,

secreo uretral e anal p/ pesquisa de Neisseria gonorrhoeae e germes comuns

Imediatamente

Cultura de URINA, com contagem de colnias

Urina jato mdio

at 2 horas aps a coleta, refrigerada.

MICROSCOPIA EM CAMPO ESCURO

Leso genital

com swab estril ou ala bacteriolgica, no LACEN; ver item 2.2.3.12.

em frasco estril de boca larga, transparente, com tampa de rosca. coleta no LACEN; ver item 2.2.1.1

em frasco estril de boca larga, transparente, com tampa de rosca; coleta no LACEN. Ver 2.2.1.2

com swab estril fino alginatado ou ala bacteriolgica; coleta no LACEN; com swab estril alginatado; introduzir o swab no meio de transporte de Amies com carvo

com swab de rayon ou dracon; inocular o swab no frasco com caldo nutritivo. Ver item 2.2.3

com swab estril; transportar em tubo com 1,0 ml de salina estril. com swab estril alginatado; introduzir o swab no meio de transporte de Amies com carvo

com swab de rayon ou dracon; inocular o swab no frasco com caldo nutritivo . ver item 2.2.3

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EXAMES

MATERIAL BIOLGICO

TEMPO CRTICO P/ CHEGADA NO LACEN diariamente

ONDE / COM QUE COLHER / TRANSPORTE

Cultura de LQUOR,

lquido cfaloRaquidiano (LCR, lquor)

imediatamente (no refrigerar)

swab retal ou swab fecal

at 24 horas em meio de transporte de CaryBlair, temperatura ambiente

Pesquisa de leuccitos e hemcias

fezes in natura diarricas

at 1 hora em temperatura ambiente ou 24 horas em caixa trmica com gelo

Cultura de FEZES ou Coprocultura para pesquisa de Enterobactrias patognicas

fezes in natura ou

at 1 hora aps a coleta em temperatura ambiente

Cultura de ESPERMA, (Espermocultura)

lquido espermtico, lquido seminal, fludo seminal

imediatamente ou no mximo dentro de 1 hora, temperatura ambiente

Cultura de SANGUE, (HEMOCULTURA)

sangue

at 30 minutos (no refrigerar) ou incubar 24 horas a 35C e encaminhar em seguida ao LACEN em temperatura ambiente.

Imunofluorescncia direta para Chlamydia trachomatis,

raspado uretral e endocervical

com swab estril ultrafino de dracon ou rayon; confeccionar esfregao em 1 lmina prpria p/ pesquisa de clamidia, no momento da coleta.

o LACEN fornece um kit para coleta, conservao e transporte com todas as instrues de uso (Figura 9A e 9B) ver item 2.2.4

em frasco prprio, com meio de TSB (Trypticase Soy Broth) ver item 2.2.5

em frasco estril coleta no LACEN (pelo menos com 48 horas sem relao sexual)

em frasco opaco de boca larga, com tampa de rosca.

em meio de transporte Cary-Blair, com auxlio de um swab.

em frasco limpo, seco, de boca larga, com tampa de rosca. Ver item 2.2.2.1

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EXAMES

MATERIAL BIOLGICO swab fecal ou swab retal

TEMPO CRTICO P/ CHEGADA NO LACEN de 24 a 72 horas em meio de transporte Cary-Blair, a temperatura ambiente. at 24 horas em caixa trmica com gelo.

ONDE / COM QUE COLHER / TRANSPORTE

Cultura de fezes (Coprocultura) para Pesquisa de Vbrio Cholerae (clera) Pesquisa de leuccitos e hemcias

em meio de transporte Cary-Blair, com auxlio de um swab.

fezes in natura diarricas

Cultura de fezes (Coprocultura) para Pesquisa de Salmonella typhi (Febre tifide)

fezes in natura diarricas para Pesquisa de leuccitos e hemcias

at 1 hora aps a coleta em temperatura ambiente ou 24 horas em caixa trmica com gelo.

ou swab retal ou swab fecal at 24 horas em meio de transporte de Cary-Blair, temperatura ambiente

fezes in natura

at 1 hora aps a coleta em temperatura ambiente

Cultura de sangue (Hemocultura) para Pesquisa de Salmonella typhi (Febre tifide)

sangue

imediatamente ou at 30 minutos em temperatura ambiente ou incubar 24 horas 36C e encaminhar em seguida ao laboratrio temperatura ambiente

em frasco limpo,seco,de boca larga, com tampa de rosca.

em frasco prprio p/ hemocultura, meio de TSB (Trypticase Soy Broth); s poca da coleta: desde os 1 sintomas at o final da 2 semana da doena; coletar o volume de sangue que corresponde a 10% do volume do meio de cultura.

em frasco limpo, seco, de boca larga, com tampa de rosca.

em frasco limpo, seco, de boca larga, com tampa de rosca Data da coleta e nmero de amostras, ver em orientaes especficas de coleta, item 2.2.2 em meio de transporte de CaryBlair, com auxlio de um swab. Ver item 2.2.2.3.2

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EXAMES

MATERIAL BIOLGICO

TEMPO CRTICO P/ CHEGADA NO LACEN At 24 horas aps a coleta se em meio de transporte de Regan-Lowe com antibitico, temperatura ambiente. Na impossibilidade de encaminhar imediatamente, incubar 36C por um perodo de 24 horas e encaminhar temperatura ambiente.

ONDE / COM QUE COLHER / TRANSPORTE

Cultura de ASPIRADO TRANSTRAQUEAL,

aspirado transtraqueal

at 2 horas aps a coleta temperatura ambiente ou por perodos maiores, refrigerar a amostra

Cultura de LAVADO BRONCOALVEOLAR

lavado broncoalveolar

at 30 minutos, sendo o mximo aceitvel de 1-2 horas temperatura ambiente

escovado brnquico

imediatamente temperatura ambiente

Cultura para ESTREPTOCOCO BETA-HEMOLTICO GRUPO A DE LANCEFIELD,

secreo de orofaringe

at 4 horas aps a coleta se em meio de transporte de Amies com carvo, temperatura ambiente

Cultura para Corynebacterium diphtheriae (difteria)

secreo de orofaringe e nasofaringe

at 24 horas aps a coleta se em meio de transporte de Amies com carvo, temperatura ambiente.

Cultura para Bordetella pertussis, (coqueluche)

secreo de nasofaringe

com 1 swab estril ultrafino alginatado, com ala flexvel. coletar material de 1 narina utilizando 1 swab

introduzir o swab em tubo c/ meio de transporte Regan-Lowe com antibitico (Meio de Agar Carvo com antibitico).

ver item 2.2.8

com swab estril fino alginatado ; introduzir o swab no meio de transporte de Amies com carvo; ver item 2.2.7

com swab estril; introduzir o swab no meio de transporte de Amies com carvo .

em tubo estril seco, sem meio de cultura

em frasco estril seco;

prpria escova colocar em tubo contendo 1ml de soluo fisiolgica estril

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EXAMES

MATERIAL BIOLGICO

TEMPO CRTICO P/ CHEGADA NO LACEN imediatamente, temperatura ambiente (no refrigerar)

ONDE / COM QUE COLHER / TRANSPORTE

Cultura de FLUDOS ORGNICOS ESTREIS,

lquidos: pleural, asctico, biliar, de articulao, outros

encaminhar o lquido coletado em tubo seco e estril

Pesquisa de ANTGENOS BACTERIANOS, (N. meningitidis A, B, C, S. pneumoniae e H. influenzae b)

lquor e soro

imediatamente, no gelo (refrigerado) ou congelado por at 48 horas

Cultura de PONTA DE CATETER

ponta de cateter

at 1 hora aps a coleta, temperatura ambiente, ou 12 horas se refrigerado

Cultura de ESCARRO (para germes comuns)

escarro

imediatamente ou at 2 horas aps a coleta, temperatura ambiente. Para perodos maiores, refrigerar a amostra.

secreo de ouvido externo

at 12 horas se em meio de transporte de Amies.

Cultura de SECREO DE OUVIDO

secreo de ouvido mdio

at 2 hora aps a coleta, temperatura ambiente

obtida por aspirao atravs do tmpano em caso de rompimento da membrana do tmpano, o fludo pode ser colhido com swab fino com swab estril ver item 2.2.10

em frasco estril de boca larga, transparente, com tampa de rosca; ver item 2.2.6

tubo estril seco, sem meio de cultura colocar o pedao de cateter dentro do frasco estril ver item 2.2.9

colocar 1 a 2 ml do LCR ou soro no frasco estril seco; transportar refrigerado.

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EXAMES

MATERIAL BIOLGICO bipsia

TEMPO CRTICO P/ CHEGADA NO LACEN em temperatura ambiente, at 2 horas aps a coleta Swab: Imediatamente. Se em meio de transporte, at 24 horas. em temperatura ambiente imediatamente

ONDE / COM QUE COLHER / TRANSPORTE

leso aberta

pstula e vescula

imediatamente

raspado de crnea

margem da plpebra

at 12 horas temperatura ambiente, se em meio de transporte.

fluido vtreo

imediatamente

imediatamente (enviar os meios inoculados e os esfregaos)

Cultura de SECREO OCULAR,

secreo ou raspado da conjuntiva

at 12 horas temperatura ambiente, se em meio de transporte.

ferida de queimadura

imediatamente, se em meio de transporte, at 24 horas

abscesso fechado

Cultura de PELE (abcessos e exsudatos) e BIPSIAS

em frasco estril. No devem ser aceitas amostras em formol;

coletar o material purulento localizado na parte profunda da leso; utilizar seringa e agulha (ou swab c/ meio de transporte); ver item 2.2.11.1

aspirar o exsudato com agulha e seringa; ver item 2.2.11.2 fragmento de tecido (ou swab estril c/ meio de transporte); ver item 2.2.11.3

com swab estril sobre a leso;

coletar 2 swab (fino, alginatado ou c/ carvo): um p/ confeccionar os esfregaos e outro p/ cultura; introduzir o swab no meio de transporte de Amies. confeccionar esfregao em 2 lminas, no momento da coleta. raspar a rea da leso da crnea c/ auxlio de uma cureta oftalmolgica (procedimento realizado pelo clnico); inocular diretamente nos meios de cultura em forma de C; confeccionar esfregao em 2 lminas, no momento da coleta. coletar 2 swabs (finos), um p/ confeccionar os esfregaos e outro p/ cultura, contendo meio de transporte de Amies. Umedecer o swab em soluo fisiolgica estril para facilitar a coleta da amostra Aspirado de fludo vtreo (0,5 ml) ou paracentese de cmara anterior (procedimento realizado pelo clnico); Transportar na prpria seringa ou inocular nos meios de agar sangue e agar chocolate fornecidos pelo LACEN (1 a 2 gotas em cada meio).

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2.2 Orientaes especficas de coleta 2.2.1 Urina 2.2.1.1 Amostra de urina de jato mdio Sempre que possvel, as amostras de urina devem ser colhidas pela manh. a) Como orientar pacientes do sexo feminino: A paciente deve lavar bem as mos com gua e sabo neutro e sec-las com toalha de papel limpa e descartvel. Deve despir-se em sala adequada, afastar os lbios vaginais e lavar bem a vulva e os lbios vaginais, usando chumaos de algodo e gazes estreis em gua morna com sabo, esfregando de frente para trs. Deve enxaguar bem com gua morna e secar com gazes esterilizadas. Durante todo este processo a paciente deve manter os lbios vaginais separados, e no tocar a rea limpa com os dedos. Urinar, desprezando a primeira parte do jato urinrio. Colher cerca de 30ml (aproximadamente a metade do frasco) de urina em um recipiente estril, fechando assim que a urina for colhida. Em seguida a amostra colhida, contida no recipiente fechado, deve ser entregue a pessoa responsvel para ser encaminhada ao laboratrio.

b) Como orientar pacientes do sexo masculino: O paciente deve lavar bem as mos. Afastar o prepcio e desprezar no vaso uma pequena quantidade de urina. Sempre segurando para trs o prepcio colher cerca de 30ml de urina no frasco estril. Em seguida, a amostra colhida, contida no recipiente fechado, deve ser entregue a pessoa responsvel para ser encaminhado ao laboratrio.

c) Crianas: Dar gua para a criana beber. Limpar a genitlia externa. Aplicar o coletor, junto genitlia o qual dever ser trocado a cada trinta minutos para evitar contaminao no momento da coleta. A criana pode sentar-se no colo da me ou da atendente que deve encorajar a criana a urinar colhendo todo o material possvel.

2.2.1.2 Amostra de urina de 1 jato Colher a primeira urina da manh ou reter a urina por pelo menos 2 horas antes de realizar o exame; Realizar higiene prvia da regio genital; Coletar os primeiros 10 ml de urina em frasco estril de boca larga com tampa de rosca. 33

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2.2.2 Fezes para Doenas Transmitidas por Alimentos 2.2.2.1 Fezes para pesquisa de Enterobactrias Patognicas A amostra deve ser coletada de preferncia no incio do quadro diarrico e antes da antibioticoterapia. a) Fezes in natura para cultura: Coletar 1a 2 gramas de fezes (equivalente a 1 colher de sobremesa) em frasco limpo, seco, de boca larga e com tampa de rosca. Enviar ao LACEN at 1 hora aps a coleta temperatura ambiente . b) Swab fecal em Cary-Blair: Coletar 1 a 2g de fezes em frasco limpo, seco, de boca larga, fornecido pelo LACEN. Mergulhar o swab no frasco contendo as fezes, dando preferncia s partes mucopurulentas e com sangue e a seguir introduzir no meio de Cary-Blair. Fechar firmemente o frasco. Enviar ao LACEN em temperatura ambiente, at 24 horas aps a coleta. c) Swab retal em Cary-Blair: Introduzir o swab no nus, fazendo movimentos rotatrios suaves por alguns segundos. Retirar o swab e introduzir no meio de Cary-Blair. Fechar firmemente o frasco. Enviar ao LACEN em temperatura ambiente, at 24 horas aps a coleta. d) Fezes in natura diarrica para pesquisa de leuccitos e hemcias: Coletar 1 a 2 gramas de fezes em frasco limpo, seco, de boca larga, com tampa de rosca. Enviar ao LACEN em temperatura ambiente, no prazo mximo de 1 hora. No sendo possvel o cumprimento desta recomendao, as fezes devero ser mantidas em refrigerador e transportadas em gelo em at 24 horas aps a coleta. Nota: As amostras devero ser encaminhadas ao LACEN acompanhadas da Ficha de Encaminhamento de Amostras Clnicas, devidamente preenchida. 2.2.2.2 Fezes para pesquisa de Vbrio cholerae a) Fezes in natura diarrica para pesquisa de leuccitos e hemcias: Coletar 1 a 2 gramas de fezes em frasco limpo, seco, de boca larga, com tampa de rosca. Enviar ao LACEN at 24 horas aps a coleta, em isopor com gelo.

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b) Swab fecal em Cary-Blair: Coletar 1 a 2g de fezes em frasco limpo, seco, de boca larga, fornecido pelo LACEN. Mergulhar o swab no frasco contendo as fezes. Introduzir o swab no meio de transporte Cary-Blair e transportar em temperatura ambiente entre 24 e 72 horas aps a coleta. c) Swab retal em Cary-Blair: Introduzir o swab no nus fazendo movimentos rotatrios suaves por alguns segundos. Retirar o swab e introduzir no meio de transporte Cary-blair. Fechar firmemente o frasco. Enviar ao LACEN em temperatura ambiente entre 24 e 72 horas aps a coleta. Nota:

As amostras devero ser encaminhadas ao LACEN acompanhadas da Ficha de Encaminhamento de Amostras Clnicas, devidamente preenchida.

2.2.2.3 Amostras para pesquisa de Salmonella Typhi (febre tifide) 2.2.2.3.1 Sangue para Hemocultura Apresenta maior positividade nas duas semanas iniciais da doena, devendo o sangue ser colhido de preferncia antes que o paciente tenha tomado antibitico. Recomenda-se a coleta para 2 a 3 hemoculturas, no havendo necessidade de intervalos maiores que 30 minutos entre as mesmas. a) Tcnica de Coleta Lavar as mos com gua e sabo, enxaguar bem, enxugar com papel toalha e calar as luvas; Fazer a anti-sepsia da rea com PVPI, por no mnimo 30 segundos. Deixar secar; Passar lcool 70%.

b) Volume de sangue para cada amostra Deve ser respeitada a quantidade de sangue de 1:10 em relao ao meio de cultura. Exemplo: 5ml de sangue para 45ml de meio de TSB Trypticase Soy Broth - (adulto) e 1ml de sangue para 9ml de TSB ( peditrico). c) Inoculao e Incubao Romper o lacre central dos frascos e fazer assepsia da tampa de borracha dos meio com TSB com lcool 70%; Inocular 5ml de sangue direto da seringa de coleta no frasco de hemocultura adulto (45ml) ou 1ml de sangue em frasco de hemocultura peditrico (9ml). Misturar bem (sem agitar) para evitar coagulao; 35

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Se a coleta for prxima do LACEN, encaminhar imediatamente ou at 30 minutos aps a coleta, em temperatura ambiente; Para distncias maiores, Incubar a 35C por 24 horas antes de enviar para o LACEN. d) Transporte Aps decorrido o tempo de incubao de 24 horas, o TSB dever ser encaminhado ao LACEN em temperatura ambiente, juntamente com a Ficha de Encaminhamento de Amostras Clnicas, devidamente preenchida. 2.2.2.3.2 Fezes para Coprocultura A amostra deve ser coletada de preferncia no incio do quadro diarrico e antes da antibiticoterapia. A pesquisa de Salmonella typhi nas fezes indicada a partir da segunda semana da doena, assim como estgio de convalescena e na pesquisa de portadores. No estado de convalescena, indicada a coleta de 2 (duas) amostras do material com intervalo de 24 horas. No caso de portadores assintomticos, particularmente aqueles envolvidos na manipulao de alimentos, recomenda-se a coleta de 7 amostras seqenciadas. Sete dias aps o trmino do tratamento com antimicrobiano, realizar 3 (trs) coproculturas, com intervalos de 30 dias. Caso uma delas seja positiva, essa srie pode ser suspensa e o indivduo deve ser novamente tratado. a) Fezes in natura para cultura: Coletar 1 a 2 gramas de fezes (equivalente colher de sobremesa) em frasco limpo, seco, de boca larga e com tampa de rosca. Enviar ao LACEN em temperatura ambiente, at 1 hora aps a coleta. b) Swab fecal em Cary-Blair: Coletar 1 a 2g de fezes em frasco limpo, seco, de boca larga, fornecido pelo LACEN. Mergulhar o swab no frasco contendo as fezes, dando preferncia s partes mucopurulentas e com sangue e a seguir introduzir no meio de Cary-Blair. Fechar firmemente o frasco. Enviar ao LACEN em temperatura ambiente, at 24 horas aps a coleta. c) Swab retal em Cary-Blair: Introduzir o swab no nus, fazendo movimentos rotatrios suaves por alguns segundos. Retirar o swab e introduzir no meio de Cary-Blair. Fechar firmemente o frasco. Enviar ao LACEN em temperatura ambiente, at 24 horas aps a coleta. d) Fezes in natura diarrica para pesquisa de leuccitos e hemcias: Coletar 1 a 2 gramas de fezes em frasco limpo, seco, de boca larga, com tampa de rosca. Enviar ao LACEN em temperatura ambiente, no prazo 36

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mximo de 1 hora. Em no sendo possvel o cumprimento desta recomendao, as fezes devero ser mantidas em refrigerador e transportadas em gelo em at 24 horas, aps a coleta. Nota:

As amostras devero ser encaminhadas ao LACEN acompanhadas da Ficha de Encaminhamento de Amostras Clnicas, devidamente preenchida.

2.2.3 Secrees Genitais 2.2.3.1 Coleta da secreo uretral masculina para exame a fresco

Solicitar ao paciente para retrair o prepcio; Limpar a secreo emergente com gaze estril; Certificar-se de que a uretra esteja reta; Introduzir o swab cerca de 2 centmetros no canal uretral; Gire o swab delicadamente de 8 a 10 vezes para absorver a secreo; retirar o swab, introduzir em um tubo com 1,0 ml de salina estril e encaminhar para o LACEN imediatamente.

2.2.3.2 Coleta da secreo uretral masculina para diagnstico de Neisseria gonorrhoeae Solicitar ao paciente para retrair o prepcio; Limpar a secreo emergente com gaze; Introduzir o swab alginatado 2 centmetros no canal uretral; Girar o swab delicadamente de 8 a 10 vezes para absorver a secreo; Retirar o swab, fazer um esfregao fino e homogneo em uma lmina identificada com o nome e idade do paciente; Proceder a nova coleta para cultura: introduzir o swab alginatado 2 centmetros no canal uretral; girar o swab delicadamente de 8 a 10 vezes para absorver a secreo e inocule a amostra em meio de transporte Amies com carvo. Encaminhar ao LACEN no mximo at 8 horas.

2.2.3.3 Coleta da secreo uretral masculina para diagnstico de clamdia


Solicitar ao paciente para retrair o prepcio; Limpar a secreo emergente com gaze estril; Introduzir o swab, com haste de alumnio, cerca de 4 centmetros no canal uretral; girar o swab delicadamente de 8 a 10 vezes para obter o maior nmero de clulas epiteliais possveis; Fazer um esfregao fino e homogneo na lmina prpria de clamdia; Encaminhar diariamente ao LACEN em porta lminas.

2.2.3.4 Coleta da secreo uretral masculina para diagnstico de Micoplasma e Ureaplasma urogenitais

Solicitar ao paciente para retrair o prepcio; Limpar a secreo emergente com gaze estril; 37

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Introduzir o swab de rayon ou dracon, cerca de 4 centmetros no canal uretral; girar o swab delicadamente de 8 a 10 vezes para obter o maior nmero de clulas epiteliais possveis; Inocular o swab imediatamente no frasco com caldo nutritivo; Encaminhar ao LACEN at 5 horas em temperatura ambiente.

2.2.3.5 Coleta da secreo uretral feminina para diagnstico da clamdia


Fazer a expresso das glndulas para uretrais pressionando a parede vaginal com o dedo mdio; Introduzir o swab de dracon ou rayon cerca de 2 cm na uretra; Coletar a secreo girando delicadamente o swab de 8 a 10 vezes; Fazer um esfregao fino e homogneo em lmina de clamdia para Imunofluorecncia direta ; Encaminhar ao LACEN diariamente.

2.2.3.6 Coleta da secreo vaginal para o exame a fresco


Introduzir o espculo; Coletar a amostra do saco vaginal com auxlio de um swab; Retirar o swab e introduzir em tubo de ensaio contendo 1,0 ml de salina estril, previamente identificado; Encaminhar ao LACEN imediatamente.

2.2.3.7 Coleta da secreo endocervical para diagnstico da Neisseria gonorrhoeae Introduzir o espculo; Limpar com gaze a secreo do fundo do saco vaginal e a que recobre o colo do tero; Introduzir o swab alginatado cerca de 1cm no canal endocervical, girando-o delicadamente de 8 a 10 vezes, para absorver a secreo. Retirar o swab sem tocar as paredes vaginais; Inocular a amostra imediatamente no meio de transporte de Amies com carvo. Identificando o mesmo. Encaminhar ao LACEN no mximo at 8 horas em temperatura ambiente.

2.2.3.8 Coleta de secreo anal para diagnstico de Neisseria gonorrhoeae Introduzir o swab alginatado ou com carvo no reto, cerca de 2 centmetros; Fazer movimentos circulares junto parede retal raspando o material das criptas por 30 segundos, para absorver a secreo; Repetir o procedimento com novo swab, caso o swab toque as fezes.

2.2.3.9 Coleta de secreo endocervical para diagnstico da clamdia. Introduzir o espculo; Limpar com gaze a secreo do fundo do saco vaginal e a que recobre o colo do tero; 38

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Introduzir o swab de rayon ou dracon cerca de 1cm no canal endocervical, girando-o delicadamente de 8 a 10 vezes, para absorver a secreo. Retirar o swab sem tocar as paredes vaginais; Fazer um esfregao fino e homogneo em lmina de clamdia para Imunofluorecncia direta, previamente identificada; Encaminhar ao LACEN diariamente.

2.2.3.10 Coleta da secreo endocervical para diagnstico de Micoplasma e Ureaplasma urogenitais Introduzir o espculo; Limpar com gaze a secreo do fundo do saco vaginal e a que recobre o colo do tero; Introduzir o swab de rayon ou dracon cerca de 1cm no canal endocervical, girando-o delicadamente de 8 a 10 vezes, para absorver a secreo. Retirar o swab sem tocar as paredes vaginais; Inocular o swab imediatamente no frasco com caldo nutritivo; Encaminhar ao LACEN at 5 horas em temperatura ambiente.

2.2.3.11 Coleta da secreo vaginal para cultura de germes comuns Introduzir o espculo; Coletar a amostra do saco vaginal com um auxlio de um swab; Introduzir o swab em tubo de 1ml de salina estril, identificando o mesmo. Encaminhar ao LACEN diariamente.

2.2.3.12 Coleta de material de leso (cancro duro- Treponema pallidum) Limpar a rea em volta da leso com gaze estril embebida em soluo salina estril; Friccionar a borda da leso com uma lmina de bisturi suavemente at obter uma linfa; Colocar esta linfa sobre uma lmina com uma gota de salina e observe imediatamente no microscpio de campo escuro (lmina e lamnula).

2.2.3.13 Coleta de material de leso (cancro mole/cancride Haemophilus ducreyi) As amostras so colhidas com swab estril, das bordas e centros das leses das regies genitais, obtendo-se maior quantidade possvel de secrees ou pus; Com o prprio swab da coleta, preparar um esfregao em lmina identificada; Deixar secar a temperatura ambiente; Encaminhar ao LACEN em porta-lmina, at 8 horas aps a coleta.

OBSERVAES GERAIS:

A coleta de amostra de secreo uretral para diagnstico laboratorial de Neisseria gonorrhoeae e de clamdia deve ser feita de preferncia pela manh, 39

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antes do paciente urinar. Caso isso no seja possvel, espere pelo menos trs horas aps a ltima mico. Para diagnostico laboratorial de clamdia, Neisseria gonorrhoeae e cultura de germes comuns, assegure-se de que o paciente no esteja sob o efeito de tratamento com antibitico. Para coleta de gonococo e clamdia jamais colete a secreo emergente. Em crianas e em mulheres histerectomizadas, a secreo do fundo do saco vaginal utilizada para exame a fresco, cultura de gonococo e diagnstico de clamdia e micoplasma/ureaplasma urogenitais.

2.2.4 Lquor Coleta realizada pelo mdico; O LACEN fornece um kit (Figura 9), em embalagem com todas as instrues (Figura 10 A e 10B); O transporte da amostra semeada no agar chocolate realizado em temperatura ambiente. Em hiptese alguma pode vir sob refrigerao.

Fig. 9 - Kit de coleta de amostras para meningite

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ESTADO DE SANTA CATARINA SECRETARIA DE ESTADO DA SADE LABORATRIO CENTRAL DE SADE PBLICA LACEN SISTEMA NICO DE SADE - SUS

KIT DE MENINGITE Este Kit composto de: 01 frasco com meio de agar chocolate (frasco com tarja verde); 01 frasco para hemocultura coleta peditrica (frasco com tarja vermelha); 01 frasco vazio estril para lquor recm puncionado (frasco com tarja azul); 01 frasco vazio estril para soro (frasco com tarja laranja); 01 porta-lminas com 01 lmina; 01 embalagem para transporte de LCR e soro; 01 embalagem para transporte de meios de cultura; Conservao na geladeira temperatura 4 a 8C.

a) b) c) d) e) f) g)

ORIENTAO PARA O USO DE KIT DE MENINGITE 1) No momento do uso, os meios de cultura devem estar a 35C 2) Romper o lacre central dos frascos e fazer assepsia das tampas de borracha com lcool 70%.
1) Semeie o lquor (LCR) imediatamente no frasco com meio de agar chocolate (verde). Incubar em estufa a 35C por 24 a 48 horas e enviar ao LACEN. Transportar em temperatura ambiente 2) Colocar 1 a 2 ml de LCR no frasco estril (azul). Transportar em Isopor com gelo. 3) Colocar 1 a 2 ml de soro no frasco estril (Laranja). Transportar em isopor com gelo. 4) Adicionar 1 ml de sangue direto no frasco para hemocultura (vermelho). Incubar em estufa a 35C por 24 a 48 horas e enviar ao LACEN. Transportar em temperatura ambiente. Observao: para adulto, utilizar frasco de meio de cultura com 45 ml e adicionar 5 ml de sangue. 5) Fazer um esfregao em lmina do lquor centrifugado e fixar em temperatura ambiente ou em estufa a 35C. No corar. Transportar no porta-lmina a temperatura ambiente

Importante: o LCR e o soro devero ser colocados no freezer ou congelador at a hora de serem enviados ao LACEN

Figura 10 A: Embalagem do Kit de Meningite com as instrues de uso (frente)

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TRANSPORTE DE MEIOS DE CULTURA


a) Aproveitar esta embalagem para acondicionar a lmina e os frascos de agar chocolate e de hemocultura aps incubao prvia por 24-48 horas a 35C. b) Enviar ao LACEN em temperatura ambiente.

LABORATRIO CENTRAL DE SADE PBLICA LACEN Avenida Rio Branco, n 152 Fundos Centro Fone: PABX: (48)251-7800 FAX: (48)251-7900 CEP: 88015-201 Florianpolis Santa Catarina

e-mail: lacen@saude.sc.gov.br

Figura 10 B: Embalagem do Kit de Meningite com as instrues de uso (verso)

2.2.5 Sangue (Hemocultura) a) Tcnica de Coleta Lavar as mos com gua e sabo, enxaguar bem, enxugar com papel toalha e calar as luvas; Fazer a anti-sepsia da rea com PVPI, por no mnimo 30 segundos. Deixar secar; Passar lcool 70%; Coletar assepticamente no mnimo 5ml de sangue de indivduos adultos e 1ml de crianas, cuidar para que no hajam bolhas de ar na seringa; No trocar de agulha antes de injetar o sangue no frasco.

b) Volume de sangue para cada amostra recomendado de duas a trs amostras de cada paciente, com intervalos de 30 minutos. Deve ser respeitada a quantidade de sangue de 1:10 em relao ao meio 42

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de cultura, isto : 5ml de sangue para 45ml de meio de TSB -Trypticase Soy Broth (hemocultura adulto) e 1ml de sangue para 9ml de TSB (hemocultura peditrico). d) Inoculao e Incubao Romper o lacre central dos frascos e fazer assepsia na tampa de borracha dos frascos de meio com TSB (frasco de hemocultura) com lcool 70%; Inocular 5ml de sangue direto da seringa de coleta no frasco de hemocultura adulto (45ml) ou 1ml de sangue em frasco de hemocultura peditrico (9ml). Misturar bem (sem agitar) para evitar coagulao; Se a coleta for prxima do LACEN, encaminhar imediatamente em temperatura ambiente; Para distncias maiores, proceder como o descrito abaixo: Em caso de mais de um frasco, em um deles dever ser introduzindo na tampa de borracha uma agulha estril com uma pequena poro de algodo na parte posterior, para aerao; Incubar a 35C por 24 horas antes de enviar para o LACEN. e) Transporte Aps decorrido o tempo de incubao de 24 horas, o TSB dever ser encaminhado ao LACEN em temperatura ambiente, juntamente com a Ficha de Encaminhamento de Amostras Clnicas devidamente preenchida.

2.2.6 Escarro Tcnica de Coleta Colher, de preferncia, a primeira amostra da manh; Orientar o paciente para enxaguar previamente vrias vezes a boca com gua para remover a flora bacteriana superficial dessa regio e colher a amostra obtida aps tosse profunda, diretamente em um frasco de boca larga; Explicar ao paciente a diferena de uma amostra obtida aps tosse profunda e saliva, para se obter um material de melhor qualidade; Paciente incapaz de expectorar colher escarro induzido aps nebulizao com soluo fisiolgica estril de 3 a 10%.

2.2.7 Secreo de orofaringe e nasofaringe para Pesquisa de Corynebacterium diphtheriae a) Material necessrio para coleta de 1 (um) paciente: 2 swabs descartveis (1 para nariz e 1 para garganta) 2 tubos com meio de cultura Amies com carvo (1 para nariz e 1 para garganta) 1 abaixador de lngua descartvel Etiqueta para identificao dos tubos com meio de cultura 43

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b) Meio de transporte de AMIES com carvo armazenamento O meio de transporte de Amies com carvo dever ser armazenado em geladeira, observando-se sempre a data de vencimento antes de sua utilizao. O meio tem validade de 6 meses partir da data de fabricao. Os meios de cultura em condies de uso devem apresentar as seguintes caractersticas: Cor preta Consistncia semi-slida Sem reas de ressecamento Os swabs devem ser armazenados em temperatura ambiente, em local seco.

c) Condies para a coleta Antes de iniciar a coleta, observar as caractersticas do meio de cultura (meio de transporte de Amies com carvo), quanto ao ressecamento do meio e contaminantes, o que tornaria inviveis para uso. Caso isso ou outro evento ocorra que inutilize os meios, coloc-los em saco plstico identificado como inutilizado e separ-los dos que ainda apresentam condies de uso, para posterior devoluo ao LACEN. Nenhum tubo de meio de Amies com carvo dever ser dispensado no lixo, mas sim devolvido ao LACEN para reaproveitamento de vidraria. Os meios no utilizados no momento da coleta e ainda em bom estado de conservao, devero voltar geladeira em saco plstico fechado, para posterior utilizao ou devoluo ao LACEN em boas condies. Os swabs a serem usados no devero apresentar sinais de violao de embalagem, umidade do algodo ou qualquer outra anormalidade que possa indicar contaminao. Caso isto ocorra, desprez-los e proceder coleta com material adequado. Verificar sempre o prazo de validade na embalagem.

d) Coleta de naso e orofaringe (NARIZ/GARGANTA) No momento de uso os meios de cultura no podem estar gelados, sendo necessrio retir-los do refrigerador pelo menos 30 minutos antes. No incio da coleta os meios de transporte de Amies com carvo devero estar temperatura ambiente. Antes de iniciar a coleta, lavar as mos, explicar ao doente e/ou comunicante o que ir ser feito. Identificar os tubos com N (nariz) e G (garganta) para facilitar o manuseio e evitar trocas. Colocar a mscara, calar as luvas e iniciar a coleta. Nariz (N) utilizar o mesmo swab para ambas as narinas. Introduzir o swab ultrafino flexvel e estril na narina do paciente at encontrar resistncia na parede posterior da nasofaringe. Realizar movimentos rotatrios. 44

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Imediatamente aps a coleta, introduzir o swab no meio de transporte de Amies com carvo. Ateno para que os swab fiquem submersos no meio de cultura. Garganta (G) com auxlio de um abaixador de lngua, pressionar a lngua para baixo e com swab estril, fazer a coleta no redor da superfcie da garganta, passando o swab pelas amdalas, vula e toda a parede da garganta. Na coleta em doentes, o swab deve ser passado cuidadosamente apenas ao redor das leses, para que no haja descolamento da placa. Imediatamente aps a coleta, introduzir o swab no meio de transporte de Amies com carvo. Ateno para que os swab fiquem submersos no meio de cultura. Fechar firmemente o tubo.

e) Identificao dos tubos Aps a semeadura, identificar os tubos com os seguintes dados: - Nome do doente e/ou comunicante - Idade - Data e hora da coleta Anexar a ficha de encaminhamento de Amostras Clnicas, especfica do LACEN devidamente preenchida, ou seja: - Preencher os dados pessoais de identificao - Preencher os dados da amostra - Especificar o tipo de amostra, se doente ou comunicante de difteria - Nas requisies de comunicantes, acrescentar o nome do doente ao qual est vinculado.

f) Acondicionamento das amostras para transporte: Os meios devidamente semeados e identificados devero se encaminhados ao LACEN em temperatura ambiente no mesmo dia ou no prazo mximo de 24 horas, acompanhados da Ficha de Encaminhamento de Amostras Clnicas. No retornar os meios semeados geladeira. Colocar os tubos com as amostras devidamente identificadas e etiquetadas, em um saco plstico e vedar. Colocar dentro de um isopor, fixando na parte interna com fita adesiva. Colocar as requisies correspondentes devidamente preenchidas, dentro de um saco plstico. Vedar bem o saco e fix-lo na parte interna da tampa do isopor. Fechar e vedar bem o isopor. Identificar com destinatrio e remetente. Enviar ao laboratrio.

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g) Recomendaes adicionais: Por ser doena de transmisso respiratria, o uso de mscara e luvas essencial para a proteo do profissional que realiza a coleta e devem ser utilizadas tanto para caso suspeito como para os comunicantes sadios. Todo material descartvel utilizado na coleta dever ser acondicionado em saco plstico, vedado com fita crepe, identificado como contaminado, recolhido no lixo hospitalar. No dever ser feita qualquer improvisao do material. imprescindvel que o meio de cultura e o swab estejam obedecendo rigorosamente s condies de uso no momento da coleta.

2.2.8 Secreo de nasofaringe para Pesquisa de Bordetella pertussis a) Material necessrio para coleta de 1 (um) paciente: 1 swab descartvel (swab ultrafino com haste flexvel, estril e alginatado) 1 tubo contendo meio de transporte para coqueluche Meio de ReganLowe com antibitico (Agar carvo com antibitico) Mscara descartvel Luvas descartveis Etiquetas para identificao dos tubos b) Armazenamento O meio de transporte para coqueluche (Meio de Regan-Lowe RL) dever ser armazenado em geladeira, observando-se sempre a data de vencimento antes de sua utilizao. O meio tem validade de 2 meses partir da data de fabricao. Os meios de cultura em condies de uso devem apresentar as seguintes caractersticas: Cor preta Consistncia semi-slida Sem reas de ressecamento Notas:

Como o meio de cultura contm sangue e antibitico, o prazo de validade dever ser seguido rigorosamente. Os swabs devem ser armazenados em temperatura ambiente em local seco.

c) Condies para coleta Antes de iniciar a coleta, observar as condies do meio de transporte, principalmente sua data de validade. Caso o meio esteja vencido ou outro evento ocorra que inutilize os meios, coloc-los em sacos plsticos identificados como inutilizados e separlos dos que ainda apresentam condies de uso, para posterior devoluo ao LACEN. Nenhum tubo de meio de Regan-Lowe dever ser 46

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dispensado no lixo, mas sim devolvido ao LACEN para reaproveitamento de vidraria. Os meios no utilizados no momento da coleta e ainda em bom estado de conservao devero voltar geladeira em sacos plsticos, para posterior utilizao ou devoluo ao LACEN em boas condies. Os swabs a serem usados no devero apresentar sinais de violao de embalagem, umidade do algodo ou qualquer outra anormalidade que possa indicar contaminao. Caso isso ocorra, desprez-los e proceder coleta com material adequado. Verificar sempre o prazo de validade na embalagem. A coleta do material de pacientes suspeitos de coqueluche dever ser realizada preferencialmente no incio dos sintomas caractersticos da doena (perodo catarral). A coleta dever ser realizada antes do tratamento ou no mximo com 3 dias de antibitico terapia.

d) Coleta de nasofaringe No momento de uso os meios de cultura no podem estar gelados, sendo necessrio retir-los do refrigerador pelo menos 30 minutos antes. No incio da coleta os meios de transporte de Regan-Lowe devero estar temperatura ambiente. Antes de iniciar a coleta, calar as luvas e iniciar a coleta. A secreo nasofaringea dever ser coletada introduzindo o swab ultrafino na narina do paciente at encontrar resistncia na parede posterior da nasofaringe e realizando movimentos rotatrios. Coletar material de uma narina, utilizando 1 (um) swab. Aps a coleta, o swab dever ser introduzido no tubo contendo o meio de transporte para coqueluche com antibitico. Ateno para que o swab fique submerso no meio de cultura. Fechar firmemente o tubo.

e) Identificao dos tubos Aps a semeadura, identificar o tubo com os seguintes dados: - Nome do paciente - idade - Data e hora da coleta Anexar a ficha de encaminhamento de Amostras clnicas, especfica do LACEN, devidamente preenchida, ou seja: - Preencher os dados pessoais de identificao - Preencher os dados da amostra - Especificar se doente ou contato de coqueluche - Nas requisies de contatos, acrescentar o nome do doente ao qual est vinculado.

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f) Acondicionamento da amostras para transporte O material coletado, devidamente semeado em meio de Regan-Lowe (RL) e identificado deve ser encaminhado ao LACEN em TEMPERATURA AMBIENTE e imediatamente aps a coleta. Na impossibilidade de um encaminhamento imediato aps a coleta, o material deve ser incubado em estufa a 36C por um perodo mximo de 24 horas e encaminhado a seguir em temperatura ambiente. No retornar os meios semeados geladeira. O material dever ser encaminhado ao LACEN acompanhado da Ficha de Encaminhamento de Amostras Clnicas devidamente preenchida. Colocar o tubo com a amostra devidamente identificada e etiquetada, em um saco plstico e vedar. Colocar dentro de um isopor, fixando na parte interna com fita adesiva. Colocar a requisio correspondente devidamente preenchida, dentro de um saco plstico. Vedar bem o saco e fix-lo na parte interna da tampa do isopor. Fechar e vedar bem o isopor. Identificar com destinatrio e remetente. Enviar ao LACEN.

g) Recomendaes adicionais Por ser doena de transmisso respiratria, o uso de mscara e luvas essencial para a proteo do profissional que realiza a coleta e devem ser utilizadas tanto para caso suspeito como para os comunicantes sadios. Todo material descartvel utilizado na coleta dever ser acondicionado em saco plstico, vedado com fita crepe, identificado como contaminado, recolhido no lixo hospitalar. No deve ser feita qualquer improvisao do material. imprescindvel que o meio de cultura e o swab estejam obedecendo rigorosamente a condio de uso no momento da coleta.

2.2.9 Ponta de cateter Procedimento de retirada do cateter os mesmos cuidados de anti-sepsia da pele utilizados no momento da insero do cateter devem ser adotados, com o propsito de evitar a contaminao com a microbiota da pele. Fazer anti-sepsia da pele que circunda o local da insero do cateter. Remover assepticamente o cateter. Cortar 5 cm da ponta distal (a que estava inserida na veia do paciente) e colocar diretamente em tubo ou frasco estril seco. Enviar ao laboratrio temperatura ambiente dentro de 1 hora aps a coleta ou at 12 horas se refrigerado. Nota:

Para melhor correlao clnica infeco relacionada ao cateter recomenda-se a coleta de hemocultura associada cultura do cateter. 48

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2.2.10 Secreo de Ouvido 2.2.10.1 Secreo de Ouvido mdio Em caso de rompimento da membrana do tmpano, o fludo pode ser colhido com swab fino. Antes do procedimento de coleta, limpar o ouvido externo com anti-sptico seguido de lavagem com soluo fisiolgica estril. Nota:

Amostras colhidas por aspirao no devem ser enviadas ao laboratrio como secreo de ouvido e sim como secreo obtida por timpanocentese. 2.2.10.2 Secreo de Ouvido externo Limpar o canal do ouvido com anti-sptico seguido de lavagem com soluo fisiolgica estril; aguardar alguns minutos e colher com swab, pressionando bem.

2.2.11 Pele (abscessos e exsudatos) e Bipsias 2.2.11.1 Leso aberta No recomendado cultura de leses secas ou crostas. Descontaminar as margens e a superfcie da leso com soluo fisiolgica, lcool a 70%, soluo de povidona-iodo ou clorexidina a 0,2% soluo aquosa, dependendo do tipo de leso. Proceder nova limpeza com soluo fisiolgica estril. Coletar o material purulento localizado na parte mais profunda da leso utilizando, de preferncia, seringa e agulha. Se no for possvel a coleta por puno, utilizar swab com meio de transporte. 2.2.11.2 Abscesso fechado Um abscesso fechado o local ideal para a coleta. No usar swab Fazer anti-sepsia com produto adequado. Aspirar o exsudato com agulha e seringa.

2.2.11.3 Ferida de queimadura A coleta deve ser realizada aps desbridamento e descontaminao da leso. A coleta de fragmento de tecido (bipsia) a tcnica mais indicada para a cultura. Caso no seja possvel, coletar com swab estril com meio de transporte. Amostra da superfcie da leso normalmente representa colonizao.

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2.2.11.4 Pstula e vescula Selecionar uma pstula intacta. Fazer anti-sepsia com produto adequado e puncionar. Se a leso for seca, com crosta, sem vescula ou pstula evidente, remover o material superficial aps anti-sepsia e passar firmemente o swab estril sobre a leso.

2.2.11.5 Bipsia Enviar em frasco estril. No devem ser aceitas amostras em formol.

2.3. Modelos de kits e fichas utilizados na Seo de Bacteriologia 2.3.1 Kit para Coqueluche (Modelo na pgina 52) 2.3.2 Kit para Difteria (Modelo na pgina 53) 2.3.3 Kit para Coprocultura (Modelo na pgina 54) 2.3.4 Kit para a RENAGONO (Modelo na pgina 55) 2.3.5 Ficha de encaminhamento de Amostras Clnicas (Modelo na pgina 56)

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COQUELUCHE
KIT PARA COLETA DE SECREO NASOFARINGE PARA CULTURA NO DIAGNSTICO LABORATORIAL DA COQUELUCHE

Kit para 1 (um) paciente Um tubo com meio de transporte para coqueluche (Meio de Regan Lowe) com antibitico; 1 swab ultrafino com haste flexvel, estril e alginatado; Orientaes sobre a coleta de secreo nasofaringe para cultura no diagnstico laboratorial da coqueluche; Ficha de encaminhamento de Amostras Clnicas.

OBS.: Transporte e armazenamento do meio de cultura em geladeira; Validade do meio de transporte para coqueluche: 2 meses; O swab deve ser armazenado em temperatura ambiente e em local seco.

Revisado e modificado em 04/03/2004

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DIFTERIA

KIT PARA COLETA DE SECREO NASO E OROFARINGE PARA CULTURA NO DIAGNSTICO LABORATORIAL DA DIFTERIA

Kit para 1 (um) paciente 2 tubos com meio de Arnies (1 paro o nariz e 1 para a garganta; 2 swabs descartveis ultrafinos com haste flexvel, estril e alginatado (1 para o nariz e 1 para a garganta); Orientaes sobre a coleta de secreo naso e orofaringe para cultura no diagnstico laboratorial da difteria; Ficha de encaminhamento de Amostras Clnicas.

OBS.: Transporte e armazenamento do meio de cultura (antes da semeadura) em geladeira; O swab deve ser armazenado em temperatura ambiente e em local seco.

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COPROCULTURA
(DOENAS DIARREICAS: CLERA E DOENAS TRANSMITIDAS POR ALIMENTOS)

KIT PARA COLETA DE FEZES PARA CULTURA NO DIAGNSTICO DE INFECES INTESTINAIS

Kit para 1 (um) paciente

Um tubo com meio de transporte de Cary-Blair 1 pote plstico para coleta de fezes in natura 1 swab 1 Ficha de encaminhamento de Amostras Clnicas.

OBS.: Transporte e armazenamento do meio de cultura (antes da semeadura) em geladeira; O swab deve ser armazenado em temperatura ambiente e em local seco.

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RENAGONO

KIT PARA COLETA DE SECREES URETRAL E ENDOCERVICAL PARA PESQUISA DE Neisseria gonorrhoeae

Kit para 1 (um) paciente


01 swab alginatado (para coleta endocervical); 01 swab comum (para a bacterioscopia); 01 swab ultrafino tratado (alginatado/Dracon) para coleta uretral; 01 lmina nova no porta lmina; 01 tubo de meio de cultura de Amies com carvo (meio de transporte); Etiquetas auto-colantese (1 para lmina e outra para o tubo) Ficha de encaminhamento de Amostras Clnicas.

OBS.:
Armazenar o Meio de Amies na geladeira (validade de 2 meses); Transportar a amostra no meio de Amies em temperatura ambiente; O tempo entre a coleta e o processamento no LACEN no pode ultrapassar 08 horas.

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ESTADO DE SANTA CATARINA SECRETARIA DE ESTADO DA SADE LABORATRIO CENTRAL DE SADE PBLICA SETOR DE BACTERIOLOGIA

FICHA DE ENCAMINHAMENTO DE AMOSTRAS CLNICAS


DADOS PESSOAIS Nome: ____________________________________________________________Idade _______ Sexo: _______ Municpio de Residncia:___________________________________________N da notificao:_____________ Procedncia: __________________________________________________(Hospital, creche, restaurante, evento) Municpio de Atendimento: ______________________________________ Regional: _________________

DADOS DA AMOSTRA
DIFTERIA Amostra: ( ) orofaringe ( )nasofaringe ( ) leso cutnea) Data e hora da Coleta:___________________________ COQUELUCHE Amostra: ( ) Secreo de Nasofaringe Data e hora de coleta: _________________________ ( ) Doente ( ) Contato

( (

) Doente ) Contato (Nome do doente:__________________________)

CLERA Amostra: ( ) fezes in natura ( ) swab fecal em Cary-Blair ( ) swab retal em Cary-Blair) Perodo de incubao (horas): _________________ Data e hora da Coleta: _____________________ DOENAS TRANSMITIDAS POR ALIMENTOS (DTA) Amostra: ( ) fezes in natura ( ) swab fecal em Cary-Blair ( ) swab retal em Cary-Blair N da amostra: ( )1 ( ) 2 3( ) ( ) Manipulador ( ) Doente Perodo de incubao (horas): _________________ Data e hora da Coleta: ___________________ FEBRE TIFIDE Hemocultura: entre a 1 e 2 semana da doena N da amostra: ( ) 1 ( ) 2 ( ) 3 Data da Coleta: __________________ Hora da Coleta: 1 amostra: ___________ 2 amostra: ___________ 3 amostra:___________ Amostra: ( ) fezes in natura ( ) swab fecal, em Cary-Blair ( )swab retal em Cary-Blair N de amostras: ( )1 ( ) 2 ( ) 3 ( ) 4 ( ) 5 ( )6 ( ) 7 Data e hora da Coleta:____________ Aps tratamento: ( ) 30 dias ( ) 60 dias ( ) 90 dias MENINGITE: Amostra: ( ) Lquor puro ( ) lquor em gar chocolate ( )lmina Data e hora da Coleta: ______________________________________ Dados dos exames de lquor j realizados: leuccitos: ____________ neutrfilos: _____ linfcitos: ________ glicose: _________ protena: _______ Gram: ______________Cultura: _______________________________ MENINGOCOCCEMIA Amostra: ______________ N da amostra: _________- 1, 2 ou 3 (1 dia) Data e hora da Coleta: _____________________________ OUTRAS AMOSTRAS/ CEPA BACTERIANA Amostra: ______________________________

_________1, 2 ou 3 (2 dia)

Origem : _________________________________________

Exame Solicitado___________________________________________________________________________ Data e hora da remessa do material: _______________________________ Responsvel: _________________________________________ Fone p/ contato:______________________ PARA USO DO LACEN Recebimento do material (data e hora): _________________________________________________________ Tipo de material: __________________________________________________________________________ Forma de acondicionamento da amostra: ( ) adequada ( ) inadequada: Se inadequada especificar: ________________________________________________ N do Registro no Setor de Bacteriologia: ___________________________________

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3. SEO DE HANSENASE 3.1 Orientaes gerais de coleta e transporte das amostras em relao ao exame solicitado

EXAME HANSEN, Pesquisa de bacilo de

MATERIAL BIOLGICO Linfa cutnea

COM QUE COLHER Lmina de bisturi n. 15

3.2 Orientaes especficas de coleta Dar ao paciente uma breve explicao sobre o exame a ser realizado; Fazer anti-sepsia do local a ser coletado com lcool 70 %; Com auxlio de uma pina de Kelli curva fazer uma boa isquemia para impedi o fluxo de sangue; Com o auxlio de um bisturi, cortar a pele em mais ou menos 5 mm de comprimento por 2 mm de profundidade; Com o lado no cortante da lmina, raspar o bordo interno do corte 2 a 3 vezes at obter boa quantidade de linfa;

Figura 10: Isquemia e Inciso

Transferi-la para uma lmina de vidro com borda fosca,bem limpa e nova previamente identificada com lpis de vdea ou com ponta de diamante, sempre do mesmo lado que sero colocados os esfregaos; Espalhar o material com a parte plana da lmina do bisturi em movimentos circulares a fim de obter um esfregao uniforme abrangendo uma nova rea de cerca de 5 a 7 mm de dimetro; Os 4 esfregaos sero colocados um ao lado do outro com a distncia de 1 cm na seqncia da coleta do material. Cada lmina dever ter no mximo 4 esfregaos. Obedecer seqncia da coleta, conforme a figura 11: lbulo de 56

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orelha direta (LOD), lbulo da orelha esquerda (LOE), cotovelo direito (CD) e cotovelo esquerdo (CE) ou critrio mdico, quando necessrio, joelho direito e esquerdo e leso.

I D E N T I F I C A O

LO

CE

Figura 11: Distribuio padro dos esfregaos na lmina

Os esfregaos no devem conter sangue, pois esse poder interferir no exame microscpio; Para o mesmo paciente usa-se a mesma lmina de bisturi aps limp-la com lcool 70% e flamb-la em chama; Deixar os esfregaos secarem temperatura ambiente e a seguir passar na chama de lamparina a lcool, por 3 vezes rapidamente. Observar que a face onde se encontra o esfregao fique para cima; Usar sempre lmina de bisturi e de vidro novos para cada paciente; A inciso feita no paciente deve ser coberta com um curativo estril.

3.3 Transporte As lminas ainda no coradas devero ser encaminhadas ao laboratrio o mais breve possvel, acondicionadas em portas-lmina. As lminas coradas para superviso devero ser encaminhadas em portalminas, mensalmente, acompanhadas do Formulrio para superviso indireta de baciloscopia para hansenase (ver item 3.3.2) 3.3.1 Transporte de lminas para Superviso Indireta a) Todas as lminas positivas e todas as negativas devem ser encaminhadas Seo de Hansenase do LACEN para superviso indireta; b) Devem ser transportadas em caixas ou frascos (Figura 15) com paredes rgidas e com ranhuras prprias para a fixao das lminas; c) Os formulrios que acompanham as lminas para a superviso indireta no devem ser colocados junto com as lminas para evitar possveis contaminaes; d) importante colocar no formulrio o nome do laboratrio e o municpio de procedncia; e) Colocar os formulrios junto caixa ou frasco, embrulhar e enviar ao LACEN, devidamente identificados com o endereo do remetente e destinatrio, corretos. 57

MANUAL DE ORIENTAES PARA COLETA, PREPARO E TRANSPORTE DE MATERIAL BIOLGICO LACEN/SC FORMULRIO PARA SUPERVISO INDIRETA DE BACILOSCOPIA PARA HANSENASE. LABORATRIO DA UNIDADE SANITRIA DE: _____________________________________________ MS: __________________ ANO: ___________________ 1. Lminas POSITIVAS para diagnstico (enviar todas as positivas): Nmero ndice baciloscpico por esfregao No. LOD LOE CD CE Nome: No. Nome: No. Nome: No. Nome: No. Nome: No. Nome: LOD LOE CD CE LOD LOE CD CE LOD LOE CD CE LOD LOE CD CE LOD LOE CD CE

LESO Idade: LESO Idade: LESO Idade: LESO Idade: LESO Idade: LESO Idade:

2. Lminas POSITIVAS para controle de tratamento (enviar todas as lminas): Nmero ndice baciloscpico por esfregao No. LOD LOE CD CE No. No. No. No. No. LOD LOD LOD LOD LOD LOE LOE LOE LOE LOE CD CD CD CD CD CE CE CE CE CE

LESO LESO LESO LESO LESO LESO

3. Lminas NEGATIVAS (enviar todas as lminas): 3.1. Para DIAGNSTICO 3.2. Para CONTROLE DE TRATAMENTO

4. Total de baciloscopias do ms DIAGNSTICO Positivo : ________________________ Negativo: ________________________ CONTROLE Positivo: _________________________ Negativo: ________________________ TOTAL: ______________________________________

5. Observaes

Data: ____/____/____

Assinatura Bioqumico:

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4. SEO DE LEPTOSPIROSE 4.1 Orientaes gerais de coleta e transporte das amostras em relao ao exame solicitado

EXAMES

MATERIAL BIOLGICO

ONDE COLHER E QUANDO


Tubo seco (5 ml)

LEPTOSPIROSE, IgM por ELISA

Sangue (soro)

LEPTOSPIROSE, microcoagulante/titulao

Sangue (soro)

Tubo seco (5 ml), a partir do 15 dia dos primeiros sintomas.

4.2 Orientaes especficas de coleta a) As normas recomendam que a primeira coleta para diagnstico por Elisa seja realizada a partir do 7 dia aps o incio dos sintomas; b) A cultura da Leptospira somente para fins epidemiolgicos; c) Em caso de Elisa Reagente, deve ser solicitada uma segunda amostra a partir do 15 dia dos primeiros sintomas da doena para realizao de Microaglutinao que tem por objetivo determinar a espcie da Leptospira; d) Em caso de Elisa No-Reagente, mas com quadro clnico suspeito, nova amostra dever ser encaminhada para confirmao laboratorial aps o 15 dia do incio dos sintomas.

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5. SEO DE MALRIA E MICROSCOPIA DE CHAGAS (DCA) 5.1 Orientaes gerais de coleta e transporte das amostras em relao ao exame solicitado

EXAMES
Malria (Pesquisa de Plasmodium)

MATERIAL BIOLGICO
Sangue

ONDE COLHER
Em lmina como gota espessa e esfregao

5.2 Orientaes especficas de coleta, preparo da amostra e transporte das lminas. a) Coletar sempre uma lmina com duas gotas espessas e uma lmina com esfregao; b) No utilizar sangue com anticoagulante para preparao da lmina. c) Aps secagem das lminas, transportar em caixas ou frascos (Figura 15), com paredes rgidas e com ranhuras prprias para fixao das lminas. d) A solicitao do exame deve acompanhar os frascos de transporte.

5.2.1 Tcnica de Coleta e Preparao da Gota Espessa

Etiqueta

a) Trabalhar sobre superfcie plana horizontal. b) Preencher completamente os dados do paciente. 60

Pesquisa de Trypanosoma cruzy para DCA

Sangue

Pesquisa de Plasmodium

Sangue

Em tubo com EDTA (ver item 1.4.1 sobre Coleta de sangue)

Em lmina como gota espessa e esfregao

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c) Usar duas lminas, colocar uma lmina sobre a superfcie plana ou sobre o padro, sendo o manuseio pelas extremidades sem tocar as superfcies. De preferncia, a lmina deve estar com etiqueta auto-adesiva para o registro da identificao ou usar lmina com extremidade esmerilhada. d) Limpar vigorosamente a pele do local de puno (parte lateral do segundo ou terceiro dedo esquerdo, lbulo da orelha ou em lactentes o dedo grande do p ou o calcanhar) com gaze ou algodo embebido em lcool e enxugar com gaze ou algodo. e) Retirar o estilete do envoltrio estril, segurando-o com a mo direita. Mantendo firmemente o dedo a ser puncionado entre o polegar e o indicador da mo esquerda, puncionar o local de maneira firme e leve. f) Remover a primeira gota de sangue com gaze ou algodo seco. g) Comprimir o dedo suavemente (como uma ordenha) para obter outra gota de sangue esfrica sobre a pele seca. No tocar o ponto de sada do sangue. h) Segurando a lmina firmemente pelas bordas numa das extremidades contra o indicador (que est comprimindo o dedo do paciente) baixa-se lentamente a lmina at tocar o alto da gota de sangue (sem entrar em contato com a pele do paciente). Se a quantidade de sangue for insuficiente, pode-se colocar outra gota ao lado. i) Colocar a lmina com a face para cima na superfcie de trabalho. Com o canto e os primeiros 5mm da borda longa da segunda lmina, espalhar o sangue formando um retngulo de tamanho e espessura adequados. Tomar outra amostra, colocar ao lado da primeira e espalhar da mesma maneira. As gotas espessas devem ser localizadas na parte central da lmina. j) Em lugar da segunda gota espessa pode-se colocar uma gota de sangue e fazer um esfregao (distendido ou extenso). k) Limpar o local puncionado com gaze ou algodo secos, se necessrio pressionar. l) Secar abanando com um pedao de carto, ar morno, caixa com lmpada, estufa, ou sobre o prprio quebra-luz com suporte para secagem de lminas recm-colhidas ou coradas. m) No recomendvel o registro do nmero da lmina na prpria amostra de sangue. n) A melhor preparao para o diagnstico de malria obtida com amostra de sangue colhida diretamente por puno digital ou venosa sem anticoagulante. O sangue com anticoagulante fixa menos na lmina de vidro, podendo ocorrer o desprendimento do sangue no ato da colorao pelo mtodo de Walker/Giemsa e no ato da lavagem. A amostra de sangue com anticoagulante deve ser submetida secagem pelo calor brando antes da colorao. o) A maneira prtica para verificao da secagem adequada da gota espessa, consiste em colocar a lmina sob a fonte de calor at o desaparecimento do brilho da amostra mida. A secagem natural aps a coleta, no confere uma boa fixao da amostra para a imediata colorao pelo mtodo de Walker sem o risco de desprendimento do sangue. A amostra de sangue positiva, com anticoagulante, conservada por vrios dias em geladeira, no apresenta boas condies para observao das caractersticas morfolgicas dos plasmdios. De modo que a melhor preparao aquela obtida com sangue fresco, sem anticoagulante, espalhada imediatamente, secagem rpida e colorao, no mximo at o 3 dia aps a coleta. 61

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5.2.2 Tcnica de Preparao de Esfregao (Distendido)

a) Trabalhar sobre superfcie plana e horizontal. b) Colocar uma pequena gota de sangue na parte central da lmina de vidro a 1,5 cm da extremidade fosca ou da etiqueta. c) Colocar a Lmina com a face para cima sobre a superfcie plana. d) Com a borda estreita da lmina em contato com a gota de sangue, formando um ngulo de 50, espalhar o sangue com um movimento rpido, para formar uma camada delgada de sangue sem atingir a extremidade da lmina. e) Deixar secar na mesma posio horizontal. f) Usar etiqueta adesiva para identificao. g) O sangue pode ser espalhado tambm da seguinte maneira: Retirar com a extremidade da prpria lmina espalhadora a gota de sangue. Colocar a extremidade que contm o sangue em contato com a parte central da lmina em posio horizontal e antes que o sangue, por capilaridade, atinja as bordas laterais da lmina espalhadora formando um ngulo de 50, faz-se o deslocamento rpido para formar a camada fina de sangue sem atingir a extremidade da lmina.

5.3 Transporte de lminas para Superviso Indireta a) Todas as lminas positivas e todas as negativas devem ser encaminhadas Seo de Malria do LACEN para superviso indireta; b) Devem ser transportadas em caixas ou frascos (Figura 15) com paredes rgidas e com ranhuras prprias para a fixao das lminas; c) Os formulrios que acompanham as lminas para a superviso indireta no devem ser colocados junto com as lminas para evitar possveis contaminaes; d) importante colocar no formulrio o nome do laboratrio e o municpio de procedncia; e) Colocar os formulrios junto caixa ou frasco, embrulhar e enviar ao LACEN, devidamente identificados com o endereo do remetente e destinatrio, corretos.

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6. SEO DE TUBERCULOSE 6.1 Orientaes gerais de coleta e transporte das amostras em relao ao exame solicitado

EXAMES

MATERIAL BIOLGICO
Escarro

ONDE COLHER
Em pote estril, de boca larga, com tampa de rosca e descartvel (Figura 12)

Lquidos asspticos (lquor, lquidos pleural, asctico, sinovial, pericrdico, peritoneal

Em frasco estril, (mnimo de 1,5 ml)

Lavado gstrico, aspirado brnquico, urina Pesquisa de BAAR Cultura para BAAR Teste de Resistncia Pus (cavidade aberta) Pus (cavidade fechada)

Em pote estril, de boca larga, com tampa de rosca e descartvel

Em seringa, atravs de puno

Com swab imerso em gua destilada ou salina

Sangue

Em tubo com anticoagulante (SPS ou EDTA) em volume de at 5 ml.

Medula ssea

Em frasco estril

bipsia

Em frasco estril, com gua destilada ou salina estril. No utilizar formol.

6.2 Orientaes especficas de coleta e transporte a) Uma boa amostra de escarro a que provm da rvore brnquica, obtida aps esforo de tosse, e no a que se obtm da faringe ou por aspirao de secrees nasais nem tampouco, a que contm somente saliva. O volume de 5 a 10 ml o ideal. b) Ao despertar pela manh, o paciente deve lavar bem a boca, inspirar profundamente, deter por um instante o ar nos pulmes e lan-lo fora pelo esforo da tosse. Deve repetir a operao at obter trs eliminaes de escarro, evitando que se escorra pela parede externa do pote;

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Figura 12: Modelo do pote para coleta de escarro

c) As amostras devem ser colhidas em local aberto, de preferncia ao ar livre ou em sala bem ventilada; d) O lavado gstrico indicado para crianas, pois essas deglutem o escarro. Deve-se colher assim que o paciente acorda, antes de se levantar e comer. Pelo menos duas amostras em dias consecutivos; e) Para o exame na urina, colhe-se toda a urina da primeira mico da manh em frasco limpo, aps higiene ntima com gua. Utiliza-se um nmero mnimo de trs e no mximo de seis amostras colhidas em dias consecutivos; f) Para os lquidos asspticos recomenda-se que o material seja enviado imediatamente ao laboratrio para que a semeadura seja feita para se obter maior positividade; g) O pus coletado assepticamente de abscessos no drenados com uma agulha estril em seringa. Aps a coleta, retirar a agulha com uma pina e passar o material para um frasco estril; h) Todas as vezes que a coleta for com swab, este deve ser umedecido em salina ou gua estril antes da coleta. Aps a coleta, deve permanecer em um frasco estril com salina suficiente para mant-lo mido at o procedimento do exame. i) Para o transporte das amostras devem-se considerar trs condies importantes: manter sob refrigerao, proteger da luz solar, e acondicionar de forma adequada para que no haja risco de derramamento; j) No so mais utilizadas as fezes para diagnstico da tuberculose intestinal. Neste caso indicada a bipsia. 6.3 Envio de culturas do Micobacterium tuberculosis para o LACEN a) O tubo com a cultura do M. tuberculosis deve ser com tampa de rosca, a prova de vazamento; b) Para o transporte, este tubo deve ser envolvido com papel absorvente, em quantidade suficiente para absorver o material e protege-lo em caso de acidente; c) O tubo embalado deve ser colocado dentro de um recipiente de paredes rgidas, a prova de vazamentos e inquebrvel (pode ser uma lata de leite em p com tampa) contendo etiqueta com as caractersticas da amostra (Figuras 13 e 14); 64

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Figura 13: Modelo do frasco com parede rgida

SUBSTNCIA INFECCIOSA
EM CASO DE DANO OU VAZAMENTO, INFORME IMEDIATAMENTE A UNIDADE REMETENTE

Figura 14: Rtulo indicando substancia infecciosa d) Este recipiente deve ser colocado dentro de outra embalagem, podendo ser uma caixa de papelo, madeira, isopor ou polietileno, que deve conter o rtulo de material infectante ou de risco biolgico (Figura 8) juntamente com o nome, telefone e endereo da pessoa que deve ser avisada em caso de acidente com a(s) cultura(s); e) Completar o espao da caixa com papel amassado ou polibolha, para evitar o movimento do recipiente contendo a cultura; f) Colocar as requisies correspondentes, devidamente preenchidas, dentro de um saco plstico; g) Vedar bem o saco e fix-lo na parte interna da tampa da caixa; h) Fechar e vedar bem a caixa; 65

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i) Identificar com destinatrio, remetente; j) Enviar ao laboratrio. Notas:

Este transporte realizado em temperatura ambiente. As orientaes acima servem para qualquer tipo de cultura que deva ser encaminhada ao LACEN.

6.4 Transporte de lminas para Superviso Indireta a) Todas as lminas positivas e todas as negativas devem ser encaminhadas a Seo de Tuberculose do LACEN para superviso indireta; b) Devem ser transportadas em caixas ou frascos (Figura 15) com paredes rgidas e com ranhuras prprias para a fixao das lminas; c) Os formulrios que acompanham as lminas para a superviso indireta no devem ser colocados junto com as lminas para evitar possveis contaminaes; d) importante colocar no formulrio o nome do laboratrio e o municpio de procedncia; e) Colocar os formulrios junto caixa ou frasco, embrulhar e enviar ao LACEN, devidamente identificados com o endereo do remetente e destinatrio, corretos.

Figura 15: Modelo de frasco para transporte de lminas

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7. SEO DE MICOLOGIA 7.1 Orientaes gerais de coleta e transporte das amostras em relao ao exame solicitado

EXAMES

MATERIAL BIOLGICO
Pele, couro cabeludo, unha, cabelo secrees

ONDE COLHER
em placa de Petri estril ou em envelope de papel impermevel estril;

em seringas, ou swab; em pote ou frasco com boca larga estril; em frasco estril; em frasco estril; em frasco hemocultura; prprio de

Pesquisa de fungos (ou Exame Direto ou Exame Micolgico Direto) FUNGOS, cultura para

escarro

lquido pleural aspirado ou lavado brnquico, sangue

medula ssea

em frasco contendo 0,5 ml de heparina diluda 1:1000

Pesquisa ou cultura para BLASTOMICOSE ou Paracoccidioides brasiliensis,

raspado das leses escarro lavado ou aspirado brnquico

em placa de Petri estril; em pote descartvel prprio; em frasco estril.

Imunodifuso dupla (IDD) para BLASTOMICOSE ou Paracoccidioides brasiliensis,

sangue (soro)

em tubo seco - 5 ml

Imunodifuso dupla (IDD)Aspergilus fumigatus,

sangue (soro)

em tubo seco - 5 ml

Pesquisa direta ou cultura para Candida albicans,

qualquer material biolgico

prprio para cada tipo

Imunodifuso dupla para Candida albicans ou CANDIDASE -

sangue (soro)

em tubo seco - 5 ml

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EXAMES
Pesquisa de Criptococcus neoformans pelo mtodo direto

MATERIAL BIOLGICO
LCR (lquor) ou qualquer outro material biolgico

ONDE COLHER
em frasco estril

Pesquisa de Criptococcus neoformans, pelo mtodo da tinta da china

LCR (lquor)

em frasco estril

Cultura para Criptococcus neoformans,

LCR (lquor) ou qualquer outro material biolgico a critrio mdico

em frasco estril

Prova do Ltex para Criptococcus neoformans,

LCR (lquor) sangue (soro)

em frasco estril em tubo seco.

7.2 Orientaes especficas de coleta 7.2.1 Micoses Superficiais 7.2.1.1 Pele a) As amostras de leses de pele como escamas, crostas, ou cascas, devem ser colhidas preferencialmente com uma lmina de bisturi descartvel ou com a borda da lmina de vidro de microscopia, muito limpa; b) Deve-se colher, raspando em vrios pontos da leso, procurando as bordas das leses mais recentes; c) Nos casos em que no h escamas aparentes, procura-se raspar bem o local e retirar o material que for possvel. 7.2.1.2 Couro Cabeludo a) As amostras de leses no couro cabeludo devem ser obtidas atravs da raspagem do local; b) A amostra deve conter tocos de cabelo, o contedo dos folculos tapados e as escamas de pele; c) Os cabelos da rea tambm podem ser puxados com pina (os cabelos infectados so facilmente removveis). 7.2.1.3 Cabelos e Pelos a) Se a leso for ao longo do cabelo ou pelo, como ndulos, por exemplo, esses devem ser cortados com tesoura. 68

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7.2.1.4 Unhas a) Os fragmentos de unhas alteradas podem ser colhidos, raspando-os com o bisturi ou com o auxlio de uma tesoura limpa; b) Material que se deposita embaixo da unha pode ser retirado cuidadosamente com o bisturi, com um palito (tipo de manicure), previamente esterilizado, ou outro objeto pontiagudo estril; c) Em casos de paronquia (leses na regio da cutcula), colhem-se as escamas e, se possvel, o pus, com um swab; d) Se a leso uma mancha esbranquiada em baixo da unha, raspar por cima da unha com o bisturi at chegar na parte com a leso; desprezar este material e raspar todo o contedo da mancha. Nota:

Quando o material da leso seco, reduz a contaminao bacteriana e a amostra pode ser estocada, em placas de petri estreis ou em envelopes, por meses, sem perder a viabilidade do fungo dermatfito. O transporte sem refrigerao. 7.2.1.5 Membranas Mucosas a) Para as infeces de boca ou vagina, o raspado com lmina de bisturi ou esptula, nas partes afetadas (reas com eritema e/ou placas brancas), melhor do que o swab, se o material for processado imediatamente; b) No caso de coleta vulvar/vaginal, o swab (sempre embebido em salina ou gua estril) o mais adequado. No esquecer que o swab tem que ser mantido mido at ser processado o exame. 7.2.1.6 Ouvido As infeces fngicas de ouvido so geralmente secas, exceto quanto associadas a infeces bacterianas; A raspagem do material sempre melhor para o diagnstico laboratorial, embora o swab tambm possa ser usado. 7.2.1.7 Olho a) Deve ser solicitado meio de cultura ao laboratrio e o material retirado das reas de ulceraes e supuraes pelo oftalmologista deve ser inoculado imediatamente no meio; b) Lgrima e fludos podem se coletados com pipeta plstica estril - chamada de pipeta Pasteur descartvel ou pipeta de transferncia (Figura 16). O swab no adequado para este tipo de material.

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Figura 16: Modelos de pipeta plstica. As estreis vem embaladas individualmente ou em mais unidades. 7.2.2 Micoses Subcutneas a) Pode ser raspado as escamas ou crostas da parte superficial da leso; b) Aspirado do pus e/ou biopsia, so mais apropriados para o exame; c) O pus coletado assepticamente de abscessos no drenados com uma agulha estril em seringa. Aps a coleta, retirar a agulha com uma pina e passar o material para um frasco estril; d) Nas leses ulceradas, caso o material tenha que ser colhido com swab (o que no recomendado), deve ser retirado da parte mais profunda da leso, evitando encostar na periferia e na pele adjacente; e) Se algum gro for visvel no pus, este deve ser includo na amostra. Notas Importantes: Para todas as coletas descritas acima, colher todo o material disponvel na leso. Quanto mais material mais viabilidade na visualizao e no crescimento em cultura. Todas as vezes que a coleta for com swab, este deve ser umedecido em salina ou gua estril antes da coleta. Aps a coleta, deve permanecer em um frasco estril com salina suficiente para mant-lo mido at o procedimento do exame. 7.2.3 Micoses Profundas (Sistmicas) 7.2.3.1 Escarro a) Preferencialmente deve ser colhido por broncoscopia: lavado ou aspirado brnquico; b) Quando no for possvel, o escarro deve ser colhido da mesma maneira como colhido para o exame de tuberculose, no esquecendo da higiene da boca antes da coleta, para diminuir a contaminao pelos saprfitas da cavidade bucal e da faringe; c) O exame de escarro, tanto o direto como a cultura, na maioria das vezes no satisfatrio, porque no confivel, j que uma amostra muito contaminada. Portanto, quando houver a possibilidade do exame sorolgico, deve-se optar pelo ltimo.

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7.2.3.2 Lquor (LCR Lquido Cfalo Raquidiano) a) colhido pelo mdico. No recomendvel que a mesma amostra seja utilizada para os exames bacteriolgicos, micolgicos ou de tuberculose, porque pode haver contaminao; b) O ideal uma alquota da amostra para cada setor; c) Para um bom exame direto com cultura e Prova do Ltex, necessrio 2 a 3ml de lquor. 7.2.3.3 Sangue (Hemocultura) a) Tcnica de Coleta Lavar as mos com gua e sabo, enxaguar bem, enxugar com papel toalha e calar as luvas; Fazer a anti-sepsia da rea com PVPI, por no mnimo 30 segundos. Deixar secar; Passar lcool 70%; Coletar assepticamente no mnimo 5ml de sangue de indivduos adultos e 1ml de crianas, cuidar para que no hajam bolhas de ar na seringa; No trocar de agulha antes de injetar o sangue no frasco. b) Volume de sangue para cada amostra recomendado de duas a trs amostras de cada paciente, com intervalos de 30 minutos. Deve ser respeitada a quantidade de sangue de 1:10 em relao ao meio de cultura, isto : 5ml de sangue para 45ml de meio de TSB -Trypticase Soy Broth (hemocultura adulto) e 1ml de sangue para 9ml de TSB (hemocultura peditrico). c) Inoculao e Incubao Romper o lacre central dos frascos e fazer assepsia na tampa de borracha dos frascos de meio com TSB (frasco de hemocultura) com lcool 70%; Inocular 5ml de sangue direto da seringa de coleta no frasco de hemocultura adulto (45ml) ou 1ml de sangue em frasco de hemocultura peditrico (9ml). Misturar bem (sem agitar) para evitar coagulao; Se a coleta for prxima do LACEN, encaminhar imediatamente em temperatura ambiente; Para distncias maiores, proceder como o descrito abaixo: Em caso de mais de um frasco, em um deles dever ser introduzindo na tampa de borracha uma agulha estril com uma pequena poro de algodo na parte posterior, para aerao; Incubar a 35C por 24 horas antes de enviar para o LACEN.

d) Transporte Aps decorrido o tempo de incubao de 24 horas, o TSB dever ser encaminhado ao LACEN em temperatura ambiente, juntamente com a Ficha de Encaminhamento de Amostras Clnicas devidamente preenchida. 71

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7.2.3.4 Medula ssea a) Coletar de 3 a 5 ml de sangue e colocar em um frasco estril contendo 0,5 ml de heparina diluda 1:1000. 7.2.3.5 Fluidos a) PLEURAL, ABDOMINAL e SINOVIAL: aspirados ou drenados, so coletados assepticamente em frasco estril contendo heparina estril 1:1000.; b) A quantidade de heparina usada varia de acordo com o volume da amostra (aproximadamente 1 ml por 10 ml de fludo); c) Em casos de fludo abdominal de pacientes de dilise peritoneal, colher sem heparina ou em frasco de hemocultura. 7.2.3.6 Bipsias a) Devem ser enviadas ao laboratrio em salina estril e no em formalina. 7.2.3.7 Sorologias a) Para as sorologias, as amostras de sangue so coletadas em tubo seco. 5 a 10 ml so suficientes. Nota Importante:

Para todos os exames, necessrio constar na requisio a suspeita clnica para que o laboratrio possa fazer uso dos meios e condies de cultivo mais adequados.

7.3 Transporte a) Para os lquidos asspticos recomenda-se que o material seja enviado imediatamente ao laboratrio para que a semeadura seja feita o mais rpido possvel, para maiores chances de viabilidade do fungo; b) Portanto, ressalvando as emergncias, necessrio observar o horrio da coleta para que chegue no laboratrio em horrio conveniente para semeadura imediata (preferencialmente pela manh). c) No transporte das amostras deve-se considerar trs condies importantes: manter sob refrigerao, proteger da luz solar e acondicionar de forma adequada para que no haja risco de derramamento.

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8. SEO DE IMUNOLOGIA 8.1 Orientaes gerais de coleta e transporte das amostras em relao ao exame solicitado

EXAMES
BRUCELOSE, reao de aglutinao (Ltex) para CHAGAS, imunofluorescncia indireta para CITOMEGALOVRUS, anticorpos IgM e IgG (EIE) para FTA-ABS, Ig Total - para sfilis (Imunofluorescncia) RUBOLA, anticorpos IgM e IgG (ELISA) para SARAMPO, anticorpos IgM (ELISA) para TOXOPLASMOSE, IgM e IgG por ELISA TOXOPLASMOSE - IgM imunofluorescncia indireta para confirmao VDRL/RPR (inclusive quantitativo) SOROLOGIA PARA LUES WIDAL, reao de DENGUE anticorpos IgM (ELISA) para CISTICERCOSE FEBRE AMARELA Contagem de linfcitos T CD4 / CD8

MATERIAL BIOLGICO
sangue (soro)

ONDE COLHER
em tubo seco (5 ml)

sangue (soro)

em tubo seco (5 ml)

sangue (soro)

em tubo seco (5 ml)

sangue (soro)

em tubo seco (5 ml)

sangue (soro)

em tubo seco (5 ml)

sangue (soro)

em tubo seco (5 ml)

sangue (soro)

em tubo seco (5 ml)

sangue (soro)

em tubo seco (5 ml)

sangue (soro)

em tubo seco (5 ml)

sangue (soro) sangue (soro) sangue (soro) sangue (soro) Sangue

em tubo seco (5 ml) em tubo seco (5 ml) em tubo seco (10 ml) em tubo seco (5 ml) colhido em tubo com EDTA (5 ml)

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8.2 Orientaes especficas de coleta a) No necessrio jejum para os exames imunolgicos; b) A coleta de sangue para diagnstico da Dengue deve ser realizada a partir do 5 dia do incio dos sintomas (febre). Se for colhido antes do 5 dia, ser necessria uma segunda amostra; c) Para Sarampo e Rubola, colher sempre que o paciente for procurar o servio de sade, independentemente do incio dos sintomas; d) Para os exames de CD4 e CD8 so necessrias duas amostras colhidas na mesma hora. Uma delas para a realizao do hemograma. e) A amostra para o exame de CD4 e CD8 deve chegar no laboratrio, antes de 18 horas da coleta, acondicionada sem gelo (temperatura entre 18 a 20o C). Nota:

Para a realizao dos exames listados para a Seo de Imunologia que utilizam o mesmo material biolgico pode ser enviado somente 1 tubo com soro; O soro resultante de 5 ml de sangue suficiente para os exames da Seo de Imunologia.

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9. SEO DE VIROLOGIA 9.1 Orientaes gerais de coleta e transporte das amostras em relao ao exame solicitado

EXAMES
HEPATITES VIRAIS, tipos A, B e C

MATERIAL BIOLGICO
sangue (soro)

ONDE COLHER
tubo seco (5 ml)

Marcadores sorolgicos: HBs Ag (Antgeno austrlia) Anti-Hbs Anti-Hbc IgM Hbe Ag Anti-Hbe Anti-Hav IgM Anti-HCV Anti Hbc Total

Anti HIV, deteco de anticorpos

sangue (soro)

tubo seco (5 ml)

Mtodos: Elisa Imunofluorescncia Indireta - IFI Western Blot

VRUS RESPIRATRIO, Pesquisa do antgeno dos Vrus Influenza A e B; Para influenza 1, 2, 3; Adenovrus e Vrus Sincicial Respiratrio.

aspirado de secreo nasofaringe (uma amostra de cada narina) em crianas. Total de 2 amostras); swab nasofaringe (um de cada narina) e orofaringe, em adultos. Total de 3 amostras.

em sistema prprio de coleta fornecido pelo LACEN (as duas amostras coletadas so colocadas em um nico tubo de meio de transporte viral); com swab para coleta de aspirado nasofaringeano e transportado em meio de transporte viral, fornecidos pelo LACEN (As trs amostras so colocadas em um nico tubo de meio de transporte).

9.2 Orientaes especficas de coleta 9.2.1 Hepatite Para a realizao do diagnstico laboratorial das hepatites virais solicita-se o marcador de acordo com os casos abaixo:

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CASO
1. Diagnstico (transaminases alteradas) 2. Anti-HBc total Reagente (Banco de sangue) 3. Contatos sexuais e intradomiciliares de Hepatite B 4. Contatos sexuais e intradomiciliares de Hepatite C 4. Monitoramento aps 6 meses - Hepatite B 5. Pr-Natal 6. Acidente percutneo, Biossegurana, Hemodilise

MARCADORES
Hbs Ag, Anti-HBC IgM, Anti-HAV IgM, AntiHCV Anti-Hbs Anti Hbc total Anti-HCV Hbs Ag, Anti-Hbs, Hbe Ag, Anti-Hbe Hbs Ag Hbs Ag, Anti-Hbs, Anti-HCV

Somente ser realizado diagnstico laboratorial de hepatites virais de pacientes que apresentarem transaminases alteradas em trs vezes, no mnimo. Estes resultados devero estar anexados requisio; No realizado Teste de Eficcia da vacina Anti-Hbs, para verificao da imunidade.

9.2.2 HIV Somente sero realizados exames de HIV de pacientes que tiverem consultado com mdicos credenciados junto ao programa DST/Aids, nos Centros de Sade, Hospital Infantil Joana de Gusmo, Hospital Nereu Ramos, Hospital Regional Homero de Miranda Gomes Hospital Regional, e possurem requisio prpria de sorologia do SUS, para HIV.

9.2.3 Vrus Respiratrio

a) A coleta deve ser realizada na fase aguda, at 3 dias do incio dos sintomas clnicos. Quanto mais cedo, maior a chance de detectar o vrus. b) O Material coletado tem que ser processado at seis horas aps a coleta e transportado em temperatura de 2 a 8 C. c) Atualmente esta coleta realizada no Hospital Infantil Joana de Gusmo, no atendimento de crianas e no Centro de Sade Saco Grande II Florianpolis, para atendimento de adultos.

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10. BIOLOGIA MOLECULAR 10.1 Orientaes gerais de coleta e transporte das amostras em relao ao exame solicitado

EXAMES
Pesquisa qualitativa do vrus da Hepatite C (PCR)

MATERIAL BIOLGICO
sangue (plasma)

ONDE COLHER
em tubo de coleta a vcuo com EDTA (5 ml)

Teste de Quantificao de Carga Viral do HIV

sangue (plasma)

em tubo de coleta a vcuo com EDTA (5 ml)

Teste de Quantificao de Carga Viral do HCV

sangue (plasma)

em tubo de coleta a vcuo com EDTA (5 ml)

Genotipagem do HIV

sangue (plasma)

em 2 tubos de coleta a vcuo com EDTA (2 x 5 ml)

Genotipagem do HCV

sangue (plasma)

em 2 tubos de coleta a vcuo com EDTA (2 x 5 ml)

10.2 Orientaes especficas de coleta, processamento e transporte 10.2.1 HIV Quantitativo (Carga Viral) 10.2.1.1 Coleta da amostra a) Para os exames de Carga Viral no necessrio jejum ou qualquer preparo especial do paciente. Entretanto, deve-se evitar a coleta, aps ingesto de alimentos gordurosos nas ltimas 3 horas; b) A amostra clnica o plasma; c) Coletar o 5 ml de sangue total em tubos vacuteiner com EDTA; d) Para a obteno do plasma, centrifugar o sangue total a 3000 rpm durante 5 minutos. No use plasma no centrifugado (separado aps repouso espontneo) ou hemolizado; no use plasma com vestgios de sangue; e) Volume de plasma necessrio para o teste: 1 ml (exatamente); f) O tempo de viabilidade da amostra aproximadamente de 2 horas aps a coleta do sangue total, durante este perodo a amostra deve ser centrifugada o mais rpido possvel para evitar que o plasma fique em contato com as clulas sanguneas;

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10.2.1.2 Preparo da amostra no Tampo de Lise a) O Tampo de Lise (Lysis Buffer) faz parte do conjunto de reagentes utilizados no processamento da amostra no teste de Carga Viral e fornecido pelo LACEN; b) Aps o procedimento de coleta, acima citado, a amostra deve ser processada e colocada no Tampo de Lise no prazo de viabilidade da mesma; c) Utilizando luvas novas e limpas; d) Retirar o Tampo de Lise da geladeira; e) Agitar e colocar em Banho-Maria a 37C por 30 minutos para dissoluo completa dos cristais. Agitar por inverso vrias vezes e verificar contra a luz at o desaparecimento dos cristais. No use os tampes com cristais devido a perda funcional; f) Identificar os tubos com nome, data e hora da coleta; g) Centrifugar os Tampes por um minuto a 2500 rpm para a retirada do excesso de lquido na tampa; h) Pipetar 1 ml de plasma para o tubo de Tampo de Lise utilizando micropipetas automticas com ponteiras com barreira, descartveis, livres de RNAse e DNAse; i) Homogeneizar os tubos por inverso ou em agitador;

10.2.1.3 Conservao da Amostra e transporte a) A amostra em Tampo de Lise deve ser conservada em geladeira (2 a 8C) at o momento do processamento, por um perodo de at 5 dias; b) Aps este perodo, deve ser mantido em freezer 80C por tempo indeterminado; c) O transporte deve ser realizado sob refrigerao, no prazo mximo de 5 dias. d) NUNCA manter a amostra em Tampo de Lise em freezer com temperatura de -20C. 10.2.2 HIV Genotipagem 10.2.2.1 Coleta da amostra a) Para os exames de Genotipagem no necessrio jejum ou qualquer preparo especial do paciente. Entretanto, deve-se evitar a coleta, aps ingesto de alimentos gordurosos nas ltimas 3 horas; b) A amostra clnica utilizada o plasma; c) Coletar o sangue total em tubos vacuteiner com EDTA 2 amostras de 5ml de sangue total (total 10ml); d) Para a obteno do plasma, centrifugar o sangue total a 1500 rpm durante 10 minutos. No usar plasma no centrifugado (separado aps repouso espontneo) ou hemolizado; no usar plasma com vestgios de sangue.

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10.2.2.2 Preparo da amostra, conservao e transporte a) Utilizar microtubos, estreis, livres de RNAse e DNAse, de preferncia com tampa de rosca, prprios para o congelamento; b) Identificar os tubos com o nome do paciente, data e hora da coleta; c) Utilizar luvas novas e limpas para manipular os tubos e a amostra; d) Transferir o plasma para os microtubos utilizando micropipetas automticas com ponteiras com barreira, descartveis, livres de RNAse e DNAse; e) Distribuir o total de plasma obtido em alquotas de aproximadamente 1 ml por microtubo; f) Manter os microtubos armazenados a 4C at o momento de envio ao laboratrio, mantidos a -20C no prazo mximo de 2 dias; g) Acondicionar individualmente os tubos em sacos plsticos transparentes e com boa vedao; h) Encaminhar as amostras para o LACEN/SC em caixa de isopor, contendo 4 unidades de gelo reciclvel congelados; i) Aps perodo de 2 dias a -20C, a amostra se no processada pode ser mantida no freezer 80C at o momento da reao por tempo indeterminado.

10.2.3 Testes Qualitativos, Quantitativos (Carga Viral) e Genotipagem do RNA do HCV 10.2.3.1 Coleta da amostra a) No necessrio jejum ou qualquer preparo especial do paciente. Entretanto, deve-se evitar a coleta, aps ingesto de alimentos gordurosos nas ltimas 3 horas; b) A amostra clnica o plasma; c) Coletar o 5 ml de sangue total em tubos vacuteiner com EDTA; d) No usar HEPARINA como anticoagulante; e) Separar o plasma do sangue total at 6 horas depois da coleta; f) Para a obteno do plasma, centrifugar o sangue total a 1500 rpm por 20 minutos. No usar plasma no centrifugado (separado aps repouso espontneo) ou hemolizado; no usar plasma com vestgios de sangue; g) Transferir o plasma para tubo estril; h) Identificar o tubo com nome, tipo do exame, origem e data da coleta.

10.2.3. 2 Armazenamento da Amostra a) A amostras de plasma podem ser armazenadas em geladeira (2 a 8C) durante at 72 horas, ou congelada a 70C; b) Recomenda-se que as amostras sejam aliquotadas em volume de 500 l, sendo duas (2) alquotas por teste); Notas Importantes: Se no existir freezer 70C, o sangue no pode ser congelado a 20C, devendo ser enviado ao LACEN, o mais rpido possvel, dentro do perodo das 6 horas aps a coleta.

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As amostras de plasma s podem ser submetidas a dois ciclos de congelamento e descongelamento, sem perda do RNA-HCV. 10.2.3.3 Transporte da amostra a) O sangue total deve ser transportado ao laboratrio entre 2 e 25C, se houver tempo para ser processado at 6 horas aps a coleta; b) O plasma deve ser transportado entre 2 e 8C. Notas:

Nunca utilizar tubos de coleta reciclados; Nunca utilizar microtubos e ponteiras reciclados; As amostras de plasma que chegarem ao LACEN/SC com pacotes de gelo reciclvel temperatura ambiente sero descartadas como inadequadas.

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11. ANLISES NEONATAIS (TESTE DO PEZINHO) 11.1 Orientaes gerais de coleta das amostras em relao ao exame solicitado

EXAMES
Dosagem da Fenilalanina

MATERIAL BIOLGICO
sangue do recm-nascido (coletado do calcanhar)

ONDE COLHER
no carto prprio, fornecido pelo LACEN,

Dosagem do Hormnio Estimulante da Tireide TSH

sangue do recm-nascido

no carto prprio, fornecido pelo LACEN

Dosagem do hormnio 17-OH Progesterona

sangue do recm-nascido

no carto prprio, fornecido pelo LACEN

Dosagem da Tripsina Imuno Reativa - IRT

sangue do recm-nascido

no carto prprio, fornecido pelo LACEN

Identificao de Hemoglobina

sangue do recm-nascido

no carto prprio, fornecido pelo LACEN

11.2 Orientaes especficas para a coleta a) A coleta realizada por tcnico capacitado pelo LACEN; b) O perodo ideal de coleta de 3 a 5 dias do nascimento; c) Caso ultrapasse este perodo, a coleta no ser perdida e os exames sero realizados da mesma maneira, mas se der positivo, a criana perde dias preciosos de tratamento.

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MANUAL DE ORIENTAES PARA COLETA, PREPARO E TRANSPORTE DE MATERIAL BIOLGICO LACEN/SC

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